CN111201036A - 包含抗α(V)β(6)抗体的药物组合物和剂量方案 - Google Patents

Abstract

提供了抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段的制剂和剂量方案。这些制剂可用于治疗例如纤维化(例如，特发性肺纤维化)、急性肺损伤和急性肾损伤。

Description

包含抗α(V)β(6)抗体的药物组合物和剂量方案

相关申请的交叉引用

本申请要求2017年8月22日提交的美国临时申请号62/548,772的权益，该美国临时申请的内容全文以引用方式并入本文。

技术领域

本申请总体上涉及用于临床用途的包含抗αvβ6抗体的药物组合物和剂量方案，以及它们的用途。

背景技术

整联蛋白是一种细胞表面糖蛋白受体超家族，其结合细胞外基质蛋白并介导细胞-细胞和细胞-细胞外基质相互作用(通常称为细胞粘附事件)。这些受体由非共价缔合的α(α)和β(β)链组成，这些链结合在一起产生具有不同细胞和粘附特异性的多种异二聚体蛋白质。整联蛋白调节多种细胞过程，包括细胞粘附、迁移、侵袭、分化、增殖、凋亡和基因表达。

αvβ6受体是表达为细胞表面异二聚体蛋白的整联蛋白家族的一个成员。尽管αv亚基可以与多种β亚基(β1、β3、β5、β6和β8)形成异二聚体，但是β6亚基仅可表达为与αv亚基的异二聚体。已知αvβ6整联蛋白是与纤连蛋白、玻连蛋白、潜伏期相关肽(LAP)-和腱生蛋白C结合的细胞表面受体，通过其上的RGD三肽结合位点与细胞外基质相互作用。αvβ6的表达仅限于上皮细胞，其中其在健康组织中以相对较低水平表达，而在发育、损伤和创伤愈合期间明显上调。

由于αvβ6与LAP的结合在TGF-β转化为其活性态中很重要，因此阻断该结合可导致抑制αvβ6介导的TGF-β活化以及相关的纤维化病理。

结合αvβ6的高亲和力拮抗剂抗体已显示为可用于治疗TGF-β相关疾患。

发明内容

本公开部分地涉及含有抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段的组合物，以及它们在治疗尤其是纤维化、急性肺损伤和急性肾损伤中的用途。

在一个方面中，本公开的特征在于一种药物组合物，该药物组合物包含抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段，以及精氨酸盐酸盐(Arg.HCl)。抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段包含免疫球蛋白重链可变结构域(VH)和免疫球蛋白轻链可变结构域(VL)。在某些情况下，VH包含VH互补决定区(VH-CDR)，其中VH-CDR1包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列或由其组成；VH-CDR2包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列或由其组成；VH-CDR3包含SEQ IDNO:3所示的氨基酸序列或由其组成；并且VL包含VL-CDR，其中VL-CDR1包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列或由其组成；VL-CDR2包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列或由其组成；并且VL-CDR3包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列或由其组成。该组合物的pH为5.2至5.7。

在某些实施方案中，该组合物包含浓度为50mg/ml至200mg/ml的抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段。在其它实施方案中，该组合物包含浓度为100mg/ml至175mg/ml的抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段。在其它实施方案中，该组合物包含浓度为125mg/ml至175mg/ml的抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段。在其它实施方案中，该组合物包含浓度为150mg/ml的抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段。

在某些实施方案中，该组合物包含浓度为50mM至250mM的Arg.HCl。在另一个实施方案中，组合物包含浓度为100mM至200mM的Arg.HCl。在其它实施方案中，组合物包含浓度为125mM至175mM的Arg.HCl。在另一个实施方案中，其中该组合物包含浓度为150mM的Arg.HCl。

在某些实施方案中，该组合物包含甲硫氨酸。在一些情况下，该组合物包含浓度为0.5mM至30mM的甲硫氨酸。在其它情况下，其中该组合物包含浓度为1mM至10mM的甲硫氨酸。在其它情况下，该组合物包含浓度为5mM的甲硫氨酸。

在某些实施方案中，该组合物包含聚山梨酯-80(PS80)。在一些情况下，该组合物包含浓度为0.01％至0.1％的PS80。在其它情况下，该组合物包含浓度为0.03％至0.08％的PS80。在其它情况下，该组合物包含浓度为0.05％的PS80。

在某些实施方案中，该组合物包含柠檬酸钠和柠檬酸。在某些情况下，该组合物包含浓度为5mM至30mM的柠檬酸钠和柠檬酸。在其它情况下，该组合物包含浓度为15mM至25mM的柠檬酸钠和柠檬酸。在其它情况下，该组合物包含浓度为20mM的柠檬酸钠和柠檬酸。

在某些实施方案中，该组合物的pH为5.3至5.6。在一个实施方案中，该组合物的pH为5.5。

在某些实施方案中，组合物包含含硫醇的抗氧化剂。在一些情况下，含硫醇的抗氧化剂选自由以下组成的组：GSH、GSSG、GSH和GSSG的组合、胱氨酸、半胱氨酸，以及半胱氨酸和胱氨酸的组合。在一种情况下，含硫醇的抗氧化剂是GSH。在一种情况下，含硫醇的抗氧化剂是GSSG。在一种情况下，含硫醇的抗氧化剂是GSH和GSSG。在一种情况下，含硫醇的抗氧化剂是半胱氨酸。在一种情况下，含硫醇的抗氧化剂是胱氨酸。在一种情况中，含硫醇的抗氧化剂是半胱氨酸和胱氨酸。在某些实施方案中，含硫醇的抗氧化剂以0.02mM至2mM的浓度存在于组合物中。在一些情况下，含硫醇的抗氧化剂以0.2mM的浓度存在于组合物中。在其它情况下，含硫醇的抗氧化剂以0.4mM的浓度存在于组合物中。在其它情况下，含硫醇的抗氧化剂以1.0mM的浓度存在于组合物中。在含硫醇的抗氧化剂是GSH和GSSG的情况下，前者以0.4mM的浓度存在，而后者以0.2mM的浓度存在。在含硫醇的抗氧化剂是半胱氨酸和胱氨酸的情况下，前者以0.4mM的浓度存在，而后者以0.2mM的浓度存在。

在一些实施方案中，该药物组合物包含浓度为125mg/ml至175mg/ml的抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段；浓度为125mM至175mM的Arg.HCl；浓度为1mM至10mM的甲硫氨酸；浓度为15mM至25mM的柠檬酸钠和柠檬酸；以及浓度为0.03％至0.08％的PS80。该组合物的pH为5.3至5.7。

在一些实施方案中，该药物组合物包含浓度为125mg/ml至175mg/ml的抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段；浓度为125mM至175mM的Arg.HCl；浓度为1mM至10mM的甲硫氨酸；浓度为15mM至25mM的柠檬酸钠和柠檬酸；浓度为0.02mM至2mM的含硫醇的抗氧化剂；以及浓度为0.03％至0.08％的PS80。该组合物的pH为5.3至5.7。

在一些实施方案中，该药物组合物包含浓度为125mg/ml至175mg/ml的抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段；浓度为125mM至175mM的Arg.HCl；浓度为15mM至25mM的柠檬酸钠缓冲液(柠檬酸钠和柠檬酸)；浓度为0.02mM至2mM的含硫醇的抗氧化剂；以及浓度为0.03％至0.08％的PS80。该组合物的pH为5.3至5.7。

在一些实施方案中，药物组合物包含浓度为150mg/ml的抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段；浓度为150mM的Arg.HCl；浓度为5mM的甲硫氨酸；浓度为20mM的柠檬酸钠和柠檬酸；以及浓度为0.03％至0.08％的PS80。该组合物的pH为5.5。

在一些实施方案中，该药物组合物包含浓度为150mg/ml的抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段；浓度为150mM的Arg.HCl；浓度为5mM的甲硫氨酸；浓度为20mM的柠檬酸钠和柠檬酸；浓度为0.4mM的GSH或半胱氨酸；以及浓度为0.03％至0.08％的PS80。该组合物的pH为5.5。

在某些实施方案中，VH由与SEQ ID NO:7至少80％、至少90％或100％同一的序列组成，并且VL由与SEQ ID NO:8至少80％、至少90％或100％同一的序列组成。

在某些实施方案中，重链由与SEQ ID NO:9至少80％、至少90％或100％同一的序列组成，并且轻链由与SEQ ID NO:10至少80％、至少90％或100％同一的序列组成。

本公开的特征还在于治疗有需要的人受试者的αvβ6介导的病症的方法。该方法包括向人受试者施用本文所述的药物组合物。在某些情况下，αvβ6介导的疾病是纤维化。在特定实施方案中，纤维化是肺纤维化、肾纤维化、肝纤维化，或心脏纤维化。在一个特定实施方案中，纤维化是特发性肺纤维化。在另一种情况下，αvβ6介导的病症是急性肺损伤。在另一种情况下，αvβ6介导的病症是急性肾损伤。在某些实施方案中，向人受试者皮下施用药物组合物。在一些情况下，每周一次以40mg至64mg的剂量向人受试者施用药物组合物的抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段。在一些情况下，每周一次以40mg的剂量向人受试者施用药物组合物的抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段。在一些情况下，每周一次以48mg的剂量向人受试者施用药物组合物的抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段。在一些情况下，每周一次以56mg的剂量向人受试者施用药物组合物的抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段。在一些情况下，每周一次以64mg的剂量向人受试者施用药物组合物的抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段。在某些情况下，每周一次以0.5mg/kg至0.8mg/kg的剂量向人受试者施用药物组合物的抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段。在某些情况下，每周一次以0.5mg/kg的剂量向人受试者施用药物组合物的抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段。在某些情况下，每周一次以0.6mg/kg的剂量向人受试者施用药物组合物的抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段。在某些情况下，每周一次以0.7mg/kg的剂量向人受试者施用药物组合物的抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段。在其它情况下，每周一次以0.8mg/kg的剂量向人受试者施用药物组合物的抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段。

在另一方面中，本公开提供了治疗有需要的人受试者的αvβ6介导的疾病的方法，该αvβ6介导的疾病选自由以下组成的组：纤维化、急性肺损伤和急性肾损伤。该方法包括每周一次以40mg至64mg的剂量向人受试者皮下施用抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段。抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段包含VH和VL。VH包含VH-CDR，其中VH-CDR1包含SEQ ID NO:1或SEQ IDNO:11所示的氨基酸序列或由其组成；VH-CDR2包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列或由其组成；VH-CDR3包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列或由其组成；并且VL-CDR，其中VL-CDR1包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列或由其组成；VL-CDR2包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列或由其组成；并且VL-CDR3包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列或由其组成。在某些情况下，剂量是每周一次40mg。在某些情况下，剂量是每周一次48mg。在某些情况下，剂量是每周一次56mg。在某些情况下，剂量是每周一次64mg。在某些情况下，向人受试者施用至少4剂抗αvβ6抗体或其抗原结合片段。在其它情况下，向人受试者施用至少7剂抗αvβ6抗体或其抗原结合片段。在其它情况下，向人受试者施用至少10剂抗αvβ6抗体或其抗原结合片段。在一些情况下，VH由与SEQ ID NO:7至少80％、至少90％或100％同一的序列组成，并且VL由与SEQ ID NO:8至少80％、至少90％或100％同一的序列组成。在一些情况下，抗αvβ6抗体包含免疫球蛋白重链和免疫球蛋白轻链，其中该重链由与SEQ ID NO:9至少80％、至少90％或100％同一的序列组成，并且该轻链由与SEQ ID NO:10至少80％、至少90％或100％同一的序列组成。在某些情况下，该病症是纤维化。在特定实施方案中，纤维化是肺纤维化、肾纤维化、肝纤维化，或心脏纤维化。在一个特定实施方案中，纤维化是特发性肺纤维化。在另一种情况下，该病症是急性肺损伤。在另一种情况下，该病症是急性肾损伤。

在另一方面中，本公开的特征在于包含本文所述药物组合物的无菌制剂的针筒或泵，其中该针筒或泵适于以40mg、48mg、56mg或64mg的固定剂量皮下施用抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段。在某些情况下，针筒或泵包含0.5mL至5.0mL的本文所述药物组合物的无菌制剂。在某些情况下，针筒或泵包含0.5mL至1.0mL的本文所述药物组合物的无菌制剂。在一个特定实施方案中，本公开的特征在于一种针筒或泵，该针筒或泵包含0.8ml的70mg/ml制剂，该制剂包含抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段。在一个特定实施方案中，本公开的特征在于一种针筒或泵，该针筒或泵包含0.8ml的制剂，该制剂包含56mg的固定剂量的抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段。在某些情况下，泵是LVSC泵。

在另一方面中，本发明的特征在于一种针筒或泵，该针筒或泵包括抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段的无菌制剂。该针筒或泵适于以40mg、48mg、56mg或64mg的固定剂量皮下施用抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段。抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段包含VH和VL。VH-CDR包含由SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列组成的VH-CDR1；由SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列组成的VH-CDR2；以及由SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列组成的VH-CDR3。VL-CDR包含由SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列组成的VL-CDR1；由SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列组成的VL-CDR2；以及由SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列组成的VL-CDR3。在某些情况下，VH由与SEQ ID NO:7至少80％、至少90％或100％同一的序列组成，并且VL由与SEQ ID NO:8至少80％、至少90％或100％同一的序列组成。在一些情况下，抗αvβ6抗体包含免疫球蛋白重链和免疫球蛋白轻链，其中该重链由与SEQ ID NO:9至少80％、至少90％或100％同一的序列组成，并且该轻链由与SEQ ID NO:10至少80％、至少90％或100％同一的序列组成。

在另一方面中，本公开的特征在于一种组合治疗方案，该组合治疗方案包含本文所述的药物组合物和吡非尼酮(prifenidone)。

在另一方面中，本公开的特征在于一种组合治疗方案，该组合治疗方案包含本文所述的药物组合物和尼达尼布(nintedanib)。

除非另外定义，否则本文所用的所有技术和科学术语均具有与由本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的相同的含义。虽然与本文中所述的那些方法和材料相似或相等的方法和材料可用于实践或测试本发明，但是以下描述示例性方法和材料。本文提到的所有公布、专利申请、专利和其它参考文献通过引用整体并入。在出现矛盾的情况下，以本申请包括定义为准。材料、方法和实施例仅具有说明性而非意图具有限制性。

