CN1112215C - 神经生长因子在治疗有机溶剂中毒性周围神经病中的用途 - Google Patents

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本发明涉及神经生长因子在治疗有机溶剂中毒性周围神经病中的新用途，尤其涉及神经生长因子在治疗丙烯酰胺及正己烷中毒性周围神经病中的新用途。

Description

神经生长因子在治疗有机溶剂中毒性周围神经病中的用途
本发明涉及神经生长因子在治疗有机溶剂中毒性周围神经病中的新用途，尤其涉及神经生长因子在治疗丙烯酰胺及正己烷中毒性周围神经病中的新用途。
神经生长因子(NGF)是最早发现的细胞调节因子，也是神经***最重要的生物活性分子之一。研究发现NGF有神经营养作用及促进外周神经损伤后再生的作用(Thoenen H，Barder YA.，神经生长因子的生理学，Physiol Rev.1980；60(4)：1284-1335；柳川，神经生长因子与神经损伤，中华神经外科杂志.1993；9(2)；109)，对大鼠糖尿病性神经病变有一定的治疗效果(Paradji V等人，在糖尿病性神经病变中的低血清浓度的神经生长因子，Acta Neurol scand 1990；81(5)：402-6；Hellwg HD，在实验性糖尿病中神经生长因子(NGF)的内源性水平发生变化：NGF可能在糖尿病性神经病变发生中起作用，NeurosciRes 1990；26(2)：258-67)。另外，NGF对实验性抗癌药物紫杉醇(taxol)、顺铂等中毒性神经病，和染毒药同时给予动物，有一定的保护作用(Apfel SC等，神经生长因子在小鼠中预防中毒性神经病，Ann Neurol 1991；29(1)：87-90；Apfel SC等，神经生长因子给药抗实验性糖尿病性感觉神经病的保护作用，Brain Res 1994；634(1)：7-12)。但对于神经生长因子对工业毒物引起的周围神经病的治疗作用，未见报道。
另一方面，有机溶剂中毒在日常生活中时常发生，尤其是接触这些有机溶剂的产业工人中经常发生有机溶剂中毒性神经病。例如，丙烯酰胺在工业上用途广泛，其聚合物或共聚物用作化学灌浆原料、土壤改良剂、纤维改性剂、粘合剂和涂料。丙烯酰胺有特异性神经毒作用，其主要神经毒是引起粗、长神经纤维的远端轴索变性。随着染毒时间延长，可向心性扩布，特称为“中枢-周围远端轴索病”。主要病变是轴索变性，可累及雪旺细胞，使髓鞘结构发生改变。与丙烯酰胺单体接触的工人可发生丙烯酰胺中毒。临床表现为四肢末稍感觉、运动及植物神经功能呈手套样或足袜式丧失，共济失调、肌无力甚至麻痹，四肢末稍发凉、发绀。有时远端关节本体感觉、震动觉丧失，但痛、温觉不受影响。临床上丙烯酰胺中毒通常在数月内发生，轻度的周围神经病神经功能可在数月内恢复，但重度中毒者神经功能不能完全恢复，后遗症为终生四肢运动不协调、远端无力、感觉障碍。在动物如猫、大鼠、小鼠、豚鼠、兔子、猴、鸡、金鱼均可复制出实验性丙烯酰胺中毒性神经病，大多为后肢无力和运动不协调，无痛觉减退，周围神经病理改变主要是轴索逆行性变性、远端粗纤维丧失。
另一种常用的有机溶剂正己烷可经呼吸道、皮肤及胃肠道吸收。长期进入体内过多，可造成中毒性周围神经病。正己烷中毒性周围神经病和其体内活性代谢物己二酮引起的相同。其主要神经毒是引起周围神经远端近末稍部位轴索肿胀、髓鞘华勒氏变性。轴突内微丝聚集导致轴突扩张、轴突呈现节段性肿胀，形成“巨轴突”，可累及雪旺细胞，使髓鞘结构发生改变。病变也可累及中枢有髓纤维。随着染毒时间延长，可向心性扩布。与正己烷接触的工人可发生中毒，临床表现主要为周围神经炎。临床上正己烷中毒恢复较慢，通常在1年以上，但重度中毒者神经功能不能完全恢复。在大鼠、鸡等动物用正己烷或其代谢物己二酮可复制出实验性中毒性神经病，主要为后肢无力，周围神经病理改变主要是微丝聚集、巨轴突形成，轴索逆行性变性。
目前，对于丙烯酰胺、正己烷等有机溶剂中毒性周围神经病尚无有效治疗药物，研制对有机溶剂中毒性周围神经病的有效治疗药物是一急待解决的课题。
本发明人在研究中发现神经生长因子对中毒性周围神经病大鼠有明显的减轻症状的作用，随即进行深入研究，终于完成了本发明。
因此，本发明的目的在于提供一种神经生长因子的新用途，即其在治疗有机溶剂中毒性周围神经病中的新应用。
根据本发明，本发明涉及神经生长因子在治疗有机溶剂中毒性周围神经病中的新用途，尤其涉及神经生长因子在治疗丙烯酰胺及正己烷中毒性周围神经病中的新用途。
在本发明的一个实施方案中，用丙烯酰胺造成大鼠中毒性周围神经病模型，用NGF肌肉内注射治疗10天，实验结果表明：首先，NGF高(20μg/kg)、中(10μg/kg)、低(5μg/kg)剂量使大鼠肢体运动能力障碍程度减轻，且有剂量依赖关系，和模型对照组比较，差别均有显著性意义。其次，以大鼠双后足落地间距反映本体感觉与肢力，NGF治疗前丙烯酰胺染毒大鼠各组和正常对照组大鼠比较，双后足落地间距明显增大，用NGF治疗10天时，NGF高、中、低剂量组大鼠双后足落地间距均明显缩小，和模型对照组比较，差别均有显著性意义。另外，以神经-肌肉动作电位潜伏期反映坐骨神经传导速度进行实验。结果是，给药前模型对照组神经-肌肉动作电位潜伏期较正常组轻度延长，且2组比较，差别非常显著。各用药组在治疗前与模型对照组比较，神经-肌肉动作电位潜伏期无显著差别，治疗10天时，NGF各剂量组神经-肌肉动作电位潜伏期缩短，且和模型对照组比较差别有显著性。给药前模型对照组神经-肌肉动作电位幅度较正常组明显降低，且2组比较，差别非常显著。各用药组在治疗前与模型对照组比较，神经-肌肉动作电位幅度无显著差别，治疗10天时，NGF高、中剂量组神经-肌肉动作电位幅度明显较模型对照组为高，且和模型对照组比较，差别均有显著性；NGF低剂量组神经-肌肉动作电位幅度虽有所增加，但和模型对照组比较，差别无显著性意义。另一方面，病理学检查结果表明，NGF高、中、低剂量组大鼠胫神经于治疗10天时取材检查显示，髓鞘肿胀较模型对照组大鼠明显为轻，变性胫神经纤维比例较模型对照组为低，形态学基本接近正常。说明NGF有逆转神经轴索变性、促进损伤神经复元的作用。
以上结果证明，NGF肌肉内注射，能改善丙烯酰胺中毒性周围神经病大鼠肢体运动功能，能缩短中毒性神经病大鼠延长的神经-肌肉电潜伏期、纠正神经-肌肉动作电位幅度下降，逆转神经轴索变性，加速损伤神经复元。
