CN111228180A - 一种天然植物防腐剂复合物的制备及其在化妆品中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种植物防腐剂复合物,该所述复合物包括:鸭跖草风仙花、连翘、青刺尖、紫玉兰和虎杖。用酶溶剂和水醇混合溶剂浸泡和提取原料3~22小时,过滤后,通过回流加热,浓缩植物提取液的组分并制备天然植物防腐剂,代替传统化学合成防腐剂,用于工业化妆品防腐技术领域,与其他防腐剂相比,本发明的植物防腐剂复合物中的组分鸭跖草风仙花、青刺尖、紫玉兰是我国特有的药用植物,用于化妆品上具有药用价值。该植物防腐剂复合物对化妆品中常见的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌等具有抑制和杀灭作用,成分全部来自天然,并且具有无刺激性、无毒副作用、抗菌谱广、高效等特征。
Description
技术领域
本发明属于化妆品技术领域,具体涉及一种天然植物防腐剂复合物的制备及其在化妆品中的应用。
背景技术
大多数化妆品通常富含大量的蛋白质、氨基酸等微生物繁殖所必需的营养物质,因此防腐是化妆品生产中质量控制的一个十分重要的环节,为了达到防腐及延长保质期的目的,添加防腐剂是被普遍采用且行之有效的方法。我国在《化妆品安全技术规范》(2015年版)中准用的防腐剂有51种,都属于化学合成类物质,化学合成防腐剂均存在刺激性大、毒性大的缺陷,在安全性方面不是非常令人满意,比如季铵盐类、对羟基苯甲酸酯类、恶唑烷类化合物、咪唑烷基脲二甲基二羟甲基海因、脱氨乙酸等具有刺激性大、致敏性高、生物毒性等缺点。由于化学防腐剂存在以上这些缺点,这些年来,在化妆品中使用植物来源防腐剂替代化工来源防腐剂受到人们越来越多的关注,因为植物来源的天然防腐剂具有可再生、刺激小、安全性高等优点。但是,植物防腐剂也存在着颜色深、味道重,抗菌谱窄及抗菌能力较弱等缺点,并且其制备过程中存在提取溶剂残留及用量过大的问题。
现有专利(公开号:CN 106309325 A)一种抗菌消炎漱口水及其制备方法,该漱口水的主要有效成分为中药提取物,其中包括玫瑰花、白残花、金银花、鱼腥草、连翘、孔雀草、川楝子、厚朴、五倍子、岗梅根、虎杖、柴胡、青柠檬鲜品、白芍、蓝桉、炙甘草,虽然有一定的抑菌作用,但是不清楚其抗菌谱,具体针对哪种细菌。专利(公开号:CN 103463576 A)一种用于手术前消毒的药剂,该药剂包含众多中药提取物,但其主要针对的是金黄色葡萄球菌和宋内志贺氏菌。专利(公开号:CN 104666784 A)一种治疗痤疮的胶囊及其制备方法,该胶囊中含有紫背天葵、鸭跖草、枫荷梨、青刺尖、赤胫散、刺瓜米草、黄鹌菜、金樱子、杜仲,但其主要是针对治疗痤疮。专利(公开号:CN 105902445A)一种用于化妆品的植物防腐剂组合物及其制备方法,该组合物虽然也通过了防腐挑战实验,但是不清楚该组合物的稳定性能。可见,现有专利中的应用植物均存在抗菌谱窄的问题,另外,植物提取物包含了较多活性物质,其稳定差,保质期短也是本领域的面临的问题。
因此,针对以上问题,旨在做出一种无刺激、无毒副作用、抗菌谱广、高效、纯天然绿色的植物防腐剂是本领域亟待解决的问题。
发明内容
为解决上述目的,本发明提供一种天然植物防腐剂复合物,从数千种植物中筛选出几种具有高抗菌活性成分植物,并通过各植物提取组分之间的协同作用,对于多种致病菌具有显著抑菌作用。并且本发明能够通过防腐挑战测试,具有极高的使用安全性。
本发明通过以下技术方案实现:
一种植物防腐剂复合物,该组合物包括:鸭跖草风仙花、连翘、青刺尖、紫玉兰和虎杖。
优选地,所述植物防腐剂复合物,该组合物包括以下重量份的组分:鸭跖草风仙花10~60份、连翘10~60份、青刺尖10~60份、紫玉兰10~60份、虎杖为10~60份。
