CN111233774B - 一种胺基嘧啶类化合物 - Google Patents
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- C07D239/50—Three nitrogen atoms
Abstract
本发明提供了一种结构新颖的式(I)胺基嘧啶类化合物及其制备方法与应用。该胺基嘧啶类化合物为式(Ⅰ)所示的化合物，或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物、前药、立体异构体或互变异构体等。本发明提供的胺基嘧啶类化合物对多种癌细胞都具有较好的增殖抑制作用，具有较低的肿瘤细胞抑制浓度，化合物活性显著提升，并且对肿瘤细胞具有较好的选择性，并且具有较好的溶解性，有望成为治疗由EGFR突变引起的恶性肿瘤细胞异常增殖疾病的特效药。
Description
技术领域
本发明属于药物化学领域，具体为一种2,4,6-三胺基嘧啶类EGFR抑制剂，以及这种抑制剂的制备方法和用途。
背景技术
蛋白酪氨酸激酶是一类将磷酸基团从ATP催化转移到位于蛋白质底物的酪氨酸残基的酶，其在正常细胞生长中起作用。许多生长因子受体蛋白通过酪氨酸激酶起作用，并且通过该过程影响信号，进而调节细胞生长。然而，在某些条件下，这些受体或者突变或者过量表达，变得异常，引起细胞繁殖不受控制，导致肿瘤生长，最终引发熟知的疾病—癌。生长因子受体蛋白酪氨酸激酶抑制剂通过抑制上述磷酸化过程，起到治疗癌症的作用。
表皮生长因子受体EGFR亦称c-erbB1/Her1，它和neu致癌基因的产物(亦称c-erbB2/Her2)均属于EGF受体超家族的成员。EGF受体超家族则属于受体酪氨酸激酶这一大家族。他们在细胞表面与特异性的生长因子或者天然配基入EGF或TGFα相互作用，从而激活受体酪氨酸激酶。通常这将激活一连串下游信号蛋白，导致基因表达改变和生长速度加快。
EGF受体是分子量为170,000的跨膜糖蛋白，且在许多类型的上皮细胞上都有发现，它至少可被3种配给-EGF\TGF-α(转化生长因子α)和双调蛋白(amphiregulin)激活。表皮生长因子(EGF)和转化生长因子α(TGF-α)都已经被证明可和EGF受体结合并导致细胞增殖和肿瘤生长。这些生长因子不和Her2结合(Ulrich和Schlesinger，1990，CELL61,203)。与借助自身二聚化性质诱导受体二聚化的几个生长因子家族(如PDGF)不同，单体生长因子如EGF具有2各受体结合位点，因此，它可以交联两个邻近的EGF受体(Lemmon等，1997，EMBOJ.16,281)。
当其与生长因子配体(例如表皮生长因子(EGF))结合时，受体可以与附加的EGFR分子发生同源二聚，或者与另一家族成员(例如erbB2(HER2)、erbB3(HER3)、或者erbB4(HER4))发生异源二聚。erbB受体的同源二聚和/或异源二聚导致胞内域中关键酪氨酸残基的磷酸化，并且导致对参与细胞增殖和生存的许多细胞内信号传导通路的刺激。erbB家族信号传导的失调促进增殖、侵入、转移、血管生成、和肿瘤细胞生存，并且已在许多的人类癌症中(包括肺癌、头颈部癌和乳腺癌等)得到描述。
EGFR是erbB受体家族的跨膜蛋白酶氨酸激酶成员。当与生长因子配体(例如表皮生长因子(EGF))结合时，受体可以与附加的EGFR分子发生同源二聚，或者与另一家族成员(例如erbB2(HER2)、erbB3(HER3)、或者erbB4(HER4))发生异源二聚。erbB家族信号传导的失调促进增殖、侵入、转移、血管生成、和肿瘤细胞生存，并且已在许多(包括肺癌、头颈部癌和乳腺癌的那些)人类癌症中得到描述。因此，erbB家族代表抗癌药物开发的合理靶点，靶向EGFR或erbB2的许多药剂现在是临床上可用的，包括吉非替尼、厄洛替尼、拉帕替尼等。
EGFR属于酪氨酸激酶抑制剂型受体，其在细胞增殖、血管生成、肿瘤侵袭、转移及细胞凋亡的过程中发挥着至关重要的作用。研究表明在许多实体肿瘤中存在EGFR的过度表达或异常突变，通过抑制EGFR酪氨酸的激酶活性，可抑制肿瘤的生长。通过对EGFR结构的分析，选择其特定部位作为靶点，干扰其信号传导，从而达到抑制肿瘤细胞生长的目的，已经成为开发抗肿瘤药物的新思路。
酪氨酸激酶抑制剂通过选择性地靶向EGFR胞内酪氨酸激酶催化区，与ATP竞争性地结合激酶的口袋，抑制酪氨酸的磷酸化，中断激酶催化引起的下游信号传导，从而达到阻断EGFR过度表达的目的。根据激酶抑制剂与靶点蛋白的结合方式可以分为可逆型抑制剂和不可逆型抑制剂。
目前，针对EGFR靶点的肿瘤靶向小分子药物已经研发到了第3代。第1代EGFR抑制剂为不可逆型抑制剂，如吉非替尼、厄洛替尼，主要用于NSCLC的治疗。虽然第1代药物的NSCLC治疗效果显著，但由于超过50％的患者发生EGFR-T790M突变，从而产生了抗药性。为了解决此类耐药问题，可逆型的第2代EGFR抑制剂阿法替尼、克唑替尼等相继问世。然而，这类药物对EGFR-T790M和野生型EGFR的选择性不佳，且出现了较为严重的副作用，如腹泻、皮疹等。因此，为了解决前两代抑制剂存在的诸多问题，研究者们进而研发出了第三代EGFR抑制剂，WZ4002是被报道的第一个第三代EGFR抑制剂，且其是基于嘧啶结构为母核的抑制剂，体外细胞实验表明，其具有很好的选择性和抑制活性；Sjin课题组筛选出的5-三氟甲基-2,4-二胺基嘧啶为母核的抑制剂也表现出了较好的体内体外的实验结果；阿斯利康的重磅药物奥斯替尼(AZD9291)同样采用了胺基嘧啶环为母核，并成为首个经FDA批准上市的第三代EGFR抑制剂。
另外，W.J.Zhou等于2009年发现了WZ4002，WZ8040等新型的突变选择性小分子抑制剂：
Emily J.Hanan等通过环合策略获得了新的激酶抑制剂：
Kwangho lee等也在此基础上发展了一系列EGFR激酶抑制剂(US2012157426)，发现I-1具有很好的抑制活性：
他们进一步设计了化合物I-4(KR20130133202，CN103269704)：
目前为止，虽然不可逆型嘧啶类EGFR抑制剂获得了不错的临床效果，但是可以预见的是患者的获得选择性抗性和药物的毒副作用的问题仍没有彻底的解决，因此本领域内仍需要不断的开发新的具有EGFR抑制活性的药物。
发明内容
本发明的目的在于提供一种结构新颖的2，4，6-三胺基嘧啶类EGFR抑制剂，本发明提供的化合物对多种癌细胞具有较强的体外抑制作用，具备成药潜质，本发明通过简单方法高效的合成了关键中间体及目标化合物。
本发明提供的如式(I)的2，4，6-三胺基嘧啶类化合物，通过研究发现，其结构中嘧啶2位芳胺可在EGFR酪氨酸激酶结合区与靶点的氨基酸形成强氢键，并且在结合区呈现马蹄形构象，从而极大的增强本化合物与EGFR靶点的亲和力。而2位芳胺引入取代基能提高化合物与EGFR铰链区的氢键作用，进而增强二者的亲和力。此外，奥斯替尼的体外实验表明其具有较差的溶解性，而本发明提供的化合物的6位芳胺取代基可以伸入溶剂暴露区，提高了该化合物与溶剂的亲和力，从而极大的改善了化合物的溶解性，有助于其快速的渗透癌变细胞的膜组织，以更好的发挥其细胞毒性。
术语解释
以下列出了用于描述本申请的各种术语的定义。这些定义适用于整个说明书和权利要求书中使用的术语，除非在特定情况下单独地或作为较大组的一部分另有限制。
本发明中的术语“烷基”是指饱和的直链或支链烃基，在某些实施方案中，分别含有1至6个或1至3个碳原子，C1-6烷基的实例包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、新戊基、正己基或类似基团，并且C1-3烷基的实例包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基或类似基团。
本发明中的术语“卤代”是指卤素原子取代碳原子上的氢原子所形成的基团，其中卤素原子包括但不限于F、Cl、Br、I。
本发明中的术语“烷氧基”是指-O-烷基，其中所述烷基包括但不限于C1-3烷基、C1-6烷基和C3-6环烷基，具体的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基及其卤代形式的基团。
本发明中的术语“芳基”是指单环或多环碳环***，其具有一个或多个稠合或非稠合的芳环，包括但不限于苯基、萘基、四氢萘基等类似基团，并且其环碳上的氢原子还可以被一至多个取代基取代，所述取代基包括但不限于C1-3烷基、烷氧基、氨基、酰胺基、脲、氧代、卤代、吡唑基、咪唑基、***基、CN、-NHC(O)(C1-3烷基)、酰基、磺酰基、磺酰胺基、-(CH2)m(C3-7杂环烷基)；各m独立的为0、1、2或3。
本发明的术语“杂环烷基”指含有2至6个环碳原子和1至3个环杂原子的单环或多环非芳香族环体系，其中所述杂原子选自N、O、S。
本发明的术语“环烷基”是指单环或多环的饱和或部分不饱和碳环化合物的单价基团，C3-6环烷基的包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基等，并且其环碳上的氢原子还可以被一至多个取代基取代，所述取代基包括但不限于C1-3烷基、烷氧基、氨基、羟基氨基、酰胺基、脲、氧代、卤代、吡唑基、咪唑基、***基、CN、-NHC(O)(C1-3烷基)、酰基、磺酰基、磺酰胺基、-(CH2)m(C3-7杂环烷基)；各m独立的为0、1、2或3。
本发明的术语“杂芳基”是指含有1至6个碳和至少一个杂原子的芳香环体系，其中所述杂原子选自N、S、O；并且其环碳上的氢原子还可以被一至多个取代基取代，所述取代基包括但不限于C1-3烷基、烷氧基、氨基、羟基氨基、酰胺基、脲、氧代、卤代、吡唑基、咪唑基、***基、CN、-NHC(O)(C1-3烷基)、酰基、磺酰基、磺酰胺基、-(CH2)m(C3-7杂环烷基)；各m独立的为0、1、2或3。具体实施中的杂芳基包括但不限于吡唑基、吡嗪基、嘧啶基、吡咯基、吡啶基、咪唑基、噻唑基、噻吩基、呋喃基、喹啉基、异喹啉基、苯并咪唑基等类似基团。
本发明的术语“烷基胺”是指基团-烷基-NRaRb，其中烷基包括但不限于C1-3烷基、C1-3卤代烷基、C1-3烷氧基和C3-6环烷基，Ra和Rb各自独立的选自H、C1-3烷基或C3-6环烷基。
本发明的术语“酰基”是指-C(O)-取代基，其中取代基包括但不限于C1-3烷基、C1-3卤代烷基、羟基、C1-3烷氧基、-NH-C3-6环烷基、-NH-芳基、-NH-取代芳基、-NH-杂芳基、-NH-C1-3烷基、-NH-C1-3烷基胺等。
本发明的术语“酰胺基”是指基团-C(O)NRaRb，其中Ra和Rb各自独立的选自H、C1-3烷基或C3-6环烷基。
本发明的术语“脲”是指基团-NRaC(O)NRb，其中Ra和Rb各自独立的选自H、C1-3烷基或C3-6环烷基。
本发明所述的“药学上可接受的盐”指本发明化合物的盐，有本发明发现的具有特定取代基的化合物与相对无毒的酸或碱制备。本发明中含有相对碱性的官能团，可通过在纯的溶液或者合适的惰性溶剂中用足量的酸与这类化合物的中性形式接触的方式获得酸加成盐，药学上可接受的酸加成盐包括无机盐和有机酸盐。所述无机酸盐包括但不限于盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐硝酸盐、磷酸盐、酸式磷酸盐；所述的有机酸盐包括但不限于甲酸盐、乙酸盐、三氟乙酸盐、丙酸盐、丙酮酸盐、羟乙酸盐、乙二酸盐、丙二酸盐、富马酸盐、马来酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、水杨酸盐、苦味酸盐、谷氨酸盐、水杨酸盐、抗坏血酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐等。
本发明所述的“溶剂合物”是指含有化学计量或非化学计量的溶剂加成形式，溶剂可选自水、乙醇、异丙醇、***、丙酮等。
本发明所述的“前药”是指通过代谢的方式在体内可转化的化合物，以提供通过本申请化学式所描述的任何化合物，且各种形式的药物是本领域已知的。
本发明所述的“有效量”是指能够在所需的对象中达到所需的治疗效果，但不会造成过度的负面影响的剂量，具体的剂量通常可以由本领域的技术人员根据需要确定。
本发明所述的“治疗”是指减轻或缓和疾病及其并发症状的方法；所述的预防是指减少或消除疾病、病状或病症的症状或并发症的发作。
应该理解的是在上文中未解释的，但出现在本发明中的其它术语，应按照本领域专业技术人员的通常理解来定义。
本发明第一方面，提供一种如式(Ⅰ)所示的2，4，6-三胺基嘧啶类化合物，或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物、前药、立体异构体或互变异构体。
其中：
R1选自：C3-6亚环烷基、C3-6亚杂环烷基、C1-6亚烷基、C1-6亚卤代烷基、C1-6亚烷氧基、卤代C1-6亚烷氧基、硫代C1-6亚烷氧基、亚芳基、亚杂芳基；
R2选自：H、卤素、羟基、C1-3烷基、-C(O)-R4、-S(O)2-R4、C1-3烷氧基、-NR5R6；
其中R4选自C1-3烷基、C1-3卤代烷基、羟基、-NHR7、C1-3烷氧基；其中R7选自C3-6环烷基、芳基、杂芳基、C1-3烷基、C1-3烷基胺；
其中R5独立的选自H或C1-3烷基；R6独立的选自H、C1-3烷基、C3-6环烷基、C1-3卤代烷基、芳基、杂芳基；
其中所述C3-6环烷基、芳基、杂芳基还可被一至多个R3基团进一步取代；
其中R3独立的选自C1-3烷基、烷氧基、氨基、羟基氨基、酰胺基、脲、氧代、卤代、吡唑基、咪唑基、***基、CN、-NHC(O)(C1-3烷基)、酰基、磺酰基、磺酰胺基、-(CH2)m(C3-7杂环烷基)；各m独立的为0、1、2或3。
本发明优选方案，所述的如式(I)的胺基嘧啶类化合物、其药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物、前药、立体异构体、或互变异构体，所述R1选自C3-6亚杂环烷基、C1-6亚烷基、C1-6亚烷氧基、亚芳基、亚杂芳基；R2、R3、R4、R5、R6、R7如式(I)化合物所定义。
本发明优选方案，所述的如式(I)的胺基嘧啶类化合物、其药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物、前药、立体异构体、或互变异构体，所述R1选自C1-6亚烷基或亚芳基；R2、R3、R4、R5、R6、R7如式(I)化合物所定义。
本发明优选方案，所述的如式(I)的胺基嘧啶类化合物、其药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物、前药、立体异构体、或互变异构体，所述R2选自-S(O)2-R4，其中R4选自C1-3烷基、C1-3卤代烷基、羟基、-NHR7、C1-3烷氧基；其它基团如式(I)化合物所定义。
本发明优选方案，所述的如式(I)的胺基嘧啶类化合物、其药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物、前药、立体异构体、或互变异构体，所述R2选自-C(O)-R4，其中R4选自C1-3烷基、C1-3卤代烷基、羟基、-NHR7、C1-3烷氧基；其它基团如式(I)化合物所定义。
本发明优选方案，所述的如式(I)的胺基嘧啶类化合物、其药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物、前药、立体异构体、或互变异构体，所述R2为-C(O)-R4或-S(O)2-R4，其中R4为-NHR7，-NHR7优选自N,N-二甲基乙二胺、环己胺、苯胺、对氟苯胺、2-氨基吡啶、4-甲氧基-3-甲基苯胺、2-氨基苯并咪唑或4-(4-(4-甲基哌嗪-1基)-哌啶-1基)苯胺；其它基团如式(I)化合物所定义。
本发明优选方案，所述的如式(I)的胺基嘧啶类化合物、其药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物、前药、立体异构体、或互变异构体，所述R1为C3-6亚杂环烷基、C1-6亚烷基、C1-6亚烷氧基、亚芳基、亚杂芳基；所述R2为-C(O)-R4或-S(O)2-R4；其中R4为-NHR7，-NHR7优选自2-氨基吡啶或4-甲氧基-3-甲基苯胺。
本发明优选方案，一种如式(I)的胺基嘧啶类化合物，所述的式(I)化合物选自下组：
本发明优选方案，一种如式(I)的胺基嘧啶类化合物，所述的式(I)化合物选自下组：
本发明优选方案，一种如式(I)的胺基嘧啶类化合物，所述的式(I)化合物选自下组：
本发明优选方案，一种如式(I)的胺基嘧啶类化合物，所述的式(I)化合物选自下组：
本发明优选方案，一种如式(I)的胺基嘧啶类化合物，所述药学上可接受的盐为无机酸盐或有机酸盐，所述无机酸盐选自盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、硝酸盐、磷酸盐、酸式磷酸盐；所述的有机酸盐选自甲酸盐、乙酸盐、三氟乙酸盐、丙酸盐、丙酮酸盐、羟乙酸盐、乙二酸盐、丙二酸盐、富马酸盐、马来酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、水杨酸盐、苦味酸盐、谷氨酸盐、水杨酸盐、抗坏血酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐。
本发明第二方面，提供一种如式(I)的胺基嘧啶类化合物的制备方法。本申请化合物可以通过使用本领域技术人员已知的多种方式制备得到。本申请可以使用本文描述的方法及有机化学合成方法或者本领域技术人员所理解的其变化来合成。优选的方法包括但不限于下述这些方法。
优选的，本发明如式(I)胺基嘧啶类化合物的通用合成方法，包括以下步骤：
其中R1和R2为本发明第一方面所定义；X选自F、Cl、Br、I，优选Cl、Br、I。
优选方案，如式(I)胺基嘧啶类化合物的制备方法，所述X选自Cl，具体步骤包括：
步骤1：化合物1即2,4,6-三氯嘧啶与化合物2即3-氯-4-氟苯胺在嘧啶环的4位发生取代反应生成中间体Ⅲ即2,6-二氯-4-(3-氯-4-氟苯胺基)-嘧啶；
步骤2：中间体Ⅲ与化合物3在催化剂作用下在嘧啶核环2位发生取代反应生成中间体Ⅱ；其中化合物3中R1和R2为本发明第一方面所定义；
步骤3：中间体Ⅱ即2,4-二取代嘧啶化合物与化合物4反应生成式(I)化合物。
优选方案，如式(I)胺基嘧啶类化合物的制备方法，具体包括以下步骤：
步骤1：将化合物1即2,4,6-三氯嘧啶加入到溶剂中搅拌至溶解，冰浴降温，缓慢滴加化合物2即3-氯-4-氟苯胺，滴加完毕撤去冰浴，控温反应，TLC跟踪检测反应结束后，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅲ即2,6-二氯-N-(3-氯-4-氟苯基)嘧啶-4-胺；
步骤2：将中间体Ⅲ和化合物3加入到溶剂中，再加入强酸催化剂，控温回流反应，TLC检测跟踪至反应完全，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体II；其中化合物3中R1和R2为本发明第一方面所定义；
步骤3：将中间体Ⅱ、浓盐酸、化合物4丙烯酰胺加入到溶剂中，置于密闭微波反应器中，一定温度下反应至结束，冷却至室温，加入乙酸乙酯和水，萃取、分液，有机相用水洗涤，再用适量无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到式(I)化合物TM。
优选方案，步骤1中所述的反应溶剂为二氯甲烷、丙酮、甲醇、乙醇、乙酸乙酯，其中特别优选二氯甲烷。
优选方案，步骤1中所述的反应温度为15℃～50℃，其中特别优选25℃。
优选方案，步骤1中所述的化合物1与化合物2的摩尔比为1:1.05～1.5，其中特别优选1:1.2。
优选方案，步骤2中所述的反应溶剂为乙醇、异丙醇、叔丁醇、正丁醇、N,N-二甲基甲酰胺，其中特别优选异丙醇。
优选方案，步骤2中所述的催化剂为盐酸、硫酸、高氯酸、氢溴酸，其中特别优选盐酸。
优选方案，步骤2中所述的中间体Ⅲ与化合物3的摩尔比为1:1.01～1.5，其中特别优选1:1.1。
优选方案，步骤3中所述的反应溶剂为二甲基亚砜，N,N-二甲基甲酰胺，正辛醇，其中特别优选正辛醇。
优选方案，步骤3中所述的反应温度为120～180℃，其中特别优选150℃。
优选方案，步骤3中所述的中间体Ⅱ2,4-二取代嘧啶化合物与化合物4丙烯酰胺的摩尔比为1:1.01～1.5，其中特别优选1:1.2。
优选方案，步骤2中所述的化合物3可以通过购买或实验合成获得。
优选方案，当所述R1选自C3-6亚杂环烷基、C1-6亚烷基、C1-6亚烷氧基、亚芳基、亚杂芳基，所述R2选自-C(O)-R4时，化合物3可以通过以下方法制备：
其中，所述的R4，R7为本发明第一方面所定义；
优选方案，当所述R1选自C3-6亚杂环烷基、C1-6亚烷基、C1-6亚烷氧基、亚芳基、亚杂芳基，所述R2选自-S(O)2-R4时，化合物3可以通过以下方法制备：
其中，所述的R4，R7为本发明第一方面所定义；
本发明第三方面，提供一种药物组合物，所述的药物组合物包括：治疗有效量的本发明所述的式(I)胺基嘧啶类化合物，或其药学上可接受的盐、互变异构体、光学异构体、药学上可接受的溶剂合物中的一种或多种，以及任选的药学上可接受的载体、赋形剂、佐剂、辅料或稀释剂。
优选方案，所述的药物组合物可用于治疗与酪氨酸激酶表达异常或酪氨酸激酶活性较高相关的疾病。
优选方案，所述的与酪氨酸激酶表达异常或酪氨酸激酶活性较高相关的疾病包括但不限于细胞异常增值、形态变化、运动功能亢进、血管新生疾病、肿瘤生长、肿瘤转移疾病。
优选方案，一种EGFR抑制剂，所述的抑制剂含有抑制有效量的如本发明所述的式(I)胺基嘧啶类化合物，或其药学上可接受的盐、互变异构体、光学异构体、药学上可接受的溶剂合物中的一种或多种，以及任选的药学上可接受的载体、赋形剂、佐剂、辅料或稀释剂。
本发明化合物可直接用于预防和治疗，或者优选地以药物组合物的形式。尽管活性成份能够单独给药，但优选为药物制剂或组合物的形式。因此，本发明提供了一种药物制剂，其包含本发明的化合物以及药学上可接受的稀释剂、赋形剂或载体(在这里统称为“载体”材料)。本发明的药物组合物可采取下文所述的药物制剂的形式。因此，本发明涉及一种药物组合物，其包含至少一种式(I)的化合物以及常规的赋形剂。
用于口服给药的示例性组合物包括：悬浮剂，其可包含例如微晶纤维素用于赋予体积，藻酸或藻酸钠作为助悬剂，甲基纤维素作为粘度增强剂，以及甜味剂或调味剂，例如本领域已知的那些；如速释片剂，其可包含例如微晶纤维素、磷酸二钙、淀粉、硬脂酸镁、硫酸钙、山梨糖醇、葡萄糖和/或乳糖和/或其他赋形剂、粘合剂、膨胀剂、崩解剂、稀释剂和润滑剂，例如本领域已知的那些。合适的粘合剂包括：淀粉、明胶、天然的糖如葡萄糖或β-乳糖、玉米甜味剂、天然和合成树胶如***胶、黄芪胶或藻酸钠、羧甲基纤维素、聚乙二醇和蜡等。崩解剂包括但不限于：淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土和黄原胶等。式(I)的化合物也可通过舌下和/或含服方式经口腔递送。模制片、压制片或冻干片是可使用的示例性形式。示例性的组合物包括将本发明化合物与快速溶解的稀释剂如甘露醇、乳糖、蔗糖和/或环糊精配制的那些。这些制剂中还可包括高分子量赋形剂如纤维素(微晶粉末纤维素)或聚乙二醇(PEG)。这些制剂也可包括有助于粘膜粘附的赋形剂，例如羟丙基纤维素(HPC)，羟丙基甲基纤维素(HPMC)，羧甲基纤维素钠(SCMC)，马来酸酐共聚物(例如，Gantrez)和控制释放的试剂如聚丙烯酸类共聚物(例如Carbopo1934)。还可加入润滑剂，助流剂，调味剂，着色剂和稳定剂以便于制备和使用。这些剂型中使用的润滑剂包括：油酸钠，硬脂酸钠，硬脂酸镁，苯甲酸钠，乙酸钠和氯化钠等。对于液体形式的口服给药，口服药物组分可以与任何口服、非毒性的药学上可接受的惰性载体如乙醇、甘油和水等组合。
