CN111149815A - 一种高效防治棉花黄萎病的抑菌剂及其制备方法与应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于植物源抑菌制剂制备与应用技术领域，具体涉及一种高效防治棉花黄萎病的抑菌剂及其制备方法与应用。本发明提供的艾叶抑菌剂组合物的配比按质量份计为：艾叶提取物1份；丙酮2份‑8份；吐温80溶液0.05份‑0.40份；补充水分至抑菌剂的全量。本发明还提供了艾叶抑菌剂组合物的制备方法，其制备步骤包括艾叶提取物的制备和艾叶抑菌剂水剂的配制两大部分。本发明的艾叶抑菌剂对棉花黄萎病菌具有显著的抑制作用。将抑菌剂施用到接种黄萎病菌后的棉株上，能有效抑制黄萎病菌对棉株的侵染，降低田间棉花黄萎病病情指数。为棉花黄萎病的防治提供一条新的途径。

Description

一种高效防治棉花黄萎病的抑菌剂及其制备方法与应用
技术领域
本发明属于植物源抑菌制剂制备与应用技术领域，具体涉及一种高效防治棉花黄萎病的抑菌剂及其制备方法与应用。
背景技术
棉花黄萎病是当前危害棉花生产的世界性病害之一，对棉花的产量和品质都有显著的影响，被称为棉花的“癌症”。在该病爆发时期，棉花的产量可以减少多达30％。棉花抗黄萎病的机制比较复杂，在占了棉花总产95％的陆地棉种中，几乎没有抗病种质资源，而且抗病育种周期长，育种成效慢。另外，在没有寄主的情况下，黄萎病菌仍可以在土壤中存活10年，这导致当前生产上很难制定切实有效的棉花黄萎病防控措施。
目前防治棉花黄萎病杀菌剂主要组合物为化学杀菌剂、微生物杀菌剂或植物源抑菌剂。就植物源抑菌剂而言，因其种类繁多，资源丰富，并且无残留，低毒或无毒，不易使病原菌产生抗性，且易于与其他农药混配而日益成为研究的热点。公开号为CN 1248578C报道了一种从大黄、虎杖等廖科植物中提取的天然蒽醌类化合物，该化合物对植物白粉菌具有非常强的抑菌效果，是我国首个获得国家认证的植物源杀菌剂。目前，尚无有效防治棉花黄萎病的植物源抑菌剂报道。公开号为CN 110343641文献公布了一种新菌种根际盐芽孢杆菌SYW-1(即SYW-1菌悬液)微生物抑菌剂在棉花黄萎病生物防治中的应用，据称能较好防治棉花生育期的棉花黄萎病，降低黄萎病对棉花生产的不利影响。但SYW-1菌悬液因其涉及细菌培养技术和菌液需要活体保存的限制，不便于在生产上大规模使用和推广。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，主要针对的技术问题是：市场上无有效防治棉花黄萎病的抑菌剂，加上抗病品种选育周期长，生产上缺乏有效的田间管理措施，使得黄萎病成为影响我国棉花生产可持续发展的重要威胁。为解决上述问题，本发明采取的技术方案是：提供一种高效防治棉花黄萎病的抑菌剂，同时提供使用该抑菌剂的制备方法及田间应用。
本发明的目的之一是艾叶与乙酸乙酯或乙醇等有机试剂提取物为主要原料制备的植物源抑菌剂(或称杀菌组合物)，利用我国资源十分丰富的艾叶制绒后所产生的下脚料废弃物艾粉来制备棉花黄萎病的抑菌剂，具有来源广泛、成本低廉、安全环保、易于推广等突出性优势。
本发明的目的之二是验证艾叶抑菌剂对棉花黄萎病菌在培养基上的抑制作用以及在棉花活体接种中抑制黄萎病病原菌的侵染的机制。
本发明制备的艾叶与乙酸乙酯及醇提物中主要成分为异泽兰黄素和棕矢车菊素等成分。