从以下具体实施方式和权利要求书中，本发明的其它特征和优点将显而易见。

附图说明

图1A是描述通过尺寸排除色谱法(SEC)测定的具有不同赋形剂的150g/L STX-100制剂的％总聚集的图表。

图1B是示出每毫升具有不同赋形剂的150g/L STX-100制剂的总亚可见颗粒的柱状图。对于测试的每种制剂，T＝0被描绘为左栏，并且T＝4周被描绘为右栏。

图1C是示出了具有不同赋形剂的150g/L STX-100制剂在环境温度下的粘度的柱状图。

图2是示出pH-精氨酸筛选研究的结果的柱状图。对于测试的每种制剂，T＝0表示为左栏，并且T＝40℃下1个月被描绘为右栏。

图3是示出在25℃(顶部)下和在40℃(底部)下GSH对STX-100制剂的聚集的影响的图表。STX-100制剂包含150mg/ml的STX-100、20mM柠檬酸盐/柠檬酸、150mM精氨酸盐酸盐、5mM甲硫氨酸、0.05％PS80并且pH为5.5，且不含GSH或含0.4mM GSH。

图4提供了图表，描述了在25℃和40℃下有或没有有或没有GSH(0.4mM)的SB4(

一种依那西普生物仿制药

)制剂(50mg/ml的SB4；10mM的磷酸钠；140mM的NaCl；1％的蔗糖，pH 6.2)的HMW物质的百分比。

图5提供了图表，描绘了在25℃和40℃下有或没有GSH(0.4mM)的抗αvβ5整联蛋白抗体(STX200)制剂(50mg/ml抗体；20mM组氨酸；5％山梨糖醇；0.05％PS80，pH 6.5)的HMW物质的百分比。

具体实施方式

本申请提供具有抗αvβ6抗体及其αvβ6结合片段的药物组合物和剂量方案，以及它们在疾病治疗中的用途，该疾病诸如但不限于纤维化、急性肺损伤、急性肾损伤和癌症。

αvβ6

αvβ6是在上皮细胞上表达的整合素。它可以经由与精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(“RGD”)基序的直接相互作用与几种配体结合，该配体包括纤连蛋白、玻连蛋白、腱生蛋白(cytotactin)、固生蛋白(tenascin)，以及潜伏期相关肽-1和潜伏期相关肽-3(LAP1和LAP3)—TGF-β1的潜在前体形式的N末端278个氨基酸。TGF-β细胞因子被合成为潜在复合物，该潜在复合物具有N末端LAP，该N末端LAP与成熟的活性C末端TGF-β细胞因子非共价缔合。潜在的TGF-β复合物不能与其同源受体结合，因此在转化成活性形式之前没有生物学活性。作为潜在复合物的构象变化的结果，αvβ6与LAP1或LAP3的结合导致TGF-β1和TGF-β3的潜在前体形式的活化，从而使得TGF-β与其受体结合。因此，αvβ6的表达上调可导致TGF-β的局部激活，这继而激活下游事件的级联反应。TGF-β1细胞因子是调节细胞增殖、分化和免疫应答的多效性生长因子。

人整联蛋白αv(UniProtKB-P06756(ITAV_HUMAN))的氨基酸序列示出如下(带下划线的30个氨基酸信号肽序列)：

成熟的αv蛋白对应于SEQ ID NO：12的氨基酸31-1048。

人整合蛋白β6(UniProtKB-P18564(ITB6_HUMAN))的氨基酸序列提供如下(21个氨基酸信号肽序列是加下划线的)：

成熟的β6蛋白对应于SEQ ID NO:13的氨基酸22-788。

本文所述的抗体可以特异性结合具有在SEQ ID NO:12的位置31-1048中所示的氨基酸序列和在SEQ ID NO:13的位置22-788中所示的氨基酸序列的αvβ6蛋白。在一些实施方案中，本文描述的抗体可以特异性结合具有在SEQ ID NO:13的位置22-788中所示的氨基酸序列的β6蛋白。

抗αvβ6抗体

在一些实施方案中，用于本文所述的组合物和方法中的抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段包含被称为“STX-100”的抗体的三个重链可变结构域互补决定区(CDR)。在一些实施方案中，抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段包含STX-100的三个轻链可变结构域CDR。在其它实施方案中，抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段包含STX-100的三个重链可变结构域CDR和三个轻链可变结构域CDR。CDR可以基于本领域已知的任何CDR定义，例如Kabat、Chothia、来自Abysis的Chothia、增强型Chothia/AbM的定义，或基于接触定义。下表1中提供了STX-100的示例性CDR序列(根据Kabat)。

表1：STX-100的Kabat CDR的序列

结构域	CDR
		VH CDR1	RYVMS(SEQ ID NO:1)
VH CDR2	SISSGGRMYYPDTVKG(SEQ ID NO:2)
		VH CDR3	GSIYDGYYVFPY(SEQ ID NO:3)
VL CDR1	SASSSVSSSYLY(SEQ ID NO:4)
		VL CDR2	STSNLAS(SEQ ID NO:5)
VL CDR3	HQWSTYPPT(SEQ ID NO:6)

在一些方面中，抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段包含：VH CDR1，该VH CDR1包含SEQID NO:1或GFTFSRYVMS(SEQ ID NO:11)所示的氨基酸序列或由其组成；VH CDR2，该VH CDR2包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列或由其组成；以及VH CDR3，该VH CDR3包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列或由其组成。在一些实施方案中，抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段包含VLCDR1，该VL CDR1包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列或由其组成；VL CDR2，该VL CDR2包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列或由其组成；以及VL CDR3，该VL CDR3包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列或由其组成。

在某些方面中，抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段包含CDR，该CDR包含SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列。在某些方面中，抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段包含CDR，该CDR包含SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ IDNO:6所示的氨基酸序列。在某些方面中，抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段包含由SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列组成的CDR。在某些方面，抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段包含由SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ IDNO:6所示的氨基酸序列组成的CDR。

STX-100是与整联蛋白αvβ6特异性结合的人源化人IgG1/人κ单克隆抗体。

STX-100的重链可变结构域(VH)包含以下氨基酸序列(加粗的VH CDR(Kabat定义))或由其组成：

STX-100的轻链可变结构域(VL)包含以下氨基酸序列(加粗的VL CDR(Kabat定义))或由其组成：

在某些实施方案中，抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段包含VH，该VH包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列或由其组成。在一些实施方案中，抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段选择性地结合αvβ6，并且包含VH结构域，该VH结构域与STX-100的VH结构域的氨基酸序列(SEQ IDNO:7)至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多同一，或与SEQ ID NO:7相差至少1个至5个氨基酸残基，但少于40个、30个、20个、15个或10个残基。在一些实施方案中，这些抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段阻断αvβ6与其配体，潜伏期相关肽(LAP)的结合，如通过阻断配体与纯化的hsαvβ6或表达β6的细胞的结合所确定的。在一些实施方案中，这些抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段具有这些特性中的一种或多种(例如，一种、两种、三种、四种)：(i)以高亲和力与αvβ6特异性结合；(ii)抑制αvβ6与LAP、纤连蛋白、玻连蛋白或固生蛋白的结合，其中IC50值低于10D5抗体的IC50值(WO 99/07405)；(iii)阻断或抑制TGF-β的活化；(iv)与β6亚基特异性结合；以及(v)在免疫染色程序(诸如石蜡包埋组织的免疫染色)中识别αvβ6。

在某些实施方案中，抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段包含VL，该VL包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列或由其组成。在一些实施方案中，抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段选择性地结合αvβ6，并且包含VL结构域，该VL结构域与STX-100的VL结构域的氨基酸序列(SEQ IDNO:8)至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多同一，或与SEQ ID NO:8相差至少1个至5个氨基酸残基，但少于40个、30个、20个、15个或10个残基。在一些实施方案中，这些抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段阻断αvβ6与其配体，潜伏期相关肽(LAP)的结合，如通过阻断配体与纯化的hsαvβ6或表达β6的细胞的结合所确定的。在一些实施方案中，这些抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段具有这些特性中的一种或多种(例如，一种、两种、三种、四种)：(i)以高亲和力与αvβ6特异性结合；(ii)抑制αvβ6与LAP、纤连蛋白、玻连蛋白或固生蛋白的结合，其中IC50值低于10D5抗体的IC50值(WO 99/07405)；(iii)阻断或抑制TGF-β的活化；(iv)与β6亚基特异性结合；以及(v)在免疫染色程序(诸如石蜡包埋组织的免疫染色)中识别αvβ6。

在一些实施方案中，抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段包含具有SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列的VH和具有SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列的VL。在一些实施方案中，抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段选择性地结合αvβ6，并且包含(i)VH结构域，该VH结构域与STX-100的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:7)至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多同一，以及(ii)VL结构域，该VL结构域与STX-100的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:8)至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多同一；或与SEQ ID NO:7和/或SEQ ID NO:8相差至少1至5个氨基酸残基，但少于40个、30个、20个、15个或10个残基。在一些实施方案中，这些抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段阻断αvβ6与其配体，潜伏期相关肽(LAP)的结合，如通过阻断配体与纯化的hsαvβ6或表达β6的细胞的结合所确定的。在一些实施方案中，这些抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段具有这些特性中的一种或多种(例如，一种、两种、三种、四种)：(i)以高亲和力与αvβ6特异性结合；(ii)抑制αvβ6与LAP、纤连蛋白、玻连蛋白或固生蛋白的结合，其中IC50值低于10D5抗体的IC50值(WO 99/07405)；(iii)阻断或抑制TGF-β的活化；(iv)与β6亚基特异性结合；以及(v)在免疫染色程序(诸如石蜡包埋组织的免疫染色)中识别αvβ6。

由下面列出的成熟重链(SEQ ID NO:9)和成熟轻链(SEQ ID NO:10)组成的抗体被称为“STX-100”或“BG00011”或“BG11”。STX-100是IgG1/κ抗体。

成熟的STX-100重链(HC)[H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3是加粗的；恒定区是带下划线的；N-连接的糖基化位点是加粗并加下划线的]

成熟的STX-100轻链(LC)[L-CDR1、L-CDR2和L-CDR3是加粗的；恒定区是带下划线的]

在某些实施方案中，抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段包含HC，该HC具有SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段选择性地结合αvβ6，并且包含HC，该HC与SEQ ID NO:9的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多同一，或与SEQ ID NO:9相差至少1个至5个氨基酸残基，但少于40个、30个、20个、15个或10个残基。在某些实施方案中，抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段包含SEQ ID NO:9所示的重链，区别在于在重链恒定区中有1个至5个氨基酸取代。在一些实施方案中，这些抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段阻断αvβ6与其配体，潜伏期相关肽(LAP)的结合，如通过阻断配体与纯化的hsαvβ6或表达β6的细胞的结合所确定的。在一些实施方案中，这些抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段具有这些特性中的一种或多种(例如，一种、两种、三种、四种)：(i)以高亲和力与αvβ6特异性结合；(ii)抑制αvβ6与LAP、纤连蛋白、玻连蛋白或固生蛋白的结合，其中IC50值低于10D5抗体的IC50值(WO99/07405)；(iii)阻断或抑制TGF-β的活化；(iv)与β6亚基特异性结合；以及(v)在免疫染色程序(诸如石蜡包埋组织的免疫染色)中识别αvβ6。

在某些实施方案中，抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段包含LC，该LC具有SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段选择性地结合αvβ6，并且包含LC，该LC与SEQ ID NO:10的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多同一，或与SEQ ID NO:10相差至少1个至5个氨基酸残基，但少于40个、30个、20个、15个或10个残基。在某些实施方案中，抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段包含SEQ ID NO:10所示的轻链，区别在于在轻链恒定区中有1个至5个氨基酸取代。在一些实施方案中，这些抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段阻断αvβ6与其配体，潜伏期相关肽(LAP)的结合，如通过阻断配体与纯化的hsαvβ6或表达β6的细胞的结合所确定的。在一些实施方案中，这些抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段具有这些特性中的一种或多种(例如，一种、两种、三种、四种)：(i)以高亲和力与αvβ6特异性结合；(ii)抑制αvβ6与LAP、纤连蛋白、玻连蛋白或固生蛋白的结合，其中IC50值低于10D5抗体的IC50值(WO 99/07405)；(iii)阻断或抑制TGF-β的活化；(iv)与β6亚基特异性结合；以及(v)在免疫染色程序(诸如石蜡包埋组织的免疫染色)中识别αvβ6。

在某些实施方案中，抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段包含具有SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列的HC和具有SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列的LC。在一些实施方案中，抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段选择性地结合人αvβ6，并且包含(i)HC，该HC与SEQ ID NO:9的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多同一，或与SEQ ID NO:9相差至少1个至5个氨基酸残基，但少于40个、30个、20个、15个或10个残基；以及(ii)LC，该LC与SEQ ID NO:10的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多同一，或与SEQID NO:10相差至少1个至5个氨基酸残基，但少于40个、30个、20个、15个或10个残基。在一些实施方案中，这些抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段阻断αvβ6与其配体，潜伏期相关肽(LAP)的结合，如通过阻断配体与纯化的hsαvβ6或表达β6的细胞的结合所确定的。在一些实施方案中，这些抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段具有这些特性中的一种或多种(例如，一种、两种、三种、四种)：(i)以高亲和力与αvβ6特异性结合；(ii)抑制αvβ6与LAP、纤连蛋白、玻连蛋白或固生蛋白的结合，其中IC50值低于10D5抗体的IC50值(WO 99/07405)；(iii)阻断或抑制TGF-β的活化；(iv)与β6亚基特异性结合；以及(v)在免疫染色程序(诸如石蜡包埋组织的免疫染色)中识别αvβ6。

在某些实施方案中，抗αvβ6抗体是IgG抗体。在特定实施方案中，抗αvβ6抗体具有选自例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgD和IgE的重链恒定区。在一个实施方案中，抗αvβ6抗体是人IgG1同种型。在另一个实施方案中，抗αvβ6抗体是人IgG2同种型。在另一个实施方案中，抗αvβ6抗体是人IgG3同种型。在另一个实施方案中，抗αvβ6抗体是人IgG4同种型。在另外的实施方案中，抗体具有选自例如人κ或人λ轻链的轻链恒定区。在某些实施方案中，抗αvβ6抗体是人IgG1/人κ抗体。在一些情况下，重链恒定区是人恒定区或人恒定区的经修饰形式。在某些情况下，人类恒定区可包括至少1个且至多2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个，11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个或20个取代。在一个特定实施方案中，经修饰的人Fc区是经修饰的人IgG1 Fc区。在一些情况下，抗αvβ6抗体的恒定区通过一个或多个氨基酸残基的突变而被修饰，以赋予期望的功能性质(例如，改变的效应子功能或半衰期、减少的糖基化)。例如，N-连接的糖基化位点可以被取代以防止或减少Fc区(例如，人IgG1 Fc区)的N-连接的糖基化。