本发明的药物制剂包括适用于口服、胃肠外[包括皮下、皮内、肌内、静脉内(推注或输注)和关节内]，吸入(包括可通过各种类型的计量加压气溶胶的方式产生的细颗粒粉剂或喷雾剂)，喷雾器或吸入器，直肠、腹膜内和局部(包括皮肤、含服、舌下和眼内)给药的制剂，虽然最合适的途径可能取决于例如接受者的病症和状态。
适用于口服给药的本发明的制剂可以是各种含有预定量的活性成分的独立单位的形式，例如胶囊、扁胶囊、丸剂或片剂；粉末或颗粒；在水性液体或非水性液体的溶液或悬液，例如酏剂、酊剂、混悬剂或糖浆剂；或水包油乳液剂或油包水乳液剂。该活性成分也可制成大丸剂、药糖剂或糊剂。
片剂可以通过与任选的一种或多种辅助成份压缩或模塑来制作。压缩片剂的制作方法可以是在合适的机器中将任选与粘结剂、润滑剂、惰性稀释剂、润滑剂、表面活性剂或分散剂混合的诸如粉末或颗粒等自由流动形式的活性成份进行压缩。模塑片剂可通过在合适的机器中对用惰性液态稀释剂湿润的粉末状化合物的混合物进行模塑。片剂可任选地包衣或刻痕，并可配制成能够提供其中活性成分的缓释或控释。本发明化合物可以适用于速释或缓释的形式给予。速释或缓释可通过利用包含本发明化合物的合适的药物组合物来实现，或者尤其是在缓释的情况下，利用例如皮下植入物或渗透泵的装置来实现。本发明化合物也可以脂质体方式给予。优选的单位剂量制剂是包含有效剂量(如下文所述)或者其合适部分的活性成分的制剂。
应该理解的是，除上述特别提到的成分，本发明的制剂还可以包括与所研究制剂类型有关领域的其他常规药剂，例如，适宜于口服的制剂可以包括调味剂。
所述制剂可以作为单位剂型方便地提供，且可通过药学领域熟知的任何方法制造。所有方法均包括使活性成分与构成一种或多种附加成分的载体结合的步骤。通常，使活性成分与液体载体和/或细分固体载体均匀且密切地结合以制备制剂，然后，如果需要，将该产物成型，得到所需制剂。
本发明的化合物也可脂质体递送***，例如小单室囊泡、大单室囊泡和多室囊泡的形式给予。脂质体可以由各种磷脂、1，2-二棕榈酰磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺(脑磷脂)、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、二磷脂酰甘油(心磷脂)或磷脂酰胆碱(卵磷脂)形成。
用于胃肠外给药的制剂包括水性和非水性无菌注射溶液，其可包含抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂以及使得制剂与指定接受者的血液等渗的溶质；以及水性和非水性无菌混悬液，其可包含助悬剂和增稠剂。可以用单位剂量或多剂量容器，例如密封的安瓿和药瓶提供该制剂，也可通过冷冻干燥(冻干)条件保存该组合物，临用前只需要加入无菌液体载体如盐水或注射用水即可使用。临时用的注射溶液和混悬液可以由前文描述的无菌粉末、颗粒和片剂进行制备。用于胃肠外给药的示例性组合物包括：可注射溶液剂或悬浮剂，其可包含例如合适的非毒性胃肠外可接受的稀释剂或溶剂，例如聚乙二醇、乙醇、1，3-丁二醇、水、林格溶液、氯化钠等渗溶液、或其他合适的分散剂或润湿剂以及助悬剂，包括合成的单或二甘油酯和脂肪酸，包括油酸和Cremaphor。
用于鼻腔、气溶胶或吸入给药的示例性组合物包括盐水中的溶液，其可包含例如苄基醇或其他合适的防腐剂，吸收促进剂以提高生物利用度，和/或其他增溶剂或分散剂如本领域已知的那些。
用于直肠给药的制剂可以用常规载体如可可油/合成甘油酯或聚乙二醇制成栓剂形式。这些载体在常温条件下通常为固体，但在直肠管腔内液化和/或溶解以释放药物。
口腔内局部给药例如含服或舌下给药的制剂，包括锭剂，其包含在调味基质如蔗糖和***胶或西黄蓍胶中的活性成分，和软锭剂，其包含在明胶和甘油或蔗糖和***胶中的基质中的活性成分。局部给药的示例性组合物包括局部载体如Plastibase(用聚乙烯胶化的矿物油)。
本发明第四方面，提供一种如式(I)的胺基嘧啶类化合物的用途，具体的可用于制备酪氨酸激酶抑制剂，用于体外非治疗性的抑制酪氨酸激酶的活性，用于体外非治疗性的抑制肿瘤细胞生长或其组合用途，其在治疗或预防其中EGFR起作用的疾病中的用途。
优选方案，本发明所述的如式(I)的胺基嘧啶类化合物，其用于制备治疗或预防其中EGFR起作用的疾病的药物。
优选方案，所述的EGFR起作用的疾病包括癌症或代谢***相关的疾病，具体的所述癌症包括但不限于非小细胞肺癌、卵巢癌、***、结肠直肠癌、乳腺癌、胰腺癌、胶质瘤、胶质母细胞瘤、黑色素瘤、***癌、白血病、淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、胃癌、肺癌、肝细胞癌、胃癌、胃肠道间质瘤(GIST)、甲状腺癌、胆管癌、子宫内膜癌、肾癌、间变性大细胞淋巴瘤、急性髓细胞白血病(AML)、多发性骨髓瘤、黑色素瘤或间皮瘤；所述代谢***相关的疾病包括但不限于糖尿病、动脉粥样硬化、肥胖症等疾病，其中特别优选为非小细胞肺癌。
优选方案，所述的治疗是指减轻或缓和疾病及其并发症状的方法；所述的预防是指减少或消除疾病、病状或病症的症状或并发症的发作。
与现有技术相比，本发明的主要优点包括：
(1)本发明提供了一种结构新颖的式(I)胺基嘧啶类EGFR抑制剂化合物，与现有的相近化合物相比，本发明的化合物具有更低的肿瘤细胞抑制浓度，化合物的活性具有显著的提升。
(2)与现有的胺基嘧啶类化合物相比，本发明提供的式(I)胺基嘧啶类化合物对于一些肿瘤细胞的选择性有极大的提高。
(3)本发明提供的式(I)胺基嘧啶类化合物，与已知的化合物AZD9291相比，其溶解性显著提高。
(4)本发明提供的式(I)胺基嘧啶类化合物，与已知的相近化合物相比，合成路线较短，操作更为简单，适合工业化放大生产。
应该理解的是，在本发明的范围内，本发明的上述各技术特征和在下文中(包括实施例)具体描述的各技术特征之间都可以相互结合，从而构成新的或优选的技术方案。
具体实施例
下面通过实施例来进一步阐明本发明，应该正确理解的是本发明的实施例仅仅是用于说明本发明，而不是对本发明的限制，所以，在本发明的方法前提下对本发明的简单改进均属本发明要求保护的范围。
本文中所使用的缩写：
EDCI：1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐
HOBt：1-羰基苯并***
DCM：二氯甲烷
TFA：三氟乙酸
TLC：薄层色谱
1H NMR：核磁共振氢谱
13C-NMR：核磁共振碳谱
实施例1 TM-1的制备
化合物3：将叔丁氧羰基保护的氨基乙酸(21.03g，120mmol)加至二氯甲烷中(30ml)，依次加入EDCI(25.31g，132mmol)、HOBt(17.82g，132mmol)和N,N-二甲基乙二胺(11.63g，132mmol)，室温搅拌反应36h，TLC检测反应结束，减压去除溶剂，所得固体重新溶解于120mL混合溶液中(DCM:TFA＝7:3)，室温搅拌反应0.5h后，TLC检测反应结束，减压旋蒸除去溶剂，经柱层析分离得产品化合物3，收率76.42％，HPLC:99.56％。
中间体Ⅲ：将2,4,6-三氯嘧啶(化合物1)(55.03g,300mmol)加入到二氯甲烷(300ml)中搅拌至溶解，冰浴降温至0～5℃，缓慢滴加3-氯-4-氟苯胺(45.71g,315mmol，化合物2)，滴加完毕撤去冰浴，自然升至室温，TLC跟踪检测反应结束后，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅲ，收率85.61％，HPLC:99.71％，白色固体。
中间体Ⅱ：将中间体Ⅲ(100mmol)和化合物3(14.43g，110mmol)加入到异丙醇(150ml)中，再加入浓盐酸(1ml)，回流反应，TLC检测跟踪至反应完全，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅱ，收率72.16％，HPLC:99.62％，白色固体。
TM-1：将中间体Ⅱ(85.11g,12mmol)、浓盐酸(0.5ml)、丙烯酰胺(1.02g,14.4mmol)加入到正辛醇(20ml)中，置于密闭微波反应器中，设温140℃，反应0.5h后结束，冷却至室温，加入乙酸乙酯和水各200ml，萃取、分液，有机相用水洗一次后用适量无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到式I化合物TM-1，白色固体，收率62.39％，HPLC:99.76％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：11.27(s,1H),10.45(s,1H),8.84(s,1H),8.41(s,1H),7.40～7.34(m,3H),6.53(t,J＝10.6Hz,1H),6.03(d,J＝6.4Hz,2H),4.69(s,1H),4.15(s,2H),3.58(s,2H),2.15(s,6H)；13C-NMR(400MHz,DMSO-d6):171.4,70.6,168.5,162.2,159.1,148.4,137.5,130.9,126.7,122.2,118.7,118.1,114.8,72.5,70.0,56.2,45.3(2C)，MS-ESI m/z:421.14(M+H)+。
实施例2 TM-2的制备
化合物3：将叔丁氧羰基保护的氨基乙酸(21.03g，120mmol)加至二氯甲烷中(40ml)，依次加入EDCI(25.31g，132mmol)、HOBt(17.82g，132mmol)和环己胺(13.09g，132mmol)，室温搅拌反应24h，TLC检测反应结束，减压去除溶剂，所得固体重新溶解于150mL混合溶液中(DCM:TFA＝7:3)，室温搅拌反应0.5h后，TLC检测反应结束，减压旋蒸除去溶剂，经柱层析分离得产品化合物3，收率73.62％，HPLC:99.62％。
中间体Ⅲ：将2,4,6-三氯嘧啶(化合物1)(55.03g,300mmol)加入到乙酸乙酯(300ml)中搅拌至溶解，冰浴降温至0～5℃，缓慢滴加3-氯-4-氟苯胺(45.72g,315mmol，化合物2)，滴加完毕撤去冰浴，自然升至室温，TLC跟踪检测反应结束后，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅲ，收率85.91％，HPLC:99.73％，白色固体。
中间体Ⅱ：将中间体Ⅲ(29.25g,100mmol)和化合物3(17.16g，110mmol)加入到异丙醇(150ml)中，再加入浓盐酸(1ml)，回流反应，TLC检测跟踪至反应完全，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅱ，收率72.16％，HPLC:99.69％，白色固体。
TM-2：将中间体Ⅱ(4.95g，12mmol)、浓盐酸(0.5ml)、丙烯酰胺(1.02g,14.4mmol)加入到正辛醇(20ml)中，置于密闭微波反应器中，设温140℃，反应1.5h后结束，冷却至室温，加入乙酸乙酯和水各200ml，萃取、分液，有机相用水洗一次后用适量无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到式I化合物TM-2，白色固体，收率62.33％，HPLC:99.66％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：11.07(s,1H),10.69(s,1H),8.73(s,1H),7.44～7.38(m,3H),6.45(s,1H),6.50(t,J＝10.6Hz,1H),6.08(d,J＝6.4Hz,2H),4.79(s,1H),4.10(s,2H),3.55～3.47(m,1H),1.74～1.69(m,2H),1.50～1.43(m,4H),1.23～1.11(m,4H)；13C-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ171.4,170.3,168.5,162.1,159.6,148.7,137.2,130.3,126.8,122.5,118.7,118.4,114.4,72.3,53.2,50.1,35.6(2C),25.6,26.7(2C)，MS-ESI m/z:446.92(M+H)+。
实施例3 TM-3的制备
化合物3：将叔丁氧羰基保护的氨基乙酸(21.03g，120mmol)加至二氯甲烷中(30ml)，依次加入EDCI(25.31g，132mmol)、HOBt(17.82g，132mmol)和苯胺(12.29g，132mmol)，室温搅拌反应24h，TLC检测反应结束，减压去除溶剂，所得固体重新溶解于120mL混合溶液中(DCM:TFA＝7:3)，室温搅拌反应0.5h后，TLC检测反应结束，减压旋蒸除去溶剂，经柱层析分离得产品化合物3，收率75.61％，HPLC:99.71％。
中间体Ⅲ：将2,4,6-三氯嘧啶(化合物1)(55.03g,300mmol)加入到丙酮(300ml)中搅拌至溶解，冰浴降温至0～5℃，缓慢滴加3-氯-4-氟苯胺(45.72g,315mmol，化合物2)，滴加完毕撤去冰浴，自然升至室温，TLC跟踪检测反应结束后，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅲ，收率84.67％，HPLC:99.69％，白色固体。
中间体Ⅱ：将中间体Ⅲ(29.25g,100mmol)和化合物3(16.52g，110mmol)加入到异丙醇(150ml)中，再加入浓盐酸(1ml)，回流反应，TLC检测跟踪至反应完全，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅱ，收率73.39％，HPLC:99.76％，白色固体。
TM-3：将中间体Ⅱ(4.86g，12mmol)、浓盐酸(0.5ml)、丙烯酰胺(1.02g,14.4mmol)加入到正辛醇(20ml)中，置于密闭微波反应器中，设温140℃，反应1.0h后结束，冷却至室温，加入乙酸乙酯和水各200ml，萃取、分液，有机相用水洗一次后用适量无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到式I化合物TM-3，白色固体，收率67.51％，HPLC:99.73％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：11.07(s,1H),10.33(s,1H),8.73(s,1H),7.58(d,J＝6.4Hz 2H),7.33～7.20(m,5H),7.01～6.95(m,1H),6.69(s,1H),6.50(t,J＝10.6Hz,1H),6.03(d,J＝6.4Hz,2H),4.73(s,1H),4.05(s,2H)；13C-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ171.5,170.2,168.6,162.2,159.5,148.8,137.1,134.3,130.4,128.8(2C),127.5,126.6,122.3,120.5(2C),118.5,118.2,114.5,72.4,53.5，MS-ESI m/z:440.87(M+H)+。
实施例4 TM-4的制备
化合物3：将叔丁氧羰基保护的氨基乙酸(21.03g，120mmol)加至二氯甲烷中(50ml)，依次加入EDCI(25.31g，132mmol)、HOBt(17.82g，132mmol)和对氟苯胺(14.67g，132mmol)，室温搅拌反应36h，TLC检测反应结束，减压去除溶剂，所得固体重新溶解于150mL混合溶液中(DCM:TFA＝7:3)，室温搅拌反应0.5h后，TLC检测反应结束，减压旋蒸除去溶剂，经柱层析分离得产品化合物3，收率71.66％，HPLC:99.59％。
中间体Ⅲ：将2,4,6-三氯嘧啶(化合物1)(55.03g,300mmol)加入到乙酸乙酯(300ml)中搅拌至溶解，冰浴降温至0～5℃，缓慢滴加3-氯-4-氟苯胺(45.72g,315mmol，化合物2)，滴加完毕撤去冰浴，自然升至室温，TLC跟踪检测反应结束后，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅲ，收率83.57％，HPLC:99.67％，白色固体。
中间体Ⅱ：将中间体Ⅲ(29.25g,100mmol)和化合物3(18.50g，110mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(150ml)中，再加入浓盐酸(1ml)，回流反应，TLC检测跟踪至反应完全，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅱ，收率73.27％，HPLC:99.76％，白色固体。
TM-4：将中间体Ⅱ(5.09g，12mmol)、浓盐酸(0.5ml)、丙烯酰胺(1.02g,14.4mmol)加入到正辛醇(20ml)中，置于密闭微波反应器中，设温140℃，反应0.5h后结束，冷却至室温，加入乙酸乙酯和水各200ml，萃取、分液，有机相用水洗一次后用适量无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到式I化合物TM-4，白色固体，收率71.36％，HPLC:99.74％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：10.99(s,1H),10.45(s,1H),8.82(s,1H),7.58(d,J＝6.4Hz 2H),7.29～7.10(m,5H),6.71(s,1H),6.48(t,J＝10.6Hz,1H),6.06(d,J＝6.4Hz,2H),4.69(s,1H),4.15(s,2H)；13C-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ171.3,170.5,168.7,159.3,148.6,137.2,134.5,130.2,129.5,127.3,126.8,122.5,120.7(2C),118.6,118.5,117.4(2C),114.2,72.2,53.6，MS-ESI m/z:458.83(M+H)+。
实施例5 TM-5的制备
化合物3：将叔丁氧羰基保护的氨基乙酸(21.03g，120mmol)加至二氯甲烷中(40ml)，依次加入EDCI(25.31g，132mmol)、HOBt(17.82g，132mmol)和2-氨基吡啶(12.42g，132mmol)，室温搅拌反应24h，TLC检测反应结束，减压去除溶剂，所得固体重新溶解于120mL混合溶液中(DCM:TFA＝7:3)，室温搅拌反应0.5h后，TLC检测反应结束，减压旋蒸除去溶剂，经柱层析分离得产品化合物3，收率73.41％，HPLC:99.64％。
中间体Ⅲ：将2,4,6-三氯嘧啶(化合物1)(55.03g,300mmol)加入到二氯甲烷(300ml)中搅拌至溶解，冰浴降温至0～5℃，缓慢滴加3-氯-4-氟苯胺(45.72g,315mmol，化合物2)，滴加完毕撤去冰浴，自然升至室温，TLC跟踪检测反应结束后，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅲ，收率86.52％，HPLC:99.71％，白色固体。
中间体Ⅱ：将中间体Ⅲ(29.25g,100mmol)和化合物3(16.62g，110mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(150ml)中，再加入浓盐酸(1ml)，回流反应，TLC检测跟踪至反应完全，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅱ，收率73.28％，HPLC:99.76％，白色固体。
TM-5：将中间体Ⅱ(4.89g，12mmol)、浓盐酸(0.5ml)、丙烯酰胺(1.02g,14.4mmol)加入到正辛醇(20ml)中，置于密闭微波反应器中，设温140℃，反应2.5h后结束，冷却至室温，加入乙酸乙酯和水各200ml，萃取、分液，有机相用水洗一次后用适量无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到式I化合物TM-5，白色固体，收率71.36％，HPLC:99.74％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：11.21(s,1H),10.40(s,1H),8.92(s,1H),8.39(d,J＝20.6Hz 1H),8.20(d,J＝14.4Hz 1H),8.08(dd,J＝7.8Hz 1H),7.35～7.18(m,4H),6.69(s,1H),6.47(t,J＝10.6Hz,1H),6.03(d,J＝6.4Hz,2H),4.73(s,1H),3.98(s,2H)；13C-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ171.5,170.8,168.9,162.4,159.8,152.8,148.9,145.7,139.5,134.7,130.7,126.5,124.4,122.3,118.8,118.9(2C),114.4,72.6,53.7，MS-ESI m/z:441.11(M+H)+。
实施例6 TM-6的制备
化合物3：将叔丁氧羰基保护的氨基乙酸(21.03g，120mmol)加至二氯甲烷中(50ml)，依次加入EDCI(25.31g，132mmol)、HOBt(17.82g，132mmol)和4-甲氧基-3-甲基苯胺(18.09g，132mmol)，室温搅拌反应36h，TLC检测反应结束，减压去除溶剂，所得固体重新溶解于150mL混合溶液中(DCM:TFA＝7:3)，室温搅拌反应1h后，TLC检测反应结束，减压旋蒸除去溶剂，经柱层析分离得产品化合物3，收率71.36％，HPLC:99.62％。
中间体Ⅲ：将2,4,6-三氯嘧啶(化合物1)(55.03g,300mmol)加入到二氯甲烷(300ml)中搅拌至溶解，冰浴降温至0～5℃，缓慢滴加3-氯-4-氟苯胺(45.72g,315mmol，化合物2)，滴加完毕撤去冰浴，自然升至室温，TLC跟踪检测反应结束后，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅲ，收率87.52％，HPLC:99.81％，白色固体。
中间体Ⅱ：将中间体Ⅲ(29.25g,100mmol)和化合物3(21.37g，110mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(145.5ml)中，再加入浓盐酸(1ml)，回流反应，TLC检测跟踪至反应完全，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅱ，收率69.57％，HPLC:99.70％，白色固体。
