CN111108121A

CN111108121A - Il-20拮抗剂治疗眼病的用途

Info

Publication number: CN111108121A
Application number: CN201880027826.3A
Authority: CN
Inventors: 张明熙
Original assignee: Yongfu Biotechnology Co Ltd
Current assignee: Yongfu Biotechnology Co Ltd
Priority date: 2017-04-25
Filing date: 2018-04-25
Publication date: 2020-05-05
Also published as: US20200048339A1; WO2018200620A1; EP3615570A1; EP3615570A4; US11279755B2

Abstract

使用IL‑20拮抗剂治疗如干眼病DED和年龄相关性黄斑变性AMD的眼病的方法，所述拮抗剂阻断由IL‑20介导的信号传导路径，例如结合IL‑20或IL‑20受体的抗体。

Description

IL-20拮抗剂治疗眼病的用途

相关申请

本申请根据35U.S.C.§119(e)要求2017年4月25日提交的美国临时专利申请第62/489,611号的优先权，所述申请的内容以全文引用的方式并入本文中。

背景技术

眼科疾病影响全世界数百万人，尤其是老年人。举例来说，干眼病(DED；也称为干燥性角膜结膜炎)为常见的眼科疾病。其为由干燥和刺激症状表征的泪膜和眼表面的多因子病。迪尤斯(Dews),眼表面(Ocul Surf.)2007,5:75-92。DED可不利地影响每日活动的执行且将导致生活质量总体下降。

作为另一实例，年龄相关性黄斑变性(AMD)为当黄斑(视网膜的一部分)受损时发生的视网膜病况。黄斑变性为视力丧失的主要起因，在美国影响超过1千万患者。

因此，对于开发用于治疗如干眼病和AMD的眼科病况的新颖组合物和方法极感兴趣。

发明内容

本发明是基于以下出人意料的结果：能够干扰IL-20信号传导路径的抗体(例如抗IL-20抗体，如mAb7E)对罹患干眼综合症的小鼠成功地增加泪液量且抑制角膜损伤，并且还在年龄相关性黄斑变性的小鼠模型中显示优良治疗作用。

因此，本发明的一个方面涉及一种治疗个体的眼病或延缓眼病发作的方法，其包含向需要治疗的个体施用有效量的包含IL-20拮抗剂的药物组合物，所述拮抗剂抑制由IL-20介导的信号传导路径。在一些实施例中，IL-20拮抗剂可为结合至IL-20或IL-20受体，由此抑制由IL-20介导的信号传导路径的抗体。举例来说，此类抗体可结合至IL-20蛋白质(例如人类IL-20)或可结合至IL-20受体(例如人类IL-20受体，如IL-20受体的R1次单位)。用于本文所述的方法中的抗体中的任一种可为全长抗体或其抗原结合片段。或者，抗体可为人类抗体、人类化抗体、嵌合抗体或单链抗体。

当结合人类IL-20的抗体用于本文所述的方法中时，所述抗体可为单株抗体mAb7E、其抗原结合片段或其功能变异体。在一些实施例中，抗IL-20抗体可与mAb7E结合至人类IL-20的相同表位或与mAb7E竞争结合至人类IL-20。在一个实例中，本文所述的抗IL-20抗体可包含与mAb7E相同的重链和轻链互补决定区(CDR)。在另一实例中，抗IL-20抗体为mAb7E的人类化抗体。此类人类化抗体可包含重链可变区(V_H)，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:8，和轻链可变区(V_L)，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:13。

或者，结合人类IL-20受体或其次单位的抗体可用于本文所述的方法。此类抗IL20受体抗体可结合IL-20R1次单位、IL-20R2次单位、IL-20R1/R2复合物、IL-22R1次单位或IL-22R1/IL-20R2复合物。在一些实施例中，抗体结合人类IL-20受体的次单位R1。在一个实例中，结合人类IL-20受体的次单位R1的抗体为与单克隆抗体mAb51D或mAb7GW，或mAb51D或mAb7GW的功能变异体包含相同V_H和V_L的抗体。在一些情况下，抗IL-20R抗体可与mAb7GW或mAb51D结合至人类IL-20R的次单位R1的相同表位，或与mAb7GW或mAb51D竞争结合至次单位R1。本文所述的抗IL-20R抗体可与mAb51D或mAb7GW包含相同重链和轻链互补决定区(CDR)。在一些实例中，抗IL-20R抗体可为mAb51D或mAb7GW的人类化抗体。

待在本文所述的方法(例如其中使用抑制IL-20信号传导路径的抗体的方法)中治疗的个体可为患有为疑似患有眼病的患者(例如人类患者)，所述眼病可为干眼病(DED)或年龄相关性黄斑变性(AMD)，例如湿性AMD。在一些实例中，DED为泪液缺乏性干眼。在其它实例中，DED为蒸发过强性干眼。在一些实施例中，眼病可为糖尿病黄斑水肿(DME)、DME中的糖尿病性视网膜病变(DR)或视网膜静脉阻塞(RVO)后的黄斑水肿。

本发明的范围内还包括(a)用于对个体治疗眼病(例如DED、AMD或本文所述的其它眼病)或延缓眼病发作的药物组合物，所述药物组合物包含本文所述的IL-20拮抗剂中的一或多种(例如抑制IL-20信号传导路径的抗体，如结合人类IL-20或人类IL-20受体(R1、R2或其复合物)的抗体；和(b)本文所述的IL-20拮抗剂中的任一种(例如抗IL-20或抗IL-20受体抗体)在制造用于治疗眼病或延缓眼病发作的药物中的用途。

在下文描述中阐述本发明的一或多个实施例的细节。本发明的其它特征或优点自以下图式和若干实施例的详细描述以及所附权利要求书将显而易见。

附图说明

图1为展示抗IL-20抗体mAb7E对患有由局部投与苯扎氯铵(BAC)诱发的干眼病(DED)的小鼠的泪液量的治疗效果的图表。DED组小鼠用PBS、小鼠免疫球蛋白G(mIgG)或mAb7E治疗。***：健康相对于DED，p<0.001。***：mIgG相对于7E，p<0.001

图2为包括角膜荧光素染色的代表性图像，显示mAb7E对角膜损伤的抑制作用的照片。

图3为展示用mAb7E治疗引起角膜荧光素染色评分显著降低的图表。***：mIgG相对于7E，p<0.001。

图4A为展示在对用PBS(空白对照)、

mIgG(对照)或mAb7E治疗的小鼠进行激光光凝术之后7天测量的脉络膜新生血管(CNV)病变的荧光强度的图表。

图4B为展示在对用PBS(空白对照)、

mIgG(对照)或mAb7E治疗的小鼠进行激光光凝术之后14天测量的脉络膜新生血管(CNV)病变的荧光强度的图表。

图4C为展示在对用PBS(空白对照)、

mIgG(对照)或mAb7E治疗的小鼠进行激光光凝术之后21天测量的脉络膜新生血管(CNV)病变的荧光强度的图表。

图4D为展示在对用PBS(空白对照)、

mIgG(对照)或mAb7E治疗的小鼠进行激光光凝术之后28天测量的脉络膜新生血管(CNV)病变的荧光强度的图表。

序列的简要说明

SEQ ID NO:1为编码单克隆抗体mAb7E的重链可变区的核苷酸序列。

SEQ ID NO:2为单克隆抗体mAb7E的重链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO:3为编码单克隆抗体mAb7E的轻链可变区的核苷酸序列。

SEQ ID NO:4为单克隆抗体mAb7E的轻链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO:5为编码衍生自mAb7E的人类化抗体HL1和HL2(前体形式，其包括信号肽)的重链可变区的核苷酸序列。

SEQ ID NO:6为衍生自mAb7E的人类化抗体HL1和HL2(前体形式，其包括信号肽)的重链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO:7为编码衍生自mAb7E的人类化抗体HL1和HL2(成熟形式，缺少信号肽)的重链可变区的核苷酸序列。

SEQ ID NO:8为衍生自mAb7E的人类化抗体HL1和HL2(成熟形式，缺少信号肽)的重链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO:9为编码人类化抗体HL2(前体形式，其包括信号肽)的轻链可变区的核苷酸序列。

SEQ ID NO:10为人类化抗体HL2(前体形式，其包括信号肽)的轻链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO:11为编码人类化抗体HL2(成熟形式，缺少信号肽)的轻链可变区的核苷酸序列。

SEQ ID NO:12为人类化抗体HL2(成熟形式，缺少信号肽)的轻链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO:13为人类化抗体HL1(成熟形式，缺少信号肽)的轻链可变区的氨基酸序列。

SEQ ID NO:14为单克隆抗体mAb7GW的重链的氨基酸序列。

SEQ ID NO:15为编码单克隆抗体mAb7GW的重链的核苷酸序列。

SEQ ID NO:16为单克隆抗体mAb7GW的轻链的氨基酸序列。

SEQ ID NO:17为编码单克隆抗体mAb7GW的轻链的核苷酸序列。

SEQ ID NO:18为单克隆抗体mAb51D的重链的氨基酸序列。

SEQ ID NO:19为编码单克隆抗体mAb51D的重链的核苷酸序列。

SEQ ID NO:20为单克隆抗体mAb51D的轻链的氨基酸序列。

SEQ ID NO:21为编码单克隆抗体mAb51D的轻链的核苷酸序列。

具体实施方式

本发明报告以下出人意料的结果：能够干扰IL-20信号传导路径的抗体(例如抗IL-20抗体，如mAb7E)在确立的干眼综合症小鼠模型(BAC诱导性干眼小鼠模型)中成功地增加泪液量且抑制角膜损伤。因此，本发明涉及使用有效量的IL-20拮抗剂对个体治疗眼病，如干眼病(例如缓解眼病或延缓眼病发作)的方法，所述拮抗剂可为能够干扰IL-20信号传导路径的抗体。

一般技术

除非另外指明，否则本发明的实践将采用在所属领域技术范围内的分子生物学(包括重组技术)、微生物学、细胞生物学、生物化学和免疫学的常规技术。此类技术充分阐述于文献中，例如分子克隆：实验指南(Molecular Cloning:A Laboratory Manual)第二版(萨姆布鲁克(Sambrook)等人,1989)冷泉港出版社(Cold Spring Harbor Press)；寡核苷酸合成(Oligonucleotide Synthesis)(M.J.盖特(Gait)编,1984)；分子生物学方法(Methods in Molecular Biology),胡马纳出版社(Humana Press)；细胞生物学：实验室笔记(Cell Biology:A Laboratory Notebook)(J.E.塞利斯(Cellis)编,1998)学术出版社(Academic Press)；动物细胞培养(Animal Cell Culture)(R.I.弗瑞旭尼(Freshney)编,1987)；细胞和组织培养概论(Introduction to Cell and Tissue Culture)(J.P.马瑟(Mather)和P.E.罗伯茨(Roberts),1998)普莱南出版社(Plenum Press)；细胞和组织培养：实验室程序(Cell and Tissue Culture:Laboratory Procedures)(A.多伊尔(Doyle),J.B.格里菲思(Griffiths)和D.G.纽厄尔(Newell)编,1993-8)约翰威利父子公司(J.Wileyand Sons)；酶学方法(Methods in Enzymology)(学术出版社公司(Academic Press,Inc.))；实验免疫学手册(Handbook of Experimental Immunology)(D.M.维尔(Weir)和C.C.布莱克威尔(Blackwell)编)；哺乳动物细胞的基因转移载体(Gene Transfer Vectorsfor Mammalian Cells)(J.M.米勒(Miller)和M.P.卡洛斯(Calos)编,1987)；现代分子生物学实验技术(Current Protocols in Molecular Biology)(F.M.奥斯贝(Ausubel)等人编,1987)；PCR：聚合酶链反应(PCR:The Polymerase Chain Reaction),(穆利斯(Mullis)等人编,1994)；免疫学最新方案(Current Protocols in Immunology)(J.E.科利根(Coligan)等人编,1991)；精编分子生物学实验指南(Short Protocols in Molecular Biology)(威利父子公司(Wiley and Sons),1999)；免疫生物学(Immunobiology)(C.A.詹韦(Janeway)和P.特拉弗斯(Travers),1997)；抗体(Antibodies)(P.芬奇(Finch),1997)；抗体：实际方法(Antibodies:a practical approach)(D.凯蒂(Catty.)编,IRL出版社(IRL Press),1988-1989)；单克隆抗体：实际方法(Monoclonal antibodies:a practical approach)(P.谢普德(Shepherd)和C.迪恩(Dean)编,牛津大学出版社(Oxford University Press),2000)；使用抗体：实验室手册(Using antibodies:a laboratory manual)(E.哈洛(Harlow)和D.莱恩(Lane)(冷泉港实验室出版社(Cold Spring Harbor LaboratoryPress),1999)；抗体(The Antibodies)(M.扎内蒂(Zanetti)和J.D.卡普拉(Capra)编,哈伍德学术出版社(Harwood Academic Publishers),1995)。