优选地,所述植物防腐剂复合物,该组合物包括以下重量份的组分:鸭跖草风仙花12-58份、连翘15-55份、青刺尖16-52份、紫玉兰18-50份、虎杖为12-40份。
优选地,所述植物防腐剂复合物,该组合物包括以下重量份的组分:鸭跖草风仙花25-50份、连翘20-40份、青刺尖20-42份、紫玉兰25-40份、虎杖为16-35份。
优选地,所述植物防腐剂复合物,该组合物包括以下重量份的组分:鸭跖草风仙花48份、连翘35份、青刺尖25份、紫玉兰21份、虎杖为16份。
本发明的植物防腐剂复合物具有良好的抑菌和防腐能力,因为这种植物防腐剂复合物的各组分能够产生良好的协同作用。而鸭跖草风仙花、青刺尖、紫玉兰为我国的特有药用植物,其中蕴含有大量的多酚、黄酮及帖类化合物,能够抑制细菌、酵母及霉菌的生长,且具有杀菌作用,能有效起到化妆品的防腐及杀菌作用。
为了便于理解本发明,现对本发明中的原料作进一步阐述:
鸭跖草又名凤仙花Impatens commllinoides是凤仙花科凤仙花属的植物,其茎、叶、花、果皮和种子均可入药,其化学成分主要包括萘醌类、黄酮类、甾醇类、皂苷类和多肽类物质。采用酶和水醇混合提取溶剂提取鸭跖草,其提取液用于化妆品,具有抗过敏、抗菌、抗氧化、抗肿瘤等多种药理活性。
连翘Forsythia suspensa是木樨科连翘属植物,其化学成分包括苯乙醇苷类、木质提及其苷类、五环三萜类、挥发油等,有抗炎、抗病毒、抗菌、解热镇痛等功效。连翘提取物为苷类和萜类,其主要含有连翘苷、连翘酯苷、五环三萜、齐墩果酸等,具有抗菌作用,可抑制伤寒杆菌、副伤寒杆菌、大肠杆菌、痢疾杆菌、白喉杆菌、葡萄球菌、链球菌及霍乱弧菌等,并且可作为天然防腐剂用于食品保鲜。
青刺尖是一种中药材名,本品为蔷薇科扁核木属植物扁核木Prinsepia utilisRoyle,茎含左旋-表儿茶精(epicatechin)、β-谷甾醇-β-葡萄糖苷(β-sitosteryl-β-glucoside)、青刺尖木脂醇(prinsepiol)等化学成分,能清热解毒,活血散结。主乳痈,痄腮,痔疮,瘰疬,跌打损伤,***。
紫玉兰Magnolia liliiflora Desr,木兰科木兰属,又名木兰、辛夷,是一种名贵的中药材,为中国也有植物,气味芬芳、味道辛辣,主要成分有柠檬醛、丁香油酚、桉油精,具有降压、镇痛、收敛及杀菌等功效,将其提取液添加到化妆品上能够使化妆品具有杀菌防腐的功能。
虎杖,又名花斑竹、酸筒杆,中药名为蓼科植物虎杖Polygonum cuspidatumSieb.et Zucc多年生草本植物。虎杖中蒽醌衍生物的抑菌作用很强,其甙元白藜芦醇能抗真菌,鞣质有收敛作用,能使微生物原生质凝固而具有抗菌作用。具有利湿退黄,清热解毒,散瘀止痛,止咳化痰的功效。
本发明还提供一种如上所述的植物防腐剂复合物的制备方法,包括以下步骤:
(1)将鸭跖草风仙花、连翘、青刺尖、紫玉兰与虎杖分别洗净、切碎、干燥或直接粉粹后,与酶溶剂和水醇混合溶剂以1:3~20(w/v)的料液比浸泡和提取3~22小时,过滤;
(2)将步骤(1)获得的液体通过回流装置加热,浓缩植物提取液的组分。
优选地,所述溶剂为酶溶剂和水醇混合溶剂。
优选地,所述原料与酶溶剂和水醇混合溶剂的体积比为1:3~20(w/v)。