TM-6：将中间体Ⅱ(5.40g，12mmol)、浓盐酸(0.5ml)、丙烯酰胺(1.02g,14.4mmol)加入到正辛醇(20ml)中，置于密闭微波反应器中，设温140℃，反应2.0h后结束，冷却至室温，加入乙酸乙酯和水各200ml，萃取、分液，有机相用水洗一次后用适量无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到式I化合物TM-6，白色固体，收率73.29％，HPLC:99.77％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：11.12(s,1H),10.28(s,1H),8.65(s,1H),7.59(s,1H),7.29～7.18(m,5H),6.79(s,1H),6.47(dd,J＝10.6,8.8Hz,1H),5.99(d,J＝6.4Hz,2H),4.68(s,1H),4.10(s,2H)；3.32(s,3H),2.15(s,3H)；13C-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ172.9,169.3,167.4,162.2,158.4,149.6,137.5,135.1,131.0,128.1,125.4,123.3,122.8,121.7,119.6,118.7,118.4,115.1,114.8,72.0,56.4,54.4,19.7，MS-ESI m/z:484.14(M+H)+。
实施例7 TM-7的制备
化合物3：将叔丁氧羰基保护的氨基乙酸(21.03g，120mmol)加至二氯甲烷中(60ml)，依次加入EDCI(25.31g，132mmol)、HOBt(17.82g，132mmol)和4-(4-(4-甲基哌嗪-1基)-哌啶-1基)苯胺(30.20g，132mmol)，室温搅拌反应36h，TLC检测反应结束，减压去除溶剂，所得固体重新溶解于150mL混合溶液中(DCM:TFA＝7:3)，室温搅拌反应1h后，TLC检测反应结束，减压旋蒸除去溶剂，经柱层析分离得产品化合物3，收率67.49％，HPLC:99.69％。
中间体Ⅲ：将2,4,6-三氯嘧啶(化合物1)(55.03g,300mmol)加入到二氯甲烷(300ml)中搅拌至溶解，冰浴降温至0～5℃，缓慢滴加3-氯-4-氟苯胺(45.72g,315mmol，化合物2)，滴加完毕撤去冰浴，自然升至室温，TLC跟踪检测反应结束后，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅲ，收率86.37％，HPLC:99.83％，白色固体。
中间体Ⅱ：将中间体Ⅲ(29.25g,100mmol)和化合物3(36.46g，110mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(150ml)中，再加入浓盐酸(1ml)，回流反应，TLC检测跟踪至反应完全，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅱ，收率68.53％，HPLC:99.77％，白色固体。
TM-7：将中间体Ⅱ(7.05g，12mmol)、浓盐酸(0.5ml)、丙烯酰胺(1.02g,14.4mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(20ml)中，置于密闭微波反应器中，设温140℃，反应0.5h后结束，冷却至室温，加入乙酸乙酯和水各200ml，萃取、分液，有机相用水洗一次后用适量无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到式I化合物TM-7，白色固体，收率77.62％，HPLC:99.82％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：10.89(s,1H),10.40(s,1H),8.81(s,1H),7.57(d,J＝6.4Hz 2H),7.28～7.11(m,5H),6.74(s,1H),6.50(t,J＝10.6Hz,1H),6.04(d,J＝6.4Hz,2H),4.70(s,1H),4.18(s,2H)；3.11(m,4H)；2.74(m,1H)；2.45(m,8H)；2.36(s,3H)；1.82(m,4H)；13C-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ171.5,170.7,168.6,159.4,148.8,137.3,134.1,130.4,129.3,127.1,126.4,122.7,120.6(2C),118.4,118.3,117.7(2C),114.1,72.4,71.1,63.4(2C),56.7(2C),54.3(2C),53.3,45.3,29.4(2C)，MS-ESI m/z:622.14(M+H)+。
实施例8 TM-8的制备
化合物3：将叔丁氧羰基保护的氨基乙酸(21.03g，120mmol)加至二氯甲烷中(40ml)，依次加入EDCI(25.31g，132mmol)、HOBt(17.82g，132mmol)和2-氨基苯并咪唑(17.57g，132mmol)，室温搅拌反应24h，TLC检测反应结束，减压去除溶剂，所得固体重新溶解于120mL混合溶液中(DCM:TFA＝7:3)，室温搅拌反应0.5h后，TLC检测反应结束，减压旋蒸除去溶剂，经柱层析分离得产品化合物3，收率68.51％，HPLC:99.62％。
中间体Ⅲ：将2,4,6-三氯嘧啶(化合物1)(55.03g,300mmol)加入到二氯甲烷(300ml)中搅拌至溶解，冰浴降温至0～5℃，缓慢滴加3-氯-4-氟苯胺(45.72g,315mmol，化合物2)，滴加完毕撤去冰浴，自然升至室温，TLC跟踪检测反应结束后，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅲ，收率85.32％，HPLC:99.82％，白色固体。
中间体Ⅱ：将中间体Ⅲ(29.25g,100mmol)和化合物3(20.92g，110mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(145.5ml)中，再加入浓盐酸(1ml)，回流反应，TLC检测跟踪至反应完全，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅱ，收率66.25％，HPLC:99.79％，白色固体。
TM-8：将中间体Ⅱ(5.36g，12mmol)、浓盐酸(0.5ml)、丙烯酰胺(1.02g,14.4mmol)加入到正辛醇(20ml)中，置于密闭微波反应器中，设温140℃，反应1.5h后结束，冷却至室温，加入乙酸乙酯和水各200ml，萃取、分液，有机相用水洗一次后用适量无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到式I化合物TM-8，白色固体，收率79.13％，HPLC:99.86％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：11.10(s,1H),10.70(s,1H),8.75(s,1H),7.30～7.19(m,7H),6.47(s,1H),6.52(t,J＝10.6Hz,1H),6.06(d,J＝6.4Hz,2H),5.40(s,1H),4.75(s,1H),4.01(s,2H)；13C-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ171.4,170.3,168.5,162.1,159.6,148.7,146.4,137.2,136.8(2C),130.3,126.8,123.2(2C),122.5,118.7,118.4,115.5(2C),114.4,72.3,53.2，MS-ESI m/z:480.16(M+H)+。
实施例9 TM-9的制备
化合物3：将叔丁氧羰基保护的氨基丙酸(22.68g，120mmol)加至二氯甲烷中(40ml)，依次加入EDCI(25.31g，132mmol)、HOBt(17.82g，132mmol)和4-甲氧基-3-甲基苯胺(18.09g，132mmol)，室温搅拌反应24h，TLC检测反应结束，减压去除溶剂，所得固体重新溶解于150mL混合溶液中(DCM:TFA＝7:3)，室温搅拌反应1h后，TLC检测反应结束，减压旋蒸除去溶剂，经柱层析分离得产品化合物3，收率72.56％，HPLC:99.64％。
中间体Ⅲ：将2,4,6-三氯嘧啶(化合物1)(55.03g,300mmol)加入到二氯甲烷(300ml)中搅拌至溶解，冰浴降温至0～5℃，缓慢滴加3-氯-4-氟苯胺(45.72g,315mmol，化合物2)，滴加完毕撤去冰浴，自然升至室温，TLC跟踪检测反应结束后，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅲ，收率86.35％，HPLC:99.85％，白色固体。
中间体Ⅱ：将中间体Ⅲ(29.25g,100mmol)和化合物3(22.91g，110mmol)加入到异丙醇(150ml)中，再加入浓盐酸(1ml)，回流反应，TLC检测跟踪至反应完全，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅱ，收率66.47％，HPLC:99.79％，白色固体。
TM-9：将中间体Ⅱ(5.57g，12mmol)、浓盐酸(0.5ml)、丙烯酰胺(1.02g,14.4mmol)加入到正辛醇(20ml)中，置于密闭微波反应器中，设温140℃，反应1.5h后结束，冷却至室温，加入乙酸乙酯和水各200ml，萃取、分液，有机相用水洗一次后用适量无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到式I化合物TM-9，白色固体，收率79.21％，HPLC:99.86％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：11.08(s,1H),10.24(s,1H),8.70(s,1H),7.55(s,1H),7.28～7.16(m,5H),6.69(s,1H),6.50(dd,J＝10.6,8.8Hz,1H),5.87(d,J＝6.4Hz,2H),4.64(s,1H),3.98～3.80(m,2H)；3.34(s,3H),2.68～2.54(m,2H)；2.18(s,3H)；13C-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ173.0,168.8,167.9,162.4,158.9,149.8,137.7,135.5,130.8,128.3,125.7,123.0,122.5,121.5,119.4,118.9,118.6,115.3,114.6,72.2,56.6,39.7,35.5,19.9，MS-ESI m/z:498.16(M+H)+。
实施例10 TM-14的制备
化合物3：将叔丁氧羰基保护的氨基丙酸(22.68g，120mmol)加至二氯甲烷中(30ml)，依次加入EDCI(25.3g，132mmol)、HOBt(17.82g，132mmol)和2-氨基吡啶(12.42g，132mmol)，室温搅拌反应24h，TLC检测反应结束，减压去除溶剂，所得固体重新溶解于120mL混合溶液中(DCM:TFA＝7:3)，室温搅拌反应0.5h后，TLC检测反应结束，减压旋蒸除去溶剂，经柱层析分离得产品化合物3，收率71.06％，HPLC:99.67％。
中间体Ⅲ：将2,4,6-三氯嘧啶(化合物1)(55.03g,300mmol)加入到二氯甲烷(300ml)中搅拌至溶解，冰浴降温至0～5℃，缓慢滴加3-氯-4-氟苯胺(45.72g,315mmol，化合物2)，滴加完毕撤去冰浴，自然升至室温，TLC跟踪检测反应结束后，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅲ，收率85.34％，HPLC:99.83％，白色固体。
中间体Ⅱ：将中间体Ⅲ(29.25g,100mmol)和化合物3(18.17g，110mmol)加入到乙醇(150ml)中，再加入浓盐酸(1ml)，回流反应，TLC检测跟踪至反应完全，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅱ，收率66.47％，HPLC:99.77％，白色固体。
TM-14：将中间体Ⅱ(5.06g，12mmol)、浓盐酸(0.5ml)、丙烯酰胺(1.02g,14.4mmol)加入到正辛醇(20ml)中，置于密闭微波反应器中，设温140℃，反应1.5h后结束，冷却至室温，加入乙酸乙酯和水各200ml，萃取、分液，有机相用水洗一次后用适量无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到式I化合物TM-14，白色固体，收率73.65％，HPLC:99.82％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：11.17(s,1H),10.41(s,1H),8.92(s,1H),8.39(d,J＝20.6Hz 1H),8.17(d,J＝14.4Hz 1H),8.05(dd,J＝7.8Hz 1H),7.35～7.18(m,4H),6.68(s,1H),6.47(t,J＝10.6Hz,1H),6.02(d,J＝6.4Hz,2H),4.74(s,1H),3.98(m,2H),2.74(m,2H)；13C-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ171.2,170.8,168.4,162.9,159.5,152.8,148.7,145.7,139.8,134.7,130.2,126.6,124.4,122.8,118.5,118.7(2C),114.4,72.6,53.7,37.8，MS-ESI m/z:455.13(M+H)+。
实施例11 TM-17的制备
化合物3：将叔丁氧羰基保护的对氨基苯甲酸(28.56g，120mmol)加至二氯甲烷中(30ml)，依次加入EDCI(25.31g，132mmol)、HOBt(17.82g，132mmol)和N,N-二甲基乙二胺(11.63g，132mmol)，室温搅拌反应24h，TLC检测反应结束，减压去除溶剂，所得固体重新溶解于120mL混合溶液中(DCM:TFA＝7:3)，室温搅拌反应0.5h后，TLC检测反应结束，减压旋蒸除去溶剂，经柱层析分离得产品化合物3，收率72.34％，HPLC:99.76％。
中间体Ⅲ：将2,4,6-三氯嘧啶(化合物1)(55.03g,300mmol)加入到二氯甲烷(300ml)中搅拌至溶解，冰浴降温至0～5℃，缓慢滴加3-氯-4-氟苯胺(45.72g,315mmol，化合物2)，滴加完毕撤去冰浴，自然升至室温，TLC跟踪检测反应结束后，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅲ，收率84.69％，HPLC:99.76％，白色固体。
中间体Ⅱ：将中间体Ⅲ(29.25g,100mmol)和化合物3(21.26g，110mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(120ml)中，再加入浓盐酸(1ml)，回流反应，TLC检测跟踪至反应完全，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅱ，收率65.79％，HPLC:99.79％，白色固体。
TM-17：将中间体Ⅱ(5.39g，12mmol)、浓盐酸(0.5ml)、丙烯酰胺(1.02g,14.4mmol)加入到二甲基亚砜(20ml)中，置于密闭微波反应器中，设温140℃，反应2.5h后结束，冷却至室温，加入乙酸乙酯和水各200ml，萃取、分液，有机相用水洗一次后用适量无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到式I化合物TM-17，白色固体，收率74.36％，HPLC:99.80％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：11.06(s,1H),10.12(s,1H),8.72(s,1H),7.35～7.18(m,7H),6.67(s,1H),6.42(t,J＝10.6Hz,1H),6.03(d,J＝6.4Hz,2H),4.75(s,1H),4.27(s,2H),2.27(m,4H)；13C-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ172.1,167.2(2C),166.1,159.6,152.3,139.7,130.9,129.2,128.3(2C),124.6,124.1,121.2,117.1(2C),116.2(2C),118.6,72.1,69.3,42.1(2C),MS-ESI m/z:483.56(M+H)+。
实施例12 TM-18的制备
化合物3：将叔丁氧羰基保护的对氨基苯甲酸(28.56g，120mmol)加至二氯甲烷中(40ml)，依次加入EDCI(25.31g，132mmol)、HOBt(17.82g，132mmol)和环己胺(13.09g，132mmol)，室温搅拌反应24h，TLC检测反应结束，减压去除溶剂，所得固体重新溶解于120mL混合溶液中(DCM:TFA＝7:3)，室温搅拌反应0.5h后，TLC检测反应结束，减压旋蒸除去溶剂，经柱层析分离得产品化合物3，收率71.62％，HPLC:99.79％。
中间体Ⅲ：将2,4,6-三氯嘧啶(化合物1)(55.03g,300mmol)加入到乙酸乙酯(300ml)中搅拌至溶解，冰浴降温至0～5℃，缓慢滴加3-氯-4-氟苯胺(45.72g,315mmol，化合物2)，滴加完毕撤去冰浴，自然升至室温，TLC跟踪检测反应结束后，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅲ，收率83.57％，HPLC:99.81％，白色固体。
中间体Ⅱ：将中间体Ⅲ(29.25g,100mmol)和化合物3(24.01g，110mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(120ml)中，再加入浓盐酸(1ml)，回流反应，TLC检测跟踪至反应完全，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅱ，收率61.37％，HPLC:99.73％，白色固体。
TM-18：将中间体Ⅱ(5.54g，12mmol)、浓盐酸(0.5ml)、丙烯酰胺(1.02g,14.4mmol)加入到正辛醇(20ml)中，置于密闭微波反应器中，设温140℃，反应2.5h后结束，冷却至室温，加入乙酸乙酯和水各200ml，萃取、分液，有机相用水洗一次后用适量无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到式I化合物TM-18，白色固体，收率76.25％，HPLC:99.87％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：11.09(s,1H),10.36(s,1H),8.83(s,1H),7.35～7.18(m,7H),6.65(s,1H),6.43(t,J＝10.6Hz,1H),6.06(d,J＝6.4Hz,2H),4.72(s,1H),1.83～1.49(m,10H)；13C-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ172.1,167.4(3C),166.2,159.6,152.5,146.3,139,8,131.3,129.4,128.4,121.3,118.6,116.1(3C),117.2,72.3，47.7,33.6(2C),28.2,22.7(2C),MS-ESI m/z:505.32(M+H)+。
实施例13 TM-20的制备
化合物3：将叔丁氧羰基保护的对氨基苯甲酸(28.56g，120mmol)加至二氯甲烷中(30ml)，依次加入EDCI(25.31g，132mmol)、HOBt(17.82g，132mmol)和2-氨基吡啶(12.42g，132mmol)，室温搅拌反应24h，TLC检测反应结束，减压去除溶剂，所得固体重新溶解于120mL混合溶液中(DCM:TFA＝7:3)，室温搅拌反应0.5h后，TLC检测反应结束，减压旋蒸除去溶剂，经柱层析分离得产品化合物3，收率75.49％，HPLC:99.78％。
中间体Ⅲ：将2,4,6-三氯嘧啶(化合物1)(55.03g,300mmol)加入到乙酸乙酯(300ml)中搅拌至溶解，冰浴降温至0～5℃，缓慢滴加3-氯-4-氟苯胺(45.72g,315mmol，化合物2)，滴加完毕撤去冰浴，自然升至室温，TLC跟踪检测反应结束后，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅲ，收率82.59％，HPLC:99.83％，白色固体。
中间体Ⅱ：将中间体Ⅲ(29.25g,100mmol)和化合物3(23.46g，110mmol)加入到异丙醇(150ml)中，再加入浓盐酸(1ml)，回流反应，TLC检测跟踪至反应完全，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅱ，收率65.33％，HPLC:99.81％，白色固体。
TM-20：将中间体Ⅱ(5.63g，12mmol)、浓盐酸(0.5ml)、丙烯酰胺(1.02g,14.4mmol)加入到正辛醇(20ml)中，置于密闭微波反应器中，设温140℃，反应1.5h后结束，冷却至室温，加入乙酸乙酯和水各200ml，萃取、分液，有机相用水洗一次后用适量无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到式I化合物TM-20，白色固体，收率78.65％，HPLC:99.83％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：11.03(s,1H),10.20(s,1H),8.74(s,1H),8.12(s,1H),7.71～7.54(m,3H),7.45～7.38(m,2H),7.25～7.17(m,5H),6.71(s,1H),6.55(dd,J＝10.6,8.8Hz,1H),5.82(d,J＝6.4Hz,2H),4.59(s,1H),.13C-NMR(400MHz,DMSO-d6):172.8,168.8,167.7,162.8,158.6,149.7,145.7,142.4,137.5,135.7,131.2(2C),130.4,128.5,125.8,124.3,123.4,122.3,121.2,118.4,115.1,114.8,113.5(2C),72.4,MS-ESI m/z:503.13(M+H)+。
实施例14 TM-21的制备
化合物3：将叔丁氧羰基保护的对氨基苯甲酸(28.56g，120mmol)加至二氯甲烷中(50ml)，依次加入EDCI(25.31g，132mmol)、HOBt(17.82g，132mmol)和4-甲氧基-3-甲基苯胺(18.09g，132mmol)，室温搅拌反应24h，TLC检测反应结束，减压去除溶剂，所得固体重新溶解于150mL混合溶液中(DCM:TFA＝7:3)，室温搅拌反应1h后，TLC检测反应结束，减压旋蒸除去溶剂，经柱层析分离得产品化合物3，收率76.35％，HPLC:99.81％。