为实现上述目的，本发明采用如下的技术方案：
一种高效防治棉花黄萎病的抑菌剂，该抑菌剂的有效成分为艾叶乙酸乙酯提取物或乙醇提取物(简称艾叶提取物)，所述的提取物能够有效抑制棉花黄萎病菌的生长。
本发明的抑菌剂的制备工艺包括两大部分，即艾叶提取物的的制备和艾叶抑菌剂水剂的配制：
1.艾叶提取物的制备
(1)用粉碎机将艾叶粉碎，过40目筛，剔除筛上物叶绒部分，留取叶粉部分，即为艾粉；
(2)按料液比为1:4-10将原料艾粉与有机溶剂如乙酸乙酯或乙醇混合，用冷浸工艺提取，提取时间为20h-24h，得到艾叶提取物的粗提液；
(3)将步骤(2)所得的艾叶提取物的粗提液用超声仪进行超声提取，超声仪的功率为240W，超声温度为25℃，提取时间为30-40min；过滤滤液，收集第一次滤液，滤渣备用；
(4)将步骤(3)的滤渣按步骤(2)的工艺按料液比为1:2-4的乙酸乙酯或乙醇再次进行超声提取，超声仪的功率为240W，超声温度为25℃，提取时间为30-40min；过滤滤液，收集所得第二次滤液；
(4)合并第一次滤液和第二次滤液，将所得滤液浓缩成浸膏状后再在真空干燥器(按设备说明书操作)中进行干燥，得到艾叶提取物。
2、艾叶抑菌剂的制备
(1)按配方量将丙酮加入到已制备的艾叶提取物中，进行超声处理，超声仪的功率为240W，温度为25℃，处理时间为30-40min，得到混合物即为水剂1；
(2)配制0.1％的吐温80水溶液，加入到水剂1中，其中水剂1与吐温80的水溶液的质量比为1：10-25，得到水剂2；
(3)将水剂2在磁力搅拌器(按设备说明书操作)下搅拌10-20min，使各组分充分搅拌混匀，得到艾叶抑菌剂。
在艾叶提取物提取过程中，本发明主要是利用冷浸法提取艾叶粗提液的基础上适当利用超声波辅助处理能够增加有效成分的提取率，使单位原药材条件下的抑菌效果更为显著。但过长时间的提取和过多的超声处理存在能耗过高、成分可能破坏等因素。另外不同的溶剂比例也会对提取效率产生影响。经过一系列实验室摸索和比较研究后，本发明提出一种艾粉提取物最佳方法，具体为：将适度粉碎的艾叶粉末(简称艾粉)浸泡于一定比例(例如控制料液比在1:4-6)的有机溶剂如乙酸乙酯或者乙醇中，浸泡20h-24h后再用超声仪(功率为240W，超声处理温度为25℃)继续超声提取30-40min；抽滤后将残渣重复进行上述操作(在滤渣再次浸泡提取工艺中控制滤渣与有机溶剂乙酸乙酯或者乙醇的料液比为1:2-4)；合并二次滤液，经浓缩成浸膏状后再在真空干燥器中进行干燥，得到艾叶提取物。
采用上述方法既能得到较高的提取率，同时还能降低提取耗能，节约时间、成本，保证提取物抑菌效果。
申请人设计了一种艾叶抑菌剂组合物的制备方法，按质量份数计，艾叶抑菌剂组合物配比的组分及其配比为：艾叶提取物1份，丙酮2份-8份，吐温80溶液0.05份-0.40份，补充水份至抑菌剂的全量(以100质量份计)，本发明制备的抑菌剂可有效抑制黄萎病菌对棉花植株的侵染。
申请人提供了一种高效防治棉花黄萎病的艾叶抑菌剂组合物的制备方法，所述的方法包括艾叶提取物的制备和艾叶抑菌剂的配制。
所述艾叶抑菌剂组合物的配比按质量份计为：艾叶提取物1份；丙酮2份-8份；吐温80溶液0.05份-0.40份；补充水分至抑菌剂的全量(以100质量份计)；
按以下步骤制备：
1.艾叶提取物的制备