本发明的有益效果:本发明的植物防腐剂以鸭跖草风仙花、连翘、青刺尖、紫玉兰及虎杖做原料,用酶溶剂和水醇混合溶剂以1:3~20(w/v)的料液比浸泡和提取原料3~22小时,过滤后通过回流加热,浓缩植物提取液的组分并制备天然植物防腐剂,代替传统化学合成防腐剂,用于工业化妆品防腐技术领域,与其他防腐剂相比,本发明的植物防腐剂复合物中的组分鸭跖草风仙花、青刺尖、紫玉兰是我国特有的药用植物,用于化妆品上具有药用价值。该植物防腐剂复合物对国家规定的几大类微生物的代表菌株,如金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌等具有抑制和杀灭作用。
附图说明
图1为牛津杯实验-平板加样示意图。
具体实施方式
为了更加简洁明了的展示本发明的技术方案、目的和优点,下面结合具体实施例及其附图对本发明做进一步的详细描述。
实施例1提供一种天然植物防腐剂复合物及其制备方法
天然植物防腐剂复合物包括以下组分:鸭跖草风仙花10份、连翘10份、青刺尖10份、紫玉兰10份、虎杖为10份。
制备方法:(1)将鸭跖草风仙花、连翘、青刺尖、紫玉兰及虎杖分别洗净、切碎、干燥或直接粉粹后,用料液(酶溶剂和水醇混合溶剂)比1:3~20浸泡和提取3~22小时,过滤;(2)通过回流加热、浓缩植物提取液的组分。
实施例2
本实施例天然植物防腐剂复合物包括以下组分:鸭跖草风仙花12份、连翘15份、青刺尖16份、紫玉兰18份、虎杖为12份。
实施例3
本实施例天然植物防腐剂复合物包括以下组分:鸭跖草风仙花25份、连翘20份、青刺尖20份、紫玉兰25份、虎杖为18份。
实施例4
本实施例天然植物防腐剂复合物包括以下组分:鸭跖草风仙花48份、连翘35份、青刺尖25份、紫玉兰21份、虎杖为16份。
实施例5
本实施例天然植物防腐剂复合物包括以下组分:鸭跖草风仙花50份、连翘40份、青刺尖42份、紫玉兰40份、虎杖为35份。
实施例6
本实施例天然植物防腐剂复合物包括以下组分:鸭跖草风仙花58份、连翘55份、青刺尖52份、紫玉兰50份、虎杖为40份。
实施例7
本实施例天然植物防腐剂复合物包括以下组分:鸭跖草风仙花60份、连翘60份、青刺尖60份、紫玉兰60份、虎杖为60份。
抑菌效果验证
选用实验例4制备的防腐组合物进行以下实验(药敏试验、防腐挑战试验以及稳定
性试验)验证其防腐、高效和稳定效果
一、药敏试验
1实验材料
1.1试验材料:本发明所得的植物防腐剂复合物
1.2试验菌:金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌。
2实验方法
2.1菌种的活化以及菌液的制备
将冷冻保存的菌种划线接种至平板培养基,37℃培养24小时;挑单菌落接种至100ml液体培养基,37℃、200r/min摇床培养过夜,菌液备用。
2.2菌液涂布
分别用pH 7.0的PBS将菌悬液稀释为浓度为106CFU/mL的菌悬液,吸取0.1ml菌悬液入固体培养基的平板表面,用涂布器涂布将菌悬液涂布均匀。
2.3牛津杯摆放及加入待检液
在培养基表面垂直摆放牛津杯,轻轻按压,使其与培养基接触无空隙;并向杯中加入150μl植物防腐剂复合物、酶和水醇混合液、34ug/mL氯霉素的阳性对照及PBS的阴性对照。
2.4孵育和观察结果
将平板正放在37℃的恒温培养箱培养16~18h后,量取抑菌圈直径(mm),取其平均值。
3评价方法
根据抑菌圈直径(mm)大小来判断试验结果,抑菌圈越大,抑菌效果越好;直径>20极敏感;15-20高敏感;10-14中敏感;<10中敏感;0不敏感。
4抑菌结果
上述结果表明,本发明的植物防腐剂复合物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌及白色念珠菌均有防腐抑菌作用,抑菌圈的直径均大于10mm,作用较明显,具有广谱的抑菌性,其中对金黄色葡萄球菌最为敏感。因此本发明的植物防腐剂具有高效的抑菌效果。
二、防腐挑战试验
1实验材料
1.1试验材料:本发明所得的一种植物防腐剂复合物