中间体Ⅲ：将2,4,6-三氯嘧啶(化合物1)(55.03g,300mmol)加入到二氯甲烷(300ml)中搅拌至溶解，冰浴降温至0～5℃，缓慢滴加3-氯-4-氟苯胺(45.72g,315mmol，化合物2)，滴加完毕撤去冰浴，自然升至室温，TLC跟踪检测反应结束后，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅲ，收率83.79％，HPLC:99.80％，白色固体。
中间体Ⅱ：将中间体Ⅲ(29.25g,100mmol)和化合物3(28.17g，110mmol)加入到异丙醇(150ml)中，再加入浓盐酸(1ml)，回流反应，TLC检测跟踪至反应完全，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅱ，收率61.37％，HPLC:99.82％，白色固体。
TM-21：将中间体Ⅱ(6.15g，12mmol)、浓盐酸(0.5ml)、丙烯酰胺(1.02g,14.4mmol)加入到正辛醇(20ml)中，置于密闭微波反应器中，设温140℃，反应1.5h后结束，冷却至室温，加入乙酸乙酯和水各200ml，萃取、分液，有机相用水洗一次后用适量无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到式I化合物TM-21，白色固体，收率76.52％，HPLC:99.85％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：11.03(s,1H),10.20(s,1H),8.74(s,1H),7.71～7.54(m,4H),7.45(s,1H),7.25～7.17(m,5H),6.71(s,1H),6.55(dd,J＝10.6,8.8Hz,1H),5.82(d,J＝6.4Hz,2H),4.59(s,1H),3.37(s,3H),2.15(s,3H).13C-NMR(400MHz,DMSO-d6):172.8,168.8,167.7,162.8,158.6,149.7,142.4,137.5,135.7,131.2(2C),130.4,128.5,125.8,124.3,123.4,122.3,121.2,119.5,118.7,118.4,115.1,114.8,113.5(2C),72.4,56.8,19.7，MS-ESI m/z:546.16(M+H)+。
实施例15 TM-23的制备
化合物3：将叔丁氧羰基保护的对氨基苯甲酸(28.56g，120mmol)加至二氯甲烷中(40ml)，依次加入EDCI(25.31g，132mmol)、HOBt(17.82g，132mmol)和2-氨基苯并咪唑(17.57g，132mmol)，室温搅拌反应24h，TLC检测反应结束，减压去除溶剂，所得固体重新溶解于150mL混合溶液中(DCM:TFA＝7:3)，室温搅拌反应0.5h后，TLC检测反应结束，减压旋蒸除去溶剂，经柱层析分离得产品化合物3，收率74.32％，HPLC:99.79％。
中间体Ⅲ：将2,4,6-三氯嘧啶(化合物1)(55.03g,300mmol)加入到二氯甲烷(300ml)中搅拌至溶解，冰浴降温至0～5℃，缓慢滴加3-氯-4-氟苯胺(45.72g,315mmol，化合物2)，滴加完毕撤去冰浴，自然升至室温，TLC跟踪检测反应结束后，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅲ，收率85.49％，HPLC:99.83％，白色固体。
中间体Ⅱ：将中间体Ⅲ(29.25g,100mmol)和化合物3(27.75g，110mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(150ml)中，再加入浓盐酸(1ml)，回流反应，TLC检测跟踪至反应完全，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅱ，收率65.37％，HPLC:99.79％，白色固体。
TM-23：将中间体Ⅱ(6.52g，12mmol)、浓盐酸(0.5ml)、丙烯酰胺(1.02g,14.4mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(20ml)中，置于密闭微波反应器中，设温150℃，反应1.5h后结束，冷却至室温，加入乙酸乙酯和水各200ml，萃取、分液，有机相用水洗一次后用适量无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到式I化合物TM-23，白色固体，收率74.39％，HPLC:99.86％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：11.13(s,1H),10.22(s,1H),8.76(s,1H),7.71～7.52(m,4H),7.45(s,1H),7.25～7.17(m,7H),6.73(s,1H),6.56(dd,J＝10.6,8.8Hz,1H),5.87(d,J＝6.4Hz,2H),4.49(s,1H).13C-NMR(400MHz,DMSO-d6):171.5,167.2,166.5,164.8,159.3,152.8,147.7,146.5,140.6,138.9(2C),131.3,129.5,128.6(2C),124.6,123.6(2C),121.5,118.5,117.3,116.1(3C),115.1(3C),72.6，MS-ESI m/z:542.32(M+H)+。
实施例16 TM-28的制备
化合物3：将叔丁氧羰基保护的对4-胺基哌嗪-1-甲酸(29.89g，120mmol)加至二氯甲烷中(30ml)，依次加入EDCI(25.31g，132mmol)、HOBt(17.82g，132mmol)和苯胺(12.29g，132mmol)，室温搅拌反应24h，TLC检测反应结束，减压去除溶剂，所得固体重新溶解于120mL混合溶液中(DCM:TFA＝7:3)，室温搅拌反应1h后，TLC检测反应结束，减压旋蒸除去溶剂，经柱层析分离得产品化合物3，收率76.85％，HPLC:99.81％。
中间体Ⅲ：将2,4,6-三氯嘧啶(化合物1)(55.03g,300mmol)加入到乙酸乙酯(300ml)中搅拌至溶解，冰浴降温至0～5℃，缓慢滴加3-氯-4-氟苯胺(45.72g,315mmol，化合物2)，滴加完毕撤去冰浴，自然升至室温，TLC跟踪检测反应结束后，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅲ，收率83.47％，HPLC:99.81％，白色固体。
中间体Ⅱ：将中间体Ⅲ(29.25g,100mmol)和化合物3(24.23g，110mmol)加入到异丙醇(150ml)中，再加入浓盐酸(1ml)，回流反应，TLC检测跟踪至反应完全，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅱ，收率66.52％，HPLC:99.82％，白色固体。
TM-28：将中间体Ⅱ(5.72g，12mmol)、浓盐酸(0.5ml)、丙烯酰胺(1.02g,14.4mmol)加入到正辛醇(20ml)中，置于密闭微波反应器中，设温140℃，反应2.5h后结束，冷却至室温，加入乙酸乙酯和水各200ml，萃取、分液，有机相用水洗一次后用适量无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到式I化合物TM-28，白色固体，收率76.21％，HPLC:99.83％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：11.18(s,1H),10.09(s,1H),8.56(s,1H),7.64～7.47(m,5H),7.45(s,1H),7.23～7.15(m,4H),6.69(s,1H),6.52(dd,J＝10.6,8.8Hz,1H),5.76(d,J＝6.4Hz,2H),4.49(s,1H),3.26(s,4H),2.75(s,4H).13C-NMR(400MHz,DMSO-d6):172.5,166.9,159.4,157.2,155.6,152.7,140.6,135.7,131.7,129.5(2C),121.3(3C),118.5,117.8,116.5,77.6,56.1(2C),47.5(2C)，MS-ESI m/z:510.43(M+H)+。
实施例17 TM-29的制备
化合物3：将叔丁氧羰基保护的对4-胺基哌嗪-1-甲酸(29.89g，120mmol)加至二氯甲烷中(50ml)，依次加入EDCI(25.31g，132mmol)、HOBt(17.8g，132mmol)和4-甲氧基-3-甲基苯胺(18.09g，132mmol)，室温搅拌反应24h，TLC检测反应结束，减压去除溶剂，所得固体重新溶解于150mL混合溶液中(DCM:TFA＝7:3)，室温搅拌反应1h后，TLC检测反应结束，减压旋蒸除去溶剂，经柱层析分离得产品化合物3，收率75.32％，HPLC:99.78％。
中间体Ⅲ：将2,4,6-三氯嘧啶(化合物1)(55.03g,300mmol)加入到二氯甲烷(300ml)中搅拌至溶解，冰浴降温至0～5℃，缓慢滴加3-氯-4-氟苯胺(45.72g,315mmol，化合物2)，滴加完毕撤去冰浴，自然升至室温，TLC跟踪检测反应结束后，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅲ，收率85.34％，HPLC:99.86％，白色固体。
中间体Ⅱ：将中间体Ⅲ(29.25g,100mmol)和化合物3(29.08g，110mmol)加入到异丙醇(145.5ml)中，再加入浓盐酸(1ml)，回流反应，TLC检测跟踪至反应完全，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅱ，收率67.35％，HPLC:99.85％，白色固体。
TM-29：将中间体Ⅱ(6.24g，12mmol)、浓盐酸(0.5ml)、丙烯酰胺(1.02g,14.4mmol)加入到正辛醇(20ml)中，置于密闭微波反应器中，设温140℃，反应1h后结束，冷却至室温，加入乙酸乙酯和水各200ml，萃取、分液，有机相用水洗一次后用适量无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到式I化合物TM-29，白色固体，收率78.65％，HPLC:99.86％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：11.03(s,1H),10.20(s,1H),8.74(s,1H),7.71～7.54(m,2H),7.45(s,1H),7.25～7.17(m,3H),6.71(s,1H),6.55(dd,J＝10.6,8.8Hz,1H),5.82(d,J＝6.4Hz,2H),4.59(s,1H),3.64～3.57(m,4H),3.37(s,3H),2.83～3.79(m,4H),2.15(s,3H).13C-NMR(400MHz,DMSO-d6):172.8,168.8,167.7,162.8,158.6,149.7,142.4,137.5,135.7,130.4,128.5,125.8,124.3,123.4,122.3,121.2,119.5,118.7,118.4,115.1,114.8,72.4,58.9(2C),56.8,44.8(2C),19.7，MS-ESI m/z:554.20(M+H)+。
实施例18 TM-30的制备
化合物3：将叔丁氧羰基保护的对4-胺基哌嗪-1-甲酸(29.89g，120mmol)加至二氯甲烷中(30ml)，依次加入EDCI(25.31g，132mmol)、HOBt(17.82g，132mmol)2-氨基吡啶(12.42g，132mmol)，室温搅拌反应24h，TLC检测反应结束，减压去除溶剂，所得固体重新溶解于120mL混合溶液中(DCM:TFA＝7:3)，室温搅拌反应0.5h后，TLC检测反应结束，减压旋蒸除去溶剂，经柱层析分离得产品化合物3，收率77.61％，HPLC:99.82％。
中间体Ⅲ：将2,4,6-三氯嘧啶(化合物1)(55.03g,300mmol)加入到二氯甲烷(300ml)中搅拌至溶解，冰浴降温至0～5℃，缓慢滴加3-氯-4-氟苯胺(45.72g,315mmol，化合物2)，滴加完毕撤去冰浴，自然升至室温，TLC跟踪检测反应结束后，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅲ，收率86.53％，HPLC:99.82％，白色固体。
中间体Ⅱ：将中间体Ⅲ(29.25g,100mmol)和化合物3(24.33g，110mmol)加入到异丙醇(145.5ml)中，再加入浓盐酸(1ml)，回流反应，TLC检测跟踪至反应完全，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅱ，收率69.51％，HPLC:99.82％，白色固体。
TM-30：将中间体Ⅱ(5.73g，12mmol)、浓盐酸(0.5ml)、丙烯酰胺(1.02g,14.4mmol)加入到正辛醇(20ml)中，置于密闭微波反应器中，设温140℃，反应1.5h后结束，冷却至室温，加入乙酸乙酯和水各200ml，萃取、分液，有机相用水洗一次后用适量无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到式I化合物TM-30，白色固体，收率76.33％，HPLC:99.83％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：10.96(s,1H),1.54(s,1H),8.56(s,1H),8.13(s,1H),7.61～7.51(m,3H),7.23～7.15(m,3H),6.70(s,1H),6.57(dd,J＝10.6,8.8Hz,1H),5.84(d,J＝6.4Hz,2H),4.52(s,1H),3.62～3.58(m,4H),2.84～2.77(m,4H).13C-NMR(400MHz,DMSO-d6):171.8,167.8,166.7,163.8,159.6,148.7,145.6,142.4,137.5,130.4,128.5,125.7,124.2,123.8,122.5,121.7,118.6,115.1,114.8,59.5(2C),48.4(2C)，MS-ESI m/z:511.16(M+H)+。
实施例19 TM-32的制备
化合物3：将叔丁氧羰基保护的对3-胺基吡咯烷-1-甲酸(26.53g，120mmol)加至二氯甲烷中(30ml)，依次加入EDCI(25.31g，132mmol)、HOBt(17.82g，132mmol)、N,N-二甲基乙二胺(11.64g，132mmol)，室温搅拌反应24h，TLC检测反应结束，减压去除溶剂，所得固体重新溶解于120mL混合溶液中(DCM:TFA＝7:3)，室温搅拌反应0.5h后，TLC检测反应结束，减压旋蒸除去溶剂，经柱层析分离得产品化合物3，收率73.52％，HPLC:99.86％。
中间体Ⅲ：将2,4,6-三氯嘧啶(化合物1)(55.03g,300mmol)加入到二氯甲烷(300ml)中搅拌至溶解，冰浴降温至0～5℃，缓慢滴加3-氯-4-氟苯胺(45.72g,315mmol，化合物2)，滴加完毕撤去冰浴，自然升至室温，TLC跟踪检测反应结束后，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅲ，收率85.34％，HPLC:99.80％，白色固体。
中间体Ⅱ：将中间体Ⅲ(29.25g,100mmol)和化合物3(20.49g，110mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(150ml)中，再加入浓盐酸(1ml)，回流反应，TLC检测跟踪至反应完全，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅱ，收率71.66％，HPLC:99.85％，白色固体。
TM-32：将中间体Ⅱ(5.31g，12mmol)、浓盐酸(0.5ml)、丙烯酰胺(1.02g,14.4mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(20ml)中，置于密闭微波反应器中，设温140℃，反应1.0h后结束，冷却至室温，加入乙酸乙酯和水各200ml，萃取、分液，有机相用水洗一次后用适量无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到式I化合物TM-32，白色固体，收率74.62％，HPLC:99.85％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：10.79(s,1H),10.51(s,1H),8.63(s,1H),7.26～7.17(m,3H),6.72(s,1H),6.56(dd,J＝10.6,8.8Hz,1H),5.73(d,J＝6.4Hz,2H),4.51(s,1H),4.31(d,J＝5.7Hz,2H),3.62～3.40(m,4H),2..26(m,4H).1.62(d,J＝5.4Hz,2H).13C-NMR(400MHz,DMSO-d6):172.6,166.6,160.3,159.2,155.1,152.6,140.6,131.2,129.3,121.4,118.5,117.5,116.2,72.3，71.1,56.3,54.4,46.5,42.6(2C),34.8,MS-ESI m/z:476.25(M+H)+。
实施例20 TM-35的制备
化合物3：将叔丁氧羰基保护的对3-胺基吡咯烷-1-甲酸(26.53g，120mmol)加至二氯甲烷中(30ml)，依次加入EDCI(25.31g，132mmol)、HOBt(17.82g，132mmol)、对氟苯胺(14.68g，132mmol)，室温搅拌反应24h，TLC检测反应结束，减压去除溶剂，所得固体重新溶解于120mL混合溶液中(DCM:TFA＝7:3)，室温搅拌反应0.5h后，TLC检测反应结束，减压旋蒸除去溶剂，经柱层析分离得产品化合物3，收率77.64％，HPLC:99.83％。
中间体Ⅲ：将2,4,6-三氯嘧啶(化合物1)(55.03g,300mmol)加入到二氯甲烷(300ml)中搅拌至溶解，冰浴降温至0～5℃，缓慢滴加3-氯-4-氟苯胺(45.72g,315mmol，化合物2)，滴加完毕撤去冰浴，自然升至室温，TLC跟踪检测反应结束后，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅲ，收率84.67％，HPLC:99.86％，白色固体。
中间体Ⅱ：将中间体Ⅲ(29.25g,100mmol)和化合物3(24.56g，110mmol)加入到异丙醇(150ml)中，再加入浓盐酸(1ml)，回流反应，TLC检测跟踪至反应完全，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅱ，收率72.91％，HPLC:99.82％，白色固体。
TM-35：将中间体Ⅱ(5.75g，12mmol)、浓盐酸(0.5ml)、丙烯酰胺(1.02g,14.4mmol)加入到正辛醇(20ml)中，置于密闭微波反应器中，设温140℃，反应1.5h后结束，冷却至室温，加入乙酸乙酯和水各200ml，萃取、分液，有机相用水洗一次后用适量无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到式I化合物TM-35，白色固体，收率71.46％，HPLC:99.87％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：11.26(s,1H),10.63(s,1H),8.77(s,1H),7.53～7.15(m,7H),6.73(s,1H),6.56(dd,J＝10.6,8.8Hz,1H),5.79(d,J＝6.4Hz,2H),4.51(s,1H),4.32(d,J＝5.7Hz,2H),3.64～3.47(m,4H).13C-NMR(400MHz,DMSO-d6):172.5,166.8,160.2,158.6(2C),153.7,152.6,159.6,140.2,131.5(2C),129.2,123.5(2C),121.7,118.2,117.7,115.9(3C),116.2,72.3，56.7,54.3,46.3,34.5,MS-ESI m/z:513.52(M+H)+。
实施例21 TM-36的制备
化合物3：将叔丁氧羰基保护的对3-胺基吡咯烷-1-甲酸(26.53g，120mmol)加至二氯甲烷中(30ml)，依次加入EDCI(25.31g，132mmol)、HOBt(17.82g，132mmol)、2-氨基吡啶(12.42g，132mmol)，室温搅拌反应36h，TLC检测反应结束，减压去除溶剂，所得固体重新溶解于120mL混合溶液中(DCM:TFA＝7:3)，室温搅拌反应0.5h后，TLC检测反应结束，减压旋蒸除去溶剂，经柱层析分离得产品化合物3，收率71.43％，HPLC:99.81％。
中间体Ⅲ：将2,4,6-三氯嘧啶(化合物1)(55.03g,300mmol)加入到二氯甲烷(300ml)中搅拌至溶解，冰浴降温至0～5℃，缓慢滴加3-氯-4-氟苯胺(45.72g,315mmol，化合物2)，滴加完毕撤去冰浴，自然升至室温，TLC跟踪检测反应结束后，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅲ，收率85.62％，HPLC:99.83％，白色固体。
中间体Ⅱ：将中间体Ⅲ(29.25g,100mmol)和化合物3(22.69g，110mmol)加入到异丙醇(145.5ml)中，再加入浓盐酸(1ml)，回流反应，TLC检测跟踪至反应完全，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅱ，收率76.24％，HPLC:99.85％，白色固体。
TM-36：将中间体Ⅱ(5.55g，12mmol)、浓盐酸(0.5ml)、丙烯酰胺(1.02g,14.4mmol)加入到正辛醇(20ml)中，置于密闭微波反应器中，设温140℃，反应0.5h后结束，冷却至室温，加入乙酸乙酯和水各200ml，萃取、分液，有机相用水洗一次后用适量无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到式I化合物TM-36，白色固体，收率75.31％，HPLC:99.87％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：11.31(s,1H),10.43(s,1H),8.71(s,1H),8.10(s,1H),7.61～7.53(m,3H),7.15～7.10(m,3H),6.76(s,1H),6.52(dd,J＝10.6,8.8Hz,1H),5.53(d,J＝6.4Hz,2H),4.54(s,1H),3.75～3.59(m,4H),2.84～2.75(m,1H),2.12～1.88(m,2H).13C-NMR(400MHz,DMSO-d6):170.8,168.8,166.7,161.8,157.6,149.7,146.7,142.4,137.5,132.9,128.6,125.5,124.8,123.9,123.3,121.2,117.4,115.1,114.5,65.4,57.5,42.3,38.2，MS-ESI m/z:496.15(M+H)+。
