CN111263646A - 基于丝-透明质酸的组织填充物及其使用方法 - Google Patents

基于丝-透明质酸的组织填充物及其使用方法 Download PDF

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Abstract

本文提供了基于透明质酸和丝蛋白片段的组织填充物及其使用方法。

Description

基于丝-透明质酸的组织填充物及其使用方法
相关申请的交叉引用
本申请要求2017年6月26日提交的美国临时专利申请No. 62/525,131和2018年3月9日提交的美国临时专利申请No. 62/641,095的权益，这些申请通过引用整体并入本文中。
背景技术
丝是由多种昆虫和蜘蛛产生的天然聚合物。丝包含丝芯蛋白、丝素蛋白和由非丝状蛋白—丝胶蛋白组成的胶状涂层。历史上研究了丝在医学领域的用途。透明质酸（玻尿酸）是一种糖胺聚糖，其分布在整个身体中，并且在***和上皮组织中发现。由于其生物相容性和结构益处，它是医疗装置和可植入材料中的有用组分。
人体软组织的结构部分地归因于细胞外基质，所述细胞外基质包含胶原蛋白、弹性蛋白和糖胺聚糖。可能发生软组织缺陷，其扭曲、变形或以其它方式改***组织结构。这样的结构可通过使用组织填充物来恢复，所述组织填充物可沉积在缺陷部位以修复缺陷。例如，可将组织填充物放置在面部皱纹的部位以修复皱纹。
然而，在本领域中需要新的组织填充物，其修复许多组织缺陷同时提供可调的性质，这可以允许针对特定组织缺陷定制组织填充物。
发明内容
在一个实施方案中，本发明涉及生物相容性组织填充物，其包含：糖胺聚糖，其选自透明质酸（HA）、羧甲基纤维素（CMC）、淀粉、藻酸盐、软骨素-4-硫酸盐、软骨素-6-硫酸盐、黄原胶、壳聚糖、果胶、琼脂、角叉菜胶和瓜尔胶；和活性剂，其选自酶抑制剂、麻醉剂、药用神经毒素、抗氧化剂、抗感染剂、抗炎剂、紫外（UV）光阻挡剂、染料、激素、免疫抑制剂和抗炎剂；其中所述糖胺聚糖的一部分通过包含烷烃或烷基链、醚基团和仲醇中的一种或多种的交联部分交联；并且其中使用交联剂、交联前体或活化剂获得交联。在一些实施方案中，糖胺聚糖是透明质酸（HA）。在一些实施方案中，相对于HA总量，交联HA的% w/w量为约1%、约2%、约3%、约4%、约5%、约6%、约7%、约8%、约9%、约10%、约11%、约12%、约13%、约14%、约15%、约16%、约17%、约18%、约19%、约20%、约21%、约22%、约23%、约24%、约25%、约26%、约27%、约28%、约29%、约30%、约31%、约32%、约33%、约34%、约35%、约36%、约37%、约38%、约39%、约40%、约41%、约42%、约43%、约44%、约45%、约46%、约47%、约48%、约49%、约50%、约51%、约52%、约53%、约54%、约55%、约56%、约57%、约58%、约59%、约60%、约61%、约62%、约63%、约64%、约65%、约66%、约67%、约68%、约69%、约70%、约71%、约72%、约73%、约74%、约75%、约76%、约77%、约78%、约79%、约80%、约81%、约82%、约83%、约84%、约85%、约86%、约87%、约88%、约89%、约90%、约91%、约92%、约93%、约94%、约95%、约96%、约97%、约98%、约99%或约100%。在一些实施方案中，交联HA的交联度为约1% -约100%。在一些实施方案中，交联HA的交联度为约1%、约2%、约3%、约4%、约5%、约6%、约7%、约8%、约9%、约10%、约11%、约12%、约13%、约14%、约15%、约16%、约17%、约18%、约19%、约20%、约21%、约22%、约23%、约24%、约25%、约26%、约27%、约28%、约29%、约30%、约31%、约32%、约33%、约34%、约35%、约36%、约37%、约38%、约39%、约40%、约41%、约42%、约43%、约44%、约45%、约46%、约47%、约48%、约49%、约50%、约51%、约52%、约53%、约54%、约55%、约56%、约57%、约58%、约59%、约60%、约61%、约62%、约63%、约64%、约65%、约66%、约67%、约68%、约69%、约70%、约71%、约72%、约73%、约74%、约75%、约76%、约77%、约78%、约79%、约80%、约81%、约82%、约83%、约84%、约85%、约86%、约87%、约88%、约89%、约90%、约91%、约92%、约93%、约94%、约95%、约96%、约97%、约98%、约99%或约100%。在一些实施方案中，交联HA的交联度为约1% -约15%。在一些实施方案中，交联HA的交联度为约1%、约2%、约3%、约4%、约5%、约6%、约7%、约8%、约9%、约10%、约11%、约12%、约13%、约14%和约15%中的一种或多种。
在一些实施方案中，交联HA包含含有聚乙二醇（PEG）链的交联部分。在一些实施方案中，交联剂和/或交联前体包含环氧基团。在一些实施方案中，使用交联剂、交联前体或活化剂获得交联，所述交联剂、交联前体或活化剂选自多环氧连接剂、二环氧连接剂、多环氧-PEG、二环氧-PEG、多缩水甘油基-PEG、二缩水甘油基-PEG、聚丙烯酸酯PEG、二丙烯酸酯PEG、1,4-双（2,3-环氧丙氧基）丁烷、1,4-双缩水甘油氧基丁烷、二乙烯基砜（DVS）、1,4-丁二醇二缩水甘油醚（BDDE）、UV光、戊二醛、1,2-双（2,3-环氧丙氧基）乙烯（EGDGE）、1,2,7,8-二环氧辛烷（DEO）、双碳二亚胺（BCDI）、季戊四醇四缩水甘油醚（PETGE）、己二酰肼（ADH）、双（磺基琥珀酰亚胺基）辛二酸酯（BS）、六亚甲基二胺（HMDA）、1- （2,3-环氧丙基） -2,3-环氧环己烷、碳二亚胺、及其任何组合。在一些实施方案中，使用多官能环氧化合物获得交联，所述多官能环氧化合物选自1,4-丁二醇二缩水甘油醚（BDDE）、乙二醇二缩水甘油醚（EGDGE）、1,6-己二醇二缩水甘油醚、聚乙二醇二缩水甘油醚、聚丙二醇二缩水甘油醚、聚丁二醇二缩水甘油醚、新戊二醇二缩水甘油醚、聚甘油多缩水甘油醚、二甘油多缩水甘油醚、甘油多缩水甘油醚、三羟甲基丙烷多缩水甘油醚、季戊四醇多缩水甘油醚和山梨醇多缩水甘油醚。在一些实施方案中，使用交联剂和/或交联前体获得交联，所述交联剂和/或交联前体选自聚乙二醇二缩水甘油醚、二环氧PEG、PEG二缩水甘油醚、聚氧乙烯双缩水甘油醚、PEGDE和PEGDGE。在一些实施方案中，使用平均Mn为约500、约1000、约2000或约6000的聚乙二醇二缩水甘油醚获得交联。在一些实施方案中，使用具有2至25个乙二醇基团的聚乙二醇二缩水甘油醚获得交联。在一些实施方案中，使用交联剂和/或交联前体获得交联，所述交联剂和/或交联前体选自多环氧丝素蛋白连接剂、二环氧丝素蛋白连接剂、多环氧丝素蛋白片段连接剂、二环氧丝素蛋白片段连接剂、多缩水甘油基丝素蛋白连接剂、二缩水甘油基丝素蛋白连接剂、多缩水甘油基丝素蛋白片段连接剂和二缩水甘油基丝素蛋白片段连接剂。
在一些实施方案中，本发明涉及一种组织填充物，其进一步包含有机化合物和/或无机化合物。在一些实施方案中，无机化合物包括羟基磷灰石(calcium hydroxyapatite)。在一些实施方案中，将羟基磷灰石配制成直径为约1μm至约100μm、约1μm至约10μm、约2μm至约12μm、约3μm至约10μm、约4μm至约15μm、约8μm至约12μm、约5μm至约10μm、约6μm至约12μm、约7μm至约20μm、约9μm至约18μm或约10μm至约25μm的颗粒。在一些实施方案中，羟基磷灰石的浓度为约0.001%至约5%。在一些实施方案中，羟基磷灰石的浓度为约0.001%、约0.002%、约0.003%、约0.004%、约0.005%、约0.006%、约0.007%、约0.008%、约0.009%、约0.01%、约0.011%、约0.012%、约0.013%、约0.014%、约0.015%、约0.016%、约0.017%、约0.018%、约0.019%或约0.02%。在一些实施方案中，羟基磷灰石的浓度为约0.05%、约0.1%、约0.15%、约0.2%、约0.25%、约0.3%、约0.35%、约0.4%、约0.45%、约0.5%、约0.55%、约0.6%、约0.65%、约0.7%、约0.75%、约0.8%、约0.85%、约0.9%、约0.95%、约1%、约1.05%、约1.1%、约1.15%、约1.2%、约1.25%、约1.3%、约1.35%、约1.4%、约1.45%、约1.5%、约1.55%、约1.6%、约1.65%、约1.7%、约1.75%、约1.8%、约1.85%、约1.9%、约1.95%或约2%。在一些实施方案中，有机化合物包含选自甘氨酸、L-脯氨酸、丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸和缬氨酸的氨基酸。
在一些实施方案中，本发明涉及包含HA的组织填充物，其中HA获自链球菌细菌或获自枯草芽孢杆菌细菌。
在一个实施方案中，本发明涉及生物相容性组织填充物，其包含：糖胺聚糖，其选自透明质酸（HA）、羧甲基纤维素（CMC）、淀粉、藻酸盐、软骨素-4-硫酸盐、软骨素-6-硫酸盐、黄原胶、壳聚糖、果胶、琼脂、角叉菜胶和瓜尔胶；和麻醉剂；其中所述糖胺聚糖的一部分通过包含烷烃或烷基链、醚基团和仲醇中的一种或多种的交联部分交联；并且其中使用交联剂、交联前体或活化剂获得交联。在一些实施方案中，麻醉剂是利多卡因。在一些实施方案中，麻醉剂在组织填充物中的浓度为约0.001%至约5%。在一些实施方案中，利多卡因在组织填充物中的浓度为约0.3%。
在一个实施方案中，本发明涉及生物相容性组织填充物，其包含：糖胺聚糖，其选自透明质酸（HA）、羧甲基纤维素（CMC）、淀粉、藻酸盐、软骨素-4-硫酸盐、软骨素-6-硫酸盐、黄原胶、壳聚糖、果胶、琼脂、角叉菜胶和瓜尔胶；和麻醉剂；其中所述糖胺聚糖的一部分通过包含烷烃或烷基链、醚基团和仲醇中的一种或多种的交联部分交联；并且其中使用交联剂、交联前体或活化剂获得交联；其中所述组织填充物是凝胶。在一些实施方案中，组织填充物是水凝胶。在一些实施方案中，组织填充物还包含水。在一些实施方案中，组织填充物中HA的总浓度为约10 mg/mL至约50 mg/mL。在一些实施方案中，组织填充物中HA的总浓度约为15 mg/mL、16 mg/mL、17 mg/mL、18 mg/mL、19 mg/mL、20 mg/mL、21 mg/mL、22 mg/mL、23 mg/mL、24 mg/mL、25 mg/mL、26 mg/mL、27 mg/mL、28 mg/mL、29 mg/mL或30 mg/mL。在一些实施方案中，交联HA在组织填充物中的浓度为约10 mg/mL至约50 mg/mL。在一些实施方案中，交联HA在组织填充物中的浓度约为15 mg/mL、16 mg/mL、17 mg/mL、18 mg/mL、19 mg/mL、20 mg/mL、21 mg/mL、22 mg/mL、23 mg/mL、24 mg/mL、25 mg/mL、26 mg/mL、27 mg/mL、28mg/mL、29 mg/mL或30 mg/mL。
在一个实施方案中，本发明涉及生物相容性组织填充物，其包含：糖胺聚糖，其选自透明质酸（HA）、羧甲基纤维素（CMC）、淀粉、藻酸盐、软骨素-4-硫酸盐、软骨素-6-硫酸盐、黄原胶、壳聚糖、果胶、琼脂、角叉菜胶和瓜尔胶；和麻醉剂；其中所述糖胺聚糖的一部分通过包含烷烃或烷基链、醚基团和仲醇中的一种或多种的交联部分交联；并且其中使用交联剂、交联前体或活化剂获得交联；所述组织填充物包含丝蛋白或丝蛋白片段（SPF）。在一些实施方案中，所述丝蛋白是丝素蛋白。在一些实施方案中，所述丝蛋白是基本上不含丝胶蛋白的丝素蛋白。在一些实施方案中，SPF具有约1 kDa至约250 kDa的平均重均分子量。在一些实施方案中，SPF具有约5 kDa至约150 kDa的平均重均分子量。在一些实施方案中，SPF具有约6 kDa至约17 kDa的平均重均分子量。在一些实施方案中，SPF具有约17 kDa至约39kDa的平均重均分子量。在一些实施方案中，SPF具有约39 kDa至约80 kDa的平均重均分子量。在一些实施方案中，SPF具有低分子量。在一些实施方案中，SPF具有中分子量。在一些实施方案中，SPF具有高分子量。在一些实施方案中，所述丝蛋白片段（SPF）具有约1.5至约3.0的多分散性。在一些实施方案中，SPF具有最高达60%的结晶度。在一些实施方案中，SPF的一部分是交联的。在一些实施方案中，相对于SPF的总量，交联SPF的% w/w量为约1%、约2%、约3%、约4%、约5%、约6%、约7%、约8%、约9%、约10%、约11%、约12%、约13%、约14%、约15%、约16%、约17%、约18%、约19%、约20%、约21%、约22%、约23%、约24%、约25%、约26%、约27%、约28%、约29%、约30%、约31%、约32%、约33%、约34%、约35%、约36%、约37%、约38%、约39%、约40%、约41%、约42%、约43%、约44%、约45%、约46%、约47%、约48%、约49%、约50%、约51%、约52%、约53%、约54%、约55%、约56%、约57%、约58%、约59%、约60%、约61%、约62%、约63%、约64%、约65%、约66%、约67%、约68%、约69%、约70%、约71%、约72%、约73%、约74%、约75%、约76%、约77%、约78%、约79%、约80%、约81%、约82%、约83%、约84%、约85%、约86%、约87%、约88%、约89%、约90%、约91%、约92%、约93%、约94%、约95%、约96%、约97%、约98%、约99%或约100%。在一些实施方案中，交联SPF的交联度为约1%至约100%。在一些实施方案中，交联SPF的交联度为约1%、约2%、约3%、约4%、约5%、约6%、约7%、约8%、约9%、约10%、约11%、约12%、约13%、约14%、约15%、约16%、约17%、约18%、约19%、约20%、约21%、约22%、约23%、约24%、约25%、约26%、约27%、约28%、约29%、约30%、约31%、约32%、约33%、约34%、约35%、约36%、约37%、约38%、约39%、约40%、约41%、约42%、约43%、约44%、约45%、约46%、约47%、约48%、约49%、约50%、约51%、约52%、约53%、约54%、约55%、约56%、约57%、约58%、约59%、约60%、约61%、约62%、约63%、约64%、约65%、约66%、约67%、约68%、约69%、约70%、约71%、约72%、约73%、约74%、约75%、约76%、约77%、约78%、约79%、约80%、约81%、约82%、约83%、约84%、约85%、约86%、约87%、约88%、约89%、约90%、约91%、约92%、约93%、约94%、约95%、约96%、约97%、约98%、约99%或约100%。在一些实施方案中，交联SPF的交联度为约1%至约15%。在一些实施方案中，交联SPF的交联度为约1%、约2%、约3%、约4%、约5%、约6%、约7%、约8%、约9%、约10%、约11%、约12%、约13%、约14%和约15%中的一种或多种。
在一个实施方案中，本发明涉及生物相容性组织填充物，其包含：糖胺聚糖，其选自透明质酸（HA）、羧甲基纤维素（CMC）、淀粉、藻酸盐、软骨素-4-硫酸盐、软骨素-6-硫酸盐、黄原胶、壳聚糖、果胶、琼脂、角叉菜胶和瓜尔胶；和麻醉剂；其中所述糖胺聚糖的一部分通过包含烷烃或烷基链、醚基团和仲醇中的一种或多种的交联部分交联；并且其中使用交联剂、交联前体或活化剂获得交联；所述组织填充物包含丝蛋白或丝蛋白片段（SPF），其中所述SPF的一部分是交联的。在一些实施方案中，交联SPF包含交联部分，该交联部分包含烷烃或烷基链和/或醚基团。在一些实施方案中，交联SPF包含含有聚乙二醇（PEG）链的交联部分。在一些实施方案中，交联SPF包含含有仲醇的交联部分。在一些实施方案中，使用交联剂、交联前体或活化剂获得交联。在一些实施方案中，交联剂和/或交联前体包含环氧基团。在一些实施方案中，使用交联剂、交联前体或活化剂获得交联，所述交联剂、交联前体或活化剂选自多环氧连接剂、二环氧连接剂、多环氧-PEG、二环氧-PEG、多缩水甘油基-PEG、二缩水甘油基-PEG、聚丙烯酸酯PEG、二丙烯酸酯PEG、1,4-双（2,3-环氧丙氧基）丁烷、1,4-双缩水甘油氧基丁烷、二乙烯基砜（DVS）、1,4-丁二醇二缩水甘油醚（BDDE）、UV光、戊二醛、1,2-双（2,3-环氧丙氧基）乙烯（EGDGE）、1,2,7,8-二环氧辛烷（DEO）、双碳二亚胺（BCDI）、季戊四醇四缩水甘油醚（PETGE）、己二酰肼（ADH）、双（磺基琥珀酰亚胺基）辛二酸酯（BS）、六亚甲基二胺（HMDA）、1- （2,3-环氧丙基） -2,3-环氧环己烷、碳二亚胺、及其任何组合。在一些实施方案中，使用多官能环氧化合物获得交联，所述多官能环氧化合物选自1,4-丁二醇二缩水甘油醚（BDDE）、乙二醇二缩水甘油醚（EGDGE）、1,6-己二醇二缩水甘油醚、聚乙二醇二缩水甘油醚、聚丙二醇二缩水甘油醚、聚丁二醇二缩水甘油醚、新戊二醇二缩水甘油醚、聚甘油多缩水甘油醚、二甘油多缩水甘油醚、甘油多缩水甘油醚、三羟甲基丙烷多缩水甘油醚、季戊四醇多缩水甘油醚和山梨醇多缩水甘油醚。在一些实施方案中，使用交联剂和/或交联前体获得交联，所述交联剂和/或交联前体选自聚乙二醇二缩水甘油醚、二环氧PEG、PEG二缩水甘油醚、聚氧乙烯双缩水甘油醚、PEGDE和PEGDGE。在一些实施方案中，使用平均Mn为约500、约1000、约2000或约6000的聚乙二醇二缩水甘油醚获得交联。在一些实施方案中，使用具有2至25个乙二醇基团的聚乙二醇二缩水甘油醚获得交联。在一些实施方案中，使用交联剂和/或交联前体获得交联，所述交联剂和/或交联前体选自多环氧丝素蛋白连接剂、二环氧丝素蛋白连接剂、多环氧丝素蛋白片段连接剂、二环氧丝素蛋白片段连接剂、多缩水甘油基丝素蛋白连接剂、二缩水甘油基丝素蛋白连接剂、多缩水甘油基丝素蛋白片段连接剂和二缩水甘油基丝素蛋白片段连接剂。在一些实施方案中，SPF的一部分与HA交联。在一些实施方案中，SPF的一部分与SPF交联。在一些实施方案中，组织填充物是凝胶。在一些实施方案中，组织填充物是水凝胶。在一些实施方案中，组织填充物还包含水。在一些实施方案中，组织填充物中SPF的总浓度为约0.1 mg/mL至约15 mg/mL。在一些实施方案中，组织填充物中SPF的总浓度为约0.1 mg/mL、约0.5 mg/mL、约1 mg/mL、约1.5 mg/mL、约2 mg/mL、约2.5mg/mL、约3 mg/mL、约3.5 mg/mL、约4 mg/mL、约4.5 mg/mL、约5 mg/mL、约5.5 mg/mL、约6mg/mL、约6.5 mg/mL、约7 mg/mL、约7.5 mg/mL、约8 mg/mL、约8.5 mg/mL、约9 mg/mL、约9.5mg/mL、约10 mg/mL、约10.5 mg/mL、约11 mg/mL、约11.5 mg/mL、约12 mg/mL、约12.5 mg/mL、约13 mg/mL、约13.5 mg/mL、约14 mg/mL、约14.5 mg/mL、或约15 mg/mL。在一些实施方案中，交联SPF在组织填充物中的浓度为约0.1 mg/mL至约15 mg/mL。在一些实施方案中，交联SPF在组织填充物中的浓度为约0.1 mg/mL、约0.5 mg/mL、约1 mg/mL、约1.5 mg/mL、约2mg/mL、约2.5 mg/mL、约3 mg/mL、约3.5 mg/mL、约4 mg/mL、约4.5 mg/mL、约5 mg/mL、约5.5mg/mL、约6 mg/mL、约6.5 mg/mL、约7 mg/mL、约7.5 mg/mL、约8 mg/mL、约8.5 mg/mL、约9mg/mL、约9.5 mg/mL、约10 mg/mL、约10.5 mg/mL、约11 mg/mL、约11.5 mg/mL、约12 mg/mL、约12.5 mg/mL、约13 mg/mL、约13.5 mg/mL、约14 mg/mL、约14.5 mg/mL、或约15 mg/mL。
在一个实施方案中，本发明涉及生物相容性组织填充物，其包含：糖胺聚糖，其选自透明质酸（HA）、羧甲基纤维素（CMC）、淀粉、藻酸盐、软骨素-4-硫酸盐、软骨素-6-硫酸盐、黄原胶、壳聚糖、果胶、琼脂、角叉菜胶和瓜尔胶；和麻醉剂；其中所述糖胺聚糖的一部分通过包含烷烃或烷基链、醚基团和仲醇中的一种或多种的交联部分交联；并且其中使用交联剂、交联前体或活化剂获得交联；所述组织填充物任选地包含丝蛋白或丝蛋白片段（SPF），其中所述SPF的一部分是交联的。在一些实施方案中，组织填充物是真皮填充物。在一些实施方案中，组织填充物是可生物降解的。在一些实施方案中，组织填充物是可注射的。在一些实施方案中，组织填充物具有约25 Pa至约1500 Pa的储能模量（G'）。在一些实施方案中，所述组织填充物的储能模量（G'）为约25 Pa、约26 Pa、约27 Pa、约28 Pa、约29 Pa、约30Pa、约31 Pa、约32 Pa、约33 Pa、约34 Pa、约35 Pa、约36 Pa、约37 Pa、约38 Pa、约39 Pa、约40 Pa、约41 Pa、约42 Pa、约43 Pa、约44 Pa、约45 Pa、约46 Pa、约47 Pa、约48 Pa、约49Pa、约50 Pa、约51 Pa、约52 Pa、约53 Pa、约54 Pa、约55 Pa、约56 Pa、约57 Pa、约58 Pa、约59 Pa、约60 Pa、约61 Pa、约62 Pa、约63 Pa、约64 Pa、约65 Pa、约66 Pa、约67 Pa、约68Pa、约69 Pa、约70 Pa、约71 Pa、约72Pa、约73 Pa、约74Pa、约75 Pa、约76 Pa、约77 Pa、约78Pa、约79 Pa、约80Pa、约81 Pa、约82Pa、约83 Pa、约84 Pa、约85 Pa、约86 Pa、约87 Pa、约88Pa、约89 Pa、约90 Pa、约91 Pa、约92 Pa、约93 Pa、约94 Pa、约95 Pa、约96 Pa、约97 Pa、约98 Pa、约99 Pa、约100 Pa，约101 Pa、约102 Pa、约103 Pa、约104 Pa、约105 Pa、约106 Pa、约107 Pa、约108 Pa、约109 Pa、约110 Pa、约111 Pa、约112 Pa、约113 Pa、约114 Pa、约115Pa、约116 Pa、约117 Pa、约118 Pa、约119 Pa、约120 Pa、约121 Pa、约122 Pa、约123 Pa、约124 Pa或约125 Pa。在一些实施方案中，本文G'通过约0.1至约10 Hz的振荡应力测量。在一些实施方案中，G'通过约1 Hz的振荡应力测量。在一些实施方案中，G'通过约5 Hz的振荡应力测量。在一些实施方案中，G'通过约10 Hz的振荡应力测量。在一些实施方案中，组织填充物具有约1 Pa·s至约10 Pa·s的复数粘度。在一些实施方案中，组织填充物具有约1 Pa·s、约1.5 Pa·s、约2 Pa·s、约2.5 Pa·s、约3 Pa·s、约3.5 Pa·s、约4 Pa·s、约4.5Pa·s、约5 Pa·s、约5.5 Pa·s、约6 Pa·s、约6.5 Pa·s、约7 Pa·s、约7.5 Pa·s、约8Pa·s、约8.5 Pa·s、约9 Pa·s、约9.5 Pa·s或约10 Pa·s的复数粘度。在一些实施方案中，复数粘度通过约0.1至约10 Hz的振荡应力测量。在一些实施方案中，复数粘度通过约1Hz的振荡应力测量。在一些实施方案中，复数粘度通过约5 Hz的振荡应力测量。
在一个实施方案中，本发明涉及一种处理有需要的对象的状况的方法，和/或一种在有需要的对象中进行美容处理的方法，所述方法包括向所述对象施用治疗有效量的生物相容性组织填充物，所述生物相容性组织填充物包含：糖胺聚糖，其选自透明质酸（HA）、羧甲基纤维素（CMC）、淀粉、藻酸盐、软骨素-4-硫酸盐、软骨素-6-硫酸盐、黄原胶、壳聚糖、果胶、琼脂、角叉菜胶和瓜尔胶；和麻醉剂；其中所述糖胺聚糖的一部分通过包含烷烃或烷基链、醚基团和仲醇中的一种或多种的交联部分交联；并且其中使用交联剂、交联前体或活化剂获得交联；所述组织填充物任选地包含丝蛋白或丝蛋白片段（SPF），其中所述SPF的一部分是交联的。在一些实施方案中，所述状况是皮肤状况。在一些实施方案中，皮肤状况选自皮肤脱水(skin dehydration)、皮肤弹性缺乏(lack of skin elasticity)、皮肤粗糙(skin roughness)、皮肤紧致缺乏(lack of skin tautness)、皮肤拉伸线(skin stretchline)、皮肤拉伸痕(skin stretch mark)、皮肤苍白(skin paleness)、真皮起皮(dermaldivot)、脸颊凹陷(sunken cheek)、薄唇(thin lip)、后眼窝缺陷(retro-orbitaldefect)、面部褶皱(facial fold)和皱纹(wrinkle)。在一些实施方案中，将组织填充物施用至对象的真皮区域。在一些实施方案中，所述方法是增大、重建、治疗疾病、治疗病症、矫正身体部分、区域或部位的缺陷或瑕疵。在一些实施方案中，所述方法是面部增大、面部重建、治疗面部疾病、治疗面部病症、处理面部缺陷或处理面部瑕疵。在一些实施方案中，组织填充物抗生物降解、生物侵蚀、生物吸收和/或生物再吸收至少约3天、约7天、约14天、约21天、约28天、约1个月、约2个月、约3个月、约4个月、约5个月或约6个月。在一些实施方案中，与由包含多糖和利多卡因的对照组织填充物诱导的炎症应答相比，向对象施用组织填充物导致炎症应答降低，其中对照组织填充物不包含丝蛋白片段（SPF）。在一些实施方案中，与由包含多糖和利多卡因的对照组织填充物诱导的胶原产生相比，向对象施用组织填充物导致胶原产生增加，其中对照组织填充物不包含丝蛋白片段（SPF）。
在一个实施方案中，本发明涉及生物相容性组织填充物，其包含多分散性为约1.5至约3.0的丝蛋白片段（SPF）和多糖。在一些实施方案中，多糖是透明质酸（HA）。在一个实施方案中，本发明包括可由丝和透明质酸制备的组织填充物。
在一些实施方案中，本发明涉及生物相容性组织填充物，其包含平均分子量为约1kDa至约250 kDa的丝蛋白片段（SPF）。在一些实施方案中，本发明涉及生物相容性组织填充物，其包含平均分子量为约5 kDa至约150 kDa的丝蛋白片段（SPF）。在一些实施方案中，SPF具有约6 kDa至约17 kDa的平均分子量。在一些实施方案中，SPF具有约17 kDa至约39 kDa的平均分子量。在一些实施方案中，SPF具有约39 kDa至约80 kDa的平均分子量。在一些实施方案中，SPF具有约80 kDa至约150 kDa的平均分子量。
在一些实施方案中，本发明涉及生物相容性组织填充物，其包含最高达约0%至100%的与SPF交联的SPF。在一些实施方案中，使用交联剂如BDDE或本文所述的其它交联剂之一将SPF交联至SPF。在一些实施方案中，交联度最高达约100%。
在一个实施方案中，本发明涉及生物相容性组织填充物，其包含多分散性为约1.5至约3.0的丝蛋白片段（SPF）和透明质酸（HA），其中最高达约0%至100%的SPF交联至SPF，并且使用交联剂如BDDE或本文所述的其它交联剂之一将SPF交联至SPF，并且SPF交联度最高达约100%。
在一个实施方案中，本发明涉及生物相容性组织填充物，其包含多分散性为约1.5至约3.0的丝蛋白片段（SPF）和透明质酸（HA），其中使用交联剂如BDDE或本文所述的其它交联剂之一将最高达100%的HA交联至HA。在一些实施方案中，最高达约100%的SPF交联至SPF，其中使用交联剂如BDDE或本文所述的其它交联剂之一将SPF交联至SPF，并且SPF交联度最高达约100%。
在一个实施方案中，本发明涉及生物相容性组织填充物，其包含多分散性为约1.5至约3.0的丝蛋白片段（SPF）和透明质酸（HA），其中0%至100%的HA是非交联的。在一些实施方案中，最高达约100%的SPF是交联的，其中使用交联剂如BDDE或本文所述的其它交联剂之一将SPF交联，并且SPF交联度最高达约100%。在一些实施方案中，所有HA是非交联的。
在一个实施方案中，本发明涉及生物相容性组织填充物，其包含多分散性为约1.5至约3.0的丝蛋白片段（SPF）和透明质酸（HA），其中0%至100%的SPF与HA交联。在一些实施方案中，使用交联剂如BDDE或本文所述的交联剂之一交联SPF和HA。在一些实施方案中，SPF-HA交联度最高达约100%。在一些实施方案中，最高达100%的HA与HA交联。在一些实施方案中，使用交联剂如BDDE或本文所述的交联剂之一将HA交联至HA。在一些实施方案中，至少0.1%的HA是非交联的。在一些实施方案中，所有HA是非交联的。
在一个实施方案中，本发明涉及生物相容性组织填充物，其包含多分散性为约1.5至约3.0的丝蛋白片段（SPF）和透明质酸（HA），其中至少0.1%的HA是非交联的。在一些实施方案中，最高达约100%的SPF是交联的，其中使用交联剂如BDDE或本文所述的其它交联剂之一交联SPF，并且SPF交联度最高达约100%。在一些实施方案中，所有HA是非交联的。
在一个实施方案中，本发明涉及生物相容性组织填充物，其包含多分散性为约1.5至约3.0的丝蛋白片段（SPF）和透明质酸（HA），其中至少0.1%的SPF与HA交联。在一些实施方案中，使用交联剂如BDDE或本文所述的交联剂之一交联SPF和HA。在一些实施方案中，SPF-HA交联度最高达约100%。在一些实施方案中，最高达100%的HA与HA交联。在一些实施方案中，使用交联剂如BDDE或本文所述的交联剂之一将HA交联至HA。在一些实施方案中，至少0.1%的HA是非交联的。在一些实施方案中，所有HA是非交联的。
在一个实施方案中，本发明涉及生物相容性组织填充物，其包含多分散性为约1.5至约3.0的丝蛋白片段（SPF）和多糖，其中SPF基本上不含丝胶蛋白。
在一个实施方案中，本发明涉及生物相容性凝胶组织填充物，其包含多分散性为约1.5至约3.0的丝蛋白片段（SPF）和多糖。
在一个实施方案中，本发明涉及生物相容性水凝胶组织填充物，其包含多分散性为约1.5至约3.0的丝蛋白片段（SPF）和多糖。
在一个实施方案中，本发明涉及生物相容性组织填充物，其包含多分散性为约1.5至约3.0的丝蛋白片段（SPF）、多糖和水。
在一个实施方案中，本发明涉及生物相容性组织填充物，其包含多分散性为约1.5至约3.0的丝蛋白片段（SPF）和多糖，其中SPF的结晶度为约0%至约60%。
在一个实施方案中，本发明涉及生物相容性组织填充物，其包含多分散性为约1.5至约3.0的丝蛋白片段（SPF）和多糖，并且进一步包含活性剂。在一些实施方案中，活性剂可以是酶抑制剂、麻醉剂、药用神经毒素、抗氧化剂、抗感染剂、血管扩张剂、反射剂、抗炎剂、紫外（UV）光阻挡剂、染料、激素、免疫抑制剂或抗炎剂。在一个实施方案中，麻醉剂是利多卡因。
在一个实施方案中，本发明涉及一种可注射生物相容性组织填充物，其包含具有约1.5至约3.0的多分散性的丝蛋白片段（SPF）和多糖。
在一个实施方案中，本发明涉及生物相容性组织填充物，其包含多分散性为约1.5至约3.0的丝蛋白片段（SPF）和多糖。在一些实施方案中，G'通过约0.1至约10 Hz的振荡应力测量。在一个实施方案中，G'通过约1 Hz的振荡应力测量。
在一个实施方案中，本发明涉及一种制备生物相容性组织填充物的方法，所述生物相容性组织填充物包含多分散性为约1.5至约3.0的丝蛋白片段（SPF）和多糖，所述方法包括提供SPF溶液，和向所述溶液中加入胶凝促进剂，所述胶凝促进剂可以是任何给质子物质。
在一个实施方案中，本发明涉及一种制备生物相容性组织填充物的方法，所述生物相容性组织填充物包含多分散性为约1.5至约3.0的丝蛋白片段（SPF）和多糖，所述方法包括提供SPF溶液，和使所述溶液经受机械激发。
在一个实施方案中，本发明涉及一种处理有需要的对象的状况的方法，该方法包括给对象施用治疗有效量的生物相容性组织填充物，该生物相容性组织填充物包含多分散性为约1.5至约3.0的丝蛋白片段（SPF）和多糖。在一些实施方案中，所述状况是皮肤状况。在一些实施方案中，皮肤状况可以是皮肤脱水、皮肤弹性缺乏、皮肤粗糙、皮肤紧致缺乏、皮肤拉伸线、皮肤拉伸痕、皮肤苍白、真皮起皮、脸颊凹陷、太阳穴凹陷、唇薄、后眼窝缺陷、面部褶皱或皱纹。
在一个实施方案中，本发明涉及一种在有需要的对象中进行美容处理的方法，所述方法包括向所述对象施用有效量的生物相容性组织填充物，所述生物相容性组织填充物包含多分散性为约1.5至约3.0的丝蛋白片段（SPF）和多糖。
在一些实施方案中，本发明的方法包括将生物相容性组织填充物施用至对象的真皮区域，所述生物相容性组织填充物包含多分散性为约1.5至约3.0的丝蛋白片段（SPF）和多糖。
在一个实施方案中，本发明的方法包括施用生物相容性组织填充物，该生物相容性组织填充物包含多分散性为约1.5-约3.0的丝蛋白片段（SPF）和多糖，该方法可以是增大、重建、治疗疾病、治疗病症、矫正身体部分、区域或部位的缺陷或瑕疵。
在一个实施方案中，本发明的方法包括施用生物相容性组织填充物，该生物相容性组织填充物包含多分散性为约1.5-约3.0的丝蛋白片段（SPF）和多糖，该方法可以是面部增大、面部重建、治疗面部疾病、治疗面部病症、处理面部缺陷或处理面部瑕疵。
在一个实施方案中，根据本发明的方法施用的包含多分散性为约1.5至约3.0的丝蛋白片段（SPF）和多糖的生物相容性组织填充物在施用后抗生物降解、生物吸收和/或生物再吸收至少约3天。
在一个实施方案中，本发明涉及生物相容性组织填充物，例如真皮填充物，其包含多分散性为约1.5至约3.0的丝蛋白片段（SPF）和多糖，所述SPF的平均重均分子量为约1kDa至约250 kDa、约5 kDa至约150 kDa、约6 kDa至约17 kDa、约17 kDa至约39 kDa或约39kDa至约80 kDa。在一些实施方案中，组织填充物是可生物降解的。在一些实施方案中，SPF的一部分是交联的。在一些实施方案中，SPF的一部分与多糖交联。在一些实施方案中，SPF的一部分与SPF交联。在一些实施方案中，多糖的一部分与多糖交联。在一些实施方案中，组织填充物还包含交联部分，例如环氧衍生的交联部分。在一些实施方案中，一部分交联是自交联。在一些实施方案中，交联SPF的部分为至多约100%。在一些实施方案中，交联多糖的部分为至多约100%。在一些实施方案中，多糖是透明质酸（HA）。在一些实施方案中，SPF基本上不含丝胶蛋白。在一些实施方案中，组织填充物还包含水。
在一个实施方案中，本发明涉及生物相容性组织填充物，例如真皮填充物，其包含多分散性为约1.5至约3.0的丝蛋白片段（SPF）和多糖，所述SPF具有低分子量、中分子量和/或高分子量。在一些实施方案中，组织填充物是可生物降解的。在一些实施方案中，SPF的一部分是交联的。在一些实施方案中，SPF的一部分与多糖交联。在一些实施方案中，SPF的一部分与SPF交联。在一些实施方案中，多糖的一部分与多糖交联。在一些实施方案中，组织填充物还包含交联部分，例如环氧衍生的交联部分。在一些实施方案中，一部分交联是自交联。在一些实施方案中，交联SPF的部分为至多约100%。在一些实施方案中，交联多糖的部分为至多约100%。在一些实施方案中，多糖是透明质酸（HA）。在一些实施方案中，SPF基本上不含丝胶蛋白。在一些实施方案中，组织填充物还包含水。
在一个实施方案中，本发明涉及生物相容性组织填充物，例如真皮填充物，其包含多分散性为约1.5至约3.0的丝蛋白片段（SPF）和多糖，所述SPF的平均重均分子量为约1kDa至约250 kDa、约5 kDa至约150 kDa、约6 kDa至约17 kDa、约17 kDa至约39 kDa或约39kDa至约80 kDa。在一些实施方案中，组织填充物是可生物降解的。在一些实施方案中，SPF的一部分是交联的。在一些实施方案中，SPF的一部分与多糖交联。在一些实施方案中，SPF的一部分与SPF交联。在一些实施方案中，多糖的一部分与多糖交联。在一些实施方案中，交联包括化学键交联。在一些实施方案中，一部分交联是零长度交联。在一些实施方案中，一部分交联是自交联。在一些实施方案中，交联SPF的部分为至多约100%。在一些实施方案中，交联多糖的部分为至多约100%。在一些实施方案中，多糖是透明质酸（HA）。在一些实施方案中，SPF基本上不含丝胶蛋白。在一些实施方案中，组织填充物还包含水。
在一个实施方案中，本发明涉及生物相容性组织填充物，例如真皮填充物，其包含多分散性为约1.5至约3.0的丝蛋白片段（SPF）和多糖，所述SPF具有低分子量、中分子量和/或高分子量。在一些实施方案中，组织填充物是可生物降解的。在一些实施方案中，SPF的一部分是交联的。在一些实施方案中，SPF的一部分与多糖交联。在一些实施方案中，SPF的一部分与SPF交联。在一些实施方案中，多糖的一部分与多糖交联。在一些实施方案中，交联包括化学键交联。在一些实施方案中，一部分交联是零长度交联。在一些实施方案中，一部分交联是自交联。在一些实施方案中，交联SPF的部分为至多约100%。在一些实施方案中，交联多糖的部分为至多约100%。在一些实施方案中，多糖是透明质酸（HA）。在一些实施方案中，SPF基本上不含丝胶蛋白。在一些实施方案中，组织填充物还包含水。
在一些实施方案中，相对于SPF的总量，交联SPF的% w/w量为最高达约1%、约2%、约3%、约4%、约5%、约6%、约7%、约8%、约9%、约10%、约11%、约12%、约13%、约14%、约15%、约16%、约17%、约18%、约19%、约20%、约21%、约22%、约23%、约24%、约25%、约26%、约27%、约28%、约29%、约30%、约31%、约32%、约33%、约34%、约35%、约36%、约37%、约38%、约39%、约40%、约41%、约42%、约43%、约44%、约45%、约46%、约47%、约48%、约49%、约50%、约51%、约52%、约53%、约54%、约55%、约56%、约57%、约58%、约59%、约60%、约61%、约62%、约63%、约64%、约65%、约66%、约67%、约68%、约69%、约70%、约71%、约72%、约73%、约74%、约75%、约76%、约77%、约78%、约79%、约80%、约81%、约82%、约83%、约84%、约85%、约86%、约87%、约88%、约89%、约90%、约91%、约92%、约93%、约94%、约95%、约96%、约97%、约98%、约99%或约100%。
在一些实施方案中，SPF的交联度为最高达约1%、约2%、约3%、约4%、约5%、约6%、约7%、约8%、约9%、约10%、约11%、约12%、约13%、约14%、约15%、约16%、约17%、约18%、约19%、约20%、约21%、约22%、约23%、约24%、约25%、约26%、约27%、约28%、约29%、约30%、约31%、约32%、约33%、约34%、约35%、约36%、约37%、约38%、约39%、约40%、约41%、约42%、约43%、约44%、约45%、约46%、约47%、约48%、约49%、约50%、约51%、约52%、约53%、约54%、约55%、约56%、约57%、约58%、约59%、约60%、约61%、约62%、约63%、约64%、约65%、约66%、约67%、约68%、约69%、约70%、约71%、约72%、约73%、约74%、约75%、约76%、约77%、约78%、约79%、约80%、约81%，约82%、约83%、约84%、约85%、约86%、约87%、约88%、约89%、约90%、约91%、约92%、约93%、约94%、约95%、约96%、约97%、约98%、约99%或约100%。
在一些实施方案中，相对于HA总量，交联HA的% w/w量为最高达约1%、约2%、约3%、约4%、约5%、约6%、约7%、约8%、约9%、约10%、约11%、约12%、约13%、约14%、约15%、约16%、约17%、约18%、约19%、约20%、约21%、约22%、约23%、约24%、约25%、约26%、约27%、约28%、约29%、约30%、约31%、约32%、约33%、约34%、约35%、约36%、约37%、约38%、约39%、约40%、约41%、约42%、约43%、约44%、约45%、约46%、约47%、约48%、约49%、约50%、约51%、约52%、约53%、约54%、约55%、约56%、约57%、约58%、约59%、约60%、约61%、约62%、约63%、约64%、约65%、约66%、约67%、约68%、约69%、约70%、约71%、约72%、约73%、约74%、约75%、约76%、约77%、约78%、约79%、约80%、约81%、约82%、约83%、约84%、约85%、约86%、约87%、约88%、约89%、约90%、约91%、约92%、约93%、约94%、约95%、约96%、约97%、约98%、约99%或约100%。
在一些实施方案中，HA的交联度为最高达约1%、约2%、约3%、约4%、约5%、约6%、约7%、约8%、约9%、约10%、约11%、约12%、约13%、约14%、约15%、约16%、约17%、约18%、约19%、约20%、约21%、约22%、约23%、约24%、约25%、约26%、约27%、约28%、约29%、约30%、约31%、约32%、约33%、约34%、约35%、约36%、约37%、约38%、约39%、约40%、约41%、约42%、约43%、约44%、约45%、约46%、约47%、约48%、约49%、约50%、约51%、约52%、约53%、约54%、约55%、约56%、约57%、约58%、约59%、约60%、约61%、约62%、约63%、约64%、约65%、约66%、约67%、约68%、约69%、约70%、约71%，约72%、约73%、约74%、约75%、约76%、约77%、约78%、约79%、约80%、约81%、约82%、约83%、约84%、约85%、约86%、约87%、约88%、约89%、约90%、约91%、约92%、约93%、约94%、约95%、约96%、约97%、约98%、约99%或约100%。
在一个实施方案中，本发明涉及生物相容性组织填充物，例如真皮填充物，其包含多分散性为约1.5至约3.0的丝蛋白片段（SPF）和多糖，所述SPF的平均重均分子量为约1kDa至约250 kDa、约5 kDa至约150 kDa、约6 kDa至约17 kDa、约17 kDa至约39 kDa或约39kDa至约80 kDa。在一些实施方案中，组织填充物是可生物降解的。在一些实施方案中，SPF的一部分是交联的。在一些实施方案中，SPF的一部分与多糖交联。在一些实施方案中，SPF的一部分与SPF交联。在一些实施方案中，多糖的一部分与多糖交联。在一些实施方案中，交联包括化学键交联。在一些实施方案中，一部分交联是零长度交联。在一些实施方案中，一部分交联是自交联。在一些实施方案中，交联SPF的部分为至多约100%。在一些实施方案中，交联多糖的部分为至多约100%。在一些实施方案中，多糖是透明质酸（HA）。在一些实施方案中，使用交联剂、交联前体或活化剂获得交联。在一些实施方案中，交联剂和/或交联前体包含环氧基团。在一些实施方案中，SPF基本上不含丝胶蛋白。
在一个实施方案中，本发明涉及生物相容性组织填充物，例如真皮填充物，其包含多分散性为约1.5至约3.0的丝蛋白片段（SPF）和多糖，所述SPF具有低分子量、中分子量和/或高分子量。在一些实施方案中，组织填充物是可生物降解的。在一些实施方案中，SPF的一部分是交联的。在一些实施方案中，SPF的一部分与多糖交联。在一些实施方案中，SPF的一部分与SPF交联。在一些实施方案中，多糖的一部分与多糖交联。在一些实施方案中，交联包括化学键交联。在一些实施方案中，一部分交联是零长度交联。在一些实施方案中，一部分交联是自交联。在一些实施方案中，交联SPF的部分为至多约100%。在一些实施方案中，交联多糖的部分为至多约100%。在一些实施方案中，多糖是透明质酸（HA）。在一些实施方案中，使用交联剂、交联前体或活化剂获得交联。在一些实施方案中，交联剂和/或交联前体包含环氧基团。在一些实施方案中，SPF基本上不含丝胶蛋白。
在一个实施方案中，本发明涉及生物相容性组织填充物，例如真皮填充物，其包含多分散性为约1.5至约3.0的丝蛋白片段（SPF）和多糖，所述SPF的平均重均分子量为约1kDa至约250 kDa、约5 kDa至约150 kDa、约6 kDa至约17 kDa、约17 kDa至约39 kDa或约39kDa至约80 kDa。在一些实施方案中，组织填充物是可生物降解的。在一些实施方案中，SPF的一部分是交联的。在一些实施方案中，SPF的一部分与多糖交联。在一些实施方案中，SPF的一部分与SPF交联。在一些实施方案中，多糖的一部分与多糖交联。在一些实施方案中，交联包括化学键交联。在一些实施方案中，一部分交联是零长度交联。在一些实施方案中，一部分交联是自交联。在一些实施方案中，交联SPF的部分为至多约100%。在一些实施方案中，交联多糖的部分为至多约100%。在一些实施方案中，多糖是透明质酸（HA）。在一些实施方案中，使用交联剂、交联前体或活化剂获得交联，所述交联剂、交联前体或活化剂选自1,4-双（2,3-环氧丙氧基）丁烷、1,4-双缩水甘油氧基丁烷、二乙烯基砜（DVS）、1,4-丁二醇二缩水甘油醚（BDDE）、UV光、戊二醛、1,2-双（2,3-环氧丙氧基）乙烯（EGDGE）、1,2,7,8-二环氧辛烷（DEO）、双碳二亚胺（BCDI）、季戊四醇四缩水甘油醚（PETGE）、己二酰肼（ADH）、双（磺基琥珀酰亚胺基）辛二酸酯（BS）、六亚甲基二胺（HMDA）、1- （2,3-环氧丙基） -2,3-环氧环己烷、碳二亚胺及其任意组合。在一些实施方案中，SPF基本上不含丝胶蛋白。
在一个实施方案中，本发明涉及生物相容性组织填充物，例如真皮填充物，其包含多分散性为约1.5至约3.0的丝蛋白片段（SPF）和多糖，所述SPF具有低分子量、中分子量和/或高分子量。在一些实施方案中，组织填充物是可生物降解的。在一些实施方案中，SPF的一部分是交联的。在一些实施方案中，SPF的一部分与多糖交联。在一些实施方案中，SPF的一部分与SPF交联。在一些实施方案中，多糖的一部分与多糖交联。在一些实施方案中，交联包括化学键交联。在一些实施方案中，一部分交联是零长度交联。在一些实施方案中，一部分交联是自交联。在一些实施方案中，交联SPF的部分为至多约100%。在一些实施方案中，交联多糖的部分为至多约100%。在一些实施方案中，多糖是透明质酸（HA）。在一些实施方案中，使用交联剂、交联前体或活化剂获得交联，所述交联剂、交联前体或活化剂选自1,4-双（2,3-环氧丙氧基）丁烷、1,4-双缩水甘油氧基丁烷、二乙烯基砜（DVS）、1,4-丁二醇二缩水甘油醚（BDDE）、UV光、戊二醛、1,2-双（2,3-环氧丙氧基）乙烯（EGDGE）、1,2,7,8-二环氧辛烷（DEO）、双碳二亚胺（BCDI）、季戊四醇四缩水甘油醚（PETGE）、己二酰肼（ADH）、双（磺基琥珀酰亚胺基）辛二酸酯（BS）、六亚甲基二胺（HMDA）、1- （2,3-环氧丙基） -2,3-环氧环己烷、碳二亚胺及其任意组合。在一些实施方案中，SPF基本上不含丝胶蛋白。
在一个实施方案中，本发明涉及生物相容性组织填充物凝胶，例如真皮填充物凝胶，其包含多分散性为约1.5至约3.0的丝蛋白片段（SPF）和多糖，所述SPF的平均重均分子量为约1 kDa至约250 kDa、约5 kDa至约150 kDa、约6 kDa至约17 kDa、约17 kDa至约39kDa或约39 kDa至约80 kDa。在一些实施方案中，组织填充物是可生物降解的。在一些实施方案中，SPF的一部分是交联的。在一些实施方案中，SPF的一部分与多糖交联。在一些实施方案中，SPF的一部分与SPF交联。在一些实施方案中，多糖的一部分与多糖交联。在一些实施方案中，交联包括化学键交联。在一些实施方案中，一部分交联是零长度交联。在一些实施方案中，一部分交联是自交联。在一些实施方案中，交联SPF的部分为至多约100%。在一些实施方案中，交联多糖的部分为至多约100%。在一些实施方案中，多糖是透明质酸（HA）。在一些实施方案中，凝胶还包含水。
在一个实施方案中，本发明涉及生物相容性组织填充物凝胶，例如真皮填充物凝胶，其包含多分散性为约1.5至约3.0的丝蛋白片段（SPF）和多糖，所述SPF具有低分子量、中分子量和/或高分子量。在一些实施方案中，组织填充物是可生物降解的。在一些实施方案中，SPF的一部分是交联的。在一些实施方案中，SPF的一部分与多糖交联。在一些实施方案中，SPF的一部分与SPF交联。在一些实施方案中，多糖的一部分与多糖交联。在一些实施方案中，交联包括化学键交联。在一些实施方案中，一部分交联是零长度交联。在一些实施方案中，一部分交联是自交联。在一些实施方案中，交联SPF的部分为至多约100%。在一些实施方案中，交联多糖的部分为至多约100%。在一些实施方案中，多糖是透明质酸（HA）。在一些实施方案中，凝胶还包含水。
在一个实施方案中，本发明涉及生物相容性组织填充物水凝胶，例如真皮填充物水凝胶，其包含多分散性为约1.5至约3.0的丝蛋白片段（SPF）和多糖，所述SPF的平均重均分子量为约1 kDa至约250 kDa、约5 kDa至约150 kDa、约6 kDa至约17 kDa、约17 kDa至约39 kDa或约39 kDa至约80 kDa。在一些实施方案中，组织填充物是可生物降解的。在一些实施方案中，SPF的一部分是交联的。在一些实施方案中，SPF的一部分与多糖交联。在一些实施方案中，SPF的一部分与SPF交联。在一些实施方案中，多糖的一部分与多糖交联。在一些实施方案中，交联包括化学键交联。在一些实施方案中，一部分交联是零长度交联。在一些实施方案中，一部分交联是自交联。在一些实施方案中，交联SPF的部分为至多约100%。在一些实施方案中，交联多糖的部分为至多约100%。在一些实施方案中，多糖是透明质酸（HA）。在一些实施方案中，水凝胶还包含水。
在一个实施方案中，本发明涉及生物相容性组织填充物水凝胶，例如真皮填充物水凝胶，其包含多分散性为约1.5至约3.0的丝蛋白片段（SPF）和多糖，所述SPF具有低分子量、中分子量和/或高分子量。在一些实施方案中，组织填充物是可生物降解的。在一些实施方案中，SPF的一部分是交联的。在一些实施方案中，SPF的一部分与多糖交联。在一些实施方案中，SPF的一部分与SPF交联。在一些实施方案中，多糖的一部分与多糖交联。在一些实施方案中，交联包括化学键交联。在一些实施方案中，一部分交联是零长度交联。在一些实施方案中，一部分交联是自交联。在一些实施方案中，交联SPF的部分为至多约100%。在一些实施方案中，交联多糖的部分为至多约100%。在一些实施方案中，多糖是透明质酸（HA）。在一些实施方案中，水凝胶还包含水。
在一个实施方案中，本发明涉及生物相容性组织填充物，例如真皮填充物，其包含多分散性为约1.5至约3.0的丝蛋白片段（SPF）和多糖，所述SPF的平均重均分子量为约1kDa至约250 kDa、约5 kDa至约150 kDa、约6 kDa至约17 kDa、约17 kDa至约39 kDa或约39kDa至约80 kDa。在一些实施方案中，组织填充物是可生物降解的。在一些实施方案中，SPF的一部分是交联的。在一些实施方案中，SPF的一部分与多糖交联。在一些实施方案中，SPF的一部分与SPF交联。在一些实施方案中，多糖的一部分与多糖交联。在一些实施方案中，交联包括化学键交联。在一些实施方案中，一部分交联是零长度交联。在一些实施方案中，一部分交联是自交联。在一些实施方案中，交联SPF的部分为至多约100%。在一些实施方案中，交联多糖的部分为至多约100%。在一些实施方案中，多糖是透明质酸（HA）。在一些实施方案中，SPF具有最高达约1%、约2%、约3%、约4%、约5%、约6%、约7%、约8%、约9%、约10%、约11%、约12%，约13%、约14%、约15%、约16%、约17%、约18%、约19%、约20%、约21%、约22%、约23%、约24%、约25%、约26%、约27%、约28%、约29%、约30%、约31%、约32%、约33%、约34%、约35%、约36%、约37%、约38%、约39%、约40%、约41%、约42%、约43%、约44%、约45%、约46%、约47%、约48%、约49%、约50%、约51%、约52%、约53%、约54%、约55%、约56%、约57%、约58%、约59%、约60%或多于60%的结晶度。
在一个实施方案中，本发明涉及生物相容性组织填充物，例如真皮填充物，其包含多分散性为约1.5至约3.0的丝蛋白片段（SPF）和多糖，所述SPF具有低分子量、中分子量和/或高分子量。在一些实施方案中，组织填充物是可生物降解的。在一些实施方案中，SPF的一部分是交联的。在一些实施方案中，SPF的一部分与多糖交联。在一些实施方案中，SPF的一部分与SPF交联。在一些实施方案中，多糖的一部分与多糖交联。在一些实施方案中，交联包括化学键交联。在一些实施方案中，一部分交联是零长度交联。在一些实施方案中，一部分交联是自交联。在一些实施方案中，交联SPF的部分为至多约100%。在一些实施方案中，交联多糖的部分为至多约100%。在一些实施方案中，多糖是透明质酸（HA）。在一些实施方案中，SPF具有最高达约1%、约2%、约3%、约4%、约5%、约6%、约7%、约8%、约9%、约10%、约11%、约12%、约13%、约14%、约15%、约16%、约17%、约18%、约19%、约20%、约21%、约22%、约23%、约24%、约25%、约26%、约27%、约28%、约29%、约30%、约31%、约32%、约33%、约34%、约35%、约36%、约37%、约38%、约39%、约40%、约41%、约42%、约43%、约44%、约45%、约46%、约47%、约48%、约49%、约50%、约51%、约52%、约53%、约54%、约55%、约56%、约57%、约58%、约59%、约60%或大于60%的结晶度。
在一个实施方案中，本发明涉及生物相容性组织填充物，例如真皮填充物，其包含多分散性为约1.5至约3.0的丝蛋白片段（SPF）和多糖，所述SPF的平均重均分子量为约1kDa至约250 kDa、约5 kDa至约150 kDa、约6 kDa至约17 kDa、约17 kDa至约39 kDa或约39kDa至约80 kDa。在一些实施方案中，组织填充物是可生物降解的。在一些实施方案中，SPF的一部分是交联的。在一些实施方案中，SPF的一部分与多糖交联。在一些实施方案中，SPF的一部分与SPF交联。在一些实施方案中，多糖的一部分与多糖交联。在一些实施方案中，交联包括化学键交联。在一些实施方案中，一部分交联是零长度交联。在一些实施方案中，一部分交联是自交联。在一些实施方案中，交联SPF的部分为至多约100%。在一些实施方案中，交联多糖的部分为至多约100%。在一些实施方案中，多糖是透明质酸（HA）。在一些实施方案中，组织填充物还包含活性剂。在一些实施方案中，活性剂选自酶抑制剂、麻醉剂、药用神经毒素、抗氧化剂、抗感染剂、抗炎剂、紫外（UV）光阻断剂、染料、激素、免疫抑制剂和抗炎剂。在一些实施方案中，麻醉剂是利多卡因。
在一个实施方案中，本发明涉及生物相容性组织填充物，例如真皮填充物，其包含多分散性为约1.5至约3.0的丝蛋白片段（SPF）和多糖，所述SPF具有低分子量、中分子量和/或高分子量。在一些实施方案中，组织填充物是可生物降解的。在一些实施方案中，SPF的一部分是交联的。在一些实施方案中，SPF的一部分与多糖交联。在一些实施方案中，SPF的一部分与SPF交联。在一些实施方案中，多糖的一部分与多糖交联。在一些实施方案中，交联包括化学键交联。在一些实施方案中，一部分交联是零长度交联。在一些实施方案中，一部分交联是自交联。在一些实施方案中，交联SPF的部分为至多约100%。在一些实施方案中，交联多糖的部分为至多约100%。在一些实施方案中，多糖是透明质酸（HA）。在一些实施方案中，组织填充物还包含活性剂。在一些实施方案中，活性剂选自酶抑制剂、麻醉剂、药用神经毒素、抗氧化剂、抗感染剂、抗炎剂、紫外（UV）光阻断剂、染料、激素、免疫抑制剂和抗炎剂。在一些实施方案中，麻醉剂是利多卡因。
在一个实施方案中，本发明涉及生物相容性可注射组织填充物，例如可注射真皮填充物，其包含具有约1.5至约3.0的多分散性的丝蛋白片段（SPF）和多糖，所述SPF的平均重均分子量为约1 kDa至约250 kDa、约5 kDa至约150 kDa、约6 kDa至约17 kDa、约17 kDa至约39 kDa或约39 kDa至约80 kDa。在一些实施方案中，组织填充物是可生物降解的。在一些实施方案中，SPF的一部分是交联的。在一些实施方案中，SPF的一部分与多糖交联。在一些实施方案中，SPF的一部分与SPF交联。在一些实施方案中，多糖的一部分与多糖交联。在一些实施方案中，交联包括化学键交联。在一些实施方案中，一部分交联是零长度交联。在一些实施方案中，一部分交联是自交联。在一些实施方案中，交联SPF的部分为至多约100%。在一些实施方案中，交联多糖的部分为至多约100%。在一些实施方案中，多糖是透明质酸（HA）。
在一个实施方案中，本发明涉及生物相容性可注射组织填充物，例如可注射真皮填充物，其包含具有约1.5至约3.0的多分散性的丝蛋白片段（SPF）和多糖，所述SPF具有低分子量、中分子量和/或高分子量。在一些实施方案中，组织填充物是可生物降解的。在一些实施方案中，SPF的一部分是交联的。在一些实施方案中，SPF的一部分与多糖交联。在一些实施方案中，SPF的一部分与SPF交联。在一些实施方案中，多糖的一部分与多糖交联。在一些实施方案中，交联包括化学键交联。在一些实施方案中，一部分交联是零长度交联。在一些实施方案中，一部分交联是自交联。在一些实施方案中，交联SPF的部分为至多约100%。在一些实施方案中，交联多糖的部分为至多约100%。在一些实施方案中，多糖是透明质酸（HA）。
在一个实施方案中，本发明涉及具有约50 Pa至约1500 Pa储能模量（G'）的生物相容性组织填充物，例如具有约50 Pa至约1500 Pa储能模量（G'）的真皮填充物，所述填充物包含多分散性为约1.5至约3.0的丝蛋白片段（SPF）和多糖，所述SPF的平均重均分子量为约5 kDa至约150 kDa、约6 kDa至约17 kDa、约17 kDa至约39 kDa或约39 kDa至约80 kDa。在一些实施方案中，组织填充物是可生物降解的。在一些实施方案中，SPF的一部分是交联的。在一些实施方案中，SPF的一部分与多糖交联。在一些实施方案中，SPF的一部分与SPF交联。在一些实施方案中，多糖的一部分与多糖交联。在一些实施方案中，交联包括化学键交联。在一些实施方案中，一部分交联是零长度交联。在一些实施方案中，一部分交联是自交联。在一些实施方案中，交联SPF的部分为至多约100%。在一些实施方案中，交联多糖的部分为至多约100%。在一些实施方案中，多糖是透明质酸（HA）。在一些实施方案中，G'通过约0.1至约10 Hz的振荡应力测量。在一些实施方案中，G'通过约1 Hz的振荡应力测量。
在一个实施方案中，本发明涉及储能模量（G'）为约50 Pa至约1500 Pa的生物相容性组织填充物，例如储能模量（G'）为约50 Pa至约1500 Pa的真皮填充物，该填充物包含多分散性为约1.5至约3.0的丝蛋白片段（SPF）和多糖，该SPF具有低分子量、中分子量或高分子量。在一些实施方案中，组织填充物是可生物降解的。在一些实施方案中，SPF的一部分是交联的。在一些实施方案中，SPF的一部分与多糖交联。在一些实施方案中，SPF的一部分与SPF交联。在一些实施方案中，多糖的一部分与多糖交联。在一些实施方案中，交联包括化学键交联。在一些实施方案中，一部分交联是零长度交联。在一些实施方案中，一部分交联是自交联。在一些实施方案中，交联SPF的部分为至多约100%。在一些实施方案中，交联多糖的部分为至多约100%。在一些实施方案中，多糖是透明质酸（HA）。在一些实施方案中，G'通过约0.1至约10 Hz的振荡应力测量。在一些实施方案中，G'通过约1 Hz的振荡应力测量。
在一些实施方案中，本发明涉及一种制备生物相容性组织填充物例如真皮填充物的方法，所述生物相容性组织填充物包含多分散性为约1.5至约3.0的丝蛋白片段（SPF）和多糖，所述方法包括提供包含SPF和多糖的组合物，和向溶液中加入交联剂、交联前体、活化剂或胶凝促进剂，所述SPF的平均重均分子量为约1 kDa至约250 kDa、约5 kDa至约150kDa、约6 kDa至约17 kDa、约17 kDa至约39 kDa或约39 kDa至约80 kDa。在一些实施方案中，组织填充物是可生物降解的。在一些实施方案中，SPF的一部分是交联的。在一些实施方案中，SPF的一部分与多糖交联。在一些实施方案中，SPF的一部分与SPF交联。在一些实施方案中，多糖的一部分与多糖交联。在一些实施方案中，组织填充物还包含交联部分，例如环氧衍生的交联部分。在一些实施方案中，一部分交联是自交联。在一些实施方案中，交联SPF的部分为至多约100%。在一些实施方案中，交联多糖的部分为至多约100%。在一些实施方案中，多糖是透明质酸（HA）。在一些实施方案中，SPF基本上不含丝胶蛋白。在一些实施方案中，组织填充物还包含水。
在一些实施方案中，本发明涉及一种制备生物相容性组织填充物例如真皮填充物的方法，所述生物相容性组织填充物包含多分散性为约1.5至约3.0的丝蛋白片段（SPF）和多糖，所述方法包括提供包含SPF和多糖的组合物，和向溶液中加入交联剂、交联前体、活化剂或胶凝促进剂，所述SPF具有低分子量、中分子量和/或高分子量。在一些实施方案中，组织填充物是可生物降解的。在一些实施方案中，SPF的一部分是交联的。在一些实施方案中，SPF的一部分与多糖交联。在一些实施方案中，SPF的一部分与SPF交联。在一些实施方案中，多糖的一部分与多糖交联。在一些实施方案中，组织填充物还包含交联部分，例如环氧衍生的交联部分。在一些实施方案中，一部分交联是自交联。在一些实施方案中，交联SPF的部分为至多约100%。在一些实施方案中，交联多糖的部分为至多约100%。在一些实施方案中，多糖是透明质酸（HA）。在一些实施方案中，SPF基本上不含丝胶蛋白。在一些实施方案中，组织填充物还包含水。
在一些实施方案中，本发明涉及一种处理有需要的对象的状况例如皮肤状况的方法，所述方法包括向所述对象施用治疗有效量的生物相容性组织填充物，例如真皮填充物，其包含多分散性为约1.5至约3.0的丝蛋白片段（SPF）和多糖，所述SPF的平均重均分子量为约1 kDa至约250 kDa、约5 kDa至约150 kDa、约6 kDa至约17 kDa、约17 kDa至约39 kDa或约39 kDa至约80 kDa。在一些实施方案中，组织填充物是可生物降解的。在一些实施方案中，SPF的一部分是交联的。在一些实施方案中，SPF的一部分与多糖交联。在一些实施方案中，SPF的一部分与SPF交联。在一些实施方案中，多糖的一部分与多糖交联。在一些实施方案中，组织填充物还包含交联部分，例如环氧衍生的交联部分。在一些实施方案中，一部分交联是自交联。在一些实施方案中，交联SPF的部分为至多约100%。在一些实施方案中，交联多糖的部分为至多约100%。在一些实施方案中，多糖是透明质酸（HA）。在一些实施方案中，SPF基本上不含丝胶蛋白。在一些实施方案中，组织填充物还包含水。在一些实施方案中，皮肤状况选自皮肤脱水、皮肤弹性缺乏、皮肤粗糙、皮肤紧致缺乏、皮肤拉伸线、皮肤拉伸痕、皮肤苍白、真皮起皮、脸颊凹陷、薄唇、后眼窝缺陷、面部褶皱和皱纹。在一些实施方案中，将组织填充物施用至对象的真皮区域中。在一些实施方案中，所述方法是增大、重建、治疗疾病、治疗病症、矫正身体部分、区域或部位的缺陷或瑕疵。在一些实施方案中，所述方法是面部增大、面部重建、治疗面部疾病、治疗面部病症、处理面部缺陷或处理面部瑕疵。在一些实施方案中，组织填充物抗生物降解、生物侵蚀、生物吸收和/或生物再吸收至少约3天、约7天、约14天、约21天、约28天、约1个月、约2个月、约3个月、约4个月、约5个月或约6个月。