在一些实施方案中，抗αvβ6抗体是全长(整个)抗体或基本上全长。该蛋白质可包括至少一条，优选两条完整的重链，以及至少一条，优选两条完整的轻链。在一些实施方案中，抗αvβ6抗体是αvβ6结合片段。在一些情况下，αvβ6结合片段是Fab、Fab'、F(ab')2、Facb、Fv、单链Fv(scFv)、sc(Fv)2，或双抗体。

可以例如通过以下方式来制得抗体(诸如STX-100)或其αvβ6-结合片段：制备和表达编码该氨基酸序列的合成基因，或使人种系基因突变以提供编码该氨基酸序列的基因。此外，可以例如使用以下方法中的一种或多种来产生该抗体和其它抗αvβ6抗体。

产生抗体的方法

抗αvβ6抗体或αvβ6结合片段可在细菌或真核细胞中产生。一些抗体(例如，Fab)可以在细菌细胞(例如，大肠杆菌细胞)中产生。抗体也可以在真核细胞，诸如转化的细胞系(例如，CHO、293E、COS)中产生。此外，抗体(例如，scFv)可以在酵母细胞(诸如毕赤酵母)(参见例如Powers等人，J Immunol Methods.251:123-35(2001))、汉逊酵母属或酵母属中表达。为了产生感兴趣的抗体，构建编码抗体的多核苷酸，将该多核苷酸引入表达载体中，然后在合适的宿主细胞中表达。普通技术人员将容易想到编码包含本文所述的αvβ6抗体的VH和/或VL、HC和/或LC的抗αvβ6抗体的多核苷酸。标准分子生物学技术用于制备重组表达载体、转染宿主细胞、选择转化体、培养宿主细胞，并回收抗体。

如果要在细菌细胞(例如，大肠杆菌)中表达抗αvβ6抗体或αvβ6结合片段，则表达载体应具有允许载体在细菌细胞中扩增的特性。此外，当大肠杆菌(诸如JM109、DH5α、HB101或XL1-Blue)用作宿主时，载体必须具有可允许在大肠杆菌中高效表达的启动子，例如lacZ启动子(Ward等人，341:544-546(1989))、araB启动子(Better等人，Science,240:1041-1043(1988))或T7启动子。此类载体的示例包括例如M13系列载体、pUC系列载体、pBR322、pBluescript、pCR-Script、pGEX-5X-1(Pharmacia)、“QIAexpress***”(QIAGEN)、pEGFP和pET(当使用该表达载体，宿主优选是表达T7 RNA聚合酶的BL21)。表达载体可包含用于抗体分泌的信号序列。为了产生进入大肠杆菌的周质，可以将pelB信号序列(Lei等人，J.Bacteriol.,169:4379(1987))用作用于抗体分泌的信号序列。对于细菌表达，可以使用氯化钙方法或电穿孔方法将表达载体引入细菌细胞中。

如果要在动物细胞(诸如CHO、COS和NIH3T3细胞)中表达抗体，则表达载体包含在这些细胞中表达所必需的启动子，例如SV40启动子(Mulligan等人，Nature,277:108(1979))、MMLV-LTR启动子、EF1α启动子(Mizushima等人，Nucleic Acids Res.,18:5322(1990))，或CMV启动子。除了编码免疫球蛋白或其结构域的核酸序列以外，重组表达载体还可带有附加序列，诸如调控载体在宿主细胞中复制的序列(例如，复制起点)和可选择标记基因。可选择标记基因有助于对已引入载体的宿主细胞进行选择(参见例如美国专利号4,399,216、4,634,665和5,179,017)。例如，通常，可选择标记基因在已引入载体的宿主细胞上赋予对诸如G418、潮霉素或甲氨蝶呤等药物的抗性。具有可选择标记的载体的示例包括pMAM、pDR2、pBK-RSV、pBK-CMV、pOPRSV和pOP13。

在一个实施方案中，在哺乳动物细胞中产生抗体。用于表达抗体的示例性哺乳动物宿主细胞包括中国仓鼠卵巢(CHO细胞)(包括dhfr^-CHO细胞，描述于Urlaub和Chasin(1980)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:4216-4220中，与DHFR可选择标记一起使用，例如如在Kaufman和Sharp(1982)Mol.Biol.159:601-621中所述)、人胚胎肾293细胞(例如，293、293E、293T)、COS细胞、NIH3T3细胞、淋巴细胞系(例如，NS0骨髓瘤细胞和SP2细胞)，以及来自转基因动物(例如，转基因哺乳动物)的细胞。举例来说，该细胞是乳腺上皮细胞。

在用于抗体表达的示例性***中，通过磷酸钙介导的转染将编码抗αvβ6抗体(例如，STX-100)的抗体重链和抗体轻链的重组表达载体引入dhfr^-CHO细胞中。在重组表达载体内，抗体重链和轻链基因各自可操作地连接至增强子/启动子调控元件(例如，来源于SV40、CMV、腺病毒等，如CMV增强子/AdMLP启动子调控元件或SV40增强子/AdMLP启动子调控元件)以便驱动高水平的基因转录。重组表达载体也带有DHFR基因，该DHFR基因允许使用甲氨蝶呤选择/扩增来选择已用载体转染的CHO细胞。培养所选择的转化株宿主细胞以便允许表达抗体重链和轻链并且从培养基中回收该抗体。

抗体还可由转基因动物来产生。例如，美国专利号5,849,992描述了在转基因哺乳动物的乳腺中表达抗体的方法。构建一种转基因，该转基因包括乳特异性启动子和编码感兴趣的抗体的核酸，以及用于分泌的信号序列。由此类转基因哺乳动物的雌性产生的乳包括分泌于其中的感兴趣的抗体。抗体可从乳中纯化，或对于一些应用来说，直接使用。还提供了包含本文所述的核酸中的一种或多种的动物。

可以从宿主细胞的内部或外部(例如培养基)分离本公开的抗体，并纯化作为基本上纯的且均质的抗体。通常用于抗体纯化的分离和纯化方法可以用于抗体的分离和纯化，并且不限于任何特定方法。可以通过适当地选择和组合例如柱色谱、过滤、超滤、盐析、溶剂沉淀、溶剂提取、蒸馏、免疫沉淀、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、等电聚焦、透析和重结晶来分离和纯化抗体。色谱包括例如亲和色谱、离子交换色谱、疏水色谱、凝胶过滤、反相色谱和吸附色谱(Strategies for Protein Purification and Characterization:A LaboratoryCourse Manual.Ed Daniel R.Marshak等人，Cold Spring Harbor Laboratory Press,1996)。可以使用液相色谱法(诸如HPLC和FPLC)进行色谱法。用于亲和色谱的柱包括蛋白A柱和蛋白G柱。使用蛋白A柱的柱的示例包括Hyper D,POROS和Sepharose FF(GEHealthcare Biosciences)。本公开还包括使用这些纯化方法高度纯化的抗体。

抗αvβ6抗体组合物

本公开还提供了组合物(例如，药物组合物)，该组合物包含本文所述的抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段。例如，抗αvβ6抗体组合物包含抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段，该抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段包含免疫球蛋白重链可变结构域(VH)和免疫球蛋白轻链可变结构域(VL)，其中该VH包含STX-100的H-CDR并且该VL包含STX-100的L-CDR。在某些情况下，重链CDR(H-CDR)包含SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列或由其组成；并且轻链CDR(L-CDR)包含SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列或由其组成。在某些情况下，重链CDR(H-CDR)包含SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:2和SEQ IDNO:3所示的氨基酸序列或由其组成；并且轻链CDR(L-CDR)包含SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列或由其组成。在一些实施方案中，抗αvβ6抗体组合物包含抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段，该抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段包含(i)VH，该VH包含与SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一的氨基酸序列或由其组成；以及(ii)VL，该VL包含与SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一的氨基酸序列或由其组成。在某些实施方案中，抗αvβ6抗体组合物包含抗αvβ6抗体，该抗αvβ6抗体包含(i)重链，该重链包含与SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一的氨基酸序列或由其组成；以及(ii)轻链，该轻链包含与SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一的氨基酸序列或由其组成。在一些实施方案中，抗αvβ6抗体选择性地与αvβ6结合。在一些实施方案中，这些抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段阻断αvβ6与其配体，潜伏期相关肽(LAP)的结合，如通过阻断配体与纯化的hsαvβ6或表达β6的细胞的结合所确定的。在一些实施方案中，这些抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段具有这些特性中的一种或多种(例如，一种、两种、三种、四种)：(i)以高亲和力与αvβ6特异性结合；(ii)抑制αvβ6与LAP、纤连蛋白、玻连蛋白或固生蛋白的结合，其中IC50值低于10D5抗体的IC50值(WO 99/07405)；(iii)阻断或抑制TGF-β的活化；(iv)与β6亚基特异性结合；以及(v)在免疫染色程序(诸如石蜡包埋组织的免疫染色)中识别αvβ6。

在某些实施方案中，这些组合物是高浓度抗αvβ6抗体组合物。“高浓度抗αvβ6抗体组合物”是指包含浓度大于100mg/ml且小于300mg/ml的抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段的组合物。在某些情况下，抗αvβ6抗体组合物包含浓度为50mg/ml至250mg/ml的抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段。在某些情况下，抗αvβ6抗体组合物包含浓度为50mg/ml至225mg/ml的抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段。在其它情况下，抗αvβ6抗体组合物包含浓度为75mg/ml至225mg/ml的抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段。在某些情况下，抗αvβ6抗体组合物包含浓度为50mg/ml至200mg/ml的抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段。在其它情况下，抗αvβ6抗体组合物包含浓度为75mg/ml至165mg/ml的抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段。在其它情况下，抗αvβ6抗体组合物包含浓度为100mg/ml至225mg/ml的抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段。在其它情况下，抗αvβ6抗体组合物包含浓度为125mg/ml至225mg/ml的抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段。在其它情况下，抗αvβ6抗体组合物包含浓度为125mg/ml至175mg/ml的抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段。在某些情况下，抗αvβ6抗体组合物包含浓度为240mg/ml的抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段。在某些情况下，抗αvβ6抗体组合物包含浓度为225mg/ml的抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段。在某些情况下，抗αvβ6抗体组合物包含浓度为200mg/ml的抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段。在某些情况下，抗αvβ6抗体组合物包含浓度为175mg/ml的抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段。在某些情况下，抗αvβ6抗体组合物包含浓度为150mg/ml的抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段。在其它情况下，抗αvβ6抗体组合物包含浓度为125mg/ml的抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段。在一些情况下，抗αvβ6抗体组合物包含浓度为100mg/ml的抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段。

包含本文所述的抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段的组合物(例如，药物组合物)可以是多种形式中的任何一种。这些形式包括例如液体溶液(例如，可注射和可输注的溶液)、分散液或悬浮液。优选形式可取决于意图施用模式和治疗应用。在某些实施方案中，本文所述的药物组合物为无菌可注射或可输注溶液的形式。

可通过以下方式制备无菌可注射溶液：将所需量的本文所述的抗体与一种成分或成分的组合一起掺加，然后进行过滤灭菌。通常，通过将本文所述的抗体掺加到含有基础分散介质和所需其它成分的无菌媒介物中来制备分散液。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，示例性制备方法是真空干燥和冷冻干燥，该方法从其先前无菌过滤溶液中得到本文所述抗体和任何另外的期望成分的粉末。可例如通过使用诸如卵磷脂等包衣、通过在分散液的情况下维持所需粒度以及通过使用表面活性剂来维持溶液的适当流动性。

抗αvβ6抗体组合物(例如，药物组合物)可以另外包含一种或多种赋形剂。

在一个实施方案中，与没有该赋形剂的药物组合物中的抗体的聚集和/或粘度相比，该赋形剂减少/降低了该组合物中的抗体的聚集和/或粘度。在某些实施方案中，此类赋形剂是精氨酸。在一种情况下，赋形剂是L-精氨酸盐酸盐。精氨酸(例如，L-精氨酸盐酸盐)可以以40mM至260mM、50mM至250mM、50mM至200mM、50mM至150mM、50mM至125mM、50mM至100mM、75mM至250mM、75mM至200mM、75mM至150mM、或75mM至100mM的浓度包含在组合物中。在某些实施方案中，精氨酸(例如，Arg.HCl)以50mM至250mM的浓度存在于组合物中。在其它实施方案中，精氨酸(例如，Arg.HCl)以50mM至200mM的浓度存在于组合物中。在某些情况下，精氨酸(例如，精氨酸盐酸盐)可以以80mM、100mM、120mM、125mM、130mM、135mM、140mM、145mM、150mM、220mM或260mM的浓度包含在组合物中。在特定情况下，精氨酸(例如，精氨酸盐酸盐)可以以100mM的浓度包含在组合物中。在另一种特定情况下，精氨酸(例如，精氨酸盐酸盐)可以以150mM的浓度包含在组合物中。

有时，在室温或更高温度(例如，40℃)下孵育后，含有精氨酸的溶液会形成可见的颗粒。蔗糖的添加可以减少或防止可见颗粒的形成。此外，蔗糖可以减少亚可见颗粒的计数。在一些实施方案中，抗αvβ6抗体组合物包含浓度为0.05％至5％、0.05％至4％、0.05％至3％、1％至5％、1％至4％、1％至3％、2％至5％、2％至4％、或2％至3％的蔗糖。在某些实施方案中，抗αvβ6抗体组合物包含浓度为0.5％、1％、1.5％、2％、2.5％、3％、3.5％、4％、4.5％、或5％的蔗糖。在一个特定实施方案中，抗αvβ6抗体组合物包含浓度为3％的蔗糖。在另一个特定实施方案中，抗αvβ6抗体组合物包含浓度为1％的蔗糖。

在一个实施方案中，抗αvβ6抗体组合物包含甲硫氨酸。在一种情况下，甲硫氨酸以0.5mM至25mM的浓度包含在组合物中。在另一种情况下，甲硫氨酸以1mM至10mM的浓度包含在组合物中。在另一种情况下，甲硫氨酸以3mM至8mM的浓度包含在组合物中。在一种情况下，甲硫氨酸以1mM、2mM、5mM、10mM、15mM、20mM或25mM的浓度包含在组合物中。在特定情况下，甲硫氨酸以10mM的浓度包含在组合物中。在另一种特定情况下，甲硫氨酸以5mM的浓度包含在组合物中。