实施例22 TM-37的制备
化合物3：将叔丁氧羰基保护的对3-胺基吡咯烷-1-甲酸(26.53g，120mmol)加至二氯甲烷中(50ml)，依次加入EDCI(25.31g，132mmol)、HOBt(17.82g，132mmol)、4-甲氧基-3-甲基苯胺(18.09g，132mmol)，室温搅拌反应36h，TLC检测反应结束，减压去除溶剂，所得固体重新溶解于150mL混合溶液中(DCM:TFA＝7:3)，室温搅拌反应0.5h后，TLC检测反应结束，减压旋蒸除去溶剂，经柱层析分离得产品化合物3，收率76.53％，HPLC:99.83％。
中间体Ⅲ：将2,4,6-三氯嘧啶(化合物1)(55.03g,300mmol)加入到二氯甲烷(300ml)中搅拌至溶解，冰浴降温至0～5℃，缓慢滴加3-氯-4-氟苯胺(45.72g,315mmol，化合物2)，滴加完毕撤去冰浴，自然升至室温，TLC跟踪检测反应结束后，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅲ，收率82.57％，HPLC:99.88％，白色固体。
中间体Ⅱ：将中间体Ⅲ(29.25g,100mmol)和化合物3(27.42g，110mmol)加入到N，N-二甲基甲酰胺(145.5ml)中，再加入浓盐酸(1ml)，回流反应，TLC检测跟踪至反应完全，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅱ，收率77.36％，HPLC:99.87％，白色固体。
TM-37：将中间体Ⅱ(6.06g，12mmol)、浓盐酸(0.5ml)、丙烯酰胺(1.02g,14.4mmol)加入到正辛醇(20ml)中，置于密闭微波反应器中，设温140℃，反应1h后结束，冷却至室温，加入乙酸乙酯和水各200ml，萃取、分液，有机相用水洗一次后用适量无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到式I化合物TM-37，白色固体，收率79.56％，HPLC:99.85％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：11.08(s,1H),10.33(s,1H),8.71(s,1H),7.60～7.55(m,2H),7.42(s,1H),7.27～7.19(m,3H),6.71(s,1H),6.52(dd,J＝10.6,8.8Hz,1H),5.87(d,J＝6.4Hz,2H),4.53(s,1H),3.72～3.58(m,4H),3.367(s,3H),2.84～2.75(m,1H),2.16～1.75(m,2H),2.18(s,3H).13C-NMR(400MHz,DMSO-d6):171.8,168.3,166.7,162.2,158.4,149.6,142.2,136.5,135.2,130.1,128.7,125.2,124.5,123.7,122.3,121.8,119.8,118.5,116.1,115.8,74.1,66.4,57.5,41.3,37.2,19.3，MS-ESI m/z:539.18(M+H)+。
实施例23 TM-40的制备
化合物3：将叔丁氧羰基保护的对4-胺基环丁烷-2-甲酸(23.17g，120mmol)加至二氯甲烷中(50ml)，依次加入EDCI(25.31g，132mmol)、HOBt(17.82g，132mmol)、4-甲氧基-3-甲基苯胺(18.09g，132mmol)，室温搅拌反应24h，TLC检测反应结束，减压去除溶剂，所得固体重新溶解于150mL混合溶液中(DCM:TFA＝7:3)，室温搅拌反应0.5h后，TLC检测反应结束，减压旋蒸除去溶剂，经柱层析分离得产品化合物3，收率71.59％，HPLC:99.85％。
中间体Ⅲ：将2,4,6-三氯嘧啶(化合物1)(55.03g,300mmol)加入到丙酮(300ml)中搅拌至溶解，冰浴降温至0～5℃，缓慢滴加3-氯-4-氟苯胺(45.72g,315mmol，化合物2)，滴加完毕撤去冰浴，自然升至室温，TLC跟踪检测反应结束后，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅲ，收率84.37％，HPLC:99.83％，白色固体。
中间体Ⅱ：将中间体Ⅲ(29.25g,100mmol)和化合物3(24.22g，110mmol)加入到异丙醇(150ml)中，再加入浓盐酸(1ml)，回流反应，TLC检测跟踪至反应完全，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅱ，收率75.62％，HPLC:99.85％，白色固体。
TM-40：将中间体Ⅱ(5.72g，12mmol)、浓盐酸(0.5ml)、丙烯酰胺(1.02g,14.4mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(20ml)中，置于密闭微波反应器中，设温140℃，反应1.5h后结束，冷却至室温，加入乙酸乙酯和水各200ml，萃取、分液，有机相用水洗一次后用适量无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到式I化合物TM-40，白色固体，收率77.26％，HPLC:99.87％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：11.21(s,1H),10.12(s,1H),8.71(s,1H),7.66～7.51(m,2H),7.49(s,1H),7.26～7.14(m,3H),6.78(s,1H),6.56(dd,J＝10.6,8.8Hz,1H),5.80(d,J＝6.4Hz,2H),4.55(s,1H),3.74～3.55(m,4H),3.36(s,3H),2.81～2.75(m,1H),2.09～1.75(m,2H),2.16(s,3H).13C-NMR(400MHz,DMSO-d6):172.4,167.8,166.7,160.8,157.5,148.6,143.4,138.5,136.7,134.4,128.2,125.7,124.6,123.5,122.4,121.8,119.3,118.3,115.7,114.2,72.5,65.7,58.6,42.5,38.3,19.5，MS-ESI m/z:510.15(M+H)+。
实施例24 TM-43的制备
化合物3：将叔丁氧羰基保护的对4-胺基环丁烷-2-甲酸(23.17g，120mmol)加至二氯甲烷中(30ml)，依次加入EDCI(25.31g，132mmol)、HOBt(17.82g，132mmol)、2-氨基吡啶(12.42g，132mmol)，室温搅拌反应24h，TLC检测反应结束，减压去除溶剂，所得固体重新溶解于120mL混合溶液中(DCM:TFA＝7:3)，室温搅拌反应1h后，TLC检测反应结束，减压旋蒸除去溶剂，经柱层析分离得产品化合物3，收率73.62％，HPLC:99.83％。
中间体Ⅲ：将2,4,6-三氯嘧啶(化合物1)(55.03g,300mmol)加入到二氯甲烷(300ml)中搅拌至溶解，冰浴降温至0～5℃，缓慢滴加3-氯-4-氟苯胺(45.72g,315mmol，化合物2)，滴加完毕撤去冰浴，自然升至室温，TLC跟踪检测反应结束后，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅲ，收率85.67％，HPLC:99.87％，白色固体。
中间体Ⅱ：将中间体Ⅲ(29.25g,100mmol)和化合物3(19.49g，110mmol)加入到异丙醇(145.5ml)中，再加入浓盐酸(1ml)，回流反应，TLC检测跟踪至反应完全，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅱ，收率76.29％，HPLC:99.82％，白色固体。
TM-43：将中间体Ⅱ(5.20g，12mmol)、浓盐酸(0.5ml)、丙烯酰胺(1.02g,14.4mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(20ml)中，置于密闭微波反应器中，设温140℃，反应1.5h后结束，冷却至室温，加入乙酸乙酯和水各200ml，萃取、分液，有机相用水洗一次后用适量无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到式I化合物TM-43，白色固体，收率75.35％，HPLC:99.89％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：11.13(s,1H),10.21(s,1H),8.71(s,1H),8.17(s,1H),7.74～7.56(m,3H),7.20～7.12(m,3H),6.70(s,1H),6.54(dd,J＝10.6,8.8Hz,1H),5.86(d,J＝6.4Hz,2H),5.75～5.64(m,2H),4.55(s,1H),2.92～2.83(m,2H).13C-NMR(400MHz,DMSO-d6):171.8,168.4,167.9,162.5,158.2,149.7,145.7,142.4,137.5,130.4,128.5,125.5,124.6,123.4,122.4,121.5,118.4,115.6,114.5,95.4,88.4,33.6，MS-ESI m/z:467.12(M+H)+。
实施例25 TM-44的制备
化合物3：将叔丁氧羰基保护的对4-胺基环丁烷-2-甲酸(23.17g，120mmol)加至二氯甲烷中(50ml)，依次加入EDCI(25.31g，132mmol)、HOBt(17.82g，132mmol)、4-(4-(4-甲基哌嗪-1基)-哌啶-1基)苯胺(30.20g，132mmol)，室温搅拌反应24h，TLC检测反应结束，减压去除溶剂，所得固体重新溶解于150mL混合溶液中(DCM:TFA＝7:3)，室温搅拌反应0.5h后，TLC检测反应结束，减压旋蒸除去溶剂，经柱层析分离得产品化合物3，收率76.33％，HPLC:99.837％。
中间体Ⅲ：将2,4,6-三氯嘧啶(化合物1)(55.03g,300mmol)加入到二氯甲烷(300ml)中搅拌至溶解，冰浴降温至0～5℃，缓慢滴加3-氯-4-氟苯胺(45.72g,315mmol，化合物2)，滴加完毕撤去冰浴，自然升至室温，TLC跟踪检测反应结束后，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅲ，收率86.52％，HPLC:99.86％，白色固体。
中间体Ⅱ：将中间体Ⅲ(29.25g,100mmol)和化合物3(39.32g，110mmol)加入到异丙醇(145.5ml)中，再加入浓盐酸(1ml)，回流反应，TLC检测跟踪至反应完全，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅱ，收率73.51％，HPLC:99.86％，白色固体。
TM-44：将中间体Ⅱ(7.33g，12mmol)、浓盐酸(0.5ml)、丙烯酰胺(1.02g,14.4mmol)加入到正辛醇(20ml)中，置于密闭微波反应器中，设温140℃，反应1.5h后结束，冷却至室温，加入乙酸乙酯和水各200ml，萃取、分液，有机相用水洗一次后用适量无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到式I化合物TM-44，白色固体，收率77.52％，HPLC:99.90％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：11.26(s,1H),10.17(s,1H),8.83(s,1H),7.20～7.12(m,7H),6.73(s,1H),6.56(dd,J＝10.6,8.8Hz,1H),5.87(d,J＝6.4Hz,2H),5.75～5.64(m,2H),4.51(s,1H),2.83(m,4H),2.45(m,8H),2.32(s,3H),1.72(m,4H).13C-NMR(400MHz,DMSO-d6):172.4,171.4,166.7,160.3,159.1,152.6,145.7,140.6,131.3,129.5,128.2,122.4(2C),121.4,118.5,117.9,116.7,114.6(2C),91.2,83.6,73.1,57.6,55.7(2C),50.5(2C),47.9(2C),43.3,32.6,28.5(2C),MS-ESI m/z:646.23(M+H)+。
实施例26 TM-47的制备
化合物3：将叔丁氧羰基保护的对4-胺基环丁烷-2-甲酸(23.17g，120mmol)加至二氯甲烷中(40ml)，依次加入EDCI(25.31g，132mmol)、HOBt(17.82g，132mmol)、2-氨基苯并咪唑(17.57g，132mmol)，室温搅拌反应24h，TLC检测反应结束，减压去除溶剂，所得固体重新溶解于120mL混合溶液中(DCM:TFA＝7:3)，室温搅拌反应0.5h后，TLC检测反应结束，减压旋蒸除去溶剂，经柱层析分离得产品化合物3，收率71.53％，HPLC:99.87％。
中间体Ⅲ：将2,4,6-三氯嘧啶(化合物1)(55.03g,300mmol)加入到二氯甲烷(300ml)中搅拌至溶解，冰浴降温至0～5℃，缓慢滴加3-氯-4-氟苯胺(45.72g,315mmol，化合物2)，滴加完毕撤去冰浴，自然升至室温，TLC跟踪检测反应结束后，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅲ，收率83.42％，HPLC:99.86％，白色固体。
中间体Ⅱ：将中间体Ⅲ(29.25g,100mmol)和化合物3(23.79g，110mmol)加入到N，N二甲基甲酰胺(150ml)中，再加入浓盐酸(1ml)，回流反应，TLC检测跟踪至反应完全，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅱ，收率76.35％，HPLC:99.82％，白色固体。
TM-47：将中间体Ⅱ(5.67g，12mmol)、浓盐酸(0.5ml)、丙烯酰胺(1.02g,14.4mmol)加入到正辛醇(20ml)中，置于密闭微波反应器中，设温140℃，反应1.5h后结束，冷却至室温，加入乙酸乙酯和水各200ml，萃取、分液，有机相用水洗一次后用适量无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到式I化合物TM-47，白色固体，收率72.16％，HPLC:99.91％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：11.06(s,1H),10.43(s,1H),8.69(s,1H),7.74～7.37(m,4H),7.26～7.16(m,3H),6.76(s,1H),6.46(dd,J＝10.6,8.8Hz,1H),5.89(d,J＝6.4Hz,2H),5.79～5.62(m,4H),4.52(s,1H),3.29～3.01(m,2H).13C-NMR(400MHz,DMSO-d6):172.5,171.5,166.5,160.3,159.7,152.6,147.6,140.2,138.7,131.2,129.4,123.5(2C),121.5,118.5,117.8,116.2,115.2(2C),91.2,83.6,72.6,32.6,MS-ESI m/z:506.36(M+H)+。
实施例27 TM-52的制备
化合物3：将叔丁氧羰基保护的2-氨基乙磺酸(27.01g，120mmol)加至二氯甲烷中(50ml)，依次加入EDCI(25.31g，132mmol)、HOBt(17.82g，132mmol)、4-甲氧基-3-甲基苯胺(18.09g，132mmol)，室温搅拌反应24h，TLC检测反应结束，减压去除溶剂，所得固体重新溶解于150mL混合溶液中(DCM:TFA＝7:3)，室温搅拌反应1h后，TLC检测反应结束，减压旋蒸除去溶剂，经柱层析分离得产品化合物3，收率77.62％，HPLC:99.83％。
中间体Ⅲ：将2,4,6-三氯嘧啶(化合物1)(55.03g,300mmol)加入到二氯甲烷(300ml)中搅拌至溶解，冰浴降温至0～5℃，缓慢滴加3-氯-4-氟苯胺(45.72g,315mmol，化合物2)，滴加完毕撤去冰浴，自然升至室温，TLC跟踪检测反应结束后，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅲ，收率86.37％，HPLC:99.89％，白色固体。
中间体Ⅱ：将中间体Ⅲ(29.25g,100mmol)和化合物3(26.87g，110mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(145.5ml)中，再加入浓盐酸(1ml)，回流反应，TLC检测跟踪至反应完全，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅱ，收率73.46％，HPLC:99.87％，白色固体。
TM-52：将中间体Ⅱ(6.01g，12mmol)、浓盐酸(0.5ml)、丙烯酰胺(1.02g,14.4mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(20ml)中，置于密闭微波反应器中，设温140℃，反应1h后结束，冷却至室温，加入乙酸乙酯和水各200ml，萃取、分液，有机相用水洗一次后用适量无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到式I化合物TM-52，白色固体，收率75.33％，HPLC:99.90％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：11.03(s,1H),10.20(s,1H),8.73(s,1H),7.75～7.61(m,2H),7.41(s,1H),7.27～7.18(m,3H),6.74(s,1H),6.56(dd,J＝10.6,8.8Hz,1H),5.85(d,J＝6.4Hz,2H),4.53(s,1H),3.67～3.58(m,4H),3.47(s,3H),2.17(s,3H).13C-NMR(400MHz,DMSO-d6):172.5,168.4,167.7,162.6,158.1,149.5,142.3,137.5,135.7,130.4,128.3,125.2,124.8,123.1,121.3,119.5,118.2,115.8,114.8,65.4,58.5,42.8,19.4，MS-ESI m/z:534.13(M+H)+。
实施例28 TM-53的制备
化合物3：将叔丁氧羰基保护的2-氨基乙磺酸(27.01g，120mmol)加至二氯甲烷中(30ml)，依次加入EDCI(25.31g，132mmol)、HOBt(17.82g，132mmol)、2-氨基吡啶(12.42g，132mmol)，室温搅拌反应24h，TLC检测反应结束，减压去除溶剂，所得固体重新溶解于120mL混合溶液中(DCM:TFA＝7:3)，室温搅拌反应0.5h后，TLC检测反应结束，减压旋蒸除去溶剂，经柱层析分离得产品化合物3，收率78.46％，HPLC:99.85％。
中间体Ⅲ：将2,4,6-三氯嘧啶(化合物1)(55.03g,300mmol)加入到二氯甲烷(300ml)中搅拌至溶解，冰浴降温至0～5℃，缓慢滴加3-氯-4-氟苯胺(45.72g,315mmol，化合物2)，滴加完毕撤去冰浴，自然升至室温，TLC跟踪检测反应结束后，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅲ，收率83.21％，HPLC:99.87％，白色固体。
中间体Ⅱ：将中间体Ⅲ(29.25g,100mmol)和化合物3(22.14g，110mmol)加入到异丙醇(145.5ml)中，再加入浓盐酸(1ml)，回流反应，TLC检测跟踪至反应完全，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅱ，收率75.42％，HPLC:99.89％，白色固体。
TM-53：将中间体Ⅱ(5.49g，12mmol)、浓盐酸(0.5ml)、丙烯酰胺(1.02g,14.4mmol)加入到正辛醇(20ml)中，置于密闭微波反应器中，设温140℃，反应0.5h后结束，冷却至室温，加入乙酸乙酯和水各200ml，萃取、分液，有机相用水洗一次后用适量无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到式I化合物TM-53，白色固体，收率72.35％，HPLC:99.88％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：11.22(s,1H),11.21(s,1H),8.64(s,1H),8.18(s,1H),7.70～7.58(m,3H),7.21～7.19(m,3H),6.70(s,1H),6.57(dd,J＝10.6,8.8Hz,1H),5.85(d,J＝6.4Hz,2H),4.66(s,1H),3.62～3.58(m,4H).13C-NMR(400MHz,DMSO-d6):170.8,169.8,168.7,163.8,155.6,149.4,145.5,142.3,136.8,130.8,128.5,126.3,124.1,122.2,117.6,115.1,114.8,95.4,65.3,42.8，MS-ESI m/z:491.09(M+H)+。
实施例29 TM-55的制备
化合物3：将叔丁氧羰基保护的2-氨基乙磺酸(27.01g，120mmol)加至二氯甲烷中(40ml)，依次加入EDCI(25.31g，132mmol)、HOBt(17.82g，132mmol)、2-氨基苯并咪唑(17.57g，132mmol)，室温搅拌反应24h，TLC检测反应结束，减压去除溶剂，所得固体重新溶解于150mL混合溶液中(DCM:TFA＝7:3)，室温搅拌反应0.5h后，TLC检测反应结束，减压旋蒸除去溶剂，经柱层析分离得产品化合物3，收率74.36％，HPLC:99.81％。
中间体Ⅲ：将2,4,6-三氯嘧啶(化合物1)(55.03g,300mmol)加入到二氯甲烷(300ml)中搅拌至溶解，冰浴降温至0～5℃，缓慢滴加3-氯-4-氟苯胺(45.72g,315mmol，化合物2)，滴加完毕撤去冰浴，自然升至室温，TLC跟踪检测反应结束后，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅲ，收率79.53％，HPLC:99.86％，白色固体。
中间体Ⅱ：将中间体Ⅲ(29.25g,100mmol)和化合物3(26.42g，110mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(145.5ml)中，再加入高氯酸(2ml)，回流反应，TLC检测跟踪至反应完全，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅱ，收率72.16％，HPLC:99.83％，白色固体。