1.2试验菌株:金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌
2实验方法
将金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌的菌悬液稀释到107,取样品每份10ml,分别加入试用菌液,使细菌最终浓度为106/ml,霉菌最终浓度为105/ml。接着将加有本发明的植物防腐剂复合物和特定浓度菌液的样品在室温下放置1、7、14、21、28天后取样品0.1ml涂平板,将平板倒置于37℃中培养1~2天,然后计算菌落数目,再乘以稀释倍数,最终得到每毫升样品中的微生物数目。
3评价方法
根据2010版《中国药典》附录XVⅢD的抑菌剂效力检查法指导原则,产品别类2类,参考局部给药制剂、非灭菌鼻用制剂及用于粘膜的乳剂,细菌于第七天时菌总数的对数绝对值下降大于3且至28天时无增长;真菌于14天菌总数的对数绝对值下降大于2且至28天时无增长,则判断防腐剂的防腐效果良好。
4防腐挑战试验结果
上述结果表明,细菌于第七天时菌落总数下降了3lg,至第28天时无增长;真菌于第14天下降2lg,至第28天时无增长,除在第7天植物防腐剂复合物加白色念珠菌的样品外,菌数的下降百分比均≧99%,在28天后菌未见生长。因此本发明的植物防腐剂复合物的防腐效果是良好的。
三稳定性试验
1实验材料
1.1试验材料:放置一年的本发明植物防腐剂复合物作为实验组,以未添加植物防腐剂复合物(组分有丁二醇、聚甘油-3甲基葡萄二硬脂酸酯、辛酸/葵酸甘油三酯、PCA钠、聚二甲基硅氧烷、酵母提取物、氢化聚葵烯、植物油、C13-14异链烷烃、月桂醇聚醚-7、鲸蜡硬脂醇、鲸蜡硬脂基葡萄苷、红没药醇、马齿觅提取物)的放置一年的样品作为对照组。
2实验方法
2.1高温、低温贮存稳定性试验
(1)方法一:在40℃-50℃电热恒温培养箱中放置30—50天,恢复室温24小时后进行离心试验;
(2)方法二:24小时之内,在0℃-50℃之间来回频繁变化,如此反复操作15-30天,恢复室温24小时后进行离心试验;
(3)方法三:在-5℃及40℃下循环存放3次,分别每次存放24h,即在-5℃存放24h后,在室温下存放24h,再放入40℃恒温箱中存放24h,依次循环3次,恢复室温24小时后进行离心试验;
(4)方法四:在-5℃下存放1周,恢复室温24小时后进行离心试验;
离心试验:将样品置于离心机中,以4000r/min的转速试验30min后,观察产品的分离、分层状况。
2.2微生物稳定性试验
2.2.1菌落总数测定试验
用灭菌吸管吸取1:10稀释的检液2ml,分别注入到两个灭菌培养皿内,每皿1ml。另取1ml注入到9ml灭菌生理盐水试管中,充分混匀,制成1:100检液,同样地,还可稀释成1:1000、1:10000等检液。
将融化并冷却至45℃~50℃的卵磷脂吐温-80营养琼脂培养基倾注到平皿内,每皿约15ml,随即转动平皿,使样品与培养基充分混匀,待琼脂凝固后,翻转平皿,置37℃培养箱内培养48h。另取一个不加样品的灭菌空平皿,加入约15ml卵磷脂吐温-80营养琼脂培养基,待琼脂凝固后,翻转平皿,置37℃培养箱内培养48h,为空白对照。
为便于区别样品中的颗粒和菌落,可在每100ml卵磷脂吐温-80营养琼脂中加入1ml 0.5%的TTC溶液,如有细菌存在,培养后菌落呈红色,而化妆品的颗粒颜色无变化。
观察培养基菌落情况,并计算菌落数。
2.2.2致病菌测定试验
2.2.2.1耐热大肠杆菌的检验
取10ml 1:10稀释的检液,加到10ml双倍乳糖胆盐(含中和剂)培养基中,置45℃培养箱中培养24h,如即不产酸也不产气,继续培养至48h,如即不产酸也不产气,则报告为耐热大肠杆菌群阴性。若产酸产气,则需划线到伊红美兰琼脂平板上培养并作革兰氏染色镜检。