(1)用粉碎机将艾叶粉碎，过40目筛，剔除筛上物叶绒部分，留取叶粉部分，所得的叶粉即为艾粉；
(2)按料液比为1:4-10将原料艾粉与有机溶剂乙酸乙酯或无水乙醇用冷浸工艺提取，提取时间为20h-24h，得到艾叶提取物的粗提物；
(3)将步骤(2)所得的艾叶提取物的粗提物用超声仪进行超声处理，超声仪的功率为240W，温度为25℃，提取时间为30-40min；滤液过滤，收集第一次滤液，滤渣备用；
(4)将步骤(3)的滤渣按料液比为1:2-4的乙酸乙酯或乙醇再次进行超声提取，超声仪的功率为240W，超声温度为25℃，提取时间为30-40min；过滤滤液，收集所得的第二次滤液；
(5)合并二次滤液，将所得滤液浓缩成浸膏状后再在真空干燥器中进行干燥，得到艾叶提取物；
2.艾叶抑菌剂的制备
(1)按配方量将丙酮加入到已制备好的艾叶提取物中，进行超声处理，超声仪的功率为240W，温度为25℃，处理时间为30-40min；得到混合物1，即水剂1；
(2)配制0.1％的吐温80水溶液，加入到水剂1中，其中水剂1与吐温80的水溶液的质量比为1：10-25，得到水剂2；
(3)将水剂2在磁力搅拌器(按设备说明书操作)下搅拌10-20min，使各组分充分搅拌混匀，得到艾叶抑菌剂(水剂)。
本发明提供了一种高效防治棉花黄萎病的艾叶抑菌剂组合物的制备方法，所述抑菌剂组合物中丙酮添加量为3份-6份。
优选地，所述抑菌剂组合物中丙酮添加量为4份。
所述抑菌剂组合物中吐温80溶液的添加量为0.06份-0.30份。
所述抑菌剂组合物中吐温80溶液的最佳值添加量为0.10份。
本发明制备的艾叶抑菌剂可在防治棉花抗黄萎病菌中应用。
所述的应用方法为，可以通过实施棉花叶面喷施或者进行灌根施用等途径达到防治棉花黄萎病病菌的效果。试验表明，应用本发明制备的艾叶抑菌剂水剂田间喷施浓度为以含艾叶提取物计算为0.5-2.0％(农业防治上可接受的有效防治浓度)，以艾叶提取物的实物量计为5g-20g/L的浓度施用比较经济有效。
本发明的有益效果在于：
(1)本发明制备的艾叶抑菌剂对棉花黄萎病具有高效的防治效果，为防治棉花黄萎病菌提供了一种绿色抑菌剂，符合作物病害绿色环保的理念。
(2)本发明公布了一种植物源抑菌剂及其制备方法和应用，相较于化学杀菌剂，本发明具有安全环保和对环境友好的突出优势。
(3)本发明的植物源材料为艾叶，可直接利用艾叶加工艾绒后所剩余的艾粉进行综合利用，具有原料来源广，生产成本低等突出优势。且能够物尽其用，可充分利用自然资源，打造资源节约型社会。
(4)本发明的工艺简便易行，对生产条件和生产技术要求比较低，易于大规模推广和应用。
附图说明：
图1：应用实施例1中不同浓度艾粉乙酸乙酯提取物对棉花黄萎病菌的抑制效果。
图2：应用实施例1中艾粉乙酸乙酯提取物对棉花黄萎病菌的浓度-抑制率曲线。
图3：应用实施例2中12d后各处理组的棉花黄萎病的发病情况。
图4：应用实施例2中不同艾叶抑菌剂用量对棉花黄萎病病情指数的影响。
图5：应用实施例2中不同用量艾叶抑菌剂处理后的棉花子叶节部位纵向剖面维管束。
图6：应用实施例2中不同用量艾叶抑菌剂处理后的叶片宽度测量。
图7：应用实施例3中艾叶乙酸乙酯提取物的指纹图谱。附图标记说明：图7中的标记A为艾叶乙酸乙酯提取物的指纹图谱；图7中的B为艾叶乙醇提取物的指纹图谱；图7中的标记C为对照标准品(棕矢车菊素C-1、异泽兰黄素C-2)的指纹图谱。