TM-55：将中间体Ⅱ(5.96g，12mmol)、浓盐酸(0.5ml)、丙烯酰胺(1.02g,14.4mmol)加入到正辛醇(20ml)中，置于密闭微波反应器中，设温140℃，反应1h后结束，冷却至室温，加入乙酸乙酯和水各200ml，萃取、分液，有机相用水洗一次后用适量无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到式I化合物TM-55，白色固体，收率76.31％，HPLC:99.89％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：11.37(s,1H),11.16(s,1H),8.76(s,1H),7.73～7.46(m,4H),7.21～7.19(m,4H),6.73(s,1H),6.57(dd,J＝10.6,8.8Hz,1H),5.85(d,J＝6.4Hz,2H),4.69(s,1H),3.62(S,4H).13C-NMR(400MHz,DMSO-d6):172.5,166.9,160.3,159.2,152.6,149.6,140.3,131.3,138.8(2C),129.1,123.1(2C),121.5,118.4,117.6,116.5,115.6(2C),72.5,55.7,40.5,MS-ESI m/z:530.56(M+H)+。
实施例30 TM-58的制备
化合物3：将叔丁氧羰基保护的5-胺基吡啶基-2-磺酸(33.18g，120mmol)加至二氯甲烷中(50ml)，依次加入EDCI(25.31g，132mmol)、HOBt(17.82g，132mmol)、4-甲氧基-3-甲基苯胺(18.09g，132mmol)，室温搅拌反应24h，TLC检测反应结束，减压去除溶剂，所得固体重新溶解于150mL混合溶液中(DCM:TFA＝7:3)，室温搅拌反应0.5h后，TLC检测反应结束，减压旋蒸除去溶剂，经柱层析分离得产品化合物3，收率75.42％，HPLC:99.83％。
中间体Ⅲ：将2,4,6-三氯嘧啶(化合物1)(55.03g,300mmol)加入到二氯甲烷(300ml)中搅拌至溶解，冰浴降温至0～5℃，缓慢滴加3-氯-4-氟苯胺(45.72g,315mmol，化合物2)，滴加完毕撤去冰浴，自然升至室温，TLC跟踪检测反应结束后，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅲ，收率82.43％，HPLC:99.85％，白色固体。
中间体Ⅱ：将中间体Ⅲ(29.25g,100mmol)和化合物3(32.27g，110mmol)加入到异丙醇(145.5ml)中，再加入浓盐酸(1ml)，回流反应，TLC检测跟踪至反应完全，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅱ，收率73.26％，HPLC:99.85％，白色固体。
TM-58：将中间体Ⅱ(6.59g，12mmol)、浓盐酸(0.5ml)、丙烯酰胺(1.02g,14.4mmol)加入到正辛醇(20ml)中，置于密闭微波反应器中，设温140℃，反应1.5h后结束，冷却至室温，加入乙酸乙酯和水各200ml，萃取、分液，有机相用水洗一次后用适量无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到式I化合物TM-58，白色固体，收率77.34％，HPLC:99.91％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：10.89(s,1H),10.37(s,1H),8.64(s,1H),7.70～7.58(m,3H),7.47(s,1H),7.28～7.20(m,5H),6.74(s,1H),6.51(dd,J＝10.6,8.8Hz,1H),5.83(d,J＝6.4Hz,2H),4.64(s,1H),3.40(s,3H),2.17(s,3H).13C-NMR(400MHz,DMSO-d6):171.6,167.3,167.1,162.5,158.3,149.5,137.6,135.9,132.2(2C),131.4,128.9,125.5,124.7,123.4,120.2,119.5,119.1,118.5,115.7,114.2,113.1(2C),72.8,56.5,19.3，MS-ESI m/z:583.12(M+H)+。
实施例31 TM-59的制备
化合物3：将叔丁氧羰基保护的5-胺基吡啶基-2-磺酸(33.18g，120mmol)加至二氯甲烷中(30ml)，依次加入EDCI(25.31g，132mmol)、HOBt(17.82g，132mmol)、2-氨基吡啶(12.42g，132mmol)，室温搅拌反应24h，TLC检测反应结束，减压去除溶剂，所得固体重新溶解于120mL混合溶液中(DCM:TFA＝7:3)，室温搅拌反应0.5h后，TLC检测反应结束，减压旋蒸除去溶剂，经柱层析分离得产品化合物3，收率76.12％，HPLC:99.85％。
中间体Ⅲ：将2,4,6-三氯嘧啶(化合物1)(55.03g,300mmol)加入到二氯甲烷(300ml)中搅拌至溶解，冰浴降温至0～5℃，缓慢滴加3-氯-4-氟苯胺(45.72g,315mmol，化合物2)，滴加完毕撤去冰浴，自然升至室温，TLC跟踪检测反应结束后，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅲ，收率81.33％，HPLC:99.87％，白色固体。
中间体Ⅱ：将中间体Ⅲ(29.25g,100mmol)和化合物3(27.53g，110mmol)加入到异丙醇(145.5ml)中，再加入浓盐酸(1ml)，回流反应，TLC检测跟踪至反应完全，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅱ，收率75.62％，HPLC:99.86％，白色固体。
TM-59：将中间体Ⅱ(6.08g，12mmol)、浓盐酸(0.5ml)、丙烯酰胺(1.02g,14.4mmol)加入到二甲基亚砜(20ml)中，置于密闭微波反应器中，设温140℃，反应1.5h后结束，冷却至室温，加入乙酸乙酯和水各200ml，萃取、分液，有机相用水洗一次后用适量无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到式I化合物TM-59，白色固体，收率79.51％，HPLC:99.89％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：11.04(s,1H),10.17(s,1H),8.65(s,1H),8.02(s,1H),7.73～7.58(m,3H),7.44～7.37(m,2H),7.25～7.17(m,4H),6.71(s,1H),6.54(dd,J＝10.6,8.8Hz,1H),5.72(d,J＝6.4Hz,2H),4.64(s,1H).13C-NMR(400MHz,DMSO-d6):172.8,167.5,166.7,160.8,157.6,148.7,145.8,142.4,137.6,135.7,131.2(2C),130.4,128.5,124.3,124.8,123.3,120.2,118.4,116.1,113.8,112.5(2C)，MS-ESI m/z:540.09(M+H)+。
实施例32 TM-63的制备
化合物3：将叔丁氧羰基保护的5-胺基吡啶基-2-磺酸(33.18g，120mmol)加至二氯甲烷中(50ml)，依次加入EDCI(25.31g，132mmol)、HOBt(17.82g，132mmol)、4-(4-(4-甲基哌嗪-1基)-哌啶-1基)苯胺(30.20g，132mmol)，室温搅拌反应24h，TLC检测反应结束，减压去除溶剂，所得固体重新溶解于150mL混合溶液中(DCM:TFA＝7:3)，室温搅拌反应0.5h后，TLC检测反应结束，减压旋蒸除去溶剂，经柱层析分离得产品化合物3，收率77.29％，HPLC:99.87％。
中间体Ⅲ：将2,4,6-三氯嘧啶(化合物1)(55.03g,300mmol)加入到二氯甲烷(300ml)中搅拌至溶解，冰浴降温至0～5℃，缓慢滴加3-氯-4-氟苯胺(45.72g,315mmol，化合物2)，滴加完毕撤去冰浴，自然升至室温，TLC跟踪检测反应结束后，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅲ，收率79.36％，HPLC:99.85％，白色固体。
中间体Ⅱ：将中间体Ⅲ(29.25g,100mmol)和化合物3(47.36g，110mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(150ml)中，再加入浓盐酸(1ml)，回流反应，TLC检测跟踪至反应完全，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅱ，收率76.59％，HPLC:99.89％，白色固体。
TM-63：将中间体Ⅱ(8.24g，12mmol)、浓盐酸(0.5ml)、丙烯酰胺(1.02g,14.4mmol)加入到正辛醇(20ml)中，置于密闭微波反应器中，设温140℃，反应0.5h后结束，冷却至室温，加入乙酸乙酯和水各200ml，萃取、分液，有机相用水洗一次后用适量无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到式I化合物TM-63，白色固体，收率76.33％，HPLC:99.85％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：11.02(s,1H),10.13(s,1H),8.87(s,1H),8.59(s,1H),8.04(s,1H),7.32～7.26(m,4H),6.69(s,1H),6.52(dd,J＝10.6,8.8Hz,1H),6.36～6.29(m,4H),5.71(d,J＝6.4Hz,2H),4.67(s,1H),2.81(m,4H),2.46(m,8H),2.31(m,3H),1.68～1.43(m,4H).13C-NMR(400MHz,DMSO-d6):172.4,167.6,166.5,159.5,152.6,149.6,148.6,140.3,139.6(2C),136.5,131.6,129.1,127.6,121.5(2C),120.6,118.2,117.6(3C),116.2,115.2(3C),72.4,57.7,55.4(2C),50.6(2C),47.6(2C),43.6,28.3(2C),MS-ESI m/z:721.16(M+H)+。
实施例33 TM-64的制备
化合物3：将叔丁氧羰基保护的5-胺基吡啶基-2-甲酸(33.18g，120mmol)加至二氯甲烷中(30ml)，依次加入EDCI(25.31g，132mmol)、HOBt(17.82g，132mmol)、N,N-二甲基乙二胺(11.63g，132mmol)，室温搅拌反应24h，TLC检测反应结束，减压去除溶剂，所得固体重新溶解于120mL混合溶液中(DCM:TFA＝7:3)，室温搅拌反应0.5h后，TLC检测反应结束，减压旋蒸除去溶剂，经柱层析分离得产品化合物3，收率75.16％，HPLC:99.83％。
中间体Ⅲ：将2,4,6-三氯嘧啶(化合物1)(55.03g,300mmol)加入到二氯甲烷(300ml)中搅拌至溶解，冰浴降温至0～5℃，缓慢滴加3-氯-4-氟苯胺(45.72g,315mmol，化合物2)，滴加完毕撤去冰浴，自然升至室温，TLC跟踪检测反应结束后，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅲ，收率81.31％，HPLC:99.86％，白色固体。
中间体Ⅱ：将中间体Ⅲ(29.25g,100mmol)和化合物3(21.37g，110mmol)加入到异丙醇(145.5ml)中，再加入浓盐酸(1ml)，回流反应，TLC检测跟踪至反应完全，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅱ，收率77.56％，HPLC:99.88％，白色固体。
TM-64：将中间体Ⅱ(5.40g，12mmol)、浓盐酸(0.5ml)、丙烯酰胺(1.02g,14.4mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(20ml)中，置于密闭微波反应器中，设温140℃，反应1.5h后结束，冷却至室温，加入乙酸乙酯和水各200ml，萃取、分液，有机相用水洗一次后用适量无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到式I化合物TM-64，白色固体，收率77.69％，HPLC:99.89％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：11.23(s,1H),10.46(s,1H),8.87(s,1H),8.57(s,1H),8.19(s,1H),7.73～7.58(m,4H),6.73(s,1H),6.59(dd,J＝10.6,8.8Hz,1H),5.76(d,J＝6.4Hz,2H),4.67(s,1H),4.16(s,2H),2.31(m,6H),.13C-NMR(400MHz,DMSO-d6):172.9,167.6,166.4,161.3,159.7,152.9,147.6,140.2(2C),134.5,131.3,129.6,123.6,122.2,121.8,118.5,117.8,116.3,72.3,68.6,43.2(2C),MS-ESI m/z:483.76(M+H)+。
实施例34 TM-68的制备
化合物3：将叔丁氧羰基保护的5-胺基吡啶基-2-甲酸(33.18g，120mmol)加至二氯甲烷中(40ml)，依次加入EDCI(25.31g，132mmol)、HOBt(17.82g，132mmol)、4-甲氧基-3-甲基苯胺(18.09g，132mmol)，室温搅拌反应24h，TLC检测反应结束，减压去除溶剂，所得固体重新溶解于150mL混合溶液中(DCM:TFA＝7:3)，室温搅拌反应0.5h后，TLC检测反应结束，减压旋蒸除去溶剂，经柱层析分离得产品化合物3，收率76.53％，HPLC:99.85％。
中间体Ⅲ：将2,4,6-三氯嘧啶(化合物1)(55.03g,300mmol)加入到二氯甲烷(300ml)中搅拌至溶解，冰浴降温至0～5℃，缓慢滴加3-氯-4-氟苯胺(45.72g,315mmol，化合物2)，滴加完毕撤去冰浴，自然升至室温，TLC跟踪检测反应结束后，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅲ，收率80.16％，HPLC:99.85％，白色固体。
中间体Ⅱ：将中间体Ⅲ(29.25g,100mmol)和化合物3(28.29g，110mmol)加入到异丙醇(145.5ml)中，再加入浓盐酸(1ml)，回流反应，TLC检测跟踪至反应完全，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅱ，收率72.51％，HPLC:99.89％，白色固体。
TM-68：将中间体Ⅱ(6.16g，12mmol)、浓盐酸(0.5ml)、丙烯酰胺(1.02g,14.4mmol)加入到正辛醇(20ml)中，置于密闭微波反应器中，设温140℃，反应2.5h后结束，冷却至室温，加入乙酸乙酯和水各200ml，萃取、分液，有机相用水洗一次后用适量无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到式I化合物TM-68，白色固体，收率76.31％，HPLC:99.90％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：10.88(s,1H),10.20(s,1H),8.71(s,1H),7.71～7.50(m,4H),7.47(s,1H),7.25～7.17(m,4H),6.71(s,1H),6.55(dd,J＝10.6,8.8Hz,1H),5.83(d,J＝6.4Hz,2H),4.55(s,1H),3.37(s,3H),2.15(s,3H).13C-NMR(400MHz,DMSO-d6):171.8,168.5,167.7,162.2,158.6,149.8,142.4,137.5,135.7,132.2(2C),130.4,127.5,125.8,123.3,123.6,122.3,118.5,118.7,118.4,116.2,114.8,113.5(2C),72.4,56.8,19.7，MS-ESI m/z:547.15(M+H)+。
实施例35 TM-69的制备
化合物3：将叔丁氧羰基保护的5-氨基吡啶基-2-甲酸(33.18g，120mmol)加至二氯甲烷中(30ml)，依次加入EDCI(25.31g，132mmol)、HOBt(17.82g，132mmol)、环己胺(13.09g，132mmol)，室温搅拌反应24h，TLC检测反应结束，减压去除溶剂，所得固体重新溶解于120mL混合溶液中(DCM:TFA＝7:3)，室温搅拌反应1h后，TLC检测反应结束，减压旋蒸除去溶剂，经柱层析分离得产品化合物3，收率75.69％，HPLC:99.86％。
中间体Ⅲ：将2,4,6-三氯嘧啶(化合物1)(55.03g,300mmol)加入到二氯甲烷(300ml)中搅拌至溶解，冰浴降温至0～5℃，缓慢滴加3-氯-4-氟苯胺(45.72g,315mmol，化合物2)，滴加完毕撤去冰浴，自然升至室温，TLC跟踪检测反应结束后，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅲ，收率81.47％，HPLC:99.87％，白色固体。
中间体Ⅱ：将中间体Ⅲ(29.25g,100mmol)和化合物3(24.12g，110mmol)加入到N，N二甲基乙酰胺(150ml)中，再加入浓盐酸(1ml)，回流反应，TLC检测跟踪至反应完全，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅱ，收率75.36％，HPLC:99.86％，白色固体。
TM-69：将中间体Ⅱ(5.70g，12mmol)、浓盐酸(0.5ml)、丙烯酰胺(1.02g,14.4mmol)加入到正辛醇(20ml)中，置于密闭微波反应器中，设温140℃，反应0.5h后结束，冷却至室温，加入乙酸乙酯和水各200ml，萃取、分液，有机相用水洗一次后用适量无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到式I化合物TM-69，白色固体，收率78.22％，HPLC:99.91％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：11.26(s,1H),10.51(s,1H),8.85(s,1H),8.67(s,1H),8.42(s,1H),7.76～7.52(m,4H),6.73(s,1H),6.57(dd,J＝10.6,8.8Hz,1H),5.91(d,J＝6.4Hz,2H),4.71(s,1H),3.37(s,3H),1.78～1.39(m,10H).13C-NMR(400MHz,DMSO-d6):172.1,167.6,166.5,160.3,159.7,152.5,147.6,140.3(2C),134.6,131.2,129.4,123.4,122.5,121.7,118.6,117.6,116.2,72.4,47.6,33.6(2C),28.1,22.6(2C),MS-ESI m/z:509.23(M+H)+。
实施例36 TM-70的制备
化合物3：将叔丁氧羰基保护的2-(氨基甲氧基)乙酸(22.92g，120mmol)加至二氯甲烷中(30ml)，依次加入EDCI(25.31g，132mmol)、HOBt(17.82g，132mmol)、N,N-二甲基乙二胺(11.63g，132mmol)，室温搅拌反应24h，TLC检测反应结束，减压去除溶剂，所得固体重新溶解于120mL混合溶液中(DCM:TFA＝7:3)，室温搅拌反应0.5h后，TLC检测反应结束，减压旋蒸除去溶剂，经柱层析分离得产品化合物3，收率76.36％，HPLC:99.85％。
中间体Ⅲ：将2,4,6-三氯嘧啶(化合物1)(55.03g,300mmol)加入到二氯甲烷(300ml)中搅拌至溶解，冰浴降温至0～5℃，缓慢滴加3-氯-4-氟苯胺(45.72g,315mmol，化合物2)，滴加完毕撤去冰浴，自然升至室温，TLC跟踪检测反应结束后，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅲ，收率83.41％，HPLC:99.86％，白色固体。
中间体Ⅱ：将中间体Ⅲ(29.25g,100mmol)和化合物3(17.74g，110mmol)加入到异丙醇(150ml)中，再加入浓盐酸(1ml)，回流反应，TLC检测跟踪至反应完全，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅱ，收率76.43％，HPLC:99.89％，白色固体。
TM-70：将中间体Ⅱ(5.01g，12mmol)、浓盐酸(0.5ml)、丙烯酰胺(1.02g,14.4mmol)加入到正辛醇(20ml)中，置于密闭微波反应器中，设温140℃，反应1.5h后结束，冷却至室温，加入乙酸乙酯和水各200ml，萃取、分液，有机相用水洗一次后用适量无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到式I化合物TM-70，白色固体，收率79.16％，HPLC:99.90％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：10.89(s,1H),10.17(s,1H),8.62(s,1H),7.36～7.27(m,3H),6.73(s,1H),6.56(dd,J＝10.6,8.8Hz,1H),5.89(d,J＝6.4Hz,2H),5.27(d,J＝6.4Hz,2H),4.76(s,1H),4.19(m,4H),2.35(m,6H).13C-NMR(400MHz,DMSO-d6):172.6,169.3,166.1,160.2,159.7,152.3,140.3,131.2,129.5,121.3,118.6,117.6,116.3,80.6,72.6,68.5,67.2,43.2(2C),MS-ESI m/z:451.17(M+H)+。
实施例37 TM-71的制备
化合物3：将叔丁氧羰基保护的2-(氨基甲氧基)乙酸(22.92g，120mmol)加至二氯甲烷中(40ml)，依次加入EDCI(25.31g，132mmol)、HOBt(17.82g，132mmol)、2-氨基苯并咪唑(17.57g，132mmol)，室温搅拌反应24h，TLC检测反应结束，减压去除溶剂，所得固体重新溶解于150mL混合溶液中(DCM:TFA＝7:3)，室温搅拌反应1h后，TLC检测反应结束，减压旋蒸除去溶剂，经柱层析分离得产品化合物3，收率73.52％，HPLC:99.82％。
中间体Ⅲ：将2,4,6-三氯嘧啶(化合物1)(55.03g,300mmol)加入到二氯甲烷(300ml)中搅拌至溶解，冰浴降温至0～5℃，缓慢滴加3-氯-4-氟苯胺(45.72g,315mmol，化合物2)，滴加完毕撤去冰浴，自然升至室温，TLC跟踪检测反应结束后，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅲ，收率81.36％，HPLC:99.87％，白色固体。