IL-20拮抗剂和包含其的药物组合物

白介素IL-20(IL-20)为IL-10家族的成员，所述家族包括IL-10、IL-19、IL-20、IL-22、IL-24和IL-26。布隆伯格(Blumberg)等人,2001,细胞(Cell)104:9-19；佩斯特卡(Pestka)等人,2004,免疫学年鉴(Annu Rev Immunol)22:929-979。IL-20表达于单核细胞、上皮细胞和内皮细胞中且通过活化IL-20R1/IL-20R2或IL-22R1/IL-20R2的杂二聚体受体复合物而作用于多种细胞类型。迪穆捷(Dumoutier)等人,2001,免疫学杂志(J Immunol)167:3545-3549)。发现IL-20涉及各种发炎性疾病，如牛皮癣(布隆伯格等人,2001；萨(Sa)等人,2007,免疫学杂志178:2229-2240；和魏(Wei)等人,2005,临床免疫学(Clin Immunol)117:65-72)、类风湿性关节炎(许(Hsu)等人,2006,关节炎与风湿病(Arthritis Rheum)54:2722-2733)、动脉粥样硬化(卡利朱里(Caligiuri)等人2006,动脉硬化、血栓与血管生物学(Arterioscler Thromb Vase Biol)26:1929-1930；和陈(Chen)等人,2006,动脉硬化、血栓与血管生物学26:2090-2095)、缺血性中风(陈等人,2009,免疫学杂志182:5003-5012)和肾衰竭(李(Li)等人,2008,基因免疫学(Genes Immun)9:395-404)。还参见魏等人,2006,生物医学科学杂志(J Biomed Sci)13:601-612。

本文所述的IL-20是指白介素-20和其变异体，所述变异体保留IL-20的至少部分活性。如本文所用，IL-20包括哺乳动物物种，包括人类、犬类动物、猫类动物、马类动物或牛类动物的天然序列IL-20。在一个实例中，IL-20为人类IL-20(GenBank登录号NP_061194.2)。

IL-20经由结合至IL-20受体活化IL-20信号传导路径，所述受体为含有次单位IL-20R1和IL-20R2(也称为RA和RB)的二聚复合物。此类IL-20受体由三种功能上不同的细胞因子，即IL-19、IL-20和IL-24共用，表明此受体介导依赖于其与特定细胞因子的结合的不同信号传导路径。IL-20还能够结合至含有IL-20R2和IL-22R1的二聚复合物。本文公开的IL-20受体是指能够结合至IL-20且由其活化的一或多种多肽。本文公开的IL-20受体包括任何哺乳动物物种，包括但不限于人类、犬类动物、猫类动物、马类动物、灵长类动物或牛类动物的IL-20R1、IL-20R2和IL-22R1。人类IL-20受体的实例包括hIL-20R1(GenBank登录号NM_014432.2)、hIL-20R2(GenBank登录号NM_144717.2)和hIL-22R1(NM_181309.1)。人类IL-20受体的序列已描述于例如美国专利第6,610,286号；第7,122,632号；第7,393,684号；和第7,537,761号；以及美国专利申请公开案第2006/0263850A1号；第2006/0263851A1号；第2008/0247945A1号和第2009/0074661A1号中。

待用于本文所描述的方法的IL-20拮抗剂为阻断、抑制或降低(包括显著)IL-20生物活性(包括由IL-20信号传导介导的下游路径)的分子，如结合至IL-20和/或诱发针对其的细胞反应的受体。参见US2011/0064731，其以全文引用的方式并入本文中。术语“拮抗剂”意指无任何特定生物作用机制，且认为明确地包括和涵盖与IL-20的所有可能的药理学、生理学和生物化学相互作用，无论直接或间接。出于本发明的目的，将明确理解的是术语“拮抗剂”涵盖所有先前鉴别的术语、标题以及功能状态和特征，从而IL-20自身(例如人类IL-20)、IL-20生物活性(包括但不限于其介导眼病的任何方面的能力)或生物活性的结果在任何有意义的程度上基本上失效、降低或中和，例如至少20％、50％、70％、85％、90％、100％、150％、200％、300％或500％，或10倍、20倍、50倍、100倍、1000倍或10⁴倍。

示例性IL-20拮抗剂包括但不限于抗IL-20抗体、针对IL-20的反义核酸分子(包括针对编码IL-20的核酸的反义核酸)、针对IL-20核酸的小干扰RNA(siRNA)、针对IL-20核酸的微RNA、IL-20抑制化合物、抗IL-20R抗体(例如特异性结合IL-20R1、IL-20R2或由此形成的二聚复合物的抗体)、针对IL-20受体次单位的反义核酸分子、针对编码IL-20受体次单位的核酸的siRNA或微RNA或IL-20R抑制化合物。在一些实施例中，IL-20拮抗剂结合IL-20或IL-20受体且防止形成IL-20-IL-20R复合物，由此抑制IL-20信号传导路径。在其它实施例中，IL-20拮抗剂抑制或降低IL-20合成和/或生产(释放)。此类拮抗剂包括反义分子、siRNA和微RNA。

能够干扰IL-20信号传导路径的抗体

抗体(可与复数形式互换使用)为能够通过位于免疫球蛋白分子的可变区中的至少一个抗原识别位点特异性结合至目标，如碳水化合物、聚核苷酸、脂质、多肽等的免疫球蛋白分子。如本文所用，术语“抗体”不仅涵盖完整(即，全长)多克隆或单克隆抗体，并且还涵盖其抗原结合片段(如Fab、Fab′、F(ab′)₂、Fv)、单链(scFv)、其突变体、包含抗体部分的融合蛋白、人类化抗体、嵌合抗体、双功能抗体、线性抗体、单链抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)和包含具有所需特异性的抗原识别位点的免疫球蛋白分子的任何其它经修饰配置，包括抗体的糖基化变异体、抗体的氨基酸序列变异体和经共价修饰的抗体。抗体包括任何类别的抗体，如IgD、IgE、IgG、IgA或IgM(或其子类)，且抗体不必属于任何特定类别。视其重链的恒定域的抗体氨基酸序列而定，免疫球蛋白可分到不同类别。存在五种主要的免疫球蛋白类别：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，并且这些类别中有几类可以进一步分成子类(同型)，例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。对应于不同的免疫球蛋白类别的重链恒定域分别称为α、δ、ε、γ和μ。不同类别的免疫球蛋白的次单位结构和三维构型是众所周知的。

待用于本文所描述的方法的抗体可为鼠类、大鼠、人类或任何其它来源(包括嵌合人类化抗体)。在一些实例中，抗体包含经修饰恒定区，如免疫惰性的恒定区，例如不触发补体介导的溶解，或不刺激抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)。ADCC活性可使用美国专利第5,500,362号中所公开的方法评估。在其它实施例中，恒定区如欧洲免疫学杂志(Eur.J.Immunol.)(1999)29:2613-2624；PCT申请第PCT/GB99/01441号；和/或英国专利申请第9809951.8号中所述地经修饰。

本文所述的任何抗体可为单克隆或多克隆的。“单克隆抗体”是指同源抗体群且“多克隆抗体”是指异源抗体群。这两个术语不限制抗体来源或其制造方式。

在一个实例中，用于本文所描述的方法的抗体为人类化抗体。人类化抗体是指非人类(例如鼠类)抗体的形式，所述抗体为含有衍生自非人类免疫球蛋白的最小序列的特异性嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白链或其抗原结合片段。人类化抗体大部分为人类免疫球蛋白(受体抗体)，其中来自受体的互补决定区(CDR)的残基被来自具有所需特异性、亲和力和能力的非人类物种(供体抗体)，如小鼠、大鼠或兔的CDR的残基置换。在一些情况下，人类免疫球蛋白的Fv构架区(FR)残基被相应的非人类残基置换。此外，人类化抗体可包含未发现于受体抗体或输入的CDR或构架序列中，但被包括以进一步改进和优化抗体性能的残基。一般来说，人类化抗体将包含基本上所有的至少一个并且通常两个可变域，其中所有或基本上所有的CDR区对应于非人类免疫球蛋白的CDR区并且所有或基本上所有的FR区是人类免疫球蛋白共有序列的FR区。人类化抗体最优还将包含免疫球蛋白恒定区或域(Fc)的至少一部分，通常是人类免疫球蛋白的至少一部分。抗体可具有如WO 99/58572中所述经修饰的Fc区。人类化抗体的其它形式具有一或多个相对于原始抗体改变的CDR(一、二、三、四、五、六个)，其又称为一或多个“衍生自”来自原始抗体的一或多个CDR的CDR。人类化抗体还可涉及亲和力成熟。

在另一实例中，本文所述的抗体为嵌合抗体，其可包括来自人类抗体的重链恒定区和轻链恒定区。嵌合抗体是指具有来自第一物种的可变区或可变区的部分和来自第二物种的恒定区的抗体。通常，在这些嵌合抗体中，轻链和重链的可变区均模拟衍生自一个哺乳动物物种(例如非人类哺乳动物，如小鼠、兔和大鼠)的抗体的可变区，而恒定部分与衍生自另一哺乳动物(如人类)的抗体中的序列同源。在一些实施例中，氨基酸修饰可在可变区和/或恒定区中进行。

在一些实例中，本文公开的抗体特异性结合目标抗原，如人类IL-20或人类IL-20受体(例如IL-20R1)的两个次单位中的一个。“特异性结合”(在本文中可互换使用)至目标或表位的抗体为在所属领域中充分理解的术语，且测定此类特异性结合的方法也在所属领域中众所周知。如果相比于分子与替代目标，分子与特定目标抗原更频繁、更快速、以更长持续时间和/或更大亲和力反应或结合，则将其称为展现“特异性结合”。如果相比于抗体结合至其它物质，抗体以更大亲和力、亲合力、更容易地和/或以更长持续时间结合，则其“特异性结合”至目标抗原。举例来说，特异性(或优先)结合至IL-20表位的抗体为相比于抗体结合至其它IL-20表位或非IL-20表位，以更大亲和力、亲合力、更容易地和/或以更长持续时间结合此IL-20表位的抗体。通过读取此定义，还应理解的是举例来说，特异性结合至第一目标抗原的抗体可能或可能不特异性或优先结合至第二目标抗原。因此，“特异性结合”或“优先结合”未必要求(尽管其可包括)排他性结合。一般来说，但不一定，提及结合意指优先结合。

能够干扰IL-20信号传导路径的抗体可为结合IL-20(例如人类IL-20)且抑制IL-20生物活性和/或由IL-20介导的下游路径的抗体。或者，此类抗体可为结合IL-20受体(IL-20R)，例如结合至IL-20受体的一个或两个次单位，且抑制由IL-20触发的受体介导的下游信号传导路径的抗体。

(i)抗IL-20抗体

抗IL-20抗体为能够结合至IL-20且抑制IL-20生物活性和/或由IL-20信号传导介导的下游路径的抗体。在一些实例中，用于本文所描述的方法的抗IL-20抗体抑制IL-20信号传导路径至少20％、至少40％、至少50％、至少75％、至少90％、至少100％，或至少2倍、至少5倍、至少10倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍或至少1000倍。抗IL-20抗体的实例包括但不限于美国专利第7,435,800号；第7,115,714号；第7,119,175号；第7,151,166号；和第7,393,684号；以及PCT公开案WO 2007/081465；WO 99/27103；WO 2004/085475；和WO2005052000中所公开的那些。

抗IL-20抗体与IL-20(如人类IL-20)的结合亲和力可小于约100nM、约50nM、约10nM、约1nM、约500pM、约100pM或约50pM中的任一个至约2pM中的任一个。结合亲和力可表示为K_D或解离常数，且增加的结合亲和力对应于减小的K_D。测定抗体与IL-20的结合亲和力的一种方式为通过测量抗体的单功能Fab片段的结合亲和力。为了获得单功能Fab片段，抗体(例如IgG)可用木瓜蛋白酶裂解或以重组方式表达。抗体的抗IL-20Fab片段的亲和力可通过表面等离子体共振(BIAcore3000^TM表面等离子体共振(SPR)***，BIAcore公司(BIAcore,INC),新泽西州皮斯卡塔韦市(Piscaway N.J.))测定。获得动力学结合速率(k_on)和解离速率(k_off)(一般在25℃下测量)；且平衡解离常数(K_D)值计算为k_off/k_on。