在一些实施方案中，本发明涉及一种处理有需要的对象的状况例如皮肤状况的方法，所述方法包括向所述对象施用治疗有效量的生物相容性组织填充物，例如真皮填充物，其包含多分散性为约1.5至约3.0的丝蛋白片段（SPF）和多糖，所述SPF具有低分子量、中分子量和/或高分子量。在一些实施方案中，组织填充物是可生物降解的。在一些实施方案中，SPF的一部分是交联的。在一些实施方案中，SPF的一部分与多糖交联。在一些实施方案中，SPF的一部分与SPF交联。在一些实施方案中，多糖的一部分与多糖交联。在一些实施方案中，组织填充物还包含交联部分，例如环氧衍生的交联部分。在一些实施方案中，一部分交联是自交联。在一些实施方案中，交联SPF的部分为至多约100%。在一些实施方案中，交联多糖的部分为至多约100%。在一些实施方案中，多糖是透明质酸（HA）。在一些实施方案中，SPF基本上不含丝胶蛋白。在一些实施方案中，组织填充物还包含水。在一些实施方案中，皮肤状况选自皮肤脱水、皮肤弹性缺乏、皮肤粗糙、皮肤紧致缺乏、皮肤拉伸线、皮肤拉伸痕、皮肤苍白、真皮起皮、脸颊凹陷、薄唇、后眼窝缺陷、面部褶皱和皱纹。在一些实施方案中，将组织填充物施用至对象的真皮区域中。在一些实施方案中，所述方法是增大、重建、治疗疾病、治疗病症、矫正身体部分、区域或部位的缺陷或瑕疵。在一些实施方案中，所述方法是面部增大、面部重建、治疗面部疾病、治疗面部病症、处理面部缺陷或处理面部瑕疵。在一些实施方案中，组织填充物抗生物降解、生物侵蚀、生物吸收和/或生物再吸收至少约3天、约7天、约14天、约21天、约28天、约1个月、约2个月、约3个月、约4个月、约5个月或约6个月。
在一些实施方案中，本发明涉及在有需要的对象中进行美容处理的方法，所述方法包括向所述对象施用有效量的生物相容性组织填充物，例如真皮填充物，其包含多分散性为约1.5至约3.0的丝蛋白片段（SPF）和多糖，所述SPF的平均重均分子量为约1 kDa至约250 kDa、约5 kDa至约150 kDa、约6 kDa至约17 kDa、约17 kDa至约39 kDa或约39 kDa至约80 kDa。在一些实施方案中，组织填充物是可生物降解的。在一些实施方案中，SPF的一部分是交联的。在一些实施方案中，SPF的一部分与多糖交联。在一些实施方案中，SPF的一部分与SPF交联。在一些实施方案中，多糖的一部分与多糖交联。在一些实施方案中，组织填充物还包含交联部分，例如环氧衍生的交联部分。在一些实施方案中，一部分交联是自交联。在一些实施方案中，交联SPF的部分为至多约100%。在一些实施方案中，交联多糖的部分为至多约100%。在一些实施方案中，多糖是透明质酸（HA）。在一些实施方案中，SPF基本上不含丝胶蛋白。在一些实施方案中，组织填充物还包含水。在一些实施方案中，将组织填充物施用至对象的真皮区域中。在一些实施方案中，所述方法是增大、重建、治疗疾病、治疗病症、矫正身体部分、区域或部位的缺陷或瑕疵。在一些实施方案中，所述方法是面部增大、面部重建、治疗面部疾病、治疗面部病症、处理面部缺陷或处理面部瑕疵。在一些实施方案中，组织填充物抗生物降解、生物侵蚀、生物吸收和/或生物再吸收至少约3天、约7天、约14天、约21天、约28天、约1个月、约2个月、约3个月、约4个月、约5个月或约6个月。
在一些实施方案中，本发明涉及在有需要的对象中进行美容处理的方法，所述方法包括向所述对象施用有效量的生物相容性组织填充物，例如真皮填充物，其包含多分散性为约1.5至约3.0的丝蛋白片段（SPF）和多糖，所述SPF具有低分子量、中分子量和/或高分子量。在一些实施方案中，组织填充物是可生物降解的。在一些实施方案中，SPF的一部分是交联的。在一些实施方案中，SPF的一部分与多糖交联。在一些实施方案中，SPF的一部分与SPF交联。在一些实施方案中，多糖的一部分与多糖交联。在一些实施方案中，组织填充物还包含交联部分，例如环氧衍生的交联部分。在一些实施方案中，一部分交联是自交联。在一些实施方案中，交联SPF的部分为至多约100%。在一些实施方案中，交联多糖的部分为至多约100%。在一些实施方案中，多糖是透明质酸（HA）。在一些实施方案中，SPF基本上不含丝胶蛋白。在一些实施方案中，组织填充物还包含水。在一些实施方案中，将组织填充物施用至对象的真皮区域中。在一些实施方案中，所述方法是增大、重建、治疗疾病、治疗病症、矫正身体部分、区域或部位的缺陷或瑕疵。在一些实施方案中，所述方法是面部增大、面部重建、治疗面部疾病、治疗面部病症、处理面部缺陷或处理面部瑕疵。在一些实施方案中，组织填充物抗生物降解、生物侵蚀、生物吸收和/或生物再吸收至少约3天、约7天、约14天、约21天、约28天、约1个月、约2个月、约3个月、约4个月、约5个月或约6个月。
在一些实施方案中，本发明涉及生物相容性组织填充物，其包含透明质酸（HA）和麻醉剂，其中所述HA的一部分被一种或多种连接剂部分改性，所述连接剂部分包含烷烃或烷基链、醚基团和仲醇中的一种或多种，其中所述连接剂部分在所述连接剂的一端处连接至所述HA。在一些实施方案中，使用交联剂、交联前体或活化剂获得改性。在一些实施方案中，组织填充物中的HA的改性度（MoD）为约10.0%、约10.1%、约10.2%、约10.3%、约10.4%、约10.5%、约10.6%、约10.7%、约10.8%、约10.9%、约11.0%、约11.1%、约11.2%、约11.3%、约11.4%、约11.5%、约11.6%、约11.7%、约11.8%、约11.9%、约12.0%、约12.1%、约12.2%、约12.3%、约12.4%、约12.5%、约12.6%、约12.7%、约12.8%、约12.9%、约13.0%、约13.1%、约13.2%、约13.3%、约13.4%、约13.5%、约13.6%、约13.7%、约13.8%、约13.9%、约14.0%、约14.1%、约14.2%、约14.3%、约14.4%、约14.5%、约14.6%、约14.7%、约14.8%、约14.9%、约15.0%、约15.1%、约15.2%、约15.3%、约15.4%、约15.5%、约15.6%、约15.7%、约15.8%、约15.9%、约16.0%、约16.1%、约16.2%、约16.3%、约16.4%、约16.5%、约16.6%、约16.7%、约16.8%、约16.9%、约17.0%、约17.1%、约17.2%、约17.3%、约17.4%、约17.5%、约17.6%、约17.7%、约17.8%、约17.9%、约18.0%、约18.1%、约18.2%、约18.3%、约18.4%、约18.5%、约18.6%、约18.7%、约18.8%、约18.9%、约19.0%、约19.1%、约19.2%、约19.3%、约19.4%、约19.5%、约19.6%、约19.7%、约19.8%、约19.9%或约20.0%。在一些实施方案中，相对于组织填充物中的HA总量，改性HA的% w/w量为约1%、约2%、约3%、约4%、约5%、约6%、约7%、约8%、约9%、约10%、约11%、约12%、约13%、约14%、约15%、约16%、约17%、约18%、约19%、约20%、约21%、约22%、约23%、约24%、约25%、约26%、约27%、约28%、约29%、约30%、约31%、约32%、约33%、约34%、约35%、约36%、约37%、约38%、约39%、约40%、约41%、约42%、约43%、约44%、约45%、约46%、约47%、约48%、约49%、约50%、约51%、约52%、约53%、约54%、约55%、约56%、约57%、约58%、约59%、约60%、约61%、约62%、约63%、约64%、约65%、约66%、约67%、约68%、约69%、约70%、约71%、约72%、约73%、约74%、约75%、约76%，约77%、约78%、约79%、约80%、约81%、约82%、约83%、约84%、约85%、约86%、约87%、约88%、约89%、约90%、约91%、约92%、约93%、约94%、约95%、约96%、约97%、约98%、约99%或约100%。
在一些实施方案中，改性HA包含交联HA，其中交联HA的交联度为约1%至约100%。在一些实施方案中，交联HA的交联度为约1%、约2%、约3%、约4%、约5%、约6%、约7%、约8%、约9%、约10%、约11%、约12%、约13%、约14%、约15%、约16%、约17%、约18%、约19%、约20%、约21%、约22%、约23%、约24%、约25%、约26%、约27%、约28%、约29%、约30%、约31%、约32%、约33%、约34%、约35%、约36%、约37%、约38%、约39%、约40%、约41%、约42%、约43%、约44%、约45%、约46%、约47%、约48%、约49%、约50%、约51%、约52%、约53%、约54%、约55%、约56%、约57%、约58%、约59%、约60%、约61%、约62%、约63%、约64%、约65%、约66%、约67%、约68%、约69%、约70%、约71%、约72%、约73%、约74%、约75%、约76%，约77%、约78%、约79%、约80%、约81%、约82%、约83%、约84%、约85%、约86%、约87%、约88%、约89%、约90%、约91%、约92%、约93%、约94%、约95%、约96%、约97%、约98%、约99%或约100%。在一些实施方案中，交联HA的交联度为约1%至约15%。
在一些实施方案中，改性或交联HA包含含有聚乙二醇（PEG）链的连接剂或交联部分。在一些实施方案中，交联剂和/或交联前体包含环氧基团。在一些实施方案中，使用交联剂、交联前体或活化剂获得改性或交联，所述交联剂、交联前体或活化剂选自多环氧连接剂、二环氧连接剂、多环氧-PEG、二环氧-PEG、多缩水甘油基-PEG、二缩水甘油基-PEG、聚丙烯酸酯PEG、二丙烯酸酯PEG、1,4-双（2,3-环氧丙氧基）丁烷、1,4-双缩水甘油氧基丁烷、二乙烯基砜（DVS）、1,4-丁二醇二缩水甘油醚（BDDE）、UV光、戊二醛、1,2-双（2,3-环氧丙氧基）乙烯（EGDGE）、1,2,7,8-二环氧辛烷（DEO）、双碳二亚胺（BCDI）、季戊四醇四缩水甘油醚（PETGE）、己二酰肼（ADH）、双（磺基琥珀酰亚胺基）辛二酸酯（BS）、六亚甲基二胺（HMDA）、1-（2,3-环氧丙基） -2,3-环氧环己烷、碳二亚胺、及其任何组合。在一些实施方案中，使用多官能环氧化合物获得改性或交联，所述多官能环氧化合物选自1,4-丁二醇二缩水甘油醚（BDDE）、乙二醇二缩水甘油醚（EGDGE）、1,6-己二醇二缩水甘油醚、聚乙二醇二缩水甘油醚、聚丙二醇二缩水甘油醚、聚丁二醇二缩水甘油醚、新戊二醇二缩水甘油醚、聚甘油多缩水甘油醚、二甘油多缩水甘油醚、甘油多缩水甘油醚、三羟甲基丙烷多缩水甘油醚、季戊四醇多缩水甘油醚和山梨醇多缩水甘油醚。在一些实施方案中，使用交联剂和/或交联前体获得改性或交联，所述交联剂和/或交联前体选自聚乙二醇二缩水甘油醚、二环氧PEG、PEG二缩水甘油醚、聚氧乙烯双缩水甘油醚、PEGDE和PEGDGE。在一些实施方案中，使用平均Mn为约500、约1000、约2000或约6000的聚乙二醇二缩水甘油醚获得改性或交联。在一些实施方案中，使用具有约2至约25个乙二醇基团的聚乙二醇二缩水甘油醚获得改性或交联。在一些实施方案中，使用交联剂和/或交联前体获得改性或交联，所述交联剂和/或交联前体选自多环氧丝素蛋白连接剂、二环氧丝素蛋白连接剂、多环氧丝素蛋白片段连接剂、二环氧丝素蛋白片段连接剂、多缩水甘油基丝素蛋白连接剂、二缩水甘油基丝素蛋白连接剂、多缩水甘油基丝素蛋白片段连接剂和二缩水甘油基丝素蛋白片段连接剂。
在一些实施方案中，组织填充物还包含有机化合物和/或无机化合物。在一些实施方案中，无机化合物包括羟基磷灰石。在一些实施方案中，将羟基磷灰石配制成直径为约1μm至约100μm、约1μm至约10μm、约2μm至约12μm、约3μm至约10μm、约4μm至约15μm、约8μm至约12μm、约5μm至约10μm、约6μm至约12μm、约7μm至约20μm、约9μm至约18μm或约10μm至约25μm的颗粒。在一些实施方案中，羟基磷灰石的浓度为约0.001%至约5%。在一些实施方案中，羟基磷灰石的浓度为约0.001%、约0.002%、约0.003%、约0.004%、约0.005%、约0.006%、约0.007%、约0.008%、约0.009%、约0.01%、约0.011%、约0.012%、约0.013%、约0.014%、约0.015%、约0.016%、约0.017%、约0.018%、约0.019%或约0.02%。在一些实施方案中，羟基磷灰石的浓度为约0.05%、约0.1%、约0.15%、约0.2%、约0.25%、约0.3%、约0.35%、约0.4%、约0.45%、约0.5%、约0.55%、约0.6%、约0.65%、约0.7%、约0.75%、约0.8%、约0.85%、约0.9%、约0.95%、约1%、约1.05%、约1.1%、约1.15%、约1.2%、约1.25%、约1.3%、约1.35%、约1.4%、约1.45%、约1.5%、约1.55%、约1.6%、约1.65%、约1.7%、约1.75%、约1.8%、约1.85%、约1.9%、约1.95%或约2%。在一些实施方案中，有机化合物包括选自甘氨酸、L-脯氨酸、丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸和缬氨酸的氨基酸。
在一些实施方案中，HA从链球菌细菌或从枯草芽孢杆菌细菌获得。在一些实施方案中，活性剂是利多卡因。在一些实施方案中，活性剂在组织填充物中的浓度为约0.001%至约5%。在一些实施方案中，利多卡因在组织填充物中的浓度为约0.3%。
在一些实施方案中，本文公开的组织填充物是凝胶。在一些实施方案中，组织填充物是水凝胶。在一些实施方案中，组织填充物还包含水。在一些实施方案中，组织填充物中HA的总浓度为约10 mg/mL至约50 mg/mL。在一些实施方案中，组织填充物中HA的总浓度为约15 mg/mL、约16 mg/mL、17 mg/mL、约18 mg/mL、约19 mg/mL、约20 mg/mL、约21 mg/mL、约22 mg/mL、约23 mg/mL、约24 mg/mL、约25 mg/mL、约26 mg/mL、约27 mg/mL、约28 mg/mL、约29 mg/mL或约30 mg/mL。在一些实施方案中，组织填充物中改性或交联HA的浓度为约10mg/mL至约50 mg/mL。在一些实施方案中，组织填充物中改性或交联HA的浓度为约15 mg/mL、约16 mg/mL、约17 mg/mL、约18 mg/mL、约19 mg/mL、约20 mg/mL、约21 mg/mL、约22 mg/mL、约23 mg/mL、约24 mg/mL、25 mg/mL、约26 mg/mL、约27 mg/mL、约28 mg/mL、约29 mg/mL或约30 mg/mL。
在一些实施方案中，所公开的组织填充物进一步包含丝蛋白或丝蛋白片段（SPF）。在一些实施方案中，所述丝蛋白是丝素蛋白。在一些实施方案中，所述丝蛋白是基本上不含丝胶蛋白的丝素蛋白。在一些实施方案中，SPF具有约1 kDa至约250 kDa的平均重均分子量。在一些实施方案中，SPF具有约5 kDa至约150 kDa的平均重均分子量。在一些实施方案中，SPF具有约6 kDa至约17 kDa的平均重均分子量。在一些实施方案中，SPF具有约17 kDa至约39 kDa的平均重均分子量。在一些实施方案中，SPF具有约39 kDa至约80 kDa的平均重均分子量。在一些实施方案中，SPF具有低分子量。在一些实施方案中，SPF具有中分子量。在一些实施方案中，SPF具有高分子量。在一些实施方案中，所述丝蛋白片段（SPF）具有约1.5至约3.0的多分散性。在一些实施方案中，SPF具有最高达60%的结晶度。
在一些实施方案中，本发明涉及包含HA和SPF的组织填充物，其中SPF的一部分是改性或交联的。在一些实施方案中，相对于SPF的总量，改性或交联SPF的% w/w量为约1%、约2%、约3%、约4%、约5%、约6%、约7%、约8%、约9%、约10%、约11%、约12%、约13%、约14%、约15%、约16%、约17%、约18%、约19%、约20%、约21%、约22%、约23%、约24%、约25%、约26%、约27%、约28%、约29%、约30%、约31%、约32%、约33%、约34%、约35%、约36%、约37%、约38%、约39%、约40%、约41%、约42%、约43%、约44%、约45%、约46%、约47%、约48%、约49%、约50%、约51%、约52%、约53%、约54%、约55%、约56%、约57%、约58%、约59%、约60%、约61%、约62%、约63%、约64%、约65%、约66%、约67%、约68%、约69%、约70%、约71%、约72%、约73%、约74%、约75%、约76%，约77%、约78%、约79%、约80%、约81%、约82%、约83%、约84%、约85%、约86%、约87%、约88%、约89%、约90%、约91%、约92%、约93%、约94%、约95%、约96%、约97%、约98%、约99%或约100%。在一些实施方案中，改性或交联SPF的改性或交联度为约1%至约100%。在一些实施方案中，改性或交联SPF的改性或交联度为约1%、约2%、约3%、约4%、约5%、约6%、约7%、约8%、约9%、约10%、约11%、约12%、约13%、约14%、约15%、约16%、约17%、约18%、约19%、约20%、约21%、约22%、约23%、约24%、约25%、约26%、约27%、约28%、约29%、约30%、约31%、约32%、约33%、约34%、约35%、约36%、约37%、约38%、约39%、约40%、约41%、约42%、约43%、约44%、约45%、约46%、约47%、约48%、约49%、约50%、约51%、约52%、约53%、约54%、约55%、约56%、约57%、约58%、约59%、约60%、约61%、约62%、约63%、约64%、约65%、约66%、约67%、约68%、约69%、约70%、约71%、约72%、约73%、约74%、约75%、约76%，约77%、约78%、约79%、约80%、约81%、约82%、约83%、约84%、约85%、约86%、约87%、约88%、约89%、约90%、约91%、约92%、约93%、约94%、约95%、约96%、约97%、约98%、约99%或约100%。在一些实施方案中，改性或交联SPF的改性或交联度为约1%至约15%。在一些实施方案中，改性或交联SPF的改性或交联度为约1%、约2%、约3%、约4%、约5%、约6%、约7%、约8%、约9%、约10%、约11%、约12%、约13%、约14%和约15%中的一种或多种。
在一些实施方案中，改性或交联SPF包含含有烷烃或烷基链和/或醚基的连接剂或交联部分，其中连接剂或交联部分在连接剂或交联部分的一端处连接至SPF。在一些实施方案中，改性或交联SPF包含含有聚乙二醇（PEG）链的连接剂或交联部分。在一些实施方案中，改性或交联SPF包含含有仲醇的连接剂或交联部分。在一些实施方案中，使用改性剂或交联剂、改性或交联前体或活化剂获得改性或交联。在一些实施方案中，改性剂或交联剂和/或改性或交联前体包含环氧基团。在一些实施方案中，使用改性剂或交联剂、改性或交联前体或活化剂获得改性或交联，所述改性剂或交联剂、改性或交联前体或活化剂选自多环氧连接剂、二环氧连接剂、多环氧PEG、二环氧PEG、多缩水甘油基PEG、二缩水甘油基PEG、聚丙烯酸酯PEG、二丙烯酸酯PEG、1,4-双（2,3-环氧丙氧基）丁烷、1,4-双缩水甘油氧基丁烷、二乙烯基砜（DVS）、1,4-丁二醇二缩水甘油醚（BDDE）、UV光、戊二醛、1,2-双（2,3-环氧丙氧基）乙烯（EGDGE）、1,2,7,8-二环氧辛烷（DEO）、双碳二亚胺（BCDI）、季戊四醇四缩水甘油醚（PETGE）、己二酰肼（ADH）、双（磺基琥珀酰亚胺基）辛二酸酯（BS）、六亚甲基二胺（HMDA）、1-（2,3-环氧丙基） -2,3-环氧环己烷、碳二亚胺、及其任何组合。在一些实施方案中，使用多官能环氧化合物获得改性或交联，所述多官能环氧化合物选自1,4-丁二醇二缩水甘油醚（BDDE）、乙二醇二缩水甘油醚（EGDGE）、1,6-己二醇二缩水甘油醚、聚乙二醇二缩水甘油醚、聚丙二醇二缩水甘油醚、聚丁二醇二缩水甘油醚、新戊二醇二缩水甘油醚、聚甘油多缩水甘油醚、二甘油多缩水甘油醚、甘油多缩水甘油醚、三羟甲基丙烷多缩水甘油醚、季戊四醇多缩水甘油醚和山梨醇多缩水甘油醚。
在一些实施方案中，使用选自聚乙二醇二缩水甘油醚、二环氧PEG、PEG二缩水甘油醚、聚氧乙烯双缩水甘油醚、PEGDE和PEGDGE的改性剂或交联剂和/或改性或交联前体获得改性或交联。在一些实施方案中，使用平均Mn为约500、约1000、约2000或约6000的聚乙二醇二缩水甘油醚获得改性或交联。在一些实施方案中，使用具有约2至约25个乙二醇基团的聚乙二醇二缩水甘油醚获得改性或交联。在一些实施方案中，使用改性剂或交联剂和/或改性或交联前体获得改性或交联，所述改性剂或交联剂和/或改性或交联前体选自多环氧丝素蛋白连接剂、二环氧丝素蛋白连接剂、多环氧丝素蛋白片段连接剂、二环氧丝素蛋白片段连接剂、多缩水甘油基丝素蛋白连接剂、二缩水甘油基丝素蛋白连接剂、多缩水甘油基丝素蛋白片段连接剂和二缩水甘油基丝素蛋白片段连接剂。
在一些实施方案中，本发明涉及包含HA和SPF的组织填充物，其中SPF的一部分与HA交联。在一些实施方案中，本发明涉及包含HA和SPF的组织填充物，其中SPF的一部分与SPF交联。在一些实施方案中，组织填充物是凝胶。在一些实施方案中，组织填充物是水凝胶。在一些实施方案中，组织填充物还包含水。在一些实施方案中，组织填充物中SPF的总浓度为约0.1 mg/mL至约15 mg/mL。在一些实施方案中，组织填充物中SPF的总浓度为约0.1mg/mL、约0.5 mg/mL、约1 mg/mL、约1.5 mg/mL、约2 mg/mL、约2.5 mg/mL、约3 mg/mL、约3.5mg/mL、约4 mg/mL、约4.5 mg/mL、约5 mg/mL、约5.5 mg/mL、约6 mg/mL、约6.5 mg/mL、约7mg/mL、约7.5 mg/mL、约8 mg/mL、约8.5 mg/mL、约9 mg/mL、约9.5 mg/mL、约10 mg/mL、约10.5 mg/mL、约11 mg/mL、约11.5 mg/mL、约12 mg/mL、约12.5 mg/mL、约13 mg/mL、约13.5mg/mL、约14 mg/mL、约14.5 mg/mL、或约15 mg/mL。在一些实施方案中，组织填充物中改性或交联SPF的浓度为约0.1 mg/mL至约15 mg/mL。在一些实施方案中，组织填充物中改性或交联SPF的浓度为约0.1 mg/mL、约0.5 mg/mL、约1 mg/mL、约1.5 mg/mL、约2 mg/mL、约2.5mg/mL、约3 mg/mL、约3.5 mg/mL、约4 mg/mL、约4.5 mg/mL、约5 mg/mL、约5.5 mg/mL、约6mg/mL、约6.5 mg/mL、约7 mg/mL、约7.5 mg/mL、约8 mg/mL、约8.5 mg/mL、约9 mg/mL、约9.5mg/mL、约10 mg/mL、约10.5 mg/mL、约11 mg/mL、约11.5 mg/mL、约12 mg/mL、约12.5 mg/mL、约13 mg/mL、约13.5 mg/mL、约14 mg/mL、约14.5 mg/mL、或约15 mg/mL。
在一些实施方案中，本发明涉及包含改性或交联HA和/或改性或交联SPF的组织填充物，其中该组织填充物是真皮填充物。在一些实施方案中，组织填充物是可生物降解的。在一些实施方案中，组织填充物是可注射的。在一些实施方案中，组织填充物具有约25 Pa至约1500 Pa的储能模量（G'）。在一些实施方案中，所述组织填充物的储能模量（G'）为约25Pa、约26 Pa、约27 Pa、约28 Pa、约29 Pa、约30 Pa、约31 Pa、约32 Pa、约33 Pa、约34 Pa、约35 Pa、约36 Pa、约37 Pa、约38 Pa、约39 Pa、约40 Pa、约41 Pa、约42 Pa、约43 Pa、约44Pa、约45 Pa、约46 Pa、约47 Pa、约48 Pa、约49 Pa、约50 Pa、约51 Pa、约52 Pa、约53 Pa、约54 Pa、约55 Pa、约56 Pa、约57 Pa、约58 Pa、约59 Pa、约60 Pa、约61 Pa、约62 Pa、约63Pa、约64 Pa、约65 Pa、约66 Pa、约67 Pa、约68 Pa、约69 Pa、约70 Pa、约71 Pa、约72Pa、约73 Pa、约74Pa、约75 Pa、约76 Pa、约77 Pa、约78 Pa、约79 Pa、约80Pa、约81 Pa、约82Pa、约83 Pa、约84 Pa、约85 Pa，约86 Pa、约87 Pa、约88 Pa、约89 Pa、约90 Pa、约91 Pa、约92Pa、约93 Pa、约94 Pa、约95 Pa、约96 Pa、约97 Pa、约98 Pa、约99 Pa、约100 Pa、约101 Pa、约102 Pa、约103 Pa、约104 Pa、约105 Pa、约106 Pa、约107 Pa、约108 Pa、约109 Pa、约110Pa、约111 Pa、约112 Pa、约113 Pa、约114 Pa、约115 Pa、约116 Pa、约117 Pa、约118 Pa、约119 Pa、约120 Pa、约121 Pa、约122 Pa、约123 Pa、约124 Pa或约125 Pa。在一些实施方案中，G'通过约0.1至约10 Hz的振荡应力测量。在一些实施方案中，G'通过约1 Hz的振荡应力测量。在一些实施方案中，G'通过约5 Hz的振荡应力测量。在一些实施方案中，G'通过约10Hz的振荡应力测量。在一些实施方案中，组织填充物具有约1 Pa·s至约10 Pa·s的复数粘度。在一些实施方案中，组织填充物具有约1 Pa·s、约1.5 Pa·s、约2 Pa·s、约2.5 Pa·s、约3 Pa·s、约3.5 Pa·s、约4 Pa·s、约4.5 Pa·s、约5 Pa·s、约5.5 Pa·s、约6 Pa·s、约6.5 Pa·s、约7 Pa·s、约7.5 Pa·s、约8 Pa·s、约8.5 Pa·s、约9 Pa·s、约9.5Pa·s或约10 Pa·s的复数粘度。在一些实施方案中，复数粘度通过约0.1至约10 Hz的振荡应力测量。在一些实施方案中，复数粘度通过约1 Hz的振荡应力测量。在一些实施方案中，复数粘度通过约5 Hz的振荡应力测量。
在一些实施方案中，本发明涉及处理有需要的对象的状况的方法，包括向对象施用治疗有效量的组织填充物，其包含改性或交联HA，和/或改性或交联SPF。在一些实施方案中，所述状况是皮肤状况。在一些实施方案中，皮肤状况选自皮肤脱水、皮肤弹性缺乏、皮肤粗糙、皮肤紧致缺乏、皮肤拉伸线、皮肤拉伸痕、皮肤苍白、真皮起皮、脸颊凹陷、薄唇、后眼窝缺陷、面部褶皱和皱纹。
在一些实施方案中，本发明涉及在有需要的对象中进行美容处理的方法，包括向对象施用有效量的组织填充物，其包含改性或交联HA，和/或改性或交联SPF。在一些实施方案中，将组织填充物施用至对象的真皮区域中。在一些实施方案中，所述方法是增大、重建、治疗疾病、治疗病症、矫正身体部分、区域或部位的缺陷或瑕疵。在一些实施方案中，所述方法是面部增大、面部重建、治疗面部疾病、治疗面部病症、处理面部缺陷或处理面部瑕疵。
在本文所述方法的一些实施方案中，组织填充物抗生物降解、生物侵蚀、生物吸收和/或生物再吸收至少约3天、约7天、约14天、约21天、约28天、约1个月、约2个月、约3个月、约4个月、约5个月或约6个月。在本文所述方法的一些实施方案中，与由包含多糖和利多卡因的对照组织填充物诱导的炎症应答相比，向对象施用组织填充物导致炎症应答降低，其中所述对照组织填充物不包含丝蛋白片段（SPF）。
在本文所述方法的一些实施方案中，与由包含多糖和利多卡因的对照组织填充物诱导的胶原产生相比，向对象施用组织填充物导致胶原产生增加，其中所述对照组织填充物不包含丝蛋白片段（SPF）。
附图说明
将参照附图进一步解释当前公开的实施方案。所示的附图不一定是按比例的，而是重点通常放在图示说明当前公开的实施方案的原理上。
图1是显示用于制备本公开的基于纯丝素蛋白的蛋白片段（SPF）的各种实施方案的流程图。
图2是显示在提取和溶解步骤期间，在制备本公开的SPF的方法期间可以被修改的各种参数的流程图。
图3是总结本公开的丝蛋白溶液中LiBr和碳酸钠（Na2CO3）浓度的表。
图4是总结本公开的丝蛋白溶液中LiBr和Na2CO3浓度的表。
图5是总结本公开的丝蛋白溶液的分子量的表。
图6和7是表示提取体积对%质量损失的影响的图。
图8是总结由不同浓度的LiBr和由不同的提取和溶解尺寸溶解的丝的分子量的表。
图9是总结提取时间对在100℃提取温度、100℃LiBr和100℃烘箱溶解（烘箱/溶解时间变化）条件下处理的丝的分子量的影响的图。
图10是总结提取时间对在100℃提取温度、沸腾LiBr和60℃烘箱溶解（烘箱/溶解时间变化）条件下处理的丝的分子量的影响的图。
图11是总结提取时间对在100℃提取温度、60℃LiBr和60℃烘箱溶解（烘箱/溶解时间变化）条件下处理的丝的分子量的影响的图。
图12是总结提取时间对在100℃提取温度，80℃LiBr和80℃烘箱溶解（烘箱/溶解时间变化）条件下处理的丝的分子量的影响的图。
图13是总结提取时间对在100℃提取温度，80℃LiBr和60℃烘箱溶解（烘箱/溶解时间变化）条件下处理的丝的分子量的影响的图。
图14是总结提取时间对在100℃提取温度、100℃LiBr和60℃烘箱溶解（烘箱/溶解时间变化）条件下处理的丝的分子量的影响的图。
图15是总结提取时间对在100℃提取温度、140℃LiBr和140℃烘箱溶解（烘箱/溶解时间变化）条件下处理的丝的分子量的影响的图。
图16是总结提取温度对在60分钟提取时间、100℃LiBr和100℃烘箱溶解（烘箱/溶解时间变化）条件下处理的丝的分子量的影响的图。
图17是总结LiBr温度对在60分钟提取时间、100℃提取温度和60℃烘箱溶解（烘箱/溶解时间变化）条件下处理的丝的分子量的影响的图。
图18是总结LiBr温度对在30分钟提取时间、100℃提取温度和60℃烘箱溶解（烘箱/溶解时间变化）条件下处理的丝的分子量的影响的图。
图19是总结烘箱/溶解温度对在100℃提取温度、30分钟提取时间和100℃溴化锂（烘箱/溶解时间变化）条件下处理的丝的分子量的影响的图。
图20是总结烘箱/溶解温度对在100℃提取温度、60分钟提取时间和100℃溴化锂（烘箱/溶解时间变化）的条件下处理的丝的分子量的影响的图。
图21是总结烘箱/溶解温度对在100℃提取温度、60分钟提取时间和140℃溴化锂（烘箱/溶解时间变化）条件下处理的丝的分子量的影响的图。
图22是总结烘箱/溶解温度对在100℃提取温度、30分钟提取时间和140℃溴化锂（烘箱/溶解时间变化）条件下处理的丝的分子量的影响的图。
图23是总结烘箱/溶解温度对在100℃提取温度、60分钟提取时间和80℃溴化锂（烘箱/溶解时间变化）条件下处理的丝的分子量的影响的图。
图24是总结在不同条件，包括提取时间、提取温度、溴化锂（LiBr）温度、用于溶解的烘箱温度、用于溶解的烘箱时间下处理的丝的分子量的图。
图25是总结在烘箱/溶解温度等于LiBr温度的条件下处理的丝的分子量的图。
图26是丝/ HA配制物在水或磷酸盐缓冲盐水（PBS）中在各种浓度下的照片，其表明丝/ HA配制物产生均匀的不透明溶液。第一个未标记的小瓶是对照小瓶（22 mg/mL HA水溶液）。
图27是注射器中沉积的含水丝/ HA配制物的照片，其表明丝/ HA配制物产生均匀的不透明溶液。对照物是22 mg/mL HA的水溶液。
图28是描述丝-HA和HA水凝胶的降解曲线的图表。
图29是注射了对照真皮填充物（包含利多卡因的市售HA填充物）的豚鼠的皮内区域的照片；炎症程度的增加由肉芽肿面积的程度反映。市售填充物以蓝色/灰色材料表示。在7天时可以观察到与该材料相关的肉芽肿性炎症。
图30是注射了对照真皮填充物（包含利多卡因的市售HA填充物）的豚鼠的皮内区域的照片；市售产品以蓝色/灰色材料表示。在30天时，可观察到伴随纤维化的炎症。
图31是注射了本发明的丝-HA真皮填充物（24 mg/ml HA，9.6 mg/ml丝，BDDE交联）的豚鼠的皮内区域的照片；与对照注射相比，肉芽肿面积减少表明急性炎症应答可忽略不计，并且与对照相比，丝-HA填充物的生物降解性更好。在7天时有非常少的炎症。炎症是局部的，有时难以发现。没有注意到植入材料。
图32是注射了本发明的丝-HA真皮填充物（24 mg/ml HA，9.6 mg/ml丝，BDDE交联）的豚鼠的皮内区域的照片；在30天时，炎症极难发现并且极少。没有注意到植入材料。
图33是注射了本发明的丝-HA真皮填充物（24 mg/ml HA，0.48 mg/ml丝，BDDE交联）的豚鼠的皮内区域的照片；填充物在7天内导致局部轻度炎症。炎症是慢性的。这种炎症需要密切的评价以进行鉴定，因为它是局部的和最小化的。没有观察到植入材料。
图34是注射了本发明的丝-HA真皮填充物（24 mg/ml HA，0.48 mg/ml丝，BDDE交联）的豚鼠的皮内区域的照片；30天的图像显示甚至更少的炎症。与7天植入物相比，甚至更难以识别。没有观察到植入材料。
图35是描述丝-HA水凝胶的浊度测量的图表。黑色曲线（a）：标准透射率；红色曲线（b）：透射率加前向散射(forward scatter)。
图36是描述不含丝的HA水凝胶的浊度测量的图表。黑色曲线（a）：标准透射率；红色曲线（b）：透射率加前向散射。
图37是注射了对照真皮填充物的豚鼠的皮内区域的代表性组织学照片。
图38是注射了本发明HA真皮填充物（24 mg/ml HA，PEGDE交联，样品C4-表25）的豚鼠的皮内区域的代表性组织学照片。
图39是注射了本发明的丝-HA真皮填充物（22.8 mg/ml HA，1.2 mg/ml丝，PEGDE交联，样品L-表25）的豚鼠的皮内区域的代表性组织学照片。
图40是注射了本发明的丝-HA真皮填充物（23.76 mg/ml HA，0.24 mg/ml丝，PEGDE交联，样品M-表25）的豚鼠的皮内区域的代表性组织学照片。
图41是注射了本发明的丝-HA真皮填充物（22.8 mg/ml HA，1.2 mg/ml丝，PEGDE交联，样品N-表25）的豚鼠的皮内区域的代表性组织学照片。
图42是注射了本发明的丝-HA真皮填充物（22.8 mg/ml HA，1.2 mg/ml丝，PEGDE交联，样品O-表25）的豚鼠的皮内区域的代表性组织学照片。
图43是显示植入后7天凝胶降解的组织学结果的图（表25配制物-BDDE交联配制物大部分降解；评分：0-正常；1-极少；2-轻度；3-中度；和4-重度）。
图44是显示植入后7天凝胶迁移的组织学结果的图（表25配制物；评分：0-正常；1-极少；2-轻度；3-中度；和4-重度）。
图45是显示植入后7天炎症的组织学结果的图（表25配制物-未观察到组织坏死，未观察到血液凝固，对对照配制物和一些试验配制物观察到极少胶原沉积；评分：0-正常；1-极少；2-轻度；3-中度；和4-重度）。
图46是显示植入后7天巨噬细胞的组织学结果的图表（表25配制物；评分：0-正常；1-极少；2-轻度；3-中度；和4-重度）。
图47A和47B显示了透析前后具有各种丝浓度的水凝胶的G'。图47A：以100 gm/ml交联的混合HA，和图47B：以25 mg/ml交联的单一MW HA。
图48A和48B显示了在透析过程中具有各种丝浓度的水凝胶的溶胀比。图48A：以100 mg/ml交联的混合HA，和图48B：以25 mg/ml交联的单一MW HA。
图49A和49B分别显示了中和低分子量丝溶液的校准曲线。
图50A和50B显示了具有未知丝浓度的稀释的丝-HA凝胶的吸收光谱；每个丝-HA凝胶样品的理论丝浓度（mg/ml）示于表26中。
图51显示了无丝（红色；在整个波长间隔内较高的透射率）和具有3 mg/ml丝（蓝色；在整个波长间隔内较低的透射率）的HA水凝胶的浊度测量；较高的透射率%表明样品较不浑浊，具有较低的光学不透明度。
尽管上述附图阐述了当前公开的实施方案，但是如讨论中所指出的，也可以设想其他实施方案。本公开通过代表性而非限制性的方式呈现了说明性实施方案。本领域技术人员可以设计出许多其它修改和实施方案，它们落入当前公开的实施方案的原理的范围和精神内。
发明详述
本文公开了包含丝蛋白片段（SPF）的组织填充物。在一些实施方案中，组织填充物由本文所述的组合物制备，所述组合物可包含SPF和透明质酸（HA）。在一些实施方案中，本文所述的组织填充物可以是真皮填充物。
在一些实施方案中，通过本文所述的方法，通过使用MW为约5 kDa至约5 MDA、约100 kDa至约4 MDA或约500 kDa至约3 MDA的HA来制备真皮填充物。在一些实施方案中，通过本文所述的方法，通过使用MW为约50 kDa、约100 kDa、约150 kDa、约200 kDa、约250kDa、约300 kDa、约350 kDa、约400 kDa、约450 kDa、约500 kDa、约550 kDa、约600 kDa、约650 kDa、约700 kDa、约750 kDa、约800 kDa、约850 kDa、约900 kDa、约950 kDa、约1000kDa、约1050 kDa、约1100 kDa、约1150 kDa、约1200 kDa、约1250 kDa、约1300 kDa、约1350kDa、约1400 kDa、约1450 kDa、约1500 kDa、约1550 kDa、约1600 kDa、约1650 kDa、约1700kDa、约1750 kDa、约1800 kDa、约1850 kDa、约1900 kDa、约1950 kDa、约2000 kDa、约2050kDa、约2100 kDa、约2150 kDa、约2200 kDa、约2250KDa、约2300 kDa、约2350 kDa、约2400kDa、约2450 kDa、约2500 kDa、约2550 kDa、约2600 kDa、约2650 kDa、约2700 kDa、约2750kDa、约2800 kDa、约2850 kDa、约2900 kDa、约2950 kDa、约3000 kDa、约3050 kDa、约3100kDa、约3150 kDa、约3200 kDa、约3250 kDa、约3300 kDa、约3350 kDa、约3400 kDa、约3450kDa、约3500 kDa、约3550 kDa、约3600 kDa、约3650 kDa、约3700 kDa、约3750 kDa、约3800kDa、约3850 kDa、约3900 kDa、约3950 kDa或约4000 kDa的HA来制备真皮填充物。任何上述MW的HA可以以任何可能的比例与任何其它上述MW的HA混合。在一些实施方案中，通过混合高MW HA（可以混合低MW HA）制备真皮填充物，其中高MW HA的比例为约0.01%，或约0.1%，或约0.2%，或约0.3%，或约0.4%，或约0.5%，或约0.6%，或约0.7%，或约0.8%，或约0.9%，或约1%，或约2%，或约3%，或约4%，或约5%，或约6%，或约7%，或约8%，或约9%，或约10%，或约11%、或约12%、或约13%、或约14%、或约15%、或约16%、或约17%、或约18%、或约19%、或约20%、或约21%、或约22%、或约23%、或约24%、或约25%、或约26%、或约27%、或约28%、或约29%、或约30%、或约31%、或约32%、或约33%、或约34%、或约35%、或约36%、或约37%、或约38%、或约39%、或约40%、或约41%、或约42%、或约43%、或约44%、或约45%、或约46%、或约47%、或约48%、或约49%、或约50%、或约51%、或约52%、或约53%、或约54%、或约55%、或约56%、或约57%、或约58%、或约59%、或约60%、或约61%、或约62%、或约63%、或约64%、或约65%、或约66%、或约67%、或约68%、或约69%、或约70%、或约71%、或约72%、或约73%、或约74%，或约75%、或约76%、或约77%、或约78%、或约79%、或约80%、或约81%、或约82%、或约83%、或约84%、或约85%、或约86%、或约87%、或约88%、或约89%、或约90%、或约91%、或约92%、或约93%、或约94%、或约95%、或约96%、或约97%、或约98%、或约99%、或约99.5%、或约99.9%。
在一些实施方案中，通过本文所述的方法通过使用MW为约5 kDa至约35 kDa的丝SPF来制备真皮填充物。在一些实施方案中，通过本文所述的方法通过使用MW为约5 kDa、或约6 kDa、或约7 kDa、或约8 kDa、或约9 kDa、或约10 kDa、或约11 kDa、或约12 kDa、或约13kDa、或约14 kDa、或约15 kDa、或约16 kDa、或约17 kDa、或约19 kDa、或约20 kDa、或约21kDa、或约22 kDa、或约23 kDa、或约24 kDa、或约25 kDa、或约26 kDa、或约27 kDa、或约28kDa、或约29 kDa、或约30 kDa的丝SPF来制备真皮填充物。
在一些实施方案中，通过本文所述的方法，通过使用初始浓度为约80 mg/ml，或约81 mg/ml，或约82 mg/ml，或约83 mg/ml，或约84 mg/ml，或约85 mg/ml，或约86 mg/ml，或约87 mg/ml，或约88 mg/ml，或约89 mg/ml，或约90 mg/ml，或约91 mg/ml，或约92 mg/ml，或约93 mg/ml，或约94 mg/ml，或约95 mg/ml，或约96 mg/ml，或约97 mg/ml，或约98 mg/ml，或约99 mg/ml，或约100 mg/ml，或约101 mg/ml，或约102 mg/ml，或约103 mg/ml，或约104 mg/ml，或约105 mg/ml，或约106 mg/ml，或约107 mg/ml，或约108 mg/ml，或约109 mg/ml，或约110 mg/ml，或约111 mg/ml，或约113 mg/ml，或约112 mg/ml，或约114 mg/ml，或约115 mg/ml，或约116 mg/ml，或约117 mg/ml，或约118 mg/ml，或约119 mg/ml，或约120 mg/ml，或更高的HA制备真皮填充物。
在一些实施方案中，本文所述的真皮填充物具有总HA和丝SPF的约0.1%、或约0.2%、或约0.3%、或约0.4%、或约0.5%、或约0.6%、或约0.7%、或约0.8%、或约0.9%、或约1%、或约1.1%、或约1.2%、或约1.3%、或约1.4%、或约1.5%、或约1.6%、或约1.7%、或约1.8%、或约1.9%、或约2%、或约2.1%、或约2.2%、或约2.3%、或约2.4%、或约2.5%、或约2.6%、或约2.7%、或约2.8%、或约2.9%、或约3%、或约3.1%、或约3.2%、或约3.3%、或约3.4%、或约3.5%、或约3.6%、或约3.7%、或约3.8%、或约3.9%、或约4%、或约4.1%、或约4.2%、或约4.3%、或约4.4%、或约4.5%、或约4.6%、或约4.7%、或约4.8%、或约4.9%、或约5%的丝SPF浓度。
在一些实施方案中，通过本文所述的方法通过使用Mn为约100、约200、约300、约400、约500、约600、约700、约800、约900、约1000、约1100或约1200的PEGDE交联剂来制备真皮填充物。
在一些实施方案中，通过本文所述的方法通过使用包括在约35℃、约36℃、约37℃、约38℃、约39℃、约40℃、约41℃、约42℃、约43℃、约44℃、约45℃、约46℃、约47℃、约48℃、约49℃、约50℃、约51℃、约52℃、约53℃、约54℃或约55℃下的交联步骤的反应条件来制备真皮填充物。在一些实施方案中，通过本文所述的方法通过使用包括约15分钟、约16分钟、约17分钟、约18分钟、约19分钟、约20分钟、约21分钟、约22分钟、约23分钟、约24分钟、约25分钟、约26分钟、约27分钟、约28分钟、约29分钟、约30分钟、约31分钟、约32分钟、约33分钟、约34分钟、约35分钟、约36分钟、约37分钟、约38分钟、约39分钟、约40分钟、约41分钟、约42分钟、约43分钟、约44分钟、约45分钟、约46分钟、约47分钟、约48分钟、约49分钟、约50分钟、约51分钟、约52分钟、约53分钟、约54分钟、约55分钟、约56分钟、约57分钟、约58分钟、约59分钟、约60分钟、约61分钟、约62分钟、约63分钟、约64分钟或约65分钟的交联步骤的反应条件来制备真皮填充物。
在一些实施方案中，真皮填充物包含游离HA，例如未交联HA。在一些实施方案中，真皮填充物包含约0.1%、或约0.2%、或约0.3%、或约0.4%、或约0.5%、或约0.6%、或约0.7%、或约0.8%、或约0.9%、或约1%、或约1.1%、或约1.2%、或约1.3%、或约1.4%、或约1.5%、或约1.6%、或约1.7%、或约1.8%、或约1.9%、或约2%、或约2.1%、或约2.2%、或约2.3%、或约2.4%、或约2.5%、或约2.6%、或约2.7%、或约2.8%、或约2.9%、或约3%、或约3.1%、或约3.2%、或约3.3%、或约3.4%、或约3.5%、或约3.6%、或约3.7%、或约3.8%、或约3.9%、或约4%、或约4.1%、或约4.2%、或约4.3%、或约4.4%、或约4.5%、或约4.6%、或约4.7%、或约4.8%、或约4.9%、或约5%、或约5.1%、或约5.2%、或约5.3%、或约5.4%、或约5.5%、或约5.6%、或约5.7%、或约5.8%、或约5.9%、或约6%、或约6.1%、或约6.2%、或约6.3%、或约6.4%、或约6.5%、或约6.6%、或约6.7%、或约6.8%、或约6.9%、或约7%、或约7.1%、或约7.2%、或约7.3%、或约7.4%、或约7.5%、或约7.6%、或约7.7%、或约7.8%、或约7.9%、或约8%、或约8.1%、或约8.2%、或约8.3%、或约8.4%、或约8.5%、或约8.6%、或约8.7%、或约8.8%、或约8.9%、或约9%、或约9.1%、或约9.2%、或约9.3%、或约9.4%、或约9.5%、或约9.6%、或约9.7%、或约9.8%、或约9.9%、或约10%的总HA （交联HA和未交联HA）。在一些实施方案中，真皮填充物不包含游离HA。
在一些实施方案中，真皮填充物包含约10 mg/ml、约11 mg/ml、约12 mg/ml、约13mg/ml、约14 mg/ml、约15 mg/ml、约16 mg/ml、约17 mg/ml、约18 mg/ml、约19 mg/ml、约20mg/ml、约21 mg/ml、约22 mg/ml、约23 mg/ml、约24 mg/ml、约25 mg/ml、约26 mg/ml、约27mg/ml、约28 mg/ml、约29 mg/ml或约30 mg/ml的HA。
在一些实施方案中，真皮填充物具有约10.0%、约10.1%、约10.2%、约10.3%、约10.4%、约10.5%、约10.6%、约10.7%、约10.8%、约10.9%、约11.0%、约11.1%、约11.2%、约11.3%、约11.4%、约11.5%、约11.6%、约11.7%、约11.8%、约11.9%、约12.0%、约12.1%、约12.2%、约12.3%、约12.4%、约12.5%、约12.6%、约12.7%、约12.8%、约12.9%、约13.0%、约13.1%、约13.2%、约13.3%、约13.4%、约13.5%、约13.6%、约13.7%、约13.8%、约13.9%、约14.0%、约14.1%、约14.2%、约14.3%、约14.4%、约14.5%、约14.6%、约14.7%、约14.8%、约14.9%、约15.0%、约15.1%、约15.2%、约15.3%、约15.4%、约15.5%、约15.6%、约15.7%、约15.8%、约15.9%、约16.0%、约16.1%、约16.2%、约16.3%、约16.4%、约16.5%、约16.6%、约16.7%、约16.8%、约16.9%、约17.0%、约17.1%、约17.2%、约17.3%、约17.4%、约17.5%、约17.6%、约17.7%、约17.8%、约17.9%、约18.0%、约18.1%、约18.2%、约18.3%、约18.4%、约18.5%、约18.6%、约18.7%、约18.8%、约18.9%、约19.0%、约19.1%、约19.2%、约19.3%、约19.4%、约19.5%、约19.6%、约19.7%、约19.8%、约19.9%、或约20.0%的MoD。
在一些实施方案中，真皮填充物具有约5N、约6N、约7N、约8N、约9N、约10N、约11N、约12N、约13N、约14N、约15N、约16N、约17N、约18N、约19N、约20N、约21N、约22N、约23N、约24N或约25N的注射力。在一些实施方案中，注射力涉及通过30G针的注射。
本文提供的组织填充物包含组合物，所述组合物还包含一种或多种组分，例如SPF，例如交联SPF和/或非交联SPF，透明质酸，例如交联HA和/或非交联HA。如本文所用，交联SPF是指与相同或不同的SPF交联的SPF。交联SPF也可以被称为均交联SPF（homo-cross-linked）。如本文所用，交联HA是指与相同或不同HA交联的HA。交联HA也可以称为均交联HA。本文提供的组织填充物还可包含与HA交联的SPF，和/或与SPF交联的HA。与HA交联的SPF和/或与SPF交联的HA也可以被称为交联SPF-HA，或杂交联SPF-HA。
在一些实施方案中，本发明的组合物是单相的。在一些实施方案中，本发明的组合物是双相的或多相的。在一些实施方案中，本发明的组合物包含非交联的聚合物相，例如非交联SPF和/或非交联HA。在一些实施方案中，本发明的组合物包含交联相，例如交联SPF和/或交联HA。在一些实施方案中，本发明的组合物包含液相，例如水，和/或水溶液。在一些实施方案中，水溶液可以包含SPF。在一些实施方案中，水相可以包含HA。在一些实施方案中，液相可以包含非交联聚合物，例如非交联HA和/或非交联SPF。
在一些实施方案中，本发明的组合物包含载体相。因此，所公开的组合物可以是单相或多相组合物。如本文所用，术语"载体相"与"载体"同义，并且是指用于增加水凝胶的流动性的材料。载体有利地是生理上可接受的载体，并且可以包括一种或多种用于药物组合物的常规赋形剂。如本文所用，术语"生理上可接受的载体"是指符合活生物体的正常功能或具有其特征的载体。因此，当施用至哺乳动物时，施用包含水凝胶和载体的组合物基本上没有长期或永久的有害作用。本发明的组织填充物包含载体，其中主要体积是水或盐水。然而，其它有用的载体包括任何生理上可容许的材料，其改善水凝胶通过针或进入目标宿主环境的可挤出性或可侵入性。潜在的载体可以包括但不限于生理缓冲溶液、血清、其它蛋白质溶液、由包括蛋白质、糖蛋白、蛋白聚糖或多糖的聚合物组成的凝胶。任何所述潜在载体可以是天然衍生的、完全合成的或其组合。
在一个实施方案中，本文提供的组合物包含改性SPF、交联SPF、非交联SPF、改性HA、交联HA、非交联HA、均交联SPF、均交联HA和杂交联SPF-HA中的一种或多种。
在一些实施方案中，本文提供的组合物包含交联SPF和非交联SPF。在一些实施方案中，本文提供的组合物包含交联SPF和非交联HA。在一些实施方案中，本文提供的组合物包含交联SPF和交联HA。在一些实施方案中，本文提供的组合物包含交联SPF和交联SPF-HA。
在一些实施方案中，本文提供的组合物包含非交联SPF和非交联HA。在一些实施方案中，本文提供的组合物包含非交联SPF和交联HA。在一些实施方案中，本文提供的组合物包含非交联SPF和交联SPF-HA。
在一些实施方案中，本文提供的组合物包含交联SPF、非交联SPF和非交联HA。在一些实施方案中，本文提供的组合物包含交联SPF、非交联SPF和交联HA。在一些实施方案中，本文提供的组合物包含交联SPF、非交联SPF和交联SPF-HA。
在一些实施方案中，本文提供的组合物包含交联SPF、交联HA和非交联HA。在一些实施方案中，本文提供的组合物包含交联SPF、交联HA和交联SPF-HA。在一些实施方案中，本文提供的组合物包含交联SPF、非交联HA和交联SPF-HA。
在一些实施方案中，本文提供的组合物包含非交联SPF、交联HA和非交联HA。在一些实施方案中，本文提供的组合物包含非交联SPF、交联HA和交联SPF-HA。在一些实施方案中，本文提供的组合物包含非交联SPF、非交联HA和交联SPF-HA。
在一些实施方案中，本文提供的组合物包含交联SPF、非交联SPF、交联HA和非交联HA。在一些实施方案中，本文提供的组合物包含交联SPF、非交联SPF、交联HA和交联SPF-HA。在一些实施方案中，本文提供的组合物包含交联SPF、非交联SPF、非交联HA和交联SPF-HA。
在一些实施方案中，本文提供的组合物包含交联SPF、交联HA、非交联HA和交联SPF-HA。在一些实施方案中，本文提供的组合物包含非交联SPF、交联HA、非交联HA和交联SPF-HA。
在一些实施方案中，本文提供的组合物包含交联SPF、非交联SPF、交联HA、非交联HA和交联SPF-HA。
在一些实施方案中，本文提供的组合物包含交联SPF。在一些实施方案中，本文提供的组合物包含SPF和透明质酸（HA）。在一个方面，本文所述的基于SPF/HA的组合物包含HA交联部分。在一些实施方案中，组合物包含SPF-HA交联部分。在一些实施方案中，组合物包含非交联HA。在一些实施方案中，组合物可以包含非交联SPF。在一些实施方案中，组合物可以包含至少一种额外的试剂。在一些实施方案中，组合物包含具有可变稳定性的交联SPF-SPF、SPF-HA和/或HA-HA，产生具有不同程度的可生物吸收性和/或生物再吸收性的组合物。
在一些实施方案中，HA交联至基质。在一些实施方案中，HA基质封装或半封装一种或多种SPF。在一些实施方案中，HA与一个或多个SPF交联。
在一些实施方案中，组织填充物或其部分是生物相容性、可生物降解的、可生物吸收的、可生物再吸收的或其组合。在一些实施方案中，本文提供的组织填充物包含流体组分，例如单一流体或基本上包含一种或多种流体的溶液。在一些实施方案中，组织填充物包含水或水溶液。在一些实施方案中，组织填充物是可注射的、可植入的或通过本领域已知的任何方式可递送到皮肤下，例如在组织的手术切除之后。在一些实施方案中，组合物是真皮填充物。在一些实施方案中，组合物是无菌的。
在一些实施方案中，本文所述的组织填充物可包含约1% （w/w） SPF和约0.3% （w/w）利多卡因。
本文提供了制备包含丝蛋白片段（SPF）和透明质酸（HA）的组合物的方法，递送包含SPF和HA的组合物的方法，以及使用包含SPF和HA的组合物的治疗/处理方法。
定义
如本文所用，术语"丝素蛋白"包括蚕丝素蛋白、昆虫或蜘蛛丝蛋白，或重组丝素蛋白。在一个实施方案中，丝素蛋白获自家蚕。
本文所用的术语"基本上无丝胶蛋白"或"基本上不含丝胶蛋白"是指大部分丝胶蛋白已被除去的丝纤维和/或由大部分丝胶蛋白已被除去的丝纤维制备的SPF。在一个实施方案中，基本上不含丝胶蛋白的丝素蛋白和SPF是指具有约0.01% （w/w）至约10.0% （w/w）丝胶蛋白的丝素蛋白和SPF。在一个实施方案中，基本上不含丝胶蛋白的丝素蛋白和SPF是指具有约0.01% （w/w）至约9.0% （w/w）丝胶蛋白的丝素蛋白和SPF。在一个实施方案中，基本上不含丝胶蛋白的丝素蛋白和SPF是指具有约0.01% （w/w）至约8.0% （w/w）丝胶蛋白的丝素蛋白和SPF。在一个实施方案中，基本上不含丝胶蛋白的丝素蛋白和SPF是指具有约0.01% （w/w）至约7.0% （w/w）丝胶蛋白的丝素蛋白和SPF。在一个实施方案中，基本上不含丝胶蛋白的丝素蛋白和SPF是指具有约0.01% （w/w）至约6.0% （w/w）丝胶蛋白的丝素蛋白和SPF。在一个实施方案中，基本上不含丝胶蛋白的丝素蛋白和SPF是指具有约0.01% （w/w）至约5.0% （w/w）丝胶蛋白的丝素蛋白和SPF。在一个实施方案中，基本上不含丝胶蛋白的丝素蛋白和SPF是指具有约0% （w/w）至约4.0% （w/w）丝胶蛋白的丝素蛋白和SPF。在一个实施方案中，基本上不含丝胶蛋白的丝素蛋白和SPF是指具有约0.05% （w/w）至约4.0% （w/w）丝胶蛋白的丝素蛋白和SPF。在一个实施方案中，基本上不含丝胶蛋白的丝素蛋白和SPF是指具有约0.1% （w/w）至约4.0% （w/w）丝胶蛋白的丝素蛋白和SPF。在一个实施方案中，基本上不含丝胶蛋白的丝素蛋白和SPF是指具有约0.5% （w/w）至约4.0% （w/w）丝胶蛋白的丝素蛋白和SPF。在一个实施方案中，基本上不含丝胶蛋白的丝素蛋白和SPF是指具有约1.0% （w/w）至约4.0% （w/w）丝胶蛋白的丝素蛋白和SPF。在一个实施方案中，基本上不含丝胶蛋白的丝素蛋白和SPF是指具有约1.5% （w/w）至约4.0% （w/w）丝胶蛋白的丝素蛋白和SPF。在一个实施方案中，基本上不含丝胶蛋白的丝素蛋白和SPF是指具有约2.0% （w/w）至约4.0% （w/w）丝胶蛋白的丝素蛋白和SPF。在一个实施方案中，基本上不含丝胶蛋白的丝素蛋白和SPF是指具有约2.5% （w/w）至约4.0% （w/w）丝胶蛋白的丝素蛋白和SPF。在一个实施方案中，基本上不含丝胶蛋白的丝素蛋白和SPF是指具有约0.01% （w/w）至约0.1% （w/w）的丝胶蛋白含量的丝素蛋白和SPF。在一个实施方案中，基本上不含丝胶蛋白的丝素蛋白和SPF是指具有低于约0.1% （w/w）的丝胶蛋白含量的丝素蛋白和SPF。在一个实施方案中，基本上不含丝胶蛋白的丝素蛋白和SPF是指具有低于约0.05% （w/w）的丝胶蛋白含量的丝素蛋白和SPF。在一个实施方案中，当将丝源加入到沸腾的（100℃）碳酸钠水溶液中持续大约30分钟至大约60分钟的处理时间时，获得大约26重量%至大约31重量%的脱胶损失。
如本文所用，术语"基本上均匀的"可指以关于确定的分子量的正态分布分布的基于纯丝素蛋白的蛋白片段。如本文所用，术语"基本上均匀的"可指添加剂例如利多卡因在本公开的组合物整体中的均匀分布。
如本文所用，术语"基本上不含无机残留物"是指组合物显示出0.1% （w/w）或更少的残留物。在一个实施方案中，基本上不含无机残留物是指组合物显示出0.05% （w/w）或更少的残留物。在一个实施方案中，基本上不含无机残留物是指组合物显示出0.01% （w/w）或更少的残留物。在一个实施方案中，无机残留物的量为0 ppm （"不可检测"或" ND "）至1000 ppm。在一个实施方案中，无机残留物的量为ND至约500 ppm。在一个实方案例中，无机残留物的量为ND至约400 ppm。在一个实施方案中，无机残留物的量为ND至约300 ppm。在一个实施方案中，无机残留物的量为ND至约200 ppm。在一个实施方案中，无机残留物的量为ND至约100 ppm。在一个实施方案中，无机残留物的量为10 ppm至1000 ppm。
如本文所用，术语"基本上不含有机残留物"是指组合物显示出0.1% （w/w）或更少的残留物。在一个实施方案中，基本上不含有机残留物是指组合物显示出0.05% （w/w）或更少的残留物。在一个实施方案中，基本上不含有机残留物是指组合物显示出0.01% （w/w）或更少的残留物。在一个实施方案中，有机残留物的量为0 ppm （"不可检测"或" ND "）至1000 ppm。在一个实施方案中，有机残留物的量为ND至约500 ppm。在一个实施方案中，有机残留物的量为ND至约400 ppm。在一个实施方案中，有机残留物的量为ND至约300 ppm。在一个实施方案中，有机残留物的量为ND至约200 ppm。在一个实施方案中，有机残留物的量为ND至约100 ppm。在一个实施方案中，有机残留物的量为10 ppm至1000 ppm。
如本文所用，术语"非交联"是指缺乏连接单独的基质聚合物分子、大分子和/或单体链的分子间键。因此，非交联的基质聚合物不通过分子间键与任何其它基质聚合物连接。
本公开的组织填充物、组合物或其部分表现出"生物相容性"或是"生物相容的"，意味着所述组合物与活体组织或活体***相容，而没有显著毒性、有害或生理反应性，并且不引起免疫排斥。术语"生物相容的"包括本文定义的术语"可生物吸收的"、"可生物再吸收的"和"可生物降解的"。
本公开的组织填充物、组合物或其部分可以是"可生物吸收的"、"可生物再吸收的"和/或"可生物降解的"。如本文所用，术语"可生物吸收的"是指植入体内后消失(dissipation)的材料或物质，其与可发生消失的机制如溶解、降解、吸收和排出(excretion)无关。如本文所用，术语"可生物再吸收的"是指能够被身体吸收。如本文所用，术语"可生物降解的"是指在生理条件下可分解为副产物的材料。这样的生理条件包括例如水解（通过水解断裂的分解）、酶催化（酶促降解）、机械相互作用等。如本文所用，术语"可生物降解的"还包括术语"可生物再吸收的"，其描述了在生理条件下分解以分解成产物的材料或物质，所述产物经历生物再吸收进入宿主生物体，即变成宿主生物体的生物化学***的代谢物。如本文所用，术语"可生物再吸收的"和"生物再吸收"包括诸如可生物再吸收的聚合物的细胞介导的降解、酶促降解和/或水解降解、和/或可生物再吸收的聚合物从活组织中的消除的过程，如本领域技术人员将理解的。在一些实施方案中，本文描述的SPF-HA组合物和材料可以是生物相容性的、可生物再吸收的、可生物吸收的和/或可生物降解的。
当本文所述的组织填充物是可生物降解的或可生物再吸收的时，它们可以抗生物降解或生物再吸收至少约1天，或至少约2天，或至少约3天，或至少约4天，至少约5天，或至少约10天，或至少约15天，或至少约20天，或至少约25天，或至少约30天，或至少约35天，或至少约40天，或至少约45天，或至少约50天，或至少约60天，或至少约70天，或至少约80天，或至少约90天，或至少约100天，或至少约110天，或至少约120天，或至少约130天，或至少约140天，或至少约150天，或至少约160天，或至少约170天，或至少约180天，或至少约190天，或至少约200天，或至少约250天，或至少约300天，或至少约1年，或至少约2年，或者它们可以抗生物降解少于约5天，或至多约10天，或至多约15天，或至多约20天，或至多约25天，或至多约30天，或至多约35天，或至多约40天，或至多约45天，或至多约50天，或至多约60天，或至多约70天，或至多约80天，或至多约90天，或至多约100天，或至多约110天，或至多约120天，或至多约130天，或至多约140天，或至多约150天，或至多约160天，或至多约170天，或至多约180天，或至多约190天，或至多约200天，或至多约250天，或至多约300天，或至多约1年，或至多约2年。
当本文所述的组织填充物是可生物吸收的时，它们可抗生物吸收至少约1天，或至少约2天，或至少约3天，或至少约4天，至少约5天，或至少约10天，或至少约15天，或至少约20天，或至少约25天，或至少约30天，或至少约35天，或至少约40天，或至少约45天，或至少约50天，或至少约60天，或至少约70天，或至少约80天，或至少约90天，或至少约100天，或至少约110天，或至少约120天，或至少约130天，或至少约140天，或至少约150天，或至少约160天，或至少约170天，或至少约180天，或至少约190天，或至少约200天，或至少约250天，或至少约300天，或至少约1年，或至少约2年，或者它们可以抗生物吸收少于约5天，或至多约10天，或至多约15天，或至多约20天，或至多约25天，或至多约30天，或至多约35天，或至多约40天，或至多约45天，或至多约50天，或至多约60天，或至多约70天，或至多约80天，或至多约90天，或至多约100天，或至多约110天，或至多约120天，或至多约130天，或至多约140天，或至多约150天，或至多约160天，或至多约170天，或至多约180天，或至多约190天，或至多约200天，或至多约250天，或至多约300天，或至多约1年，或至多约2年。
如本文所述，生物降解、生物吸收和生物再吸收的程度可通过例如向本文所述的组合物中加入一种或多种延迟生物降解、生物吸收和/或生物再吸收的试剂来改变和/或控制。此外，生物降解、生物吸收和生物再吸收的程度可通过增加或减少本文所述的聚合物材料中存在的聚合物交联的程度来改变和/或控制。例如，本文所述组合物的生物降解、生物吸收和/或生物再吸收的速率可通过减少本文所述聚合物材料中的交联量来增加。或者，本文所述的组织填充物和组合物的生物降解、生物吸收和/或生物再吸收的速率可通过增加本文所述的聚合物材料中的交联量来降低。
本公开的组织填充物和组合物是"低过敏性的"，意味着它们相对不太可能引起过敏反应。这种低过敏性可以通过参与者在他们的皮肤上局部施用本公开的组合物持续延长的时间段来证明。在一个实施方案中，延长的时间段是约3天。在一个实施方案中，延长的时间段是约7天。在一个实施方案中，延长的时间段是约14天。在一个实施方案中，延长的时间段是约21天。在一个实施方案中，延长的时间段是约30天。在一个实施方案中，延长的时间段选自约1个月、约2个月、约3个月、约4个月、约5个月、约6个月、约7个月、约8个月、约9个月、约10个月、约11个月、约12个月和无限期的。
如本文所用，"低分子量"丝是指具有约5 kDa至约20 kDa的分子量的丝蛋白片段。在一些实施方案中，某些丝蛋白片段的目标低分子量可以是约11 kDa。
如本文所用，"中分子量"丝是指具有约20 kDa至约55 kDa的分子量的丝蛋白片段。在一些实施方案中，某些丝蛋白片段的目标低分子量可以是约40 kDa。