中间体Ⅱ：将中间体Ⅲ(29.25g,100mmol)和化合物3(24.22g，110mmol)加入到N，N二甲基甲酰胺(145.5ml)中，再加入浓盐酸(1ml)，回流反应，TLC检测跟踪至反应完全，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅱ，收率77.23％，HPLC:99.85％，白色固体。
TM-71：将中间体Ⅱ(5.72g，12mmol)、浓盐酸(0.5ml)、丙烯酰胺(1.02g,14.4mmol)加入到二甲基亚砜(20ml)中，置于密闭微波反应器中，设温180℃，反应0.5h后结束，冷却至室温，加入乙酸乙酯和水各200ml，萃取、分液，有机相用水洗一次后用适量无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到式I化合物TM-71，白色固体，收率76.53％，HPLC:99.89％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：11.26(s,1H),10.57(s,1H),8.73(s,1H),7.73～7.43(m,4H),7.36～7.23(m,4H),6.74(s,1H),6.52(dd,J＝10.6,8.8Hz,1H),5.81(d,J＝7.2Hz,2H),5.32(d,J＝6.4Hz,2H),4.65(s,1H),4.32(d,J＝5.3Hz,2H).13C-NMR(400MHz,DMSO-d6):172.3,169.3,166.7,160.2,159.3,152.9,147.6,140.3,138.9(2C),131.2,129.2,123.5(2C),121.7,118.6,117.7,116.5,115.2(2C),80.2,72.4,67.6,MS-ESI m/z:510.86(M+H)+。
实施例38 TM-74的制备
化合物3：将叔丁氧羰基保护的2-(氨基甲氧基)乙酸(22.92g，120mmol)加至二氯甲烷中(30ml)，依次加入EDCI(25.31g，132mmol)、HOBt(17.82g，132mmol)、2-氨基吡啶(12.42g，132mmol)，室温搅拌反应24h，TLC检测反应结束，减压去除溶剂，所得固体重新溶解于120mL混合溶液中(DCM:TFA＝7:3)，室温搅拌反应1.5h后，TLC检测反应结束，减压旋蒸除去溶剂，经柱层析分离得产品化合物3，收率76.47％，HPLC:99.85％。
中间体Ⅲ：将2,4,6-三氯嘧啶(化合物1)(55.03g,300mmol)加入到二氯甲烷(300ml)中搅拌至溶解，冰浴降温至0～5℃，缓慢滴加3-氯-4-氟苯胺(45.72g,315mmol，化合物2)，滴加完毕撤去冰浴，自然升至室温，TLC跟踪检测反应结束后，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅲ，收率80.35％，HPLC:99.86％，白色固体。
中间体Ⅱ：将中间体Ⅲ(29.25g,100mmol)和化合物3(19.93g，110mmol)加入到异丙醇(150ml)中，再加入浓盐酸(1ml)，回流反应，TLC检测跟踪至反应完全，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅱ，收率78.57％，HPLC:99.86％，白色固体。
TM-74：将中间体Ⅱ(5.25g，12mmol)、浓盐酸(0.5ml)、丙烯酰胺(1.02g,14.4mmol)加入到二甲基亚砜(20ml)中，置于密闭微波反应器中，设温160℃，反应1.0h后结束，冷却至室温，加入乙酸乙酯和水各200ml，萃取、分液，有机相用水洗一次后用适量无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到式I化合物TM-74，白色固体，收率78.26％，HPLC:99.90％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：10.97(s,1H),10.31(s,1H),8.67(s,1H),8.49(s,1H),8.21(s,1H),7.91(s,1H),7.47(s,1H),7.25～7.17(m,4H),6.73(s,1H),6.52(dd,J＝10.6,8.8Hz,1H),5.86(d,J＝6.4Hz,2H),5.32(d,J＝6.4Hz,2H),4.67(s,1H),4.32(d,J＝5.3Hz,2H).13C-NMR(400MHz,DMSO-d6):172.6,169.2,166.6,160.1,159.3,152.8,150.2,146.3,140.2,138.6,131.4,129.6,121.3,119.5,118.6,117.6,116.2,115.7,80.6,72.2,67.2,MS-ESI m/z:471.36(M+H)+。
实施例39 TM-76的制备
化合物3：将叔丁氧羰基保护的2-(氨基甲氧基)乙酸(22.92g，120mmol)加至二氯甲烷中(30ml)，依次加入EDCI(25.31g，132mmol)、HOBt(17.82g，132mmol)、环己胺(13.09g，132mmol)，室温搅拌反应24h，TLC检测反应结束，减压去除溶剂，所得固体重新溶解于120mL混合溶液中(DCM:TFA＝7:3)，室温搅拌反应0.5h后，TLC检测反应结束，减压旋蒸除去溶剂，经柱层析分离得产品化合物3，收率79.37％，HPLC:99.87％。
中间体Ⅲ：将2,4,6-三氯嘧啶(化合物1)(55.03g,300mmol)加入到二氯甲烷(300ml)中搅拌至溶解，冰浴降温至0～5℃，缓慢滴加3-氯-4-氟苯胺(45.72g,315mmol，化合物2)，滴加完毕撤去冰浴，自然升至室温，TLC跟踪检测反应结束后，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅲ，收率81.46％，HPLC:99.87％，白色固体。
中间体Ⅱ：将中间体Ⅲ(29.25g,100mmol)和化合物3(20.49g，110mmol)加入到异丙醇(145.5ml)中，再加入浓盐酸(1ml)，回流反应，TLC检测跟踪至反应完全，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅱ，收率79.33％，HPLC:99.84％，白色固体。
TM-76：将中间体Ⅱ(5.31g，12mmol)、浓盐酸(0.5ml)、丙烯酰胺(1.02g,14.4mmol)加入到二甲基亚砜(20ml)中，置于密闭微波反应器中，设温140℃，反应1.5h后结束，冷却至室温，加入乙酸乙酯和水各200ml，萃取、分液，有机相用水洗一次后用适量无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到式I化合物TM-76，白色固体，收率79.15％，HPLC:99.91％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：11.13(s,1H),10.27(s,1H),8.69(s,1H),7.37～7.21(m,3H),6.76(s,1H),6.49(dd,J＝10.6,8.8Hz,1H),5.81(d,J＝6.4Hz,2H),5.36(d,J＝6.4Hz,2H),4.67(s,1H),4.37(d,J＝5.3Hz,2H),1.78～1.71(m,4H),1.46～1.39(m,6H).13C-NMR(400MHz,DMSO-d6):172.5,168.6,166.4,160.2,159.4,152.6,140.3,131.2,129.3,121.6,118.5,117.7,116.2,80.6,72.3,67.4,47.5,33.6(2C),28.1,22.7(2C),MS-ESI m/z:476.83(M+H)+。
实施例40 TM-81的制备
化合物3：将叔丁氧羰基保护的2-(氨基甲氧基)磺酸(27.24g，120mmol)加至二氯甲烷中(50ml)，依次加入EDCI(25.31g，132mmol)、HOBt(17.82g，132mmol)、4-(4-(4-甲基哌嗪-1基)-哌啶-1基)苯胺(30.20g，132mmol)，室温搅拌反应24h，TLC检测反应结束，减压去除溶剂，所得固体重新溶解于150mL混合溶液中(DCM:TFA＝7:3)，室温搅拌反应1h后，TLC检测反应结束，减压旋蒸除去溶剂，经柱层析分离得产品化合物3，收率76.45％，HPLC:99.85％。
中间体Ⅲ：将2,4,6-三氯嘧啶(化合物1)(55.03g,300mmol)加入到二氯甲烷(300ml)中搅拌至溶解，冰浴降温至0～5℃，缓慢滴加3-氯-4-氟苯胺(45.72g,315mmol，化合物2)，滴加完毕撤去冰浴，自然升至室温，TLC跟踪检测反应结束后，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅲ，收率80.33％，HPLC:99.86％，白色固体。
中间体Ⅱ：将中间体Ⅲ(29.25g,100mmol)和化合物3(43.73g，110mmol)加入到异丙醇(150ml)中，再加入浓盐酸(1ml)，回流反应，TLC检测跟踪至反应完全，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅱ，收率76.57％，HPLC:99.87％，白色固体。
TM-81：将中间体Ⅱ(7.84g，12mmol)、浓盐酸(0.5ml)、丙烯酰胺(1.02g,14.4mmol)加入到正辛醇(20ml)中，置于密闭微波反应器中，设温140℃，反应0.5h后结束，冷却至室温，加入乙酸乙酯和水各200ml，萃取、分液，有机相用水洗一次后用适量无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到式I化合物TM-81，白色固体，收率77.43％，HPLC:99.89％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：11.03(s,1H),10.15(s,1H),8.61(s,1H),8.04(s,1H),7.32～7.26(m,4H),6.69(s,1H),6.52(dd,J＝10.6,8.8Hz,1H),6.34～6.28(m,4H),5.71(d,J＝6.4Hz,2H),5.49(d,J＝6.4Hz,2H),5.16(d,J＝6.4Hz,2H),4.67(s,1H),2.81(m,4H),2.46(m,8H),2.31(m,3H),1.68～1.43(m,4H).13C-NMR(400MHz,DMSO-d6):172.4,166.7,160.2,159.5,152.6,140.2,139.6(2C),131.5,129.2,127.4,121.3,118.5,117.8,117.3(2C),116.1,115.3(3C),91.5,79.7,72.3,57.9,55.6(2C),50.5(2C),47.6(2C),43.4,28.3,,MS-ESI m/z:688.29(M+H)+。
实施例41 TM-83的制备
化合物3：将叔丁氧羰基保护的2-(氨基甲氧基)磺酸(27.24g，120mmol)加至二氯甲烷中(30ml)，依次加入EDCI(25.31g，132mmol)、HOBt(17.82g，132mmol)、2-氨基吡啶(12.42g，132mmol)，室温搅拌反应24h，TLC检测反应结束，减压去除溶剂，所得固体重新溶解于120mL混合溶液中(DCM:TFA＝7:3)，室温搅拌反应0.5h后，TLC检测反应结束，减压旋蒸除去溶剂，经柱层析分离得产品化合物3，收率78.53％，HPLC:99.87％。
中间体Ⅲ：将2,4,6-三氯嘧啶(化合物1)(55.03g,300mmol)加入到二氯甲烷(300ml)中搅拌至溶解，冰浴降温至0～5℃，缓慢滴加3-氯-4-氟苯胺(45.72g,315mmol，化合物2)，滴加完毕撤去冰浴，自然升至室温，TLC跟踪检测反应结束后，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅲ，收率81.43％，HPLC:99.89％，白色固体。
中间体Ⅱ：将中间体Ⅲ(29.25g,100mmol)和化合物3(23.90g，110mmol)加入到异丙醇(145.5ml)中，再加入浓盐酸(1ml)，回流反应，TLC检测跟踪至反应完全，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅱ，收率78.59％，HPLC:99.86％，白色固体。
TM-83：将中间体Ⅱ(5.68g，12mmol)、浓盐酸(0.5ml)、丙烯酰胺(1.02g,14.4mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(20ml)中，置于密闭微波反应器中，设温150℃，反应0.5h后结束，冷却至室温，加入乙酸乙酯和水各200ml，萃取、分液，有机相用水洗一次后用适量无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到式I化合物TM-83，白色固体，收率79.37％，HPLC:99.90％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：11.23(s,1H),10.56(s,1H),8.69(s,1H),8.13(s,1H),7.46(s,1H),7.23～7.15(m,5H),6.73(s,1H),6.52(dd,J＝10.6,8.8Hz,1H),5.79(d,J＝6.4Hz,2H),4.71(s,1H),5.47(d,J＝6.4Hz,2H),5.21(d,J＝5.7Hz,2H),3.37(s,3H),2.15(s,3H).13C-NMR(400MHz,DMSO-d6):171.8,168.5,167.7,162.2,158.6,149.8,142.4,137.5,135.7,132.2(2C),130.4,127.5,125.8,123.3,123.6,122.3,118.5,118.7,118.4,116.2,114.8,113.5(2C),72.4,56.8,19.7，MS-ESI m/z:507.26(M+H)+。
实施例42 TM-86的制备
化合物3：将叔丁氧羰基保护的2-(氨基甲氧基)磺酸(27.24g，120mmol)加至二氯甲烷中(30ml)，依次加入EDCI(25.31g，132mmol)、HOBt(17.82g，132mmol)、4-甲氧基-3-甲基苯胺(18.09g，132mmol)，室温搅拌反应24h，TLC检测反应结束，减压去除溶剂，所得固体重新溶解于120mL混合溶液中(DCM:TFA＝7:3)，室温搅拌反应0.5h后，TLC检测反应结束，减压旋蒸除去溶剂，经柱层析分离得产品化合物3，收率75.46％，HPLC:99.89％。
中间体Ⅲ：将2,4,6-三氯嘧啶(化合物1)(55.03g,300mmol)加入到二氯甲烷(300ml)中搅拌至溶解，冰浴降温至0～5℃，缓慢滴加3-氯-4-氟苯胺(45.72g,315mmol，化合物2)，滴加完毕撤去冰浴，自然升至室温，TLC跟踪检测反应结束后，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅲ，收率82.57％，HPLC:99.86％，白色固体。
中间体Ⅱ：将中间体Ⅲ(29.25g,100mmol)和化合物3(28.63g，110mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(150ml)中，再加入浓盐酸(1ml)，回流反应，TLC检测跟踪至反应完全，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅱ，收率77.32％，HPLC:99.83％，白色固体。
TM-86：将中间体Ⅱ(6.20g，12mmol)、浓盐酸(0.5ml)、丙烯酰胺(1.02g,14.4mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(20ml)中，置于密闭微波反应器中，设温150℃，反应1.0h后结束，冷却至室温，加入乙酸乙酯和水各200ml，萃取、分液，有机相用水洗一次后用适量无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到式I化合物TM-86，白色固体，收率80.51％，HPLC:99.91％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：10.93(s,1H),10.20(s,1H),8.70(s,1H),7.75～7.54(m,2H),7.45(s,1H),7.24～7.17(m,3H),6.71(s,1H),6.55(dd,J＝10.6,8.8Hz,1H),5.82(d,J＝6.4Hz,2H),5.57～5.44(m,2H),4.77～4.69(m,2H),4.59(s,1H),3.47(s,3H),2.14(s,3H).13C-NMR(400MHz,DMSO-d6):172.6,168.8,167.7,162.1,158.6,149.7,142.4,137.4,135.7,130.2,128.5,125.9,124.3,123.4,121.2,119.8,118.7,115.1,114.8,65.4,58.5,42.3,19.7，MS-ESI m/z:550.12(M+H)+。
实施例43 TM-89的制备
中间体Ⅲ：将2,4,6-三氯嘧啶(化合物1)(55.03g,300mmol)加入到二氯甲烷(300ml)中搅拌至溶解，冰浴降温至0～5℃，缓慢滴加3-氯-4-氟苯胺(45.72g,315mmol，化合物2)，滴加完毕撤去冰浴，自然升至室温，TLC跟踪检测反应结束后，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅲ，收率82.46％，HPLC:99.85％，白色固体。
中间体Ⅱ：将中间体Ⅲ(29.25g,100mmol)和化合物3(18.50g，110mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(150ml)中，再加入浓盐酸(1ml)，回流反应，TLC检测跟踪至反应完全，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅱ，收率77.52％，HPLC:99.89％，白色固体。
TM-89：将中间体Ⅱ(5.09g，12mmol)、浓盐酸(0.5ml)、丙烯酰胺(1.02g,14.4mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(20ml)中，置于密闭微波反应器中，设温150℃，反应1.0h后结束，冷却至室温，加入乙酸乙酯和水各200ml，萃取、分液，有机相用水洗一次后用适量无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到式I化合物TM-89，白色固体，收率80.43％，HPLC:99.91％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：10.93(s,1H),10.20(s,1H),8.70(s,1H),7.96～7.73(m,4H),7.35～7.23(m,3H),6.76(s,1H),6.57(dd,J＝10.6,8.8Hz,1H),6.15(m,2H),5.91(d,J＝6.4Hz,2H),4.63(s,1H),3.39(m,2H),1.14(s,3H).13C-NMR(400MHz,DMSO-d6):172.4,167.4,166.5,159.5,152.6,140.2,132.3,131.2,129.5,121.5,118.4,117.6,117.2,116.1,109.7,72.3,40.3,12.6，MS-ESI m/z:458.56(M+H)+。
实施例44 TM-90的制备，
中间体Ⅲ：将2,4,6-三溴嘧啶(化合物1)(31.68g,100mmol)加入到二氯甲烷(200ml)中搅拌至溶解，冰浴降温至0～5℃，缓慢滴加3-氯-4-氟苯胺(15.23g,105mmol，化合物2)，滴加完毕撤去冰浴，自然升至室温，TLC跟踪检测反应结束后，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅲ，收率81.76％，HPLC:99.86％，白色固体。
中间体Ⅱ：将中间体Ⅲ(38.14g,100mmol)和化合物3(15.20g，110mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(150ml)中，再加入浓盐酸(1ml)，回流反应，TLC检测跟踪至反应完全，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅱ，收率75.57％，HPLC:99.83％，白色固体。
TM-90：将中间体Ⅱ(5.26g，12mmol)、浓盐酸(0.5ml)、丙烯酰胺(1.02g,14.4mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(20ml)中，置于密闭微波反应器中，设温150℃，反应1.0h后结束，冷却至室温，加入乙酸乙酯和水各200ml，萃取、分液，有机相用水洗一次后用适量无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到式I化合物TM-90，白色固体，收率79.86％，HPLC:99.89％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：10.86(s,1H),10.16(s,1H),8.69(s,1H),7.63(s,1H),7.43～7.36(m,3H),7.23(s,1H),6.62(dd,J＝10.6,8.8Hz,1H),6.41(m,2H),5.89(d,J＝6.4Hz,2H),4.69(s,1H),3.71(m,3H),2.64(s,3H).13C-NMR(400MHz,DMSO-d6):172.4,167.4,166.5,159.3,152.7,149.2,14.5,131.7,131.2,131.1,129.2,126.1,121.5,118.7,118.4,117.6,116.1,72.4,56.3，14.5,MS-ESI m/z:428.33(M+H)+。
实施例45 TM-92的制备
中间体Ⅲ：将2,4,6-三溴嘧啶(化合物1)(31.68g,100mmol)加入到二氯甲烷(200ml)中搅拌至溶解，冰浴降温至0～5℃，缓慢滴加3-氯-4-氟苯胺(15.23g,105mmol，化合物2)，滴加完毕撤去冰浴，自然升至室温，TLC跟踪检测反应结束后，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅲ，收率82.56％，HPLC:99.87％，白色固体。