具体实施方式：
应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本申请使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本申请的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式示意图也包括复数形式。此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。
正如《背景技术》所介绍的，棉花黄萎病为棉花主要病害之一，生产上对该病害缺乏有效的防治措施。因此，本发明提出一种高效防治棉花黄萎病菌的抑菌剂及其制备方法与应用，就是将中药原料艾叶粉碎后过筛，将过筛后的艾粉经有机溶剂提取后制备成抑菌剂剂，可用于喷施叶面或对感染黄萎病菌的棉花进行灌根施药。
优选地，艾叶打粉，是取当年采收的干燥艾叶，用常规中草药粉碎机粉碎，转速控制为5000r/min以上。
优选地，艾粉过筛，粉碎后过40目筛，剔除筛上叶绒部分，留取叶粉部分。一种艾粉提取物的制备方法，所述方法的优选步骤如下所述：
(1)称取预处理制备好的原料艾粉，将艾粉和乙酸乙酯溶液或乙醇溶液置于一个提取容器中；
(2)用常规冷浸工艺提取艾叶20小时-24小时，得到艾叶浸泡液(即为上述艾叶粗提取物)；
(3)将步骤(2)所得的浸泡液(即为艾叶粗提取物)进行超声辅助提取(超声仪的工作功率为240W，温度25℃；)提取时间为30min；
(4)将超声后的浸泡液抽滤，得到第一次滤液，滤渣备用，用于再提取；
(5)将乙酸乙酯溶液再次加入到滤渣中冷浸提取20--24小时，用超声(超声仪的工作功率为240W，温度25℃；)30min；
(6)将二次浸泡滤液抽滤，将第二次虑液与第一次滤液合并；
(7)将步骤(6)所得的滤液在浓缩设备(常规设备)上减压浓缩得到艾粉提取物浸膏；
(8)将浓缩后的浸膏进行真空干燥(常规方法)。
上述步骤(1)中，优选地原料与有机溶剂的料液比控制在1:4-6；
上述步骤(2)中，优选地浸泡过程中每隔6小时充分摇匀一次；
上述步骤(3)中，优选地超声仪的工作功率为240W，温度为25℃；
上述步骤(4)中，优选地浸泡液使用减压抽滤装置抽滤；
上述步骤(5)中，优选地原料与溶剂的料液比控制在1:2-4；
上述步骤(7)中，优选的:所述浓缩设备为旋转蒸发仪(例如型号为BUCHI 9230)，减压浓缩时的转速为60-75r/min；制冷温度为-2℃—5℃；加热温度为45℃；
上述步骤(8)中，优选地:真空干燥箱(memmert)压强为20Pa，温度为40℃，干燥时间为48小时。
作为优选方法，本发明的艾叶抑菌剂各原料组分按质量份数计如下：艾粉提取物1份；丙酮3-5份；吐温80溶液0.10-0.15份；补充水分至抑菌剂的全量(以抑菌剂全量为100质量份计)，具体步骤如下：
(1)称取预先制备好的艾粉提取物，按配方量加入丙酮，得到艾粉混合物，即水剂1；
(2)将步骤(1)所得的水剂1，在240W，温度25℃的超声仪中超声处理20min使之充分溶解；
(3)配制0.1％浓度的吐温80水溶液，将该吐温80水溶液加入步骤(2)中溶解的艾叶混合物，得到水剂2；
(4)将水剂2充分搅拌置于搅拌装置上充分搅拌混匀，得到艾叶抑菌剂。