如本文所用，"高分子量"丝是指具有约55 kDa至约150 kDa的分子量的丝蛋白片段。在一些实施方案中，某些丝蛋白片段的目标低分子量可以是约100 kDa至约145 kDa。
在一些实施方案中，本文所述的分子量，例如低分子量SPF、中分子量SPF、高分子量SPF，可以被转化为相应的天然或重组蛋白，例如天然或重组丝蛋白中所含的近似数目的氨基酸，如本领域普通技术人员所理解的。例如，氨基酸的平均重量可以为约110道尔顿，即110g/mol。因此，在一些实施方案中，线性蛋白质的分子量除以110道尔顿可以用于近似其中所含的氨基酸残基的数目。
如本文所用，术语"多分散性"是指在给定的聚合物样品中分子量分布的量度。多分散性可以通过将重均分子量（Mw）除以数均分子量（Mn）来计算。如本文所用，术语"重均分子量" （Mw）通常是指取决于聚合物分子根据其尺寸的贡献的分子量测量结果。重均分子量可以由下式定义:
Figure 684094DEST_PATH_IMAGE001
，其中Mi是链的分子量并且Ni是具有该分子量的链的数目。本文所用的术语"数均分子量" （Mn）通常是指通过将样品中所有聚合物分子的总重量除以样品中聚合物分子的总数而计算的分子量测量结果。数均分子量可以由下式定义:
Figure 601234DEST_PATH_IMAGE002
，其中Mi是链的分子量并且Ni是具有该分子量的链的数目。例如，其中所有聚合物链相等的单分散聚合物的多分散性（Mw/Mn）为1。通常，可以通过凝胶渗透色谱法（GPC）和尺寸排阻色谱法（SEC）测定分子量平均值。多分散性指数越大，分子量越宽。
如本文所用，术语"组织填充物"广义上是指可提供在软组织中和周围以增加体积、增加支撑或以其它方式治疗/处理软组织缺陷的材料。术语"组织填充物"还包括真皮填充物；然而，术语"真皮填充物"不应被解释为对这样的填充物的递送位置和类型施加任何限制。然而，本文所述的真皮填充物通常可以包括在真皮下以多个水平使用和递送此类真皮填充物。如本文所用，术语"软组织"可指连接、支撑或围绕身体的其它结构和器官的那些组织。例如，本文所述的软组织可包括但不限于皮肤、真皮组织、真皮下组织、皮肤组织、皮下组织、硬膜内组织、肌肉、腱、韧带、纤维组织、脂肪、血管和动脉、神经和滑膜（皮内）组织。
如本文所用，术语"环氧衍生的交联剂"是指在相同或分开的聚合物链中的两个部分之间的分子桥，其通过使用包含环氧基团的交联前体，例如1,4-丁二醇二缩水甘油醚（BDDE）、聚乙二醇二缩水甘油醚（PEGDE或PEGDGE）、或丝素蛋白、或丝素蛋白片段多环氧连接剂获得。不希望受任何特定理论的束缚，通过与聚合物链中（包括聚合物的侧链中）的反应性中心反应，环氧环打开以形成仲醇和新键（方案1）。反应性基团包括但不限于亲核基团，例如羧基、氨基或羟基。
方案1
Figure 380971DEST_PATH_IMAGE003
如本文所用，"自交联"是指a）两条化学性质相似的聚合物链之间的交联，例如两条透明质酸链之间的交联，或两条SPF链之间的交联，或b）同一聚合物链上的交联基团之间的交联以产生环酯（内酯）、环酰胺、包含交联部分的环状结构体等，例如同一条透明质酸链上的两个基团之间的交联，或同一条SPF链上的两个基团之间的交联。
如本文所用，"零长度交联"和/或"包含键的交联"和/或"使用活化剂的交联"是指在分开的聚合物链或相同的聚合物链上的两个基团之间的交联，其中基团彼此直接反应，并且没有额外的交联部分***它们之间。在羧酸基团和胺或醇之间的交联是零长度交联的一个实例，其中所述基团之一被活化剂例如碳二亚胺活化。
如本文所用，"丁达尔效应"和/或"丁达尔化（tyndalling）"是在一些施用组织填充物的患者中发生的不良事件。丁达尔效应的特征在于在注射了组织填充物的皮肤部位出现蓝色变色，这代表通过半透明表皮看到的可见的真皮填充物组合物。当光散射颗粒物质分散在另外的光传输介质中时，当颗粒的横截面在特定范围内时，通常稍微低于或接近可见光波长，可以看到丁达尔效应。在丁达尔效应下，较长波长的光（例如，红色）更大程度地透射通过介质，而较短波长的光（例如，蓝色）经由散射更大程度地反射，从而给出介质着色为蓝色的总体印象。
丝蛋白片段
在一些实施方案中，所述基于丝蛋白的组合物和丝蛋白片段或其制备方法可以包括在美国专利申请公开No. 2015/00933340、No. 2015/0094269、No. 2016/0193130、No. 2016/0022560、No. 2016/0022561、No. 2016/0022562、No. 2016/0022563和No. 2016/0222579、No. 2016/0281294，以及美国专利No. 9,187,538、No. 9,522,107、No. 9,517,191、No. 9,522,108、No. 9,511,012和No. 9,545,369中描述的那些，其全部内容通过引用并入本文。
如本文所用，丝蛋白片段（SPF）通常指来源于丝的肽和/或蛋白质的混合物、组合物或群体。在一些实施方案中，SPF被制备为基本上纯的和高度可扩展的(scalable)SPF混合物溶液，其可以在多种工业中用于多种应用。所述溶液由原始的纯的完整丝蛋白材料产生，并且被处理以除去任何丝胶蛋白并获得片段混合物的所需重均分子量（MW）和多分散性。可以改变选择的方法参数以实现取决于预期的用途的不同的最终丝蛋白片段特征。所得的最终片段溶液是纯丝蛋白片段和水，具有PPM至不可检测水平的工艺污染物，该水平在药物、医疗和消费者化妆品市场中是可接受的。可以根据所需的用途和性能要求进一步改变溶液中丝蛋白片段的浓度、大小和多分散性。在一个实施方案中，溶液中的基于纯丝素蛋白的蛋白片段基本上不含丝胶蛋白，具有约1 kDa至约250 kDa的平均重均分子量，且具有约1.5至约3.0的多分散性。在一个实施方案中，溶液中的基于纯丝素蛋白的蛋白片段基本上不含丝胶蛋白，具有约5 kDa至约150 kDa的平均重均分子量和约1.5至约3.0的多分散性。在一个实施方案中，溶液中的基于纯丝素蛋白的蛋白片段基本上不含丝胶蛋白，具有约6 kDa至约17 kDa的平均重均分子量和约1.5至约3.0的多分散性。在一个实施方案中，溶液中的基于纯丝素蛋白的蛋白片段基本上不含丝胶蛋白，具有约17 kDa至约39 kDa的平均重均分子量和约1.5至约3.0的多分散性。在一个实施方案中，溶液中的基于纯丝素蛋白的蛋白片段基本上不含丝胶蛋白，具有约39 kDa至约80 kDa的平均重均分子量和约1.5至约3.0的多分散性。在一个实施方案中，溶液中的基于纯丝素蛋白的蛋白片段基本上不含丝胶蛋白，具有约80 kDa至约150 kDa的平均重均分子量和约1.5至约3.0的多分散性。
在一个实施方案中，本文所述的丝蛋白片段可以作为溶液或作为固体制备，其中所述固体悬浮在生理溶液（例如水、盐水等）中或HA的凝胶中，如本文所述。在一些实施方案中，本文所述的丝蛋白片段可以在将其沉积在HA凝胶中之前在脂质体或微球中制备。
在一个实施方案中，本公开的丝溶液可以用于产生本文所述的组织填充物组合物。在一个实施方案中，溶液可用于产生凝胶，凝胶可与HA和其它试剂一起匀化，以制备本文所述的组织填充物。根据所用的丝溶液和流延膜或凝胶的方法，获得了各种性质。
在一些实施方案中，本文所述的组织填充物中的SPF百分比含量按重量计为至少0.01%、或至少0.1%、或至少0.2%、或至少0.3%、或至少0.4%、或至少0.5%、或至少0.6%、或至少0.7%、或至少0.8%、或至少0.9%、或至少1%、或至少2%、或至少3%、或至少4%、或至少5%、或至少6%、或至少7%、或至少8%、或至少9%、或至少10%、或至少11%、或至少12%、或至少13%、或至少14%、或至少15%、或至少16%、或至少17%、或至少18%、或至少19%、或至少20%、或至少21%、或至少22%、或至少23%、或至少24%、或至少25%、或至少26%、或至少27%、或至少28%、或至少29%、或至少30%、或至少31%、或至少32%、或至少33%、或至少34%、或至少35%、或至少36%、或至少37%、或至少38%、或至少39%、或至少40%、或至少41%、或至少42%、或至少43%、或至少44%、或至少45%、或至少46%、或至少47%、或至少48%、或至少49%、或至少50%、或至少51%、或至少52%、或至少53%、或至少54%、或至少55%、或至少56%、或至少57%、或至少58%、或至少59%、或至少60%、或至少61%、或至少62%、或至少63%、或至少64%、或至少65%、或至少66%、或至少67%、或至少68%、或至少69%、或至少70%、或至少71%、或至少72%、或至少73%、或至少74%、或至少75%、或至少76%、或至少77%、或至少78%、或至少79%、或至少80%、或至少81%、或至少82%、或至少83%、或至少84%、或至少85%、或至少86%、或至少87%、或至少88%、或至少89%、或至少90%、或至少91%、或至少92%、或至少93%、或至少94%、或至少95%、或至少96%、或至少97%、或至少98%、或至少99%、或至少99.5%、或至少99.9%。
在一些实施方案中，本文所述的组织填充物中的SPF百分比含量按重量计为至多0.01%、或至多0.1%、或至多0.2%、或至多0.3%、或至多0.4%、或至多0.5%、或至多0.6%、或至多0.7%、或至多0.8%、或至多0.9%、或至多1%、或至多2%、或至多3%、或至多4%、或至多5%、或至多6%、或至多7%、或至多8%、或至多9%、或至多10%、或至多11%、或至多12%、或至多13%、或至多14%、或至多15%、或至多16%、或至多17%、或至多18%、或至多19%、或至多20%、或至多21%、或至多22%、或至多23%、或至多24%、或至多25%、或至多26%、或至多27%、或至多28%、或至多29%、或至多30%、或至多31%、或至多32%、或至多33%、或至多34%、或至多35%、或至多36%、或至多37%、或至多38%、或至多39%、或至多40%、或至多41%、或至多42%、或至多43%、或至多44%、或至多45%、或至多46%、或至多47%、或至多48%、或至多49%、或至多50%、或至多51%、或至多52%、或至多53%、或至多54%、或至多55%、或至多56%、或至多57%、或至多58%、或至多59%、或至多60%、或至多61%、或至多62%、或至多63%、或至多64%、或至多65%、或至多66%、或至多67%、或至多68%、或至多69%、或至多70%、或至多71%、或至多72%、或至多73%、或至多74%、或至多75%、或至多76%、或至多77%、或至多78%、或至多79%、或至多80%、或至多81%、或至多82%、或至多83%、或至多84%、或至多85%、或至多86%、或至多87%、或至多88%、或至多89%、或至多90%、或至多91%、或至多92%、或至多93%、或至多94%、或至多95%、或至多96%、或至多97%、或至多98%、或至多99%、或至多99.5%、或至多99.9%。
在一些实施方案中，本文所述的组织填充物中的SPF百分比含量按重量计为约0.01%、或约0.1%、或约0.2%、或约0.3%、或约0.4%、或约0.5%、或约0.6%、或约0.7%、或约0.8%、或约0.9%、或约1%、或约2%、或约3%、或约4%、或约5%、或约6%、或约7%、或约8%、或约9%、或约10%、或约11%、或约12%、或约13%、或约14%、或约15%、或约16%、或约17%、或约18%、或约19%、或约20%、或约21%、或约22%、或约23%、或约24%、或约25%、或约26%、或约27%、或约28%、或约29%、或约30%、或约31%、或约32%、或约33%、或约34%、或约35%、或约36%、或约37%、或约38%、或约39%、或约40%、或约41%、或约42%、或约43%、或约44%、或约45%、或约46%、或约47%、或约48%、或约49%、或约50%、或约51%、或约52%、或约53%、或约54%、或约55%、或约56%、或约57%、或约58%、或约59%、或约60%、或约61%、或约62%、或约63%、或约64%、或约65%、或约66%、或约67%、或约68%、或约69%、或约70%、或约71%、或约72%、或约73%、或约74%、或约75%、或约76%、或约77%、或约78%、或约79%、或约80%、或约81%、或约82%、或约83%、或约84%、或约85%、或约86%、或约87%、或约88%、或约89%、或约90%、或约91%、或约92%、或约93%、或约94%、或约95%、或约96%、或约97%、或约98%、或约99%、或约99.5%、或约99.9%。
在一些实施方案中，本文所述的组织填充物中SPF的百分比含量以重量计为约0.01%至约100%、或约0.01%至约99.9%、或约0.01%至约75%；或约0.1%至约95%、或约1%至约95%、或约10%至约95%；或约0.1%至约1%、或约0.1%至约2%、或约0.1%至约3%、或约0.1%至约4%、或约0.1%至约5%、或约0.1%至约6%、或约0.1%至约7%、或约0.1%至约8%、或约0.1%至约9%、或约0.1%至约10%、或约0.1%至约11%、或约0.1%至约12%、或约0.1%至约13%、或约0.1%至约14%、或约0.1%至约15%、或约0.1%至约16%、或约0.1%至约17%、或约0.1%至约18%、或约0.1%至约19%、或约0.1%至约20%、或约0.1%至约21%、或约0.1%至约22%、或约0.1%至约23%、或约0.1%至约24%、或约0.1%至约25%；或约1%至约2%、或约1%至约3%、或约1%至约4%、或约1%至约5%、或约1%至约6%、或约1%至约7%、或约1%至约8%、或约1%至约9%、或约1%至约10%、或约1%至约11%、或约1%至约12%、或约1%至约13%、或约1%至约14%、或约1%至约15%、或约1%至约16%、或约1%至约17%、或约1%至约18%、或约1%至约19%、或约1%至约20%、或约1%至约21%、或约1%至约22%、或约1%至约23%、或约1%至约24%、或约1%至约25%；或约10%至约20%、或约10%至约25%、或约10%至约30%、或约10%至约35%、或约10%至约40%、或约10%至约45%、或约10%至约50%、或约10%至约55%、或约10%至约60%、或约10%至约65%、或约10%至约70%、或约10%至约75%、或约10%至约80%、或约10%至约85%、或约10%至约90%、或约10%至约100%。
根据SPF肽和/或蛋白质的结晶度，本文所述的SPF可具有多种机械和物理性质。在一个实施方案中，由于蛋白质的结晶性，本公开的SPF组合物不溶于水溶液中。在一个实施方案中，本公开的SPF组合物可溶于水溶液中。在一个实施方案中，本公开的组合物的SPF包含约三分之二的结晶部分和约三分之一的无定形区域。在一个实施方案中，本公开的组合物的SPF包含约一半的结晶部分和约一半的无定形区域。在一个实施方案中，本公开的组合物的SPF包含99%的结晶部分和1%的无定形区域。在一个实施方案中，本公开的组合物的SPF包含95%的结晶部分和5%的无定形区域。在一个实施方案中，本公开的组合物的SPF包含90%的结晶部分和10%的无定形区域。在一个实施方案中，本公开的组合物的SPF包含85%的结晶部分和15%的无定形区域。在一个实施方案中，本公开的组合物的SPF包含80%的结晶部分和20%的无定形区域。在一个实施方案中，本公开的组合物的SPF包含75%的结晶部分和25%的无定形区域。在一个实施方案中，本公开的组合物的SPF包含70%的结晶部分和30%的无定形区域。在一个实施方案中，本公开的组合物的SPF包含65%的结晶部分和35%的无定形区域。在一个实施方案中，本公开的组合物的SPF包含60%的结晶部分和40%的无定形区域。在一个实施方案中，本公开的组合物的SPF包含50%的结晶部分和50%的无定形区域。在一个实施方案中，本公开的组合物的SPF包含40%的结晶部分和60%的无定形区域。在一个实施方案中，本公开的组合物的SPF包含35%的结晶部分和65%的无定形区域。在一个实施方案中，本公开的组合物的SPF包含30%的结晶部分和70%的无定形区域。在一个实施方案中，本公开的组合物的SPF包含25%的结晶部分和75%的无定形区域。在一个实施方案中，本公开的组合物的SPF包含20%的结晶部分和80%的无定形区域。在一个实施方案中，本公开的组合物的SPF包含15%的结晶部分和85%的无定形区域。在一个实施方案中，本公开的组合物的SPF包含10%的结晶部分和90%的无定形区域。在一个实施方案中，本公开的组合物的SPF包含5%的结晶部分和90%的无定形区域。在一个实施方案中，本公开的组合物的SPF包含1%的结晶部分和99%的无定形区域。
在一些实施方案中，SPF的物理和机械性质随SPF组合物中α-螺旋和/或无规卷曲区域的存在程度而变化。在一些实施方案中，本文公开的SPF水凝胶具有基本上不含α-螺旋和无规卷曲区域的蛋白质结构。在这些实施方案的方面，水凝胶具有的蛋白质结构包含，例如，约5%的α-螺旋和无规卷曲区域，约10%的α-螺旋和无规卷曲区域，约15%的α-螺旋和无规卷曲区域，约20%的α-螺旋和无规卷曲区域，约25%的α-螺旋和无规卷曲区域，约30%的α-螺旋和无规卷曲区域，约35%的α-螺旋和无规卷曲区域，约40%的α-螺旋和无规卷曲区域，约45%的α-螺旋和无规卷曲区域，或约50%的α-螺旋和无规卷曲区域。在这些实施方案的其它方面，水凝胶具有的蛋白质结构包含，例如，至多5%的α-螺旋和无规卷曲区域，至多10%的α-螺旋和无规卷曲区域，至多15%的α-螺旋和无规卷曲区域，至多20%的α-螺旋和无规卷曲区域，至多25%的α-螺旋和无规卷曲区域，至多30%的α-螺旋和无规卷曲区域，至多35%的α-螺旋和无规卷曲区域，至多40%的α-螺旋和无规卷曲区域，至多45%的α-螺旋和无规卷曲区域，或至多50%的α-螺旋和无规卷曲区域。在这些实施方案的其它方面，水凝胶具有的蛋白质结构包含，例如，约5%至约10%的α-螺旋和无规卷曲区域，约5%至约15%的α-螺旋和无规卷曲区域，约5%至约20%的α-螺旋和无规卷曲区域，约5%至约25%的α-螺旋和无规卷曲区域，约5%至约30%的α-螺旋和无规卷曲区域，约5%至约40%的α-螺旋和无规卷曲区域，约5%至约50%的α-螺旋和无规卷曲区域，约10%至约20%的α-螺旋和无规卷曲区域，约10%至约30%的α-螺旋和无规卷曲区域，约15%至约25%的α-螺旋和无规卷曲区域，约15%至约30%的α-螺旋和无规卷曲区域，或约15%至约35%的α-螺旋和无规卷曲区域。
在一些实施方案中，本公开的SPF溶液组合物具有贮存稳定性，即当在水溶液中储存时，它们将不会缓慢地或自发地胶凝，并且随着时间推移，从10天至3年，这取决于储存条件、丝百分比以及运输次数和运输条件，没有片段的明显聚集和/或分子量的增加。另外，通过防止丝的过早折叠和聚集，可以改变pH以延长保存期限和/或支持运输条件。在一个实施方案中，本公开的SPF溶液组合物在室温（RT）下具有最长达2周的贮存稳定性。在一个实施方案中，本公开的SPF溶液组合物在RT下具有最长达4周的贮存稳定性。在一个实施方案中，本公开的SPF溶液组合物在RT下具有最长达6周的贮存稳定性。在一个实施方案中，本公开的SPF溶液组合物在RT下具有最长达8周的贮存稳定性。在一个实施方案中，本公开的SPF溶液组合物在RT下具有最长达10周的贮存稳定性。在一个实施方案中，本公开的SPF溶液组合物在RT下具有最长达12周的贮存稳定性。在一个实施方案中，本公开的SPF溶液组合物在RT下具有约4周至约52周的贮存稳定性。下表1显示了本公开的SPF组合物的实施方案的贮存稳定性测试结果。
Figure 713864DEST_PATH_IMAGE004
可将已知的添加剂例如维生素（例如维生素C）加入本公开的SPF溶液组合物中以产生在室温（RT）下稳定10天至3年的凝胶。两个实例，SPF组合物和具有添加剂的SPF组合物，可以被冻干以增强从10天到10年的储存控制，这取决于储存和运输条件。冻干的丝粉末还可作为医药、消费和电子市场的原料。另外，在储存后可以将冻干的丝粉末再悬浮在水、HFIP或有机溶液中以产生不同浓度的丝溶液，包括比最初产生的那些更高浓度的溶液。在另一个实施方案中，使用Rototherm蒸发器或本领域已知的用于产生含有少于10质量%水的干蛋白质形式的其他方法干燥基于丝素蛋白的蛋白片段。
本文公开的组织填充物和方法中使用的SPF可以以各种方式操作和并入，例如以溶液的形式，其可以与其它材料（例如HA）组合以制备本文所述的组织填充物组合物。以下是本公开的丝溶液的制备中的各种参数的合适范围的非限制性实例。本公开的丝溶液可以包括这些参数中的一个或多个，但不必是全部，并且可以使用这样的参数的范围的各种组合来制备。
在一个实施方案中，溶液中的丝百分比小于30%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比小于25%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比小于20%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比小于19%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比小于18%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比小于17%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比小于16%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比小于15%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比小于14%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比小于13%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比小于12%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比小于11%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比小于10%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比小于9%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比小于8%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比小于7%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比小于6%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比小于5%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比小于4%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比小于3%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比小于2%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比小于1%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比小于0.9%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比小于0.8%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比小于0.7%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比小于0.6%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比小于0.5%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比小于0.4%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比小于0.3%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比小于0.2%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比小于0.1%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比大于0.1%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比大于0.2%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比大于0.3%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比大于0.4%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比大于0.5%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比大于0.6%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比大于0.7%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比大于0.8%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比大于0.9%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比大于1%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比大于2%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比大于3%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比大于4%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比大于5%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比大于6%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比大于7%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比大于8%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比大于9%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比大于10%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比大于11%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比大于12%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比大于13%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比大于14%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比大于15%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比大于16%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比大于17%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比大于18%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比大于19%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比大于20%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比大于25%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比为0.1%至30%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比为0.1%至25%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比为0.1%至20%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比为0.1%至15%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比为0.1%至10%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比为0.1%至9%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比为0.1%至8%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比为0.1%至7%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比为0.1%至6.5%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比为0.1%至6%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比为0.1%至5.5%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比为0.1%至5%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比为0.1%至4.5%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比为0.1%至4%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比为0.1%至3.5%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比为0.1%至3%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比为0.1%至2.5%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比为0.1%至2.0%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比为0.1%至2.4%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比为0.5%至5%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比为0.5%至4.5%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比为0.5%至4%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比为0.5%至3.5%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比为0.5%至3%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比为0.5%至2.5%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比为1至4%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比为1至3.5%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比为1至3%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比为1至2.5%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比为1至2.4%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比为1至2%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比为20%至30%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比为0.1%至6%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比为6%至10%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比为6%至8%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比为6%至9%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比为10%至20%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比为11%至19%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比为12%至18%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比为13%至17%。在一个实施方案中，溶液中的丝百分比为14%至16%。
在一个实施方案中，本文所述的丝组合物可以与HA组合以形成组织填充物组合物。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比小于30%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比小于25%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比小于20%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比小于19%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比小于18%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比小于17%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比小于16%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比小于15%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比小于14%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比小于13%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比小于12%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比小于11%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比小于10%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比小于9%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比小于8%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比小于7%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比小于6%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比小于5%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比小于4%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比小于3%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比小于2%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比小于1%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比小于0.9%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比小于0.8%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比小于0.7%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比小于0.6%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比小于0.5%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比小于0.4%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比小于0.3%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比小于0.2%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比小于0.1%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比大于0.1%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比大于0.2%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比大于0.3%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比大于0.4%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比大于0.5%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比大于0.6%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比大于0.7%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比大于0.8%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比大于0.9%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比大于1%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比大于2%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比大于3%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比大于4%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比大于5%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比大于6%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比大于7%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比大于8%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比大于9%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比大于10%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比大于11%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比大于12%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比大于13%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比大于14%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比大于15%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比大于16%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比大于17%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比大于18%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比大于19%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比大于20%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比大于25%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比为0.1%至30%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比为0.1%至25%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比为0.1%至20%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比为0.1%至15%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比为0.1%至10%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比为0.1%至9%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比为0.1%至8%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比为0.1%至7%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中的丝的重量百分比为0.1%至6.5%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比为0.1%至6%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中的丝的重量百分比为0.1%至5.5%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比为0.1%至5%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中的丝的重量百分比为0.1%至4.5%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比为0.1%至4%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中的丝的重量百分比为0.1%至3.5%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比为0.1%至3%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中的丝的重量百分比为0.1%至2.5%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中的丝的重量百分比为0.1%至2.0%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比为0.1%至2.4%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比为0.5%至5%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中的丝的重量百分比为0.5%至4.5%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比为0.5%至4%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中的丝的重量百分比为0.5%至3.5%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比为0.5%至3%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中的丝的重量百分比为0.5%至2.5%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比为1%至4%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比为1至3.5%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比为1至3%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比为1至2.5%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比为1至2.4%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比为1至2%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比为20%至30%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比为0.1%至6%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比为6%至10%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比为6%至8%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比为6%至9%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比为10%至20%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比为11%至19%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比为12%至18%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比为13%至17%。在一个实施方案中，所述组织填充物组合物中丝的重量百分比为14%至16%。
在一个实施方案中，溶液或组织填充物组合物中的丝胶蛋白百分比为不可检测至30%。在一个实施方案中，溶液或组织填充物组合物中的丝胶蛋白百分比为不可检测至5%。在一个实施方案中，溶液或组织填充物组合物中的丝胶蛋白百分比为1%。在一个实施方案中，溶液或组织填充物组合物中的丝胶蛋白百分比为2%。在一个实施方案中，溶液或组织填充物组合物中的丝胶蛋白百分比为3%。在一个实施方案中，溶液或组织填充物组合物中的丝胶蛋白百分比为4%。在一个实施方案中，溶液或组织填充物组合物中的丝胶蛋白百分比为5%。在一个实施方案中，溶液或组织填充物组合物中的丝胶蛋白百分比为10%。在一个实施方案中，溶液或组织填充物组合物中的丝胶蛋白百分比为30%。
在一个实施方案中，LiBr-丝片段溶液的稳定性为0至1年。 在一个实施方案中，LiBr-丝片段溶液的稳定性为0至2年。在一个实施方案中，LiBr-丝片段溶液的稳定性为0至3年。在一个实施方案中，LiBr-丝片段溶液的稳定性为0至4年。在一个实施方案中，LiBr-丝片段溶液的稳定性为0至5年。在一个实施方案中，LiBr-丝片段溶液的稳定性为1至2年。在一个实施方案中，LiBr-丝片段溶液的稳定性为1至3年。在一个实施方案中，LiBr-丝片段溶液的稳定性为1至4年。在一个实施方案中，LiBr-丝片段溶液的稳定性为1至5年。在一个实施方案中，LiBr-丝片段溶液的稳定性为2至3年。在一个实施方案中，LiBr-丝片段溶液的稳定性为2至4年。在一个实施方案中，LiBr-丝片段溶液的稳定性为2至5年。在一个实施方案中，LiBr-丝片段溶液的稳定性为3至4年。在一个实施方案中，LiBr-丝片段溶液的稳定性为3至5年。在一个实施方案中，LiBr-丝片段溶液的稳定性为4至5年。
在一个实施方案中，可包含在本公开的组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段组合物的稳定性为10天至6个月。在一个实施方案中，可包含在本公开的组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段组合物的稳定性为6个月至12个月。在一个实施方案中，可包含在本公开的组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段组合物的稳定性为12个月至18个月。在一个实施方案中，可包含在本公开的组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段组合物的稳定性为18个月至24个月。在一个实施方案中，可包含在本公开的组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段组合物的稳定性为24个月至30个月。在一个实施方案中，可包含在本公开的组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段组合物的稳定性为30个月至36个月。在一个实施方案中，可包含在本公开的组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段组合物的稳定性为36个月至48个月。在一个实施方案中，可包含在本公开的组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段组合物的稳定性为48个月至60个月。
在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有1 kDa至250 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有5 kDa至150 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有1 kDa至6 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述的组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有6 kDa至17 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有17 kDa至39 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有39 kDa至80 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有80 kDa至150kDa的平均重均分子量。
在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有1 kDa至250 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有1 kDa至240 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述的组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有1 kDa至230 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有1kDa至220 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述的组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有1 kDa至210 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述的组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有1 kDa至200 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有1kDa至190 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有1 kDa至180 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有1 kDa至170 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有1 kDa至160 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有1 kDa至150 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有1 kDa至140 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有1 kDa至130 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述的组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有1 kDa至120 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述的组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有1 kDa至110 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述的组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有1 kDa至100 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述的组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有1 kDa至90 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述的组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有1 kDa至80 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有1 kDa至70 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述的组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有1 kDa至60 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述的组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有1 kDa至50 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有1 kDa至40 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述的组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有1 kDa至30 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述的组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有1 kDa至20 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述的组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有1 kDa至10 kDa的平均重均分子量。
在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有1至5 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有5至10 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有10至15 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有15至20 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有20至25 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有25至30 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有30至35 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有35至40 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有40至45 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有45至50 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有50至55 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有55至60 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有60至65 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有65至70 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有70至75 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有75至80 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有80至85 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有85至90 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有90至95 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有95至100 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有100至105 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有105至110 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有110至115 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有115至120 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有120至125 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有125至130 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有130至135 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有135至140 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有140至145 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有145至150 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有150至155 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有155至160 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有160至165 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有165至170 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有170至175 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有175至180 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有180至185 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有185至190kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有190至195 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有195至200 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有200至205 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有205至210 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有210至215 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有215至220 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有220至225 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有225至230 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有230至235 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有235至240 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有240至245 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有245至250 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有250至255 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有255至260 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有260至265 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有265至270 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有270至275 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有275至280 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有280至285 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有285至290 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有290至295 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有295至300 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有300至305 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有305至310 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有310至315 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有315至320 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有320至325 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有325至330 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有330至335 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有35至340 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有340至345 kDa的平均重均分子量。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有345至350 kDa的平均重均分子量。