抗体产品制造是一个复杂的过程，该过程可能涉及多个步骤，诸如原料药和散装制剂、过滤、运输、合并、填充、冻干、检查、包装和贮存。在这些步骤中，可使抗体经受多种不同形式的胁迫，例如搅动、温度、曝光和氧化。这些类型的胁迫可导致抗体变性和聚集，这会损害产品质量，甚至可导致生产批次的损失。搅动是抗体治疗剂在制造工艺的过程中经受的常见物理胁迫之一。搅动发生在例如混合、超滤/渗滤、泵送、运输和填充期间。为了保护抗体组合物免受搅动引起的胁迫，该组合物可包含聚山梨酯。在某些实施方案中，组合物包含浓度浓度为0.01％至0.5％、0.01％至0.1％、0.01％至0.09％、0.01％至0.08％、0.01％至0.07％、0.01％至0.06％、0.01％至0.05％、0.01％至0.04％、或0.01％至0.03％的聚山梨酯-80。在某些实施方案中，该组合物包含浓度为0.02％至0.08％的聚山梨酯-80。在一些实施方案中，该组合物包含浓度为0.01％、0.02％、0.03％、0.04％、0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％或0.1％的聚山梨酯-80。在一个特定实施方案中，该组合物包含浓度为0.05％的聚山梨酯-80。

任何抗体组合物都受益于提供良好缓冲能力的缓冲液。在某些实施方案中，抗体组合物包含柠檬酸钠和柠檬酸作为缓冲剂。在某些实施方案中，该组合物包含浓度为5mM至50mM、5mM至40mM、5mM至35mM、5mM至30mM、5mM至25mM、10mM至50mM、10mM至40mM、10mM至30mM、10mM至25mM、15mM至50mM、15mM至40mM、15mM至30mM、或15mM至25mM的柠檬酸钠和柠檬酸。在某些实施方案中，该组合物包含浓度为5mM至35mM的柠檬酸钠和柠檬酸。在某些实施方案中，该组合物包含浓度为10mM至30mM的柠檬酸钠和柠檬酸。在一些实施方案中，该组合物包含浓度为5mM、10mM、15mM、20mM、25mM、30mM或35mM的柠檬酸钠和柠檬酸。在一个特定实施方案中，该组合物包含浓度为20mM的柠檬酸钠和柠檬酸。

抗体组合物的pH可为5.0至6.5。在某些情况下，抗体组合物的pH可为5.2至6.2。在某些情况下，抗体组合物的pH为5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4，或6.5。在一个特定实施方案中，抗体组合物的pH为5.5。

在一些情况下，抗αvβ6抗体组合物包含L-精氨酸盐酸盐(例如，150mM)和甲硫氨酸(例如，5mM)。在某些情况下，这些组合物的pH为5.5。

在一些情况下，抗αvβ6抗体组合物包含L-精氨酸盐酸盐(例如，150mM)、甲硫氨酸(例如，5mM)和缓冲液(例如，20mM的柠檬酸钠和柠檬酸)。在某些情况下，这些组合物的pH为5.5。

在一些情况下，抗αvβ6抗体组合物包含L-精氨酸盐酸盐(例如，150mM)、甲硫氨酸(例如，5mM)和PS80(例如，0.05％)。在某些情况下，这些组合物的pH为5.5。

在某些实施方案中，抗αvβ6抗体组合物包含L-精氨酸盐酸盐(例如，150mM)、甲硫氨酸(例如，5mM)、柠檬酸钠和柠檬酸(例如，20mM)和PS80(例如，0.05％)，并且pH为5.2至6.2。在一些实施方案中，抗αvβ6组合物包含L-精氨酸盐酸盐(例如，150mM)、甲硫氨酸(例如，5mM)、柠檬酸钠和柠檬酸(例如，20mM)和PS80(例如，0.05％)，并且pH为5.5。在某些实施方案中，抗αvβ6组合物包含L-精氨酸盐酸盐(例如，150mM)、甲硫氨酸(例如，5mM)、柠檬酸钠和柠檬酸(例如，20mM)、PS80(例如，0.05％)和蔗糖(至多3％)，并且pH为5.2至6.2。在一些实施方案中，抗αvβ6组合物包含L-精氨酸盐酸盐、甲硫氨酸、柠檬酸钠和柠檬酸、PS80，并且pH为5.5。在所有此类实施方案中，抗αvβ6抗体以100mg/ml至165mg/ml的浓度存在。在一种情况下，抗αvβ6抗体以150mg/ml的浓度存在。在一种情况下，抗αvβ6抗体以100mg/ml的浓度存在。

在一些情况下，抗αvβ6组合物包含浓度为0.02mM至2mM(例如，0.02mM、0.03mM、0.05mM、0.06mM、0.08mM、0.1mM、0.2mM、0.3mM、0.4mM、0.5mM、0.6mM、0.7mM、0.8mM、0.9mM、1.0mM、1.1mM、1.2mM、1.3mM、1.4mM、1.5mM、1.6mM、1.7mM、1.8mM、1.9mM或2.0mM)的含硫醇的抗氧化剂(例如，还原型谷胱甘肽(GSH)、氧化型谷胱甘肽(GSSG)、GSH+GSSG、半胱氨酸、胱氨酸、半胱氨酸+胱氨酸)。此类含硫醇的抗氧化剂可以裂解不利的或错误桥接的二硫键并促进形成有利的或适当桥接的二硫键。这将导致抗体或其片段的天然确认的稳定，并减慢聚集速率。这些分子的抗氧化性质可能会使导致聚集的氧化过程减慢。在一些情况下，组合物包含浓度为0.4mM的GSH。在一些情况下，组合物包含浓度为0.2mM的GSSG。在一些情况下，该组合物包含浓度为0.4mM的GSH和浓度为0.2mM的GSSG。在一些情况下，该组合物包含浓度为0.4mM的半胱氨酸。在一些情况下，组合物包含浓度为0.2mM的胱氨酸。在一些情况下，组合物包含浓度为0.4mM的半胱氨酸和浓度为0.2mM的胱氨酸。

在某些实施方案中，抗αvβ6抗体组合物包含L-精氨酸盐酸盐(例如，150mM)、甲硫氨酸(例如，5mM)、柠檬酸钠和柠檬酸(例如，20mM)、含硫醇的抗氧化剂(诸如GSH、GSSG、GSH和GSSG、半胱氨酸、胱氨酸、或半胱氨酸和胱氨酸)(例如，0.02mM至2mM)和PS80(例如，0.05％)，并且pH为5.2至6.2。在一些实施方案中，抗αvβ6抗体组合物包含L-精氨酸盐酸盐(例如，150mM)、甲硫氨酸(例如，5mM)、柠檬酸钠和柠檬酸(例如，20mM)、含硫醇的抗氧化剂(诸如GSH、GSSG、GSH和GSSG、半胱氨酸、胱氨酸、或半胱氨酸和胱氨酸)(例如，0.02mM至2mM)和PS80(例如，0.05％)，并且pH为5.5。在某些实施方案中，抗αvβ6抗体组合物包含L-精氨酸盐酸盐(例如，150mM)、甲硫氨酸(例如，5mM)、柠檬酸钠和柠檬酸(例如，20mM)、PS80(例如，0.05％)、含硫醇的抗氧化剂(诸如GSH、GSSG、GSH和GSSG、半胱氨酸、胱氨酸、或半胱氨酸和胱氨酸)(例如，0.02mM至2mM)和蔗糖(至多3％)，并且pH为5.2至6.2。在一些实施方案中，抗αvβ6抗体组合物包含L-精氨酸盐酸盐、甲硫氨酸、组氨酸、PS80和含硫醇的抗氧化剂(诸如GSH、GSSG、GSH和GSSG、半胱氨酸、胱氨酸、或半胱氨酸和胱氨酸)，并且pH为5.5。在所有此类实施方案中，抗αvβ6抗体以100mg/ml至165mg/ml的浓度存在。在一种情况下，抗αvβ6抗体以150mg/ml的浓度存在。在一种情况下，抗αvβ6抗体以100mg/ml的浓度存在。

在某些实施方案中，抗αvβ6抗体组合物包含L-精氨酸盐酸盐(例如，150mM)、柠檬酸钠缓冲液(柠檬酸钠和柠檬酸)(例如，20mM)、含硫醇的抗氧化剂(诸如GSH、GSSG、GSH和GSSG、半胱氨酸、胱氨酸、或半胱氨酸和胱氨酸)(例如，0.02mM至2mM)和PS80(例如，0.05％)，并且pH为5.2至6.2。在一些实施方案中，抗αvβ6抗体组合物包含L-精氨酸盐酸盐(例如，150mM)、柠檬酸钠和柠檬酸(例如，20mM)、含硫醇的抗氧化剂(诸如GSH、GSSG、GSH和GSSG、半胱氨酸、胱氨酸、或半胱氨酸和胱氨酸)(例如，0.02mM至2mM)和PS80(例如，0.05％)，并且pH为5.5。在某些实施方案中，抗αvβ6抗体组合物包含L-精氨酸盐酸盐(例如，150mM)、柠檬酸钠和柠檬酸(例如，20mM)、PS80(例如，0.05％)、含硫醇的抗氧化剂(诸如GSH、GSSG、GSH和GSSG、半胱氨酸、胱氨酸、或半胱氨酸和胱氨酸)(例如，0.02mM至2mM)和蔗糖(至多3％)，并且pH为5.2至6.2。在一些实施方案中，抗αvβ6抗体组合物包含L-精氨酸盐酸盐、组氨酸、PS80和含硫醇的抗氧化剂(诸如GSH、GSSG、GSH和GSSG、半胱氨酸、胱氨酸、或半胱氨酸和胱氨酸)，并且pH为5.5。在所有此类实施方案中，抗αvβ6抗体以100mg/ml至165mg/ml的浓度存在。在一种情况下，抗αvβ6抗体以150mg/ml的浓度存在。在一种情况下，抗αvβ6抗体以100mg/ml的浓度存在。

在某些实施方案中，该组合物(例如，药物组合物)包含浓度为75mg/ml至250mg/ml的抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段、浓度为50mM至200mM的精氨酸(例如，L-精氨酸盐酸盐)、浓度为1mM至10mM的甲硫氨酸、浓度为0.01％至0.1％的聚山梨酯-80、浓度为10mM至30mM的柠檬酸钠和柠檬酸，以及浓度为0％至3％的蔗糖。该组合物的pH为5.2至6.0。在某些实施方案中，组合物的抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段包含VH和VL，该VH和VL包含STX-100的CDR(例如，SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5，以及SEQ ID NO:6)。在某些实施方案中，组合物的抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段包含VH和VL，该VH和VL分别包含SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8。在一些实施方案中，组合物的抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段包含重链和轻链，该重链和轻链分别包含SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10。在一个实施方案中，该组合物的pH为5.5，并且该组合物包含浓度为150mg/ml的STX-100或其STX-100结合片段、浓度为150mM的L-精氨酸盐酸盐、浓度为5mM的甲硫氨酸、浓度为0.05％的聚山梨酯-80，以及浓度为20mM的柠檬酸钠和柠檬酸。在某些实施方案中，该组合物还包含浓度为0.02mM至2mM的含硫醇的抗氧化剂(例如，GSH、GSSG、GSH+GSSG、半胱氨酸、胱氨酸、半胱氨酸+胱氨酸)。在一些实施方案中，组合物还包含浓度为0.01％至3％的蔗糖。在某些实施方案中，组合物的抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段包含VH和VL，该VH和VL包含STX-100的CDR(例如，SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ IDNO:4、SEQ ID NO:5，以及SEQ ID NO:6)。在某些实施方案中，组合物的抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段包含VH和VL，该VH和VL分别包含SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8。在一些实施方案中，组合物的抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段包含重链和轻链，该重链和轻链分别包含SEQ IDNO:9和SEQ ID NO:10。

在一个实施方案中，该组合物的pH为5.5，并且该组合物包含浓度为150mg/ml的STX-100或其STX-100结合片段、浓度为150mM的L-精氨酸盐酸盐、浓度为0.02mM至2mM的含硫醇的抗氧化剂(例如，GSH、GSSG、GSH+GSSG、半胱氨酸、胱氨酸、半胱氨酸+胱氨酸)、浓度为0.05％的聚山梨酯-80，以及浓度为20mM的柠檬酸钠和柠檬酸。在一个实施方案中，含硫醇的抗氧化剂是浓度为0.4mM的GSH。在一个实施方案中，含硫醇的抗氧化剂是浓度为0.4mM的GSH和浓度为0.2mM的GSSG。在另一个实施方案中，含硫醇的抗氧化剂是浓度为0.4mM的半胱氨酸。在另一个实施方案中，含硫醇的抗氧化剂是浓度为0.4mM的半胱氨酸和浓度为0.2mM的胱氨酸。

投配

可以将上述的抗αvβ6抗体(例如，STX-100)或其αvβ6-结合片段以不同剂量施用于受试者，例如，人受试者。可以将抗αvβ6抗体(例如，STX-100)或其αvβ6结合片段作为固定剂量(即，不依赖于患者的体重)或以mg/kg剂量(即，基于受试者的体重而变化的剂量)施用。如本文所用的剂量单位形式或“固定剂量”是指适合于作为单一剂量用于待治疗受试者的实体离散单位；每个单位含有预定量的活性化合物，该预定量的活性化合物经计算以缔合需要的药物载体并且任选地缔合其它药剂来产生期望的治疗效应。可以给予单次或多次剂量。治疗可以持续数天、数周、数月，或甚至数年。

在某些实施方案中，为了治疗成人受试者的本文所述的适应症，抗αvβ6抗体(例如，STX-100)或其αvβ6结合片段的剂量为每周一次40mg至64mg的固定剂量。在一个实施方案中，为了治疗成人受试者的本文所述的适应症，抗αvβ6抗体(例如，STX-100)或其αvβ6结合片段的剂量为每周一次40mg的固定剂量。在另一个实施方案中，抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段的剂量是每周一次48mg的固定剂量。在另一个实施方案中，抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段的剂量是每周一次56mg的固定剂量。在另一个实施方案中，抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段的剂量是每周一次64mg的固定剂量。