上述步骤(1)中，优选地，丙酮处理时，以丙酮稍浸没艾叶提取物为宜。
上述步骤(3)中，优选地，艾叶提取物与吐温80水溶液的质量比控制在1：15-25。
上述步骤(4)中，优选地，所述搅拌装置为磁力搅拌器，搅拌时间为10-20min。
本发明抑菌剂的使用方法：
棉田可以采用叶面喷施或者对黄萎病感染株灌根(作为优选方法，推荐做灌根处理，能起到良好防治效果)，是用浓度为艾叶提取物的0.8-1.2％，实物量为艾叶提取物8-12g/L)
应用实施例1：本发明的艾叶抑菌剂对棉花黄萎病菌的毒力测定
称取适量艾叶抑菌剂，加5ml乙醇溶解后加入95ml马铃薯葡萄糖琼脂培养基中，高压蒸汽灭菌锅灭菌(120℃，5min)后配置成含药量分别为2.5g/L、5.0g/L、7.5g/L、10.0g/L、12.5g/L和20.0g/L的含药培养基，以含5％乙醇(无水酒精)的马铃薯葡萄糖琼脂培养基为空白对照组(CK)。之后用打孔器在黄萎病病菌纯菌落边缘打孔切取菌饼，分别接种于空白对照培养基和各浓度含药培养基；根据真菌的生长速率，选取CK组接近长满培养基时，采用十字交叉法对菌落直径进行测量，并绘制浓度-抑制率曲线，计算艾叶提取物对棉花黄萎病菌的毒力方程和EC50值。每个处理组4个重复，结果见表1、图1和图2。
计算公式为：抑制率＝[(空白组-菌柄直径)-(试验组-菌柄直径)]/(空白组-菌柄直径)
表1不同浓度的艾叶抑菌剂对棉花黄萎病菌的抑制率
处理组 抑制率％
2.5g/L 47.08±8.29
5.0g/L 56.69±7.57
7.5g/L 71.14±3.89
10.0g/L 74.18±4.40
12.5g/L 80.25±1.37
20.0g/L 84.10±1.90
通过以上公式计算得出如下结果：艾粉乙酸乙酯提取物对棉花黄萎病菌的毒力方程为y＝0.033x3-0.2785x2+0.6909x+0.3088R2＝0.9862，EC50/g*L-1(95％的置信限)值为3.070(2.027～3.967)。上述结果表明，艾粉乙酸乙酯提取物对黄萎病菌具有良好的抑制生长的作用。
应用实施例2:艾粉乙酸乙酯提取物对棉花黄萎病菌的活体试验
抑菌剂的配制：称取艾粉乙酸乙酯提取物(即本发明制备的艾叶抑菌剂组合物)，加入适量的丙酮溶解，再用0.1％的吐温80水溶液稀释至10g/L，低温保存备用。
孢子液的配制：取黄萎病菌饼于察氏培养基中，置于30℃、300r/min的摇床中振摇两天后，取出过滤，将滤过的孢子液用无菌水稀释至浓度为1×106/ml。
棉花的培育和处理：将棉花种子进行催芽处理，待种子发芽后移入蛭石中，保持蛭石的湿度。待棉花幼苗长出两片子叶后，将幼苗移入Hoagland's营养液(一种报道和常用的何格兰氏营养液)中生长，棉株长出2-3片新叶后选取长势一致的棉花幼苗做伤根处理，并迅速浸泡于稀释后的孢子液中。
试验组：每升蛭石中分别加入0、5、10、15、20、30、40、50ml的艾叶抑菌剂，即艾粉乙酸乙酯提取物含药量为0(A)、0.33(B)、0.67(C)、1.00(D)、1.33(E)、2.00(F)、2.67(G)、3.33(H)g/kg，拌匀。将伤根处理后的棉花置于孢子液中浸泡2min后种植于以上各处理的蛭石中，以正常生长的棉花作为空白对照(CK)，每个处理三个重复。从第12d处理组棉花发生黄萎病开始，每天统计各处理组的棉花黄萎病发病等级，并计算病情指数。发病指数＝∑(各级病株数×该病级值)/(调查总株数×最高级值)×100。第19d测量各处理组最外侧叶片以评判棉花生长情况，并观察子叶结的纵向剖面维管束、判断棉花染病情况。结果见图3、图4、图5和图6。