在一个实施方案中，本文所述的组织填充物可以包含丝蛋白，所述丝蛋白包含低分子量丝、中分子量丝和高分子量丝中的一种或多种。
在一个实施方案中，本文所述的组织填充物可以包含丝蛋白，所述丝蛋白包含低分子量丝、中分子量丝和高分子量丝中的一种或多种。在一个实施方案中，本文所述的组织填充物可以包含丝蛋白，所述丝蛋白包含低分子量丝和中分子量丝。在一个实施方案中，本文所述的组织填充物可以包含丝蛋白，所述丝蛋白包含低分子量丝和高分子量丝。在一个实施方案中，本文所述的组织填充物可以包含丝蛋白，所述丝蛋白包含中分子量丝和高分子量丝。在一个实施方案中，本文所述的组织填充物可以包含丝蛋白，所述丝蛋白包含低分子量丝、中分子量丝和高分子量丝。
在一个实施方案中，本文所述的组织填充物可以包含丝蛋白，所述丝蛋白包含低分子量丝和中分子量丝。在一些实施方案中，低分子量丝和中分子量丝之间的w/w比为约99:1至约1:99、约95:5至约5:95、约90:10至约10:90、约75:25至约25:75、约65:35至约35:65、或约55:45至约45:55。在一些实施方案中，低分子量丝和中分子量丝之间的w/w比为约99:1至约55:45、约95:5至约45:55、约90:10至约35:65、约75:25至约15:85、约65:35至约10:90、或约55:45至约1:99。在一些实施方案中，低分子量丝和中分子量丝之间的w/w比为约 99:1、约98:2、约97:3、约96:4、约95:5、约94:6、约93:7、约92:8、约91:9、约90:10、约89:11、约88:12、约87:13、约86:14、约85:15、约84:16、约83:17、约82:18、约81:19、约80:20、约79:21、约78:22、约77:23、约76:24、约75:25、约74:26、约73:27、约72:28、约71:29、约70:30、约69:31、约68:32、约67:33、约66:34、约65:35、约64:36、约63:37、约62:38、约61:39、约60:40、约59:41、约58:42、约57:43、约56:44、约55:45、约54:46、约53:47、约52:48、约51:49、约50:50、约49:51、约48:52、约47:53、约46:54、约45:55、约44:56、约43:57、约42:58、约41:59、约40:60、约39:61、约38:62、约37:63、约36:64、约35:65、约34:66、约33:67、约32:68、约31:69、约30:70、约29:71、约28:72、约27:73、约26:74、约25:75、约24:76、约23:77、约22:78、约21:79、约20:80、约19:81、约18:82、约17:83、约16:84、约15:85、约14:86、约13:87、约12:88、约11:89、约10:90、约9:91、约8:92、约7:93、约6:94、约5:95、约4:96、约3:97、约2:98、或约1:99。在一个实施方案中，低分子量丝和中分子量丝之间的w/w比为约9:1、约8:1、约7:1、约6:1、约5:1、约4:1、约3:1、约2:1、或约1:1。在一个实施方案中，低分子量丝和中分子量丝之间的w/w比为约1:9、约1:8、约1:7、约1:6、约1:5、约1:4、约1:3、约1:2、或约1:1。
在一个实施方案中，本文所述的组织填充物可以包含丝蛋白，所述丝蛋白包含低分子量丝和高分子量丝。在一些实施方案中，低分子量丝和高分子量丝之间的w/w比为约99:1至约1:99、约95:5至约5:95、约90:10至约10:90、约75:25至约25:75、约65:35至约35:65、或约55:45至约45:55。在一些实施方案中，低分子量丝和高分子量丝之间的w/w比为约99:1至约55:45、约95:5至约45:55、约90:10至约35:65、约75:25至约15:85、约65:35至约10:90、或约55:45至约1:99。在一个实施方案中，低分子量丝和高分子量丝之间的w/w比为约99:1、约98:2、约97:3、约96:4、约95:5、约94:6、约93:7、约92:8、约91:9、约90:10、约89:11、约88:12、约87:13、约86:14、约85:15、约84:16、约83:17、约82:18、约81:19、约80:20、约79:21、约78:22、约77:23、约76:24、约75:25、约74:26、约73:27、约72:28、约71:29、约70:30、约69:31、约68:32、约67:33、约66:34、约65:35、约64:36、约63:37、约62:38、约61:39、约60:40、约59:41、约58:42、约57:43、约56:44、约55:45、约54:46、约53:47、约52:48、约51:49、约50:50、约49:51、约48:52、约47:53、约46:54、约45:55、约44:56、约43:57、约42:58、约41:59、约40:60、约39:61、约38:62、约37:63、约36:64、约35:65、约34:66、约33:67、约32:68、约31:69、约30:70、约29:71、约28:72、约27:73、约26:74、约25:75、约24:76、约23:77、约22:78、约21:79、约20:80、约19:81、约18:82、约17:83、约16:84、约15:85、约14:86、约13:87、约12:88、约11:89、约10:90、约9:91、约8:92、约7:93、约6:94、约5:95、约4:96、约3:97、约2:98、或约1:99。
在一个实施方案中，本文所述的组织填充物可以包含丝蛋白，所述丝蛋白包含中分子量丝和高分子量丝。在一些实施方案中，中分子量丝和高分子量丝之间的w/w比为约99:1至约1:99、约95:5至约5:95、约90:10至约10:90、约75:25至约25:75、约65:35至约35:65、或约55:45至约45:55。在一些实施方案中，中分子量丝和高分子量丝之间的w/w比为约99:1至约55:45、约95:5至约45:55、约90:10至约35:65、约75:25至约15:85、约65:35至约10:90、或约55:45至约1:99。在一个实施方案中，中分子量丝和高分子量丝之间的w/w比为约99:1、约98:2、约97:3、约96:4、约95:5、约94:6、约93:7、约92:8、约91:9、约90:10、约89:11、约88:12、约87:13、约86:14、约85:15、约84:16、约83:17、约82:18、约81:19、约80:20、约79:21、约78:22、约77:23、约76:24、约75:25、约74:26、约73:27、约72:28、约71:29、约70:30、约69:31、约68:32、约67:33、约66:34、约65:35、约64:36、约63:37、约62:38、约61:39、约60:40、约59:41、约58:42、约57:43、约56:44、约55:45、约54:46、约53:47、约52:48、约51:49、约50:50、约49:51、约48:52、约47:53、约46:54、约45:55、约44:56、约43:57、约42:58、约41:59、约40:60、约39:61、约38:62、约37:63、约36:64、约35:65、约34:66、约33:67、约32:68、约31:69、约30:70、约29:71、约28:72、约27:73、约26:74、约25:75、约24:76、约23:77、约22:78、约21:79、约20:80、约19:81、约18:82、约17:83、约16:84、约15:85、约14:86、约13:87、约12:88、约11:89、约10:90、约9:91、约8:92、约7:93、约6:94、约5:95、约4:96、约3:97、约2:98、或约1:99。
在一个实施方案中，本文所述的组织填充物可以包含丝蛋白，所述丝蛋白包含低分子量丝、中分子量丝和高分子量丝。在一个实施方案中，低分子量丝、中分子量丝和高分子量丝之间的w/w比为约1:1:8、1:2:7、1:3:6、1:4:5、1:5:4、1:6:3、1:7:2、1:8:1、2:1:7、2:2:6、2:3:5、2:4:4、2:5:3、2:6:2、2:7:1、3:1:6、3:2:5、3:3:4、3:4:3、3:5:2、3:6:1、4:1:5、4:2:4、4:3:3、4:4:2、4:5:1、5:1:4、5:2:3、5:3:2、5:4:1、6:1:3、6:2:2、6:3:1、7:1:2、7:2:1、或8:1:1。在一个实施方案中，低分子量丝、中分子量丝和高分子量丝之间的w/w比为约3:0.1:0.9、3:0.2:0.8、3:0.3:0.7、3:0.4:0.6、3:0.5:0.5、3:0.6:0.4、3:0.7:0.3、3:0.8:0.2或3:0.9:0.1。
在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有约1至约5.0的多分散性。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有约1.5至约3.0的多分散性。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有约1至约1.5的多分散性。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有约1.5至约2.0的多分散性。在一个实施方案中，并入本文所述组织填充物中的基于丝素蛋白的蛋白片段具有约2.0至约2.5的多分散性。在一个实施方案中，具有基于纯丝素蛋白的蛋白片段的本公开的组合物具有2.0至约3.0的多分散性。在一个实施方案中，具有基于纯丝素蛋白的蛋白片段的本公开的组合物具有2.5至约3.0的多分散性。
在一个实施方案中，本文所述的包含SPF的组织填充物具有不可检测的水平的LiBr残留物。在一个实施方案中，在本文所述的包含SPF的组织填充物中LiBr残留物的量为10 ppm至1000 ppm。在一个实施方案中，在本文所述的包含SPF的组织填充物中LiBr残留物的量为10 ppm至300 ppm。在一个实施方案中，在本文所述的包含SPF的组织填充物中LiBr残留物的量小于25 ppm。在一个实施方案中，在本文所述的包含SPF的组织填充物中LiBr残留物的量小于50 ppm。在一个实施方案中，在本文所述的包含SPF的组织填充物中LiBr残留物的量小于75 ppm。在一个实施方案中，在本文所述的包含SPF的组织填充物中LiBr残留物的量小于100 ppm。在一个实施方案中，在本文所述的包含SPF的组织填充物中LiBr残留物的量小于200 ppm。在一个实施方案中，在本文所述的包含SPF的组织填充物中LiBr残留物的量小于300 ppm。在一个实施方案中，在本文所述的包含SPF的组织填充物中LiBr残留物的量小于400 ppm。在一个实施方案中，在本文所述的包含SPF的组织填充物中LiBr残留物的量小于500 ppm。在一个实施方案中，在本文所述的包含SPF的组织填充物中LiBr残留物的量小于600 ppm。在一个实施方案中，在本文所述的包含SPF的组织填充物中LiBr残留物的量小于700 ppm。在一个实施方案中，在本文所述的包含SPF的组织填充物中LiBr残留物的量小于800 ppm。在一个实施方案中，在本文所述的包含SPF的组织填充物中LiBr残留物的量小于900 ppm。在一个实施方案中，在本文所述的包含SPF的组织填充物中LiBr残留物的量小于1000 ppm。在一个实施方案中，在本文所述的包含SPF的组织填充物中LiBr残留物的量为不可检测至500 ppm。在一个实施方案中，在本文所述的包含SPF的组织填充物中LiBr残留物的量为不可检测至450 ppm。在一个实施方案中，在本文所述的包含SPF的组织填充物中的LiBr残留物的量为不可检测至400 ppm。在一个实施方案中，在本文所述的包含SPF的组织填充物中LiBr残留物的量为不可检测至350 ppm。在一个实施方案中，在本文所述的包含SPF的组织填充物中LiBr残留物的量为不可检测至300 ppm。在一个实施方案中，在本文所述的包含SPF的组织填充物中LiBr残留物的量为不可检测至250 ppm。在一个实施方案中，在本文所述的包含SPF的组织填充物中LiBr残留物的量为不可检测至200 ppm。在一个实施方案中，在本文所述的包含SPF的组织填充物中LiBr残留物的量为不可检测至150ppm。在一个实施方案中，在本文所述的包含SPF的组织填充物中LiBr残留物的量为不可检测至100 ppm。在一个实施方案中，在本文所述的包含SPF的组织填充物中LiBr残留物的量为100 ppm至200 ppm。在一个实施方案中，在本文所述的包含SPF的组织填充物中LiBr残留物的量为200 ppm至300 ppm。在一个实施方案中，在本文所述的包含SPF的组织填充物中LiBr残留物的量为300 ppm至400 ppm。在一个实施方案中，在本文所述的包含SPF的组织填充物中LiBr残留物的量为400 ppm至500 ppm。
在一个实施方案中，本文所述的包含具有基于纯丝素蛋白的蛋白片段的SPF的组织填充物具有不可检测的Na2CO3残留物水平。在一个实施方案中，在本文所述的包含SPF的组织填充物中Na2CO3残留物的量小于100 ppm。在一个实施方案中，在本文所述的包含SPF的组织填充物中Na2CO3残留物的量小于200 ppm。在一个实施方案中，在本文所述的包含SPF的组织填充物中Na2CO3残留物的量小于300 ppm。在一个实施方案中，在本文所述的包含SPF的组织填充物中Na2CO3残留物的量小于400 ppm。在一个实施方案中，在本文所述的包含SPF的组织填充物中Na2CO3残留物的量小于500 ppm。在一个实施方案中，在本文所述的包含SPF的组织填充物中Na2CO3残留物的量小于600 ppm。在一个实施方案中，在本文所述的包含SPF的组织填充物中Na2CO3残留物的量小于700 ppm。在一个实施方案中，在本文所述的包含SPF的组织填充物中Na2CO3残留物的量小于800 ppm。在一个实施方案中，在本文所述的包含SPF的组织填充物中Na2CO3残留物的量小于900 ppm。在一个实施方案中，在本文所述的包含SPF的组织填充物中Na2CO3残留物的量小于1000 ppm。在一个实施方案中，在本文所述的包含SPF的组织填充物中Na2CO3残留物的量为不可检测至500 ppm。在一个实施方案中，在本文所述的包含SPF的组织填充物中Na2CO3残留物的量为不可检测至450 ppm。在一个实施方案中，在本文所述的包含SPF的组织填充物中Na2CO3残留物的量为不可检测至400 ppm。在一个实施方案中，在本文所述的包含SPF的组织填充物中Na2CO3残留物的量为不可检测至350 ppm。在一个实施方案中，在本文所述的包含SPF的组织填充物中Na2CO3残留物的量为不可检测至300 ppm。在一个实施方案中，在本文所述的包含SPF的组织填充物中Na2CO3残留物的量为不可检测至250 ppm。在一个实施方案中，在本文所述的包含SPF的组织填充物中Na2CO3残留物的量为不可检测至200 ppm。在一个实施方案中，在本文所述的包含SPF的组织填充物中Na2CO3残留物的量为不可检测至150 ppm。在一个实施方案中，在本文所述的包含SPF的组织填充物中Na2CO3残留物的量为不可检测至100 ppm。在一个实施方案中，在本文所述的包含SPF的组织填充物中Na2CO3残留物的量为100 ppm至200 ppm。在一个实施方案中，在本文所述的包含SPF的组织填充物中Na2CO3残留物的量为200 ppm至300 ppm。在一个实施方案中，在本文所述的包含SPF的组织填充物中Na2CO3残留物的量为300 ppm至400 ppm。在一个实施方案中，在本文所述的包含SPF的组织填充物中Na2CO3残留物的量为400 ppm至500 ppm。
在一个实施方案中，本公开的基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶解度为50至100%。在一个实施方案中，本公开的基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶解度为60至100%。在一个实施方案中，本公开的基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶解度为70至100%。在一个实施方案中，本公开的基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶解度为80至100%。在一个实施方案中，水溶解度为90至100%。在一个实施方案中，本公开的基于丝素蛋白的片段不溶于水溶液。
在一个实施方案中，本公开的基于纯丝素蛋白的蛋白片段在有机溶液中的溶解度为50至100%。在一个实施方案中，本公开的基于纯丝素蛋白的蛋白片段在有机溶液中的溶解度为60至100%。在一个实施方案中，本公开的基于纯丝素蛋白的蛋白片段在有机溶液中的溶解度为70至100%。在一个实施方案中，本公开的基于纯丝素蛋白的蛋白片段在有机溶液中的溶解度为80至100%。在一个实施方案中，本公开的基于纯丝素蛋白的蛋白片段在有机溶液中的溶解度为90至100%。在一个实施方案中，本公开的基于丝素蛋白的片段不溶于有机溶液。
制备用于本公开的组合物中的丝蛋白片段的方法在美国专利申请公开No. 2015/00933340、No. 2015/0094269、No. 2016/0193130、No. 2016/0022560、No. 2016/0022561、No. 2016/0022562、No. 2016/0022563和No. 2016/0222579、No. 2016/0281294以及美国专利No. 9,187,538、No. 9,522,107、No. 9,517,191、No. 9,522,108、No. 9,511,012和No. 9,545,369中进行了说明，其全部内容通过引用并入本文。然而，示例性方法在图1中显示，其是显示用于制备本公开的基于纯丝素蛋白的蛋白片段（SPF）的各种实施方案的流程图。应当理解，并非所有图示说明的步骤都是制造本公开的所有丝溶液所必需的。如图1步骤A所示，茧（热处理或非热处理的）、丝纤维、丝粉末或蜘蛛丝可以用作丝源。如果从家蚕的生丝茧开始，茧可以被切成小片，例如大约相等尺寸的片，步骤B1。然后在步骤C1a中，生丝被提取和漂洗以除去任何丝胶蛋白。这产生了基本上不含丝胶蛋白的生丝。在一个实施方案中，将水加热至84℃至100℃的温度（理想地沸腾），然后将Na2CO3 （碳酸钠）加入沸水中，直到Na2CO3完全溶解。将生丝加入沸水/ Na2CO3 （100℃）中并浸没约15-90分钟，其中煮沸更长的时间导致更小的丝蛋白片段。在一个实施方案中，水体积等于约0.4x生丝重量，Na2CO3体积等于约0.848x生丝重量。在一个实施方案中，水体积等于0.1x生丝重量，并且Na2CO3体积保持在2.12g/L。这在图6和图7中得到证实：在相同体积的提取溶液（即相同体积的水和相同浓度的Na2CO3）中改变丝质量（x轴），实现丝胶蛋白去除（基本上不含丝胶蛋白），如由26-31%的总丝质量损失（y轴）所证实的。随后，将水溶解的Na2CO3溶液排出，并从丝素蛋白纤维中除去过量的水/ Na2CO3 （例如，用手将丝素蛋白提取物环出(ring out)，使用机器的旋转循环(spin cycle)等）。用温水至热水漂洗所得丝素蛋白提取物，以除去任何残留的吸附丝胶蛋白或污染物，通常在约40℃至约80℃的温度范围，改变水的体积至少一次（根据需要重复多次）。所得的丝素蛋白提取物是基本上除去丝胶蛋白的丝素蛋白。在一个实施方案中，用约60℃的温度的水漂洗所得的丝素蛋白提取物。在一个实施方案中，每个周期的漂洗水的体积等于0.1L至0.2L×生丝重量。搅动、转动或循环漂洗水以使漂洗效果最大化是有利的。在漂洗之后，从提取的丝素蛋白纤维中除去过量的水（例如，用手或使用机器将丝素蛋白提取物环出）。或者，本领域技术人员已知的方法如压力、温度或其它试剂或其组合可以用于丝胶蛋白提取的目的。或者，可以直接从虫中除去丝腺（100%不含丝胶蛋白的丝蛋白）。这将导致不含丝胶蛋白的液体丝蛋白，而没有任何蛋白质结构的改变。
然后使提取的丝素蛋白纤维完全干燥。一旦干燥，在步骤C1b中，使用在环境温度至沸腾温度的温度下加入丝素蛋白中的溶剂溶解提取的丝素蛋白。在一个实施方案中，溶剂是溴化锂（LiBr）的溶液（对于LiBr的沸点为140℃）。或者，不将提取的丝素蛋白纤维干燥而是润湿并放置在溶剂中；然后可以改变溶剂浓度以达到与将干燥的丝加入到溶剂中时相似的浓度。LiBr溶剂的最终浓度可为0.1M至9.3M。图8是总结了由不同浓度的溴化锂（LiBr）和不同提取和溶解尺寸溶解的丝的分子量的表。通过改变处理时间和温度以及溶解溶剂的浓度，可以实现提取的丝素蛋白纤维的完全溶解。可以使用其它溶剂，包括但不限于磷酸盐(phosphate phosphoric acid)、硝酸钙、氯化钙溶液或其它无机盐的浓缩水溶液。为了确保完全溶解，应将丝纤维完全浸入已经加热的溶剂溶液中，然后在约60℃至约140℃的温度下保持1-168小时。在一个实施方案中，应将丝纤维完全浸入溶剂溶液中，然后置于温度为约100℃的干燥烘箱中约1小时。
将丝素蛋白提取物加入到LiBr溶液中（或反之亦然）的温度对完全溶解丝素蛋白所需的时间和最终SPF混合物溶液的所得分子量和多分散性有影响。在一个实施方案中，丝溶剂溶液浓度小于或等于20% w/v。此外，在引入或溶解过程中的搅拌可用于促进在不同温度和浓度下的溶解。LiBr溶液的温度将提供对丝蛋白片段混合物分子量和产生的多分散性的控制。在一个实施方案中，较高的温度将更快地溶解丝，提供增强的丝溶液的工艺可扩展性和大规模生产。在一个实施方案中，使用加热到80℃-140℃的温度的LiBr溶液减少了在烘箱中为了实现完全溶解所需的时间。改变时间和在60℃或以上的溶解溶剂的温度将改变和控制由天然丝素蛋白蛋白质的原始分子量形成的SPF混合物溶液的MW和多分散性。
或者，可以将整个茧直接放入溶剂如LiBr中，绕过提取步骤B2。这需要随后使用本领域已知的分离疏水性和亲水性蛋白质的方法，例如柱分离和/或色谱法、离子交换、用盐和/或pH进行化学沉淀、和/或酶消化和过滤或提取，从丝和溶剂溶液中过滤蚕颗粒，并除去丝胶蛋白，所有方法都是常见的实例，并且不限于标准蛋白质分离方法，步骤C2。除去蚕的非热处理茧可以替代地被放入溶剂如LiBr中，绕过提取。上述方法可用于丝胶蛋白分离，其优点是未经热处理的茧将含有显著较少的虫碎片。
在步骤E1，通过用一定体积的水透析溶液，透析可用于从所得溶解的丝素蛋白片段溶液中除去溶解溶剂。在步骤D，透析之前的预过滤有助于从丝和LiBr溶液中除去任何碎片（即，蚕残留物）。在一个实例中，在透析和可能的浓缩（如果需要）之前使用3μm或5μm的过滤器，流速为200-300 mL/min，过滤0.1%至1.0%的丝-LiBr溶液。如上所述，本文公开的方法是使用时间和/或温度将浓度从9.3M LiBr降低到0.1M至9.3M的范围，以促进过滤和下游透析，特别是当考虑创建可规模化的工艺方法时。或者，不使用额外的时间或温度，可以用水稀释9.3M LiBr-丝蛋白片段溶液以促进碎片过滤和透析。在所需时间和温度下溶解并过滤的结果是已知MW和多分散性的半透明无颗粒室温贮存稳定的丝蛋白片段-LiBr溶液。定期更换透析水直到溶剂被除去是有利的（例如，在1小时、4小时后更换水，然后每12小时更换一次，总共更换6次水）。水体积变化的总数可以基于所得的用于丝蛋白溶解和断裂的溶剂的浓度而变化。透析后，可以进一步过滤最终的丝溶液以除去任何残留的碎片（即，蚕残留物）。
或者，切向流过滤（TFF），其是用于分离和纯化生物分子的快速和有效的方法，可用于从所得溶解的丝素蛋白溶液中除去溶剂，步骤E2。TFF提供了高纯度丝蛋白片段水溶液，并使得该方法能够规模化，以便以受控和可重复的方式产生大体积的溶液。丝和LiBr溶液可以在TFF之前稀释（在水或LiBr中，从20%稀释至0.1%丝）。在TFF处理之前如上所述的预过滤可以保持过滤效率，并且潜在地避免由于碎片颗粒的存在而在过滤器表面上产生丝凝胶边界层。在TFF之前的预过滤也有助于从丝和LiBr溶液中除去任何残留的碎片（即，蚕残留物），所述残留的碎片可能导致所得的仅含水的溶液的自发或长期胶凝，步骤D。再循环或单程的TFF可以用于制备0.1%丝至30.0%丝（更优选0.1% -6.0%丝）的水-丝蛋白片段溶液。基于丝蛋白片段混合物在溶液中的所需浓度、分子量和多分散性，可能需要不同截留尺寸的TFF膜。对于改变例如通过改变提取煮沸时间的长度或在溶解溶剂（例如LiBr）中的时间和温度而产生的分子量丝溶液，范围为1-100 kDa的膜可能是必需的。在一个实施方案中，使用TFF5或10 kDa膜来纯化丝蛋白片段混合物溶液并产生最终所需的丝与水之比。同样，TFF单程、TFF和本领域已知的其它方法，例如降膜蒸发器，可以用于在除去溶解溶剂（例如LiBr）之后浓缩溶液（得到的所需浓度为0.1% -30%丝）。这可以用作本领域已知的标准HFIP浓缩方法的替代方法，以产生水基溶液。还可以使用更大孔的膜来滤出小的丝蛋白片段，并产生具有和/或不具有更紧密的多分散性值的更高分子量的丝的溶液。图5是总结本公开的丝蛋白溶液的一些实施方案的分子量的表。丝蛋白溶液的处理条件如下：100℃提取20分钟，室温漂洗，LiBr在60℃烘箱中放置4-6小时。水溶性膜的TFF处理条件如下：100℃提取60分钟，60℃漂洗，100℃LiBr在100℃烘箱中放置60分钟。图12-23进一步显示了提取时间、LiBr溶解条件、TFF处理和所得示例性分子量和多分散性的控制。这些实例不是为了限制，而是为了证明指定特定分子量丝片段溶液的参数的潜力。
使用装备有蒸发光散射检测器（ELSD）的HPLC***进行LiBr和Na2CO3检测的试验。通过对浓度作图的分析物的所得峰面积的线性回归进行计算。本公开的许多配制物的多于一个样品用于样品制备和分析。通常，直接在10 mL容量瓶中称量不同配制物的四个样品。将样品悬浮在5 mL的20 mM甲酸铵（pH3.0）中，并在2-8℃下保持2小时，偶尔摇动以从膜中提取分析物。2小时后，用20 mM甲酸铵（pH3.0）稀释溶液。将容量瓶中的样品溶液转移到HPLC小瓶中，并注入HPLC-ELSD***中以评估碳酸钠和溴化锂。
发现为丝蛋白配制物中的Na2CO3和LiBr的定量开发的分析方法在10-165μg/mL范围内是线性的，其中对于碳酸钠和溴化锂，对于面积，注***度RSD分别为2%和1%，对于保留时间分别为0.38%和0.19%。该分析方法可用于丝蛋白配制物中碳酸钠和溴化锂的定量测定。
最终的丝蛋白片段溶液是纯丝蛋白片段和水，含有PPM至不可检测水平的颗粒碎片和/或处理污染物，包括LiBr和Na2CO3。图3和图4是总结本公开的溶液中LiBr和Na2CO3浓度的表。在图3中，处理条件包括100℃提取60分钟，60℃漂洗，100℃LiBr在100℃烘箱中60分钟。改变TFF条件，包括压差和渗滤体积的数目。在图4中，处理条件包括100℃煮沸60分钟，60℃漂洗，LiBr在60℃烘箱中4-6小时。
可以按照本领域的标准方法，不限于过滤、加热、辐射或电子束，将所述丝片段-水溶液、冻干的丝蛋白片段混合物或任何其它包含SPF的组合物灭菌。预期所述丝蛋白片段混合物由于其较短的蛋白质聚合物长度而将比本领域所述的完整丝蛋白溶液更好地耐受灭菌。另外，由本文所述SPF混合物产生的丝制品可以根据应用的需要进行灭菌。例如，加载有分子以用于具有开放性伤口/切口的医疗应用中的SPF真皮填充物可以用标准方法，例如通过辐射或电子束灭菌。
图2是显示在提取和溶解步骤期间在制备本公开的丝蛋白片段溶液的过程期间可以修改的各种参数的流程图。可以改变选择的方法参数以实现不同的最终溶液特性，这取决于预期的用途，例如分子量和多分散性。应当理解，并非所有示出的步骤都是制造本公开的所有丝溶液所必需的。
在一个实施方案中，用于制备本公开的丝蛋白片段溶液的方法包括由家蚕形成丝茧的片；在水和Na2CO3的溶液中在约100℃下提取所述片约60分钟，其中所述水的体积等于约0.4x生丝重量，并且Na2CO3的量为约0.848x所述片的重量，以形成丝素蛋白提取物；在一定体积的漂洗水中，在约60℃下三次漂洗所述丝素蛋白提取物，每次漂洗约20分钟，其中，每个循环的漂洗水等于约0.2L×所述片的重量；从丝素蛋白提取物中除去过量的水；干燥所述丝素蛋白提取物；将干燥丝素蛋白提取物溶解在LiBr溶液中，其中首先将LiBr溶液加热至约100℃以产生丝和LiBr溶液并保持；将所述丝和LiBr溶液置于约100℃的干燥烘箱中约60分钟以实现所述天然丝蛋白结构的完全溶解和进一步断裂成具有所需分子量和多分散性的混合物；过滤溶液以除去蚕的任何残留碎片；用水稀释该溶液以得到1%的丝溶液；和使用切向流过滤（TFF）从溶液中除去溶剂。在一个实施方案中，使用10 kDa的膜来纯化丝溶液并产生最终所需的丝与水之比。然后TFF可以用于进一步浓缩纯丝溶液至丝比水的浓度为2%。
从原茧到透析的每个工艺步骤是可扩展的，以增加制造效率。目前购买的原料是完整的茧，但是也已经使用了预清洁的茧或非热处理的茧，其中虫的去除留下了极少的碎片。切割和清洁茧是手工过程，然而，为了可扩展性，可以通过例如使用自动化机器结合压缩空气来去除虫和任何微粒，或者使用切割研磨机将茧切割成更小的片，来使得该过程劳动强度更小。目前以小批量进行的提取步骤可以在较大的容器中完成，例如工业洗衣机，其中可以保持60℃至100℃或之间的温度。漂洗步骤也可以在工业洗衣机中完成，消除了手动漂洗循环。丝在LiBr溶液中的溶解可以在除了对流烘箱之外的容器，例如搅拌釜反应器中进行。通过一系列换水透析丝是手动的和时间密集的过程，其可以通过改变某些参数加速，例如在透析前稀释丝溶液。透析过程可以通过使用半自动设备，例如切向流过滤***，来规模进行。
改变提取（即，时间和温度）、LiBr （即，当加入至丝素蛋白提取物，或反之亦然时LiBr溶液的温度）和溶解（即，时间和温度）参数导致溶剂和丝溶液具有不同的粘度、均匀性和颜色。提高提取温度、延长提取时间、在浮出（emersion）时和随着时间的推移在溶解丝时使用更高温度的LiBr溶液和提高在该温度下的时间（例如，在这里所示的烘箱中，或替代的热源）都导致粘度更低和更均匀的溶剂和丝溶液。尽管几乎所有参数都产生可行的丝溶液，但是对于方法的可扩展性，优选允许在少于4至6小时内实现完全溶解的方法。
可以基于在提取步骤期间使用的具体参数，包括提取时间和温度；在溶解步骤中使用的具体参数，包括在将丝浸入溴化锂时的LiBr温度和溶液保持在特定温度的时间；以及在过滤步骤中使用的具体参数来控制所述丝蛋白片段的分子量。通过使用公开的方法控制工艺参数，可以产生具有等于或低于2.5的多分散性的SPF混合物溶液，其具有1 kDa至250 kDa、5 kDa至200 kDa、5 kDa至150 kDa、10 kDa至150 kDa或10 kDa至80 kDa的多种不同分子量。通过改变工艺参数以获得具有不同分子量的丝溶液，可以基于所需的性能要求获得具有等于或小于2.5的所需多分散性的片段混合物最终产物。例如，与较高分子量的SPF配制物相比，含有药物的较低分子量的丝膜可以具有更快的释放速率。另外，可以获得多分散性大于2.5的SPF混合物溶液。此外，可以将具有不同平均分子量和多分散性的两种溶液混合以产生组合溶液。或者，已经直接从虫中除去的液体丝腺（100%不含丝胶蛋白的丝蛋白）可以与本公开的任何SPF混合物溶液组合使用。使用具有折射率检测器（RID）的高压液相色谱（HPLC）测定基于纯丝素蛋白的蛋白片段组合物的分子量。使用Cirrus GPCOnline GPC/SEC软件3.3版本（Agilent）计算多分散性。
在将生丝茧加工成丝溶液的过程中改变参数。改变这些参数影响所得丝溶液的MW。控制的参数包括（i）提取时间和温度，（ii） LiBr的温度，（iii）溶解烘箱的温度，和（iv）溶解时间。如图9-25所示用质谱测定分子量。
进行实验以确定改变提取时间的影响。图9-15是显示这些结果的图，表2-8总结了这些结果。 以下是总结：
-30分钟的丝胶蛋白提取时间导致比60分钟的丝胶蛋白提取时间更大的MW
-MW随在烘箱中的时间而降低
-140℃LiBr和烘箱导致置信区间的低端低于9500 Da的MW
-在1小时和4小时时间点的30分钟提取具有未消化的丝
-在1小时时间点的30分钟提取导致显著高的分子量，置信区间的低端为35,000 Da
-置信区间的高端所达到的MW范围为18000至216000 Da （对于提供具有指定上限的解决方案是重要的）。
Figure 528236DEST_PATH_IMAGE005
Figure 350698DEST_PATH_IMAGE006
Figure 617732DEST_PATH_IMAGE007
Figure 754315DEST_PATH_IMAGE008
Figure 423194DEST_PATH_IMAGE009
Figure 416557DEST_PATH_IMAGE010
Figure 170887DEST_PATH_IMAGE011
进行实验以确定改变提取温度的影响。图16是显示这些结果的图，表9总结了这些结果。以下是总结：
-90℃下的丝胶蛋白提取导致比100℃提取下的丝胶蛋白提取更高的MW
-90℃和100℃都显示随在烘箱中的时间的MW降低。
Figure 836793DEST_PATH_IMAGE012
进行实验以确定当加入丝中时改变溴化锂（LiBr）温度的影响。图17-18是显示这些结果的图，表10-11总结了这些结果。以下是总结：
–对MW或置信区间没有影响（所有CI～10500-6500 Da）
–研究表明，由于大部分物质在室温下是丝，当加入LiBr并开始溶解时，LiBr-丝溶解的温度迅速下降低于原始LiBr温度。
Figure 360178DEST_PATH_IMAGE013
Figure 790022DEST_PATH_IMAGE014
进行实验以确定烘箱/溶解温度的影响。图19-23是显示这些结果的图，表12-16总结了这些结果。以下是总结：
–烘箱温度对60分钟的提取丝的影响小于对30分钟的提取丝的影响。不希望受理论的束缚，据信30分钟的丝在提取过程中降解较少，因此烘箱温度对丝的较大MW、降解较少的部分具有更大的影响。
–对于60℃vs 140℃烘箱，30分钟提取的丝在较高烘箱温度下显示非常显著的较低MW的效果，而60分钟提取的丝具有小得多的效果
–140℃烘箱导致置信区间的低端为～6000 Da。
Figure 31648DEST_PATH_IMAGE015
Figure 244454DEST_PATH_IMAGE016
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在一个实施方案中，本文公开的方法产生具有可在制造期间控制的特性的溶液，所述特性包括但不限于：MW-可以通过改变提取和/或溶解时间和温度（例如LiBr温度）、压力和过滤（例如尺寸排阻色谱法）来改变；结构-去除或裂解丝素蛋白蛋白质聚合物的重链或轻链；纯度-用于改善丝胶蛋白去除的热水漂洗温度或用于改善颗粒去除的过滤能力，所述颗粒去除不利地影响所述丝片段蛋白质混合物溶液的贮存稳定性；颜色-溶液的颜色可以用例如LiBr温度和时间来控制；粘度；透明度；和溶液的稳定性。溶液的所得pH通常为约7，并且可以根据储存要求使用酸或碱来改变。
如本文所述，上述SPF混合物溶液可用于制备含有SPF的组织填充物。
一种用于制备具有约1 kDa至约250 kDa的平均重均分子量的基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液的方法，包括以下步骤：通过将丝源加入沸腾的（100℃）碳酸钠水溶液中约30分钟至约60分钟的处理时间，使丝源脱胶；从所述溶液中除去丝胶蛋白以产生包含不可检测水平的丝胶蛋白的丝素蛋白提取物；从所述丝素蛋白提取物中排出所述溶液；将所述丝素蛋白提取物溶解在溴化锂溶液中，所述溴化锂溶液在将所述丝素蛋白提取物置于所述溴化锂溶液中时具有约60℃至约140℃的起始温度；将丝素蛋白-溴化锂溶液在温度为约140℃的烘箱中保持至少1小时的时间；从所述丝素蛋白提取物中除去溴化锂；和产生丝蛋白片段的水溶液，所述水溶液包含：具有约1 kDa至约250 kDa的平均重均分子量的片段，且其中所述基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液具有约1.5至约3.0的多分散性。所述方法可进一步包括在溶解步骤之前干燥丝素蛋白提取物。如使用高效液相色谱溴化锂测定所测量的，基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液可包含小于300 ppm的溴化锂残留物。如使用高效液相色谱碳酸钠测定所测量的，基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液可包含小于100 ppm的碳酸钠残留物。所述方法可进一步包括将治疗剂添加至基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液中。所述方法可进一步包括将选自抗氧化剂或酶之一的分子添加至基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液中。所述方法可进一步包括将维生素加入基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液中。维生素可以是维生素C或其衍生物。可将基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液冻干。所述方法可进一步包括将α羟基酸加入基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液中。α-羟基酸可选自乙醇酸、乳酸、酒石酸和柠檬酸。该方法可进一步包括将浓度为约0.5%至约10.0%的透明质酸或其盐形式加入至基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液中。该方法可进一步包括添加氧化锌或二氧化钛中的至少一种。可由通过该方法制备的基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液制造膜。所述膜可包含约1.0重量%至约50.0重量%的维生素C或其衍生物。所述膜可具有约2.0重量%至约20.0重量%的水含量。所述膜可包含约30.0重量%至约99.5重量%的基于纯丝素蛋白的蛋白片段。可由通过该方法制备的基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液制备凝胶。所述凝胶可包含约0.5重量%至约20.0重量%的维生素C或其衍生物。所述凝胶可以具有至少2%的丝含量和至少20%的维生素含量。
一种用于制备具有约5 kDa至约150 kDa的平均重均分子量的基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液的方法，包括以下步骤：通过将丝源加入沸腾的（100℃）碳酸钠水溶液中约30分钟至约60分钟的处理时间，使丝源脱胶；从所述溶液中除去丝胶蛋白以产生包含不可检测水平的丝胶蛋白的丝素蛋白提取物；从所述丝素蛋白提取物中排出所述溶液；将所述丝素蛋白提取物溶解在溴化锂溶液中，所述溴化锂溶液在将所述丝素蛋白提取物置于所述溴化锂溶液中时具有约60℃至约140℃的起始温度；将丝素蛋白-溴化锂溶液在温度为约140℃的烘箱中保持至少1小时的时间；从所述丝素蛋白提取物中除去溴化锂；和产生丝蛋白片段的水溶液，所述水溶液包含：具有约5 kDa至约150 kDa的平均重均分子量的片段，且其中所述基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液具有约1.5至约3.0的多分散性。所述方法可进一步包括在溶解步骤之前干燥丝素蛋白提取物。如使用高效液相色谱溴化锂测定所测量的，基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液可包含小于300 ppm的溴化锂残留物。如使用高效液相色谱碳酸钠测定所测量的，基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液可包含小于100 ppm的碳酸钠残留物。所述方法可进一步包括将治疗剂添加至基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液中。所述方法可进一步包括将选自抗氧化剂或酶之一的分子添加至基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液中。所述方法可进一步包括将维生素加入基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液中。维生素可以是维生素C或其衍生物。可将基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液冻干。所述方法可进一步包括将α羟基酸加入基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液中。α-羟基酸可选自乙醇酸、乳酸、酒石酸和柠檬酸。该方法可进一步包括将浓度为约0.5%至约10.0%的透明质酸或其盐形式加入至基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液中。该方法可进一步包括添加氧化锌或二氧化钛中的至少一种。可由通过该方法制备的基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液制造膜。所述膜可包含约1.0重量%至约50.0重量%的维生素C或其衍生物。所述膜可具有约2.0重量%至约20.0重量%的水含量。所述膜可包含约30.0重量%至约99.5重量%的基于纯丝素蛋白的蛋白片段。可由通过该方法制备的基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液制备凝胶。所述凝胶可包含约0.5重量%至约20.0重量%的维生素C或其衍生物。所述凝胶可以具有至少2%的丝含量，和至少20%的维生素含量。
一种用于制备具有约6 kDa至约17 kDa的平均重均分子量的基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液的方法，包括以下步骤：通过将丝源加入沸腾的（100℃）碳酸钠水溶液中约30分钟至约60分钟的处理时间，使丝源脱胶；从所述溶液中除去丝胶蛋白以产生包含不可检测水平的丝胶蛋白的丝素蛋白提取物；从所述丝素蛋白提取物中排出所述溶液；将所述丝素蛋白提取物溶解在溴化锂溶液中，所述溴化锂溶液在将所述丝素蛋白提取物置于所述溴化锂溶液中时具有约60℃至约140℃的起始温度；将丝素蛋白-溴化锂溶液在温度为约140℃的烘箱中保持至少1小时的时间；从所述丝素蛋白提取物中除去溴化锂；和产生丝蛋白片段的水溶液，所述水溶液包含：具有约6 kDa至约17 kDa的平均重均分子量的片段，且其中所述基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液具有约1.5至约3.0的多分散性。所述方法可进一步包括在溶解步骤之前干燥丝素蛋白提取物。如使用高效液相色谱溴化锂测定所测量的，基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液可包含小于300 ppm的溴化锂残留物。如使用高效液相色谱碳酸钠测定所测量的，基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液可包含小于100 ppm的碳酸钠残留物。所述方法可进一步包括将治疗剂添加至基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液中。所述方法可进一步包括将选自抗氧化剂或酶之一的分子添加至基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液中。所述方法可进一步包括将维生素加入基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液中。维生素可以是维生素C或其衍生物。可将基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液冻干。所述方法可进一步包括将α羟基酸加入基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液中。α-羟基酸可选自乙醇酸、乳酸、酒石酸和柠檬酸。该方法可进一步包括将浓度为约0.5%至约10.0%的透明质酸或其盐形式加入至基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液中。该方法可进一步包括添加氧化锌或二氧化钛中的至少一种。可由通过该方法制备的基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液制造膜。所述膜可包含约1.0重量%至约50.0重量%的维生素C或其衍生物。所述膜可具有约2.0重量%至约20.0重量%的水含量。所述膜可包含约30.0重量%至约99.5重量%的基于纯丝素蛋白的蛋白片段。可由通过该方法制备的基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液制备凝胶。所述凝胶可包含约0.5重量%至约20.0重量%的维生素C或其衍生物。所述凝胶可以具有至少2%的丝含量，和至少20%的维生素含量。
一种用于制备具有约17 kDa至约39 kDa的平均重均分子量的基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液的方法，包括以下步骤：将丝源加入沸腾的（100℃）碳酸钠水溶液中约30分钟至约60分钟的处理时间以脱胶；从所述溶液中除去丝胶蛋白以产生包含不可检测水平的丝胶蛋白的丝素蛋白提取物；从所述丝素蛋白提取物中排出所述溶液；将所述丝素蛋白提取物溶解在溴化锂溶液中，所述溴化锂溶液在将所述丝素蛋白提取物置于所述溴化锂溶液中时具有约80℃至约140℃的起始温度；将丝素蛋白-溴化锂溶液在温度为约60℃至约100℃的干燥烘箱中保持至少1小时的时间；从所述丝素蛋白提取物中除去溴化锂；和产生基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液，其中所述基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液包含约10 ppm至约300 ppm的溴化锂残留物，其中所述丝蛋白片段的水溶液包含约10 ppm至约100 ppm的碳酸钠残留物，其中所述基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液包含具有约17kDa至约39kDa的平均重均分子量的片段，且其中所述基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液具有约1.5至约3.0的多分散性。所述方法可进一步包括在溶解步骤之前干燥丝素蛋白提取物。如使用高效液相色谱溴化锂测定所测量的，基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液可包含小于300 ppm的溴化锂残留物。如使用高效液相色谱碳酸钠测定所测量的，基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液可包含小于100 ppm的碳酸钠残留物。所述方法可进一步包括将治疗剂添加至基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液中。所述方法可进一步包括将选自抗氧化剂或酶之一的分子添加至基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液中。所述方法可进一步包括将维生素加入基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液中。维生素可以是维生素C或其衍生物。可将基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液冻干。所述方法可进一步包括将α羟基酸加入基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液中。α-羟基酸可选自乙醇酸、乳酸、酒石酸和柠檬酸。该方法可进一步包括将浓度为约0.5%至约10.0%的透明质酸或其盐形式加入至基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液中。该方法可进一步包括添加氧化锌或二氧化钛中的至少一种。
可由通过该方法制备的基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液制备凝胶。所述凝胶可包含约0.5重量%至约20.0重量%的维生素C或其衍生物。所述凝胶可以具有至少2%的丝含量，和至少20%的维生素含量。
根据本文举例说明的方面，公开了一种用于制备具有约39 kDa至约80 kDa的平均重均分子量的基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液的方法，该方法包括以下步骤：将丝源加入沸腾的（100℃）碳酸钠水溶液中约30分钟的处理时间以脱胶；从所述溶液中除去丝胶蛋白以产生包含不可检测水平的丝胶蛋白的丝素蛋白提取物；从所述丝素蛋白提取物中排出所述溶液；将所述丝素蛋白提取物溶解在溴化锂溶液中，所述溴化锂溶液在将所述丝素蛋白提取物置于所述溴化锂溶液中时具有约80℃至约140℃的起始温度；将丝素蛋白-溴化锂溶液在温度为约60℃至约100℃的干燥烘箱中保持至少1小时的时间；从所述丝素蛋白提取物中除去溴化锂；和产生基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液，其中所述基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液包含约10 ppm至约300 ppm的溴化锂残留物，约10 ppm至约100 ppm的碳酸钠残留物，具有约40 kDa至约65 kDa的平均重均分子量的片段，且其中所述基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液具有约1.5至约3.0的多分散性。所述方法可进一步包括在溶解步骤之前干燥丝素蛋白提取物。如使用高效液相色谱溴化锂测定所测量的，基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液可包含小于300 ppm的溴化锂残留物。如使用高效液相色谱碳酸钠测定所测量的，基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液可包含小于100 ppm的碳酸钠残留物。所述方法可进一步包括将治疗剂添加至基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液中。所述方法可进一步包括将选自抗氧化剂或酶之一的分子添加至基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液中。所述方法可进一步包括将维生素加入基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液中。维生素可以是维生素C或其衍生物。可将基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液冻干。所述方法可进一步包括将α羟基酸加入基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液中。α-羟基酸可选自乙醇酸、乳酸、酒石酸和柠檬酸。该方法可进一步包括将浓度为约0.5%至约10.0%的透明质酸或其盐形式加入至基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液中。该方法可进一步包括添加氧化锌或二氧化钛中的至少一种。
可由通过该方法制备的基于纯丝素蛋白的蛋白片段的水溶液制备凝胶。所述凝胶可包含约0.5重量%至约20.0重量%的维生素C或其衍生物。所述凝胶可以具有至少2%的丝含量，和至少20%的维生素含量。
透明质酸和透明质酸凝胶
本发明的可生物降解的聚合物组分是透明质酸盐，也称为透明质酸（HA）。HA由D-葡糖醛酸和N-乙酰基-D-葡糖胺的交替残基组成。这种水溶性聚合物天然存在于几乎所有组织中，尤其是在细胞外基质、眼睛和关节的滑液中。 HA可以以纯的形式商购。小凝胶颗粒HA填充物可用于刺激天然胶原的产生，其被认为是由真皮的机械拉伸和真皮成纤维细胞的活化诱导的。
本发明所得真皮填充物中的HA浓度有助于真皮填充物的硬度和寿命。在一些实施方案中，与具有相对较低浓度的HA的真皮填充物相比，本文所述的所得真皮填充物中增加的HA浓度可增加所得真皮填充物的硬度和/或寿命。
在一些实施方案中，并入本文所述的组织填充物中的HA具有100,000道尔顿或更大、150,000道尔顿或更大、1百万道尔顿或更大、或2百万道尔顿或更大的分子量。在一些实施方案中，并入本文所述的组织填充物中的HA具有100,000道尔顿或更小、150,000道尔顿或更小、1百万道尔顿或更小、或2百万道尔顿或更小的分子量。在一些实施方案中，并入本文所述的组织填充物中的HA具有高分子量（例如，HA分子量为约1 MDa至约4 MDa）。在一些实施方案中，并入本文所述组织填充物中的HA具有低分子量（例如，HA分子量小于约1MDa）。
在一些实施方案中，HA源可以是透明质酸盐，例如透明质酸钠。在一些实施方案中，HA是交联的。交联HA可以配制成各种形状，如膜、凝胶、半凝胶、海绵或微球。在一些实施方案中，交联HA是流体凝胶形式，即它采取其容器的形状。HA凝胶或半凝胶的粘度可以通过加入未缀合的HA和/或透明质酸盐来改变。粘度也可以通过改变SPF-SPF、SPF-HA和/或HA-HA交联的程度来调节，如本文所述。在一些实施方案中，约4%至约12%的HA可被交联为HA-HA或HA-SPF。