在本发明的另一实施方案中，用正己烷体内活性代谢物己二酮灌胃制备大鼠中毒性周围神经病模型，用NGF肌肉内注射治疗12天，实验结果表明：首先，NGF高(20μg/kg)、中(10μg/kg)剂量使大鼠肢体运动能力障碍程度减轻，和模型对照组比较，差别均有显著性意义；NGF低(5μg/kg)剂量虽使大鼠肢体运动能力障碍程度减轻，但和模型对照组比较，差别无显著性意义。其次，对照组和治疗各组中部分大鼠停止染毒后14天时肢体运动能力障碍程度无减轻迹象，此部分大鼠在对照组、NGF低、中、高剂量组分别为3/10、3/9、1/10、1/10例，分别占30、33.3、10、10％。另外以坐骨神经-比目鱼肌神经一肌肉动作电位潜伏期反映坐骨神经传导速度进行实验，结果，给药前模型对照组神经-肌肉动作电位潜伏期较正常组轻度延长，且2组比较，差别非常显著。另外，各用药组在治疗前与模型对照组比较，电位潜伏期差别无显著意义。治疗12天时，模型对照组潜伏期进一步延长，NGF各剂量组神经-肌肉动作电位潜伏期较模型对照组缩短，且和模型对照组比较差别有显著性意义。给药前模型对照组坐骨神经-比目鱼肌神经-肌肉动作电位幅度较正常组轻度降低，且2组比较，差别无显著性。各用药组在治疗前与模型对照组比较，神经-肌肉动作电位幅度无显著差别。治疗12天时，模型对照组神经-肌肉动作电位幅度进一步降低，且和正常组比较，差别非常显著；NGF高、中剂量组神经-肌肉动作电位幅度明显较模型对照组为高，且和模型对照组比较，差别均有显著性意义；NGF低剂量组神经-肌肉动作电位幅度虽有所增加，但和模型对照组比较，差别无显著性意义。病理学检查结果表明，NGF治疗12天后，高、中剂量组大鼠胫神经病理切片可见巨神经纤维形成鼠数明显减少，髓鞘肿胀发生率较低、表明NGF有逆转轴索变性、促进神经损伤恢复的作用。
以上结果证明，NGF肌肉内注射，能改善己二酮中毒性周围神经病大鼠肢体运动功能，缩短神经-肌肉电潜伏期、纠正神经-肌肉动作电位幅度下降，逆转神经轴索变性，加速损伤神经复元。
总之，本发明第一次阐明了神经生长因子对治疗有机溶剂特别是丙烯酰胺和正己烷中毒性周围神经病的作用，为开发治疗所述疾病的临床药物提供了前景。
以下将以实施例详细说明本发明。
实施例1
本实施例用丙烯酰胺造成大鼠中毒性周围神经病模型，观察了NGF肌注给药后对大鼠中毒性周围神经病的治疗作用。
材料与方法
药品：小鼠颌下腺神经生长因子(2.5smNGF)由北京圣日医药科技发展公司和北京正大天元生物技术有限公司提供，批号990716，含量9000BU/支(20μg)。-30℃保存，临用前用生理盐水稀释。丙烯酰胺，为Sigma产品，进口分装，购自上海生化所申华生化公司，电泳级。
动物：Wistar大鼠，♂♀各半，体重150-200g，购自甘肃省医学科学研究院实验动物中心，清洁级，合格证号医动字第14-004，动物饲养室温度20-25℃，湿度40-60％。
仪器：MS302型微电脑多媒体生理记录仪，广东药学院产品，CIAMIS8型多媒体图象分析仪，北京航空航天大学产品。方法：
(一)丙烯酰胺中毒性大鼠周围神经病动物模型的制备
大鼠80只，10只为正常对照组，70只为造型组。造型组大鼠用丙烯酰胺灌胃，一日一次，根据体重减轻程度、大鼠全身状态及饲料消耗量的变化调整间歇时间，以大鼠出现一侧后肢瘫痪为造型终点。具体造型过程如下：最初12天用丙烯酰胺40mg/kg，灌胃，一日一次，连续4天，休2天，连续2个周期。从第13天起，根据全身状态适当调整用药间隔，丙烯酰胺剂量仍为40mg/kg，灌胃，一日一次。于末次染毒后次日进行实验分组，开始用NGF治疗。丙烯酰胺累计剂量640mg/kg，累计染毒22天。
(二)动物分组：取上述正常对照组10只大鼠及造型合格的大鼠48只，随机分组：其中正常组10只；中毒性周围神经病大鼠48只，随机分为4组：模型对照组12只，NGF低剂量(5μg/kg)组12只，NGF中剂量(10μg/kg)组12只，NGF高剂量(20μg/kg)组12只。
(三)给药方法及测定时间：于造型结束后次日开始肌肉内注射NGF 1m1/kg，正常对照组及模型对照组肌注等体积生理盐水，每天一次，共10次。以模型对照组临床症状开始恢复及治疗组临床症状明显改善作为治疗终点，于末次给药后次日进行电生理学测定及取材病检。
(四)测定方法及指标：
双后足落地间距测定：参考Edward IM等的方法(Toxical ApplPharmacol 1977；40：589-591)。令大鼠从水平位30cm高处自由落下，测量落地时两后足第四趾间距离，即为双后足落地间距，此指标反映肢体本体感觉与肢体肌力。
大鼠肢体运动能力障碍程度评分
大鼠后肢肌力的定量测定非常困难，目前尚无成熟的方法。本发明人根椐观察本模型中大鼠肢体肌力的变化过程，进行了半定量测定。将后肢肌力定义为三级，将肌力减退最严重者定义为第三级，较正常轻度减退者定义为第一级，介于两者之间者定义为第二级。另外随着病情加重，相继出现足外翻、前肢无力、后肢回缩能力丧失，后肢靠躯干牵拉被动前移(拖拉腿)、步态异常(蛙式步态)均相应给与加分。此指标变化与双后足落地间距、生物电测定、病检结果一致，说明本指标在本模型中确可反映肢体运动能力障碍程度。
1)后肢肌力：
1级：轻度减退：有以下之一表现者，计1分。重复出现者只计分一次。
①从鼠尾向后拉动时，后肢完全背伸，停留片刻后自动收回。
②表现为一侧后肢肌力轻度减退，鼠躯体向同侧推进式旋转。
③表现为一侧后肢回缩轻度迟缓。
3级：重度减退：有下述之一表现者，一侧计3分。
①从鼠尾向后拉动时，一侧或者双侧后肢完全背伸，停留数分钟不能收回。
②表现为一侧后肢运动力消失，鼠躯体向同侧推进式旋转。
③后肢运动力重度减退或消失，躯体靠前肢拉动呈匍伏式前进。
④臀部无力，表现为后肢呈蛙式撑开，腹部紧贴地面，用疼痛剌激尾部，也不向前移动。
2级：介于1-3级之间。计2分。
2)加分：
①拖拉腿：一侧腿失去主动回缩能力，靠躯干运动被动前移，一侧加1分。
②足外翻，一侧足外翻加1分。
③前肢瘫痪：一侧加1分。
④步态异常：表现为蛙式步态，加1分。
神经-肌肉动作电位测定
测定时用***吸入麻醉大鼠，背位固定。由坐骨切迹作为骨性定位标志，于坐骨切迹坐骨神经旁1-2mm经皮刺入针状刺激电极刺激坐骨神经，在距刺激电极3.5cm的比目鱼肌肌腹部位剌入针状并行引导电极记录神经-肌肉动作电位。无关电极置于刺激电极与记录电极之间。用2.5倍阈电压(0.5V)连续方波刺激坐骨神经近端，波宽0.1ms，波间隔200ms。每批实验各组及组内各大鼠双侧坐骨神经刺激参数相同。用MS302型微机型三导生理记录***对诱发电位进行放大、12位A/D转换后输入IBM 486电子计算机，用MS302型软件对神经-肌肉动作电位进行分析处理，测定神经-肌肉动作电位潜伏期(N-M电潜伏期)反映坐骨神经传导速度。同时记录动作电位幅度(NMAP，峰峰值)。扫描速度4000mm/s，刺激由MS302型生理记录***内含程控刺激器输出。