2.2.2.2铜绿假单胞菌的检验
取1:10样品稀释液10ml加到90mlSCDLP液体培养基中,置37℃培养18~24h。如有铜绿假单胞菌生长,培养液表面多有一层薄菌膜,培养液常呈黄绿色或蓝绿色。
2.2.2.3金黄色葡萄球菌的检验
增菌:取1:10样品稀释液10ml接种到90mlSCDLP液体培养基中,置37℃培养24h;
分离:从上述增菌培养液取1-2接种环,划线接种在Barid Parker平板培养基,置37℃培养48h。在Barid Parker平板培养基上为圆形,光滑,凸起,湿润,颜色呈灰色到黑色,边缘为淡色,周围为一混浊带,在其外层有一透明带。挑取单个菌落分纯在Barid Parker平板培养基上,37℃培养24h。
染色镜检:挑取分纯菌落,涂片,进行革兰氏染色,镜检,观察是否有金黄色葡萄球菌。
3试验结果
(1)高温、低温贮存试验结果:
从上表可知,该植物防腐剂复合物在高、低温的贮存条件下,具有良好的耐热性和耐寒性,并且通过4000r/min的转速试验30min后离心,均未出现分离、分层的状况。说明本发明的植物防腐剂具有很好的稳定性。
(2)微生物实验结果:
上述结果表明,该植物防腐剂复合物,即使存放了一年,其菌落总数未超过2015年《化妆品安全技术规范》中的规定的菌落总数指标限值,而耐热大肠杆菌、铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌也未检出,说明该产品的稳定性好。
实验例2安全性效果验证
一:皮肤刺激性实验试验
1实验材料
1.1试验材料:本发明所得的植物防腐剂复合物和加入该植物防腐剂的膏霜剂化妆品以及乳液剂化妆品。
2实验方法
分别将本发明的一种植物防腐剂复合物和含该植物防腐剂复合物的膏霜剂及乳液剂化妆品涂抹在皮肤上,并进行临床试验。将该测试应用于20名19-35岁的男性受试者和平均25岁的女性受试者上,本实验排除牛皮癣、湿疹、其它皮肤损害的患者,孕妇,哺乳妇女、或服用避孕药、抗组胺药的人等。有无刺激性通过肉眼来观察评估。
3皮肤刺激性试验结果
实验项目 | 植物防腐剂复合物 | 膏霜剂化妆品 | 乳液剂化妆品 |
结果 | 无刺激性 | 无刺激性 | 无刺激性 |
从上表可知这些受试者使用该植物防腐剂复合物以及添加了该植物防腐剂复合物的膏霜剂和乳液剂化妆品后均未出现任何的刺激性反应,说明该复合物以及添加了该复合物的化妆品绿色安全、无毒副作用,不会诱导对皮肤的刺激。
应用例
应用例1应用于膏霜剂化妆品
1、膏霜剂化妆品配方:
A相:聚氧乙烯(2)硬脂醇醚1.0%、硬脂酸3.0%、辛酸/葵酸甘油三酯2.0%、鲸蜡硬脂醇2.5%、鲸蜡硬脂基葡萄苷1.5%、霍霍巴(SIMMONDSIA CHINENSIS)籽油1.0%、植物油(甜杏仁油)1.0%、聚二甲基硅氧烷1.0%;B相:甘油4.0%、丁二醇3.0%、PCA钠0.05%、黄原胶0.1%;C相:实施例一天然植物防腐剂复合物1.0%、补水至100%。
2、制备工艺:
(1)将黄原胶加入甘油及丁二醇中预分散,然后加入去离子水搅拌均匀后加入PCA钠,搅拌均匀加热至80℃,保温30min,待用,记为B相。
(2)称量A相中料液,并按次序添加,加热至80℃并搅拌分散均匀,保温30min,待用;将B相加入A相中,均值乳化2-3min,然后降温至50℃再加入C相,均值乳化1min。
(3)取出,缓慢搅拌并慢降温至室温,出料。
应用例2应用于乳液剂化妆品
1、乳液剂化妆品配方:
A相:聚甘油-3-甲基葡萄二硬脂酸酯0.5%、氢化聚葵烯2.0%、辛酸/葵酸甘油三酯2.0%、鲸蜡硬脂醇2.5%、鲸蜡硬脂基葡萄苷1.5%、酵母提取物0.5%、C13-14异链烷烃1.0%、月桂醇聚醚0.5%、红没药醇0.2%、辣木油1.0%、植物油(甜杏仁油)1.5%、聚二甲基硅氧烷1.0%;B相:甘油4.0%、丁二醇3.0%、PCA钠0.2%、黄原胶0.1%;C相:实施例一天然植物防腐剂复合物1.0%、酵母提取物2.0%,补水至100%。
2、制备工艺:
(1)将黄原胶加入甘油及丁二醇中预分散,然后加入去离子水搅拌均匀后加入PCA钠,搅拌均匀加热至80℃,保温30min,待用,记为B相。
(2)称量A相中料液,并按次序添加,加热至80℃并搅拌分散均匀,保温30min,待用;将B相加入A相中,均值乳化2-3min,然后降温至50℃再加入C相,均值乳化1min。
(3)取出,缓慢搅拌并慢降温至室温,出料。
化妆品防腐挑战、稳定性及皮肤刺激性试验
化妆品防腐挑战、稳定性及皮肤刺激性试验方法同上。
试验结果:
由上表可知未添加本发明制备的天然植物防腐剂复合物的化妆品未通过防腐挑战试验,并且稳定性效果不好,易出现分层、变色、变稀现象和对人体皮肤易产生刺激性作用。而添加了天然植物防腐剂复合物的化妆品具有好的防腐和稳定性效果,并且对人体无刺激性。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式,其描述较为具体和详细,但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是,对于本领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明构思的前提下,还可以做出若干变形和改进,这些都属于本发明的保护范围。因此,本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (9)
1.一种植物防腐剂复合物,其特征在于,该所述复合物包括:鸭跖草风仙花、连翘、青刺尖、紫玉兰和虎杖。
2.如权利要求1所述的所述植物防腐剂复合物,其特征在于,该组合物包括以下重量份的组分:鸭跖草风仙花10~60份、连翘10~60份、青刺尖10~60份、紫玉兰10~60份、虎杖为10~60份。
3.如权利要求2所述的所述植物防腐剂复合物,其特征在于,该组合物包括以下重量份的组分:鸭跖草风仙花12-58份、连翘15-55份、青刺尖16-52份、紫玉兰18-50份、虎杖为12-40份。
4.如权利要求3所述的所述植物防腐剂复合物,其特征在于,该组合物包括以下重量份的组分:鸭跖草风仙花25-50份、连翘20-40份、青刺尖20-42份、紫玉兰25-40份、虎杖为16-35份。
5.如权利要求4所述的所述植物防腐剂复合物,其特征在于,该组合物包括以下重量份的组分:鸭跖草风仙花48份、连翘35份、青刺尖25份、紫玉兰21份、虎杖为16份。
6.一种如权利要求1所述的植物防腐剂复合物的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)将鸭跖草风仙花、连翘、青刺尖、紫玉兰与虎杖分别洗净、切碎、干燥或直接粉粹后,与酶溶剂和水醇混合溶剂以1:3~20(w/v)的料液比浸泡和提取3~22小时,过滤;
(2)将步骤(1)获得的液体通过回流装置加热、浓缩植物提取液的组分。
7.如权利要求6所述的制备方法,其特征在于,所述溶剂为酶溶剂和水醇混合溶剂。
8.如权利要求6所述的制备方法,其特征在于,所述原料与酶溶剂和水醇混合溶剂的体积比为1:3~20(w/v)。
9.如权利要求1所述的植物防腐剂复合物在化妆品中的应用。
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