在一些实施例中，抗体结合人类IL-20，但不显著结合来自另一哺乳动物物种的IL-20。在一些实施例中，抗体结合人类IL-20以及一或多种来自另一哺乳动物物种的IL-20。在其它实施例中，抗体结合IL-20且不与其它细胞因子(如相关细胞因子IL-10、IL-17A、IL-19、IL-22、IL-24和IL-26)显著交叉反应。与抗体结合的表位可为连续或不连续的。

在一些实施例中，本文所述的抗IL-20抗体为抗IL-20抗体7E，其是指单克隆抗体mAb 7E和其功能变异体。MAb 7E由保藏于美国弗吉尼亚州马纳萨斯市博拉瓦德大学10801号20110-2209(10801 University Boulevard,Manassas,Va.20110-2209,U.S.A.)的美国菌种保藏中心(American Type Culture Collection)的融合瘤细胞系产生且被分配保藏号PTA-8687。此融合瘤细胞系将在向本申请授予美国专利后不可撤销地且无限制/条件地向公共公布且将自保藏日期开始持续至少30年的时段(持续专利的可执行有效期)或在最近的日期之后持续5年的时段维持于ATCC中。还参见美国专利第8,206,712号和第7,611,705号，其中的每一个的相关公开内容以引用的方式并入本文中。

mAb7E的重链可变区(V_H)和轻链可变区(V_L)的氨基酸序列编码核苷酸序列生成如下：

mAb 7E重链可变区的核苷酸序列(SEQ ID NO:1)和氨基酸序列(SEQ ID NO:2)

mAb 7E轻链可变区的核苷酸序列(SEQ ID NO:3)和氨基酸序列(SEQ ID NO:4)

mAb7E的功能变异体(等效物)具有与mAb7E基本上相同的表位结合特异性且相对于mAb7E展现中和由IL-20介导的信号传导路径的活性的至少20％(例如30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更大)。在一些实施例中，mAb7E的功能变异体含有与mAb7E相同的负责抗原结合的区域/残基，如相同的确定特异性的CDR中的残基或整个CDR。负责抗原结合的区域/残基可通过所属领域中已知的方法鉴别自mAb7E的重链/轻链序列的氨基酸序列(显示如上)。参见例如www.bioinf.org.uk/abs；阿尔马格罗(Almagro),分子识别杂志(J.Mol.Recognit.)17:132-143(2004)；和科西亚(Chothia)等人,分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)227:799-817(1987)。

另外，确定抗体中的CDR区完全在所属领域的技术内。存在至少两种用于确定CDR的技术∶(1)基于交叉物种序列变异性的方法(即卡巴特(Kabat)等人免疫学感兴趣的蛋白质的序列(Sequences of Proteins of Immunological Interest),(第5版,1991,美国国家卫生研究院(National Institutes of Health),马里兰州贝塞斯达(Bethesda Md.))；以及(2)基于抗原-抗体复合物的结晶学研究的方法(科西亚(Chothia)等人(1989)自然(Nature)342:877；阿尔拉兹卡尼(Al-lazikani)等人(1997)分子生物学杂志(J.Molec.Biol.)273:927-948))。其它方法包括“IMGT”编号方案(乐弗兰克(Lefranc)M P等人,发育与比较免疫学(Dev Comp Immunol),2003年1月；27(l):55-77)，和“AHo”编号方案(霍内格(Honegger)A和普鲁克通(Pluckthun)A,分子生物学杂志,2001年6月8；309(3):657-70)。如本文所用，CDR可指由任一方法或由两种方法的组合定义的CDR。

具有相同CDR的两个重链可变区(或两个轻链可变区)意指如通过相同编号方案确定的两个重链可变区(或轻链可变区)中的CDR相同。

在一些实例中，本文所述的抗IL-20抗体可为mAb7E的功能变异体，其包含V_H链，所述V_H链包括与mAb7E的对应V_H CDR至少75％(例如80％、85％、90％、95％或98％)一致的V_HCDR1、V_H CDR2和V_H CDR3，和V_L链，所述V_L链包括与mAb7E的对应V_H CDR至少75％(例如80％、85％、90％、95％或98％)一致的V_L CDR1、V_L CDR2和V_L CDR3。

或者，mAb7E的功能变异体包含与mAb7E的V_H链(成熟或前体)至少75％(例如80％、85％、90％、95％或98％)一致的V_H链和与mAb7E的V_L链(成熟或前体)至少75％(例如80％、85％、90％、95％或98％)一致的V_L链。

两个氨基酸序列的“百分比一致性”是使用卡林(Karlin)和阿尔丘尔(Altschul)美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)87:2264-68,1990的算法测定，所述算法如卡林和阿尔丘尔美国国家科学院院刊90:5873-77,1993中所修改。这种算法被并入阿尔丘尔等人,分子生物学杂志215:403-10,1990的NBLAST和XBLAST程序(版本2.0)中。BLAST蛋白质检索可以用XBLAST程序进行，评分＝50，字长＝3，以获得与所关注的蛋白质分子同源的氨基酸序列。当两个序列之间存在间隙时，可如阿尔丘尔等人,核酸研究(Nucleic AcidsRes.)25(17):3389-3402,1997中所述地利用Gapped BLAST。当利用BLAST和Gapped BLAST程序时，可使用各别程序(例如XBLAST和NBLAST)的默认参数。

在其它实例中，mAb7E的功能变异体包含V_H链，所述V_H链相比于mAb7E的V_H CDR在V_HCDR区(V_H CDR1、CDR2和/或CDR3)中包括至多5(例如1、2、3、4或5)个氨基酸残基变异，和/或V_L链，所述V_L链相比于mAb7E的V_H CDR在V_L CDR区(V_L CDR1、CDR2和/或CDR3)中包括至多5(例如1、2、3、4或5)个氨基酸残基变异。

mAb7E的功能变异体还公开于美国专利第7,611,705号和US2011/0064731中，其均以引用的方式并入本文中。

在一个实例中，mAb7E的功能变异体为衍生自mAb7E的人类化抗体。下文提供示例性人类化mAb7E抗体HL1和HL2；还参见美国专利第8,597,647号，其中的相关公开内容以引用的方式并入。

人类化抗IL-20抗体HL1和HL2的V_H链的氨基酸序列和编码核苷酸序列：

加下划线的区域是指信号肽且粗体/斜体区域为CDR。SEQ ID NO:8和7分别表示成熟V_H氨基酸序列(缺少信号肽)和其编码核苷酸序列。

人类化抗IL-20抗体HL2的V_L链(VL2)的氨基酸序列和编码核苷酸序列：

加下划线的区域是指信号肽且粗体/斜体区域为CDR。SEQ ID NO:12和11分别表示成熟V_L氨基酸序列(缺少信号肽)和其编码核苷酸序列。

人类化抗体HL1包含与HL2相同的V_H链和除了HL2的成熟V_L的位置2处的I残基经F置换之外，另外与HL2的V_L相同的V_L链(SEQ ID NO:13；成熟形式)。

本文还公开上文指出的人类化抗体HL1和HL2的功能变异体。此类功能变异体可包含V_H链，所述V_H链包含与HL1和HL2的V_H的氨基酸序列(前体或成熟形式；分别为SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:8)至少85％(例如90％、92％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)一致的氨基酸序列，和V_L链，所述V_L链具有与HL2的V_L的氨基酸序列(前体或成熟形式；分别为SEQ IDNO:10和SEQ ID NO:12)至少85％(例如90％、92％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)一致的氨基酸序列。这些变异体能够结合至IL-20分子，尤其人类IL-20分子。在一些实例中，变异体具有与上文所述的示例性人类化抗体类似的抗原结合亲和力(例如具有<4×10^-9的K_d)。

在一些实施例中，本文所述的抗IL-20抗体可结合至与mAb7E相同的人类IL-20的表位或与mAb7E竞争结合至人类IL-20。“表位”是指由抗体识别且与抗体结合的目标抗原上的位点。位点可完全由氨基酸组分构成、完全由蛋白质的氨基酸的化学修饰(例如糖基部分)构成或由其组合构成。重叠表位包括至少一个共同氨基酸残基。表位可为线性的，其长度通常为6-15个氨基酸。或者，表位可为构象的。抗体所结合的表位可通过常规技术确定，例如表位定位法(参见例如下文的描述)。与本文所述的参考抗体结合相同表位的抗体可与示例性抗体结合至完全相同的表位或基本上重叠的表位(例如含有小于3个不重叠氨基酸残基、小于2个不重叠氨基酸残基或仅1个不重叠氨基酸残基)。两个抗体是否彼此竞争结合至同源抗原可通过所属领域中众所周知的竞争分析来确定。

(ii)抗IL-20R抗体

抗IL-20R抗体为能够结合至IL-20R(例如结合至其两个次单位中的任一个或结合至二聚复合物)且抑制IL-20R的生物活性和/或其由IL-20介导的下游路径的抗体。在一些实例中，用于本文所描述的方法的抗IL-20抗体抑制IL-20信号传导路径至少20％、至少40％、至少50％、至少75％、至少90％、至少100％，或至少2倍、至少5倍、至少10倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍或至少1000倍。在一些实例中，抗IL-20R抗体特异性结合IL-20R1，如人类IL-20R1。此类抗体可对IL-20R2或IL-20R1/IL-20R2复合物具有低亲和力或不结合IL-20R2或IL-20R1/IL-20R2复合物。在其它实例中，抗IL-20R抗体特异性结合IL-20R2，如人类IL-20R2。此类抗体可对IL-20R1或IL-20R1/IL-20R2复合物具有低亲和力或不结合IL-20R1或IL-20R1/IL-20R2复合物。在其它实例中，本文所述的抗IL-20R抗体特异性结合IL-20R1/IL-20R2复合物。

抗IL-20R抗体与IL-20R或其次单位(如人类IL-20R或人类IL-20R1)的结合亲和力可小于约100nM、约50nM、约10nM、约1nM、约500pM、约100pM或约50pM中的任一个至约2pM中的任一个。结合亲和力可表示为K_D或解离常数，且增加的结合亲和力对应于减小的K_D。测定抗体与IL-20R的结合亲和力的一种方法为通过测量抗体的单功能Fab片段的结合亲和力。为了获得单功能Fab片段，抗体(例如IgG)可用木瓜蛋白酶裂解或以重组方式表达。抗体的抗IL-20R Fab片段的亲和力可通过表面等离子体共振(BIAcore3000^TM表面等离子体共振(SPR)***，BIAcore公司,新泽西州皮斯卡塔韦市)测定。获得动力学结合速率(k_on)和解离速率(k_off)(一般在25℃下测量)；且平衡解离常数(K_D)值计算为k_off/k_on。

在一些实施例中，抗体结合人类IL-20R或其次单位(例如人类IL-20R1)，且不显著结合来自另一哺乳动物物种的IL-20R。在一些实施例中，抗体结合人类IL-20R以及一或多种来自另一哺乳动物物种的IL-20R。在其它实施例中，抗体结合IL-20R且不与其它细胞因子受体显著交叉反应。与抗体结合的表位可为连续或不连续的。

在一些实施例中，用于本文所描述的方法的抗体为与单克隆抗体mAb7GW或mAb51D、单克隆抗体、其抗原结合片段、或mAb7GW或mAb51D的功能等效物具有相同重链和轻链可变区(V_H和V_L)的抗体。US2011/0256093，其以全文引用的方式并入本文中。下文示出mAb7GW和mAb51D的重链和轻链的氨基酸序列，以及其编码核苷酸序列。

mAb7GW的重链：

氨基酸序列(SEQ ID NO:14)

(斜体区域是指重链恒定区)。

核苷酸序列(SEQ ID NO:15)

ATGA(斜体区域编码重链恒定区)。

mAb7GW的轻链：

氨基酸序列(SEQ ID NO:16)

(斜体区域是指轻链恒定区)。核苷酸序列(SEQ ID NO:17)

(斜体区域编码轻链恒定区)。

mAb51D的重链：

氨基酸序列(SEQ ID NO:18)

(斜体区域是指重链恒定区)。

核苷酸序列(SEQ ID NO:19)

(斜体区域编码重链恒定区)。

mAb51D的轻链：

氨基酸序列(SEQ ID NO:20)

(斜体区域是指轻链恒定区)