病理学检查：电生理学测定后立即取胫神经，10％福马林生理盐水溶液固定、锇酸染色，石腊包埋，取胫神经髁上段0.3cm切为5μm组织切片，用显微摄像机摄像，观察神经轴索病理形态学变化。用图象分析仪(北京航空航天大学产品)放大400倍观察神经纤维变性程度。锇酸为亲脂性染料，含脂量高的髓鞘黑染而轴突不着色，故髓鞘的形态在本染色切片上极易判定(见图5图例)。神经纤维变性程度可用髓鞘肿胀程度来判定。在镜下可见神经髓鞘向心性增厚，神经轴突变细甚至消失，反映神经髓鞘水肿、变性。
(五)统计分析：计量资料用t-检验，等级资料用等级序值法。结果一、丙烯酰胺诱导的大鼠中毒性周围神经病模型特点
造型期间各指标变化如下：
大鼠体重与饲料消耗量变化：染毒1周时大鼠体重下降，饲料消耗量减少，2周时饲料消耗量接近正常组，体重逐渐回升。
双后足落地间距变化：染毒终了时，染毒组大鼠双后足落地间距明显增大，和正常组比较，差别非常显著(表1)。
表1、染毒终了时大鼠双后足落地间距的变化
组别            双后足落地间距/cm
正常组          7.5+0.8
造型组          11.0+1.6***#
和正常组比，***P＜0.01。#：为模型对照组数据。
后肢肌力变化：于造型结束时，大鼠后肢肌力明显减退，于1-2天内出现一侧或两侧后肢无力
动作电位变化：神经-肌肉动作电位潜伏期轻度延长，动作电位幅度明显下降(表4)。
周围神经病理学变化：模型对照组大鼠胫神经粗轴索广泛变性，髓鞘肿胀、变性，轴索外膜增厚，轴突变细甚至消失。二、NGF对丙烯酰胺中毒性大鼠周围神经病的治疗作用：
1.对大鼠肢体运动能力障碍程度的影响
结果见表2A-G。治疗前各组大鼠肢体运动能力障碍程度基本一致，各用药组和模型对照组比较，均无显著性差别。治疗3天时，模型对照组大鼠肢体运动能力障碍程度进一步恶化。治疗4天时，高剂量组大鼠肢体运动能力障碍程度轻度减轻，和模型对照组比较，差别有显著性意义。治疗6天后各用药组大鼠肢体运动能力障碍程度均较模型对照组为轻，且有剂量依赖关系，和模型对照组比较，差别均有显著性意义。
           表2A、治疗前大鼠肢体运动能力障碍程度肢体运动能力  对照组   NGF低剂量组* NGF中剂量组*  NGF高剂量组*障碍程度/分    (只)       (只)          (只)           (只)
 0
 1
 2
 3
 4
 5
 6
 7                                     2              2
 8            1          3             1              2
 9            2          2             3              2
 10           2          3             6              1
 11           7          4                            5
 12和对照比，*P＞0.05，**＜0.05，***P＜0.01(等级序值法)
           表2B、NGF治疗2天大鼠肢体运动能力障碍程度肢体运动能力  对照组  NGF低剂量组*  NGF中剂量组*  NGF高剂量组*障碍程度/分    (只)       (只)          (只)          (只)
 0
 1
 2
 3
 4
 5
 6
 7                                    1
 8                       2            1              1
 9           2                        1              2
 10          1           1            1              1
 11          9           8            8              8
 12和对照比，*P＞0.05，**P＜0.05，***P＜0.01(等级序值法)
        表2C、NGF治疗4天大鼠肢体运动能力障碍程度肢体运动动能力        NGF低剂量组* NGF中剂量组* NGF高剂量组**
          对照组障碍程度/分             (只)           (只)           (只)
 0
 1
 2
 3
 4
 5                     2
 6                     2
 7                                     3
 8                                                    3
 9          1          1               2              3
 10                    1               1              1
 11         9          5               6              5
 12                    1和对照比，*P＞0.05，**P＜0.05，***P＜0.01(等级序值法)
             表2D、NGF治疗6天大鼠肢体运动能力障碍程度肢体运动能力障  对照组    NGF低剂量组**   NGF中剂量组** NGF高剂量组***碍程度/分       (只)         (只)             (只)             (只)
 0
 1
 2
 3
 4
 5                           2               1
 6                           2
 7                                           3                 5
 8                           1               4                 4
 9              1            2
 10                          1
 11             9            4               4                  3
 12和对照比，*P＞0.05，**P＜0.05，***P＜0.01(等级序值法)
           表2E、NGF治疗8天大鼠肢体运动能力障碍程度肢体运动能力障  对照组  NGF低剂量组*** NGF中剂量组*** NGF高剂量组***碍程度/分       (只)       (只)            (只)           (只）