在一个实施方案中，本文所述的SPF组合物可以与HA组合以形成组织填充物组合物。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比小于99%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比小于98%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比小于97%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比小于96%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比小于95%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比小于94%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比小于93%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比小于92%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比小于91%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比小于90%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比小于85%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比小于80%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比小于75%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比小于70%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比小于65%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比小于60%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比小于55%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比小于50%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比小于45%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比小于40%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比小于35%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比小于30%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比小于25%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比小于20%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比小于19%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比小于18%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比小于17%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比小于16%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比小于15%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比小于14%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比小于13%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比小于12%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比小于11%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比小于10%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比小于9%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比小于8%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比小于7%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比小于6%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比小于5%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比小于4%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比小于3%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比小于2%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比小于1%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比小于0.9%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比小于0.8%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比小于0.7%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比小于0.6%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比小于0.5%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比小于0.4%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比小于0.3%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比小于0.2%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比小于0.1%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比大于0.1%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比大于0.2%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比大于0.3%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比大于0.4%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比大于0.5%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比大于0.6%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比大于0.7%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比大于0.8%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比大于0.9%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比大于1%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比大于2%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比大于3%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比大于4%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比大于5%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比大于6%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比大于7%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比大于8%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比大于9%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比大于10%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比大于11%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比大于12%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比大于13%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比大于14%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比大于15%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比大于16%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比大于17%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比大于18%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比大于19%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比大于20%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比大于25%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比大于30%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比大于35%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比大于40%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比大于45%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比大于50%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比大于55%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比大于60%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比大于65%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比大于70%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比大于75%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比大于80%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比大于85%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比大于90%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比大于91%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比大于92%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比大于93%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比大于94%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比大于95%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比大于96%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比大于97%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比大于98%。
在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约0.1%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约0.2%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约0.3%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约0.4%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约0.5%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约0.6%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约0.7%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约0.8%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约0.9%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约1%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约2%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约3%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约4%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约5%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约6%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约7%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约8%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约9%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约10%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约11%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约12%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约13%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约14%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约15%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约16%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约17%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约18%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约19%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约20%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约25%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约30%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约35%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约40%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约45%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约50%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约55%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约60%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约65%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约70%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约75%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约80%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约85%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约90%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约91%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约92%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约93%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约94%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约95%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约96%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约97%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约98%。
在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约0.1%至约1%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约0.5%至约1.5%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约1%至约5%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约1.5%至约5.5%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约2%至约6%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约2.5%至约6.5%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约3%至约7%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约3.5%至约7.5%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约4%至约8%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约4.5%至约8.5%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约5%至约9%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约5.5%至约9.5%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约6%至约10%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约6.5%至约10.5%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约7%至约11%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约7.5%至约11.5%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约8%至约12%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约8.5%至约12.5%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约9%至约13%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约9.5%至约13.5%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约10%至约14%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约10.5%至约14.5%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约11%至约15%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约11.5%至约15.5%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约12%至约16%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约12.5%至约16.5%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约13%至约17%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约13.5%至约17.5%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约14%至约18%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约14.5%至约18.5%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约15%至约19%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约15.5%至约19.5%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约16%至约20%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约20%至约30%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约30%至约40%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约40%至约50%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约50%至约60%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约60%至约70%。在一个实施方案中，组织填充物组合物中HA的重量百分比为约80%至约90%。
在一些实施方案中，本文所述的组织填充物组合物中的HA的重量百分比为约1%至约2%、或约1%至约3%、或约1%至约4%、或约1%至约5%、或约1%至约6%、或约1%至约7%、或约1%至约8%、或约1%至约9%、或约1%至约10%、或约1%至约11%、或约1%至约12%、或约1%至约13%、或约1%至约14%、或约1%至约15%、或约1%至约16%、或约1%至约17%、或约1%至约18%、或约1%至约19%、或约1%至约20%、或约1%至约21%、或约1%至约22%、或约1%至约23%、或约1%至约24%、或约1%至约25%、或约1%至约30%、或约1%至约40%、或约1%至约50%、或约1%至约60%、或约1%至约70%、或约1%至约80%、或约1%至约95%；或约10%至约20%、或约10%至约25%、或约10%至约30%、或约10%至约35%、或约10%至约40%、或约10%至约45%、或约10%至约50%、或约10%至约55%、或约10%至约60%、或约10%至约65%、或约10%至约70%、或约10%至约75%、或约10%至约80%、或约10%至约85%、或约10%至约90%、或约10%至约95%。
在一些实施方案中，本文所述的HA可从商业来源获得或可由马链球菌细菌产生。
本文所述的包含HA的组织填充物可表征为它们的体外生物活性和体内生物活性。例如，可以对本文所述的组织填充物的一部分体外测定其细胞毒性、抗酶降解性、可注射性（例如，溶液粘度、注射流速、注射器/针直径）和/或颗粒形态分析。参见，例如，Park等人，J.Eur. Acad. Dermatol. Venerol. (2014) 28:565-568。可以进行体内测定以确定初始形态学模式、总的剩余填充物存在、组织学评价，并且可以包括肉芽肿形成或皮肤不良反应的检查。参见，例如，Park等人，J. Eur. Acad. Dermatol. Venerol. (2014) 28:565-568;和Ramot等人，Toxicology Pathology (2015) 43: 267-271。
胶凝
在一个实施方案中，可以向丝凝胶提供胶凝助剂。在一些实施方案中，胶凝助剂可以是酸、电、混合和/或超声处理。
在一个实施方案中，当制备丝凝胶时，可以将酸加入到本文所述的丝溶液中以帮助促进胶凝。在一个实施方案中，当制备包含中性或碱性分子和/或治疗剂的丝凝胶时，可以添加酸以促进胶凝。在一个实施方案中，当制备丝凝胶时，提高pH （使凝胶更具碱性）增加凝胶的贮存稳定性。在一个实施方案中，当制备丝凝胶时，提高pH （使凝胶更具碱性）使得更大量的酸性分子被加载到凝胶中。
在一个实施方案中，当制备丝凝胶时，可以使电通过本文所述的丝溶液以帮助促进胶凝。
在一个实施方案中，当制备丝凝胶时，可以使用本文所述的丝溶液的混合来帮助促进胶凝。
在一个实施方案中，当制备丝凝胶时，可以使用本文所述的丝溶液的超声处理来帮助促进胶凝。
在一个实施方案中，可以将天然添加剂加入所述丝凝胶中以进一步稳定添加剂。例如，可以使用微量元素如硒或镁或L-甲硫氨酸。此外，可以添加阻光容器（light-blockcontainers）以进一步增加稳定性。
在一些实施方案中，可以使用胶凝促进剂来加速SPF胶凝。在一些实施方案中，SPF溶液可以与纯醇或醇的水溶液以不同的体积比混合，同时通过搅拌、摇动或任何其它形式的搅拌来混合。在一些实施方案中，该醇溶液促进剂可具有一定量的两亲性肽，其作为最终凝胶结果的进一步促进剂加入。通过向***中添加更多或更少的促进剂成分，加速的程度可以适当地提高或降低。
在一些实施方案中，胶凝速率可通过增加用于制备凝胶的溶液中SPF的浓度来提高。为此目的，可以使用各种方法，包括但不限于：用含有吸湿性物质如聚乙二醇的缓冲液透析中间SPF溶液、冻干步骤和/或蒸发步骤。升高的温度也可用作胶凝过程的促进剂。此外，通过包括但不限于直接滴定和气体交换的方法来控制中间丝溶液的pH值可以用于促进胶凝过程。也可以引入选择的离子物质，尤其包括钙和钾，以加速胶凝速率。
在一些实施方案中，通过使用成核剂可以有助于胶凝，所述成核剂包括在SPF中间体中可溶和不溶的有机和无机物质。成核剂可以包括但不限于结合丝分子的肽序列、预先胶凝的丝和难溶性的富含β-折叠的结构。在一些实施方案中，加速胶凝过程的另一种方式是通过引入机械激发，其可以通过剪切装置、超声装置或机械混合器施加。
完成丝溶液胶凝所需的时间可以从数秒到数小时或数天变化，这取决于上述参数的值以及SPF溶液中发现的聚集和组织的初始状态。所添加的促进剂的体积分数可以从总***体积的约0%变化至约99% （即，任一组分可以被添加至大大过量的另一组分或在该间隔内以任何相对浓度添加）。所用SPF溶液的浓度可以为约1% （w/v）至约20% （w/v），以及任何其它合适的范围。可将促进剂加入SPF溶液中或将SPF溶液加入促进剂中。形成的SPF水凝胶可进一步化学或物理交联以获得改变的机械性质。
在一些实施方案中，将促进剂溶液加入SPF溶液中，或反之亦然，SPF溶液具有约1%（w/v）、约2% （w/v）、约3% （w/v）、约4% （w/v）、约5% （w/v）、约6% （w/v）、约7% （w/v）、约8%（w/v）、约9% （w/v）、约10% （w/v）、约12% （w/v）、约15% （w/v）、约18% （w/v）、约20% （w/v）、约25% （w/v）或约30% （w/v）的SPF浓度。在一些实施方案中，将促进剂溶液加入SPF溶液中，或反之亦然，SPF溶液具有至少1% （w/v）、至少2% （w/v）、至少3% （w/v）、至少4% （w/v）、至少5% （w/v）、至少6% （w/v）、至少7% （w/v）、至少8% （w/v）、至少9% （w/v）、至少10% （w/v）、至少12% （w/v）、至少15% （w/v）、至少18% （w/v）、至少20% （w/v）、至少25% （w/v）或至少30% （w/v）的SPF浓度。在一些实施方案中，将促进剂溶液加入SPF溶液中，或反之亦然，SPF溶液具有约1% （w/v）至约5% （w/v），约1% （w/v）至约10% （w/v），约1% （w/v）至约15% （w/v），约1% （w/v）至约20% （w/v），约1% （w/v）至约25% （w/v），约1% （w/v）至约30% （w/v），约5% （w/v）至约10% （w/v），约5% （w/v）至约15% （w/v），约5% （w/v）至约20% （w/v），约5%（w/v）至约25% （w/v），约5% （w/v）至约30% （w/v），约10% （w/v）至约15% （w/v），约10% （w/v）至约20% （w/v），约10% （w/v）至约25% （w/v），或约10% （w/v）至约30% （w/v）的SPF浓度。
凝胶和水凝胶—改性和交联
在一些实施方案中，本发明提供包含一种或多种水凝胶的组合物，所述水凝胶包含一种或多种交联的基质聚合物。如本文所用，术语"交联"是指将各个聚合物分子、大分子和/或单体链连接成更稳定的结构如凝胶的分子间键。因此，交联的基质聚合物具有至少一个分子间键，其将至少一个单独的聚合物分子连接到另一个，其中第一个单独的聚合物分子可以具有与另一个相似或不同的化学性质。本文公开的基质聚合物可以使用二醛和二硫化物交联剂交联，包括但不限于多官能的基于PEG的交联剂、二乙烯基砜、二缩水甘油醚和双环氧化物。SPF和/或HA交联剂的非限制性实例包括二乙烯基砜（DVS）、1,4-丁二醇二缩水甘油醚（BDDE）、UV光、戊二醛、1,2-双（2,3-环氧丙氧基）乙烯（EGDGE）、1,2,7,8-二环氧辛烷（DEO）、双碳二亚胺（BCD）、季戊四醇四缩水甘油醚（PETGE）、己二酰肼（ADH）、双（磺基琥珀酰亚胺基）辛二酸酯（BS）、六亚甲基二胺（HMDA）、1- （2,3-环氧丙基） -2,3-环氧环己烷或其组合。在一些实施方案中，HA交联剂可包括BDDE或DVS。在一些实施方案中，HA和/或SPF交联剂可以是BDDE、DVS、UV光、戊二醛或碳二亚胺，如本文所述。
在一些实施方案中，本文所述的组织填充物可包含残留交联剂。在一些实施方案中，本文所述的组织填充物可仅包含痕量的交联剂，例如不大于约2 ppm，或不大于约1.9ppm，或不大于约1.8 ppm，或不大于约1.7 ppm，或不大于约1.6 ppm，或不大于约1.5 ppm，或不大于约1.4 ppm，或不大于约1.3 ppm，或不大于约1.2 ppm，或不大于约1.1 ppm，或不大于约1.0 ppm，或不大于约0.9 ppm，或不大于约0.8 ppm，或不大于约0.7 ppm，或不大于约0.6 ppm，或不大于约0.5 ppm，或不大于约0.4 ppm，或不大于约0.3 ppm，或不大于约0.2ppm，或不大于约0.1 ppm。在一些实施方案中，本文所述的组织填充物可以含有痕量BDDE，但其浓度不大于约2 ppm，或不大于约1.9 ppm，或不大于约1.8 ppm，或不大于约1.7 ppm，或不大于约1.6 ppm，或不大于约1.5 ppm，或不大于约1.4 ppm，或不大于约1.3 ppm，或不大于约1.2 ppm，或不大于约1.1 ppm，或不大于约1.0 ppm，或不大于约0.9 ppm，或不大于约0.8 ppm，或不大于约0.7 ppm，或不大于约0.6 ppm，或不大于约0.5 ppm，或不大于约0.4ppm，或不大于约0.3 ppm，或不大于约0.2 ppm，或不大于约0.1 ppm。如本领域普通技术人员所理解的，存在于特定组织填充物样品中的残留交联剂的量可以通过气相色谱-质谱测定。
在一些实施方案中，本文所述的组织填充物可包含基质，该基质可包含SPF基质部分和HA基质部分，其中SPF基质部分包含交联和非交联SPF的混合物，HA基质部分包含交联和非交联HA的混合物。
在一些实施方案中，本发明的组织填充物包含连接剂改性的HA。在一些实施方案中，本发明的组织填充物包含连接剂改性的SPF。双官能交联剂可以在两端反应以连接两个不同的HA分子、两个不同的SPF分子或一个HA分子与一个SPF分子。在一些实施方案中，交联剂仅在一端与HA分子结合，留下另一端为侧基。在一些实施方案中，交联剂仅在一端与SPF分子结合，留下另一端为侧基。
如本文所用，改性度（MoD）可定义为（参见例如J. Kablik等人，Dermatol Surg,2009 (35): 302–312）：
总改性度% =%交联+%侧基
为了测定MoD，它也可以定义为（参见例如L. Kenne等人, Carbohydrate Polymers,2013 (91): 410– 418）:
Figure 968511DEST_PATH_IMAGE020
其中n连接的交联剂是连接的交联剂分子的数目，nHA二糖是HA中二糖的数目，nSPF重复单元是SPF中重复单元的数目。这些数值可以使用交联剂、HA和SPF的特征化学位移通过NMR测定。
在一些实施方案中，MoD为约1%至25%、约2%至约20%、或约3.5%至约17.5%。在一些实施方案中，MoD为约1.1%、约1.2%、约1.3%、约1.4%、约1.5%、约1.6%、约1.7%、约1.8%、约1.9%、约2.0%、约2.1%、约2.2%、约2.3%、约2.4%、约2.5%、约2.6%、约2.7%、约2.8%、约2.9%、约3.0%、约3.1%、约3.2%、约3.3%、约3.4%、约3.5%、约3.6%、约3.7%、约3.8%、约3.9%、约4.0%、约4.1%、约4.2%、约4.3%、约4.4%、约4.5%、约4.6%、约4.7%、约4.8%、约4.9%、约5.0%、约5.1%、约5.2%、约5.3%、约5.4%、约5.5%、约5.6%、约5.7%、约5.8%、约5.9%、约6.0%、约6.1%、约6.2%、约6.3%、约6.4%、约6.5%、约6.6%、约6.7%、约6.8%、约6.9%、约7.0%、约7.1%、约7.2%、约7.3%、约7.4%、约7.5%、约7.6%、约7.7%、约7.8%、约7.9%、约8.0%、约8.1%、约8.2%、约8.3%、约8.4%、约8.5%、约8.6%、约8.7%、约8.8%、约8.9%、约9.0%、约9.1%、约9.2%、约9.3%、约9.4%、约9.5%、约9.6%、约9.7%、约9.8%、约9.9%、约10.0%、约10.1%、约10.2%、约10.3%、约10.4%、约10.5%、约10.6%、约10.7%、约10.8%、约10.9%、约11.0%、约11.1%、约11.2%、约11.3%、约11.4%、约11.5%、约11.6%、约11.7%、约11.8%、约11.9%、约12.0%、约12.1%、约12.2%、约12.3%、约12.4%、约12.5%、约12.6%、约12.7%、约12.8%、约12.9%、约13.0%、约13.1%、约13.2%、约13.3%、约13.4%、约13.5%、约13.6%、约13.7%、约13.8%、约13.9%、约14.0%、约14.1%、约14.2%、约14.3%、约14.4%、约14.5%、约14.6%、约14.7%、约14.8%、约14.9%、约15.0%、约15.1%、约15.2%、约15.3%、约15.4%、约15.5%、约15.6%、约15.7%、约15.8%、约15.9%、约16.0%、约16.1%、约16.2%、约16.3%、约16.4%、约16.5%、约16.6%、约16.7%、约16.8%、约16.9%、约17.0%、约17.1%、约17.2%、约17.3%、约17.4%、约17.5%、约17.6%、约17.7%、约17.8%、约17.9%、约18.0%、约18.1%、约18.2%、约18.3%、约18.4%、约18.5%、约18.6%、约18.7%、约18.8%、约18.9%、约19.0%、约19.1%、约19.2%、约19.3%、约19.4%、约19.5%、约19.6%、约19.7%、约19.8%、约19.9%、或约20.0%.
在一些实施方案中，本发明的组织填充物包含交联SPF。在一些实施方案中，本发明的组织填充物包含交联HA。SPF片段可以与另一个SPF片段或HA交联。SPF-SPF、SPF-HA和HA-HA交联物质可以通过使用各种长度，包括零长度的交联剂获得。
在一些实施方案中，本文所述的组织填充物可以具有交联HA和/或交联SPF的水凝胶形式提供。交联HA和/或交联SPF （或SPF-HA交联物质）可以具有可测量的交联度。本文所用的术语"交联度"是指相对于交联的聚合物大分子中单体单元的数目，交联单元（或分子或残基）的数目。在一些实施方案中，单体单元是SPF中的氨基酸。在一些实施方案中，单体单元是HA的二糖单体单元。因此，具有4%交联度的交联基质聚合物的组合物是指平均每100个单体单元有四个交联分子。其它参数都相等，交联度越大，凝胶变得越硬。不受本发明任何理论的限制，HA和/或SPF中的交联度可导致所得材料或由其制备的组合物更硬。例如，交联度越高，这样的材料可能在体内存留的时间越长。实际上，不限于任何一种理论，包含交联材料的生物相容性材料将具有不同的生物再吸收、生物吸收和/或生物降解速率，这取决于交联度，其中交联度与生物再吸收、生物吸收和/或生物降解速率成反比。此外，本文所述的组织填充物中的更大的交联可降低此类组织填充物的亲水性和提升能力（liftingcapacity）。
在一个非限制性的实例中，交联度为约5%的交联SPF对于每100个单体单元，例如交联SPF中的氨基酸，具有约5个交联部分。
交联度的非限制性实例包括约1%至约15%、或约2%至约14%、或约1%至约2%、约1.5%至约2.5%、或约2%至约3%、或约2.5%至约3.5%、或约3%至约4%、或约3.5%至约4.5%、或约4%至约5%、或约4.5%至约5.5%、或约5%至约6%、或约5.5%至约6.5%、或约6%至约7%、或约6.5%至约7.5%、或约7%至约8%、或约7.5%至约8.5%、或约8%至约9%、或约8.5%至约9.5%、或约9%至约10%、或约9.5%至约10.5%、或约10%至约11%、或约10.5%至约11.5%、或约11%至约12%、或约11.5%至约12.5%、或约12%至约13%、或约12.5%至约13.5%、或约13%至约14%、或约13.5%至约14.5%、或约14%至约15%。
在一些实施方案中，交联度为至少1%。在一些实施方案中，交联度为至少2%。在一些实施方案中，交联度为至少3%。在一些实施方案中，交联度为至少4%。在一些实施方案中，交联度为至少5%。在一些实施方案中，交联度为至少6%。在一些实施方案中，交联度为至少7%。在一些实施方案中，交联度为至少8%。在一些实施方案中，交联度为至少9%。在一些实施方案中，交联度为至少10%。在一些实施方案中，交联度为至少11%。在一些实施方案中，交联度为至少12%。在一些实施方案中，交联度为至少13%。在一些实施方案中，交联度为至少14%。在一些实施方案中，交联度为至少15%。
在一些实施方案中，本发明的组合物包含交联SPF，其中交联度为至少1%、至少2%、至少3%、至少4%、至少5%、至少6%、至少7%、至少8%、至少9%、至少10%、至少11%、至少12%、至少13%、至少14%、或至少15%。在一些实施方案中，组合物包含交联SPF，其中交联度为至多1%、至多2%、至多3%、至多4%、至多5%、至多6%、至多7%、至多8%、至多9%、至多10%、至多11%、至多12%、至多13%、至多14%、或至多15%。在一些实施方案中，组合物包含交联SPF，其中交联度为约1%至约15%、约2%至约11%、约3%至约10%、约1%至约5%、约10%至约15%、约11%至约15%、约6%至约10%、或约6%至约8%、或约1%至约2%、约1.5%至约2.5%、或约2%至约3%、或约2.5%至约3.5%、或约3%至约4%、或约3.5%至约4.5%、或约4%至约5%、或约4.5%至约5.5%、或约5%至约6%、或约5.5%至约6.5%、或约6%至约7%、或约6.5%至约7.5%、或约7%至约8%、或约7.5%至约8.5%、或约8%至约9%、或约8.5%至约9.5%、或约9%至约10%、或约9.5%至约10.5%、或约10%至约11%、或约10.5%至约11.5%、或约11%至约12%、或约11.5%至约12.5%、或约12%至约13%、或约12.5%至约13.5%、或约13%至约14%、或约13.5%至约14.5%、或约14%至约15%。
在一些实施方案中，本发明的组合物包含交联HA，其中交联度为至少1%、至少2%、至少3%、至少4%、至少5%、至少6%、至少7%、至少8%、至少9%、至少10%、至少11%、至少12%、至少13%、至少14%、或至少15%。在一些实施方案中，组合物包含交联HA，其中交联度为至多1%、至多2%、至多3%、至多4%、至多5%、至多6%、至多7%、至多8%、至多9%、至多10%、至多11%、至多12%、至多13%、至多14%、或至多15%。在一些实施方案中，组合物包含交联HA，其中交联度为约1%至约15%、约2%至约11%、约3%至约10%、约1%至约5%、约10%至约15%、约11%至约15%、约6%至约10%、或约6%至约8%、或约1%至约2%、约1.5%至约2.5%、或约2%至约3%、或约2.5%至约3.5%、或约3%至约4%、或约3.5%至约4.5%、或约4%至约5%、或约4.5%至约5.5%、或约5%至约6%、或约5.5%至约6.5%、或约6%至约7%、或约6.5%至约7.5%、或约7%至约8%、或约7.5%至约8.5%、或约8%至约9%、或约8.5%至约9.5%、或约9%至约10%、或约9.5%至约10.5%、或约10%至约11%、或约10.5%至约11.5%、或约11%至约12%、或约11.5%至约12.5%、或约12%至约13%、或约12.5%至约13.5%、或约13%至约14%、或约13.5%至约14.5%、或约14%至约15%。
在一些实施方案中，本发明的组合物包含交联SPF-HA，其中交联度为至少1%、至少2%、至少3%、至少4%、至少5%、至少6%、至少7%、至少8%、至少9%、至少10%、至少11%、至少12%、至少13%、至少14%、或至少15%。在一些实施方案中，组合物包含交联SPF-HA，其中交联度为至多1%、至多2%、至多3%、至多4%、至多5%、至多6%、至多7%、至多8%、至多9%、至多10%、至多11%、至多12%、至多13%、至多14%、或至多15%。在一些实施方案中，组合物包含交联SPF-HA，其中交联度为约1%至约15%、约2%至约11%、约3%至约10%、约1%至约5%、约10%至约15%、约11%至约15%、约6%至约10%、或约6%至约8%、或约1%至约2%、约1.5%至约2.5%、或约2%至约3%、或约2.5%至约3.5%、或约3%至约4%、或约3.5%至约4.5%、或约4%至约5%、或约4.5%至约5.5%、或约5%至约6%、或约5.5%至约6.5%、或约6%至约7%、或约6.5%至约7.5%、或约7%至约8%、或约7.5%至约8.5%、或约8%至约9%、或约8.5%至约9.5%、或约9%至约10%、或约9.5%至约10.5%、或约10%至约11%、或约10.5%至约11.5%、或约11%至约12%、或约11.5%至约12.5%、或约12%至约13%、或约12.5%至约13.5%、或约13%至约14%、或约13.5%至约14.5%、或约14%至约15%。
例如，1摩尔SPF与1摩尔HA可以交联，其中该摩尔HA的分子量可以为约1 kDa至约2M kDa。在一些实施方案中，1摩尔SPF与1百万摩尔HA可以交联，或反之亦然，其中SPF可以是100 Da至350 kDa，由此每摩尔的任何百分比可以是交联的或游离的。将SPF交联至其它SPF的方法可以包括一个或多个步骤。在第一步骤中，将环氧化物如BDDE过量加入SPF溶液中，并使反应进行。环氧化物可以与SPF大分子上的各种基团，例如羧基、胺、醇、硫醇等反应，产生连接基，例如酯、仲胺或叔胺、醚、硫醚等。当BDDE的两个环氧化物都与一个或多个SPF大分子中的官能团反应时，SPF变成交联的。在一个实施方案中，HA的交联可以通过在碱性条件下与BDDE反应，以产生HA和交联剂之间的共价键来进行，如Schanté等人，Carbohydrate Polymers (2011) 85:469-489中所述。改性或交联的程度可根据本领域已知的方法（例如Edsman等人, Dermatol. Surg. (2012) 38: 1170-1179）通过NMR测定。
连接肽的方法是本领域已知的。如本文所述，将单个分离的SPF连接到低聚和/或交联SPF肽中可以通过本领域公知的化学缀合方法来实现，例如通过产生肽键、使用缩合剂和通过使用公知的双官能交联试剂。缀合可以是直接的，其包括不涉及任何***基团的连接，例如直接肽键，或者是间接的，其中连接含有***部分，例如蛋白质或肽，例如血浆白蛋白或其它间隔分子。例如，连接可以通过异双官能或同双官能交联剂，例如碳二亚胺、戊二醛、N-琥珀酰亚胺基3- （2-吡啶基二硫代）丙酸酯（SPDP）及其衍生物、双-马来酰亚胺、4-（N-马来酰亚胺甲基）环己烷-1-甲酸酯等。
交联也可在没有外源交联剂的情况下通过利用被缀合分子上的反应性基团来完成。化学交联肽分子的方法通常是本领域已知的，许多异双官能试剂和同双官能试剂描述于例如美国专利No. 4,355,023、No. 4,657,853、No. 4,676,980、No. 4,925,921和No. 4,970,156以及Immuno Technology Cataloue and Handbook，Pierce Chemical Co.（1989）中，其每一个通过引用并入本文。应当进行这样的缀合，包括交联，以便基本上不影响与其缀合的肽低聚物或实体的所需功能，所述肽低聚物或实体包括治疗剂和能够结合目标物质的部分。
本领域技术人员应当理解，可以使用替代连接剂连接SPF肽，例如使用化学蛋白交联剂。例如同双官能交联剂，如二琥珀酰亚胺基-辛二酰亚胺-二盐酸盐；己二亚胺酸二甲酯-二盐酸盐；1,5,-2,4-二硝基苯或异双官能交联剂如N-羟基琥珀酰亚胺基2,3-二溴丙酸酯；1-乙基-3- [3-二甲基氨基丙基]碳二亚胺盐酸盐；和琥珀酰亚胺基-4- [ N-马来酰亚胺基甲基] -环己烷-1-甲酸酯。
本发明还提供了包含交联至HA的SPF的组合物。SPF至HA的交联可以通过各种方法实现，例如通过环氧化物方法、高碘酸盐方法和/或三氟乙磺酰氯方法。在一些实施方案中，使用环氧化物，例如多官能环氧化物将SPF交联至HA。例如，可以使用双官能环氧化物如1,4-丁二醇二缩水甘油醚（BDDE）。其它多官能环氧化物包括但不限于聚甘油多缩水甘油醚（PGPGPGE）、季戊四醇多缩水甘油醚（PEPGE）和二甘油多缩水甘油醚（DGPGE）。还提供了SPF和HA之间使用活化剂的零长度交联。
SPF与其它大分子，例如HA的交联方法可以包括一个或多个步骤。在第一步骤中，将环氧化物如BDDE过量加入SPF溶液中，并使反应进行。环氧化物可以与SPF大分子上的各种基团，例如羧基、胺、醇、硫醇等反应，产生连接基，例如酯、仲胺或叔胺、醚、硫醚等。当仅有一种环氧化物与SPF反应时，仍有游离的连接至SPF的环氧化物，其可与另一SPF或不同的大分子如HA等交联。试剂的加入顺序可以变化。例如，BDDE可以首先加入HA中，然后加入SPF以形成交联SPF-HA。在一些实施方案中，SPF和HA可以首先混合，然后将BDDE加入到混合物中。在一些实施方案中，将BDDE加入SPF和HA的混合物中得到包含与SPF交联的SPF、与HA交联的HA和与HA交联的SPF的组合物。
在一些实施方案中，交联SPF-HA可以使用三氟乙磺酰氯方法制备，包括一个或多个步骤。在一个步骤中，可以用三氟乙磺酰氯，即2,2,2-三氟乙磺酰氯，或任何其它合适的酰基氯活化交联HA和/或非交联HA。例如将三氟乙磺酰氯逐滴加入到含有交联和/或非交联HA的碱/溶剂溶液中，例如吡啶/丙酮溶液。在一些实施方案中，该三氟乙磺酰氯与交联和/或非交联HA的糖环上的所有四个羟基反应。在任选的步骤中，洗涤得到的HA-三氟乙磺酸酯（tresylate）。在一个步骤中，加入SPF片段，其将与HA-三氟乙磺酸酯反应。
在一些实施方案中，三氟乙磺酰氯方法可以用于将SPF直接连接至交联和/或非交联HA。在其它实施方案中，三氟乙磺酰氯方法可以用来通过间隔物，例如6-氨基-1-己醇将SPF连接至交联和/或非交联HA。在一些实施方案中，可首先通过三氟乙磺酰基活化和偶联将间隔物偶联到交联或非交联HA。为了将SPF偶联至间隔物，此后重复三氟乙磺酰基活化和偶联。可以使用任何合适的间隔物，即具有至少一些类似于6-氨基-1-己醇的特征，即，用于偶联至HA-三氟乙磺酸酯的伯胺，和用于活化和偶联SPF的反应性基团，例如羟基的间隔物。
在一些实施方案中，三氟乙磺酰氯不与HA交联。然而，用于三氟乙磺酰氯方法的HA基质可以是交联的以获得额外的稳定性。交联可以例如通过使用多官能环氧化物如BDDE来实现，如上所述。交联可以在肽偶联之前或之后进行。
三氟乙磺酰氯方法优于其它固定方法，包括在非常温和的条件下有效偶联，在活化和偶联过程中没有副反应，并且RGD肽可以直接结合至HA载体的碳原子。
在各种实施方案中，本文所述的组织填充物可包含基于HA的凝胶和水凝胶。如本文所用的基于HA是指包含交联HA的组合物或材料和包含交联HA加一种或多种其它交联聚合物的组合物。此外，HA可以指透明质酸和任何其透明质酸盐，包括但不限于透明质酸钠（NaHA）、透明质酸钾、透明质酸镁、透明质酸钙及其组合。本说明书中不特别排除使用多于一种生物相容性聚合物。本文所述的组织填充物，其可以是凝胶和水凝胶的形式，可以包含多于一种生物相容性聚合物，例如，除了HA和/或SPF之外的2、3、4、5、6、7、8、9、10种或更多种生物相容性聚合物。合适的生物相容性聚合物包括多糖（例如HA、壳聚糖、硫酸软骨素、藻酸盐、羧甲基纤维素）、聚（乙二醇）、聚（乳酸）、聚（甲基丙烯酸羟乙酯）、聚（甲基丙烯酸甲酯）、除SPF以外的蛋白质（例如弹性蛋白和胶原）。
本文所述的HA可以是分子间交联的。在一些实施方案中，交联稳定了HA的物理性质。在一些实施方案中，本发明提供了使用多官能环氧化物形成稳定的交联HA。如本文所用，术语"多官能"环氧化物是指存在两个或更多个环氧的化学试剂，例如低级脂族环氧化物或它们相应的表卤代醇。多官能环氧化物的实例包括，但不限于，二环氧化物1,4-丁二醇二缩水甘油醚（BDDE）、聚甘油多缩水甘油醚（PGPGPGE）、季戊四醇多缩水甘油醚（PEPGE）和二甘油多缩水甘油醚（DGPGE）。在一个优选的实施方案中，使用二环氧化物BDDE作为交联剂。HA的糖部分通过BDDE的两个环氧化物交联。在其它实施方案中，交联剂包括烷基二环氧化物类如1,3-丁二烯二环氧化物、1,2,7,8-二环氧辛烷、1,5-己二烯二环氧化物等，二缩水甘油醚类如乙二醇二缩水甘油醚、1,4-丁二醇二缩水甘油醚、双酚A二缩水甘油醚等，二乙烯基砜和表氯醇。其中，特别地，可以合适地使用二乙烯基砜、1,4-丁二醇二缩水甘油醚和乙二醇二缩水甘油醚。在本发明中，可以通过适当地组合两种或更多种交联剂使用它们。
在一些实施方案中，HA与HA交联。将HA交联至HA的方法可以包括一个或多个步骤。在第一步骤中，将环氧化物如BDDE过量加入HA溶液中，并使反应进行。环氧化物可以与HA的糖环上的一至四个羟基反应以形成一至四个醚键。替代地，或除了与羟基反应外，环氧化物可与多糖的羧酸反应以形成酯键。当BDDE的两种环氧化物都与一个或多个HA大分子的糖环中的官能团反应时，HA变得交联。
在一些实施方案中，交联剂可以是零长度交联剂，例如通过使用活化剂如1-乙基-3- （3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺（EDC）或BCDI获得的化学键。在一些实施方案中，在N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）、磺基-NHS （或磺酰基-NHS）或4-二甲基氨基吡啶（DMAP）存在下，使零长度交联活化剂与HA反应。在一些实施方案中，本文所述的凝胶和水凝胶通过使至少一种可交联的生物相容性聚合物，例如HA和/或蛋白质，例如SPF蛋白质，或任何其它另外的蛋白质与至少一种交联活化剂反应而形成。
在一些实施方案中，交联SPF-SPF、交联SPF-HA和/或交联HA-HA在施用后，例如在作为皮内、皮下或通常作为真皮填充物注射后，可以具有可变的停留时间。在一些实施方案中，在高碘酸钠方法中，停留时间可以受到影响，这取决于SPF中可用于连接至另一个SPF大分子或HA的反应性基团的数目。SPF中可以连接至HA的反应性基团的实例是伯胺。含有两个反应性基团，例如两个伯胺的SPF本身可以在高碘酸盐方法中交联HA，从而产生更稳定的缀合物。在其它实施方案中，当SPF中只存在一个反应性基团，例如只有一个伯胺，例如在氨基末端，SPF-HA交联减少，产生更可生物降解的基质。
在一些实施方案中，BDDE交联HA在应用后，例如在作为皮内、皮下或通常的真皮填充物注射后，可以具有可变的停留时间。在一些实施方案中，BDDE交联HA可以在真皮组织中任何地方持续一到至少三十天，取决于交联的量。交联HA的可变停留时间可以通过在环氧化物交联过程中引入可水解的键来调节。在一些实施方案中，在较低pH下用环氧化物交联的材料具有较大量的酯键形成，因此可更迅速地水解。
在一个实施方案中，交联剂是零长度交联活化剂。通常，零长度交联活化剂偶联聚合物而不添加任何额外的间隔臂原子，因此零长度交联活化剂不被并入交联的聚合物基质中。合适的零长度交联剂包括碳二亚胺，例如1-乙基-3- （3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺（EDC）和BCDI。非水溶性碳二亚胺类包括二环己基碳二亚胺（DCC）和二异丙基碳二亚胺（DIC），它们也是合适的。
羧酸酯与醇或胺官能团之间的碳二亚胺介导的偶联在环境温度、中性pH和水性条件下容易进行。中性pH可以是例如约6.0至约8.0，如约6.5至约7.5，如约7.0。通常在水中，1-乙基-3- （3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐（EDC）可用于介导羧酸酯和醇之间的酯化或羧酸酯和胺之间的酰胺化。因此，通过利用HA上存在的反应性基团（例如，羧酸酯和醇）形成交联HA。此外，通过利用蛋白质例如SPF蛋白质上的胺基的高反应性，实现蛋白质的赖氨酸侧链与HA的羧酸酯基团之间的酰胺化以形成HA-蛋白质交联的水凝胶。交联剂和未反应的聚合物可以通过透析除去。
在一些实施方案中，EDC与N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）或磺酰基-NHS （磺基-NHS）（本文统称为" NHS "）联合使用。NHS稳定EDC形成的反应性中间体；因此，NHS的添加可以增加EDC的偶联效率。或者，4-二甲基氨基吡啶（DMAP）可以用于催化偶联反应。
在一些实施方案中，本发明的基于HA的组织填充物包含基于交联HA的组合物和基于至少部分交联HA的组合物。本文所用的未交联HA是指真正未交联（例如"游离"）的HA链以及轻度交联的链和其片段，它们通常为可溶的液体形式。
在一些实施方案中，本发明的水凝胶组合物包含HA和SPF之间的至少一些交联。
非限制性的示例性实施方案
在一个实施方案中，本发明涉及生物相容性真皮填充物，其包含具有约1.5至约3.0的多分散性和约1 kDa至约250 kDa的平均重均分子量的丝蛋白片段（SPF）、透明质酸（HA）、水和约0.05%至约0.5%的利多卡因，例如约0.3%的利多卡因；其中一部分至多100% w/w的SPF是交联的，一部分至多100% w/w的HA是交联的，所述交联发生在SPF至SPF、SPF至HA和HA至HA中的一种或多种之间；交联是使用环氧衍生交联剂，例如BDDE的结果，交联度最高达15%。
在一个实施方案中，本发明涉及生物相容性真皮填充物，其包含具有约1.5至约3.0的多分散性和约5 kDa至约150 kDa的平均重均分子量的丝蛋白片段（SPF）、透明质酸（HA）、水和约0.05%至约0.5%的利多卡因，例如约0.3%的利多卡因；其中一部分至多100% w/w的SPF是交联的，一部分至多100% w/w的HA是交联的，所述交联发生在SPF至SPF、SPF至HA和HA至HA中的一种或多种之间；交联是使用环氧衍生交联剂，例如BDDE的结果，交联度最高达15%。
在一个实施方案中，本发明涉及生物相容性真皮填充物，其包含具有约1.5至约3.0的多分散性和约6 kDa至约17 kDa的平均重均分子量的丝蛋白片段（SPF）、透明质酸（HA）、水和约0.05%至约0.5%的利多卡因，例如约0.3%的利多卡因；其中一部分至多100% w/w的SPF是交联的，一部分至多100% w/w的HA是交联的，所述交联发生在SPF至SPF、SPF至HA和HA至HA中的一种或多种之间；交联是使用环氧衍生交联剂，例如BDDE的结果，交联度最高达15%。
在一个实施方案中，本发明涉及生物相容性真皮填充物，其包含具有约1.5至约3.0的多分散性和约17 kDa至约39 kDa的平均重均分子量的丝蛋白片段（SPF）、透明质酸（HA）、水和约0.05%至约0.5%的利多卡因，例如约0.3%的利多卡因；其中一部分至多100% w/w的SPF是交联的，一部分至多100% w/w的HA是交联的，所述交联发生在SPF至SPF、SPF至HA和HA至HA中的一种或多种之间；交联是使用环氧衍生交联剂，例如BDDE的结果，交联度最高达15%。
在一个实施方案中，本发明涉及生物相容性真皮填充物，其包含具有约1.5至约3.0的多分散性和约39 kDa至约80 kDa的平均重均分子量的丝蛋白片段（SPF）、透明质酸（HA）、水和约0.05%至约0.5%的利多卡因，例如约0.3%的利多卡因；其中一部分至多100% w/w的SPF是交联的，一部分至多100% w/w的HA是交联的，所述交联发生在SPF至SPF、SPF至HA和HA至HA中的一种或多种之间；交联是使用环氧衍生交联剂，例如BDDE的结果，交联度最高达15%。
在一个实施方案中，本发明涉及生物相容性真皮填充物，其包含具有约1.5至约3.0的多分散性的低分子量的丝蛋白片段（SPF）、透明质酸（HA）、水和约0.05%至约0.5%的利多卡因，例如约0.3%的利多卡因；其中一部分至多100% w/w的SPF是交联的，一部分至多100% w/w的HA是交联的，所述交联发生在SPF至SPF、SPF至HA和HA至HA中的一种或多种之间；交联是使用环氧衍生交联剂，例如BDDE的结果，交联度最高达15%。
在一个实施方案中，本发明涉及生物相容性真皮填充物，其包含具有约1.5至约3.0的多分散性的中分子量的丝蛋白片段（SPF）、透明质酸（HA）、水和约0.05%至约0.5%的利多卡因，例如约0.3%的利多卡因；其中一部分至多100% w/w的SPF是交联的，一部分至多100% w/w的HA是交联的，所述交联发生在SPF至SPF、SPF至HA和HA至HA中的一种或多种之间；交联是使用环氧衍生交联剂，例如BDDE的结果，交联度最高达15%。
在一个实施方案中，本发明涉及生物相容性真皮填充物，其包含具有约1.5至约3.0的多分散性的低分子量的丝蛋白片段（SPF）、具有约1.5至约3.0的多分散性的中分子量的丝蛋白片段（SPF）、透明质酸（HA）、水和约0.05%至约0.5%的利多卡因，例如约0.3%的利多卡因；其中一部分至多100% w/w的SPF是交联的，一部分至多100% w/w的HA是交联的，所述交联发生在SPF至SPF、SPF至HA和HA至HA中的一种或多种之间；交联是使用环氧衍生交联剂，例如BDDE的结果，交联度最高达15%；其中低分子量SPF和中分子量SPF的w/w比为约3:1。
在一个实施方案中，本发明涉及生物相容性真皮填充物，其包含具有约1.5至约3.0的多分散性的高分子量的丝蛋白片段（SPF）、透明质酸（HA）、水和约0.05%至约0.5%的利多卡因，例如约0.3%的利多卡因；其中一部分至多100% w/w的SPF是交联的，一部分至多100% w/w的HA是交联的，所述交联发生在SPF至SPF、SPF至HA和HA至HA中的一种或多种之间；交联是使用环氧衍生交联剂，例如BDDE的结果，交联度最高达15%。
在一个实施方案中，本发明涉及生物相容性真皮填充物，其包含具有约1.5至约3.0的多分散性和约1 kDa至约250 kDa的平均重均分子量的丝蛋白片段（SPF）、透明质酸（HA）、水和约0.05%至约0.5%的利多卡因，例如约0.3%的利多卡因；其中一部分至多100% w/w的SPF是交联的，一部分至多100% w/w的HA是交联的，所述交联发生在SPF至SPF、SPF至HA和HA至HA中的一种或多种之间；交联包括由于使用活化剂如BCDI而发生的零长度交联，并且交联度最高达15%。
在一个实施方案中，本发明涉及生物相容性真皮填充物，其包含具有约1.5至约3.0的多分散性和约5 kDa至约150 kDa的平均重均分子量的丝蛋白片段（SPF）、透明质酸（HA）、水和约0.05%至约0.5%的利多卡因，例如约0.3%的利多卡因；其中一部分至多100% w/w的SPF是交联的，一部分至多100% w/w的HA是交联的，所述交联发生在SPF至SPF、SPF至HA和HA至HA中的一种或多种之间；交联包括由于使用活化剂如BCDI而发生的零长度交联，并且交联度最高达15%。
在一个实施方案中，本发明涉及生物相容性真皮填充物，其包含具有约1.5至约3.0的多分散性和约6 kDa至约17 kDa的平均重均分子量的丝蛋白片段（SPF）、透明质酸（HA）、水和约0.05%至约0.5%的利多卡因，例如约0.3%的利多卡因；其中一部分至多100% w/w的SPF是交联的，一部分至多100% w/w的HA是交联的，所述交联发生在SPF至SPF、SPF至HA和HA至HA中的一种或多种之间；交联包括由于使用活化剂如BCDI而发生的零长度交联，并且交联度最高达15%。
在一个实施方案中，本发明涉及生物相容性真皮填充物，其包含具有约1.5至约3.0的多分散性和约17 kDa至约39 kDa的平均重均分子量的丝蛋白片段（SPF）、透明质酸（HA）、水和约0.05%至约0.5%的利多卡因，例如约0.3%的利多卡因；其中一部分至多100% w/w的SPF是交联的，一部分至多100% w/w的HA是交联的，所述交联发生在SPF至SPF、SPF至HA和HA至HA中的一种或多种之间；交联包括由于使用活化剂如BCDI而发生的零长度交联，并且交联度最高达15%。
在一个实施方案中，本发明涉及生物相容性真皮填充物，其包含具有约1.5至约3.0的多分散性和约39 kDa至约80 kDa的平均重均分子量的丝蛋白片段（SPF）、透明质酸（HA）、水和约0.05%至约0.5%的利多卡因，例如约0.3%的利多卡因；其中一部分至多100% w/w的SPF是交联的，一部分至多100% w/w的HA是交联的，所述交联发生在SPF至SPF、SPF至HA和HA至HA中的一种或多种之间；交联包括由于使用活化剂如BCDI而发生的零长度交联，并且交联度最高达15%。
在一个实施方案中，本发明涉及生物相容性真皮填充物，其包含具有约1.5至约3.0的多分散性的低分子量的丝蛋白片段（SPF）、透明质酸（HA）、水和约0.05%至约0.5%的利多卡因，例如约0.3%的利多卡因；其中一部分至多100% w/w的SPF是交联的，一部分至多100% w/w的HA是交联的，所述交联发生在SPF至SPF、SPF至HA和HA至HA中的一种或多种之间；交联包括由于使用活化剂如BCDI而发生的零长度交联，并且交联度最高达15%。
在一个实施方案中，本发明涉及生物相容性真皮填充物，其包含具有约1.5至约3.0的多分散性的中分子量的丝蛋白片段（SPF）、透明质酸（HA）、水和约0.05%至约0.5%的利多卡因，例如约0.3%的利多卡因；其中一部分至多100% w/w的SPF是交联的，一部分至多100% w/w的HA是交联的，所述交联发生在SPF至SPF、SPF至HA和HA至HA中的一种或多种之间；交联包括由于使用活化剂如BCDI而发生的零长度交联，并且交联度最高达15%。
在一个实施方案中，本发明涉及生物相容性真皮填充物，其包含具有约1.5至约3.0的多分散性的低分子量的丝蛋白片段（SPF）、具有约1.5至约3.0的多分散性的中分子量的丝蛋白片段（SPF）、透明质酸（HA）、水和约0.05%至约0.5%的利多卡因，例如约0.3%的利多卡因；其中一部分至多100% w/w的SPF是交联的，一部分至多100% w/w的HA是交联的，所述交联发生在SPF至SPF、SPF至HA和HA至HA中的一种或多种之间；交联包括由于使用活化剂如BCDI而发生的零长度交联，并且交联度最高达15%；其中低分子量SPF和中分子量SPF的w/w比为约3:1。
在一个实施方案中，本发明涉及生物相容性真皮填充物，其包含具有约1.5至约3.0的多分散性的高分子量的丝蛋白片段（SPF）、透明质酸（HA）、水和约0.05%至约0.5%的利多卡因，例如约0.3%的利多卡因；其中一部分至多100% w/w的SPF是交联的，一部分至多100% w/w的HA是交联的，所述交联发生在SPF至SPF、SPF至HA和HA至HA中的一种或多种之间；交联包括由于使用活化剂如BCDI而发生的零长度交联，并且交联度最高达15%。
其它试剂
在一些实施方案中，本文所述的组织填充物包含活性剂，例如药物。在一些实施方案中，活性剂可以是酶抑制剂、麻醉剂、药用神经毒素、抗氧化剂、抗感染剂、抗炎剂、血管扩张剂、紫外（UV）光阻挡剂、染料（例如纹身染料、墨水或颜料）、反射剂、激素、免疫抑制剂及其组合中的一种或多种。本文所述的组织填充物可包含活性剂，所述活性剂选自酶抑制剂、麻醉剂、药用神经毒素（例如肉毒杆菌毒素和梭状芽孢杆菌毒素）、抗氧化剂、抗感染剂（例如抗生素）、血管扩张剂、染料（例如纹身墨水或颜料）、反射剂、抗炎剂、紫外（UV）光阻挡剂、染料、激素、免疫抑制剂、以及它们的组合。
在一些实施方案中，免疫抑制剂是雷帕霉素或雷帕霉素样化合物。
在一些实施方案中，活性剂可以是选自青霉素（例如青霉素V、阿莫西林）、红霉素（例如红霉素硬脂酸酯）、林可酰胺（例如克林霉素）和头孢菌素（例如头孢氨苄）及其组合的抗生素。