核苷酸序列(SEQ ID NO:21)

(斜体区域编码轻链恒定区)。

mAb7GW或mAb51D的功能等效物与mAb7GW或mAb51D具有相同表位结合特异性且相比于mAb7GW或mAb51D展现中和由IL-20R1介导的信号传导路径的活性的至少20％(例如30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更大)。在一些实施例中，mAb7GW或mAb51D的功能等效物含有与mAb7GW或mAb51D相同的负责抗原结合的区域/残基，如相同的确定特异性的CDR中的残基或整个CDR。负责抗原结合的区域/残基可通过所属领域中已知的方法鉴别自mAb7GW或mAb51D的重链/轻链序列的氨基酸序列(上文示出)。参见例如www.bioinf.org.uk/abs；阿尔马格罗,分子识别杂志17:132-143(2004)；和科西亚等人,分子生物学杂志227:799-817(1987)。

在一些实例中，mAb7GW或mAb51D的功能等效物(变异体)包含V_H链，所述V_H链包括与mAb7GW或mAb51D的对应V_H CDR至少75％(例如80％、85％、90％、95％或98％)一致的V_HCDR1、V_H CDR2和V_H CDR3，和V_L链，所述V_L链包括与mAb7GW或mAb51D的对应V_H CDR至少75％(例如80％、85％、90％、95％或98％)一致的V_L CDR1、V_L CDR2和V_L CDR3。

或者，mAb7GW或mAb51D的功能等效物包含与mAb7GW或mAb51D的V_H链(成熟或前体)至少75％(例如80％、85％、90％、95％或98％)一致的V_H链和与mAb7GW或mAb51D的V_L链(成熟或前体)至少75％(例如80％、85％、90％、95％或98％)一致的V_L链。

在其它实例中，mAb7GW或mAb51D的功能等效物包含V_H链，所述V_H链相比于mAb7GW或mAb51D的V_H CDR包括至多5(例如1、2、3、4或5)个V_H CDR区(V_H CDR1、CDR2和/或CDR3)中的氨基酸残基变异，和/或V_L链，所述V_L链相比于mAb7GW或mAb51D的V_H CDR包括至多5(例如1、2、3、4或5)个V_L CDR区(V_L CDR1、CDR2和/或CDR3)中的氨基酸残基变异。

在一些实施例中，本文所述的抗IL-20R抗体可与mAb7GW或mAb51D结合至人类IL-20R的次单位R1的相同表位，或与mAb7GW或mAb51D竞争结合至人类IL-20的次单位R1。

(iii)抗体制备

如本文所述的能够干扰IL-20信号传导路径的抗体可通过所属领域中已知的任何方法制得。参见例如哈洛和莱恩,(1988)抗体：实验室手册,冷泉港实验室,纽约。

在一些实施例中，特异性针对目标抗原(例如人类IL-20或IL-20R1)的抗体可通过常规融合瘤技术制得。任选地偶联到如KLH的载体蛋白的全长目标抗原或其片段可用于对宿主动物免疫接种以产生结合至所述抗原的抗体。对宿主动物免疫接种的途径和排程一般根据用于抗体刺激和生产的确立和常规技术，如本文进一步描述。用于产生小鼠、人类化和人类抗体的一般技术为所属领域中已知的且描述于本文中。预期任何哺乳动物个体(包括人类)或来自其的抗体产生细胞可经操纵以充当产生哺乳动物(包括人类)杂交瘤细胞系的基础。通常，宿主动物用一定量的免疫原(包括如本文所述)腹膜内、肌肉内、经口、皮下、足底和/或皮内接种。

融合瘤可使用科勒(Kohler)B.和米尔斯坦(Milstein),C.(1975)自然(Nature)256:495-497或如由布克(Buck),D.W.等人,体外(In Vitro),18:377-381(1982)修改的一般体细胞杂交技术，由淋巴细胞和永生化骨髓瘤细胞制备。可用的骨髓瘤细胞系，包括但不限于X63-Ag8.653和获自美国加利福尼亚州圣地亚哥市细胞分销中心的索尔克研究所(Salk Institute,Cell Distribution Center,San Diego,Calif.,USA)的那些可用于杂交。一般来说，技术包括使用如聚乙二醇的融合剂来融合骨髓瘤细胞和淋巴细胞，或通过所属领域的技术人员众所周知的电学方法。在融合之后，细胞与融合培养基分离且生长于选择性生长培养基，如次黄嘌呤-氨基喋呤-胸苷(HAT)培养基中，以消除未杂交的亲本细胞。补充有或未补充血清的本文所述的培养基中的任一种可用于培养分泌单克隆抗体的融合瘤。作为细胞融合技术的另一替代方案，EBV永生化B细胞可用于产生本发明的抗IL-20单克隆抗体。融合瘤在必要时经扩增和亚克隆，且通过常规免疫分析程序(例如放射免疫分析、酶免疫分析或荧光免疫分析)对上清液分析抗免疫原活性。

可用作抗体来源的融合瘤涵盖产生能够干扰IL-20信号传导路径的单克隆抗体的亲本融合瘤的所有衍生物、后代细胞。产生此类抗体的融合瘤可使用已知程序在体外或体内生长。单克隆抗体可在必要时通过常规免疫球蛋白纯化程序，如硫酸铵沉淀、凝胶电泳、透析、色谱和超过滤从培养基或体液分离。非所需活性(如果存在)可例如通过在连接至固相的由免疫原制成的吸附剂上运行制剂和使所需抗体洗脱或释放离开免疫原来去除。

使用双官能试剂或衍生剂，例如顺丁烯二酰亚胺基苯甲酰基磺基丁二酰亚胺酯(通过半胱氨酸残基结合)、N-羟基丁二酰亚胺(通过赖氨酸残基)、戊二醛、丁二酸酐、SOCl或R1N＝C＝NR(其中R和R1为不同烷基)，用含有结合到在待免疫的物种中具有免疫原性的蛋白质，例如匙孔螺血氰蛋白、血清白蛋白、牛甲状腺球蛋白或大豆胰蛋白酶抑制剂的目标氨基酸序列的目标抗原或片段对宿主动物免疫接种可产生抗体(例如单克隆抗体)群。

必要时，所关注的抗体(单克隆或多克隆)(例如通过融合瘤产生)可经定序且聚核苷酸序列可接着克隆至载体中用于表达或繁殖。编码所关注的抗体的序列可维持于宿主细胞的载体中且宿主细胞可接着经扩增且冷冻以供将来使用。在替代方案中，聚核苷酸序列可用于遗传操纵以使抗体“人类化”或改善抗体的亲和力(亲和力成熟)，或其它特征。举例来说，如果所述抗体用于人类的临床试验和治疗中，那么可以使所述恒定区工程改造以更类似于人类恒定区，从而避免免疫反应。可能需要基因操纵抗体序列以获得针对目标抗原的更大亲和力和在抑制由IL-20介导的信号传导路径中的更大功效。对于所属领域的技术人员将显而易见的是可对抗体作出一或多个聚核苷酸改变而仍维持其与目标抗原的结合特异性。

在其它实施例中，全人类抗体可通过使用已经工程改造以表达特定人类免疫球蛋白的可商购的小鼠获得。经设计以产生更合意(例如全人类抗体)或更稳定免疫反应的转基因动物也可用于产生人类化或人类抗体。此类技术的实例为获自安进公司(Amgen,Inc.)(加利福尼亚州弗里蒙特(Fremont,Calif.))的Xenomouse^RTM和获自美达瑞公司(Medarex,Inc.)(新泽西州普林斯顿(Princeton,N.J.))的HuMAb-Mouse^RTM和TC Mouse^TM。在另一替代方案中抗体可通过噬菌体呈现技术以重组方式制得。参见例如美国专利第5,565,332号；第5,580,717号；第5,733,743号；和第6,265,150号；以及温特(Winter)等人,(1994)免疫学年鉴(Annu.Rev.Immunol.)12:433-455。或者，噬菌体呈现技术(麦卡弗蒂(McCafferty)等人,(1990)自然(Nature)348:552-553)可用于由来自未免疫供体的免疫球蛋白可变(V)域基因谱系在体外产生人类抗体和抗体片段。

完整抗体(全长抗体)的抗原结合片段可经由常规方法制备。举例来说，F(ab′)2片段可通过抗体分子的胃蛋白酶消化产生，且Fab片段可通过还原F(ab′)2片段的二硫桥键产生。

基因工程改造抗体，如人类化抗体、嵌合抗体、单链抗体和双特异性抗体可经由例如常规重组技术产生。在一个实例中，编码特异性针对目标抗原的单克隆抗体的DNA可使用常规程序(例如通过使用能够特异性结合至编码单克隆抗体的重链和轻链的基因的寡核苷酸探针)容易地分离和定序。融合瘤细胞充当此类DNA的优选来源。一旦分离，就可以将DNA放入一或多种表达载体中，接着将其转染到不以其它方式产生免疫球蛋白的宿主细胞中，以在重组宿主细胞中合成单克隆抗体，所述宿主细胞例如为大肠杆菌细胞、猴COS细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或骨髓瘤细胞。参见例如PCT公开号WO87/04462。举例来说，可以接着通过用人类重链和轻链恒定域的编码序列替代同源鼠类序列，莫里森(Morrison)等人,(1984)美国国家科学院院刊(Proc.Nat.Acad.Sci.)81:6851，或通过将非免疫球蛋白多肽的编码序列的全部或一部分共价接合至免疫球蛋白编码序列来修饰DNA。以所述方式，可制备具有目标抗原的结合特异性的基因工程改造抗体，如“嵌合”或“杂交”抗体。

开发用于产生“嵌合抗体”的技术为所属领域中众所周知的。参见例如莫里森等人(1984)美国国家科学院院刊81,6851；纽博格(Neuberger)等人(1984)自然(Nature)312,604；和武田(Takeda)等人(1984)自然314:452。

构筑人类化抗体的方法也是所属领域中众所周知的。参见例如奎因(Queen)等人,美国国家科学院院刊,86:10029-10033(1989)。在一个实例中，亲本非人类抗体的V_H和V_L的可变区遵循所属领域中已知的方法进行三维分子建模分析。随后，使用相同分子建模分析鉴别预测对于形成适当CDR结构重要的构架氨基酸残基。同时，使用亲本V_H和V_L序列作为搜索查询从任何抗体基因数据库鉴别具有与亲本非人类抗体的氨基酸序列同源的氨基酸序列的人类V_H和V_L链。接着选择人类V_H和V_L受体基因。

所选人类受体基因内的CDR区可经来自亲本非人类抗体或其功能变异体的CDR区置换。必要时，预测在与CDR区相互作用中重要的亲本链的构架区内的残基(参见上文描述)可用于替代人类受体基因中的对应残基。

单链抗体可经由重组技术，通过将编码重链可变区的核苷酸序列与编码轻链可变区的核苷酸序列连接而制备。优选地，柔性连接子并入两个可变区之间。或者，关于产生单链抗体描述的技术(美国专利第4,946,778号和第4,704,692号)可经调适以产生噬菌体ScFv文库且特异性针对IL-20R1或IL-20R2的ScFv克隆体可遵循常规程序从所述文库鉴别。阳性克隆体可进行进一步筛选以鉴别抑制IL-20受体活性的那些。

可使用所属领域中众所周知的方法表征遵循所属领域中已知且描述于本文中的方法获得的抗体。举例来说，一种方法为鉴别抗原所结合的表位，或“表位定位”。存在多种用于定位和表征表位于蛋白质上的位置的所属领域中已知的方法，包括解析抗体-抗原复合物的晶体结构、竞争分析、基因片段表达分析和基于合成肽的分析，如例如哈洛和莱恩,使用抗体实验指南,冷泉港实验室出版社,纽约冷泉港,1999的第11章中所描述。在另一实例中，表位定位可用于测定抗体所结合的序列。表位可为线性表位，即包含于氨基酸的单一延伸部中，或由氨基酸的三维相互作用形成的可能未必包含于单一延伸部(一级结构线性序列)中的构象表位。具有改变长度(例如长度为至少4-6个氨基酸)的肽可经分离或合成(例如以重组方式)且用于抗体结合分析。在另一实例中，抗体所结合的表位可通过使用衍生自目标抗原序列的重叠肽并且通过抗体确定结合而在***筛选中确定。根据基因片段表达分析，编码目标抗原的开放阅读框架以随机方式或通过特定基因构筑体片段化且测定抗原的经表达片段与待测试抗体的反应性。基因片段可例如通过PCR产生且接着在放射性氨基酸存在下在体外转录和翻译为蛋白质。接着通过免疫沉淀和凝胶电泳测定抗体与放射性标记的抗原片段的结合。某些表位也可通过使用显示于噬菌体粒子表面上的随机肽序列的大型文库(噬菌体文库)鉴别。或者，可在简单结合分析中对重叠肽片段的界定文库测试与测试抗体的结合。在另一实例中，可进行抗原结合域突变诱发、域交换实验和丙氨酸扫描突变诱发以鉴别对于表位结合来说所需、足够和/或必需的残基。举例来说，域交换实验可使用目标抗原的突变体进行，其中IL-20多肽的各种片段已用来自紧密相关、但抗原上不同的蛋白质(如神经营养因子蛋白家族的另一成员)的序列替换(交换)。通过评估抗体与突变IL-20的结合，可评估特定抗原片段对于抗体结合的重要性。