在某些实施方案中，为了治疗成人受试者的本文所述的适应症，抗αvβ6抗体(例如，STX-100)或其αvβ6结合片段的剂量为0.3mg/kg至1.0mg/kg的mg/kg剂量。在一个实施方案中，为了治疗成人受试者的本文所述的适应症，抗αvβ6抗体(例如，STX-100)或其αvβ6结合片段的剂量为0.5mg/kg至0.8mg/kg的mg/kg剂量。在一个实施方案中，为了治疗成人受试者的本文所述的适应症，抗αvβ6抗体(例如，STX-100)或其αvβ6结合片段的剂量为0.5mg/kg的mg/kg剂量。在另一个实施方案中，为了治疗成人受试者的本文所述的适应症，抗αvβ6抗体(例如，STX-100)或其αvβ6结合片段的剂量为0.6mg/kg的mg/kg剂量。在另一个实施方案中，为了治疗成人受试者的本文所述的适应症，抗αvβ6抗体(例如，STX-100)或其αvβ6结合片段的剂量为0.7mg/kg的mg/kg剂量。在又一个实施方案中，为了治疗成人受试者的本文所述的适应症，抗αvβ6抗体(例如，STX-100)或其αvβ6结合片段的剂量为0.8mg/kg的mg/kg剂量。

在某些情况下，将抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段与治疗有效量的本领域公认的用于IPF的治疗组合施用。

可以与本发明的抗体组合使用的示例性的本领域公认的治疗选项包括：皮质类固醇(***)；环磷酰胺

硫唑嘌呤

霉酚酸酯

N-乙酰半胱氨酸(NAC)；尼达尼布

吡非尼酮

质子泵抑制剂(Prilosec

等)；或补充氧气疗法。

在一个实施方案中，本发明的抗体与吡非尼酮或尼达尼布组合。在某些情况下，按如下方式向受试者施用吡非尼酮：

与本发明的抗体的组合。在某些情况下，向受试者施用治疗有效量的每天两次150mg的固定剂量的尼达尼布与本发明的抗体的组合。

在某些情况下，将抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段与抑制***生长因子(CTGF)的活性的抗体(诸如但不限于全人单克隆抗体Pamrevlumab)组合施用。

在某些情况下，将抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段与治疗有效量的选择性自分泌运动因子(autotaxin)抑制剂(例如，GLPG1690)组合施用。

在某些情况下，将抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段与治疗有效量的GBT-440组合施用。

药物组合物可包含“治疗有效量”的本文所述药剂。可以基于所施用药剂的效应或药剂的组合效应(如果使用多于一种药剂的话)来确定此类有效量。药剂的治疗有效量也可以根据诸如以下因素变化：个体的疾病病况、年龄、性别和体重，以及化合物在个体体内引发期望应答的能力。治疗有效量也是其中治疗上有益的效应超过组合物的任何毒性或有害效应的量。在某些实施方案中，抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段的治疗有效量为40mg至64mg。在一个实施方案中，抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段的治疗有效量为40mg。在另一个实施方案中，抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段的治疗有效量为48mg。在另一个实施方案中，抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段的治疗有效量为56mg。在另一个实施方案中，抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段的治疗有效量为64mg。

抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段的施用途径和/或方式可以针对个体受试者进行定制。对于许多应用来说，施用途径是如下之一：皮下注射(SC)、静脉内注射或输注(IV)、腹腔施用(IP)，或肌内注射。在一个实施方案中，施用途径为皮下。在另一个实施方案中，施用途径为静脉内。

可以用医疗装置施用包含单独的抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段或抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段与一种或多种非αvβ6抗体药剂的组合的药物组合物。该装置可以设计为具有诸如便携性、室温贮存和易用性等特征，因此其可以在紧急情况下使用，例如由未经培训的受试者或现场的急救人员使用，并移至医疗设施和其它医疗设备。该装置可包括例如用于贮存包含抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段的药物制剂的一个或多个壳体，并且可被配置为递送一种或多种单位剂量的抗αvβ6抗体或其它药剂。

例如，药物组合物可用无针皮下注射装置，诸如US 5,399,163；5,383,851；5,312,335；5,064,413；4,941,880；4,790,824；或4,596,556中所公开的装置来施用。熟知的植入物和模块的示例包括：US 4,487,603，其公开以受控速率施配药物的可植入微输注泵；US4,486,194，其公开经由皮肤施用药物的治疗装置；US 4,447,233，其公开以精确输注速率递送药物的药物输注泵；US 4,447,224，其公开用于连续药物递送的变速流可植入输注设备；US 4,439,196，其公开具有多腔室的渗透药物递送***；以及US 4,475,196，其公开渗透药物递送***。许多其它装置、植入物、递送***和模块也是已知的。

在一个实施方案中，用针筒将抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段施用于人受试者。在另一个实施方案中，使用用于皮下递送的泵将抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段施用于人受试者。在一些实施方案中，用自动注射器将抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段施用于人受试者。在其它实施方案中，用皮下大容量注射器将抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段施用于人受试者。

本公开提供了泵或针筒，该泵或针筒包含抗αvβ6抗体(例如，STX-100)或其αvβ6结合片段的无菌制剂。针筒或泵可适于皮下施用抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段。在一些情况下，针筒或泵递送一种或多种固定剂量(例如，40mg、48mg、56mg、64mg)的抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段。

本公开还提供了一种泵、针筒或注射器(例如，自动注射器、皮下大容量注射器)，该泵、针筒或注射器包含上述药物组合物的无菌制剂。注射器或泵可适于皮下施用包含抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段的药物组合物。在一些情况下，针筒或泵递送一种或多种固定剂量(例如，40mg、48mg、56mg、64mg)的抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段。

治疗方法

本公开的抗体可用于治疗，包括预防αvβ6介导的疾病。例如，这些抗体可用于通过阻断TGF-β的活化或阻断β6与任何其它配体(诸如纤连蛋白、玻连蛋白和固生蛋白)的结合来治疗纤维化(例如，肺纤维化、肾纤维化、肝纤维化、心脏纤维化)、急性肺损伤、急性肾损伤、阿尔波特氏综合征(Alport’s Syndrome)、牛皮癣、硬皮病，以及肺、肝或肾的硬化。该方法的新颖性包括：(1)它阻断TGF-β的活化而不是TGF-β与其受体的结合，(2)它可以局部而不是全身地抑制TGF-β(即，在αvβ6上调的位点处)，以及(3)它抑制αvβ6与配体的结合。

除了纤维化疾病或病症之外，本公开的抗体还可用于治疗癌症或癌症转移(包括肿瘤生长和侵袭)，特别是上皮癌。上皮癌的一个子集是鳞状细胞癌，例如头颈癌、口腔癌、乳腺癌、肺癌、***癌、***、鼻咽癌、结肠癌、胰腺癌和卵巢癌。

在本发明的另外的实施方案中，可以将结合αvβ6的抗体或其片段用于治疗患有癌或有发展出癌的风险的人的治疗方案。本发明的此类方法可用于治疗癌症和相关事件，包括肿瘤生长、转移和血管生成。特别适合此类方法的是这样的疾病或癌症，这些疾病或癌症表征为患有该疾病并且对治疗有反应的哺乳动物的组织或细胞中的αvβ6表达水平升高，该治疗靶向表达升高水平的αvβ6的组织或细胞并消除这些组织或细胞。尤其可通过这些方法治疗的疾病包括上皮组织转移癌(即，转移癌和/或腺癌)，包括乳腺组织、卵巢组织、***组织、肝组织、肺组织、胰腺组织、结肠组织、头颈部组织(例如，口腔组织、咽部组织、舌部和喉部组织)、子宫内膜、子宫颈、胃和脾脏的转移癌。特别适合通过本发明的这些方法治疗的是子宫内膜癌、胰腺癌、结肠癌(例如，结直肠癌)、子***、肺癌和乳腺癌(包括***的原位导管癌(DCIS)和小叶原位癌(LCIS))。

以下是实施本发明的实施例。不应将其解释为以任何方式限制本发明的范围。

实施例

这些实施例部分地涉及用于STX-100的稳定高浓度(例如，100mg/ml或更高)液体制剂的开发。

实施例1：配制前评估

在初始的配制前评估期间，进行加速稳定性研究，以探索适用于STX-100的高浓度液体制剂的pH、缓冲液和赋形剂组分。使用包含pH为5.0的10mM柠檬酸钠/柠檬酸、150mM精氨酸盐酸盐(精氨酸-HCl)的制剂基质作为对照以用于比较。对于赋形剂筛选，测试了氨基酸(如甘氨酸、赖氨酸、精氨酸-HCl和甲硫氨酸)、糖(如山梨醇、海藻糖、甘露醇、蔗糖)和缓冲体系(诸如柠檬酸盐和乙酸盐)。还评估了在4.4至5.7的范围内的pH。

在40℃下孵育4周以执行对制剂的加速稳定性评估。监测以下质量属性：可见微粒和透明度、％高分子量物质(经由SEC)、总亚可见微粒(经由MFI)、浊度(经由OD340)、pH、片段化(经由GXII)、％总酸性同种型(经由iCIEF)，以及在T0时的粘度。将最大权重分配给关键质量属性(CQA)，如聚集水平和颗粒形成，并将该CQA用于制剂选择中。选择具有最小量的聚集水平和颗粒形成的制剂来进行进一步评估。

数据表明，与其它相比，含精氨酸和含海藻糖的制剂最稳定(表2；图1A至图1C；以及图2)。

表2.配制前缓冲液-赋形剂筛选研究的结果

NT：未测出

附加的25mM甲硫氨酸的存在赋予了含精氨酸的制剂更大的抗聚集性(图1A)。

在pH 4.4下，含有75mM至300mM Arg-HCl的制剂显示出凝胶形成，而在pH 5.2至5.7范围内，在加速条件下未观察到凝胶形成(图2)。如在图1A和图2中看到的，在整个缓冲液-赋形剂筛选和pH-精氨酸筛选中，在这些制剂中观察到的％总聚集增加也较低。在150mM的ArgHCl下，在pH 5.2与pH 5.7之间的聚集没有显著差异(图2)，表明该pH范围最可能包含使聚集最小化所需的设定点。

实施例2：中长期稳定性研究和制剂选择

基于实施例1中的预配制结果，选择了以下五种液体制剂和对应的容器封塞(container-closure,CC)以进行长期(24个月)稳定性研究：

1)批号18169-62：在pH 5.3的20mM柠檬酸钠/柠檬酸、150mM精氨酸盐酸盐(Arg.HCl)、0.05％PS-80中的150mg/mL STX-100(1mL装在3mL的Schott小瓶中)

2)批号18169-64：在pH 5.3的20mM柠檬酸钠/柠檬酸、150mM精氨酸盐酸盐(Arg.HCl)、0.05％PS-80中的150mg/mL STX-100(1mL装在BD Hypak预填充针筒中，27G针)

3)批号18169-66：在pH 5.3的20mM柠檬酸钠/柠檬酸、150mM精氨酸盐酸盐(Arg.HCl)、25mM甲硫氨酸、0.05％PS-80中的150mg/mL STX-100(1mL装在BD Hypak预填充针筒中，27G针)

4)批号18169-67：在pH 5.3的20mM柠檬酸钠/柠檬酸、200mM海藻糖、0.05％PS-80中的150mg/mL STX-100(1mL装在BD Hypak预填充针筒中，27G针)

5)批号18169-72：在pH 5.3的20mM柠檬酸钠/柠檬酸、150mM精氨酸盐酸盐(Arg.HCl)、25mM甲硫氨酸、0.05％PS-80中的250mg/mL STX-100(1mL装在BD Hypak预填充针筒中，27G针)

聚集数据：稳定性数据表明，以上列出的所有五种制剂在5℃下贮存12个月的整个过程中均显示出较低的聚集倾向，其中在所有制剂中％总聚集仅增加了0.2-0.3％(表3)。

表3.使用SEC-UPLC测量的长期％总聚集数据

数据还表明，预填充针筒(18169-64)和小瓶(18169-62)中贮存的制剂的聚集水平没有显著差异。

亚可见微粒(SVP)数据：尽管聚集数据有望获得稳定的液体制剂，但经由微流成像、MFI仍显示出一些对高亚可见微粒(SVP)的指示(表4、表5和表6)。

表4.亚可见微粒总量/mL(MFI)

表5.亚可见微粒(>10um)/mL(MFI)

表6.亚可见微粒(>25um)/mL(MFI)

然而，这些SVP被认为主要来自实验室规模的UF/DF过程、预填充贮存、运输到测试实验室期间的STX-100原料药(DS)的处理和加工，以及测试方法可能存在的问题。SVP>10um(通过MFI更灵敏地拾取)的生长速率在任何含精氨酸-HCl的制剂中都没有显示出显著的不稳定性，含有200mM海藻糖的18169-67除外。还观察到与小瓶中的制剂相比，预填充针筒中的SVP计数也更高。这表明该测试方法还确定了在此类针筒中通常存在的大量硅油微滴。经由基于光遮蔽的HIAC方法(根据USP-788)进行的SVP分析未表明在所需的5℃的贮存条件下的不稳定(表7和表8)。

表7.亚可见颗粒(>10um)/mL(HIAC)

表8.亚可见微粒(>25um)/mL(HIAC)

氧化数据：过去对STX-100样本进行的强制氧化分析显示，第二重链CDR中包含的Met-55与Fc区中的两个其它甲硫氨酸(Met-255和Met-431)一起具有氧化倾向。结构活性关系研究表明，这些残基中的氧化不会导致与抗原的结合活性的任何变化。在这项研究中，还研究了这些残基中的氧化是否会由于存在作为可能的氧化剂的聚山梨酯-80而随着时间的流逝导致不稳定性。在通过LysC切割产生对应肽所含的Met残基(肽H2中的Met-55，肽H15中的Met-255，以及肽H30中的Met-431)后，使用LCMS方法测定％氧化。总体而言，尽管制剂中甲硫氨酸作为赋形剂的存在确实抑制了该氧化反应，但每个位点的氧化没有显著增加。(表9A和9B)。

表9A.在5℃下贮存的制剂的氧化分析

表9B.在25℃下贮存的制剂的氧化分析

可见微粒数据：在整个5℃下12个月贮存期内外观(微粒)观察未显示任何制剂的可见微粒的任何明显增加(表10A)。可见微粒确实会在长期贮存中在25℃时(表10B)，并且可能与该温度下的大SVP(>25um)的增加有关。