在一些实施方案中，活性剂可以是血管扩张剂，其选自***、拉贝洛尔、thrazide、二硝酸异山梨酯、四硝酸季戊四醇酯、洋地黄、肼屈嗪、二氮嗪、氨力农、L-精氨酸、硫酸巴美汀、富马酸苄环烷、半琥珀酸苄呋地尔、烟酸苄酯、盐酸丁咯地尔、盐酸布比林、盐酸丁胺、柠檬酸西替地尔、烟酸三甲环己酯、马来酸桂哌齐特、环扁桃酯、二氯乙酸二异丙铵、烟酸乙酯、己酮酸酯、烟酸己酯、酒石酸艾芬地尔、烟酸肌醇酯、盐酸异舒普林、激肽、烟酸甲酯、草酸萘呋胺酯、柠檬酸烟胺乙酯、尼麦特罗、尼波非尼、呋喃糖、烟酰醇、酒石酸烟酰醇、一氧化氮、诺利胺、己酮可可碱（oxpentiflutine）、罂粟碱、帕帕非林（paveryloline）、己基可可碱、过氧亚硝酸盐、吡那地尔、哌拉替考、丙戊茶碱（propentofyltine）、萝巴新、舒洛地尔、teasuprine、盐酸莫西赛利、生育酚烟酸酯、妥拉唑啉、烟酸占替诺、二氮嗪、肼屈嗪、米诺地尔和硝普钠及其组合。
在一些实施方案中，本文所述的组织填充物可以包含浓度为按重量计至少0.01%、或至少0.02%、或至少0.03%、或至少0.04%、或至少0.05%、或至少0.06%、或至少0.07%、或至少0.08%、或至少0.09%、或至少0.1%、或至少0.2%、或至少0.3%、或至少0.4%、或至少0.5%、或至少0.6%、或至少0.7%、或至少0.8%、或至少0.9%、或至少1.0%、或至少1.5%、或至少2.0%、或至少2.5%、或至少3.0%、或至少3.5%、或至少4.0%、或至少4.5%、或至少5.0%、或至少5.5%、或至少6.0%、或至少6.5%、或至少7.0%、或至少7.5%、或至少8.0%、或至少8.5%、或至少9.0%、或至少9.5%、或至少10%、或至少15%、或至少20%、或至少25%、或至少30%、或至少35%、或至少40%、或至少45%、或至少50%的活性剂。
在一些实施方案中，本文所述的组织填充物可以包含浓度为按重量计至多0.01%、或至多0.02%、或至多0.03%、或至多0.04%、或至多0.05%、或至多0.06%、或至多0.07%、或至多0.08%、或至多0.09%、或至多0.1%、或至多0.2%、或至多0.3%、或至多0.4%、或至多0.5%、或至多0.6%、或至多0.7%、或至多0.8%、或至多0.9%、或至多1.0%、或至多1.5%、或至多2.0%、或至多2.5%、或至多3.0%、或至多3.5%、或至多4.0%、或至多4.5%、或至多5.0%、或至多5.5%、或至多6.0%、或至多6.5%、或至多7.0%、或至多7.5%、或至多8.0%、或至多8.5%、或至多9.0%、或至多9.5%、或至多10%、或至多15%、或至多20%、或至多25%、或至多30%、或至多35%、或至多40%、或至多45%、或至多50%的活性剂。
在一些实施方案中，本文所述的组织填充物可以包含浓度为按重量计约 0.01%至约0.1%、或约0.05%至约0.15%、或约0.1%至约0.2%、或约0.15%至约0.25%、或约0.2%至约0.3%、或约0.25%至约0.35%、或约0.3%至约0.4%、或约0.35%至约0.45%、或约0.4%至约0.5%、或约0.45%至约0.55%、或约0.5%至约0.6%、或约0.55%至约0.65%、或约0.6%至约0.7%、或约0.65%至约0.75%、或约0.7%至约0.8%、或约0.75%至约0.85%、或约0.8%至约0.9%、或约0.85%至约0.95%、或约1%至约2%、或约1.5%至约2.5%、或约2%至约3%、或约2.5%至约3.5%、或约3%至约4%、或约3.5%至约4.5%、或约4%至约5%、或约4.5%至约5.5%、或约5%至约6%、或约5.5%至约6.5%、或约6%至约7%、或约6.5%至约7.5%、或约7%至约8%、或约7.5%至约8.5%、或约8%至约9%、或约8.5%至约9.5%、或约9%至约10%、或约10%至约15%、或约15%至约20%、或约20%至约25%、或约25%至约30%、或约30%至约35%、或约35%至约40%、或约40%至约45%、或约45%至约50%的活性剂。
在一些实施方案中，本文所述的组织填充物可以包含浓度为按重量计约0.01%、或约0.02%、或约0.03%、或约0.04%、或约0.05%、或约0.06%、或约0.07%、或约0.08%、或约0.09%、或约0.1%、或约0.2%、或约0.3%、或约0.4%、或约0.5%、或约0.6%、或约0.7%、或约0.8%、或约0.9%、或约1.0%、或约1.5%、或约2.0%、或约2.5%、或约3.0%、或约3.5%、或约4.0%、或约4.5%、或约5.0%、或约5.5%、或约6.0%、或约6.5%、或约7.0%、或约7.5%、或约8.0%、或约8.5%、或约9.0%、或约9.5%、或约10%、或约11%、或约12%、或约13%、或约14%、或约15%、或约16%、或约17%、或约18%、或约19%、或约20%、或约21%、或约22%、或约23%、或约24%、或约25%、或约26%、或约27%、或约28%、或约29%、或约30%、或约31%、或约32%、或约33%、或约34%、或约35%、或约36%、或约37%、或约38%、或约39%、或约40%、或约41%、或约42%、或约43%、或约44%、或约45%、或约46%、或约47%、或约48%、或约49%、或约50%的活性剂。
在一些实施方案中，本文所述的组织填充物包含纤维化抑制剂。在一些实施方案中，本文所述的组织填充物可进一步包含对治疗/处理部位中或周围的病理过程起抑制作用的化合物。在某些方面，活性剂可以选自以下类别的化合物中的一种：抗炎剂（例如***、可的松、氟氢可的松、***、***龙、6α-甲泼尼龙、曲安西龙、倍他米松和阿司匹林）。
在一些实施方案中，活性剂可以但不限于，抗氧化剂和酶。在一个实施方案中，活性剂可包括但不限于硒、泛醌衍生物、基于硫醇的抗氧化剂、含糖的抗氧化剂、多酚、植物提取物、咖啡酸、芹菜素、碧萝芷、白藜芦醇、叶酸、维生素B12、维生素B6、维生素B3、维生素E、维生素C及其衍生物、维生素D、维生素A、虾青素（astaxathin）、叶黄素、番茄红素、必需脂肪酸（ω3和6）、铁、锌、镁、类黄酮（大豆、姜黄素、水飞蓟素、碧萝芷（pycnogenol））、生长因子、芦荟、透明质酸、细胞外基质蛋白、细胞、核酸、生物标志物、生物试剂、氧化锌、过氧化苯甲酰、类视黄醇、钛、已知剂量的变应原（用于致敏处理）、精油包括但不限于柠檬草或迷迭香油、和香料。更广泛地考虑活性剂，活性剂可以包括治疗剂，例如小分子、药物、蛋白质、肽和核酸。
在某些实施方案中，本文所述的组织填充物可包含一种或多种麻醉剂，其量可有效改善或减轻组织填充物注射部位的疼痛或不适。局部***可以选自安布卡因、阿米兰酮、阿米卡林、丁氧普鲁卡因、苯佐卡因、贝氧卡因、联苯胺、布比卡因、丁卡因、氨苯丁烷、丁苯胺、布他乙胺、丁氧卡因、卡他卡因、氯普鲁卡因、可卡乙烯（cocaethylene）、***、环甲卡因、地布卡因、地美喹、二甲氧卡因、地哌冬、双环胺、芽子定(ecgonidine)、芽子碱(ecgonine)、氯乙烷、依替卡因、β-优卡因、尤普罗辛、非那可明、formocaine、己卡因、羟丁卡因、对氨基苯甲酸异丁酯、甲磺酸亮氨卡因、levoxadrol、利多卡因、甲哌卡因、甲丙卡因、偏丁卡因、氯甲烷、桃卡因、纳依卡因、奥他卡因、奥索卡因、奥昔卡因、对乙氧卡因、芬那卡因、苯酚、哌罗卡因、匹多卡因、聚多卡醇、丙吗卡因、丙胺卡因、普鲁卡因、丙泮卡因、丙对卡因、丙哌卡因、丙氧卡因、pseudo***e、吡咯卡因、罗哌卡因、水杨醇、丁卡因、托利卡因、三甲卡因、佐拉敏、以及它们的盐。
在一些实施方案中，本文所述的组织填充物可以包含浓度为按重量计至少0.01%、或至少0.02%、或至少0.03%、或至少0.04%、或至少0.05%、或至少0.06%、或至少0.07%、或至少0.08%、或至少0.09%、或至少0.1%、或至少0.2%、或至少0.3%、或至少0.4%、或至少0.5%、或至少0.6%、或至少0.7%、或至少0.8%、或至少0.9%、或至少1.0%、或至少1.5%、或至少2.0%、或至少2.5%、或至少3.0%、或至少3.5%、或至少4.0%、或至少4.5%、或至少5.0%、或至少5.5%、或至少6.0%、或至少6.5%、或至少7.0%、或至少7.5%、或至少8.0%、或至少8.5%、或至少9.0%、或至少9.5%、或至少10%的利多卡因或上述其他麻醉剂。
在一些实施方案中，本文所述的组织填充物可以包含浓度为按重量计至多0.01%、或至多0.02%、或至多0.03%、或至多0.04%、或至多0.05%、或至多0.06%、或至多0.07%、或至多0.08%、或至多0.09%、或至多0.1%、或至多0.2%、或至多0.3%、或至多0.4%、或至多0.5%、或至多0.6%、或至多0.7%、或至多0.8%、或至多0.9%、或至多1.0%、或至多1.5%、或至多2.0%、或至多2.5%、或至多3.0%、或至多3.5%、或至多4.0%、或至多4.5%、或至多5.0%、或至多5.5%、或至多6.0%、或至多6.5%、或至多7.0%、或至多7.5%、或至多8.0%、或至多8.5%、或至多9.0%、或至多9.5%、或至多10%的利多卡因或上述其他麻醉剂。
在一些实施方案中，本文所述的组织填充物可以包含浓度为按重量计约0.01%、或约0.02%、或约0.03%、或约0.04%、或约0.05%、或约0.06%、或约0.07%、或约0.08%、或约0.09%、或约0.1%、或约0.2%、或约0.3%、或约0.4%、或约0.5%、或约0.6%、或约0.7%、或约0.8%、或约0.9%、或约1.0%、或约1.5%、或约2.0%、或约2.5%、或约3.0%、或约3.5%、或约4.0%、或约4.5%、或约5.0%、或约5.5%、或约6.0%、或约6.5%、或约7.0%、或约7.5%、或约8.0%、或约8.5%、或约9.0%、或约9.5%、或约10%的利多卡因或上述其他麻醉剂。
在一些实施方案中，本文所述的组织填充物可以包含浓度为按重量计约0.01%至约0.02%、或约0.03%至约0.04%、或约0.05%至约0.06%至约0.07%、或约0.08%至约0.09%、或约0.1%至约0.2%、或约0.3%至约0.4%、或约0.5%至约0.6%、或约0.7%至约0.8%、或约0.9%至约1.0%、或约1%至约1.5%、或约1.5%至约2.0%、或约2.0%至约2.5%、或约2.5%至约3.0%、或约3.0%至约3.5%、或约3.5%至约4.0%、或约4.0%至约4.5%、或约4.5%至约5.0%、或约5.0%至约5.5%、或约5.5%至约6.0%、或约6.0%至约6.5%、或约6.5%至约7.0%、或约7.5%至约8.0%、或约8.0%至约8.5%、或约8.5%至约9.0%、或约9.5%至约10%的利多卡因或上述其他麻醉剂。
在一个实施方案中，麻醉剂是利多卡因，例如盐酸利多卡因的形式。本文所述的组织填充物可具有浓度为组合物的约0.1重量%至约5重量%，例如组织填充物的约0.2重量%至约1.0重量%的利多卡因或其它麻醉剂。在一个实施方案中，组织填充物具有组织填充物的约0.3重量% （w/w%）的利多卡因浓度。本文所述的组织填充物中利多卡因的浓度可以是治疗有效的，意味着浓度足以提供治疗益处，例如，改善或减轻组织填充物注射部位的疼痛或不适。
光学性质
当光遇到材料时，它可以以几种方式与材料相互作用。这些相互作用取决于光的性质，即其波长、频率、能量等，以及材料的性质。光通过反射和透射与折射的一种组合与物体相互作用。光学透明材料允许落在其上的很多光被透射，而极少的光被反射。不允许光透射的材料被称为光学不透明，或简单地称为不透明。
在一些实施方案中，本发明提供了本文所述的具有透明性和/或半透明性的组织填充物。透明性（也称为透明性（pellucidity）或透明性（diaphaneity））是允许光穿过材料的物理性质，而半透明性（也称为半透明性（translucence）或半透明性（translucidity））仅允许光漫射地穿过。相反的性质是不透明性。透明材料是清澈的，而半透明材料不能清楚地看透。本文公开的组织填充物可以或可以不表现出光学性质，诸如透明性和/或半透明性。在一些实施方案中，包括用于浅表线（superficial line）填充的方法，具有不透明的水凝胶将是有利的。用于控制组织填充物的光学性质的因素包括但不限于SPF浓度、结晶度和/或水凝胶均匀性。
在一些实施方案中，本文所述的组织填充物是不透明的。
在一个实施方案中，本文所述的组织填充物是光学透明的。在该实施方案的方面中，本文所述的组织填充物透射例如约75%的光、约80%的光、约85%的光、约90%的光、约95%的光、或约100%的光。在该实施方案的其它方面中，本文所述的组织填充物透射例如至少75%的光、至少80%的光、至少85%的光、至少90%的光、或至少95%的光。在该实施方案的其它方面中，本文所述的组织填充物透射例如约75%至约100%的光、约80%至约100%的光、约85%至约100%的光、约90%至约100%的光、或约95%至约100%的光。
在另一个实施方案中，本文所述的组织填充物是光学不透明的。在该实施方案的方面中，本文所述的组织填充物透射例如约0.1%的光、约1%的光、约10%的光、约15%的光、约20%的光、约25%的光、约30%的光、约35%的光、约40%的光、约45%的光、约50%的光、约55%的光、约60%的光、约65%的光、约70%的光、约75%的光、约80%的光、约85%的光、约90%的光、约95%的光、或约100%的光。在该实施方案的其它方面中，本文所述的组织填充物透射例如至多0.1%的光、至多1%的光、至多10%的光、至多15%的光、至多20%的光、至多25%的光、至多30%的光、至多35%的光、至多40%的光、至多45%的光、至多50%的光、至多55%的光、至多60%的光、至多65%的光、至多70%的光、或至多75%的光。在该实施方案的其它方面中，本文所述的组织填充物透射例如至少0.1%的光、至少1%的光、至少10%的光、至少15%的光、至少20%的光、至少25%的光、至少30%的光、至少35%的光、至少40%的光、至少45%的光、至少50%的光、至少55%的光、至少60%的光、至少65%的光、至少70%的光、或至少75%的光。在该实施方案的其它方面中，本文所述的组织填充物透射例如约0.1%至约15%、约0.1%至约20%、约0.1%至约25%、约0.1%至约30%、约0.1%至约35%、约0.1%至约40%、约0.1%至约45%、约0.1%至约50%、约0.1%至约55%、约0.1%至约60%、约0.1%至约65%、约0.1%至约70%、约0.1%至约75%、约1%至约15%、约1%至约20%、约1%至约25%、约1%至约30%、约1%至约35%、约1%至约40%、约1%至约45%、约1%至约50%、约1%至约55%、约1%至约60%、约1%至约65%、约1%至约70%、约1%至约75%、约10%至约20%、约10%至约25%、约10%至约30%、约10%至约35%、约10%至约40%、约10%至约45%、约10%至约50%、约10%至约55%、约10%至约60%、约10%至约65%、约10%至约70%、约10%至约75%、约25%至约35%、约25%至约40%、约25%至约45%、约25%至约50%、约25%至约55%、约25%至约60%、约25%至约65%、约25%至约70%、或约25%至约75%的光。
在一些实施方案中，本文所述的组织填充物是光学半透明的。在该实施方案的方面中，本文所述的组织填充物漫透射例如约75%的光、约80%的光、约85%的光、约90%的光、约95%的光、或约100%的光。在这些实施方案的其它方面中，组织填充物漫透射例如至少0.1%的光、至少1%的光、至少5%的光、至少10%的光、至少15%的光、至少20%的光、至少25%的光、至少30%的光、至少35%的光、至少40%的光、至少45%的光、至少50%的光、至少55%的光、至少60%的光、至少65%的光、至少70%的光、 75%的光、至少80%的光、至少85%的光、至少90%的光、 或至少95%的光。在这些实施方案的其它方面中，组织填充物漫透射例如至多0.1%的光、至多1%的光、至多5%的光、至多10%的光、至多15%的光、至多20%的光、至多25%的光、至多30%的光、至多35%的光、至多40%的光、至多45%的光、至多50%的光、至多55%的光、至多60%的光、至多65%的光、至多70%的光、 75%的光、至多80%的光、至多85%的光、至多90%的光、至多95%的光、或至多100%的光。在这些实施方案的其它方面中，组织填充物漫透射例如约0.1%至约100%的光、约1%至约100%的光、约5%至约100%的光、约10%至约100%的光、约15%至约100%的光、约20%至约100%的光、约25%至约100%的光、约30%至约100%的光、约35%至约100%的光、约45%至约100%的光、约50%至约100%的光、约55%至约100%的光、约60%至约100%的光、约65%至约100%的光、约70%至约100%的光、约75%至约100%的光、约80%至约100%的光、约85%至约100%的光、约90%至约100%的光、或约95%至约100%的光。
在一些实施方案中，本文所述的组织填充物可通过其衰减系数来描述，所述衰减系数被定义为材料散射或吸收光的能力的描述。
组织填充物和皮肤性质可影响在递送本领域已知的某些组织填充物后皮肤中不良丁达尔效应事件的表现。具有高硬度和弹性的填充物可以用于矫正面部区域，如鼻唇沟、面颊和下巴，而不用担心面部变色，因为材料被注射到真皮中部和深部区域。然而，当填充物用于更浅的应用，例如用于矫正细纹皱纹，或错误地将填充物过浅地应用于真皮的上部区域时，经常观察到皮肤的蓝色变色。这种现象被认为是丁达尔效应的结果，其导致施用部位的半永久性变色。在一些实施方案中，在施用酶例如透明质酸酶以降解填充材料之后，该效果消失。因此，丁达尔效应在处理浅表细纹皱纹的患者中更常见。丁达尔效应的延长表现，通常只要填充物在皮肤中持续，是不希望的副作用并且是患者关注的原因。
在一些实施方案中，本文所述的组织填充物由于其均匀性和所得不透明性而减轻丁达尔效应。
在一些实施方案中，本文所述的组织填充物不导致丁达尔效应，或不导致由丁达尔效应引起的任何视觉上可感知的蓝色变色。在一些实施方案中，本发明涉及用于改善美学外观的组织填充物和方法，包括向患者的真皮区域施用不显示或显示不显著的丁达尔效应的基本上光学透明的真皮填充物组合物。在注射组织填充物的皮肤部位出现蓝色变色（丁达尔效应）是一些真皮填充物患者经历的显著不良事件。丁达尔效应在处理浅表细纹皱纹的患者中更常见。本发明的实施方案已经被开发，其提供了长效的半透明填充物，其可以被表面注射以处理细纹和皱纹，甚至在相对薄的皮肤区域中，而没有任何由丁达尔效应导致的蓝色变色。细纹或浅表皱纹通常被理解为通常在皮肤最薄（即，皮肤具有小于1 mm的真皮厚度）的面部区域（前额、外眦、唇红缘/口周线）中发现的皮肤中的那些皱纹或皱褶。在前额上，正常皮肤的平均真皮厚度为约0.95 mm，有皱纹的皮肤的平均真皮厚度为约0.81 mm。外眦周围的真皮甚至更薄（例如，正常皮肤约0.61 mm，有皱纹的皮肤约0.41 mm）。30或32号针（通常用于细线凝胶施用的针）的平均外径为约0.30至约0.24 mm。
在一个实施方案中，本文公开的组织填充物是光学不透明的。在该实施方案的方面中，本文公开的组织填充物透射例如约5%的光、约10%的光、约15%的光、约20%的光、约25%的光、约30%的光、约35%的光、约40%的光、约45%的光、约50%的光、约55%的光、约60%的光、约65%的光、或约70%的光。在该实施方案的其它方面中，本文公开的组织填充物透射例如至多5%的光、至多10%的光、至多15%的光、至多20%的光、至多25%的光、至多30%的光、至多35%的光、至多40%的光、至多45%的光、至多50%的光、至多55%的光、至多60%的光、至多65%的光、至多70%的光、或至多75%的光。在该实施方案的其它方面中，本文公开的组织填充物透射例如约5%至约15%、约5%至约20%、约5%至约25%、约5%至约30%、约5%至约35%、约5%至约40%、约5%至约45%、约5%至约50%、约5%至约55%、约5%至约60%、约5%至约65%、约5%至约70%、约5%至约75%、约15%至约20%、约15%至约25%、约15%至约30%、约15%至约35%、约15%至约40%、约15%至约45%、约15%至约50%、约15%至约55%、约15%至约60%、约15%至约65%、约15%至约70%、约15%至约75%、约25%至约35%、约25%至约40%、约25%至约45%、约25%至约50%、约25%至约55%、约25%至约60%、约25%至约65%、约25%至约70%、或约25%至约75%的光。
在一些实施方案中，本文公开的组织填充物表现出例如约5%、约10%、约15%、约20%、约25%、约30%、约35%、约40%、约45%、约50%、约55%、约60%、约65%、约70%、约75%、约80%、约85%、约90%、约95%、约100%的丁达尔化降低。在这些实施方案的其他方面，本文公开的组织填充物表现出例如至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少100%的丁达尔化降低。在这些实施方案的其他方面，本文公开的组织填充物表现出例如约20%至约100%、约50%至约100%、约70%至约100%、约15%至约35%、约20%至约40%、约25%至约45%、约30%至约50%、约35%至约55%、约40%至约60%、约45%至约65%、约50%至约70%、约55%至约75%、约60%至约80%、约65%至约85%、约70%至约90%、约75%至约95%、或约80%至约100%的丁达尔化降低。
水含量
在一个实施方案中，本文所述的组织填充物可包含水。例如，本文所述的一些组织填充物可以是凝胶，例如水凝胶，并且可以包含吸收、截留或以其他方式设置在其中的水。
在一个实施方案中，本公开的组织填充物中的水含量重量百分比为1%至95%。在一个实施方案中，本文所述的组织填充物中的水含量重量百分比为至少1%、或至少2%、或至少3%、或至少4%、或至少5%、或至少6%、或至少7%、或至少8%、或至少9%、或至少10%、或至少11%、或至少12%、或至少13%、或至少14%、或至少15%、或至少16%、或至少17%、或至少18%、或至少19%、或至少20%、或至少21%、或至少22%、或至少23%、或至少24%、或至少25%、或至少26%、或至少27%、或至少28%、或至少29%、或至少30%、或至少31%、或至少32%、或至少33%、或至少34%、或至少35%、或至少36%、或至少37%、或至少38%、或至少39%、或至少40%、或至少41%、或至少42%、或至少43%、或至少44%、或至少45%、或至少46%、或至少47%、或至少48%、或至少49%、或至少50%、或至少51%、或至少52%、或至少53%、或至少54%、或至少55%、或至少56%、或至少57%、或至少58%、或至少59%、或至少60%、或至少61%、或至少62%、或至少63%、或至少64%、或至少65%、或至少66%、或至少67%、或至少68%、或至少69%、或至少70%、或至少71%、或至少72%、或至少73%、或至少74%、或至少75%、或至少76%、或至少77%、或至少78%、或至少79%、或至少80%、或至少81%、或至少82%、或至少83%、或至少84%、或至少85%、或至少86%、或至少87%、或至少88%、或至少89%、或至少90%、或至少91%、或至少92%、或至少93%、或至少94%、或至少95%。
在一个实施方案中，本文所述的组织填充物中的水含量重量百分比为至多1%、或至多2%、或至多3%、或至多4%、或至多5%、或至多6%、或至多7%、或至多8%、或至多9%、或至多10%、或至多11%、或至多12%、或至多13%、或至多14%、或至多15%、或至多16%、或至多17%、或至多18%、或至多19%、或至多20%、或至多21%、或至多22%、或至多23%、或至多24%、或至多25%、或至多26%、或至多27%、或至多28%、或至多29%、或至多30%、或至多31%、或至多32%、或至多33%、或至多34%、或至多35%、或至多36%、或至多37%、或至多38%、或至多39%、或至多40%、或至多41%、或至多42%、或至多43%、或至多44%、或至多45%、或至多46%、或至多47%、或至多48%、或至多49%、或至多50%、或至多51%、或至多52%、或至多53%、或至多54%、或至多55%、或至多56%、或至多57%、或至多58%、或至多59%、或至多60%、或至多61%、或至多62%、或至多63%、或至多64%、或至多65%、或至多66%、或至多67%、或至多68%、或至多69%、或至多70%、或至多71%、或至多72%、或至多73%、或至多74%、或至多75%、或至多76%、或至多77%、或至多78%、或至多79%、或至多80%、或至多81%、或至多82%、或至多83%、或至多84%、或至多85%、或至多86%、或至多87%、或至多88%、或至多89%、或至多90%、或至多91%、或至多92%、或至多93%、或至多94%、或至多95%。
在一个实施方案中，本文所述的组织填充物中的水含量重量百分比为1%至2%、或2%至3%、或3%至4%、或4%至5%、或5%至6%、或6%至7%、或7%至8%、或8%至9%、或9%至10%、或10%至11%、或11%至12%、或12%至13%、或13%至14%、或14%至15%、或15%至16%、或16% or 17%、或17%至18%、或18%至19%、或19%至20%、或20%至21%、或21%至22%、或22%至23%、或23%至24%、或24%至25%、或25%至26%、或26%至27%、或27%至28%、或28%至29%、或30%至31%、或31%至32%、或32%至33%、或33%至34%、或34%至35%、或35%至36%、或36%至37%、或37%至38%、或38%至39%、或39%至40%、或40%至41%、或41%至42%、或42%至43%、或43%至44%、或44%至45%、或45%至46%、或46%至47%、或47%至48%、或48%至49%、或49%至50%、或50%至51%、或51%至52%、或52%至53%、或53%至54%、或54%至55%、或55%至56%、或56%至57%、或57%至58%、或58%至59%、或59%至60%、或60%至61%、或61%至62%、或62%至63%、或63%至64%、或64%至65%、或65%至66%、或66%至67%、或67%至68%、或68%至69%、或69%至70%、或70%至71%、或71%至72%、或72%至73%、或73%至74%、或74%至75%、或75%至76%、或76%至77%、或77%至78%、或78%至79%、或79%至80%、或80%至81%、或81%至82%、或82%至83%、或83%至84%、或84%至85%、或85%至86%、或86%至87%、或87%至88%、或88%至89%、或89%至90%、或90%至91%、或91%至92%、或92%至93%、或93%至94%、或94%至95%、或95%至96%、或96%至97%、或97%至98%。
在一个实施方案中，本文所述的组织填充物中的水含量重量百分比为约1%、或约2%、或约3%、或约4%、或约5%、或约6%、或约7%、或约8%、或约9%、或约10%、或约11%、或约12%、或约13%、或约14%、或约15%、或约16%、或约17%、或约18%、或约19%、或约20%、或约21%、或约22%、或约23%、或约24%、或约25%、或约26%、或约27%、或约28%、或约29%、或约30%、或约31%、或约32%、或约33%、或约34%、或约35%、或约36%、或约37%、或约38%、或约39%、或约40%、或约41%、或约42%、或约43%、或约44%、或约45%、或约46%、或约47%、或约48%、或约49%、或约50%、或约51%、或约52%、或约53%、或约54%、或约55%、或约56%、或约57%、或约58%、或约59%、或约60%、或约61%、或约62%、或约63%、或约64%、或约65%、或约66%、或约67%、或约68%、或约69%、或约70%、或约71%、或约72%、或约73%、或约74%、或约75%、或约76%、或约77%、或约78%、或约79%、或约80%、或约81%、或约82%、或约83%、或约84%、或约85%、或约86%、或约87%、或约88%、或约89%、或约90%、或约91%、或约92%、或约93%、或约94%、或约95%。
机械性质
本文所述的组织填充物或其组分可以以多种物理状态提供，这取决于所选择的处理和递送模式。在一些实施方案中，本发明的组织填充物是流体，例如液体。在一些实施方案中，本发明的组织填充物是粘性流体。在一些实施方案中，本发明的组织填充物是固体。在一些实施方案中，本发明的组织填充物是弹性固体。
当检查本文所述的组织填充物时，可以评价多个流变学性质，如表17所示：
Figure 466488DEST_PATH_IMAGE021
。
在一些实施方案中，本发明的组织填充物是粘弹性材料，其表现出弹性和粘性材料的机械性能。在一些实施方案中，本发明的组织填充物可描述为凝胶。用于评估材料的机械或流变性质（例如，粘弹性）的方法是本领域已知的，例如美国专利申请公开No. 2006/0105022和Stocks等人，J. Drugs. Dermatol. (2011) 10:974-980中描述的方法，其全部内容通过引用并入本文。材料的粘弹性可以通过使用动态力学分析来表征，例如通过向样品施加振荡应力并测量所得应变。弹性材料通常表现出同相应力和应变，即，施加应力导致立即的应变。在粘性材料中，应变与施加的应力有90度的相位差。在粘弹性材料中，应变和应力之间的相位差大于0度，但小于90度。在一些实施方案中，本发明的SPF材料的粘弹性可通过复数动态模量G来表征，所述复数动态模量G包括储能模量G' （也称为弹性模量）和损耗模量G" （也称为粘性模量）:
Figure 238135DEST_PATH_IMAGE022
其中i2 = -1，
Figure 126457DEST_PATH_IMAGE023
，且
Figure 8962DEST_PATH_IMAGE024
，σ0是应力的幅度，ε0是应变的幅度，并且δ是相移。
弹性模量G'和损耗模量G"通过使SPF凝胶样品在旋转或剪切流变仪中经受振荡应力测量。将样品置于两个板之间，一个板是固定的，另一个板能够旋转，或者以给定频率振荡。弹性模量G'和损耗模量G"的值是频率相关的。用于测量弹性模量G'和损耗模量G"的频率范围通常为0.1至10 Hz，但不限于此。在一些实施方案中，弹性模量G'和损耗模量G"在1Hz的振荡频率下测量。
在一些实施方案中，本文所述的组织填充物的流变性质，例如G'和G"，可用振荡平行板流变仪测量。可以在各种距离，例如1 mm的板之间的间隙高度处使用各种直径，例如25mm的板。测量可以在各种温度下进行。在一些实施方案中，在25℃的恒定温度下进行测量。在一些实施方案中，测量包括在特定应变值下，例如在2%的恒定应变下，在两个频率值之间，例如从1 Hz至10 Hz的频率扫描。在一些实施方案中，测量包括频率的对数增加，随后是应变扫描，其可以例如在恒定频率下，例如在应变对数增加的情况下为5 Hz，在1%至300%之间。在一些实施方案中，储能模量G'和损耗模量G"可从在特定百分比应变值下，例如在1%应变下的应变扫描获得。
在一些实施方案中，复数模量（即G'和iG"的总和）提供了对本文所述的特定组织填充物的总抗变形性的综合量度。复数模量可以使用流变仪测试，其中可以在两个平行的圆板之间挤压特定的组织填充物（例如凝胶），并且通过以变化的频率旋转一个板来提供可变的旋转应变。
在一些实施方案中，特定组织填充物的特性可通过该组织填充物的弹性百分比来检查，其中弹性百分比等于100×G'/（G' + G"）。
在一些实施方案中，特定组织填充物的特性可通过该组织填充物的恢复系数来检查:
Figure 361446DEST_PATH_IMAGE025
其中：约1的恢复系数是指尽管施加力，但特定组织填充物（例如凝胶）仍保持其结构；大于1的恢复系数是指特定组织填充物（例如凝胶）经历结构破坏；小于1的恢复系数的凝胶经历了增加的结构性能。
不受本发明的任何理论的限制，增加G'导致材料更好地抵抗形状改变的能力的相对增加，并且材料可以被描述为比具有较低G'的材料（例如，凝胶组织填充物）更坚固、更硬或更有弹性。因此，增加G'可以导致材料提供结构支撑和/或体积化的能力的相应增加。
不受本发明任何一种理论的限制，与具有较低G"的材料相比，增加G"导致更粘的材料（例如凝胶）。此外，对于具有较高G"的材料，存在较大的能量损失（作为耗散热）。在一些实施方案中，G'随着交联度的增加而增加。在一些实施方案中，G"随着交联度的增加而增加。在一些实施方案中，G'和G"都随着交联度的增加而增加。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约小于50 Pa至约大于15000 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约50 Pa至约500,000 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约100 Pa至约500,000 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约75 Pa至约150 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约100 Pa至约250 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约150 Pa至约275 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约150 Pa至约500 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约250 Pa至约750 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约375 Pa至约675 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约425 Pa至约850 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约500 Pa至约1000 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约650 Pa至约1050 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约750 Pa至约1250 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约950 Pa至约1500 Pa的G'。
在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少50 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少100 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少150 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少200 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少225 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少250 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少275 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少300 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少325 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少350 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少375 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少400 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少425 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少450 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少475 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少500 Pa的G'。
在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少525 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少550 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少575 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约至少600 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约625 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少650 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少675 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少700 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少725 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少750 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少775 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少800 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少825 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少850 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少875 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少900 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少925Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少950 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少975 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少1000 Pa的G'。
在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少1050 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少1100 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少1150 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少1200 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少1250 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少1300 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少1350 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少1400 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少1450 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少1500 Pa的G'。
在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多50 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多100 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多150 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多200 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多225 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多250 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多275 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多300 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多325 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多350 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多375 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多400 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多425 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多450 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多475 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多500 Pa的G'。
在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多525 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多550 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多575 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约625 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多650 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多675 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多700 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多725 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多750 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多775 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多800 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多825 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多850 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多875 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多900 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多925 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多950 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多975 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多1000 Pa的G'。
在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多1050 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多1100 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多1150 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多1200 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多1250 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多1300 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多1350 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多1400 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多1450 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多1500 Pa的G'。
在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约50 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约100 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约150 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约200 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约225 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约250 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约275 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约300 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约325 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约350 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约375 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约400 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约425 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约450 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约475 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约500 Pa的G'。
在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约525 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约550 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约575 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约600 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约625 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约650 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约675 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约700 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约725 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约750 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约775 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约800 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约825 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约850 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约875 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约900 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约925 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约950 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约975 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约1000 Pa的G'。
在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约1050 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约1100 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约1150 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约1200 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约1250 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约1300 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约1350 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约1400 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约1450 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约1500 Pa的G'。
在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少2000 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少2250 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少2500 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少2750 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少3000 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少3250 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少3500 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少3750 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少4000 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少4250 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少4500 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少4750 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少5000 Pa的G'。
在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少5250 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少5500 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少5750 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约至少6000 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约6250 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少6500 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少6750 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少7000 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少7250 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少7500 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少7750 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少8000 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少8250 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少8500 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少8750 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少9000 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少9250 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少9500 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少9750 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少10000 Pa的G'。
在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少10500 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少11000 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少11500 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少12000 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少12500 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少13000 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少13500 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少14000 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少14500 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少15000 Pa的G'。
在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多2000 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多2250 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多2500 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多2750 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多3000 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多3250 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多3500 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多3750 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多4000 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多4250 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多4500 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多4750 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多5000 Pa的G'。
在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多5250 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多5500 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多5750 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多6000 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约6250 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多6500 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多6750Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多7000 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多7250 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多7500 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多7750 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多8000 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多8250 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多8500 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多8750 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多9000 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多9250 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多9500 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多9750 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多10000 Pa的G'。