图3、图4的结果表明，本发明制备的艾叶抑菌剂能够显著抑制黄萎病菌对棉花的侵染。降低棉花的发病指数。当施用量达到2.00g/kg(提取物含量/蛭石)时，可以完全阻断黄萎病菌对棉花的侵染。对棉花子叶节部分进行剖杆试验发现(如图5所示)，黄萎病菌侵染棉花后造成棉株维管束褐化，施用艾叶抑菌剂后能够有效阻止黄萎病的侵染，随着施用量不断加大，维管束褐化程度逐渐减轻，说明随着施用量的加大,本发明的抑菌剂对棉花黄萎病的侵染抑菌效果越来越明显；当施用量达3.33g/kg时能够完全阻断黄萎病菌的侵染。图6结果表明，棉花伤根处理后接种黄萎病菌，以棉花叶片大小为代表的生长指标受到显著抑制，而添加本发明的艾叶抑菌剂后能够减少不良影响，且减小不良影响的程度与抑菌剂施用量呈明显的量效关系。
应用实施例3：本发明的艾叶抑菌剂指纹图谱的建立
供试品溶液制备：取艾叶抑菌剂(艾粉乙酸乙酯提取物和乙醇提取物)适量，加入80％甲醇完全溶解后过0.45μm滤膜得到供试品溶液，采用戴安UltiMate 3000高效液相色谱仪(美国戴安)建立其指纹图谱。
色谱条件：Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm)；流动相：乙腈(A)-0.2％磷酸水溶液(B)，梯度洗脱(梯度洗脱程序见下表)；流速：0.8ml/min，温度：30℃；检测波长：330nm。
表2本发明的色谱条件
Figure BDA0002358702520000081
本实施例的试验结果如图7所示。由图7，从艾粉提取物指纹图谱对照标准品可知，艾粉乙酸乙酯提取物和乙醇提取物中含量最高的两种成分均为异泽兰黄素和棕矢车菊素。在艾粉乙酸乙酯提取物中，异泽兰黄素峰面积达到总出峰面积的45.30％，棕矢车菊素峰面积为总出峰面积的10.14％；艾粉乙醇提取物中，异泽兰黄素峰面积达到总出峰面积的49.04％，而棕矢车菊素的峰面积为总出峰面积的12.86％，可初步推测异泽兰黄素和棕矢车菊素为抗棉花黄萎病的主要抑菌成分。

Claims (10)

1.一种高效防治棉花黄萎病的艾叶抑菌剂组合物，其特征在于，所述的艾叶抑菌剂组合物的配比按质量份计为：艾叶提取物1份；丙酮2份-8份；吐温80溶液0.05份-0.40份；补充水分至抑菌剂的全量；
其制备步骤包括两大部分，即艾叶提取物的制备和艾叶抑菌剂水剂的配制：
(1)艾叶提取物的制备
1)用粉碎机将艾叶粉碎、过40目筛，剔除筛上物叶绒部分，留取叶粉部分，所得的叶粉即为艾粉；
2)按料液比为1:4-10将原料艾粉与有机溶剂乙酸乙酯或无水乙醇用冷浸工艺提取，提取时间为20h-24h，得到艾叶提取物的粗提物；
3)将步骤(2)所得的艾叶提取物的粗提物用超声仪进行超声处理，超声仪的功率为240W，温度为25℃，提取时间为30-40min；滤液过滤，收集第一次滤液，滤渣备用；
4)将步骤(3)的滤渣按料液比为1:2-4的乙酸乙酯或乙醇再次进行超声提取，超声仪的功率为240W，超声温度为25℃，提取时间为30-40min；过滤滤液，收集所得的第二次滤液；
5)合并二次滤液，将所得滤液浓缩成浸膏状后再在真空干燥器中进行干燥，得到艾叶提取物；