 0
 1
 2
 3                                      1               1
 4                      1
 5                      1               4               2
 6                      1                               4
 7                      1               2               1
 8           1          3               3               2
 9           2          1                               1
 10
 11          7          2               2               1
 12和对照比，*P＞0.05，**P＜0.05，***P＜0.01(等级序值法)
           表2F、NGF治疗9天大鼠肢体运动能力障碍程度肢体运动能力障  对照组    NGF低剂量组*** NGF中剂量组*** NGF高剂量组***碍程度/分      (只)          (只)            (只)             (只)
 0                                         1
 1
 2                         1                                 1
 3                         1               2                 3
 4                                         3                 4
 5                                         2                 3
 6                          2              1
 7            1             2              2
 8            2             3
 9            4             1                                1
 10           1
 11           2                            1
 12和对照比，*P＞0.05，**P＜0.05，***P＜0.01(等级序值法)
          表2G、NGF治疗10天大鼠肢体运动能力障碍程度肢体运动能力障  对照组  NGF低剂量组*** NGF中剂量组*** NGF高剂量组***碍程度/分        (只)        (只)           (只)             (只)
0                                        2               2
1
2                         1                              3
3                         1              6               5
4                                        2               1
5                         3              1               1
6                         2
7            6            1
8            1             2
9            2                            1
10
11           1
12和对照比，*P＞0.05，**P＜0.05，***P＜0.01(等级序值法)
2.对大鼠双后足落地间距的影响
NGF治疗前丙烯酰胺染毒大鼠各组和正常对照组大鼠比较，双后足落地间距明显增大，且差别非常显著(表3)。用NGF治疗10天时，NGF高、中剂量组大鼠双后足落地间距均明显缩小，和模型对照组比较，差别均有显著性意义(表3)；NGF低剂量组大鼠双后足落地间距虽较模型对照组为小，但和模型对照组比较，差别无显著性(P＞0.05)。
             表3.对大鼠双后足落地间距的影响
           组别           治疗前        治疗后
         正常组          7.45±0.80    7.05+0.64
         模型对照组      11.04±1.59   10.90±2.03
         NGF5μg/kg      12.80±2.55* 9.60±0.91*
         NGF10μg/kg     11.42+2.03*  8.33±0.96***
         NGF20μg/kg     11.88±1.45* 7.57±0.91***
和模型对照组比，*P＞0.05，**P＜0.05，***P＜0.01
3.对神经-肌肉动作电位的影响
(1)对神经-肌肉动作电位潜伏期的影响：由于大鼠坐骨神经较短，潜伏期过短，难以记录神经干动作电位，故本实验以神经-肌肉动作电位潜伏期(N-M电潜伏期)反映坐骨神经传导速度。结果，给药前模型对照组神经-肌肉动作电位潜伏期较正常组轻度延长，且2组比较，差别非常显著。各用药组在治疗前与模型对照组比较，神经-肌肉动作电位潜伏期无显著差别，治疗10天时，NGF高、中、低剂量组神经-肌肉动作电位潜伏期缩短，且和模型对照组比较差别有显著性(表4)。
(2)对神经-肌肉动作电位幅度的影响结果，给药前模型对照组神经-肌肉动作电位幅度较正常组明显降低，且2组比较，差别非常显著。各用药组在治疗前与模型对照组比较，神经-肌肉动作电位幅度无显著差别，治疗第10天时，NGF高、中剂量组神经-肌肉动作电位幅度明显较模型对照组为高，且和模型对照组比较，差别均有显著性(表4)，NGF低剂量组神经-肌肉动作电位幅度虽有所增加，但和模型对照组比较，差别无显著性意义(P＞0.05)。
表4.NGF对大鼠中毒性周围神经病神经-肌肉动作电位的影响
            N-M潜伏期/ms                    动作电位幅度/mV组别