在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多10500 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有最多11000 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多11500 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多12000 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多12500 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多13000 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多13500 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多14000 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多14500 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多15000 Pa的G'。
在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约2000 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约2250 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约2500 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约2750 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约3000 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约3250 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约3500 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约3750 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约4000 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约4250 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约4500 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约4750 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约5000 Pa的G'。
在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约5250 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约5500 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约5750 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约6000 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约6250 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约6500 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约6750 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约7000 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约7250 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约7500 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约7750 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约8000 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约8250 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约8500 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约8750 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约9000 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约9250 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约9500 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约9750 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约10000 Pa的G'。
在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约1050 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约1100 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约1150 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约1200 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约1250 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约1300 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约1350 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约1400 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约1450 Pa的G'。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约1500 Pa的G'。
在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约小于5 Pa至约大于200 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约5 Pa至约200 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约5 Pa至约25 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约15 Pa至约35 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约10 Pa至约50Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约15 Pa至约75 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约20 Pa至约85 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约25 Pa至约100 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约35Pa至约125 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约45 Pa至约115 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约75 Pa至约150 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约100 Pa至约175 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约115 Pa至约200 Pa的G"。
在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少5 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少10 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少15 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少20 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少25 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少30 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少35 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少40 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少45 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少50 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少55 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少60 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少65Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少70 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少75 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少80 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少85 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少90 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少95 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少100 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少105 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少110 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少115 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少120 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少125 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少130 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少135 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少140 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少145 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少150 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少155 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少160 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少165Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少170 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少175 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少180 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少185 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少190 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少195 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至少200 Pa的G"。
在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多5 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多10 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多15 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多20 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多25 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多30 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多35 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多40 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多45 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多50 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多55 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多60 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多65Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多70 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多75 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多80 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多85 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多90 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多95 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多100 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多105 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多110 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多115 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多120 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多125 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多130 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多135 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多140 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多145 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多150 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多155 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多160 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多165Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多170 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多175 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多180 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多185 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多190 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多195 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有至多200 Pa的G"。
在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约5 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约10 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约15Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约20 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约25 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约30Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约35 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约40 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约45Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约50 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约55 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约60Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约65 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约70 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约75Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约80 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约85 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约90Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约95 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约100 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约105Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约110 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约115 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约120 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约125 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约130 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约135 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约140 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约145 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约150 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约155 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约160 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约165 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约170 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约175 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约180 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约185 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约190 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约195 Pa的G"。在一些实施方案中，本发明的组织填充物具有约200 Pa的G"。
在一些实施方案中，本文公开的组织填充物表现出动态粘度。粘度是流体对由剪切应力或拉伸应力引起的剪切或流动的阻力。粘度描述了当流体层试图彼此滑动时由分子间摩擦产生的流体的流动内部阻力，并且可以被认为是流体摩擦的量度。流体越不粘稠，其运动的容易程度（流动性）越大。
粘度可以以两种方式定义；动态粘度（μ；有时使用η）或运动粘度（v）。动态粘度，也称为绝对或复数粘度，是当通过流体保持单位分开距离时，以单位速度相对于一个水平面移动另一个水平面所需的每单位面积的切向力。动态粘度的SI物理单位是帕斯卡-秒（Pas），与Nm-2s相同。动态粘度可以表示为τ=μdvx/dz，其中τ=剪切应力，μ=动态粘度，并且dvx/dz是随时间的速度梯度。例如，如果将粘度为一Pa·s的流体置于两个板之间，并且以一帕斯卡的剪切应力侧向推动一个板，则它在一秒内移动等于板之间的层厚度的距离。运动粘度（v）是动态粘度与密度的比率，其为其中不涉及力的量并且定义如下：v =μ/ρ，其中μ是动态粘度，ρ是密度（kg/m3）。运动粘度通常通过玻璃毛细管粘度计测量，SI单位为m2/s。流体的粘度是温度依赖性的，因此动态粘度和运动粘度是参照温度报告的。
在一些实施方案中，本文公开的组织填充物表现出例如至少10 Pa·s、至少20Pa·s、至少30 Pa·s、至少40 Pa·s、至少50 Pa·s、至少60 Pa·s、至少70 Pa·s、至少80Pa·s、至少90 Pa·s、至少100 Pa·s、至少125 Pa·s、至少150 Pa·s、至少175 Pa·s、至少200 Pas、至少225 Pa·s、至少250 Pa·s、至少275 Pa·s、至少300 Pa·s、至少400Pa·s、至少500 Pa·s、至少600 Pa·s、至少700 Pa·s、至少750 Pa·s、至少800 Pa·s、至少900 Pa·s、至少1,000 Pa·s、至少1,100 Pa·s、或至少1,200 Pa·s的动态粘度。在一些实施方案中，本文公开的组织填充物表现出例如至多10 Pa·s、至多20 Pa·s、至多30Pa·s、至多40 Pa·s、至多50 Pa·s、至多60 Pa·s、至多70 Pa·s、至多80 Pa·s、至多90Pa·s、至多100 Pa·s、至多125 Pa·s、至多150 Pa·s、至多175 Pa·s、至多200 Pa·s、至多225 Pa·s、至多250 Pa·s、至多275 Pa·s、至多300 Pa·s、至多400 Pa·s、至多500Pa·s、至多600 Pa·s、至多700 Pa·s、至多750 Pa·s、至多800 Pa·s、至多900 Pa·s、或至多1000 Pa·s的动态粘度。在一些实施方案中，本文公开的组织填充物表现出例如约10 Pa·s至约100 Pa·s、约10 Pa·s至约150 Pa·s、约10 Pa·s至约250 Pa·s、约50Pa·s至约100 Pa·s、约50 Pa·s至约150 Pa·s、约50 Pa·s至约250 Pa·s、约100 Pa·s至约500 Pa·s、约100 Pa·s至约750 Pa·s、约100 Pa·s至约1,000 Pa·s、约100 Pa·s至约1,200 Pa·s、约300 Pa·s至约500 Pa·s、约300 Pa·s至约750 Pa·s、约300 Pa·s至约1,000 Pa·s、或约300 Pa·s至约1,200 Pa·s的动态粘度。
在一个实施方案中，本文所述的组织填充物可基本上在体内保持其G’和/或G”至少1天、或至少2天、或至少3天、或至少4天、或至少5天、或至少6天、或至少1周、或至少2周、或至少3周、或至少1个月、或至少2个月、或至少3个月、或至少4个月、或至少5个月、或至少6个月、或至少7个月、或至少8个月、或至少9个月、或至少10个月、或至少11个月、或至少1年。
在一个实施方案中，本文所述的组织填充物可基本上在体内保持其G’和/或G”至多1天、或至多2天、或至多3天、或至多4天、或至多5天、或至多6天、或至多1周、或至多2周、或至多3周、或至多1个月、或至多2个月、或至多3个月、或至多4个月、或至多5个月、或至多6个月、或至多7个月、或至多8个月、或至多9个月、或至多10个月、或至多11个月、或至多1年。
在一个实施方案中，本文所述的组织填充物可基本上在体内保持其G’和/或G”约1天、或约2天、或约3天、或约4天、或约5天、或约6天、或约1周、或约2周、或约3周、或约1个月、或约2个月、或约3个月、或约4个月、或约5个月、或约6个月、或约7个月、或约8个月、或约9个月、或约10个月、或约11个月、或约1年。
在一个实施方案中，本文所述的组织填充物可基本上在体内保持其弹至少1 天、或至少2天、或至少3天、或至少4天、或至少5天、或至少6天、或至少1周、或至少2周、或至少3周、或至少1个月、或至少2个月、或至少3个月、或至少4个月、或至少5个月、或至少6个月、或至少7个月、或至少8个月、或至少9个月、或至少10个月、或至少11个月、或至少1年。
在一个实施方案中，本文所述的组织填充物可基本上在体内保持其弹性至多1天、或至多2天、或至多3天、或至多4天、或至多5天、或至多6天、或至多1周、或至多2周、或至多3周、或至多1个月、或至多2个月、或至多3个月、或至多4个月、或至多5个月、或至多6个月、或至多7个月、或至多8个月、或至多9个月、或至多10个月、或至多11个月、或至多1年。
在一个实施方案中，本文所述的组织填充物可基本上在体内保持其弹性约1 天、或约2天，或约3天，或约4天，或约5天，或约6天，或约1周，或约2周，或约3周，或约1个月，或约2个月，或约3个月，或约4个月，或约5个月, 或约6个月，或约7个月，或约8个月，或约9个月，或约10个月，或约11个月、或约1年。
在一个实施方案中，本文所述的组织填充物可基本上在体内保持其粘度至少1天、或至少2天、或至少3天、或至少4天、或至少5天、或至少6天、或至少1周、或至少2周、或至少3周、或至少1个月、或至少2个月、或至少3个月、或至少4个月、或至少5个月、或至少6个月、或至少7个月、或至少8个月、或至少9个月、或至少10个月、或至少11个月、或至少1年。
在一个实施方案中，本文所述的组织填充物可基本上在体内保持其粘度至多1天、或至多2天、或至多3天、或至多4天、或至多5天、或至多6天、或至多1周、或至多2周、或至多3周、或至多1个月、或至多2个月、或至多3个月、或至多4个月、或至多5个月、或至多6个月、或至多7个月、或至多8个月、或至多9个月、或至多10个月、或至多11个月、或至多1年。
在一个实施方案中，本文所述的组织填充物可基本上在体内保持其粘度约1天，或约2天，或约3天，或约4天，或约5天，或约6天，或约1周，或约2周，或约3周，或约1个月，或约2个月，或约3个月，或约4个月，或约5个月, 或约6个月，或约7个月，或约8个月，或约9个月，或约10个月，或约11个月，或约1年。
在一个实施方案中，本文所述的组织填充物可基本上在体内保持其体积至少1天、或至少2天、或至少3天、或至少4天、或至少5天、或至少6天、或至少1周、或至少2周、或至少3周、或至少1个月、或至少2个月、或至少3个月、或至少4个月、或至少5个月、或至少6个月、或至少7个月、或至少8个月、或至少9个月、或至少10个月、或至少11个月、或至少1年。
在一个实施方案中，本文所述的组织填充物可基本上在体内保持其体积至多1天，或至多2天，或至多3天，或至多4天，或至多5天，或至多6天，或至多1周，或至多2周，或至多3周，或至多1个月，或至多2个月，或至多3个月，或至多4个月，或至多5个月，或至多6个月，或至多7个月，或至多8个月，或至多9个月，或至多10个月，或至多11个月，或至多1年。
在一个实施方案中，本文所述的组织填充物可基本上在体内保持其体积约1天、或约2天、或约3天、或约4天、或约5天、或约6天、或约1周、或约2周、或约3周、或约1个月、或约2个月、或约3个月、或约4个月、或约5个月、或约6个月、或约7个月、或约8个月、或约9个月、或约10个月、或约11个月、或约1年。
制造方法
本文提供的组织填充物可通过将基于SPF的组分与基于HA的组分在有或没有任何额外试剂的情况下组合来制备。在某些实施方案中，SPF和HA之一或两者可以在组合之前交联。在一些实施方案中，SPF和HA可以组合，然后用本文所述的交联剂交联。在一些实施方案中，SPF可以用交联剂交联，然后加入到HA中，HA可以是交联的或未交联的，然后其组合可以进行额外的交联。在一些实施方案中，HA可以用交联剂交联，然后加入到SPF中，SPF可以是交联的或未交联的，然后其组合可以进行额外的交联。
在一些实施方案中，本文所述的组织填充物可通过将基于SPF的组分、基于HA的组分和如上所述额外的试剂组合来制备。在这样的实施方案中，SPF和HA之一或两者可以在组合之前交联。在一些实施方案中，SPF和HA可以与额外的试剂组合，然后用本文所述的交联剂交联。在一些实施方案中，可以在组合SPF和HA后加入额外的试剂。
在一些实施方案中，本文所述的组织填充物可包含重量比（SPF：HA）为0.1:1至0.1:10，或0.1:1至0.1:100，或0.1:1000，1:1至1:10，或1:1至1:100，或1:1至1:1000的SPF和HA。
在一些实施方案中，本文所述的组织填充物可包含重量比（HA：SPF）为0.1:1至0.1:10，或0.1:1至0.1:100，或0.1:1000，1:1至1:10，或1:1至1:100，或1:1至1:1000的SPF和HA。
在一些实施方案中，所得HA/SPF组合（无论交联的还是未交联的）可以被均化，例如通过初始交联HA和/或SPF的机械共混。
在一些实施方案中，可以提供SPF溶液，并用交联剂交联以产生交联SPF，可以向其中加入交联形式、非交联形式或其混合物的HA。然后可将所得混合物均化，并可加入任何其它试剂（例如利多卡因）。
在一些实施方案中，可以提供SPF溶液，并在HA的存在下用交联剂交联，以产生交联SPF-HA组合物，可以向其中加入或不加入非交联形式的HA。然后可将所得混合物均化，并可加入任何其它试剂（例如利多卡因）。
在一些实施方案中，本文提供的特定SPF配制物可以与HA组合，或者可以利用交联方法，使用美国专利No. 8,288,347或No. 8,450,475或美国专利申请公开No. 2006/0105022、No. 2016/0376382或No. 2017/0315828中所述的配制物，其全部内容通过引用并入本文。
在一些实施方案中，本文所述的方法可包括灭菌步骤，其中组织填充物或其部分暴露于例如120℃至约130℃的温度和约12至约20磅/平方英寸的压力下约1至约15分钟的时间。
在一些实施方案中，本文所述的方法可包括脱气步骤，其中对本文所述的用于制备所得组织填充物的SPF、HA或SPF/HA溶液进行脱气。
在一些实施方案中，本文所述的组织填充物可根据实施例5至20中所述的一般方法制备。在其中描述的方法中，丝可以在水溶液、水/醇溶液中制备，其中醇可以是例如乙醇或甲醇。在其中描述的方法中，如本领域普通技术人员所理解的，本文描述的任何交联剂可用于SPF至SPF、SPF至HA或HA至HA的交联。
治疗/处理方法
在一个实施方案中，本文所述的组织填充物可在处理有需要的患者的一种或多种状况的方法中提供。在一些实施方案中，可将治疗有效量的组织填充物递送到有需要的患者的组织中以处理状况或其它组织缺陷。
如本文所用，术语"治疗或处理"是指减少或消除患者的状况如软组织状况的美容或临床症状，或延迟或预防个体的状况的美容或临床症状的发作。
在一些实施方案中，由本文所述的组织填充物处理的状况可包括软组织状况。软组织状况包括但不限于身体部分、区域或面积的增大、重建、疾病、病症、缺陷或瑕疵。在一个方面，由所公开的组织填充物处理的软组织状况包括但不限于面部增大、面部重建、面部疾病、面部病症、面部缺陷或面部瑕疵。在一些实施方案中，通过本文所述的组织填充物处理的软组织状况包括但不限于皮肤脱水、皮肤弹性缺乏、皮肤粗糙、皮肤紧致缺乏、皮肤拉伸线或皮肤拉伸痕、皮肤苍白、真皮起皮、脸颊凹陷、太阳穴凹陷、薄唇、尿道缺损、皮肤缺损、***缺损、后眼窝缺陷、面部褶皱或皱纹。在一些实施方案中，通过本文所述的组织填充物处理的软组织状况包括但不限于***缺陷、缺损、疾病和/或病症，例如隆乳、***重建、***固定、微乳、胸发育不全、Poland综合征、由于植入物并发症如囊收缩和/或破裂引起的缺陷；面部缺陷、缺损、疾病或病症，例如面部增大、面部重建、Parry-Romberg综合征、深部红斑狼疮、真皮起皮、脸颊凹陷、太阳穴凹陷、唇薄、鼻部缺陷或缺损、后眼窝缺陷或缺损、面部褶皱、线条和/或皱纹如眉间皱纹、鼻唇线、口周线和/或木偶纹，和/或面部的其它轮廓畸形或缺陷；颈部缺陷、缺损、疾病或病症；皮肤缺陷、缺损、疾病和/或病症；其它软组织缺陷、缺损、疾病和/或病症，例如上臂、下臂、手、肩、背、躯干包括腹部、臀部、大腿、小腿包括小腿、足包括足底脂肪垫、眼、生殖器或其它身体部分、区域或部位的增大或重建，或影响这些身体部分、区域或部位的疾病或病症；尿失禁、大便失禁、其它形式的失禁；和胃食管反流病（GERD）。
在一些实施方案中，本文所述的组织填充物可递送至软组织，包括但不限于皮肤、真皮组织、皮下组织、皮肤组织、皮下组织、硬膜内组织、肌肉、腱、韧带、纤维组织、脂肪、血管和动脉、神经和滑膜（皮内）组织。
在一些实施方案中，本文所述的组织填充物可直接置于伤口中，通过提供人造可生物降解的基质以及细胞附着、迁移和增殖信号来帮助愈合。在一些实施方案中，本文所述的组织填充物可涂覆在可生物降解的网状物或其它植入材料上，或者其本身可形成片材或其它结构，或者可保持为水合形式。
在一些实施方案中，本文公开的任何方法所用的组合物的量将基于期望的改变和/或改善、期望的状况症状的减轻和/或消除、个体和/或医师期望的临床和/或美容效果以及待处理的身体部分或区域来确定。组合物施用的有效性可以通过以下临床和/或美容措施中的一种或多种来表现：改变和/或改善的软组织形状、改变和/或改善的软组织大小、改变和/或改善的软组织轮廓、改变和/或改善的组织功能、组织向内生长支持和/或新胶原沉积、组织填充物的持续植入、改善的患者满意度和/或生活质量、以及减少的可植入外来材料的使用。例如，对于隆乳手术，组合物和方法的有效性可以通过以下临床和/或美容措施中的一种或多种来表现：***尺寸增加、***形状改变、***轮廓改变、持续植入、囊收缩风险降低、脂肪坏死囊肿形成速率降低、患者满意度和/或生活质量改善以及***植入物的使用减少。
在一些实施方案中，组织填充物和方法在处理面部软组织中的有效性可通过以下临床和/或美容措施中的一种或多种来表现：面部特征的尺寸、形状和/或轮廓增加，如唇、脸颊、太阳穴或眼部区域的尺寸、形状和/或轮廓增加；面部特征的大小、形状和/或轮廓改变，如唇、脸颊、太阳穴或眼部形状的大小、形状和/或轮廓改变；减少或消除皮肤中的皱纹、褶皱或纹路；皮肤抗皱、抗褶皱或抗起纹；皮肤的再水化；增加皮肤的弹性；皮肤粗糙的减少或消除；增加和/或改善的皮肤紧实度；减少或消除拉伸线或拉伸痕；增加和/或改善的肤色、光泽、亮度和/或光彩；增加和/或改善肤色，减少或消除皮肤苍白；组合物的持续植入；副作用降低；改善的患者满意度和/或生活质量。
在一些实施方案中，本发明提供了组织填充物和涉及真皮区域的处理方法。如本文所用，术语"真皮区域"是指包括表皮-真皮接点的皮肤区域和包括浅层真皮（***区）和深层真皮（网状区）的真皮。皮肤由三个主要层组成：表皮，其提供防水并且充当针对感染的屏障；真皮，其用作皮肤的附属物的位置；和下皮（皮下脂肪层）。表皮不含血管，并且通过从真皮扩散而被滋养。构成表皮的细胞的主要类型是角质形成细胞、黑素细胞、朗格汉斯细胞和梅克尔斯细胞。
真皮是表皮下的皮肤层，其由***组成并缓冲身体免受应力和应变。真皮通过基底膜与表皮紧密连接。它还具有许多提供触觉和热感的机械性刺激感受器/神经末梢。它含有毛囊、汗腺、皮脂腺、顶泌腺、***和血管。真皮中的血管提供营养，并从其自身细胞以及表皮的基底层中去除废物。真皮在结构上被分成两个区域：与表皮相邻的浅表区域，称为***区，和称为网状区的较厚的深区域。
***区由疏松的蜂窝***组成。其由于其向表皮延伸的称为乳突的指状突起而命名。***为真皮提供与表皮交错的"凹凸"表面，从而加强两层皮肤之间的连接。网状区位于***区域深处，并且通常厚得多。它由致密的不规则***组成，并且由编织贯穿它的胶原、弹性和网状纤维的致密集中而命名。这些蛋白质纤维赋予真皮强度、延展性和弹性的特性。位于网状区域内的还有毛发的根、皮脂腺、汗腺、受体、指甲和血管。妊娠纹例如位于真皮中。
下皮位于真皮下方。其目的是将皮肤的真皮区域附着到下面的骨骼和肌肉上，并为其提供血管和神经。它由疏松***和弹性蛋白组成。主要的细胞类型是成纤维细胞、巨噬细胞和脂肪细胞（下皮含有身体脂肪的50%）。脂肪用作身体的衬垫和隔离物。
在一些实施方案中，本文公开的组织填充物通过注射到真皮区域或皮下区域中而施用至个体的皮肤区域。在一些实施方案中，本文公开的组织填充物通过注射至例如表皮-真皮接点区、***区、网状区或其任何组合中而施用至个体的真皮区域。
在一些实施方案中，本发明提供处理个体的软组织状况的方法，包括将本文公开的一种或多种组织填充物施用至个体的软组织状况的部位，其中组合物的施用改善软组织状况，从而处理软组织状况。在一些实施方案中，软组织状况是***组织状况、面部组织状况、颈部状况、皮肤状况、上臂状况、下臂状况、手状况、肩部状况、背部状况、躯干包括腹部状况、臀部状况、大腿状况、小腿状况包括小腿状况、足部状况包括足底脂肪垫状况、眼睛状况、生殖器状况、或影响另一身体部分、区域或面积的状况。
在一些实施方案中，本发明提供处理皮肤状况的方法，包括向患有皮肤状况的个体施用本文公开的一种或多种组织填充物，其中组织填充物的施用改善皮肤状况，从而处理皮肤状况。在一些实施方案中，皮肤状况包括皮肤脱水，并且处理方法包括向患有皮肤脱水的个体施用本文公开的一种或多种组织填充物，其中施用组织填充物使皮肤再水合，从而处理皮肤脱水。在这些实施方案的另一方面，处理皮肤弹性缺乏的方法包括对患有皮肤弹性缺乏的个体施用本文公开的组织填充物，其中组织填充物的施用增加皮肤的弹性，从而处理皮肤弹性缺乏。在这些实施方案的另一方面，处理皮肤粗糙的方法包括向患有皮肤粗糙的个体施用本文公开的组合物，其中所述组合物的施用降低皮肤粗糙，从而处理皮肤粗糙。在一些实施方案中，处理皮肤紧致缺乏的方法包括向患有皮肤紧致缺乏的个体施用本文公开的组织填充物，其中组织填充物的施用使皮肤紧致，从而处理皮肤紧致缺乏。
在一些实施方案中，本发明提供处理皮肤拉伸线或皮肤拉伸痕的方法，包括向患有皮肤拉伸线或皮肤拉伸痕的个体施用本文公开的一种或多种组织填充物，其中所述一种或多种组织填充物的施用减少或消除所述皮肤拉伸线或皮肤拉伸痕，从而处理皮肤拉伸线或皮肤拉伸痕。在一些实施方案中，处理皮肤苍白的方法包括向患有皮肤苍白的个体施用本文公开的组织填充物，其中所述组织填充物的施用增加肤色或光泽，从而处理皮肤苍白。在一些实施方案中，处理皮肤皱纹的方法包括向患有皮肤皱纹的个体施用本文公开的组织填充物，其中组织填充物的施用减少或消除皮肤皱纹，从而处理皮肤皱纹。在这些实施方案的另一方面，处理皮肤皱纹的方法包括向个体施用本文公开的组织填充物，其中组织填充物的施用使得皮肤抵抗皮肤皱纹，从而处理皮肤皱纹。
在一些实施方案中，本发明提供了本文公开的组合物的施用，其中这样的施用促进新胶原沉积或形成。本文所述的组织填充物可支持组织向内生长和胶原的新沉积或形成。
不受本发明任何理论的限制，可以调节本文所述组织填充物制备中所用SPF的分子量以在所选组织处提供温和的炎症反应，以便通过初始炎症反应之后所产生的组织增殖和成熟应答来触发胶原的沉积或形成。实际上，较高分子量的SPF可导致增加的炎性应答，而较低分子量的SPF可导致很少的炎性应答或不导致炎性应答。
不受本发明任何一种理论的限制，本文所述的组织填充物提供了出乎意料的属性，即，由于本文所用的SPF溶液具有窄而非宽的多分散性，因此可以调节所产生的炎症应答，并由此调节通过增殖和成熟组织应答的胶原形成。在一个实施方案中，施用本文公开的组织填充物增加了新胶原沉积。
在一些实施方案中，施用本文公开的组织填充物使新胶原沉积或形成增加约1%、约2%、约3%、约4%、约5%、约6%、约7%、约8%、约9%、约10%、约11%、约12%、约13%、约14%、约15%、约16%、约17%、约18%、约19%、约20%、约21%、约22%、约23%、约24%、约25%、约26%、约27%、约28%、约29%、约30%、约31%、约32%、约33%、约34%、约35%、约36%、约37%、约38%、约39%、约40%、约41%、约42%、约43%、约44%、约45%、约46%、约47%、约48%、约49%、约50%、约51%、约52%、约53%、约54%、约55%、约56%、约57%、约58%、约59%、约60%、约61%、约62%、约63%、约64%、约65%、约66%、约67%、约68%、约69%、约70%、约71%、约72%、约73%、约74%、约75%、约76%、约77%、约78%、约79%、约80%、约81%、约82%、约83%、约84%、约85%、约86%、约87%、约88%、约89%、约90%、约91%、约92%、约93%、约94%、约95%、约96%、约97%、约98%、约99%、或约100%, 相对于含有HA但缺少SPF的相同或相似的组织填充物。
在一些实施方案中，施用本文公开的组织填充物使新胶原沉积或形成增加至少1%、或至少2%、或至少3%、或至少4%、或至少5%、或至少6%、或至少7%、或至少8%、或至少9%、或至少10%、或至少11%、或至少12%、或至少13%、或至少14%、或至少15%、或至少16%、或至少17%、或至少18%、或至少19%、或至少20%、或至少21%、或至少22%、或至少23%、或至少24%、或至少25%、或至少26%、或至少27%、或至少28%、或至少29%、或至少30%、或至少31%、或至少32%、或至少33%、或至少34%、或至少35%、或至少36%、或至少37%、或至少38%、或至少39%、或至少40%、或至少41%、或至少42%、或至少43%、或至少44%、或至少45%、或至少46%、或至少47%、或至少48%、或至少49%、或至少50%、或至少51%、或至少52%、或至少53%、或至少54%、或至少55%、或至少56%、或至少57%、或至少58%、或至少59%、或至少60%、或至少61%、或至少62%、或至少63%、或至少64%、或至少65%、或至少66%、或至少67%、或至少68%、或至少69%、或至少70%、或至少71%、或至少72%、或至少73%、或至少74%、或至少75%、或至少76%、或至少77%、或至少78%、或至少79%、或至少80%、或至少81%、或至少82%、或至少83%、或至少84%、或至少85%、或至少86%、或至少87%、或至少88%、或至少89%、或至少90%、或至少91%、或至少92%、或至少93%、或至少94%、或至少95%、或至少96%、或至少97%、或至少98%、或至少99%、或至少100%、或至少125%、或至少150%、或至少175%、或至少200%、或至少225%、或至少250%、或至少275%、或至少300%, 相对于含有HA但缺少SPF的相同或相似的组织填充物。
在一些实施方案中，施用本文公开的组织填充物使新胶原沉积或形成增加至多1%、或至多2%、或至多3%、或至多4%、或至多5%、或至多6%、或至多7%、或至多8%、或至多9%、或至多10%、或至多11%、或至多12%、或至多13%、或至多14%、或至多15%、或至多16%、或至多17%、或至多18%、或至多19%、或至多20%、或至多21%、或至多22%、或至多23%、或至多24%、或至多25%、或至多26%、或至多27%、或至多28%、或至多29%、或至多30%、或至多31%、或至多32%、或至多33%、或至多34%、或至多35%、或至多36%、或至多37%、或至多38%、或至多39%、或至多40%、或至多41%、或至多42%、或至多43%、或至多44%、或至多45%、或至多46%、或至多47%、或至多48%、或至多49%、或至多50%、或至多51%、或至多52%、或至多53%、或至多54%、或至多55%、或至多56%、或至多57%、或至多58%、或至多59%、或至多60%、或至多61%、或至多62%、或至多63%、或至多64%、或至多65%、或至多66%、或至多67%、或至多68%、或至多69%、或至多70%、或至多71%、或至多72%、或至多73%、或至多74%、或至多75%、或至多76%、或至多77%、或至多78%、或至多79%、或至多80%、或至多81%、或至多82%、或至多83%、或至多84%、或至多85%、或至多86%、或至多87%、或至多88%、或至多89%、或至多90%、或至多91%、或至多92%、或至多93%、或至多94%、或至多95%、或至多96%、或至多97%、或至多98%、或至多99%、或至多100%、或至多125%、或至多150%、或至多175%、或至多200%、或至多225%、或至多250%、或至多275%、或至多300%, 相对于含有HA但缺少SPF的相同或相似的组织填充物。
在一些实施方案中，施用本文公开的组织填充物使新胶原沉积或形成增加约1%至约10%、约10%至约50%、约10%至约100%、约50%至约150%、约100%至约200%、约150%至约250%、约200%至约300%、约350%至约450%、约400%至约500%、约550%至约650%、约600%至约700%, 相对于含有HA但缺少SPF的相同或相似的组织填充物。
在一些实施方案中，用于本文公开的任何方法的组织填充物的量通常将是治疗有效量。如本文所用，术语"治疗有效量"与"有效量"、"治疗有效剂量"和/或"有效剂量"同义，并且是指将在有需要的患者中引起预期的生物、美容或临床反应的组织填充物的量。作为非限制性实例，有效量是足以实现本文公开的一种或多种临床和/或美容措施的量。对于所公开方法的特定应用，施用的适当有效量可由本领域技术人员使用本文提供的指导来确定。例如，有效量可以从本文所述的任何和所有体外和体内测定推断。本领域技术人员将认识到，可以在整个治疗/处理过程中监测个体的状况，并且可以相应地调整施用的本文公开的组合物的有效量。
在一些实施方案中，施用的组织填充物的量为至少0.001 g、或至少0.002 g、或至少0.003 g、或至少0.004 g、或至少0.005 g、或至少0.006 g、或至少0.007 g、或至少0.008g、或至少0.009 g、或至少0.01 g、或至少0.02 g、或至少0.03 g、或至少0.04 g、或至少0.05 g、或至少0.06 g、或至少0.07 g、或至少0.08 g、或至少0.09 g、或至少0.1 g、或至少0.2 g、或至少0.3 g、或至少0.4 g、或至少0.5 g、或至少0.6 g、或至少0.7 g、或至少0.8g、或至少0.9 g、或至少1 g、或至少2 g、或至少3 g、或至少4 g、或至少5 g、或至少6 g、或至少7 g、或至少8 g、或至少9 g、或至少10 g、或至少11 g、或至少12 g、或至少13 g、或至少14 g、或至少15 g、或至少20 g、或至少25 g、或至少30 g、或至少35 g、或至少40 g、或至少45 g、或至少50 g、或至少55 g、或至少60 g、或至少65 g、或至少70 g、或至少75 g、或至少80 g、或至少85 g、或至少90 g、或至少95 g、或至少100 g。
在一些实施方案中，施用的组织填充物的量为至多0.001 g、或至多0.002 g、或至多0.003 g、或至多0.004 g、或至多0.005 g、或至多0.006 g、或至多0.007 g、或至多0.008g、或至多0.009 g、或至多0.01 g、或至多0.02 g、或至多0.03 g、或至多0.04 g、或至多0.05 g、或至多0.06 g、或至多0.07 g、或至多0.08 g、或至多0.09 g、或至多0.1 g、或至多0.2 g、或至多0.3 g、或至多0.4 g、或至多0.5 g、或至多0.6 g、或至多0.7 g、或至多0.8g、或至多0.9 g、或至多1 g、或至多2 g、或至多3 g、或至多4 g、或至多5 g、或至多6 g、或至多7 g、或至多8 g、或至多9 g、或至多10 g、或至多11 g、或至多12 g、或至多13 g、或至多14 g、或至多15 g、或至多20 g、或至多25 g、或至多30 g、或至多35 g、或至多40 g、或至多45 g、或至多50 g、或至多55 g、或至多60 g、或至多65 g、或至多70 g、或至多75 g、或至多80 g、或至多85 g、或至多90 g、或至多95 g、或至多100 g。
在一些实施方案中，施用的组织填充物的量为约0.001 g、或约0.002 g、或约0.003 g、或约0.004 g、或约0.005 g、或约0.006 g、或约0.007 g、或约0.008 g、或约0.009g、或约0.01 g、或约0.02 g、或约0.03 g、或约0.04 g、或约0.05 g、或约0.06 g、或约0.07g、或约0.08 g、或约0.09 g、或约0.1 g、或约0.2 g、或约0.3 g、或约0.4 g、或约0.5 g、或约0.6 g、或约0.7 g、或约0.8 g、或约0.9 g、或约1 g、或约2 g、或约3 g、或约4 g、或约5g、或约6 g、或约7 g、或约8 g、或约9 g、或约10 g、或约11 g、或约12 g、或约13 g、或约14g、或约15 g、或约20 g、或约25 g、或约30 g、或约35 g、或约40 g、或约45 g、或约50 g、或约55 g、或约60 g、或约65 g、或约70 g、或约75 g、或约80 g、或约85 g、或约90 g、或约95g、或约100 g。
在一些实施方案中，施用的组织填充物的量为0.001 g至0.01 g、或0.01 g至0.1g、或0.1 g至1 g、或1 g至10 g、或10 g至20 g、或20 g至30 g、或30 g至40 g、或40 g至50g、或50 g至60 g、或60 g至70 g、或70 g至80 g、或80 g至90 g、或90 g至100 g。
在一些实施方案中，施用的组织填充物的体积为至少0.01 mL、或至少0.02 mL、或至少0.03 mL、或至少0.04 mL、或至少0.05 mL、或至少0.06 mL、或至少0.07 mL、或至少0.08 mL、或至少0.09 mL、或至少0.10 mL、或至少0.15 mL、或至少0.20 mL、或至少0.25mL、或至少0.30 mL、或至少0.35 mL、或至少0.40 mL、或至少0.45 mL、或至少0.50 mL、或至少0.55 mL、或至少0.60 mL、或至少0.65 mL、或至少0.70 mL、或至少0.75 mL、或至少0.80mL、或至少0.85 mL、或至少0.90 mL、或至少0.95 mL、或至少1 mL、或至少2 mL、或至少3mL、或至少4 mL、或至少5 mL、或至少6 mL、或至少7 mL、或至少8 mL、或至少9 mL、或至少10mL、或至少15 mL、或至少20 mL、或至少25 mL、或至少30 mL、或至少35 mL、或至少40 mL、或至少45 mL、或至少50 mL、或至少55 mL、或至少60 mL、或至少65 mL、或至少70 mL、或至少75 mL、或至少80 mL、或至少85 mL、或至少90 mL、或至少95 mL、或至少100 mL、或至少110mL、或至少120 mL、或至少130 mL、或至少140 mL、或至少150 mL、或至少160 mL、或至少170mL、或至少180 mL、或至少190 mL、或至少200 mL、或至少210 mL、或至少220 mL、或至少230mL、或至少240 mL、或至少250 mL、或至少260 mL、或至少270 mL、或至少280 mL、或至少290mL、或至少300 mL、或至少325, 350 mL、或至少375 mL、或至少400 mL、或至少425 mL、或至少450 mL、或至少475 mL、或至少500 mL、或至少525 mL、或至少550 mL、或至少575 mL、或至少600 mL、或至少625 mL、或至少650 mL、或至少675 mL、或至少700 mL、或至少725 mL、或至少750 mL、或至少775 mL、或至少800 mL、或至少825 mL、或至少850 mL、或至少875mL、或至少900 mL、或至少925 mL、或至少950 mL、或至少975 mL、或至少1000 mL。
在一些实施方案中，施用的组织填充物的体积为至多0.01 mL、或至多0.02 mL、或至多0.03 mL、或至多0.04 mL、或至多0.05 mL、或至多0.06 mL、或至多0.07 mL、或至多0.08 mL、或至多0.09 mL、或至多0.10 mL、或至多0.15 mL、或至多0.20 mL、或至多0.25mL、或至多0.30 mL、或至多0.35 mL、或至多0.40 mL、或至多0.45 mL、或至多0.50 mL、或至多0.55 mL、或至多0.60 mL、或至多0.65 mL、或至多0.70 mL、或至多0.75 mL、或至多0.80mL、或至多0.85 mL、或至多0.90 mL、或至多0.95 mL、或至多1 mL、或至多2 mL、或至多3mL、或至多4 mL、或至多5 mL、或至多6 mL、或至多7 mL、或至多8 mL、或至多9 mL、或至多10mL、或至多15 mL、或至多20 mL、或至多25 mL、或至多30 mL、或至多35 mL、或至多40 mL、或至多45 mL、或至多50 mL、或至多55 mL、或至多60 mL、或至多65 mL、或至多70 mL、或至多75 mL、或至多80 mL、或至多85 mL、或至多90 mL、或至多95 mL、或至多100 mL、或至多110mL、或至多120 mL、或至多130 mL、或至多140 mL、或至多150 mL、或至多160 mL、或至多170mL、或至多180 mL、或至多190 mL、或至多200 mL、或至多210 mL、或至多220 mL、或至多230mL、或至多240 mL、或至多250 mL、或至多260 mL、或至多270 mL、或至多280 mL、或至多290mL、或至多300 mL、或至多325, 350 mL、或至多375 mL、或至多400 mL、或至多425 mL、或至多450 mL、或至多475 mL、或至多500 mL、或至多525 mL、或至多550 mL、或至多575 mL、或至多600 mL、或至多625 mL、或至多650 mL、或至多675 mL、或至多700 mL、或至多725 mL、或至多750 mL、或至多775 mL、或至多800 mL、或至多825 mL、或至多850 mL、或至多875mL、或至多900 mL、或至多925 mL、或至多950 mL、或至多975 mL、或至多1000 mL。
在一些实施方案中，施用的组织填充物的体积为约0.01 mL、或约0.02 mL、或约0.03 mL、或约0.04 mL、或约0.05 mL、或约0.06 mL、或约0.07 mL、或约0.08 mL、或约0.09mL、或约0.10 mL、或约0.15 mL、或约0.20 mL、或约0.25 mL、或约0.30 mL、或约0.35 mL、或约0.40 mL、或约0.45 mL、或约0.50 mL、或约0.55 mL、或约0.60 mL、或约0.65 mL、或约0.70 mL、或约0.75 mL、或约0.80 mL、或约0.85 mL、或约0.90 mL、或约0.95 mL、或约1 mL、或约2 mL、或约3 mL、或约4 mL、或约5 mL、或约6 mL、或约7 mL、或约8 mL、或约9 mL、或约10 mL、或约11 mL、或约12 mL、或约13 mL、或约14 mL、或约15 mL、或约16 mL、或约17 mL、或约18 mL、或约19 mL、或约20 mL、或约21 mL、或约22 mL、或约23 mL、或约24 mL、或约25mL、或约26 mL、或约27 mL、或约28 mL、或约30 mL、或约35 mL、或约36 mL、或约37 mL、或约38 mL、或约39 mL、或约40 mL、或约41 mL、或约42 mL、或约43 mL、或约44 mL、或约45 mL、或约46 mL、或约47 mL、或约48 mL、或约49 mL、或约50 mL、或约51 mL、或约52 mL、或约53mL、或约54 mL、或约55 mL、或约56 mL、或约57 mL、或约58 mL、或约59 mL、或约60 mL、或约61 mL、或约62 mL、或约63 mL、或约64 mL、或约65 mL、或约66 mL、或约67 mL、或约68 mL、或约69 mL、或约70 mL、或约71 mL、或约72 mL、或约73 mL、或约74 mL、或约75 mL、或约76mL、或约77 mL、或约78 mL、或约79 mL、或约80 mL、或约81 mL、或约82 mL、或约83 mL、或约84 mL、或约85 mL、或约86 mL、或约87 mL、或约88 mL、或约89 mL、或约90 mL、或约91 mL、或约92 mL、或约93 mL、或约94 mL、或约95 mL、或约96 mL、或约97 mL、或约98 mL、或约99mL、或约100 mL、或约110 mL、或约120 mL、或约130 mL、或约140 mL、或约150 mL、或约160mL、或约170 mL、或约180 mL、或约190 mL、或约200 mL、或约210 mL、或约220 mL、或约230mL、或约240 mL、或约250 mL、或约260 mL、或约270 mL、或约280 mL、或约290 mL、或约300mL、或约310 mL、或约320 mL、或约330 mL、或约340 mL、或约350 mL、或约360 mL、或约370mL、或约380 mL、或约390 mL、或约400 mL、或约410 mL、或约420 mL、或约430 mL、或约440mL、或约450 mL、或约460 mL、或约470 mL、或约480 mL、或约490 mL、或约500 mL、或约510mL、或约520 mL、或约530 mL、或约540 mL、或约550 mL、或约560 mL、或约570 mL、或约580mL、或约590 mL、或约600 mL、或约610 mL、或约620 mL、或约630 mL、或约640 mL、或约650mL、或约660 mL、或约670 mL、或约680 mL、或约690 mL、或约700 mL、或约710 mL、或约720mL、或约730 mL、或约740 mL、或约750 mL、或约760 mL、或约770 mL、或约780 mL、或约790mL、或约800 mL、或约810 mL、或约820 mL、或约830 mL、或约840 mL、或约850 mL、或约860mL、或约870 mL、或约880 mL、或约890 mL、或约900 mL、或约910 mL、或约920 mL、或约930mL、或约940 mL、或约950 mL、或约960 mL、或约970 mL、或约980 mL、或约990 mL、或约1000mL。
在一些实施方案中，施用的组织填充物的体积为0.01 mL至0.10 mL、或0.10 mL至1 mL、或1 mL至10 mL、或10 mL至100 mL、或50 mL至100 mL、或100 mL至150 mL、或150 mL至200 mL、或200 mL至250 mL、或250 mL至300 mL、或300 mL至350 mL、或350 mL至400 mL、或400 mL至450 mL、或450 mL至500 mL、或500 mL至550 mL、或550 mL至600 mL、或600 mL至650 mL、或650 mL至700 mL、或700 mL至750 mL、或750 mL至800 mL、或800 mL至850 mL、或850 mL至900 mL、或900 mL至950 mL、或950 mL至1000 mL、或1 mL至25 mL、或1 mL至50mL、或1 mL至75 mL、或1 mL至100 mL、或10 mL至25 mL、或10 mL 50 mL、或10 mL至75 mL、或100 mL至250 mL、或100 mL至500 mL、或100 mL至750 mL、或100 mL至1000 mL。