表10A.在5℃下对可见微粒的长期评定

*在最初的报告显示一些微粒后，对样品进行了重新检查。对一式三份的小瓶/针筒的内部检查未发现任何可见的微粒。因此，最初的观察被认为是由于处理错误或人为错误引起的。

表10B.在25℃下对可见微粒的长期评定

Milestone测定：在t＝0个月、6个月、12个月时测试的其它稳定性测定，诸如CE-SDS(非还原的)、icIEF、重量渗透摩尔浓度、粘度和效力在本文中被分类为milestone测定。该数据没有显示出在5℃下在12个月内样本的任何明显降解(表11A至11E)。

表11A.在t＝0时执行Milestone测定

表11B.在t＝6个月时对在5℃下贮存的制剂执行的Milestone测定

表11C.在t＝6个月时对在25℃下贮存的制剂执行的Milestone测定

表11D.在t＝12个月时对在5℃下贮存的制剂执行的Milestone测定

表11E.在t＝12个月时对在25℃下贮存的制剂执行的Milestone测定

颜色、透明度和pH数据：在5℃下的整个1年期间，除18169-72外，所有制剂中的肉眼观察到的颜色均保持低于BY3(BY4-BY5或BY3-BY4)。18169-72的颜色在BY3-BY4之间长达9个月，并且在12个月时被观察到为BY3-BY2。在5℃下的整个贮存过程中，所有制剂的透明度均保持低于30NTU(6-18NTU或18-30NTU)。

结论：发现制剂18169-62、18169-64、18169-66和18169-72在一年内稳定在可接受的极限内。最关键属性的趋势：这段时间内的％总聚集物和亚可见微粒(HIAC)表明，制剂18169-64和18169-66均适用于预填充的针筒(PFS)药品(DP)。

实施例3：制剂粘度的表征

使用全因子实验设计(DOE)研究评估了pH和甲硫氨酸浓度对STX-100制剂在高浓度下的粘度的影响。以下制剂参数有所不同：

1)pH：5.0、5.5、6.0

2)甲硫氨酸：0mM、10mM、25mM

3)蛋白质浓度：150mg/mL、220mg/mL、240mg/mL和260mg/mL

核心制剂缓冲液为：20mM柠檬酸/柠檬酸钠、150mM精氨酸HCl、0.05％PS80。

数据表明STX-100制剂的粘度不会受到包含20mM柠檬酸钠/柠檬酸、150mM精氨酸-HCl、0.05％PS-80的核心制剂周围的pH或甲硫氨酸浓度的显著影响。5℃和25℃两者下的数据未显示出两个制剂参数中每个参数的p值均低于0.05。对粘度有显著影响的唯一溶液参数是蛋白质浓度，该蛋白质浓度预期在所考察的范围内。这些结果表明，pH和赋形剂水平可以在该设计空间内变化，而不会不利地影响制剂的粘度。

实施例4：药品括号法研究

进行这项研究是为了检验将甲硫氨酸含量从5mM增加到10mM，以及将聚山梨酯-80水平从0.05％降低到0.03％对长期稳定性属性的影响。

制备以下两种制剂并将其填充到代表性的预填充针筒中(0.8mL装在BD HypakSTW 27G PFS中)。

制剂A：150mg/mL STX-100、pH 5.5的20mM柠檬酸钠/柠檬酸、150mM精氨酸-HCl、10mM甲硫氨酸、0.05％聚山梨酯-80。

制剂B：150mg/mL STX-100、pH 5.5的20mM柠檬酸钠/柠檬酸、150mM精氨酸-HCl、5mM甲硫氨酸、0.03％聚山梨酯-80。

基于％HMW和亚可见微粒的趋势，从在2-8℃下的长期稳定性得到的结果表现出同等的稳定性。还出于信息目的在25℃和40℃下收集了稳定性数据。该制剂在其氧化物质含量方面似乎没有显著差异。

因此，数据显示该制剂在聚山梨酯-80和甲硫氨酸浓度方面具有灵活性。

实施例5：过程稳定性研究

这项研究评定不同的聚山梨酯-80表面活性剂水平对小型DS容器(PC瓶或袋)中的STX-100以及预填充针筒(PFS)中的代表性DP的稳定性的影响。制剂受到两种不同的胁迫：

a)多个冻融循环(1个、3个和5个冻融循环)，

b)振荡引起的搅拌胁迫(在环境条件下以650rpm的速度进行轨道振荡72小时)，以及

c)代表性的环境保持时间(仅选择PS-80水平)。

在含有pH 5.5的20mM柠檬酸钠/柠檬酸、150mM精氨酸-HCl、5mM甲硫氨酸的150mg/mL STX-100制剂中选择用于评估的不同PS-80水平为0％w/v、0.01％w/v、0.02％w/v、0.05％w/v、0.08％w/v、0.1％w/v。用于评估的容器封塞***是聚碳酸酯瓶(1mL装在5mL瓶中)、小DS袋(30mL容量，装5mL或15mL)、PFS针筒(带有柱塞(47165919)的BD Hypak47368319，在150mg/mL时装有0.8mL或0.3mL，或在40mg/mL时装有0.3mL)。

所检查的产品质量属性是：可见外观(微粒)、浊度(A340)、％总聚集体(SEC)、蛋白质浓度(SoloVPE法)和亚可见微粒(MFI)

在150mg/mL STX-100的情况下目标药物产品填充量为0.8mL的结果表明，只要在制剂中存在0.01％的PS-80，在避光条件下在室温下以650rpm搅动STX-100针筒72小时对可见微粒的影响就极小。在0.02％PS80样本中观察到了一个粉尘状颗粒，但这似乎是环境因素。含有0-0.01％PS80的制剂中在搅拌后可溶聚集物仅增加0.05-0.1％，而在任何其它制剂中可溶聚集物均未观察到增加。浊度数据表明，除了具有0.1％PS80的制剂外，所有制剂的OD340均没有实质性增加，这表明相对较高水平的PS80有一些贡献。然而，SVP数据表明，只要存在PS80，就没有实质性的颗粒形成趋势。工艺研究结果表明，0.05％w/v是用于保护制剂免受冻融胁迫、搅动胁迫和工艺保持时间的影响的最佳聚山梨酯-80水平。用于产品开发目的的PS80水平的建议规格为0.05+/-0.025％w/v。

实施例6：制剂选择

根据以上所有研究，以下STX-100制剂在长期贮存(在2-8℃下1年)中在最坏情况的搅拌胁迫(650rpm持续72h)和最坏情况的冻融胁迫(5个冻融循环)显示出可接受的稳定性：150mg/mL STX-100、20mM柠檬酸钠/柠檬酸、150mM精氨酸-HCl、5mM甲硫氨酸、0.05％w/v聚山梨酯-80，pH 5.5。

根据稳定性属性的趋势，该制剂可确保代表性的预填充针筒产品在2-8℃下具有超过24个月的稳定性。

实施例7：包含含硫醇基的赋形剂的STX-100制剂的稳定性

如由在贮存期间高分子量物质的发展所确定的，向STX-100制剂中添加含硫醇基的赋形剂减少了聚集。

对照STX-100制剂具有150mg/mL STX-100、20mM柠檬酸盐/柠檬酸、150mM L-精氨酸盐酸盐、5mM甲硫氨酸、0.05％聚山梨酯-80，pH 5.5。对照制剂掺有含硫醇基的赋形剂：GSH。将制剂在25℃和40℃下贮存。如图3所示，GSH的加入减少了贮存期间的聚集。

谷胱甘肽的添加对另一种抗体STX200产生了负面影响，其中观察到了聚集的增加(图5)。STX 200是无糖基化的分子，在较高的温度下显示出较差的构象稳定性。因此，该分子的展开暴露了巯基，使其更易于与谷胱甘肽中的巯基交联并促进进一步的聚集。谷胱甘肽在25℃下对SB4(

一种依那西普生物仿制药

)的聚集动力学没有影响，但是在40℃下有助于更快聚集(图4)。

实施例8：STX-100制剂的稳定性数据

填充到针筒中的在pH 5.5的含有150mM Arg.HCL、5mM甲硫氨酸、0.05％PS80的20mM柠檬酸钠缓冲液中的50mg/mL和100mg/mL STX-100制剂(0.8mL/针筒)的稳定性研究数据支持当在2-8℃下贮存时36个月的稳定性。这是基于在2-8℃的长期贮存条件下的稳定性数据。参见下面的表12和表13。基于该药品数据，可以将36个月的稳定性分配给70mg/mL的制剂(0.8mL/针筒)，该制剂被选择递送56mg的剂量。

表12：在2-8℃下贮存在1mL注射器中的100mg/mL STX-100药品的稳定性数据

表13：在2-8℃下贮存在1mL针筒中的50mg/mL STX-100药品的稳定性数据

其它实施方案

虽然本发明已经结合其详细说明来描述，但是前述描述意图具有说明性而非限制本发明范围，其由附加权利要求范围来界定。其它方面、优势和修改在以下权利要求的范围内。

序列表

<110> 比奥根MA公司(BIOGEN MA INC.)

<120> 包含抗α(V)β(6)抗体的药物组合物和剂量方案

<130> 13751-0289WO1

<140> PCT/US2018/047502

<141> 2018-08-22

<150> 62/548,772

<151> 2017-08-22

<160> 13

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 来源

<223> /注释=“人工序列说明：合成

肽”

<400> 1

Arg Tyr Val Met Ser

1 5

<210> 2

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 来源

<223> /注释=“人工序列说明：合成

肽”

<400> 2

Ser Ile Ser Ser Gly Gly Arg Met Tyr Tyr Pro Asp Thr Val Lys Gly

1 5 10 15

<210> 3

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 来源

<223> /注释=“人工序列说明：合成

肽”

<400> 3

Gly Ser Ile Tyr Asp Gly Tyr Tyr Val Phe Pro Tyr

1 5 10

<210> 4

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 来源

<223> /注释=“人工序列说明：合成

肽”

<400> 4

Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Tyr

1 5 10

<210> 5

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 来源

<223> /注释=“人工序列说明：合成

肽”

<400> 5

Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser

1 5

<210> 6

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 来源

<223> /注释=“人工序列说明：合成

肽”

<400> 6

His Gln Trp Ser Thr Tyr Pro Pro Thr

1 5

<210> 7

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 来源

<223> /注释=“人工序列说明：合成

肽”

<400> 7

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr

20 25 30

Val Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Ser Ile Ser Ser Gly Gly Arg Met Tyr Tyr Pro Asp Thr Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Gly Ser Ile Tyr Asp Gly Tyr Tyr Val Phe Pro Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 8

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 来源

<223> /注释=“人工序列说明：合成

肽”

<400> 8

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser

20 25 30

Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Trp Ser Thr Tyr Pro

85 90 95

Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 9

<211> 449

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 来源

<223> /注释=“人工序列说明：合成

肽”

<400> 9

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr

20 25 30

Val Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Ser Ile Ser Ser Gly Gly Arg Met Tyr Tyr Pro Asp Thr Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Gly Ser Ile Tyr Asp Gly Tyr Tyr Val Phe Pro Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala

130 135 140

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

180 185 190

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys

195 200 205

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp

210 215 220

Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly

225 230 235 240

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile

245 250 255

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu

260 265 270

Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His

275 280 285

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg

290 295 300

Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys

305 310 315 320

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu

325 330 335

Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr

340 345 350

Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu

355 360 365

Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp

370 375 380

Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val

385 390 395 400

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp

405 410 415

Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His

420 425 430

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

435 440 445

Gly

<210> 10

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 来源

<223> /注释=“人工序列说明：合成

肽”

<400> 10

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser

20 25 30

Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Trp Ser Thr Tyr Pro

85 90 95

Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala

100 105 110

Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser

115 120 125

Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu

130 135 140

Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser

145 150 155 160

Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu

165 170 175

Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val

180 185 190

Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys

195 200 205

Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 11

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 来源

<223> /注释=“人工序列说明：合成

肽”