       治疗前         治疗后           治疗前          治疗后正常组     0.80±0.15*** 0.90±0.05***    22.20±4.23*** 19.53+5.55***模型对照组 0.98±0.13     1.14±0.07       7.89+4.83       4.77±3.66NGF1000BU/kg组1.05±0.1*    0.99±0.08**    7.66+6.96*     8.25±5.11*NGF2000BU/kg组0.97+0.13*    1.01±0.12**    9.10±6.15*    16.24±6.31***NGF4000BU/kg组0.96±0.12*   0.91+0.05***    8.77±5.76*    19.73+4.42***和模型对照组比，*P＞0.05，**P＜0.05，***P＜0.01(多组均数t检验)
4.病理学检查结果
和正常胫神经纤维比较，见丙烯酰胺染毒大鼠胫神经粗纤维变性，细纤维受累较轻，变性纤维髓鞘增厚，轴突变细甚至消失。模型对照组大鼠胫神经粗纤维广泛变性，髓鞘肿胀明显。NGF高、中、低量组大鼠胫神经取材标本病检显示，髓鞘肿胀较模型对照组大鼠明显为轻，形态学基本接近正常，粗神经纤维变性比例减小，说明NGF有逆转神经纤维变性、促进损伤神经复元的作用。
实施例2
本实施例用正己烷的体内活性代谢物己二酮造成大鼠中毒性周围神经病模型，观察了NGF肌注给药后对大鼠中毒性周围神经病的治疗作用。
现已证明，正己烷中毒性周围神经病是其在体内代谢产生的代谢物己二酮所致。动物实验进一步证明外源性己二酮可产生与正己烷中毒相同的周围神经病。由于己二酮的神经毒性是正己烷的33倍，其产生中毒性周围神经病的时间较短，通常在20天-2月内，因此采用己二酮代替正己烷来诱发周围神经病是一方便可靠的方法。
本实施例所用己二酮为Fluka产品，用前用蒸馏水稀释。其余实验动物及材料同实施例1。
(一)己二酮中毒性大鼠周围神经病动物模型的制备
大鼠70只，10只为正常对照组，60只为造型组。造型组大鼠用己二酮ig，一目一次，根据体重减轻程度、大鼠全身状态及饲料消耗量的变化调整间歇时间，以大鼠出现双后肢瘫痪为造型终点。具体造型过程如下：
最初12天用己二酮400mg/kg，ig，一日一次，连续4-5天，休2天，连续2个周期。从第14天起，用己二酮600mg/kg，ig，一日一次，连续5天，休2天后，再用400mg/kg剂量ig，中间间以休息，最后用500mg/kg ig 5天，于末次染毒后隔1日后进行实验分组，开始用NGF治疗。己二酮累计剂量11,900mg/kg，累计染毒36天。
(二)动物分组：取上述正常对照组10只大鼠及造型合格的大鼠40只，随机分组：正常组：10只；中毒性周围神经病大鼠40只，随机分4组：模型对照组10只，NGF低剂量(5μg/kg)组，10只，NGF中剂量(10μg/kg)组，10只，NGF高剂量(20μg/kg)组，10只。
(三)给药方法及测定时间：于造型结束后第3日开始肌肉内注射NGF 1ml/1kg，正常对照组及模型对照组肌注等体积生理盐水，每天一次，共12次。以模型对照组临床症状开始恢复及治疗组临床症状明显改善作为治疗终点，于末次给药后次日进行电生理学测定及取材病检。
(四)动物饲养：动物造型期间一律喂以普通饲料，周围神经病发生后，部分动物摄食困难，喂以30％全脂无糖奶粉，每次2-5ml，每天3-5次。
(五)测定方法及指标：
1.大鼠肢体运动能力障碍程度评分
大鼠后肢肌力的定量测定非常困难，目前尚无成熟的方法。本实验根椐观察本模型中大鼠肢体肌力的变化过程，进行了半定量测定。大鼠后肢运动功能障碍程度分2部分，第一部分为膝关节以下肌力的变化，将膝关节以下肢力的变化定义为三级，将肌力减退最严重者(膝关节及其以下收缩力减退)定义为第三级，将踝关节及其以下收缩力减退定义为第二级，将后肢行动迟缓定义为第一级。第二部分：随着病情加重，相继出现足外翻、后肢不能回缩到自然位，给与相应加分(各计1分)。
己二酮诱导的周围神经病形成后，肢体肌力的减退顺序是从后肢末稍向心性发展，依次为踝关节受累、膝关节受累、髋关节受累，时间顺序依次是：
(1)步履迟缓：后肢行走动作迟缓，足掌落地，行走时足掌缓慢抬起，如放录象之慢镜头。踝关节和膝关节不着地。定义为后肢运动功能障碍1级，计1分。
(2)行走艰难：后肢踝关节以下丧失运动能力，足掌丧失支撑能力，踝关节着地，膝关节悬空。定义为后肢运动功能障碍2级，计2分。
(3)跪行：后肢膝关节以下完全丧失回缩力，足掌、踝关节丧失支撑能力，膝关节着地，大鼠呈跪行状态，定义为后肢运动功能障碍3级，计3分。
(4)后肢不能缩回到自然位：髋关节、腰肌、或(及)后肢膝关节以下肌肉受累严重而使后肢肌肉收缩力严重减弱或消失，后肢靠躯干拖拉移动，不能缩回到自然位置。
大鼠肢体肌力停止染毒后膝关节以下功能恢复的顺序依次为(3)→(2)→(1)。后肢位置不能缩回到自然位置，时间顺序无一定规律性，因此，将后肢不能缩回到自然位另行加分，计1分。
(5)左、右足外翻各计1分。
2.神经-肌肉动作电位测定
同实施例1。
3.病理学检查：电生理学测定后立即取胫神经，10％福马林生理盐水溶液固定、锇酸染色，取胫神经踝上段，0.3cm石蜡包埋，切为4-6μm组织切片，用显微摄像机摄像，观察神经纤维病理形态学变化。用图象分析仪(北京航空航天大学产品)放大400倍观察神经纤维变性程度。锇酸为亲脂性染料，含脂量高的髓鞘黑染而轴突不着色，故髓鞘的形态在本染色切片上极易判定。本模型主要观察下述2种神经纤维变性指标，计算阳性率：
(1)巨神经纤维形成：为微丝增生型，表现为轴突极度扩张，髓鞘壁变薄，形成巨神经纤维(巨轴突)。
(2)髓鞘肿胀变性，在镜下可见神经髓鞘向心性增厚，神经轴突变细甚至消失。
巨神经纤维发生率＝(形成巨神经纤维鼠数/病检鼠数)×100％
髓鞘肿胀发生率＝(髓鞘肿胀鼠数/病检鼠数)×100％
(六)、统计分析：计量资料用t-检验，方差不齐时用较正t′值法。等级资料用等级序值法，四格表计数资料用Fisher直接概率法。结果
一、己二酮诱导的大鼠中毒性周围神经病模型特点
1.一般特点：造型时间36天，累计染毒剂量11,900mg/kg。60只大鼠中有43只在2-3天范围内出现对称性双后肢瘫痪，占71.7％，中毒死亡9只，占15.0％，不符合周围神经病模型要求大鼠8只，占13.3％。停止染毒后在治疗过程中NGF低剂量组大鼠死亡1只。
2.后肢肌力变化：于造型结束时，大鼠双后肢肌力明显减退，于2-3天内出现对称性双后肢无力，停止染毒后短时间内肌力进一步减退，于10天左右开始自发性恢复。个别大鼠于实验终了时后肢肌力无恢复迹象。