在一些实施方案中，本发明提供了施用本文公开的组织填充物。如本文所用，术语"施用"是指向个体提供本文公开的组织填充物的任何递送机制，其潜在地导致临床、治疗或实验上有益的结果。用于将组织填充物施用至个体的实际递送机制可由本领域普通技术人员通过考虑以下因素来确定，所述因素包括但不限于状况类型、状况位置、状况原因、状况严重性、所需缓解程度、所需缓解持续时间、所用特定组织填充物、所用特定组织填充物的可生物降解性速率、生物吸收性速率、生物再吸收性速率等、所用特定组织填充物中所包含的组分的性质、特定施用途径、患者的特定特征、历史和风险因素，例如年龄、体重、一般健康状况等或其任何组合。在该实施方案的一个方面，本文公开的组织填充物通过注射施用至患者的区域，其中该区域可以在皮肤、真皮组织、皮下组织、皮肤组织、皮下组织、硬膜内组织、肌肉、腱、韧带、纤维组织、脂肪、血管和动脉、神经或滑膜（皮内）组织中。
在一些实施方案中，施用至患者的组织填充物的施用途径将基于患者和/或医师以及待治疗/处理的身体部位或区域所需的美容和/或临床效果来确定。本文公开的组织填充物可通过本领域普通技术人员已知的任何方式施用，包括但不限于，带针注射器、导管、局部施用或通过直接手术植入。本文公开的组织填充物可施用到皮肤区域，例如真皮区域或皮下区域。此外，本文公开的组织填充物可根据具体治疗的需要施用一次、两次、三次或多次。
在一些实施方案中，本文公开的组织填充物是可注射的。如本文所用，术语"可注射的"是指具有使用具有针例如细针的注射装置将组织填充物施用到个体的皮肤区域中所必需的性质的组织材料。如本文所用，术语"细针"是指27号或更小的针。在一些实施方案中，细针可以是27号至30号针。本文公开的组织填充物的可注射性可通过改变本文公开的组织填充物的某些参数来实现，例如通过调节交联度，或者改变G'和/或G"参数，加入非交联聚合物（例如SPF或HA）等。
在一些实施方案中，本文公开的组织填充物可通过细针注射。在一些实施方案中，本文公开的组织填充物可通过例如20号、或21号、或22号、或23号、或24号、或25号、或26号、或27号、或28号、或29号、或30号、或31号、或32号、或33号、或34号的针注射。在一些实施方案中，本文所述的组织填充物可通过20号、或21号、或22号、或23号、或24号、或25号、或26号、或27号、或28号、或29号、或30号针注射。
在一些实施方案中，本文公开的组织填充物可用体积为约0.8 mL至约1.0 mL的注射器注射。
在一些实施方案中，本文所述的组织填充物可递送至软组织中或周围的空隙空间，以用于例如组织增大（例如，***或臀部增大）的目的。当将本文所述的组织填充物递送至此类空隙空间时，可使用较大的注射器和针（例如，27号或更大的针）。
在一些实施方案中，本文所述的组织填充物可在不使用针的情况下施用于伤口，以便涂覆伤口或邻近伤口的医疗装置。
在一些实施方案中，本文所述的组织填充物可应用于医疗装置的表面。
提出以下实施例以便为本领域普通技术人员提供如何制备和使用所述实施方案的完整公开和描述，并且不旨在限制发明人所认为的其发明的范围，也不旨在表示以下实验是所进行的所有或唯一实验。已经努力确保所用数字（例如量、温度等）的准确性，但是应当考虑到一些实验误差和偏差。除非另有说明，份数是重量份数，分子量是重均分子量，温度是摄氏度，压力是大气压或接近大气压。
实施例
实施例1：凝胶的丁达尔评价
为了进一步支持目视观察和进行真皮填充物的比较性能分析，进行丁达尔效应的定量分析。基于对光散射和光与皮肤的相互作用的现有科学理解，采用基于（a）比色法和（b）光谱法的两种不同方法来量化皮肤中的丁达尔效应。基于这些技术，定义了三个不同的定量参数（下文概述）以测量体内丁达尔效应。
丁达尔效应视觉评分：
标度具有1至5的范围，增量为0.5。注射部位的正常肤色和没有蓝色变色的分数为1。厚的和明显的蓝色变色给出最大分数5。在进行盲试验测试样品评分之前，三个独立的观察者进行标度训练。
皮肤颜色的蓝色组分" -b "：使用色度计来量化从注射有各种填充物的皮肤部位发出的光的蓝色组分。这通过使用L-a-b颜色标度的" b "组分来实现。
从皮肤发出的"%蓝光"：使用便携式分光光度计来量化在总的可见光范围内从皮肤发出的蓝光的百分比。这是通过积分400-490 nm的可见光谱下的面积并通过光谱（400-700 nm）下的总面积将其归一化来实现的。
使用线性穿线技术通过适当的针将本公开的凝胶和市售凝胶皮内注射到两月龄无毛大鼠的大腿中。将凝胶表面植入以模拟临床细线操作。在凝胶植入后48小时进行丁达尔试验。在进行丁达尔试验之前，将动物人道地安乐死以提高丁达尔效果的对比度。
用1-5的视觉评分和0.5的增量对注射部位评分。分数为1的注射部位显示没有皮肤变色，而分数为5的注射部位显示皮肤严重的蓝色变色。也在色度计的帮助下在注射部位进行光谱分析。独立地测量肤色的蓝色组分" b "和从皮肤发出的蓝光的% （400-700 nm）。
实施例2：体内组织填充物测试
根据前述描述制备的组织填充物可在皮内植入、肌肉植入和皮下注射后测试。
例如，一定剂量的组织填充物可被装载在注射器中，并使用允许组织填充物通过针流到注射部位的适当尺寸的注射器皮内注射、肌内注射或皮下注射。
在最初注射vs.对照物（例如水和/或市售的基于HA的组织填充物，如Juvederm）后，可以1周或2周的间隔监测注射部位，在此观察患者的生物相容性问题，包括细胞毒性、致热原性、内毒素形成、急性***毒性、亚慢性毒性、皮内反应性、基因毒性和皮肤致敏。
此外，组织填充物的物理属性可以通过检查在注射部位处丁达尔化的存在或体积、弹性或硬度的损失来监测。
实施例3：组织填充物流变学的检查
可使用振荡平行板流变仪（Anton Paar Physica MCR301）测量本文所述的组织填充物的流变性质。在间隙高度为1 mm时，可使用25 mm的板直径。测量可以在25℃的恒定温度下进行。每个测量包括在2%的恒定应变和频率对数增加下从1至10 Hz的频率扫描，随后是在5Hz的恒定频率下从1至300%的应变扫描，其中应变对数增加。这种分析的结果将提供每个测试的组织填充物的储能模量G'和损耗模量G'。
实施例4：丝/ HA溶液不透明度的检查
根据表18在水或磷酸盐缓冲盐水中制备HA和丝的溶液。
Figure 303994DEST_PATH_IMAGE026
Figure 679612DEST_PATH_IMAGE027
Figure 100229DEST_PATH_IMAGE028
低= 0至25 kDa的丝分子量
中等 = 25 kDa至60 kDa的丝分子量。
上表中描述的溶液的结果示于图26和27中。图26和27中的对照物（图26中未标记的烧瓶和图27中的对照注射器）是HA （22 mg/mL）的水溶液。如图26和27图示说明，与单独的HA相比，丝/ HA溶液是均匀的并且在视觉上是不透明的。
实施例5：提出的组织充填物的制备方法
本文所述的丝/ HA组织填充物可根据以下一般方法制备：
步骤a：可以将透明质酸溶解在NaOH溶液中并加入到如本文所述的丝溶液中；
步骤b：将溶解于NaOH中的BDDE加入丝/ HA/NaOH溶液中；
步骤c：通过加热混合交联；
步骤d：通过金属筛并允许在水中溶胀；
步骤e：将溶胀的凝胶在乙醇中沉淀；
步骤f：用乙醇、水、和NaOH溶液洗涤；
步骤g：在乙醇/ NaOH溶液中加热（50℃）完成交联约2小时；
步骤h：中和溶液pH至7；
步骤I：沉淀物洗涤和干燥；
步骤j：使所得干粉末在0.9% NaCl缓冲溶液中溶胀成凝胶；以及
步骤k：将凝胶填充到注射器中并压热处理，得到组织填充物。
实施例6：提出的组织充填物的制备方法
本文所述的丝/ HA组织填充物可根据以下一般方法制备：
步骤a：可以将透明质酸溶解于NaOH溶液中；
步骤b：将丝的NaOH溶液加入到丝的溶液中，然后将溶解在NaOH中的BDDE加入到丝/HA/NaOH溶液中；
步骤c：通过加热混合交联；
步骤d：通过金属筛并允许在水中溶胀；
步骤e：将溶胀的凝胶在乙醇中沉淀；
步骤f：用乙醇、水、和NaOH溶液洗涤；
步骤g：在乙醇/ NaOH溶液中加热（50℃）完成交联约2小时；
步骤h：中和溶液pH至7；
步骤I：沉淀物洗涤和干燥；
步骤j：使所得干粉末在0.9% NaCl缓冲溶液中溶胀成凝胶；以及
步骤k：将凝胶填充到注射器中并压热处理，得到组织填充物。
实施例7：提出的组织充填物的制备方法
本文所述的丝/ HA组织填充物可根据以下一般方法制备：
步骤a：可以将透明质酸溶解于NaOH溶液中；
步骤b：将溶解于NaOH中的BDDE加入到HA/NaOH溶液中；
步骤c：将丝溶液加入到步骤b的溶液中并通过加热混合交联；
步骤d：通过金属筛并允许在水中溶胀；
步骤e：将溶胀的凝胶在乙醇中沉淀；
步骤f：用乙醇、水、和NaOH溶液洗涤；
步骤g：在乙醇/ NaOH溶液中加热（50℃）完成交联约2小时；
步骤h：中和溶液pH至7；
步骤I：沉淀物洗涤和干燥；
步骤j：使所得干粉末在0.9% NaCl缓冲溶液中溶胀成凝胶；以及
步骤k：将凝胶填充到注射器中并压热处理，得到组织填充物。
实施例8：提出的组织充填物的制备方法
本文所述的丝/ HA组织填充物可根据以下一般方法制备：
步骤a：可以将透明质酸溶解于NaOH溶液中；
步骤b：将溶解于NaOH中的BDDE加入到HA/NaOH溶液中；
步骤c：通过加热混合交联；
步骤d：将丝溶液加入到交联HA/NaOH溶液中，并通过金属筛，并允许在水中溶胀；
步骤e：将溶胀的凝胶在乙醇中沉淀；
步骤f：用乙醇、水、和NaOH溶液洗涤；
步骤g：在乙醇/ NaOH溶液中加热（50℃）完成交联约2小时；
步骤h：中和溶液pH至7；
步骤I：沉淀物洗涤和干燥；
步骤j：使所得干粉末在0.9% NaCl缓冲溶液中溶胀成凝胶；以及
步骤k：将凝胶填充到注射器中并压热处理，得到组织填充物。
实施例9：提出的组织充填物的制备方法
本文所述的丝/ HA组织填充物可根据以下一般方法制备：
步骤a：可以将透明质酸溶解于NaOH溶液中；
步骤b：将溶解于NaOH中的BDDE加入到HA/NaOH溶液中；
步骤c：通过加热混合交联；
步骤d：通过金属筛并允许在水中溶胀；
步骤e：将溶胀的凝胶在乙醇中沉淀；
步骤f：用乙醇、水、和NaOH溶液洗涤；
步骤g：将丝溶液加入到步骤f中制备的材料中，并在加热（50℃）下在乙醇/ NaOH溶液中完成交联约2小时；
步骤h：中和溶液pH至7；
步骤I：沉淀物洗涤和干燥；
步骤j：使所得干粉末在0.9% NaCl缓冲溶液中溶胀成凝胶；
步骤k：将凝胶填充到注射器中并压热处理，得到组织填充物。
实施例10：提出的组织充填物的制备方法
本文所述的丝/ HA组织填充物可根据以下一般方法制备：
步骤a：可以将透明质酸钠与NaOH溶液和本文所述的丝溶液混合；
步骤b：可以将BDDE加入到步骤a的溶液中；
步骤c：使步骤b的产物反应；
步骤d：将氨加入步骤c的经透析的混合物中，并将混合物倒入培养皿中；
步骤e：使步骤d的产物干燥成膜；
步骤f：将步骤e的膜分成颗粒并在盐水中溶胀；
步骤g；将步骤f的产物加入注射器中并压热处理；
步骤h （任选）：步骤f的产物可以用BDDE溶液或本文所述的其它交联剂进行第二最终交联过程，并洗涤。
实施例11：提出的组织充填物的制备方法
本文所述的丝/ HA组织填充物可根据以下一般方法制备：
步骤a：可以将透明质酸钠与NaOH溶液混合；
步骤b：可以将丝溶液加入到步骤a的溶液中，并且可以加入BDDE；
步骤c：使步骤b的产物反应；
步骤d：将氨加入步骤c的经透析的混合物中，并将混合物倒入培养皿中；
步骤e：使步骤d的产物干燥成膜；
步骤f：将步骤e的膜分成颗粒并在盐水中溶胀；
步骤g；将步骤f的产物加入注射器中并压热处理；
步骤h （任选）：步骤f的产物可以用BDDE溶液或本文所述的其它交联剂进行第二最终交联过程，并洗涤。
实施例12：提出的组织充填物的制备方法
本文所述的丝/ HA组织填充物可根据以下一般方法制备：
步骤a：可以将透明质酸钠与NaOH溶液混合；
步骤b：可以将BDDE加入到步骤a的溶液中；
步骤c：将步骤b的产物加入丝溶液中并使其反应；
步骤d：将氨加入步骤c的经透析的混合物中，并将混合物倒入培养皿中；
步骤e：使步骤d的产物干燥成膜；
步骤f：将步骤e的膜分成颗粒并在盐水中溶胀；
步骤g；将步骤f的产物加入注射器中并压热处理；
步骤h （任选）：步骤f的产物可以用BDDE溶液或本文所述的其它交联剂进行第二最终交联过程，并洗涤。
实施例13：提出的组织充填物的制备方法
本文所述的丝/ HA组织填充物可根据以下一般方法制备：
步骤a：可以将透明质酸钠与NaOH溶液混合；
步骤b：可以将BDDE加入到步骤a的溶液中；
步骤c：使步骤b的产物反应；
步骤d：将步骤c的产物加入丝溶液中，然后将氨加入其经透析的混合物中，并将混合物倒入培养皿中；
步骤e：使步骤d的产物干燥成膜；
步骤f：将步骤e的膜分成颗粒并在盐水中溶胀；
步骤g；将步骤f的产物加入注射器中并压热处理；
步骤h （任选）：步骤f的产物可以用BDDE溶液或本文所述的其它交联剂进行第二最终交联过程，并洗涤。
实施例14：提出的组织充填物的制备方法
本文所述的丝/ HA组织填充物可根据以下一般方法制备：
步骤a：可以如本文所述制备丝溶液，可以向其加入BDDE的水溶液；
步骤b：可以将HA加入到步骤a的溶液中；
步骤c：可以搅拌步骤b的混合物（例如，5分钟）并使其静置约1天；
步骤d：可以将步骤c所得的凝胶在盐水中静置1周以提供所得组织填充物。
实施例15：提出的组织充填物的制备方法
本文所述的丝/ HA组织填充物可根据以下一般方法制备：
步骤a：可以将BDDE加入到水中；
步骤b：可以将丝溶液加入到步骤a的溶液中，然后可以向其中加入HA；
步骤c：可以搅拌步骤b的混合物（例如，5分钟）并使其静置约1天；
步骤d：可以将步骤c所得的凝胶在盐水中静置1周以提供所得组织填充物。
实施例16：提出的组织充填物的制备方法
本文所述的丝/ HA组织填充物可根据以下一般方法制备：
步骤a：可以将BDDE加入到水中；
步骤b：可以将HA加入到步骤a的溶液中；
步骤c：可以将丝溶液加入到步骤b的混合物中，并且可以搅拌所得混合物（例如5分钟）并使其静置约1天；
步骤d：可以将步骤c所得的凝胶在盐水中静置1周以提供所得组织填充物。
实施例17：提出的组织充填物的制备方法
本文所述的丝/ HA组织填充物可根据以下一般方法制备：
步骤a：可以向本文所述的丝溶液中加入溶解于NaOH溶液中的HA （在400 rpm下混合约12小时）；
步骤b：可以将步骤a的溶液脱气；
步骤c：可以将步骤b的溶液与本文所述的交联剂（例如BDDE）在50℃下混合约10-20分钟；
步骤d：将交联凝胶与盐酸利多卡因混合；
步骤e：调节的交联溶液的透析可以进行3天，然后用PBS透析2天，然后用水透析1天；
步骤f：然后将过滤的所得产物冻干以获得固体；
步骤g：将固体溶于PBS中，然后培育；
步骤h （任选）：可以将游离HA加入到步骤g的产物中；
步骤i：步骤g或h的所得产物可以通过蒸汽压热处理灭菌。
实施例18：提出的组织充填物的制备方法
本文所述的丝/ HA组织填充物可根据以下一般方法制备：
步骤a：可以将HA溶解（在400 rpm下混合约12小时）在NaOH溶液中；
步骤b：可以将丝溶液加入到步骤a的溶液中，并可以将所得混合物脱气；
步骤c：可以将步骤b的溶液与本文所述的交联剂（例如BDDE）在50℃下混合约10-20分钟；
步骤d：将交联凝胶与盐酸利多卡因混合；
步骤e：调节的交联溶液的透析可以进行3天，然后用PBS透析2天，然后用水透析1天；
步骤f：然后将过滤的所得产物冻干以获得固体；
步骤g：将固体溶于PBS中，然后培育；
步骤h （任选）：可以将游离HA加入到步骤g的产物中；
步骤i：步骤g或h的所得产物可以通过蒸汽压热处理灭菌。
实施例19：提出的组织充填物的制备方法
本文所述的丝/ HA组织填充物可根据以下一般方法制备：
步骤a：可以将HA溶解（在400 rpm下混合约12小时）在NaOH溶液中；
步骤b：可以将步骤a的溶液脱气；
步骤c：可以将丝溶液加入到步骤b的溶液中，并且可以将所得混合物与本文所述的交联剂（例如BDDE）在50℃下混合约10-20分钟；
步骤d：将交联凝胶与盐酸利多卡因混合；
步骤e：调节的交联溶液的透析可以进行3天，然后用PBS透析2天，然后用水透析1天；
步骤f：然后将过滤的所得产物冻干以获得固体；
步骤g：将固体溶于PBS中，然后培育；
步骤h （任选）：可以将游离HA加入到步骤g的产物中；
步骤i：步骤g或h的所得产物可以通过蒸汽压热处理灭菌。
实施例20：提出的组织充填物的制备方法
本文所述的丝/ HA组织填充物可根据以下一般方法制备：
步骤a：可以将HA溶解（在400 rpm下混合约12小时）在NaOH溶液中；
步骤b：可以将步骤a的溶液脱气；
步骤c：可以将步骤b的溶液与本文所述的交联剂（例如BDDE）在50℃下混合约10-20分钟；
步骤d：可以将丝溶液加入到步骤c的产物中，并且可以将混合物与盐酸利多卡因混合；
步骤e：调节的交联溶液的透析可以进行3天，然后用PBS透析2天，然后用水透析1天；
步骤f：然后将过滤的所得产物冻干以获得固体；
步骤g：将固体溶于PBS中，然后培育；
步骤h （任选）：可以将游离HA加入到步骤g的产物中；
步骤i：步骤g或h的所得产物可以通过蒸汽压热处理灭菌。
实施例21：由丝和用BDDE交联的透明质酸组成的真皮填充物配制物
材料：1,4-丁二醇二缩水甘油醚（BDDE；Sigma-Aldrich）；透明质酸钠（HA；Lifecore）；丝，6%溶液（Silk Therapeutics）；氢氧化钠，0.1N溶液（BDH）；盐酸，5N （Ricca Chemical）；磷酸盐缓冲盐水（PBS；20x；VWR Life Science）。
配方变量：丝分子量：中MW和低MW丝溶液（6%）；HA分子量：1.5 MDa和2.2 MDa；丝浓度：1% v/v （0.6 mg/ml），2% v/v （6 mg/ml），5% v/v （3 mg/ml）和20% v/v （12 mg/ml）。
水凝胶交联：（a）将6%丝溶液加入到0.1N氢氧化钠中；（b）根据丝含量，在200-400rpm的速度的置顶搅拌下，将HA粉末逐渐加入到上述制备的溶液中；轻轻搅拌以避免产生过多的气泡；继续搅拌至HA完全溶解；（c）向上述溶液中加入1% w/w BDDE；（d）加热至50℃并保持以100-200 rpm搅拌30分钟；（e）使交联的凝胶冷却至低于30℃；（f）加入5N盐酸以调节pH至7.0-7.4。
水凝胶透析：（a）使透析盒水合2分钟；擦去过量的水并测量空盒的总质量；（b）将约18g水凝胶配制物加入透析盒中；测量加载凝胶后盒的总质量；（c）将透析盒悬浮于2L的1x PBS缓冲液中并设定磁力搅拌为200 rpm；记录透析开始的时间，并在透析4小时、24小时和48小时后更换PBS缓冲液；72小时后收集凝胶。
表征：剪切储能模量（G'）和粘度；酶降解；BDDE残留；交联密度；30天动物研究；细胞毒性；细菌内毒素；浊度。
粘弹性：使用Discovery HR-1混合流变仪（TA Instruments）测定真皮填充物配制物的储能模量（G'）和复数粘度（η）。通过以每十进制间隔10个数据点从0.1 Hz到10 Hz的扫描振荡频率测试样品。记录数据并在5 Hz剪切速率下比较。具有恒定HA浓度和可变丝浓度的水凝胶配制物（透析后）的G'和γ数据示于表19。在该批料中，使用1.5 MDa分子量HA。
表19：具有恒定HA浓度的水凝胶的粘弹性
Figure 572799DEST_PATH_IMAGE029
*: 透析后水凝胶吸收PBS缓冲液，导致体积增加。HA和丝的浓度根据稀释因子重新计 算。
HA和丝的恒定总浓度为30 mg/ml的水凝胶配制物（透析后）的G'和γ数据总结在表20中。
表20：具有恒定总浓度的水凝胶的粘弹性
Figure 686248DEST_PATH_IMAGE030
*: 透析后水凝胶吸收PBS缓冲液，导致体积增加。HA和丝的浓度根据稀释因子重新计算。
水凝胶可逆性：制备含有和不含丝蛋白的水凝胶并透析。最终的组成分别对于丝-HA水凝胶为33.3 mg/ml HA + 8 mg/ml丝，对于HA水凝胶为33.3 mg/ml HA。将1g±100g以上制备的水凝胶加入20 ml玻璃小瓶中，随后加入3 ml的16U/ml透明质酸酶的1×PBS溶液。将样品在37℃下培育3天。对照样品也使用HA水凝胶制备，没有加入透明质酸酶。图28中示出了降解曲线。在3天培育过程中，没有透明质酸酶的对照样品没有降解。在培育的前6小时内，水凝胶吸收缓冲液并溶胀，导致质量百分比的增加。丝-HA水凝胶和HA水凝胶在3天培育后完全降解。在丝存在的情况下，水凝胶比纯HA水凝胶消化更快。培育12小时后，大约90%的丝-HA水凝胶被酶消化。
交联剂（BDDE）残留：使用Millennium Research Laboratories, Inc.（MRL）的GC-FID测试表19中列出的样品的BDDE残留物。MRL测试报告MRL18JAN06表明，在所有样品中都没有检测到BDDE残留，满足等于或小于2 ppm的接受标准。
交联密度：表19中所列的样品进一步被透明质酸酶完全消化，并使用NMR分析以确定交联密度，以改性百分比表示。测试结果列于表21 （MRL测试报告MRL18JAN07）。
表21：各种配制物的改性度百分比（交联密度）
Figure 549162DEST_PATH_IMAGE031
。
动物研究：在WuXi AppTec Minneapolis, MN facility进行使用豚鼠模型的30天动物研究，以解决产品安全问题。在该研究中有2个终止时间点，7天和30天，以评价组织应答。该研究总结在WuXi Apptec报告D28195 （项目C19879）中。两个对照样品（JuvedermUltra Plus和表19中的样品C2）和6种配制物（表19中的样品A-F）用于皮内注射。样品A-F和对照样品C2在注射前在Nelson Laboratories，LLC中蒸汽灭菌（规程201707289）。研究程序简述如下：在本研究中使用二十四只动物，每次十二只。每只动物接受使用穿线技术的六个背部皮内注射（注射线而不是推注）：一个对照点在脊柱的一侧，第二个对照点在对侧（两侧由动物交替指定）和四个测试点，其中至多一次注射给定的测试制品（右侧和左侧在动物中交替指定）。在整个研究中每天观察动物以评估一般健康。在预定的终止日期人道地对动物实施安乐死。将所有动物的植入部位和周围组织切除，置于***中，加工成石蜡块，然后进行组织病理学评价。代表性的组织学图像和病理学发现总结在表22中。总之，没有提示在任何植入部位中的脓毒症或免疫应答。
Figure 773470DEST_PATH_IMAGE032
细菌内毒素：从用于细菌内毒素试验的动物研究（列于表19）中使用的7种配制物中选择三种灭菌后样品（样品A、样品E和样品C2）。使用动力学比浊法测定内毒素水平。测试结果列于表23中，并且低于20 EU/ml的接受标准（Nelson Labs Study Report1006775-S01）。
表23: 内毒素测试结果
Figure 834967DEST_PATH_IMAGE033
。
生物相容性-细胞毒性：从动物研究（列于表19）中使用的7种配制物中选择四种灭菌后样品（样品A、样品B、样品D和样品E）用于ISO-10993-5细胞毒性测试（使用L-929小鼠成纤维细胞的ISO MEM洗脱）。这些样品代表在测试的真皮填充物配制物中的中分子量丝和低分子量丝的最高和最低丝含量。测试报告表明所有测试样品评分为0级，意味着无细胞毒性（Wuxi Apptec报告D28287-1、D28287-2、D28287-3、D28287-4）。
浊度：纯HA水凝胶在自然光下澄清。当HA与丝蛋白交联时，水凝胶变得略微混浊（混浊），并且浊度取决于配制物中的总丝浓度。浊度通过配备有InGaAs积分球的λX50S UV-Vis分光光度计（PerkinElmer）测量，该积分球除了收集标准透射光之外，还具有收集前向散射光的能力。丝-HA水凝胶的浊度测量示于图35中。黑色曲线是标准透射率，红色曲线由显示显著前向散射的球体收集。将不含丝的纯HA水凝胶用作对照样品。图36中的曲线几乎相同，表明纯HA凝胶的非常少的散射。浊度测量结果表明丝-HA水凝胶具有散射光的能力，当用作真皮填充物时，这可以消除丁达尔效应。
结论：基于具有各种丝含量和恒定总浓度的恒定HA浓度开发真皮填充物配制物。这些配制物提供了宽范围的储能模量、粘度和交联密度，这可以导致各种应用。丝-HA水凝胶是酶可逆的。水凝胶配制物透析后的交联剂残留符合接受标准。细胞毒性试验表明，丝含量为0.48 mg/ml至9.6 mg/ml的丝-HA水凝胶没有细胞毒性和生物相容性。30天的动物研究证明所有丝含量最高达9.6 mg/ml的配制物都不会引起脓毒症并且没有免疫应答。
实施例22：由丝和与PEGDE （PEGDGE）交联的透明质酸组成的真皮填充物配制物
交联剂：聚（乙二醇）二缩水甘油醚（PEGDE），平均分子量Mn =500。反应条件：与BDDE交联（实施例21）相同。PEGDE的总量等于BDDE的摩尔数。
表24: PEGDE交联配制物和测试结果
Figure 119318DEST_PATH_IMAGE034
*: 透析后水凝胶吸收PBS缓冲液，导致体积增加。HA和丝的浓度根据稀释因子重新计算。
实施例23：动物研究C20419
动物研究C20419的样品的配方和表征如表25所示：
Figure 469528DEST_PATH_IMAGE035
。
图37-46显示了研究结果。图37是注射有对照真皮填充物的豚鼠中皮内区域的代表性组织学图片。图38是注射有本发明HA真皮填充物（24 mg/ml HA，PEGDE交联，样品C4-表25）的豚鼠中皮内区域的代表性组织学图片。图39是注射有本发明的丝-HA真皮填充物（22.8 mg/ml HA，1.2 mg/ml丝，PEGDE交联，样品L-表25）的豚鼠中皮内区域的代表性组织学图片。图40是注射有本发明的丝-HA真皮填充物（23.76 mg/ml HA，0.24 mg/ml丝，PEGDE交联，样品M-表25）的豚鼠中皮内区域的代表性组织学图片。图41是注射有本发明的丝-HA真皮填充物（22.8 mg/ml HA，1.2 mg/ml丝，PEGDE交联，样品N-表25）的豚鼠中皮内区域的代表性组织学图片。图42是注射有本发明的丝-HA真皮填充物（22.8 mg/ml HA，1.2 mg/ml丝，PEGDE交联，样品O-表25）的豚鼠中皮内区域的代表性组织学照片。
图43-46是表25配制物在植入后7天的组织学结果的图表示（评分：0-正常；1-极少；2-轻度；3-中度；和4-重度）。图43是显示植入后7天凝胶降解的组织学结果的图；BDDE交联的配制物大部分被降解。图44是显示植入7天后凝胶迁移的组织学结果的图。图45是显示植入7天后炎症组织学结果的图；没有观察到组织坏死，没有观察到血液凝固，并且在对照配制物和一些测试配制物上观察到极少的胶原沉积。图46是显示植入后7天巨噬细胞的组织学结果的图。
实施例24：PEGDE交联的丝-HA水凝胶的性质：1）剪切储能模量（G'），和2）透析过程中的溶胀比
真皮填充物制备，材料：聚（乙二醇）二缩水甘油醚（PEGDE），Mn = 500，Sigma-Aldrich；透明质酸钠（HA），Lifecore；丝，6%溶液，Silk Inc.；氢氧化钠，0.1N溶液，BDH；盐酸，5N，Ricca Chemical；磷酸盐缓冲盐水（PBS），20x，VWR Life Science。
真皮填充物配方变量：丝分子量：中MW和低MW丝溶液（6%）；HA分子量：700 KDa和1.5 MDa；丝浓度（初始）：0-15 mg/ml。
高浓度水凝胶交联：将6%丝溶液加入到0.1N氢氧化钠中；在温和搅拌下向上述制备的溶液中逐渐加入100 mg/ml混合分子量HA （700 KDa/1.5 MDA = 90/10）直至HA完全溶解；将PEGDE加入上述溶液中；将水浴加热至40℃，并在水浴中保持交联45分钟；使交联的凝胶冷却至低于30℃；将5N盐酸加入1x PBS中，将凝胶稀释至40 mg/ml，并调节最终pH至7.0-7.4。
低浓度水凝胶交联：将6%丝溶液加入到0.1N氢氧化钠中；在温和搅拌下向上述制备的溶液中逐渐加入25 mg/ml的1.5 MDa HA，直至HA完全溶解；将PEGDE加入上述溶液中；将水浴加热至40℃，并在水浴中保持交联45分钟；使交联的凝胶冷却至低于30℃；向交联的凝胶中加入5N盐酸，并调节最终pH至7.0-7.4。
水凝胶透析：使透析盒（20 KDa MWCO）水合2分钟；擦去过量的水并测量空盒的总质量；将约18g水凝胶加入透析盒中；测量加载凝胶后盒的总质量；将透析盒悬浮于2L的1xPBS缓冲液中并设定磁力搅拌为200 rpm；透析72小时后收集凝胶。
粘弹性
使用Discovery HR-1混合流变仪（TA Instruments）测定水凝胶配制物的储能模量（G'）。通过以每十进制间隔10个数据点从0.1 Hz到10 Hz的扫描振荡频率测试样品。记录数据并在5 Hz剪切速率下比较。在具有恒定HA浓度和可变丝浓度的透析之前和之后的水凝胶配制物的G'示于图47A和47B中。对于在高初始HA浓度下通过PEGDE交联的水凝胶，由于丝与总HA的相对低的比率，丝浓度对G'的影响是最小的。它也可以有助于含有90%的低分子量（700 KDa）的混合HA，其对丝浓度的变化不敏感。对于在低初始HA浓度下通过PEGDE交联的水凝胶，当向配制物中加入更多的丝时，G'增加。当初始HA浓度低时，丝浓度的变化对G'有更大的影响，并且对高分子量HA （1.5 MDa）也有更大的影响。对于两种交联方法，没有观察到丝分子量对G'的显著影响。
透析期间的溶胀率：没有明显的趋势表明，对于两种交联过程，在透析过程中，加入到水凝胶配制物中的丝的量对凝胶溶胀有任何影响，并且在中分子量和低分子量的丝之间没有显著的差异（图48A和48B）。
如果混合HA在高初始HA浓度下通过PEGDE交联，则水凝胶配制物中的丝浓度对G'具有最小的影响，但是如果单一高MW HA在低初始HA浓度下交联，则与G'成比例。当比较HA被PEGDE交联时对G'和溶胀的贡献时，凝胶配制物中的丝的分子量没有显著差异。
实施例25：丝-HA真皮填充物配制物中的丝浓度
材料：丝，6%溶液，Silk, Inc.；磷酸盐缓冲盐水（PBS），20x，VWR Life Science；交联透明质酸（HA）凝胶。
设备：水分分析仪HE53，Mettler Toledo；Cary100 UV/Vis分光光度计。
校准标准曲线：测量中和低分子量6%丝溶液的干含量以确定所述丝溶液的实际干含量（mg/ml）；通过使用1X PBS稀释6%丝溶液来产生一系列标准丝溶液（例如，1 mg/ml丝、0.75 mg/ml丝、0.5 mg/ml丝、0.25 mg/ml丝和0 mg/ml丝）；在石英比色皿中测量每种标准溶液在275 nm的吸光度-吸光度测量可以用200-800 nm的扫描、5 nm的数据间隔和0.1秒的平均收集来进行；将275 nm的吸光度对丝浓度（mg/ml）作图以产生标准曲线。
丝浓度的测定：用1×PBS稀释HA凝胶样品，使得在275 nm的吸光度在0和1.0之间（例如，样品可以用1:12的凝胶与1×PBS的比率稀释，即1200%稀释）；在200 nm-800 nm之间扫描丝-HA凝胶样品相对于1×PBS参比的吸光度，测量每个凝胶样品在275 nm处的吸光度峰；通过无丝样品的吸收信号与校准曲线的截距之间的差异校正凝胶样品的吸收信号，将无丝样品设定为具有0 mg/ml的丝浓度；可以从校准曲线和稀释因子计算丝-HA凝胶样品中的丝浓度。
通过测量一系列具有0 mg/ml至1 mg/ml的不同丝浓度的标准样品在275 nm处的吸收来建立校准曲线。中和低分子量丝溶液的校准曲线示于图49A和49B。中分子量丝的R2值0.99947和低分子量丝的R2值0.99949表明在0-1 mg/ml丝浓度的工作范围内校准曲线是线性的。这些曲线可以用于测定凝胶样品中的丝浓度。
HA-丝水凝胶的丝浓度的测定：如图50A和50B所示，测量每种样品在275 nm的稀释的丝-HA水凝胶的吸收。用校准曲线和稀释因子计算每个样品的丝浓度，总结于表26中。
表26-由校准曲线计算的具有未知丝浓度的丝-HA凝胶的丝浓度
凝胶样品 理论丝浓度（mg/ml） 计算丝浓度（mg/ml）
XHA15M00SX17110201 0 0
XHA15M01SL17103001 0.6 0.49
XHA15M02SL17110201 1.2 1.26
XHA15M05SL17110201 3 3.08
XHA15M01SM17103001 0.6 0.57
XHA15M10SM17103001 6 6.21
XHA15M20SM17103001 12 13.83
实施例26：丝-HA真皮填充物配制物：凝胶不透明度
材料：交联透明质酸（HA）凝胶；磷酸盐缓冲盐水（PBS），20x，VWR Life Science。
设备：Cary100 UV/Vis分光光度计。
样品制备：将约2 mL HA凝胶注入干净的石英比色皿中，使得样品中存在最小量的气泡；使用18G针的注射可帮助减少样品中的气泡量；可以将1×PBS的空白参考样品加入到第二个干净的石英比色皿中（注意：对于不透明度测量，可以使用塑料比色皿，因为塑料比色皿在400 nm-800 nm的可见光范围内没有吸收）。
凝胶不透明度的测量：设定X-扫描范围为200 nm-800 nm，数据间隔为5 nm，平均时间为0.1秒；选择Y模式作为% T用于透射光的测量（注意：也可以测量吸收并且% T可以从吸收值计算）；相对于1X PBS参考标准对凝胶样品进行扫描；数据可保存为CSV文件且可绘制光谱。
凝胶不透明度可以使用UV/Vis分光光度计对标准透射光进行测量。光学透明的样品将透射100%的光，而稍微混浊或浑浊的样品可能仅透射该光的一部分。图51显示了含有丝和不含有丝的HA水凝胶的浊度测量结果。蓝色曲线显示了含有3 mg/mL丝和26 mg/mL HA的丝-HA凝胶样品的透射光的%透射率。红色曲线显示了没有丝和有20 mg/ml HA的样品的透射光，并且显示了比有丝的样品透射更多的光。浊度测量表明，与没有丝的HA凝胶相比，丝-HA凝胶具有更多散射可见光的能力。
实施例27：通过NMR测定的HA水凝胶的改性度（MoD）
改性度（MoD）定义为所有连接的交联剂分子与HA重复单元的摩尔数的化学计量比。MoD中包括交联和单连接的连接剂。MoD通过对来自2.1 ppm HA和1.7 ppm BDDE交联剂或3.0-4.5 ppm PEGDE交联剂的N-乙酰基的信号积分由1H NMR谱测定。
在酶促降解之前，HA水凝胶首先再次透析PBS （1X，2L X5）溶液以除去游离的交联剂。使用Slide-A-Lyzer透析盒（MWCO3.5K，Thermo Scientific，Rockford，IL），并将PBS溶液在RT下搅拌72小时。透析后，取出1 mL HA水凝胶溶液，用Labconco Freezone冻干机（2.5L）冻干，得到干燥粉末。
为了制备NMR样品，将10 mg干粉末放入NMR管（5 mm，Wilmad-LabGlass）中，并加入0.6 mL透明质酸酶（MP Biomedicals，Solon，OH）的氧化氘（D2O，Alfa Aesar，Ward Hill，MA）溶液。透明质酸酶的量为5U/1 mg HA。将NMR管在37℃培育过夜，以使所有HA降解。在Varian MR400 MHz自动NMR***上记录NMR谱。弛豫延迟时间是1秒，扫描数是256。所有数据都使用MestReNova软件（12.0.2版）处理。
实施例28：丝-HA两步交联工艺
丝-HA水凝胶可以用2步交联工艺形成以提高丝结合至HA的效率。对于给定的配制物，在第一步，将所有丝蛋白和小部分低分子量HA加入到pH为10的NaOH溶液中，然后与一部分交联剂反应。不希望受任何特定理论的束缚，据信在该步骤期间，尽可能多的丝与交联剂反应。在第二步中，加入NaOH溶液以稀释步骤1的产物并将pH提高到13。然后将剩余的低分子量HA、所有的高分子量HA和剩余的交联剂加入到溶液中，交联反应完成。
实施例29：HA水凝胶的合成
通过使用不同的HA分子量、交联剂、反应时间、反应温度、HA浓度、交联剂比率、混合方法和搅拌方法合成HA水凝胶。表27和28显示了所采用的各种反应条件和获得的各种水凝胶。
表27
HA MW 700 k, 1.5 M, 2.2 M, 3M, 或具有任意比率的不同MW的混合物
交联剂 PEG500DE和BDDE
反应时间 30 min, 60 min, 90 min, 120 min或240 min
反应温度 40℃或50℃
HA浓度 30 mg/ml, 90 mg/ml, 100 mg/ml和140 mg/ml
交联剂比率 7 Wt.%或10 Wt.%
混合方法 将HA和交联剂预混合在一起或将交联剂逐部分加入HA溶液中
搅拌 有或没有机械搅拌
Figure 497526DEST_PATH_IMAGE036
Figure 679109DEST_PATH_IMAGE037
Figure 868782DEST_PATH_IMAGE038
本文引用的所有专利、专利申请和公开的参考文献都通过引用整体并入本文。虽然已经结合本公开的具体实施方案描述了本公开的方法，但是将理解，其能够进一步修改。此外，本申请旨在涵盖本公开的方法的任何变化、用途或修改，包括本公开的方法所属领域的已知或惯例实践内的与本公开的偏离。

Claims (96)

1.一种生物相容性组织填充物，包含透明质酸（HA）和麻醉剂，其中所述HA的一部分被一个或多个连接剂部分改性，所述连接剂部分包含烷烃或烷基链、醚基和仲醇中的一种或多种，其中所述连接剂部分在所述连接剂的一端连接至所述HA。
2.如权利要求1所述的组织填充物，其中，使用交联剂、交联前体或活化剂来获得改性。
3.如权利要求1或权利要求2所述的组织填充物，其具有约10.0%、约10.1%、约10.2%、约10.3%、约10.4%、约10.5%、约10.6%、约10.7%、约10.8%、约10.9%、约11.0%、约11.1%、约11.2%、约11.3%、约11.4%、约11.5%、约11.6%、约11.7%、约11.8%、约11.9%、约12.0%、约12.1%、约12.2%、约12.3%、约12.4%、约12.5%、约12.6%、约12.7%、约12.8%、约12.9%、约13.0%、约13.1%、约13.2%、约13.3%、约13.4%、约13.5%、约13.6%、约13.7%、约13.8%、约13.9%、约14.0%、约14.1%、约14.2%、约14.3%、约14.4%、约14.5%、约14.6%、约14.7%、约14.8%、约14.9%、约15.0%、约15.1%、约15.2%、约15.3%、约15.4%、约15.5%、约15.6%、约15.7%、约15.8%、约15.9%、约16.0%、约16.1%、约16.2%、约16.3%、约16.4%、约16.5%、约16.6%、约16.7%、约16.8%、约16.9%、约17.0%、约17.1%、约17.2%、约17.3%、约17.4%、约17.5%、约17.6%、约17.7%、约17.8%、约17.9%、约18.0%、约18.1%、约18.2%、约18.3%、约18.4%、约18.5%、约18.6%、约18.7%、约18.8%、约18.9%、约19.0%、约19.1%、约19.2%、约19.3%、约19.4%、约19.5%、约19.6%、约19.7%、约19.8%、约19.9%或约20.0%的改性度（MoD）。
4.如权利要求1至3中任一项所述的组织填充物，其中相对于HA的总量，改性HA的% w/w量为约1%、约2%、约3%、约4%、约5%、约6%、约7%、约8%、约9%、约10%、约11%、约12%、约13%、约14%、约15%、约16%、约17%、约18%、约19%、约20%、约21%、约22%、约23%、约24%、约25%、约26%、约27%、约28%、约29%、约30%、约31%、约32%、约33%、约34%、约35%、约36%、约37%、约38%、约39%、约40%、约41%、约42%、约43%、约44%、约45%、约46%、约47%、约48%、约49%、约50%、约51%、约52%、约53%、约54%、约55%、约56%、约57%、约58%、约59%、约60%、约61%、约62%、约63%、约64%、约65%、约66%、约67%、约68%、约69%、约70%、约71%、约72%、约73%、约74%、约75%、约76%、约77%、约78%、约79%、约80%、约81%、约82%、约83%、约84%、约85%、约86%、约87%、约88%、约89%、约90%、约91%、约92%、约93%、约94%、约95%、约96%、约97%、约98%、约99%或约100%。
5.如权利要求1至4中任一项所述的组织填充物，其中改性HA包括交联HA，其中所述交联HA的交联度为约1%至约100%。
6.如权利要求1至5中任一项所述的组织填充物，其中所述交联HA的交联度为约1%、约2%、约3%、约4%、约5%、约6%、约7%、约8%、约9%、约10%、约11%、约12%、约13%、约14%、约15%、约16%、约17%、约18%、约19%、约20%、约21%、约22%、约23%、约24%、约25%、约26%、约27%、约28%、约29%、约30%、约31%、约32%、约33%、约34%、约35%、约36%、约37%、约38%、约39%、约40%、约41%、约42%、约43%、约44%、约45%、约46%、约47%、约48%、约49%、约50%、约51%、约52%、约53%、约54%、约55%、约56%、约57%、约58%、约59%、约60%、约61%、约62%、约63%、约64%、约65%、约66%、约67%、约68%、约69%、约70%、约71%、约72%、约73%、约74%、约75%、约76%、约77%、约78%、约79%、约80%、约81%、约82%、约83%、约84%、约85%、约86%、约87%、约88%、约89%、约90%、约91%、约92%、约93%、约94%、约95%、约96%、约97%、约98%、约99%或约100%。
7.如权利要求1至6中任一项所述的组织填充物，其中所述交联HA的交联度为约1%至约15%。
8.如权利要求1至7中任一项所述的组织填充物，其中所述改性或交联HA包含含有聚乙二醇（PEG）链的连接剂或交联部分。
9.如权利要求1至8中任一项所述的组织填充物，其中所述交联剂和/或所述交联前体包含环氧基团。
10.如权利要求1至9中任一项所述的组织填充物，其中使用交联剂、交联前体或活化剂获得改性或交联，所述交联剂、交联前体或活化剂选自多环氧连接剂、二环氧连接剂、多环氧-PEG、二环氧-PEG、多缩水甘油基-PEG、二缩水甘油基-PEG、聚丙烯酸酯PEG、二丙烯酸酯PEG、1,4-双（2,3-环氧丙氧基）丁烷、1,4-双缩水甘油氧基丁烷、二乙烯基砜（DVS）、1,4-丁二醇二缩水甘油醚（BDDE）、紫外光、戊二醛、1,2-双（2,3-环氧丙氧基）乙烯（EGDGE）、1,2,7,8-二环氧辛烷（DEO）、双碳二亚胺（BCDI）、季戊四醇四缩水甘油醚（TGE）、己二酰肼（ADH）、双（磺基琥珀酰亚胺基）辛二酸酯（BS）、六亚甲基二胺（HMDA）、1- （2,3-环氧丙基） -2,3-环氧环己烷、碳二亚胺及其任意组合。
11.如权利要求1至9中任一项所述的组织填充物，其中使用多官能环氧化合物获得改性或交联，所述多官能环氧化合物选自1,4-丁二醇二缩水甘油醚（BDDE）、乙二醇二缩水甘油醚（EGDGE）、1,6-己二醇二缩水甘油醚、聚乙二醇二缩水甘油醚、聚丙二醇二缩水甘油醚、聚丁二醇二缩水甘油醚、新戊二醇二缩水甘油醚、聚甘油多缩水甘油醚、二甘油多缩水甘油醚、甘油多缩水甘油醚、三羟甲基丙烷多缩水甘油醚、季戊四醇多缩水甘油醚和山梨醇多缩水甘油醚。
12.如权利要求1至9中任一项所述的组织填充物，其中使用交联剂和/或交联前体获得改性或交联，所述交联剂和/或交联前体选自聚乙二醇二缩水甘油醚、二环氧PEG、PEG二缩水甘油醚、聚氧乙烯双缩水甘油醚、PEGDE和PEGDGE。
13.如权利要求1至9中任一项所述的组织填充物，其中使用平均Mn为约500、约1000、约2000或约6000的聚乙二醇二缩水甘油醚获得改性或交联。
14.如权利要求1至9中任一项所述的组织填充物，其中使用具有约2至约25个乙二醇基团的聚乙二醇二缩水甘油醚获得改性或交联。
15.如权利要求1至9中任一项所述的组织填充物，其中使用交联剂和/或交联前体获得改性或交联，所述交联剂和/或交联前体选自多环氧丝素蛋白连接剂、二环氧丝素蛋白连接剂、多环氧丝素蛋白片段连接剂、二环氧丝素蛋白片段连接剂、多缩水甘油基丝素蛋白连接剂、二缩水甘油基丝素蛋白连接剂、多缩水甘油基丝素蛋白片段连接剂和二缩水甘油基丝素蛋白片段连接剂。
16.如权利要求1至15中任一项所述的组织填充物，其进一步包含有机化合物和/或无机化合物。
17.如权利要求16所述的组织填充物，其中所述无机化合物包括羟基磷灰石。
18.如权利要求17所述的组织填充物，其中所述羟基磷灰石被配制成直径为约1μm至约100μm、约1μm至约10μm、约2μm至约12μm、约3μm至约10μm、约4μm至约15μm、约8μm至约12μm、约5μm至约10μm、约6μm至约12μm、约7μm至约20μm、约9μm至约18μm或约10μm至约25μm的颗粒。
19.如权利要求17或权利要求18所述的组织填充物，其中所述羟基磷灰石的浓度为约0.001%至约5%。
20.如权利要求17至19中任一项所述的组织填充物，其中，所述羟基磷灰石的浓度为约0.001%、约0.002%、约0.003%、约0.004%、约0.005%、约0.006%、约0.007%、约0.008%、约0.009%、约0.01%、约0.011%、约0.012%、约0.013%、约0.014%、约0.015%、约0.016%、约0.017%、约0.018%、约0.019%或约0.02%。
21.如权利要求17至19中任一项所述的组织填充物，其中所述羟基磷灰石的浓度为约0.05%、约0.1%、约0.15%、约0.2%、约0.25%、约0.3%、约0.35%、约0.4%、约0.45%、约0.5%、约0.55%、约0.6%、约0.65%、约0.7%、约0.75%、约0.8%、约0.85%、约0.9%、约0.95%、约1%、约1.05%、约1.1%、约1.15%、约1.2%、约1.25%、约1.3%、约1.35%、约1.4%、约1.45%、约1.5%、约1.55%、约1.6%、约1.65%、约1.7%、约1.75%、约1.8%、约1.85%、约1.9%、约1.95%或约2%。
22.如权利要求16所述的组织填充物，其中所述有机化合物包括选自甘氨酸、L-脯氨酸、丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸和缬氨酸的氨基酸。
23.如权利要求1至22中任一项所述的组织填充物，其中所述HA获自链球菌细菌或获自枯草芽孢杆菌细菌。
24.如权利要求1至23中任一项所述的组织填充物，其中所述活性剂是利多卡因。
25.如权利要求1至24中任一项所述的组织填充物，其中所述组织填充物中活性剂的浓度为约0.001%至约5%。
26.如权利要求24所述的组织填充物，其中所述组织填充物中利多卡因的浓度为约0.3%。
27.如权利要求1至26中任一项所述的组织填充物，其中所述组织填充物为凝胶。
28.如权利要求1至27中任一项所述的组织填充物，其中所述组织填充物为水凝胶。
29.如权利要求1至28中任一项所述的组织填充物，其中所述组织填充物还包含水。
30.如权利要求1至29中任一项所述的组织填充物，其中所述组织填充物中HA的总浓度为约10 mg/mL至约50 mg/mL。
31.如权利要求1至30中任一项所述的组织填充物，其中所述组织填充物中HA的总浓度为约15 mg/mL、约16 mg/mL、17 mg/mL、约18 mg/mL、约19 mg/mL、约20 mg/mL、约21 mg/mL、约22 mg/mL、约23 mg/mL、约24 mg/mL、约25 mg/mL、约26 mg/mL、约27 mg/mL、约28 mg/mL、约29 mg/mL或约30 mg/mL。
32.如权利要求1至31中任一项所述的组织填充物，其中所述组织填充物中改性或交联HA的浓度为约10 mg/mL至约50 mg/mL。
33.如权利要求1至32中任一项所述的组织填充物，其中所述组织填充物中改性或交联HA的浓度为约15 mg/mL、约16 mg/mL、约17 mg/mL、约18 mg/mL、约19 mg/mL、约20 mg/mL、约21 mg/mL、约22 mg/mL、约23 mg/mL、约24 mg/mL、约25 mg/mL、约26 mg/mL、约27 mg/mL、约28 mg/mL、约29 mg/mL或约30 mg/mL。
34.如权利要求1至33中任一项所述的组织填充物，进一步包含丝蛋白或丝蛋白片段（SPF）。
35.如权利要求34所述的组织填充物，其中所述丝蛋白是丝素蛋白。
36.如权利要求34或权利要求35所述的组织填充物，其中所述丝蛋白是基本上不含丝胶蛋白的丝素蛋白。
37.如权利要求34至36中任一项所述的组织填充物，其中所述SPF具有约1 kDa至约250kDa的平均重均分子量。
38.如权利要求34至36中任一项所述的组织填充物，其中所述SPF具有约5 kDa至约150kDa的平均重均分子量。
39.如权利要求34至36中任一项所述的组织填充物，其中所述SPF具有约6 kDa至约17kDa的平均重均分子量。
40.如权利要求34至36中任一项所述的组织填充物，其中所述SPF具有约17 kDa至约39kDa的平均重均分子量。
41.如权利要求34至36中任一项所述的组织填充物，其中所述SPF具有约39 kDa至约80kDa的平均重均分子量。
42.如权利要求34至36中任一项所述的组织填充物，其中所述SPF具有低分子量。
43.如权利要求34至36中任一项所述的组织填充物，其中所述SPF具有中分子量。
44.如权利要求34至36中任一项所述的组织填充物，其中所述SPF具有高分子量。
45.如权利要求34至44中任一项所述的组织填充物，其中所述丝蛋白片段（SPF）具有约1.5至约3.0的多分散性。
46.如权利要求34至45中任一项所述的组织填充物，其中，所述SPF具有最高达60%的结晶度。
47.如权利要求34至46中任一项所述的组织填充物，其中所述SPF的一部分被改性或交联。
48.如权利要求47所述的组织填充物，其中相对于SPF的总量，改性或交联SPF的% w/w量为约1%、约2%、约3%、约4%、约5%、约6%、约7%、约8%、约9%、约10%、约11%、约12%、约13%、约14%、约15%、约16%、约17%、约18%、约19%、约20%、约21%、约22%、约23%、约24%、约25%、约26%、约27%、约28%、约29%、约30%、约31%、约32%、约33%、约34%、约35%、约36%、约37%、约38%、约39%、约40%、约41%、约42%、约43%、约44%、约45%、约46%、约47%、约48%、约49%、约50%、约51%、约52%、约53%、约54%、约55%、约56%、约57%、约58%、约59%、约60%、约61%、约62%、约63%、约64%、约65%、约66%、约67%、约68%、约69%、约70%、约71%、约72%、约73%、约74%、约75%、约76%、约77%、约78%、约79%、约80%、约81%、约82%、约83%、约84%、约85%、约86%、约87%、约88%、约89%、约90%、约91%、约92%、约93%、约94%、约95%、约96%、约97%、约98%、约99%或约100%。
49.如权利要求47或权利要求48所述的组织填充物，其中所述改性或交联SPF的改性或交联度为约1%至约100%。
50.如权利要求47至49中任一项所述的组织填充物，其中所述改性或交联SPF的改性或交联度为约1%、约2%、约3%、约4%、约5%、约6%、约7%、约8%、约9%、约10%、约11%、约12%、约13%、约14%、约15%、约16%、约17%、约18%、约19%、约20%、约21%、约22%、约23%、约24%、约25%、约26%、约27%、约28%、约29%、约30%、约31%、约32%、约33%、约34%、约35%、约36%、约37%、约38%、约39%、约40%、约41%、约42%、约43%、约44%、约45%、约46%、约47%、约48%、约49%、约50%、约51%、约52%、约53%、约54%、约55%、约56%、约57%、约58%、约59%、约60%、约61%、约62%、约63%、约64%、约65%、约66%、约67%、约68%、约69%、约70%、约71%、约72%、约73%、约74%、约75%、约76%、约77%、约78%、约79%、约80%、约81%、约82%、约83%、约84%、约85%、约86%、约87%、约88%、约89%、约90%、约91%、约92%、约93%、约94%、约95%、约96%、约97%、约98%、约99%或约100%。
51.如权利要求47至50中任一项所述的组织填充物，其中，所述改性或交联SPF的改性或交联度为约1%至约15%。
52.如权利要求47至51中任一项所述的组织填充物，其中，所述改性或交联SPF的改性或交联度为约1%、约2%、约3%、约4%、约5%、约6%、约7%、约8%、约9%、约10%、约11%、约12%、约13%、约14%和约15%中的一个或多个。
53.如权利要求47至52中任一项所述的组织填充物，其中，所述改性或交联SPF包含含有烷烃或烷基链和/或醚基的连接剂或交联部分，其中所述连接剂或交联部分在所述连接剂或交联部分的一端连接至所述SPF。
54.如权利要求47至53中任一项所述的组织填充物，其中，所述改性或交联SPF包含含有聚乙二醇（PEG）链的连接剂或交联部分。
55.如权利要求47至54中任一项所述的组织填充物，其中，所述改性或交联SPF包含含有仲醇的连接剂或交联部分。
56.如权利要求47至55中任一项所述的组织填充物，其中，使用改性剂或交联剂、改性前体或交联前体、或活化剂来获得改性或交联。
57.如权利要求56所述的组织填充物，其中，所述改性剂或交联剂和/或所述改性前体或交联前体包含环氧基。
58.如权利要求47至57中任一项所述的组织填充物，其中使用改性剂或交联剂、改性或交联前体或活化剂获得改性或交联，所述改性剂或交联剂、改性或交联前体或活化剂选自多环氧连接剂、二环氧连接剂、多环氧-PEG、二环氧-PEG、多缩水甘油基-PEG、二缩水甘油基-PEG、聚丙烯酸酯PEG、二丙烯酸酯PEG、1,4-双（2,3-环氧丙氧基）丁烷、1,4-双缩水甘油氧基丁烷、二乙烯基砜（DVS）、1,4-丁二醇二缩水甘油醚（BDDE）、UV光、戊二醛、1,2-双（2,3-环氧丙氧基）乙烯（EGDGE）、1,2,7,8-二环氧辛烷（DEO）、双碳二亚胺（BCDI）、季戊四醇四缩水甘油醚（PETGE）、己二酰肼（ADH）、双（磺基琥珀酰亚胺基）辛二酸酯（BS）、六亚甲基二胺（HMDA）、1- （2,3-环氧丙基） -2,3-环氧环己烷、碳二亚胺及其任意组合。
59.如权利要求47至57中任一项所述的组织填充物，其中使用多官能环氧化合物获得改性或交联，所述多官能环氧化合物选自1,4-丁二醇二缩水甘油醚（BDDE）、乙二醇二缩水甘油醚（EGDGE）、1,6-己二醇二缩水甘油醚、聚乙二醇二缩水甘油醚、聚丙二醇二缩水甘油醚、聚丁二醇二缩水甘油醚、新戊二醇二缩水甘油醚、聚甘油多缩水甘油醚、二甘油多缩水甘油醚、甘油多缩水甘油醚、三羟甲基丙烷多缩水甘油醚、季戊四醇多缩水甘油醚和山梨醇多缩水甘油醚。
60.如权利要求47至57中任一项所述的组织填充物，其中使用选自聚乙二醇二缩水甘油醚、二环氧PEG、PEG二缩水甘油醚、聚氧乙烯双缩水甘油醚、PEGDE和PEGDGE的改性剂或交联剂和/或改性或交联前体获得改性或交联。
61.如权利要求47至57中任一项所述的组织填充物，其中使用具有约500、约1000、约2000或约6000的平均Mn的聚乙二醇二缩水甘油醚获得改性或交联。
62.如权利要求47至57中任一项所述的组织填充物，其中使用具有约2至约25个乙二醇基团的聚乙二醇二缩水甘油醚获得改性或交联。
63.如权利要求47至57中任一项所述的组织填充物，其中使用改性剂或交联剂和/或改性或交联前体来获得改性或交联，所述改性剂或交联剂和/或改性或交联前体选自多环氧丝素蛋白连接剂、二环氧丝素蛋白连接剂、多环氧丝素蛋白片段连接剂、二环氧丝素蛋白片段连接剂、多缩水甘油基丝素蛋白连接剂、二缩水甘油基丝素蛋白连接剂、多缩水甘油基丝素蛋白片段连接剂和二缩水甘油基丝素蛋白片段连接剂。
64.如权利要求47至63中任一项所述的组织填充物，其中所述SPF的一部分交联至HA。
65.如权利要求47至64中任一项所述的组织填充物，其中所述SPF的一部分交联至SPF。
66.如权利要求47至65中任一项所述的组织填充物，其中所述组织填充物为凝胶。
67.如权利要求47至66中任一项所述的组织填充物，其中所述组织填充物为水凝胶。
68.如权利要求47至67中任一项所述的组织填充物，其中所述组织填充物进一步包含水。
69.如权利要求47至68中任一项所述的组织填充物，其中所述组织填充物中SPF的总浓度为约0.1 mg/mL至约15 mg/mL。
70.如权利要求47至69中任一项所述的组织填充物，其中所述组织填充物中SPF的总浓度为约0.1 mg/mL、约0.5 mg/mL、约1 mg/mL、约1.5 mg/mL、约2 mg/mL、约2.5 mg/mL、约3mg/mL、约3.5 mg/mL、约4 mg/mL、约4.5 mg/mL、约5 mg/mL、约5.5 mg/mL、约6 mg/mL、约6.5mg/mL、约7 mg/mL、约7.5 mg/mL、约8 mg/mL、约8.5 mg/mL、约9 mg/mL、约9.5 mg/mL、约10mg/mL、约10.5 mg/mL、约11 mg/mL、约11.5 mg/mL、约12 mg/mL、约12.5 mg/mL、约13 mg/mL、约13.5 mg/mL、约14 mg/mL、约14.5 mg/mL或约15 mg/mL。
71.如权利要求47至70中任一项所述的组织填充物，其中所述组织填充物中改性或交联SPF的浓度为约0.1 mg/mL至约15 mg/mL。
72.如权利要求47至71中任一项所述的组织填充物，其中所述组织填充物中改性或交联SPF的浓度为约0.1 mg/mL、约0.5 mg/mL、约1 mg/mL、约1.5 mg/mL、约2 mg/mL、约2.5mg/mL、约3 mg/mL、约3.5 mg/mL、约4 mg/mL、约4.5 mg/mL、约5 mg/mL、约5.5 mg/mL、约6mg/mL、约6.5 mg/mL、约7 mg/mL、约7.5 mg/mL、约8 mg/mL、约8.5 mg/mL、约9 mg/mL、约9.5mg/mL、约10 mg/mL、约10.5 mg/mL、约11 mg/mL、约11.5 mg/mL、约12 mg/mL、约12.5 mg/mL、约13 mg/mL、约13.5 mg/mL、约14 mg/mL, 约14.5 mg/mL或约15 mg/mL。
73.如权利要求1至72中任一项所述的组织填充物，其中所述组织填充物是真皮填充物。
74.如权利要求1至73中任一项所述的组织填充物，其中所述组织填充物是可生物降解的。
75.如权利要求1至74中任一项所述的组织填充物，其中所述组织填充物是可注射的。
76.如权利要求1至75中任一项所述的组织填充物，其中所述组织填充物具有约25 Pa至约1500 Pa的储能模量（G'）。
77.如权利要求1至76中任一项所述的组织填充物，其中，所述组织填充物的储能模量（G'）为约25 Pa、约26 Pa、约27 Pa、约28 Pa、约29 Pa、约30 Pa、约31 Pa、约32 Pa、约33Pa、约34 Pa、约35 Pa、约36 Pa、约37 Pa、约38 Pa、约39 Pa、约40 Pa、约41 Pa、约42 Pa、约43 Pa、约44 Pa、约45 Pa、约46 Pa、约47 Pa、约48 Pa、约49 Pa、约50 Pa、约51 Pa、约52Pa、约53 Pa、约54 Pa、约55 Pa、约56 Pa、约57 Pa、约58 Pa、约59 Pa、约60 Pa、约61 Pa、约62 Pa、约63 Pa、约64 Pa、约65 Pa、约66 Pa、约67 Pa、约68 Pa、约69 Pa、约70 Pa、约71Pa、约72 Pa、约73 Pa、约74 Pa、约75 Pa、约76 Pa、约77 Pa、约78 Pa、约79Pa、约80 Pa、约81 Pa、约82 Pa，约83 Pa、约84 Pa、约85 Pa、约86 Pa、约87 Pa、约88 Pa、约89 Pa、约90Pa、约91 Pa、约92 Pa、约93 Pa、约94 Pa、约95 Pa、约96 Pa、约97 Pa、约98 Pa、约99 Pa、约100 Pa、约101 Pa、约102 Pa、约103 Pa、约104 Pa、约105 Pa、约106 Pa、约107 Pa、约108Pa、约109 Pa、约110 Pa、约111 Pa、约112 Pa、约113 Pa、约114 Pa、约115 Pa、约116 Pa、约117 Pa、约118 Pa、约119 Pa、约120 Pa、约121 Pa、约122 Pa、约123 Pa、约124 Pa或约125Pa。
78.如权利要求76或权利要求77所述的组织填充物，其中G'通过约0.1 Hz至约10 Hz的振荡应力测量。
79.如权利要求76至78中任一项所述的组织填充物，其中G'通过约1 Hz的振荡应力测量。
80.如权利要求76至78中任一项所述的组织填充物，其中G'通过约5 Hz的振荡应力测量。
81.如权利要求76至78中任一项所述的组织填充物，其中G'通过约10 Hz的振荡应力测量。
82.如权利要求1至81中任一项所述的组织填充物，其中所述组织填充物具有约1 Pa·s至约10 Pa·s的复数粘度。
83.如权利要求1至82中任一项所述的组织填充物，其中所述组织填充物具有约1 Pa·s、约1.5 Pa·s、约2 Pa·s、约2.5 Pa·s、约3 Pa·s、约3.5 Pa·s、约4 Pa·s、约4.5Pa·s、约5 Pa·s、约5.5 Pa·s、约6 Pa·s、约6.5 Pa·s、约7 Pa·s、约7.5 Pa·s、约8Pa·s、约8.5 Pa·s、约9 Pa·s、约9.5 Pa·s或约10 Pa·s的复数粘度。
84.如权利要求82或83所述的组织填充物，其中所述复数粘度通过约0.1 Hz至约10 Hz的振荡应力测量。
85.如权利要求82至84中任一项所述的组织填充物，其中所述复数粘度通过约1 Hz的振荡应力测量。
86.如权利要求82至84中任一项所述的组织填充物，其中所述复数粘度通过约5 Hz的振荡应力测量。
87.一种处理有需要的对象的状况的方法，其包括向所述对象施用治疗有效量的如权利要求1至86中任一项所述的组织填充物。
88.如权利要求87所述的方法，其中所述状况是皮肤状况。
89.如权利要求88的方法，其中所述皮肤状况选自皮肤脱水、皮肤弹性缺乏、皮肤粗糙、皮肤紧致缺乏、皮肤拉伸线、皮肤拉伸痕、皮肤苍白、真皮起皮、面颊凹陷、薄唇、后眼窝缺陷、面部褶皱和皱纹。
90.一种在有需要的对象中进行美容处理的方法，所述方法包括向所述对象施用有效量的如权利要求1至86中任一项所述的组织填充物。
91.如权利要求87至90中任一项所述的方法，其中将所述组织填充物施用至所述对象的真皮区域。
92.如权利要求87-91中任一项所述的方法，其中所述方法是增大、重建、治疗疾病、治疗病症、矫正身体部分、区域或部位的缺陷或瑕疵。
93.如权利要求87到92中任一项所述的方法，其中所述方法是面部增大、面部重建、治疗面部疾病、治疗面部病症、处理面部缺陷或处理面部瑕疵。
94.如权利要求87至93中任一项所述的方法，其中所述组织填充物抗生物降解、生物侵蚀、生物吸收和/或生物再吸收至少约3天、约7天、约14天、约21天、约28天、约1个月、约2个月、约3个月、约4个月、约5个月或约6个月。
95.如权利要求87至94中任一项所述的方法，其中与由包含多糖和利多卡因的对照组织填充物诱导的炎症应答相比，向所述对象施用所述组织填充物导致炎症应答降低，其中所述对照组织填充物不包含丝蛋白片段（SPF）。
96.如权利要求87至95中任一项所述的方法，其中与由包含多糖和利多卡因的对照组织填充物诱导的胶原产生相比，向所述对象施用所述组织填充物导致胶原产生增加，其中所述对照组织填充物不包含丝蛋白片段（SPF）。
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