或者，可使用已知结合至相同抗原的其它抗体进行竞争分析以确定抗体是否与其他抗体结合至相同表位。竞争分析为所属领域的技术人员所众所周知。

其它IL-20拮抗剂

除了如上文所述的能够干扰IL-20信号传导路径的抗体以外的IL-20拮抗剂可用于本文所描述的方法。

在本发明的一些实施例中，IL-20拮抗剂包含至少一种能够阻断或减少功能性IL-20(例如人类IL-20)或IL-20受体的次单位(例如IL-20R1)的表达的反义核酸分子。IL-20和IL-20受体次单位的核苷酸序列为已知的且可容易地获自可公开使用的数据库。参见以上公开内容。制备将在不与其它聚核苷酸交叉反应的情况下特异性结合目标mRNA的反义寡核苷酸分子是常规的。示例性靶向位点包括但不限于起始密码子、5′调节区、编码序列和3′非翻译区。在一些实施例中，寡核苷酸的长度为约10至100个核苷酸、约15至50个核苷酸、约18至25个核苷酸或更长。寡核苷酸可包含主链修饰，例如所属领域中众所周知的硫代磷酸酯键联和2′-0糖修饰。

或者，IL-20/IL-20R表达和/或释放可使用所属领域中众所周知的基因敲落、吗啉基寡核苷酸、小干扰RNA(siRNA或RNAi)、微RNA或核酶方法降低。RNA干扰(RNAi)为其中dsRNA引导信使RNA的同源序列特异性降解的过程。在哺乳动物细胞中，RNAi可通过小干扰RNA(siRNA)的21个核苷酸的双螺旋在不活化宿主干扰素反应的情况下触发。本文公开的方法中所用的dsRNA可为siRNA(含有两条分离且互补的RNA链)或短发夹RNA(即，形成紧密发夹结构的RNA链)，其均可基于靶基因的序列而设计。或者，其可为微RNA。

任选地，如上文所述的待用于本文所述的方法的核酸分子(例如反义核酸、小干扰RNA或微RNA)含有非天然存在的核碱基、糖或共价核苷间键(主链)。此类经修饰的寡核苷酸赋予所希望的特性，例如增强的细胞吸收、提高的对标靶核酸的亲和力和增加的体内稳定性。

在一个实例中，核酸具有经修饰主链，包括保留磷原子的那些(参见例如美国专利3,687,808；4,469,863；5,321,131；5,399,676；和5,625,050)和不具有磷原子的那些(参见例如美国专利5,034,506；5,166,315；和5,792,608)。含磷的经修饰主链的实例包括但不限于硫代磷酸酯、手性硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、磷酸三酯、氨基烷基-磷酸三酯、甲基和其它烷基膦酸酯(包括3′-亚烷基膦酸酯、5′-亚烷基膦酸酯和手性膦酸酯)、亚膦酸酯、氨基磷酸酯(包括3′-氨基氨基磷酸酯和氨基烷基氨基磷酸酯)、硫代氨基磷酸酯、硫代烷基膦酸酯、硫代烷基磷酸三酯、硒代磷酸酯和具有3′-5′键或2′-5′键的硼烷磷酸酯。此类主链还包括具有反向极性，即3′-3′、5′-5′或2′-2′键的那些。不包括磷原子的经修饰主链由短链烷基或环烷基核苷间键、混合杂原子和烷基或环烷基核苷间键或一或多个短链杂原子或杂环核苷间键形成。此类主链包括具有吗啉基键(部分由核苷的糖部分形成)的主链；硅氧烷主链；硫醚、亚砜和砜主链；甲乙酰基和硫代甲乙酰基主链；亚甲基甲乙酰基和硫代甲乙酰基主链；核糖乙酰基主链；含有烯烃的主链；氨基磺酸酯主链；亚甲基亚氨基和亚甲基肼基主链；磺酸酯和磺酰胺主链；酰胺主链；以及其它具有混合N、O、S和CH₂组成部分的主链。

在另一实例中，用于所公开的方法中的核酸包括一或多个经取代糖部分。此类经取代的糖部分可在其2′位包括以下基团之一∶OH；F；O-烷基、S-烷基、N-烷基、O-烯基、S-烯基、N-烯基；O-炔基、S-炔基、N-炔基和O-烷基-O-烷基。在这些基团中，烷基、烯基和炔基可为经取代或未经取代的C₁至C₁₀烷基或C₂至C₁₀烯基和炔基。其还可以在其2′位包括杂环烷基、杂环烷芳基、氨基烷氨基、聚烷基氨基、经取代的硅烷基、RNA裂解基团、报告基团、嵌入剂、用于提高寡核苷酸的药物动力学特性的基团或用于提高寡核苷酸的药效学特性的基团。优选的经取代糖部分包括具有2′-甲氧基乙氧基、2′-二甲基氨基氧基乙氧基和2′-二甲基氨基乙氧基乙氧基的那些。参见马丁(Martin)等人,瑞士化学学报(Helv.Chim.Acta),1995,78,486-504。

在另一实例中，核酸包括一或多个经修饰天然核碱基(即，腺嘌呤、鸟嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶和尿嘧啶)。经修饰核碱基包括以下各者中描述的那些：美国专利3,687,808、聚合物科学和工程化简明百科全书(The Concise Encyclopedia Of Polymer Science AndEngineering),第858-859页,克洛斯威兹(Kroschwitz),J.I.编约翰·威利父子公司,1990,恩利施(Englisch)等人,应用化学国际版(Angewandte Chemie,InternationalEdition),1991,30,613和桑维(Sanghvi),Y.S.,第15章,反义研究和应用(AntisenseResearch and Applications),第289-302页,CRC出版社,1993。这些核碱基中的一些特别适用于增加反义寡核苷酸于其目标核酸的结合亲和力。这些包括5-取代的嘧啶、6-氮杂嘧啶和N-2、N-6和O-6取代的嘌呤(例如2-氨基丙基-腺嘌呤、5-丙炔基尿嘧啶和5-丙炔基胞嘧啶)。参见桑维等人编,反义研究和应用,CRC出版社,波卡拉顿,1993,第276-278页)。

核酸中的任一种可通过所属领域中已知的方法合成。参见例如卡拉瑟斯(Caruthers)等人,1992,酶学方法(Methods in Enzymology)211,3-19，温科特(Wincott)等人,1995,核酸研究(Nucleic Acids Res.)23,2677-2684，温科特等人,1997,分子生物学方法(Methods Mol.Bio.)74,59，布伦南(Brennan)等人,1998,生物技术与生物工程(Biotechnol Bioeng.),61,33-45和布伦南Brennan,美国专利第6,001,311号。其也可从表达载体转录且使用标准技术分离。

在其它实施例中，IL-20拮抗剂包含至少一种IL-20或IL-20R抑制化合物。如本文所用，“IL-20抑制化合物”或“IL-20R抑制化合物”是指直接或间接降低、抑制、中和或消除IL-20/IL-20R生物活性的除抗IL-20或抗IL-20R抗体以外的化合物。IL-20/IL-20R抑制化合物应展现以下特征中的任何一或多个：(a)结合至IL-20或IL-20R且抑制其生物活性和/或由IL-20信号传导功能介导的下游路径；(b)预防、改善或治疗眼病的任何方面；(c)阻断或降低IL-20受体活化；(d)增加IL-20或IL-20R的清除率；(e)抑制(减少)IL-20或IL-20R合成、产生或释放。所属领域的技术人员可制备其它小分子抑制化合物。

在一些实施例中，IL-20或IL-20R抑制化合物为IL-20突变体、IL-19突变体或IL-24突变体，其可结合至IL-20受体但无法引发信号转导。此类突变体可阻断野生型IL-20与IL-20受体的结合，因此阻止IL-20信号转导。

在其它实施例中，本文所述的IL-20或IL-20R抑制化合物为小分子，其可具有约100至20,000道尔顿、500至15,000道尔顿或1000至10,000道尔顿中的任一个的分子量。小分子文库为可商购的。小分子可使用所属领域中已知的任何方法投与，包括吸入、腹膜内、静脉内、肌肉内、皮下、鞘内、脑室内、经口、肠内、非经肠、鼻内或经皮。一般来说，当根据本发明的IL-20拮抗剂为小分子时，其将分成一至三个或更多个剂量以每千克患者重量0.1至300毫克的比率投与。对于正常体重的成年患者，可投与每剂量1mg至5g范围内的剂量。

上文所提及的小分子可获自化合物文库。文库可为空间上可寻址的平行固相或溶液相文库。参见例如祖凯曼(Zuckermann)等人药物化学杂志(J.Med.Chem.)37,2678-2685,1994；和兰姆(Lam)抗癌药物设计(Anticancer Drug Des.)12:145,1997。合成化合物文库的方法为所属领域中众所周知的，例如德威特(DeWitt)等人美国国家科学院院刊(PNASUSA)90:6909,1993；厄尔布(Erb)等人美国国家科学院院刊91:11422,1994；祖凯曼等人药物化学杂志37:2678,1994；曹(Cho)等人科学(Science)261:1303,1993；卡瑞尔(Carrell)等人应用化学英文国际版(Angew Chem.Int.Ed.Engl.)33:2059,1994；卡瑞尔(Carell)等人应用化学英文国际版33:2061,1994；和盖洛普(Gallop)等人药物化学杂志37:1233,1994。化合物文库可呈现于溶液中(例如霍顿(Houghten)生物技术(Biotechniques)13:412-421,1992)，或珠粒上(兰姆自然354:82-84,1991)、芯片上(弗德(Fodor)自然364:555-556,1993)、细菌上(美国专利第5,223,409号)、孢子上(美国专利第5,223,409号)、质粒上(卡尔(Cull)等人美国国家科学院院刊89:1865-1869,1992)或噬菌体上(斯科特和史密斯科学249:386-390,1990；德弗林(Devlin)科学249:404-406,1990；科维拉(Cwirla)等人美国国家科学院院刊87:6378-6382,1990；费利斯(Felici)分子生物学杂志222:301-310,1991；和美国专利第5,223,409号)。

在其它实施例中，IL-20拮抗剂可为包含IL-20受体(如IL-20R1、IL-20R2或IL-22R1)的胞外部分的多肽，其中多肽特异性结合于11-20且阻断其与一或多种IL-20受体的相互作用。在一些实施例中，IL-20受体的胞外部分融合至抗体的Fc域。可溶受体的实例描述于PCT WO 01/46232中。

鉴别IL-20拮抗剂

IL-20拮抗剂可使用所属领域中已知的方法鉴别或表征，借以检测和/或测量IL-20生物活性的降低、改善或中和。举例来说，ELISA型分析可适合于通过测量由IL-20级联活化的蛋白质的磷酸化来定性或定量测量IL-20介导的激酶活化。实例包括JNK、ERK、AKT、p38、STAT3和TRAF6。

IL-20拮抗剂也可通过将候选试剂与IL-20或IL-20R一起培育且监测以下特征中的任何一或多个来鉴别：(a)结合至IL-20或IL-20R且抑制其生物活性和/或由IL-20信号传导功能介导的下游路径；(b)预防、改善或治疗眼病的任何方面；(c)阻断或降低IL-20受体活化；(d)增加IL-20或IL-20R的清除率；(e)抑制(减少)IL-20合成、产生或释放。在一些实施例中，IL-20拮抗剂是通过将候选试剂与IL-20或IL-20R一起培育且监测结合和IL-20或IL-20R的生物活性的伴随降低或中和来鉴别。结合分析可用经纯化IL-20或IL-20R多肽，或用天然地表达或经转染以表达IL-20或IL-20R多肽的细胞进行。在一个实施例中，结合分析为竞争性结合分析，其中评估候选抗体与已知IL-20拮抗剂关于IL-20或IL-20R结合进行竞争的能力。分析可以各种形式，包括ELISA形式进行。在其它实施例中，IL-20拮抗剂是通过将候选试剂与IL-20或IL-20R(例如IL-20R1)一起培育且监测IL-20R1/IL-20R2复合物形成或IL-20R2/IL-22R1复合物形成的伴随抑制来鉴别。在初始鉴别后，候选IL-20拮抗剂的活性可通过已知测试靶向生物活性的生物分析进一步确认和细化。或者，生物分析可用于直接筛选候选物。