<400> 11

Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr Val Met Ser

1 5 10

<210> 12

<211> 1048

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 12

Met Ala Phe Pro Pro Arg Arg Arg Leu Arg Leu Gly Pro Arg Gly Leu

1 5 10 15

Pro Leu Leu Leu Ser Gly Leu Leu Leu Pro Leu Cys Arg Ala Phe Asn

20 25 30

Leu Asp Val Asp Ser Pro Ala Glu Tyr Ser Gly Pro Glu Gly Ser Tyr

35 40 45

Phe Gly Phe Ala Val Asp Phe Phe Val Pro Ser Ala Ser Ser Arg Met

50 55 60

Phe Leu Leu Val Gly Ala Pro Lys Ala Asn Thr Thr Gln Pro Gly Ile

65 70 75 80

Val Glu Gly Gly Gln Val Leu Lys Cys Asp Trp Ser Ser Thr Arg Arg

85 90 95

Cys Gln Pro Ile Glu Phe Asp Ala Thr Gly Asn Arg Asp Tyr Ala Lys

100 105 110

Asp Asp Pro Leu Glu Phe Lys Ser His Gln Trp Phe Gly Ala Ser Val

115 120 125

Arg Ser Lys Gln Asp Lys Ile Leu Ala Cys Ala Pro Leu Tyr His Trp

130 135 140

Arg Thr Glu Met Lys Gln Glu Arg Glu Pro Val Gly Thr Cys Phe Leu

145 150 155 160

Gln Asp Gly Thr Lys Thr Val Glu Tyr Ala Pro Cys Arg Ser Gln Asp

165 170 175

Ile Asp Ala Asp Gly Gln Gly Phe Cys Gln Gly Gly Phe Ser Ile Asp

180 185 190

Phe Thr Lys Ala Asp Arg Val Leu Leu Gly Gly Pro Gly Ser Phe Tyr

195 200 205

Trp Gln Gly Gln Leu Ile Ser Asp Gln Val Ala Glu Ile Val Ser Lys

210 215 220

Tyr Asp Pro Asn Val Tyr Ser Ile Lys Tyr Asn Asn Gln Leu Ala Thr

225 230 235 240

Arg Thr Ala Gln Ala Ile Phe Asp Asp Ser Tyr Leu Gly Tyr Ser Val

245 250 255

Ala Val Gly Asp Phe Asn Gly Asp Gly Ile Asp Asp Phe Val Ser Gly

260 265 270

Val Pro Arg Ala Ala Arg Thr Leu Gly Met Val Tyr Ile Tyr Asp Gly

275 280 285

Lys Asn Met Ser Ser Leu Tyr Asn Phe Thr Gly Glu Gln Met Ala Ala

290 295 300

Tyr Phe Gly Phe Ser Val Ala Ala Thr Asp Ile Asn Gly Asp Asp Tyr

305 310 315 320

Ala Asp Val Phe Ile Gly Ala Pro Leu Phe Met Asp Arg Gly Ser Asp

325 330 335

Gly Lys Leu Gln Glu Val Gly Gln Val Ser Val Ser Leu Gln Arg Ala

340 345 350

Ser Gly Asp Phe Gln Thr Thr Lys Leu Asn Gly Phe Glu Val Phe Ala

355 360 365

Arg Phe Gly Ser Ala Ile Ala Pro Leu Gly Asp Leu Asp Gln Asp Gly

370 375 380

Phe Asn Asp Ile Ala Ile Ala Ala Pro Tyr Gly Gly Glu Asp Lys Lys

385 390 395 400

Gly Ile Val Tyr Ile Phe Asn Gly Arg Ser Thr Gly Leu Asn Ala Val

405 410 415

Pro Ser Gln Ile Leu Glu Gly Gln Trp Ala Ala Arg Ser Met Pro Pro

420 425 430

Ser Phe Gly Tyr Ser Met Lys Gly Ala Thr Asp Ile Asp Lys Asn Gly

435 440 445

Tyr Pro Asp Leu Ile Val Gly Ala Phe Gly Val Asp Arg Ala Ile Leu

450 455 460

Tyr Arg Ala Arg Pro Val Ile Thr Val Asn Ala Gly Leu Glu Val Tyr

465 470 475 480

Pro Ser Ile Leu Asn Gln Asp Asn Lys Thr Cys Ser Leu Pro Gly Thr

485 490 495

Ala Leu Lys Val Ser Cys Phe Asn Val Arg Phe Cys Leu Lys Ala Asp

500 505 510

Gly Lys Gly Val Leu Pro Arg Lys Leu Asn Phe Gln Val Glu Leu Leu

515 520 525

Leu Asp Lys Leu Lys Gln Lys Gly Ala Ile Arg Arg Ala Leu Phe Leu

530 535 540

Tyr Ser Arg Ser Pro Ser His Ser Lys Asn Met Thr Ile Ser Arg Gly

545 550 555 560

Gly Leu Met Gln Cys Glu Glu Leu Ile Ala Tyr Leu Arg Asp Glu Ser

565 570 575

Glu Phe Arg Asp Lys Leu Thr Pro Ile Thr Ile Phe Met Glu Tyr Arg

580 585 590

Leu Asp Tyr Arg Thr Ala Ala Asp Thr Thr Gly Leu Gln Pro Ile Leu

595 600 605

Asn Gln Phe Thr Pro Ala Asn Ile Ser Arg Gln Ala His Ile Leu Leu

610 615 620

Asp Cys Gly Glu Asp Asn Val Cys Lys Pro Lys Leu Glu Val Ser Val

625 630 635 640

Asp Ser Asp Gln Lys Lys Ile Tyr Ile Gly Asp Asp Asn Pro Leu Thr

645 650 655

Leu Ile Val Lys Ala Gln Asn Gln Gly Glu Gly Ala Tyr Glu Ala Glu

660 665 670

Leu Ile Val Ser Ile Pro Leu Gln Ala Asp Phe Ile Gly Val Val Arg

675 680 685

Asn Asn Glu Ala Leu Ala Arg Leu Ser Cys Ala Phe Lys Thr Glu Asn

690 695 700

Gln Thr Arg Gln Val Val Cys Asp Leu Gly Asn Pro Met Lys Ala Gly

705 710 715 720

Thr Gln Leu Leu Ala Gly Leu Arg Phe Ser Val His Gln Gln Ser Glu

725 730 735

Met Asp Thr Ser Val Lys Phe Asp Leu Gln Ile Gln Ser Ser Asn Leu

740 745 750

Phe Asp Lys Val Ser Pro Val Val Ser His Lys Val Asp Leu Ala Val

755 760 765

Leu Ala Ala Val Glu Ile Arg Gly Val Ser Ser Pro Asp His Val Phe

770 775 780

Leu Pro Ile Pro Asn Trp Glu His Lys Glu Asn Pro Glu Thr Glu Glu

785 790 795 800

Asp Val Gly Pro Val Val Gln His Ile Tyr Glu Leu Arg Asn Asn Gly

805 810 815

Pro Ser Ser Phe Ser Lys Ala Met Leu His Leu Gln Trp Pro Tyr Lys

820 825 830

Tyr Asn Asn Asn Thr Leu Leu Tyr Ile Leu His Tyr Asp Ile Asp Gly

835 840 845

Pro Met Asn Cys Thr Ser Asp Met Glu Ile Asn Pro Leu Arg Ile Lys

850 855 860

Ile Ser Ser Leu Gln Thr Thr Glu Lys Asn Asp Thr Val Ala Gly Gln

865 870 875 880

Gly Glu Arg Asp His Leu Ile Thr Lys Arg Asp Leu Ala Leu Ser Glu

885 890 895

Gly Asp Ile His Thr Leu Gly Cys Gly Val Ala Gln Cys Leu Lys Ile

900 905 910

Val Cys Gln Val Gly Arg Leu Asp Arg Gly Lys Ser Ala Ile Leu Tyr

915 920 925

Val Lys Ser Leu Leu Trp Thr Glu Thr Phe Met Asn Lys Glu Asn Gln

930 935 940

Asn His Ser Tyr Ser Leu Lys Ser Ser Ala Ser Phe Asn Val Ile Glu

945 950 955 960

Phe Pro Tyr Lys Asn Leu Pro Ile Glu Asp Ile Thr Asn Ser Thr Leu

965 970 975

Val Thr Thr Asn Val Thr Trp Gly Ile Gln Pro Ala Pro Met Pro Val

980 985 990

Pro Val Trp Val Ile Ile Leu Ala Val Leu Ala Gly Leu Leu Leu Leu

995 1000 1005

Ala Val Leu Val Phe Val Met Tyr Arg Met Gly Phe Phe Lys Arg

1010 1015 1020

Val Arg Pro Pro Gln Glu Glu Gln Glu Arg Glu Gln Leu Gln Pro

1025 1030 1035

His Glu Asn Gly Glu Gly Asn Ser Glu Thr

1040 1045

<210> 13

<211> 788

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 13

Met Gly Ile Glu Leu Leu Cys Leu Phe Phe Leu Phe Leu Gly Arg Asn

1 5 10 15

Asp His Val Gln Gly Gly Cys Ala Leu Gly Gly Ala Glu Thr Cys Glu

20 25 30

Asp Cys Leu Leu Ile Gly Pro Gln Cys Ala Trp Cys Ala Gln Glu Asn

35 40 45

Phe Thr His Pro Ser Gly Val Gly Glu Arg Cys Asp Thr Pro Ala Asn

50 55 60

Leu Leu Ala Lys Gly Cys Gln Leu Asn Phe Ile Glu Asn Pro Val Ser

65 70 75 80

Gln Val Glu Ile Leu Lys Asn Lys Pro Leu Ser Val Gly Arg Gln Lys

85 90 95

Asn Ser Ser Asp Ile Val Gln Ile Ala Pro Gln Ser Leu Ile Leu Lys

100 105 110

Leu Arg Pro Gly Gly Ala Gln Thr Leu Gln Val His Val Arg Gln Thr

115 120 125

Glu Asp Tyr Pro Val Asp Leu Tyr Tyr Leu Met Asp Leu Ser Ala Ser

130 135 140

Met Asp Asp Asp Leu Asn Thr Ile Lys Glu Leu Gly Ser Arg Leu Ser

145 150 155 160

Lys Glu Met Ser Lys Leu Thr Ser Asn Phe Arg Leu Gly Phe Gly Ser

165 170 175

Phe Val Glu Lys Pro Val Ser Pro Phe Val Lys Thr Thr Pro Glu Glu

180 185 190

Ile Ala Asn Pro Cys Ser Ser Ile Pro Tyr Phe Cys Leu Pro Thr Phe

195 200 205

Gly Phe Lys His Ile Leu Pro Leu Thr Asn Asp Ala Glu Arg Phe Asn

210 215 220

Glu Ile Val Lys Asn Gln Lys Ile Ser Ala Asn Ile Asp Thr Pro Glu

225 230 235 240

Gly Gly Phe Asp Ala Ile Met Gln Ala Ala Val Cys Lys Glu Lys Ile

245 250 255

Gly Trp Arg Asn Asp Ser Leu His Leu Leu Val Phe Val Ser Asp Ala

260 265 270

Asp Ser His Phe Gly Met Asp Ser Lys Leu Ala Gly Ile Val Ile Pro

275 280 285

Asn Asp Gly Leu Cys His Leu Asp Ser Lys Asn Glu Tyr Ser Met Ser

290 295 300

Thr Val Leu Glu Tyr Pro Thr Ile Gly Gln Leu Ile Asp Lys Leu Val

305 310 315 320

Gln Asn Asn Val Leu Leu Ile Phe Ala Val Thr Gln Glu Gln Val His

325 330 335

Leu Tyr Glu Asn Tyr Ala Lys Leu Ile Pro Gly Ala Thr Val Gly Leu

340 345 350

Leu Gln Lys Asp Ser Gly Asn Ile Leu Gln Leu Ile Ile Ser Ala Tyr

355 360 365

Glu Glu Leu Arg Ser Glu Val Glu Leu Glu Val Leu Gly Asp Thr Glu

370 375 380

Gly Leu Asn Leu Ser Phe Thr Ala Ile Cys Asn Asn Gly Thr Leu Phe

385 390 395 400

Gln His Gln Lys Lys Cys Ser His Met Lys Val Gly Asp Thr Ala Ser

405 410 415

Phe Ser Val Thr Val Asn Ile Pro His Cys Glu Arg Arg Ser Arg His

420 425 430

Ile Ile Ile Lys Pro Val Gly Leu Gly Asp Ala Leu Glu Leu Leu Val

435 440 445

Ser Pro Glu Cys Asn Cys Asp Cys Gln Lys Glu Val Glu Val Asn Ser

450 455 460

Ser Lys Cys His His Gly Asn Gly Ser Phe Gln Cys Gly Val Cys Ala

465 470 475 480

Cys His Pro Gly His Met Gly Pro Arg Cys Glu Cys Gly Glu Asp Met

485 490 495

Leu Ser Thr Asp Ser Cys Lys Glu Ala Pro Asp His Pro Ser Cys Ser

500 505 510

Gly Arg Gly Asp Cys Tyr Cys Gly Gln Cys Ile Cys His Leu Ser Pro

515 520 525

Tyr Gly Asn Ile Tyr Gly Pro Tyr Cys Gln Cys Asp Asn Phe Ser Cys

530 535 540

Val Arg His Lys Gly Leu Leu Cys Gly Gly Asn Gly Asp Cys Asp Cys

545 550 555 560

Gly Glu Cys Val Cys Arg Ser Gly Trp Thr Gly Glu Tyr Cys Asn Cys

565 570 575

Thr Thr Ser Thr Asp Ser Cys Val Ser Glu Asp Gly Val Leu Cys Ser

580 585 590

Gly Arg Gly Asp Cys Val Cys Gly Lys Cys Val Cys Thr Asn Pro Gly

595 600 605

Ala Ser Gly Pro Thr Cys Glu Arg Cys Pro Thr Cys Gly Asp Pro Cys

610 615 620

Asn Ser Lys Arg Ser Cys Ile Glu Cys His Leu Ser Ala Ala Gly Gln

625 630 635 640

Ala Arg Glu Glu Cys Val Asp Lys Cys Lys Leu Ala Gly Ala Thr Ile

645 650 655

Ser Glu Glu Glu Asp Phe Ser Lys Asp Gly Ser Val Ser Cys Ser Leu

660 665 670

Gln Gly Glu Asn Glu Cys Leu Ile Thr Phe Leu Ile Thr Thr Asp Asn

675 680 685

Glu Gly Lys Thr Ile Ile His Ser Ile Asn Glu Lys Asp Cys Pro Lys

690 695 700

Pro Pro Asn Ile Pro Met Ile Met Leu Gly Val Ser Leu Ala Ile Leu

705 710 715 720

Leu Ile Gly Val Val Leu Leu Cys Ile Trp Lys Leu Leu Val Ser Phe

725 730 735

His Asp Arg Lys Glu Val Ala Lys Phe Glu Ala Glu Arg Ser Lys Ala

740 745 750

Lys Trp Gln Thr Gly Thr Asn Pro Leu Tyr Arg Gly Ser Thr Ser Thr

755 760 765

Phe Lys Asn Val Thr Tyr Lys His Arg Glu Lys Gln Lys Val Asp Leu

770 775 780

Ser Thr Asp Cys

785

Claims (71)

1.一种药物组合物，所述药物组合物包含抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段，以及精氨酸盐酸盐(Arg.HCl)，其中所述抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段包含免疫球蛋白重链可变结构域(VH)和免疫球蛋白轻链可变结构域(VL)，所述VH和所述VL分别包含：

(a)VH互补决定区(CDR)，其中

VH-CDR1由SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列组成；

VH-CDR2由SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列组成；并且

VH-CDR3由SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列组成；以及

(b)VL CDR，其中

VL-CDR1由SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列组成；

VL-CDR2由SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列组成；并且

VL-CDR3由SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列组成；并且

其中所述组合物的pH为5.2至5.7。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述组合物包含浓度为50mg/ml至200mg/ml的所述抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段。

3.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述组合物包含浓度为100mg/ml至175mg/ml的所述抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段。

4.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述组合物包含浓度为150mg/ml的所述抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的药物组合物，其中所述组合物包含浓度为50mM至250mM的Arg.HCl。

6.根据权利要求1至4中任一项所述的药物组合物，其中所述组合物包含浓度为100mM至200mM的Arg.HCl。

7.根据权利要求1至4中任一项所述的药物组合物，其中所述组合物包含浓度为150mM的Arg.HCl。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的药物组合物，其中所述组合物包含甲硫氨酸。