3.动作电位变化：于造型结束时神经-肌肉动作电位潜伏期轻度延长，于治疗结束时，模型对照组潜伏期进一步延长。动作电位幅度于造型结束时个别大鼠轻度下降，为正常对照组的93.9％，模型对照组和正常组比较，差别无显著性。于治疗终了时，动作电位幅度进一步下降，模型对照组仅为正常组的13.6％，和正常组比较，差别非常显著。
4.周围神经病理学变化：于造型结束、NGF治疗前胫神经病检显示，己二酮中毒性周围神经病大鼠胫神经纤维主要出现2种病理改变，胫神经纤维广泛变性，表现为轴突极度扩张，髓鞘壁变薄，形成巨神经纤维。间或有单纯髓鞘肿胀变性，在镜下可见神经髓鞘向心性增厚，神经轴突变细甚至消失。
二、NGF对己二酮中毒性大鼠周围神经病的治疗作用：
1.对大鼠肢体运动能力障碍程度的影响
结果见表5A-J。治疗前各组大鼠肢体运动能力障碍程度基本一致，各用药组和模型对照组比较，均无显著性差别。治疗2天时，模型对照组大鼠肢体运动能力障碍程度进一步恶化。治疗5天时，高剂量组大鼠肢体运动能力障碍程度轻度减轻，和模型对照组比较，差别有显著性意义。治疗6天后NGF中、高剂量组大鼠肢体运动能力障碍程度均较模型对照组为轻，和模型对照组比较，差别均有显著性意义。NGF低剂量组大鼠在治疗各时点肢体运动能力障碍程度虽较模型对照组为轻，但2组比较，差别无显著性。对照组和治疗各组中部分大鼠停止染毒后14天时肢体运动能力障碍程度无减轻迹象，此部分大鼠在对照组、NGF低、中、高剂量组分别为3/10、3/9、1/10、1/10例，分别占30、33.3、10、10％。
           表5A、治疗前大鼠肢体运动能力障碍程度肢体运动能力障  对照组  NGF低剂量组* NGF中剂量组*   NGF高剂量组*碍程度/分        (只)       (只)          (只)            (只)
 0
 1
 2
 3
 4
 5
 6
 7                        1
 8            4           2             3               2
 9            6           7             7               8和对照比，*P＞0.05，**P＜0.05，***P＜0.01(等级序值法)
      表5B、NGF治疗2天大鼠肢体运动能力障碍程度肢体运动能力    对照组  NGF低剂量组* NGF中剂量组*   NGF高剂量组*障碍程度/分       (只)      (只)          (只)            (只)
 0
 1
 2
 3
 4
 5
 6
 7
 8               2                                        2
 9               8         10             10              8和对照比，*P＞0.05，**P＜0.05，***P＜0.01(等级序值法)
      表5C、NGF治疗4天大鼠肢体运动能力障碍程度肢体运动能力障  对照组  NGF低剂量组*   NGF中剂量组*   NGF高剂量组*碍程度/分         (只)      (只)            (只)             (只)
 0
 1
 2
 3
 4
 5
 6
 7
 8
 9             10         10             10                10和对照比，*P＞0.05，**P＜0.05，***P＜0.01(等级序值法)
       表5D、NGF治疗5天大鼠肢体运动能力障碍程度肢体运动能力  对照组  NGF低剂量组* NGF中剂量组* NGF高剂量组**障碍程度/分    (只)       (只)          (只)          (只)
 0
 1
 2
 3
 4                                                  1
 5
 6                      2             2
 7                      1             1             4
 8           2          1             2             2
 9           8          6             5             3和对照比，*P＞0.05，**P＜0.05，***P＜0.01(等级序值法)
    表5E、NGF治疗6天大鼠肢体运动能力障碍程度肢体运动能力  对照组  NGF低剂量组* NGF中剂量组** NGF高剂量组**障碍程度/分    (只)       (只)          (只)            (只)
 0
 1
 2
 3
 4                      1             2               4
 5                                                    1
 6                      2             2
 7          1           1             2
 8          2           1             1               2
 9          7           5             3               3和对照比，*P＞0.05，**P＜0.05，***P＜0.01(等级序值法)
     表5F、NGF治疗7天大鼠肢体运动能力障碍程度肢体运动能力  对照组  NGF低剂量组* NGF中剂量组** NGF高剂量组***障碍程度/分    (只)       (只)          (只)           (只)
 0
 1
 2                                   1               3
 3
 4                     1             4               2
 5                     1             1               2
 6                     1                             1
 7           2         2             1
 8           2         2                             1