下文提供的实例提供可用于筛选候选IL-20拮抗剂的多种分析。生物分析包括但不限于在候选IL-20拮抗剂存在下测定IL-20与细胞的竞争性结合的流式细胞测量术；和在肾上皮细胞中抑制IL-20诱发的细胞凋亡。另外，RT-PCR或实时PCR可用于直接测量IL-20表达或测量通过IL-20上调的基因(如TNFαMCP-1、IL-1β、IL-6和VEGF)的表达。

药物组合物

上述IL-20拮抗剂中的一种或多种可与药学上可接受的载剂(赋形剂)，包括缓冲剂混合，以形成用于缓解眼病的药物组合物。“可接受”意指载剂必须与组合物的活性成分相容(并且优选地能够使活性成分稳定)且对待治疗的个体无害。药学上可接受的赋形剂(载剂)包括缓冲剂，其为所属领域中众所周知的。参见例如雷明顿：医药科学和实践(Remington:The Science and Practice of Pharmacy)第20版(2000)利平科特威廉姆斯和威尔金斯(Lippincott Williams and Wilkins),K.E.胡佛(Hoover)编。在一个实例中，本文所述的药物组合物含有超过一种识别目标抗原的不同表位的抗IL-20或抗IL-20R抗体。在另一实例中，药物组合物包含至少两种不同类型的IL-20拮抗剂(例如一种抗体和一种小分子)。

待用于本发明方法的药物组合物可包含呈冻干调配物或水溶液形式的药学上可接受的载剂、赋形剂或稳定剂。(雷明顿：医药科学和实践第20版(2000)利平科特威廉姆斯和威尔金斯,K.E.胡佛编)。可接受的载剂、赋形剂或稳定剂在所用剂量和浓度下对接受者无毒性，并且可包含缓冲剂，如磷酸盐、柠檬酸盐和其它有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(如十八烷基二甲基苯甲基氯化铵；氯化六羟季铵；苯扎氯铵(benzalkonium chloride)、苄索氯铵(benzethonium chloride)；苯酚、丁醇或苯甲醇；对羟基苯甲酸烷酯，如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、双糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或聚葡萄糖；螯合剂，如EDTA；糖，如蔗糖、甘露糖醇、海藻糖或山梨糖醇；成盐相对离子，如钠；金属复合物(例如，Zn-蛋白质复合物)；和/或非离子表面活性剂，如TWEEN^TM、PLURONICS^TM或聚乙二醇(PEG)。药学上可接受的赋形剂进一步描述于本文中。

在一些实例中，本文所述的药物组合物包含含有IL-20拮抗剂(如抗体)的脂质体，其可通过所属领域中已知的方法制备，所述方法如艾伯斯坦(Epstein)等人,美国国家科学院院刊82:3688(1985)；黄(Hwang)等人,美国国家科学院院刊77:4030(1980)；以及美国专利第4,485,045号和第4,544,545号中所述。具有增强的循环时间的脂质体公开于美国专利第5,013,556号中。尤其有用的脂质体可以通过逆相蒸发法用脂质组合物产生，所述脂质组合物包含磷脂酰胆碱、胆固醇和PEG衍生化的磷脂酰乙醇胺(PEG-PE)。将脂质体挤出通过规定孔径的过滤器，得到具有所期望的直径的脂质体。

还可将活性成分(例如IL-20拮抗剂)包覆在微胶囊中，所述微胶囊例如通过凝聚技术或通过界面聚合制备，例如羟甲基纤维素或明胶微胶囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊，分别在胶状药物递送***(例如脂质体、白蛋白微球体、微乳液、纳米粒子和纳米胶囊)中或在粗乳液中。此类技术为所属领域中已知的，参见例如雷明顿：医药科学和实践(Remington,The Science and Practice of Pharmacy)第20版马克出版社(MackPublishing)(2000)。

在其它实例中，本文所述的药物组合物可以持续释放形式调配。持续释放制剂的适合实例包括含有所述抗体的固体疏水性聚合物的半渗透基质，所述基质呈成形制品，例如膜或微胶囊形式。持续释放基质的实例包括聚酯、水凝胶(例如聚(甲基丙烯酸2-羟乙酯)或聚(乙烯醇))、聚丙交酯(美国专利第3,773,919号)、L-谷氨酸和L-谷氨酸7乙酯的共聚物、不可降解的乙烯-乙酸乙烯酯、如LUPRON DEPOT^TM(由乳酸-乙醇酸共聚物和乙酸亮丙立德(leuprolide acetate)构成的可注射微球体)的可降解的乳酸-乙醇酸共聚物、乙酸异丁酸蔗糖酯以及聚D-(-)-3-羟基丁酸。

待用于体内投与的药物组合物必须无菌。这易于通过例如经无菌过滤膜进行过滤而实现。治疗性组合物一般置于具有无菌接入端口的容器中，例如具有可被皮下注射针刺穿的塞子的静脉内溶液袋或小瓶。

本文所述的药物组合物可呈单位剂型，如片剂、丸剂、胶囊、粉末、颗粒、溶液或悬浮液或栓剂，用于经口、非经肠或经直肠投与，或通过吸入或吹入投与。

为了制备如片剂的固体组合物，主要活性成分可与药物载剂，例如常规压片成分，如玉米淀粉、乳糖、蔗糖、山梨糖醇、滑石、硬脂酸、硬脂酸镁、磷酸二钙或胶，和其它药物稀释剂，例如水混合，以形成含有本发明化合物或其无毒的药学上可接受的盐的均质混合物的固体预调配组合物。当提及这些预调配组合物是均匀的时，意味着活性成分通常均匀分散在整个组合物中，以便组合物可以容易地再分成同等有效的单位剂型，如片剂、丸剂以及胶囊。此固体预调配组合物接着再分成含有0.1至约500mg本发明的活性成分的上述类型的单位剂型。新颖组合物的片剂或丸剂可经包覆或另外混配，以得到具有长效优势的剂型。例如，片剂或丸剂可以包括内部剂量和外部剂量组分，后者呈在前者上的包膜形式。两种组分可以通过肠溶层分开，肠溶层用于抵抗胃中的崩解并允许内部组分完整地进入十二指肠或延迟释放。多种材料可以用于此类肠溶层或包衣，这些材料包含多种聚合酸和聚合酸与如虫胶、鲸蜡醇和乙酸纤维素之类材料的混合物。

合适的表面活性剂尤其包括非离子试剂，如聚氧乙烯脱水山梨醇酐(例如Tween^TM20、40、60、80或85)和其它脱水山梨糖醇(例如Span^TM 20、40、60、80或85)。具有表面活性剂的组合物将宜包含0.05与5％之间的表面活性剂，且可在0.1与2.5％之间。应了解，必要时可添加其它成分，例如甘露糖醇或其它药学上可接受的媒剂。

合适的乳液可使用可商购的脂肪乳液，如Intralipid^TM、Liposyn^TM、Infonutrol^TM、Lipofundin^TM和Lipiphysan^TM制备。活性成分可溶解于预先混合的乳液组合物中，或者其可溶解于油(例如大豆油、红花油、棉籽油、芝麻油、玉米油或杏仁油)中且在与磷脂(例如卵磷脂、大豆磷脂或大豆卵磷脂)和水混合时形成乳液。应了解，可添加其它成分，例如甘油或葡萄糖以调节乳液的张力。合适的乳液将通常含有至多20％，例如5与20％之间的油。脂肪乳液可包含0.1与1.0μm，尤其0.1与0.5μm之间的脂肪滴，且具有5.5至8.0范围内的pH。

乳液组合物可为通过混合IL-20拮抗剂与Intralipid^TM或其组分(大豆油、卵磷脂、甘油和水)制备的那些。

吸入或吹入药物组合物包括在药学上可接受的水性或有机溶剂中的溶液和悬浮液，或其混合物和粉末。液体或固体组合物可含有如上文所阐述的合适的药学上可接受的赋形剂。在一些实施例中，组合物通过用于局部或全身作用的经口或经鼻呼吸道途径投与。

优选无菌的药学上可接受的溶剂中的组合物可以通过使用气体来雾化。雾化溶液可从雾化装置直接吸入或雾化装置可附接至面罩、围罩或间歇正压呼吸机。可优选地从以适当方式递送调配物的装置经口或经鼻投与溶液、悬浮液或粉末组合物。

IL-20拮抗剂治疗眼病的用途

为了实践本文公开的方法，有效量的上文所述的药物组合物可经由合适的途径，如静脉内投与，例如以推注形式或通过在一段时间内连续输注，通过眼内注射、玻璃体内注射、基质内注射、视网膜下注射或通过局部途径向需要治疗的个体(例如人类)投与。

通过本文所描述的方法治疗的个体可为哺乳动物，更优选为人类。哺乳动物包括但不限于农畜、竞技动物、宠物、灵长类动物、马、狗、猫、小鼠和大鼠。需要治疗的人类个体可为患有眼病、处于眼病的风险下或疑似患有眼病的人类患者，所述眼病为例如干眼病(DED)，其可为泪液缺乏性干眼或蒸发过强性干眼，和年龄相关性黄斑变性(ADM)，包括湿性ADM或干性ADM。其它视网膜病况包括但不限于糖尿病黄斑水肿(DME)和DME中的糖尿病性视网膜病变(DR)，以及视网膜静脉阻塞(RVO)后的黄斑水肿。患有如本文所述的眼病的个体可通过常规医学检查来鉴别，例如全面的眼科检查、测量泪液量、测定泪液质量、视力测试、扩张型眼科检查、阿姆斯勒(Amsler)网格测试、荧光素血管造影或光学相干断层扫描(OCT)。疑似患有眼病的个体可显示病症的一或多种症状，例如眼部灼烧感、眼睛内部或周围的粘液、对光敏感、眼睛发红、视力模糊、眼疲劳、流眼水、视觉畸变、中央视力下降、颜色强度或亮度降低或视力浑浊。处于眼病的风险下的个体可为具有所述病症的一或多个风险因素的个体。举例来说，与眼病相关的风险因素包括(a)年龄(眼病在超过40岁的人群中更频繁)，(b)吸烟，(c)性别，(d)家族病史，(e)药物治疗，和(f)如慢性发炎的医学病况。

如本文所用的“有效量”是指单独或与一或多种其它活性剂组合赋予个体治疗效果所需的每种活性剂的量。如所属领域的技术人员所认知，有效量可变化，取决于以下：所治疗的具体病况、病况严重程度、个别患者参数(包括年龄、身体状况、体型、性别和体重)、治疗持续时间、并行疗法(如果存在)的性质、特定投药途径以及保健医生的知识和专长范围内的类似因素。这些因素为所属领域的普通技术人员众所周知并且可仅用常规实验便可解决。通常优选使用个别组分或其组合的最大剂量，即根据合理医学判断的最高安全剂量。然而所属领域的普通技术人员应了解，患者因医学原因、心理原因或实际上任何其它原因可坚持较低剂量或可耐受剂量。

经验考虑因素，如半衰期一般将有助于确定剂量。举例来说，与人类免疫***相容的抗体，如人类化抗体或全人类抗体可用于延长抗体的半衰期和预防抗体被宿主的免疫***攻击。可在疗程中测定和调节投与频率，且一般但未必基于眼病的治疗和/或抑制和/或改善和/或延缓。或者，IL-20拮抗剂的持续性连续释放调配物可为适当的。用于实现持续释放的各种调配物和装置为所属领域中已知的。

在一个实例中，如本文所述的IL-20拮抗剂的剂量可在已给予IL-20拮抗剂的一或多次投药的个体中凭经验确定。给予个体递增剂量的拮抗剂。为了评估拮抗剂的功效，可追踪眼病的指标(如泪液量)。