9.根据权利要求8所述的药物组合物，其中所述组合物包含浓度为0.5mM至30mM的甲硫氨酸。

10.根据权利要求8所述的药物组合物，其中所述组合物包含浓度为1mM至10mM的甲硫氨酸。

11.根据权利要求8所述的药物组合物，其中所述组合物包含浓度为5mM的甲硫氨酸。

12.根据权利要求1至11中任一项所述的药物组合物，其中所述组合物包含聚山梨酯-80(PS80)。

13.根据权利要求12所述的药物组合物，其中所述组合物包含浓度为0.01％至0.1％的PS80。

14.根据权利要求12所述的药物组合物，其中所述组合物包含浓度为0.03％至0.08％的PS80。

15.根据权利要求12所述的药物组合物，其中所述组合物包含浓度为0.05％的PS80。

16.根据权利要求1至15中任一项所述的药物组合物，其中所述组合物包含柠檬酸钠和柠檬酸。

17.根据权利要求16所述的药物组合物，其中所述组合物包含浓度为5mM至30mM的柠檬酸钠和柠檬酸。

18.根据权利要求16所述的药物组合物，其中所述组合物包含浓度为15mM至25mM的柠檬酸钠和柠檬酸。

19.根据权利要求16所述的药物组合物，其中所述组合物包含浓度为20mM的柠檬酸钠和柠檬酸。

20.根据权利要求1至19中任一项所述的药物组合物，其中所述组合物的pH为5.3至5.6。

21.根据权利要求1至19中任一项所述的药物组合物，其中所述组合物的pH为5.5。

22.根据权利要求1至21中任一项所述的药物组合物，其中所述组合物包含含硫醇的抗氧化剂。

23.根据权利要求22所述的药物组合物，其中所述含硫醇的抗氧化剂选自由以下组成的组：GSH、GSSG、GSH和GSSG的组合、胱氨酸、半胱氨酸，以及半胱氨酸和胱氨酸的组合。

24.根据权利要求22所述的药物组合物，其中所述含硫醇的抗氧化剂是GSH。

25.根据权利要求22所述的药物组合物，其中所述含硫醇的抗氧化剂是GSSG。

26.根据权利要求22所述的药物组合物，其中所述含硫醇的抗氧化剂是GSH和GSSG的组合。

27.根据权利要求22至26中任一项所述的药物组合物，其中所述含硫醇的抗氧化剂的浓度为0.02mM至2mM。

28.根据权利要求22至26中任一项所述的药物组合物，其中所述含硫醇的抗氧化剂的浓度为0.2mM。

29.根据权利要求22至26中任一项所述的药物组合物，其中所述含硫醇的抗氧化剂的浓度为0.4mM。

30.根据权利要求22至26中任一项所述的药物组合物，其中所述含硫醇的抗氧化剂的浓度为1mM。

31.根据权利要求26所述的药物组合物，其中所述GSH的浓度为0.4mM并且所述GSSG的浓度为0.2mM。

32.根据权利要求1所述的药物组合物，所述药物组合物包含：

浓度为125mg/ml至175mg/ml的所述抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段；

浓度为125mM至175mM的Arg.HCl；

浓度为1mM至10mM的甲硫氨酸；

浓度为15mM至25mM的柠檬酸钠和柠檬酸；以及

浓度为0.03％至0.08％的PS80，

其中所述组合物的pH为5.3至5.7。

33.根据权利要求1所述的药物组合物，所述药物组合物包含：

浓度为125mg/ml至175mg/ml的所述抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段；

浓度为125mM至175mM的Arg.HCl；

浓度为1mM至10mM的甲硫氨酸；

浓度为15mM至25mM的柠檬酸钠和柠檬酸；

浓度为0.02mM至2mM的含硫醇的抗氧化剂；以及

浓度为0.03％至0.08％的PS80，

其中所述组合物的pH为5.3至5.7。

34.根据权利要求1所述的药物组合物，所述药物组合物包含：

浓度为150mg/ml的所述抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段；

浓度为150mM的Arg.HCl；

浓度为5mM的甲硫氨酸；

浓度为20mM的柠檬酸钠和柠檬酸；以及

浓度为0.05％的PS80，

其中所述组合物的pH为5.5。

35.根据权利要求1所述的药物组合物，所述药物组合物包含：

浓度为150mg/ml的所述抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段；

浓度为150mM的Arg.HCl；

浓度为5mM的甲硫氨酸；

浓度为20mM的柠檬酸钠和柠檬酸；

含硫醇的抗氧化剂，所述含硫醇的抗氧化剂选自由以下组成的组：浓度为0.4mM的GSH、浓度为0.4mM的半胱氨酸、浓度为0.2mM的GSSG、浓度为0.2mM的胱氨酸、浓度为0.2mM的GSSH和浓度为0.4mM的GSSG，以及浓度为0.4mM的半胱氨酸和浓度为0.2mM的胱氨酸；以及

浓度为0.05％的PS80，

其中所述组合物的pH为5.5。

36.根据权利要求1至35中任一项所述的药物组合物，其中：

(i)所述VH由与SEQ ID NO:7至少80％同一的序列组成，并且所述VL由与SEQ ID NO:8至少80％同一的序列组成；

(ii)所述VH由与SEQ ID NO:7至少90％同一的序列组成，并且所述VL由与SEQ ID NO:8至少90％同一的序列组成；或者

(iii)所述VH由SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列组成，并且所述VL由SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列组成。

37.根据权利要求1至36中任一项所述的药物组合物，其中所述抗αvβ6抗体包含免疫球蛋白重链和免疫球蛋白轻链，其中：

(i)所述重链由与SEQ ID NO:9至少80％同一的序列组成，并且所述轻链由与SEQ IDNO:10至少80％同一的序列组成；

(ii)所述重链由与SEQ ID NO:9至少90％同一的序列组成，并且所述轻链由与SEQ IDNO:10至少90％同一的序列组成；或者

(iii)所述重链由SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列组成，并且所述轻链由SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列组成。

38.一种治疗有需要的人受试者的病症的方法，所述病症选自由以下组成的组：纤维化、急性肺损伤和急性肾损伤，所述方法包括向所述人受试者施用根据权利要求1至37中任一项所述的药物组合物。

39.根据权利要求38所述的方法，其中所述病症是纤维化。

40.根据权利要求39所述的方法，其中所述纤维化是肺纤维化。

41.根据权利要求40所述的方法，其中所述肺纤维化是特发性肺纤维化。

42.根据权利要求38至41中任一项所述的方法，其中向所述人受试者皮下施用所述药物组合物。

43.根据权利要求38至42中任一项所述的方法，其中每周一次以40mg的剂量向所述人受试者施用所述药物组合物的所述抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段。

44.根据权利要求38至42中任一项所述的方法，其中每周一次以48mg的剂量向所述人受试者施用所述药物组合物的所述抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段。

45.根据权利要求38至42中任一项所述的方法，其中每周一次以56mg的剂量向所述人受试者施用所述药物组合物的所述抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段。

46.根据权利要求38至42中任一项所述的方法，其中每周一次以64mg的剂量向所述人受试者施用所述药物组合物的所述抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段。

47.根据权利要求38至42中任一项所述的方法，其中每周一次以0.5mg/kg至0.8mg/kg的剂量向所述人受试者施用所述药物组合物的所述抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段。

48.根据权利要求38至42中任一项所述的方法，其中每周一次以0.5mg/kg的剂量向所述人受试者施用所述药物组合物的所述抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段。

49.根据权利要求38至42中任一项所述的方法，其中每周一次以0.6mg/kg的剂量向所述人受试者施用所述药物组合物的所述抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段。

50.根据权利要求38至42中任一项所述的方法，其中每周一次以0.7mg/kg的剂量向所述人受试者施用所述药物组合物的所述抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段。

51.根据权利要求38至42中任一项所述的方法，其中每周一次以0.8mg/kg的剂量向所述人受试者施用所述药物组合物的所述抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段。

52.一种治疗有需要的人受试者的病症的方法，所述病症选自由以下组成的组：纤维化、急性肺损伤和急性肾损伤，所述方法包括每周一次以40mg的剂量向所述人受试者皮下施用抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段，其中所述抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段包含免疫球蛋白重链可变结构域(VH)和免疫球蛋白轻链可变结构域(VL)，所述VH和所述VL分别包含：

(a)VH互补决定区(CDR)，其中

VH-CDR1由SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列组成；

VH-CDR2由SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列组成；并且

VH-CDR3由SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列组成；以及

(b)VL CDR，其中

VL-CDR1由SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列组成；

VL-CDR2由SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列组成；并且

VL-CDR3由SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列组成。

53.一种治疗有需要的人受试者的病症的方法，所述病症选自由以下组成的组：纤维化、急性肺损伤和急性肾损伤，所述方法包括每周一次以48mg的剂量向所述人受试者皮下施用抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段，其中所述抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段包含免疫球蛋白重链可变结构域(VH)和免疫球蛋白轻链可变结构域(VL)，所述VH和所述VL分别包含：

(a)VH互补决定区(CDR)，其中

VH-CDR1由SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列组成；

VH-CDR2由SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列组成；并且

VH-CDR3由SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列组成；以及

(b)VL CDR，其中

VL-CDR1由SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列组成；

VL-CDR2由SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列组成；并且

VL-CDR3由SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列组成。

54.一种治疗有需要的人受试者的病症的方法，所述病症选自由以下组成的组：纤维化、急性肺损伤和急性肾损伤，所述方法包括每周一次以56mg的剂量向所述人受试者皮下施用抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段，其中所述抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段包含免疫球蛋白重链可变结构域(VH)和免疫球蛋白轻链可变结构域(VL)，所述VH和所述VL分别包含：

(a)VH互补决定区(CDR)，其中

VH-CDR1由SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列组成；

VH-CDR2由SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列组成；并且

VH-CDR3由SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列组成；以及

(b)VL CDR，其中

VL-CDR1由SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列组成；

VL-CDR2由SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列组成；并且

VL-CDR3由SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列组成。

55.一种治疗有需要的人受试者的病症的方法，所述病症选自由以下组成的组：纤维化、急性肺损伤和急性肾损伤，所述方法包括每周一次以64mg的剂量向所述人受试者皮下施用抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段，其中所述抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段包含免疫球蛋白重链可变结构域(VH)和免疫球蛋白轻链可变结构域(VL)，所述VH和所述VL分别包含：

(a)VH互补决定区(CDR)，其中

VH-CDR1由SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列组成；

VH-CDR2由SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列组成；并且

VH-CDR3由SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列组成；以及

(b)VL CDR，其中

VL-CDR1由SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列组成；

VL-CDR2由SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列组成；并且

VL-CDR3由SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列组成。

56.根据权利要求52至55中任一项所述的方法，其中向所述人受试者施用至少4剂所述抗αvβ6抗体或其抗原结合片段。

57.根据权利要求52至55中任一项所述的方法，其中向所述人受试者施用至少7剂所述抗αvβ6抗体或其抗原结合片段。

58.根据权利要求52至55中任一项所述的方法，其中向所述人受试者施用至少10剂所述抗αvβ6抗体或其抗原结合片段。

59.根据权利要求52至58中任一项所述的方法，其中：

(i)所述VH由与SEQ ID NO:7至少80％同一的序列组成，并且所述VL由与SEQ ID NO:8至少80％同一的序列组成；

(ii)所述VH由与SEQ ID NO:7至少90％同一的序列组成，并且所述VL由与SEQ ID NO:8至少90％同一的序列组成；或者

(iii)所述VH由SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列组成，并且所述VL由SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列组成。

60.根据权利要求52至59中任一项所述的方法，其中所述抗αvβ6抗体包含免疫球蛋白重链和免疫球蛋白轻链，其中：

(i)所述重链由与SEQ ID NO:9至少80％同一的序列组成，并且所述轻链由与SEQ IDNO:10至少80％同一的序列组成；

(ii)所述重链由与SEQ ID NO:9至少90％同一的序列组成，并且所述轻链由与SEQ IDNO:10至少90％同一的序列组成；或者

(iii)所述重链由SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列组成，并且所述轻链由SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列组成。

61.根据权利要求52至60中任一项所述的方法，其中所述病症是纤维化。

62.根据权利要求61所述的方法，其中所述纤维化是肺纤维化。

63.根据权利要求62所述的方法，其中所述肺纤维化是特发性肺纤维化。

64.一种针筒或泵，所述针筒或泵包含根据权利要求1至37中任一项所述的药物组合物的无菌制剂，所述针筒或泵适于以40mg、48mg、56mg或64mg的固定剂量皮下施用所述抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段。

65.一种针筒或泵，所述针筒或泵包含0.5mL至5.0mL的根据权利要求1至37中任一项所述的药物组合物的无菌制剂。

66.一种针筒或泵，所述针筒或泵包含抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段的无菌制剂，其中所述针筒或泵适于以40mg、48mg、56mg或64mg的固定剂量皮下施用所述抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段，并且其中所述抗αvβ6抗体或其αvβ6结合片段包含免疫球蛋白重链可变结构域(VH)和免疫球蛋白轻链可变结构域(VL)，所述VH和所述VL分别包含：

(a)VH互补决定区(CDR)，其中

VH-CDR1由SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列组成；

VH-CDR2由SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列组成；并且

VH-CDR3由SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列组成；以及

(b)VL CDR，其中

VL-CDR1由SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列组成；

VL-CDR2由SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列组成；并且

VL-CDR3由SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列组成。

67.根据权利要求66所述的针筒或泵，其中：

(i)所述VH由与SEQ ID NO:7至少80％同一的序列组成，并且所述VL由与SEQ ID NO:8至少80％同一的序列组成；

(ii)所述VH由与SEQ ID NO:7至少90％同一的序列组成，并且所述VL由与SEQ ID NO:8至少90％同一的序列组成；或者

(iii)所述VH由SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列组成，并且所述VL由SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列组成。

68.根据权利要求66或67所述的针筒或泵，其中所述抗αvβ6抗体包含免疫球蛋白重链和免疫球蛋白轻链，其中：

(i)所述重链由与SEQ ID NO:9至少80％同一的序列组成，并且所述轻链由与SEQ IDNO:10至少80％同一的序列组成；

(ii)所述重链由与SEQ ID NO:9至少90％同一的序列组成，并且所述轻链由与SEQ IDNO:10至少90％同一的序列组成；或者

(iii)所述重链由SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列组成，并且所述轻链由SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列组成。

69.根据权利要求38至63中任一项所述的方法，其中所述方法还包括向所述人受试者施用治疗有效量的吡非尼酮或尼达尼布。

70.根据权利要求69所述的方法，其中如下向所述人受试者施用吡非尼酮：

71.根据权利要求69所述的方法，其中每天两次以150mg的固定剂量向所述人受试者施用尼达尼布。

Images