 9           6         2             3               1和对照比，*P＞0.05，**P＜0.05，***P＜0.01(等级序值法)
         表5G、NGF治疗8天大鼠肢体运动能力障碍程度肢体运动能力  对照组  NGF低剂量组* NGF中剂量组*** NGF高剂量组***障碍程度/分    (只)      (只)           (只)            (只)
 0                                                    3
 1
 2                                    1               1
 3
 4                     2              4               4
 5                                    2
 6                     2                              1
 7           3         1              2
 8           3         2
 9           4         2              1               1和对照比，*P＞0.05，**P＜0.05，***P＜0.01(等级序值法)
       表5H、NGF治疗9天大鼠肢体运动能力障碍程度肢体运动能力  对照组  NGF低剂量组* NGF中剂量组*** NGF高剂量组***障碍程度/分     (只)      (只)           (只)            (只)
 0                                                    3
 1
 2                     1              2               2
 3                                    1
 4                     1              3               3
 5                                    2
 6            1        1                              1
 7            2        3              1
 8            4        2
 9            3        1              1               1和对照比，*P＞0.05，**P＜0.05，***P＜0.01(等级序值法)
       表5I、NGF治疗10天大鼠肢体运动能力障碍程度肢体运动能力   对照组  NGF低剂量组* NGF中剂量组*** NGF高剂量组***障碍程度/分      (只)    (只)            (只)            (只)
 0                                    1               5
 1                     1
 2                                    6               3
 3                                    1
 4                     1              1               1
 5
 6             1       1
 7             2       3
 8             4       2
 9             3       1              1               1和对照比，*P＞0.05，**P＜0.05，***P＜0.01(等级序值法)
        表5J、NGF治疗11天大鼠肢体运动能力障碍程度肢体运动能力  对照组  NGF低剂量组* NGF中剂量组*** NGF高剂量组***障碍程度/分    (只)       (只)           (只)           (只)
 0                     1               4              6
 1                                     2
 2                                     2              2
 3
 4                     2               1              1
 5                     1
 6          1
 7          2          2
 8          4          2               1              1
 9          3          1和对照比，*P＞0.05，**P＜0.05，***P＜0.01(等级序值法)
2.对神经-肌肉动作电位的影响
(1)对神经-肌肉动作电位潜伏期的影响：由于大鼠坐骨神经较短，难以记录神经干动作电位，故本实验以神经-肌肉动作电位潜伏期(N-M电潜伏期)反映坐骨神经传导速度。结果，给药前模型对照组神经-肌肉动作电位潜伏期较正常组轻度延长，且2组比较，差别非常显著。各用药组在治疗前与模型对照组比较，神经-肌肉动作电位潜伏期差别无显著性意义。治疗12天时，模型对照组神经-肌肉电潜伏期进一步延长，NGF高、中、低剂量组神经-肌肉动作电位潜伏期较模型对照组明显为短，且和模型对照组比较差别有显著性意义(表6)  。
(2)对神经-肌肉动作电位幅度的影响  给药前模型对照组神经-肌肉动作电位幅度较正常组轻度降低，且2组比较，差别无显著性意义。各用药组在治疗前与模型对照组比较，神经-肌肉动作电位幅度无显著差别。治疗第12天时，模型对照组大鼠神经-肌肉动作电位幅度进一步降低，且和正常组比较，差别非常显著。NGF高、中剂量组神经-肌肉动作电位幅度明显较模型对照组为高，且和模型对照组比较，差别均有显著性意义(表6)；NGF低剂量组神经-肌肉动作电位幅度虽有所增加，但和模型对照组比较，差别无显著性意义(P＞0.05)。
表6.NGF对己二酮中毒性大鼠周围神经病神经-肌肉动作电位的影响
                  N-M潜伏期/ms                   动作电位幅度/mV