一般来说，关于投与本文所述的抗体中的任一种，初始候选剂量可为约2mg/kg。出于本发明的目的，取决于上文所提及的因素，典型日剂量可在以下中的任一个范围内：约0.1pg/kg至3pg/kg、至30pg/kg、至300pg/kg、至3mg/kg、至30mg/kg、至100mg/kg或更大。对于在数天或更长时间内重复投药，取决于病况，治疗持续直至出现症状的所需抑制或直至实现足够治疗水准以缓解眼病或其症状。示例性给药方案包含投与约2mg/kg的初始剂量，接着为约1mg/kg抗体的每周维持剂量，或接着为每隔一周约1mg/kg的维持剂量。但是，取决于执业医生希望实现的药物动力学衰减模式，其它给药方案可能适用。举例来说，涵盖一周给药一至四次。在一些实施例中，可使用约3μg/mg至约2mg/kg(如约3μg/mg、约10μg/mg、约30μg/mg、约100μg/mg、约300μg/mg、约1mg/kg和约2mg/kg)范围内的剂量。在一些实施例中，给药频率为每周、每2周、每4周、每5周、每6周、每7周、每8周、每9周、或每10周一次；或每个月、每2个月、或每3个月、或更长时间一次。通过常规技术和分析容易地监测此疗法的进展。给药方案(包括使用的抗体)可随时间推移而变化。

当IL-20拮抗剂不为抗体时，其可分成一至三个剂量以每千克患者体重约0.1至300mg的比率，或如本文中所公开地投与。在一些实施例中，对于正常体重的成年患者，可投与约0.3至5.00mg/kg范围内的剂量。特定给药方案，即剂量、时序和重复次数将取决于特定个体和所述个体的病史，以及个别药剂的特性(如药剂的半衰期，和所属领域中众所周知的其它考虑因素)。

出于本发明的目的，IL-20拮抗剂的适当剂量将取决于所用的特定IL-20拮抗剂(或其组合物)、眼病的类型和严重度、出于预防或治疗目的而投与拮抗剂、先前疗法、患者的临床史和对拮抗剂的反应和主治医师的判断。通常，临床医师将投与IL-20拮抗剂，如抗IL-20或抗IL-20R抗体直至达到实现所需结果的剂量。投与IL-20拮抗剂可为连续或间歇的，其取决于例如受体的生理状况、投与目的为治疗或预防以及熟练的执业医生已知的其它因素。投与IL-20拮抗剂(例如如果IL-20拮抗剂为抗IL-20抗体)可在预先选择的时段内基本上连续或可以一系列间隔开的剂量，例如在产生眼病之前、期间或之后。

如本文所用，术语“治疗”是指向具有眼病、眼病症状或患病倾向性的个体施用或投与包括一或多种活性剂的组合物，目的为治愈、治疗、减轻、缓解、改变、补救、改善、改良或影响病症、疾病症状或患病倾向性。

缓解眼病包括延缓疾病的发展或进展，或减轻疾病严重性。缓解疾病未必需要治愈结果。如本文所用，“延缓”疾病(如眼病)发展意指推迟、阻碍、减缓、延迟、稳定和/或推迟疾病进展。此延缓可以是时间长度变化，取决于疾病病史和/或所治疗的个体。“延缓”或缓解疾病发展，或延缓疾病发作的方法为当相比于不使用所述方法时，降低在给定时间范围内产生疾病的一或多种症状的概率和/或减轻在给定时间范围内症状的程度。此类比较通常基于临床研究，使用数量为足以得到统计显著结果的个体。

疾病“发展”或“进展”意指疾病的初始表现和/或随之而来的进展。疾病发展可使用也在所属领域中已知的标准临床技术检测和评估。但是，发展还指可能不可检测的进展。出于本发明的目的，发展或进展是指症状的生物过程。“发展”包括发生、复发和发作。如本文所用，眼病的“发作”或“发生”包括初发和/或复发。

在一些实施例中，本文所述的IL-20拮抗剂(例如抗IL-20抗体或抗IL-20R抗体，如抗IL-20R1抗体)以足以降低IL-20受体/IL-20介导的信号传导水平至少20％(例如30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更大)的量向需要治疗的个体投与。在其它实施例中，拮抗剂以有效减少至少眼病症状的量投与。

取决于待治疗的眼病的类型(例如DED或AMD)，药学领域的技术人员已知的常规方法可用于向个体投与药物组合物。此组合物也可经由其它常规途径投与，例如经口、非经肠、通过吸入气雾剂、局部、经直肠、经鼻、经颊、经***或经由植入式贮器投与。如本文所用的术语“非经肠”包括皮下、皮內、静脉内、肌肉内、关节内、动脉内、滑膜内、胸骨内、鞘内、病灶内以及颅内注射或输注技术。另外，其可经由可注射积存投与途径，如使用1、3或6个月积存可注射或可生物降解材料和方法向个体投与。

可注射组合物可含有各种载剂，如植物油、二甲基乙酰胺、二甲基甲酰胺、乳酸乙酯、碳酸乙酯、十四烷酸异丙酯、乙醇和多元醇(甘油、丙二醇、液体聚乙二醇等)。对于静脉内注射来说，可通过滴注方法投与水溶性抗体，借以输注含有抗体和生理学上可接受的赋形剂的药物调配物。生理学上可接受的赋形剂可包括例如5％右旋糖、0.9％生理盐水、林格氏溶液(Ringer′s solution)或其它合适的赋形剂。肌肉内制剂，例如抗体的合适的可溶盐形式的无菌调配物可在药物赋形剂，如注射用水、0.9％生理盐水或5％葡萄糖溶液中溶解和投与。

在一个实施例中，IL-20拮抗剂经由位点特异性或靶向局部递送技术投与。在一些实例中，含有IL-20拮抗剂(如抗IL-20抗体)的水性调配物可局部施用至需要治疗的眼部。位点特异性或靶向局部递送技术的其它实例包括IL-20拮抗剂的各种可植入积存源(例如眼植入物)。眼植入物可为可生物降解或不可生物降解的。在一些实施例中，不可生物降解的眼植入物包含聚合物，如聚乙烯醇(PVA)、乙烯乙酸乙烯酯(EVA)和聚砜毛细管纤维(PCF)。在一些实施例中，可生物降解的眼植入物包含聚合物，如聚乳酸(PLA)、聚乙醇酸(PGA)、聚(交酯-共-乙交酯)(PLGA)和聚己内酯。在一些实施例中，IL-20拮抗剂经由装载有IL-20拮抗剂的隐形眼镜投与。

在一些实施例中，IL-20拮抗剂经由眼内注射投与。眼内注射包括但不限于基质内注射、结膜下注射、玻璃体内注射或眼周注射。在一些实施例中，使用微针投与IL-20拮抗剂。

也可使用含有反义聚核苷酸、表达载体或次基因组聚核苷酸的治疗组合物的靶向递送。受体介导的DNA递送技术描述于例如芬德斯(Findeis)等人,生物技术趋势(TrendsBiotechnol.)(1993)11:202；邱(Chiou)等人,基因治疗剂：直接基因转移的方法和应用(Gene Therapeutics:Methods And Applications Of Direct Gene Transfer)(J.A.沃尔富(Wolff)编)(1994)；吴(Wu)等人,生物化学杂志(1988)263:621；吴等人,生物化学杂志(1994)269:542；曾克(Zenke)等人,美国国家科学院院刊(1990)87:3655；吴等人,生物化学杂志(1991)266:338中。对于基因疗法方案中的局部投药，含有聚核苷酸的治疗组合物在约100ng至约200mg DNA范围内投与。在一些实施例中，也可在基因疗法方案期间使用约500ng至约50mg、约1μg至约2mg、约5μg至约500μg和约20μg至约100μg DNA或更大的浓度范围。

本文所述的治疗聚核苷酸和多肽可使用基因递送媒剂递送。基因递送媒剂可为病毒或非病毒来源(一般参见乔利(Jolly),癌症基因疗法(Cancer Gene Therapy)(1994)1:51；木村(Kimura),人类基因疗法(Human Gene Therapy)(1994)5:845；康奈利(Connelly),人类基因疗法(Human Gene Therapy)(1995)1:185；和卡普利特(Kaplitt),自然·遗传学(Nature Genetics)(1994)6:148)。此类编码序列的表达可使用内源性哺乳动物或异源启动子和/或增强子诱导。编码序列的表达可为组成型或经调节的。

用于递送所需聚核苷酸和表达于所需细胞中的基于病毒的载体为所属领域中众所周知的。示例性基于病毒的媒剂包括但不限于重组逆转录病毒(参见例如PCT公开案第WO90/07936号；第WO 94/03622号；第WO 93/25698号；第WO 93/25234号；第WO 93/11230号；第WO 93/10218号；第WO 91/02805号；美国专利第5,219,740号和第4,777,127号；中国专利第2,200,651号；以及欧洲专利第0 345 242号)、基于α病毒的载体(例如辛德毕斯病毒(Sindbis virus)载体、胜利基森林病毒(Semliki forest virus)(ATCC VR-67；ATCC VR-1247)、罗斯河病毒(Ross River virus)(ATCC VR-373；ATCC VR-1246)和委内瑞拉马脑炎病毒(Venezuelan equine encephalitis virus)(ATCC VR-923；ATCC VR-1250；ATCC VR1249；ATCC VR-532))，以及腺相关病毒(AAV)载体(参见例如PCT公开案第WO 94/12649号、第WO 93/03769号；第WO 93/19191号；第WO 94/28938号；第WO 95/11984号和第WO 95/00655号)。也可采用投与与库列尔(Curiel)人类基因治疗(Hum.Gene Ther.)(1992)3:147中所述的经杀灭腺病毒连接的DNA。

也可采用非病毒递送媒剂和方法，包括但不限于与单独的经杀灭腺病毒连接或不连接的聚阳离子缩合DNA(参见例如库列尔,人类基因治疗(1992)3:147)；配体连接的DNA(参见例如吴,生物化学杂志(1989)264:16985)；真核细胞递送媒剂细胞(,例如美国专利第5,814,482号；PCT公开案第WO 95/07994号；第WO 96/17072号；第WO 95/30763号；和第WO97/42338号)和与细胞膜进行核电荷中和或融合。也可采用裸DNA。示例性裸DNA引入方法描述于PCT公开案第WO 90/11092号和美国专利第5,580,859号中。可充当基因递送媒剂的脂质体描述于美国专利第5,422,120号；PCT公开案第WO 95/13796号；WO 94/23697号；第WO91/14445号；和欧洲专利第0524968号中。其它方法描述于菲利普(Philip),分子与细胞生物学(Mol.Cell.Biol.)(1994)14:2411，和沃芬登(Woffendin),美国国家科学院院刊(1994)91:1581中。

还显而易见的是表达载体可用于引导本文所述的任何基于蛋白质的IL-20拮抗剂(例如抗IL-20抗体或抗IL-20R抗体)的表达。举例来说，能够阻断(部分至完全阻断)IL-20和/或IL-20生物活性的其它IL-20受体片段为所属领域中已知的。

用于本文所述的方法的特定给药方案，即剂量、时序和重复次数将取决于特定个体和个体的病史。

在一些实施例中，超过一种IL-20拮抗剂，如抗体和小分子IL-20抑制化合物可向需要治疗的个体投与。拮抗剂可为相同类型或彼此不同。可共投与至少一种、至少两种、至少三种、至少四种、至少五种不同的IL-20拮抗剂。一般来说，具有互补活性的那些IL-20拮抗剂不会不利地彼此影响。IL-20拮抗剂也可与用以增强和/或补充药剂有效性的其它药剂结合使用。

治疗功效可通过所属领域中众所周知的方法评估。

用于治疗眼病的试剂盒

本发明还提供用于缓解眼病的试剂盒。此类试剂盒可包括一个或多个包含IL-20拮抗剂(如抗体，例如mAb7E或其功能变异体、mAb7GW或其功能变异体或mAb51D或其功能变异体)的容器。在一些实施例中，IL-20拮抗剂为任何如本文所述的能够干扰IL-20信号传导路径的抗体。在其它实施例中，试剂盒包含除刚刚指出的抗体以外的IL-20拮抗剂。

在一些实施例中，试剂盒可包含根据本文所述方法中的任一种的使用说明书。包括的说明书可包含根据本文所描述的任一方法投与IL-20拮抗剂以治疗眼病、延缓眼病发作或缓解眼病的描述。试剂盒可进一步包含基于鉴别个体是否患有眼病而选择适合于治疗的个体的描述。在其它实施例中，说明书包含向处于眼病风险下的个体投与IL-20拮抗剂的描述。