(2)艾叶抑菌剂的制备
1)按配方量将丙酮加入到已制备的艾叶提取物中，进行超声处理，超声仪的功率为240W，温度为25℃，处理时间为30-40min；得到水剂1；
2)配制0.1％的吐温80水溶液，加入到水剂1中，其中水剂1与吐温80的水溶液的质量比为1：10-25，得到水剂2；
3)将水剂2在磁力搅拌器下搅拌10-20min，使各组分充分搅拌混匀，得到艾叶抑菌剂。
2.如权利要求1所述的一种高效防治棉花黄萎病的艾叶抑菌剂组合物，其特征在于，所述抑菌剂组合物中的丙酮添加量为3份-6份。
3.如权利要求1所述的一种高效防治棉花黄萎病的艾叶抑菌剂组合物，其特征在于，所述抑菌剂组合物中的丙酮添加量为4份。
4.如权利要求1所述的一种高效防治棉花黄萎病的艾叶抑菌剂组合物，其特征在于，所述抑菌剂组合物中的吐温80溶液的添加量为0.08份-0.30份。
5.如权利要求1所述的一种高效防治棉花黄萎病的艾叶抑菌剂组合物，其特征在于，所述抑菌剂组合物中的吐温80溶液的添加量为0.10份。
6.一种高效防治棉花黄萎病的艾叶抑菌剂组合物的制备方法，其特征在于，所述的方法包括艾叶提取物的制备和抑菌剂的配制，
所述艾叶抑菌剂组合物的配比按质量份计为：艾叶提取物1份；丙酮2份-8份；吐温80溶液0.05份-0.40份；补充水分至抑菌剂的全量；
按以下步骤制备：
(1)艾叶提取物的制备
1)用粉碎机将艾叶粉碎、过40目筛，剔除筛上物叶绒部分，留取叶粉部分，所得的叶粉即为艾粉；
2)按料液比为1:4-10将原料艾粉与有机溶剂乙酸乙酯或无水乙醇用冷浸工艺提取，提取时间为20h-24h，得到艾叶提取物的粗提物；
3)将步骤(2)所得的艾叶提取物的粗提物用超声仪进行超声处理，超声仪的功率为240W，温度为25℃，提取时间为30-40min；滤液过滤，收集第一次滤液，滤渣备用；
4)将步骤(3)的滤渣按按料液比为1:2-4的乙酸乙酯或乙醇再次进行超声提取，超声仪的功率为240W，超声温度为25℃，提取时间为30-40min；过滤滤液，收集所得的第二次滤液；
5)合并二次滤液，将所得滤液浓缩成浸膏状后再在真空干燥器中进行干燥，得到艾叶提取物；
(2)艾叶抑菌剂的制备
1)按配方量将丙酮加入到已制备的艾叶提取物中，进行超声处理，超声仪的功率为240W，温度为25℃，处理时间为30-40min；得到水剂1；
2)配制0.1％的吐温80水溶液，加入到水剂1中，其中水剂1与吐温80的水溶液的质量比为1：10-25，得到水剂2；
3)将水剂2在磁力搅拌器下搅拌10-20min，使各组分充分搅拌混匀，得到艾叶抑菌剂。
7.如权利要求6所述的一种高效防治棉花黄萎病的艾叶抑菌剂组合物的制备方法，其特征在于，所述抑菌剂组合物中丙酮添加量为3份-6份。
8.如权利要求6所述的一种高效防治棉花黄萎病的艾叶抑菌剂组合物的制备方法，其特征在于，所述抑菌剂组合物中丙酮添加量为4份。
9.如权利要求1所述的一种高效防治棉花黄萎病的艾叶抑菌剂组合物的制备方法，其特征在于，所述抑菌剂组合物中的吐温80溶液的添加量为0.06份-0.30份，最佳添加量为0.10份。
10.权利要求1-5任一项所述的艾叶抑菌剂在防治棉花抗黄萎病菌中的应用。
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