组别
            治疗前         治疗后           治疗前           治疗后
正常组    0.84±0.10***  0.98±0.13***    21.4±4.3***     22.8+2.6***
模型对照组1.29±0.23      1.58±0.35       20.1±5.9         3.1±2.4
NGF
5μg/kg组 1.23±0.20*    1.29±0.17**    17.4±7.0*       5.2+4.3*
NGF
10μg/kg组1.15±0.21*    1.28±0.18**    18.3+4.4*        8.5±5.3***
NGF
20μg/kg组1.36+0.33*     1.27±0.14***   15.0+±8.1*      7.3±4.8**
和模型对照组比，*P＞0.05，**P＜0.05，***P＜0.01。
4.病理学检查结果
结果见表7，和正常胫神经纤维比较，见己二酮染毒大鼠胫神经纤维变性，变性纤维轴突极度扩张、髓鞘变薄，形成“巨神经纤维”。模型对照组大鼠胫神经纤维巨神经纤维广泛形成，髓鞘壁明显变薄，同时部分神经纤维髓鞘肿胀变性，髓鞘壁增厚、轴突变细。NGF高、中、低剂量组大鼠胫神经取材标本显示，巨神经纤维形成鼠数明显减少，且和对照组比较，高、中剂量组差别非常显著。NGF治疗各组髓鞘肿胀发生率也明显减少，但和对照组比较，各剂量组差别均不显著。NGF各组神经髓鞘内壁伸出伪足样突起，巨神经纤维减少或消失。
  表7、己二酮诱导的大鼠中毒性周围神经病NGF治疗后病检结果
               巨神经纤维形成                髓鞘肿胀变性
组别
           阳性/只    阴性/只    阳性％    阳性/只  阴性/只  阳性％
模型对照组   10          0        100         8        2       80
NGF5μg/kg    6          3        66.7*       4        5       44.4*
NGF10μg/kg   3          7        30**        3        7       30*
NGF20μg/kg   0          10       0***        5        5       50*
和对照比，*P＞0.05，**P＜0.05，***P＜0.01(Fisher直接机率法)。
本实施例证实对己二酮中毒性大鼠周围神经病，肌内注射神经生长因子治疗使神经轴索变性逆转，改善神经传导功能，促进神经-肌肉动作电位的恢复，加快提高肢体运动功能。NGF的这种治疗效果，对治疗正己烷等工业毒物中毒性周围神经病有重要的临床价值。

Claims (3)

1、神经生长因子在制备治疗有机溶剂中毒性周围神经病的药物中的应用。
2、如权利要求1所述的应用，其中所述的有机溶剂为丙烯酰胺。
3、如权利要求1所述的应用，其中所述的有机溶剂为正己烷。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP4342485A1 (en) * 2022-09-23 2024-03-27 Dompe' Farmaceutici S.P.A. Ngf for the treatment of spasticity

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104161771A (zh) * 2014-04-09 2014-11-26 大连医科大学 骨髓间充质干细胞来源的神经细胞作为治疗正己烷致周围性神经病的药物的应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1052141A (zh) * 1989-08-30 1991-06-12 马克斯普朗克精神病学院 神经营养因子-3-一种与神经生长因子和脑衍生的神经营养因子有关的新的神经营养因子
DE4125933A1 (de) * 1991-08-05 1993-02-11 Max Planck Gesellschaft Verbesserung der regeneration von oligodendrocyten
CN1071585A (zh) * 1991-07-10 1993-05-05 里珍纳龙药品有限公司 应用bdnf/nt-3/ngf分子族成员治疗运动神经元疾病的方法
WO1998046254A1 (en) * 1997-04-11 1998-10-22 Roche Diagnostics Gmbh Ngf for the prevention of demyelination in the nervous system

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1052141A (zh) * 1989-08-30 1991-06-12 马克斯普朗克精神病学院 神经营养因子-3-一种与神经生长因子和脑衍生的神经营养因子有关的新的神经营养因子
CN1071585A (zh) * 1991-07-10 1993-05-05 里珍纳龙药品有限公司 应用bdnf/nt-3/ngf分子族成员治疗运动神经元疾病的方法
DE4125933A1 (de) * 1991-08-05 1993-02-11 Max Planck Gesellschaft Verbesserung der regeneration von oligodendrocyten
WO1998046254A1 (en) * 1997-04-11 1998-10-22 Roche Diagnostics Gmbh Ngf for the prevention of demyelination in the nervous system

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP4342485A1 (en) * 2022-09-23 2024-03-27 Dompe' Farmaceutici S.P.A. Ngf for the treatment of spasticity
WO2024062135A1 (en) * 2022-09-23 2024-03-28 Dompe' Farmaceutici Spa Ngf for the treatment of spasticity

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