中间体Ⅱ：将中间体Ⅲ(38.14g,100mmol)和化合物3(22.14g，110mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(150ml)中，再加入浓盐酸(1ml)，回流反应，TLC检测跟踪至反应完全，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅱ，收率76.25％，HPLC:99.85％，白色固体。
TM-92：将中间体Ⅱ(6.02g，12mmol)、浓盐酸(0.5ml)、丙烯酰胺(1.02g,14.4mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(20ml)中，置于密闭微波反应器中，设温150℃，反应1.0h后结束，冷却至室温，加入乙酸乙酯和水各200ml，萃取、分液，有机相用水洗一次后用适量无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到式I化合物TM-92，白色固体，收率79.87％，HPLC:99.88％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：10.81(s,1H),10.32(s,1H),8.75(s,1H),7.69(m,2H),7.24～7.17(m,3H),6.76(m,2H),6.72(s,1H),6.52(dd,J＝10.6,8.8Hz,1H),5.84(d,J＝6.4Hz,2H),5.49(m,3H),4.71(s,1H),3.27(s,3H).13C-NMR(400MHz,DMSO-d6):172.2,167.6,166.7,159.5,152.7,148.1,140.2,131.2,129.2(3C),128.9,121.5,118.4,117.6,117.2(2C),116.1,87.6,72.3,57.7，MS-ESI m/z:491.73(M+H)+。
实施例46 TM-94的制备
化合物3：将叔丁氧羰基保护的2-氯乙胺(28.65g，120mmol)加至N,N二甲基甲酰胺中(100ml)，依次加入碳酸钾(41.46g)和4-甲氧基-3-甲基苯胺(18.09g，132mmol)，100℃搅拌反应24h，TLC检测反应结束，减压去除溶剂，所得固体重新溶解于120mL混合溶液中(DCM:TFA＝7:3)，室温搅拌反应0.5h后，TLC检测反应结束，减压旋蒸除去溶剂，经柱层析分离得产品化合物3，收率56.32％，HPLC:99.83％。
中间体Ⅲ：将2,4,6-三溴嘧啶(化合物1)(31.68g,100mmol)加入到二氯甲烷(200ml)中搅拌至溶解，冰浴降温至0～5℃，缓慢滴加3-氯-4-氟苯胺(15.23g,105mmol，化合物2)，滴加完毕撤去冰浴，自然升至室温，TLC跟踪检测反应结束后，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅲ，收率81.47％，HPLC:99.89％，白色固体。
中间体Ⅱ：将中间体Ⅲ(38.14g,100mmol)和化合物3(19.83g，110mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(150ml)中，再加入浓盐酸(1ml)，回流反应，TLC检测跟踪至反应完全，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅱ，收率76.43％，HPLC:99.87％，白色固体。
TM-94：将中间体Ⅱ(5.77g，12mmol)、浓盐酸(0.5ml)、丙烯酰胺(1.02g,14.4mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(20ml)中，置于密闭微波反应器中，设温150℃，反应1.0h后结束，冷却至室温，加入乙酸乙酯和水各200ml，萃取、分液，有机相用水洗一次后用适量无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到式I化合物TM-94，白色固体，收率78.96％，HPLC:99.87％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：10.87(s,1H),10.26(s,1H),8.76(s,1H),7.36～7.21(m,3H),6.71(s,1H),6.55(dd,J＝10.6,8.8Hz,1H),6.43(s,1H),6.13(m,2H),5.82(d,J＝6.4Hz,2H),4.64(s,1H),3.77(s,3H),2.34(s,3H).13C-NMR(400MHz,DMSO-d6):172.4,166.5,160.2,159.7,152.7,147.2,140.2,139.7,131.2,129.2,125.4,121.5,118.4,117.6,116.1,115.2,114.3,111.6,72.6,56.3,49.2(2C),14.6,MS-ESI m/z:470.64(M+H)+。
实施例47 TM-98的制备
化合物3：将叔丁氧羰基保护的氯代甲氧基甲胺(30.57g，120mmol)加至二氯甲烷中(30ml)，依次加入依次加入碳酸钾(41.46g)、4-氟苯胺(14.67g，132mmol)，室温搅拌反应24h，TLC检测反应结束，减压去除溶剂，所得固体重新溶解于120mL混合溶液中(DCM:TFA＝7:3)，室温搅拌反应0.5h后，TLC检测反应结束，减压旋蒸除去溶剂，经柱层析分离得产品化合物3，收率65.37％，HPLC:99.79％。
中间体Ⅲ：将2,4,6-三溴嘧啶(化合物1)(31.68g,100mmol)加入到二氯甲烷(200ml)中搅拌至溶解，冰浴降温至0～5℃，缓慢滴加3-氯-4-氟苯胺(15.23g,105mmol，化合物2)，滴加完毕撤去冰浴，自然升至室温，TLC跟踪检测反应结束后，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅲ，收率81.49％，HPLC:99.87％，白色固体。
中间体Ⅱ：将中间体Ⅲ(38.14g,100mmol)和化合物3(15.63g，110mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(150ml)中，再加入浓盐酸(1ml)，回流反应，TLC检测跟踪至反应完全，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅱ，收率76.47％，HPLC:99.86％，白色固体。
TM-98：将中间体Ⅱ(5.31g，12mmol)、浓盐酸(0.5ml)、丙烯酰胺(1.02g,14.4mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(20ml)中，置于密闭微波反应器中，设温150℃，反应1.0h后结束，冷却至室温，加入乙酸乙酯和水各200ml，萃取、分液，有机相用水洗一次后用适量无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到式I化合物TM-98，白色固体，收率78.75％，HPLC:99.89％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：10.74(s,1H),10.16(s,1H),8.92(s,1H),7.34～7.29(m,3H),6.76(m,2H),6.73(s,1H),6.52(dd,J＝10.6,8.8Hz,1H),6.43(m,2H),5.81(d,J＝6.4Hz,2H),5.26(m,4H),4.68(s,1H).13C-NMR(400MHz,DMSO-d6):172.4,166.8,160.3,159.5,152.7,143.2,140.2,131.2,129.2,121.5,118.4,117.6,116.1(2C),115.2(2C),78.8,78.6,72.3，MS-ESI m/z:432.6(M+H)+。
实施例48 TM-100的制备
中间体Ⅲ：将2,4,6-三溴嘧啶(化合物1)(31.68g,100mmol)加入到二氯甲烷(200ml)中搅拌至溶解，冰浴降温至0～5℃，缓慢滴加3-氯-4-氟苯胺(15.23g,105mmol，化合物2)，滴加完毕撤去冰浴，自然升至室温，TLC跟踪检测反应结束后，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅲ，收率80.87％，HPLC:99.85％，白色固体。
中间体Ⅱ：将中间体Ⅲ(38.14g,100mmol)和化合物3(19.61g，110mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(150ml)中，再加入浓盐酸(1ml)，回流反应，TLC检测跟踪至反应完全，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅱ，收率76.59％，HPLC:99.89％，白色固体。
TM-100：将中间体Ⅱ(5.75g，12mmol)、浓盐酸(0.5ml)、丙烯酰胺(1.02g,14.4mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(20ml)中，置于密闭微波反应器中，设温150℃，反应1.0h后结束，冷却至室温，加入乙酸乙酯和水各200ml，萃取、分液，有机相用水洗一次后用适量无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到式I化合物TM-100，白色固体，收率79.68％，HPLC:99.88％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：10.87(s,1H),10.32(s,1H),8.76(s,1H),8.49～8.31(m,2H),7.40～7.29(m,2H),7.21～7.15(m,3H),6.73(s,1H),6.57(dd,J＝10.6,8.8Hz,1H),5.86(d,J＝6.4Hz,2H),4.67(s,1H),3.31(s,1H),2.81～2.72(m,4H),1.91～1.65(m,2H).13C-NMR(400MHz,DMSO-d6):172.4,166.7,160.2,159.5,152.7,145.2,140.2,138.8,137.5,131.1,129.1,124.6,122.7,121.6,118.4,117.6,116.2,72.4,59.6,52.5,50.8,33.2,MS-ESI m/z:468.57(M+H)+。
实施例49 TM-104的制备
化合物3：将叔丁氧羰基保护的3-氯-环丁胺(31.77g，120mmol)加至二氯甲烷中(30ml)，依次加入依次加入碳酸钾(41.46g)、2-氨基苯并咪唑(17.57g，132mmol)，室温搅拌反应24h，TLC检测反应结束，减压去除溶剂，所得固体重新溶解于120mL混合溶液中(DCM:TFA＝7:3)，室温搅拌反应0.5h后，TLC检测反应结束，减压旋蒸除去溶剂，经柱层析分离得产品化合物3，收率75.56％，HPLC:99.89％。
中间体Ⅲ：将2,4,6-三溴嘧啶(化合物1)(31.68g,100mmol)加入到二氯甲烷(200ml)中搅拌至溶解，冰浴降温至0～5℃，缓慢滴加3-氯-4-氟苯胺(15.23g,105mmol，化合物2)，滴加完毕撤去冰浴，自然升至室温，TLC跟踪检测反应结束后，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅲ，收率81.65％，HPLC:99.89％，白色固体。
中间体Ⅱ：将中间体Ⅲ(38.14g,100mmol)和化合物3(22.25g，110mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(150ml)中，再加入浓盐酸(1ml)，回流反应，TLC检测跟踪至反应完全，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅱ，收率77.62％，HPLC:99.87％，白色固体。
TM-104：将中间体Ⅱ(6.03g，12mmol)、浓盐酸(0.5ml)、丙烯酰胺(1.02g,14.4mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(20ml)中，置于密闭微波反应器中，设温150℃，反应1.0h后结束，冷却至室温，加入乙酸乙酯和水各200ml，萃取、分液，有机相用水洗一次后用适量无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到式I化合物TM-104，白色固体，收率79.23％，HPLC:99.87％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：10.85(s,1H),10.32(s,1H),8.87(s,1H),7.75(m,2H),7.25(m,2H),7.23～7.15(m,3H),6.73(s,1H),6.53(dd,J＝10.6,8.8Hz,2H),5.83(d,J＝6.4Hz,2H),4.67(s,1H),3.17(m,2H),2.24(m,4H).13C-NMR(400MHz,DMSO-d6):172.2,166.7,160.2,159.5,152.7,141.6,140.2,138.8,131.2,129.1,123.2(2C),121.5,118.2,117.6,116.2,115.2(2C),72.5,49.6,38.4(2C),MS-ESI m/z:492.46(M+H)+。
对癌细胞的体外细胞毒活性测试
为了研究本次实验中所合成的目标化合物抑制肿瘤细胞增殖的能力，我们测定了本发明化合物对人结肠癌细胞(HT29)、肺癌细胞(A549)、乳腺癌细胞(MCF7)、头颈部鳞癌细胞(HN5)四种肿瘤细胞的体外细胞毒性，并以奥斯替尼(AZD9291)作为阳性对照。实验采用的检测方法是标准的MTT法。
实验方法具体为：
人结肠癌细胞、肺癌细胞、乳腺癌细胞、头颈部鳞癌细胞(上海和序生物科技有限公司)四种肿瘤细胞经胰酶消化处理10min后弃掉液体，用5％血清的培养液吹打，调细胞浓度为300～400个/μL，依次加入受试化合物，预留只含培养液的空白组，在培养箱中培养24h。弃掉上清液，将稀释好的不同浓度的目标化合物加入96孔板(上海卧宏生物科技有限公司)，对照组只加细胞液，每组浓度均设置三个副孔，混匀后继续培养36h，观察不同时间段细胞形态变化，细胞与受试化合物充分作用后，每孔加入现配的MTT溶液显色，继续培养6h。弃掉上层液体，100μL DMSO溶解形成紫色结晶，选定490nm，酶标仪(HBS-1096A酶标分析仪，南京德铁实验设备有限公司)测定吸光度。通过公式：细胞抑制率(％)＝(1-A实验/A对照)×100％，求出IC50值(用细胞存活率对剂量对数作图法)。
本发明中的化合物对人结肠癌细胞(HT29)、肺癌细胞(A549)、乳腺癌细胞(MCF7)、头颈部鳞癌细胞(HN5)四种癌细胞增殖抑制的体外毒性试验结果见表1。
表1化合物对肿瘤细胞毒性实验
注:a表中数值为3次实验的平均值；b药物作用时间36h
其中未在表中列出的其它化合物对癌细胞的增殖抑制作用与表中化合物近似，均表现出良好的细胞毒性。
从实验结果可以看出，本发明提供的一类新型抗肿瘤活性化合物与对照化合物AZD9291相比，本发明的化合物对人结肠癌细胞(HT29)、肺癌细胞(A549)、乳腺癌细胞(MCF7)、头颈部鳞癌细胞(HN5)四种癌细胞生长抑制活性与AZD9291相当，其中一些化合物对肺癌细胞表现出突出的抑制效果，比如化合物TM-6、TM-9、TM-14、TM-21、TM-58和TM-68对肺癌细胞的抑制效果相对于AZD9291有很大的提高。其中化合物TM-21对实验中的四种肿瘤细胞的增殖抑制作用均优于对照药物AZD9291，对HT29，MCF7，A549三种肿瘤细胞的抑制效果是AZD9291的近十倍，其中对肺癌(A549)的IC50达到2.66nM，表现出优异的抑制活性与选择性。
化合物溶解性试验
为了研究本发明的化合物的溶解性，对本发明的化合物及对照化合物ADZ9291在不同介质中的溶解度进行了测试。分别量取10ml的介质：水、0.1mmol/L HCl溶液、pH6.8的磷酸盐缓冲液、模拟胃液(SGF)、模拟禁食状态肠液(FaSSIF)、模拟喂食状态肠液(FeSSIF)于6组西林瓶中，加入过量的受试化合物配制成相应的过饱和溶液6组，将配制好的溶液置于25℃恒温水浴中持续振荡搅拌2h至达到溶解平衡，经0.45μm滤膜过滤，取1ml上清液，另外量取9ml纯化水加入到上述上清液中，震荡混合均匀后，用HPLC检测，具体结果见表2：
表2本发明式(I)化合物在不同介质中的溶解性
通过实验结果得知，与对照化合物AZD9291相比，本发明中的化合物在水、0.1mmol/L HCl溶液、pH6.8的磷酸盐缓冲液和三种生物溶媒中都有较好的溶解性，特别是在水中的溶解度比现有上市的AZD9291有较大的提高，有利于制剂工艺的开发；在生物溶媒中溶解度提高，有利于患者对药物的吸收，提高了生物利用度。
化合物生物利用度试验
每一个受试化合物均采用如下方法进行生物利用度的考察：用0.2M的磷酸缓冲溶液溶解受试化合物，配制成2mg/ml的溶液为给药配方，雄性SD大鼠(体重200-240g，购于上海西普尔-必凯实验动物有限公司)6只，分成A、B两组，禁食但可自由饮水12小时后，采取0时刻空白血浆；取A组大鼠，分别灌胃给药化合物TM-21，给药剂量为10mg/kg；取B组大鼠经由尾巴静脉给药化合物TM-21,给药剂量为2mg/kg；于给药后5min，30min，1h，2h，4h，8h，12h，24h，从眼底静脉丛连续取血300μl置于分布有肝素抗凝的试管中，8000rpm/min离心10min后取上层血浆；精密量取100μl血浆样品于空白离心管中，加入10μl银杏内酯B内标溶液(5.85μg/ml)，混合混匀，再加入1ml乙酸乙酯提取液，涡旋振荡3min，14000r/min离心10min，提取上层有机相，LC-MS/MS分析；根据试验所得的血药浓度-时间数据，采用WinNonlin的非房室模型来处理药动数据求算药代动力学参数，对照化合物AZD9291采用同样的实验方法进行药代动力学及生物利用度的考察，具体实验结果见表3：
表3本发明式(I)化合物在大鼠体内的药代动力学参数
根据药代动力学研究的实验结果可以看出式(I)化合物具有相对较高的生物利用度，与对照化合物AZD9291相比，本发明中化合物的生物利用度都要优于AZD9291，其中TM-6、TM-9、TM-14、TM-21、TM-58和TM-68的生物利用度大约是是AZD9291的两倍，表现出优异的生物利用度特性。
Claims (9)
1.一种如式(I)所示的2,4,6-三胺基嘧啶类化合物，或其药学上可接受的盐；
其中：
R1选自：C3-6亚环烷基、C3-6亚杂环烷基、C1-6亚烷基、C1-6亚烷氧基、亚芳基、亚杂芳基，所述的亚芳基为亚苯基，所述的亚杂芳基为亚吡啶基，所述的C3-6亚杂环烷基中杂原子选自N；
R2选自：-C(O)-R4、-S(O)2-R4、C1-3烷氧基、-NR5R6；
其中R4选自C1-3烷基、C1-3卤代烷基、-NHR7、C1-3烷氧基；其中-NHR7选自N,N-二甲基乙二胺基、环己胺基、苯胺基、对氟苯胺基、吡啶-2-胺基、4-甲氧基-3-甲基苯胺基、苯并咪唑-2-胺基或4-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)-哌啶-1-基)苯胺基；
其中R5独立的选自H或C1-3烷基；R6独立的选自H、C1-3烷基、C3-6环烷基、C1-3卤代烷基、芳基、杂芳基，所述的芳基为苯基，所述的杂芳基为吡啶基，苯并咪唑基；
其中以上所述C3-6环烷基、芳基、杂芳基还可被一至多个R3基团进一步取代；
其中R3独立的选自甲基，甲氧基，氟代。
2.根据权利要求1所述的胺基嘧啶类化合物，或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述的式(I)化合物选自下组：
3.如权利要求1-2任一项所述的胺基嘧啶类化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
其中R1和R2如式(I)所定义；X选自F、Cl、Br、I。
4.如权利要求3所述的胺基嘧啶类化合物的制备方法，其特征在于X为Cl，其步骤具体包括：
步骤1：化合物1即2,4,6-三氯嘧啶与化合物2即3-氯-4-氟苯胺在嘧啶环的4位发生取代反应生成中间体Ⅲ即2,6-二氯-4-(3-氯-4-氟苯胺基)-嘧啶；
步骤2：中间体Ⅲ与化合物3在催化剂作用下在嘧啶环的2位发生取代反应生成中间体Ⅱ；其中化合物3中R1和R2如式(I)所定义；
步骤3：中间体Ⅱ即2,4-二取代嘧啶化合物与化合物4反应生成式(I)化合物。
5.如权利要求3所述的胺基嘧啶类化合物的制备方法，其特征在于X为Cl，其步骤具体包括：
步骤1：将化合物1即2,4,6-三氯嘧啶加入到溶剂中搅拌至溶解，冰浴降温，缓慢滴加化合物2即3-氯-4-氟苯胺，滴加完毕撤去冰浴，控温反应，TLC跟踪检测反应结束后，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体Ⅲ即2,6-二氯-N-(3-氯-4-氟苯基)嘧啶-4-胺；
步骤2：将中间体Ⅲ和化合物3加入到溶剂中，再加入强酸催化剂，控温回流反应，TLC检测跟踪至反应完全，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到中间体II；其中化合物3中R1和R2如式(I)所定义；
步骤3：将中间体Ⅱ、浓盐酸、化合物4丙烯酰胺加入到溶剂中，置于密闭微波反应器中，一定温度下反应至结束，冷却至室温，加入乙酸乙酯和水，萃取、分液，有机相用水洗涤，再用适量无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到式(I)化合物TM。
6.如权利要求3所述的胺基嘧啶类化合物的制备方法，其特征在于，当所述R1选自C3-6亚杂环烷基、C1-6亚烷基、C1-6亚烷氧基、亚芳基、亚杂芳基，所述R2选自-C(O)-R4，R4选自-NHR7时，化合物3通过以下方法制备：
其中，所述的-NHR7为权利要求1所定义。
7.如权利要求3所述的胺基嘧啶类化合物的制备方法，其特征在于，当所述R1选自C3-6亚杂环烷基、C1-6亚烷基、C1-6亚烷氧基、亚芳基、亚杂芳基，所述R2选自-S(O)2-R4，R4选自-NHR7时，化合物3通过以下方法制备：
其中，所述的-NHR7为权利要求1所定义。
8.一种药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物包括：治疗有效量的如权利要求1-2任一项所述的式(I)化合物，或其药学上可接受的盐，以及任选的药学上可接受的载体、赋形剂、佐剂、辅料或稀释剂。
9.如权利要求1-2任一项所述的式(I)化合物，或其药学上可接受的盐的用途，其特征在于，用于体外非治疗性的抑制肿瘤细胞增殖的用途。
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Legal Events
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| GR01 | Patent grant | ||
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