与IL-20拮抗剂的使用相关的说明书大体上包括关于所期望治疗的剂量、给药时程和投与途径的信息。容器可为单位剂量、散装(例如多剂量包装)或亚单位剂量。虽然本发明试剂盒中供应的说明书通常为在标记或药品说明书(例如试剂盒中包括的纸片)上的书面说明书，但机器可读说明书(例如磁盘或光盘存储盘上载有的说明书)也是可接受的。

标记或药品说明书指示组合物用于治疗眼病、延缓眼病发作和/或缓解眼病。可提供说明书用于实践本文所描述的任一方法。

本发明的试剂盒呈合适包装形式。合适包装包括但不限于小瓶、瓶子、罐、柔性包装(例如密封聚酯薄膜或塑料袋)等。还涵盖用于与特定装置(例如吸入器、经鼻投药装置(例如雾化器)或输注装置(例如小型泵))组合的包装。试剂盒可具有无菌进入孔(例如容器可为静脉内溶液袋或具有可由皮下注射针刺穿的塞子的小瓶)。容器也可具有无菌进入孔(例如容器可为静脉内溶液袋或具有可由皮下注射针刺穿的塞子的小瓶)。组合物中的至少一种活性剂为IL-20拮抗剂，如抗IL-20抗体。

试剂盒可任选地提供额外组分(如缓冲剂)和说明性信息。通常，试剂盒包含容器和在容器上或与容器相联的标记或药品说明书。在一些实施例中，本发明提供了包含上述试剂盒的内含物的制品。

在不进一步详细描述的情况下，相信所属领域的技术人员可基于以上描述，最大程度地利用本发明。因此，以下特定实施例仅视为说明性的，并且决不以任何方式限制本发明的其余部分。本文中引用的所有公开案以引用的方式并入以达成本文中提及的目的或主题。

实例

为了可以更充分理解本文中的本公开内容，阐述以下实例。提供本申请中描述的实例以说明本文提供的方法、组合物和***且不以任何方式理解为限制其范围。

实例1：抗IL-20抗体保护小鼠免受苯扎氯铵(BAC)诱发的干眼综合症

材料与方法

BAC诱发的干眼综合症

三十六只雌性BALB/c小鼠(18-20克，6-8周)获自实验动物中心(中国台湾台南的成功大学(Cheng Kung University，Tainan，Taiwan，China))且用标准实验室食物和饮用水喂养。其根据由国际动物实验医学科学组织委员会(瑞士日内瓦的世界卫生组织(WorldHealth Organization,Geneva,Switzerland))阐述的指南和由成功大学阐述的指南处理。DED组小鼠通过局部投与溶解于PBS中的0.2％BAC一天两次(8AM和8PM)地治疗，持续7天。在治疗方案的持续时间内投与BAC治疗，且在投与治疗剂(PBS、IgG、7E)之前4小时投与BAC。

测量泪液量

在第0、4、7、11、14天在类似的时间点在标准环境中使用

(回声电公司(Echo Electricity Co.))测量泪液量。小鼠通过腹膜内注射戊巴比妥而保持不动。将SMTube***到下眼睑接合部周围的结膜囊位置中。在一分钟之后读取纸管的润湿长度(毫米)。

分析角膜损伤

小鼠的两只眼睛均在第0、4、7和14天的类似时间点用荧光素(西格玛-阿尔德里奇(Sigma-Aldrich))染色以显现角膜上皮的损伤。简单来说，将1μl的0.1％液体荧光素滴至小鼠的结膜囊中。在90秒之后，在裂隙灯显微镜(拓普康(Topcon)DC-4；拓普康医疗***公司(Topcon Medical Systems,Inc.))下用钴蓝滤片观察角膜上皮损伤。如下分析荧光素评分：0，无荧光素染色；0.5，略微荧光素点状染色；1，扩散的点状荧光素染色；2，小于角膜三分之一的荧光素染色区域；3，超过角膜三分之一的荧光素染色区域；4，超过角膜三分之二的荧光素染色区域。有四个个体盲法进行评分。通过对由四个个体确定的评分取平均值来确定各组的评分。

结果

苯扎氯铵(BAC)诱发的干眼综合症已用作研究干眼病(DED)的动物模型。动物模型的BAC治疗产生与人类干眼综合症相符合的病理变化，包括发炎、上皮细胞凋亡和鳞状化生。不管其已知的损害效应，BAC为眼用溶液中最经常使用的防腐剂。

在BAC诱发的小鼠干眼综合症模型中分析IL-20抑制对眼病的效应。雌性BALB/c小鼠(18-20克/6-8周)用于实验。DED组(n＝27)中的小鼠的两只眼睛通过局部投与0.2％BAC每日治疗两次，持续七天。健康对照小鼠(n＝9)用单独的PBS治疗。在通过投与BAC诱发干眼综合症之后，小鼠接着随机分为3个治疗组(每组的n＝9)，且在治疗方案的持续时间内每日用磷酸盐缓冲盐水(PBS)、抗IL-20单克隆抗体、mAb7E(800μg/mL于5μL中)或小鼠免疫球蛋白G(800μg/mL于5μL中)治疗。在第0、4、7、11和14天测量泪液量。通过第0、4、7和14天的荧光素染色分析角膜上皮损伤。

相比于健康对照小鼠，DED组小鼠显示泪液产量的显著减少(图1)和荧光素染色的增加(图2)。相比于用IgG或PBS治疗的DED小鼠，用mAb7E治疗的DED小鼠显示泪液量的显著增加(图1)。另外，相比于用IgG或PBS治疗的DED小鼠，用mAb7E治疗的DED小鼠显示减少的荧光素染色(图2-3)。角膜荧光素染色的代表性图像在图2中示出，且如本文所述测定的荧光素染色评分在图3中示出。

以上结果明显地展示抗IL-20抗体免于BAC诱发的干眼综合症，如由增加的泪液量和减少的角膜损伤指示，表明抗IL-20疗法将有效地治疗DED。

实例2：抗IL-20抗体在年龄相关性黄斑变性(AMD)小鼠模型中提供治疗作用

年龄相关性黄斑变性(AMD)为发达国家的老年人失明的主要起因。可归因于AMD的大部分严重视力丧失由渗出性形式产生，其由脉络膜新生血管(CNV)表征。CNV被定义为未成熟的新血管从脉络膜血管层穿透至玻璃膜中且其延伸至视网膜下和/或视网膜下色素上皮(RPE)空间中。这与例如RPE脱离、视网膜下出血和纤维血管盘状疤痕的表现相关。

本研究证实相对于

(阿柏西普(aflibercept))，一种批准用于治疗某些视网膜疾病，包括湿性AMD、糖尿病黄斑水肿(例如DME中的糖尿病性视网膜病变)和视网膜静脉阻塞(RVO)后的黄斑水肿的Fc融合蛋白，由mAb 7E例示的抗IL-20抗体在AMD动物模型中的优良治疗作用。

材料与方法

动物

八周龄的C57BL/6J雄性小鼠在22±2℃下保持12小时光暗循环。所有动物实验均根据实验动物护理和使用的常规方案和指南进行。对于所有程序，通过腹膜内注射标准剂量的舒泰(Zoletil)和隆朋(Rompun)的混合物来实现麻醉，且用局部0.5％托品酰胺来扩张瞳孔。

激光诱发的脉络膜新生血管(CNV)

小鼠用舒泰和隆朋的混合物麻醉，且用0.5％托品酰胺的局部滴剂来扩张瞳孔。在瞳孔扩张之后两分钟，将润滑滴眼剂(爱尔康实验室(Alcon Laboratories))施用至角膜。用成像相机查看眼底，且使用图像引导激光***(Micron IV，菲尼克斯研究实验室(Phoenix Research Laboratories)，加利福尼亚州普莱森顿(Pleasanton,CA))引发激光光凝术。可在监视器屏幕上观测眼底图像以及瞄准光束。通过具有532nm波长、170ms持续时间和80mW功率电平的绿色氩激光在右眼上逐个地诱发距视神经相等距离的四个激光烧伤。

治疗

在激光光凝术之后，用无菌生理盐水温和地冲洗眼睛以去除润滑滴眼剂。将小鼠分成四组且玻璃体内注射PBS(2微升/小鼠，n＝5)、抗IL-20mAb(7E)(50微克/2微升/小鼠，n＝5)、小鼠IgG同型对照(50微克/2微升/小鼠，n＝5)、

(阿柏西普，80微克/2微升/小鼠，n＝5)。动物用含有四环素的抗生素软膏治疗。接着将小鼠置于35℃的预升温暖板上直至其醒来。

眼底荧光素血管造影(FFA)

在激光光凝术之后7、14、21和28天用视网膜成像显微镜(Micron IV，菲尼克斯研究实验室)进行测定渗漏的FFA。小鼠经麻醉、瞳孔扩张且腹膜内注射每克体重5μg的荧光素

(艾克隆(Akorn)，伊利诺伊州森林湖市(Lake Forest,IL))。在荧光素注射之后5和10分钟用视网膜成像显微镜获取荧光眼底图像。CNV病变的荧光强度由经遮蔽的研究人员使用Image J(美国国家卫生研究院(National Institutes of Health)，马里兰州贝塞斯达(Bethesda,MD))评级，且5分钟与10分钟图像之间的荧光强度差异记录为CNV血管渗漏的指标。

结果

在年龄相关性黄斑变性(AMD)小鼠模型中分析IL-20抑制对眼病的治疗作用，其中CNV通过激光光凝术诱发。在诱发CNV之后，接着将小鼠随机分成四个治疗组，且用磷酸盐缓冲盐水(PBS)、抗IL-20单克隆抗体(mAb7E)、小鼠免疫球蛋白G或

(可商购的抗VEGF药物，也称为阿柏西普)治疗。在激光光凝术之后的第7天、第14天、第21天和第28天测量CNV病变的荧光强度。结果分别显示于图4A、图4B、图4C和图4D中。

相比于mIgG同型对照组，抗IL-20mAb7E治疗在激光烧伤之后的第7、14和21天显著降低CNV病变的荧光强度(分别为***p<0.001、***p<0.001和***p<0.001)(图4A-4D)。在激光烧伤之后的第7天(56％相对于71％)和第21天(50％相对于56％)，mAb7E治疗组的CNV病变的荧光强度低于

治疗组(图4A和4C)。相比于

治疗对照组，治疗功效在抗IL-20mAb7E治疗组中保持较长时段，表明抗IL-20mAb7E比

更有效，如AMD动物模型中所示。图4A-4D。

以上结果清楚地展现抗IL-20抗体提供针对年龄相关性黄斑变性(AMD)和脉络膜新生血管(CNV)的治疗作用，如由减少的荧光渗漏指示，表明抗IL-20疗法将治疗学上有效地治疗AMD和其它视网膜疾病。

其它实施例

本说明书中公开的所有特征可以任何组合形式组合。本说明书中公开的每个特征可经用于达成相同、等效或类似目的的替代性特征置换。因此，除非另外明确陈述，否则所公开的每个特征仅是一系列通用的等效或类似特征的实例。

从以上论述中，所属领域的普通技术人员可容易地确定本发明的基本特征，并且在不背离其精神和范围的情况下，可进行本发明的不同变化和修改以使本发明适于不同用途和条件。因此，其它实施例也属于权利要求书内。

同等物和范围

在权利要求书中，除非相反地指示或另外从上下文显而易见，否则如“一(a/an)”和“所述”的冠词可意指一或大于一。除非相反地指示或另外从上下文显而易见，否则如果一个、一个以上或所有的群组成员存在、使用于给定产品或方法中或另外与其有关，那么在群组的一或多个成员之间包括“或”的权利要求书或说明书被视为满足。本发明包括群组中恰好一个成员存在于、使用于给定产品或方法中或另外与其有关的实施例。本发明包括超过一个或所有的群组成员存在、使用于既定产品或方法中或另外与其有关的实施例。

此外，本发明涵盖其中来自一或多条所列权利要求的一或多个限制、要素、条款和描述性用语被引入到另一条权利要求中的所有变化、组合和排列。举例来说，附属于另一权利要求的任何权利要求都可以经过修改以包括在附属于同一基本权利要求的任何其它权利要求中所见的一或多个限制。当要素呈现于列表(例如呈马库什组(Markush group)形式)中时，还公开要素的每个子组，且可从组中去除任何要素。应理解，一般来说，在本发明或本发明的方面被称为包含具体要素和/或特征时，本发明的或本发明的方面的某些实施例由此类要素和/或特征组成或主要由此类要素和/或特征组成。为了简单起见，那些实施例尚未专门地以这些词语阐述在本文中。还应注意，术语“包含”和“含有”打算为开放的并且允许包括额外要素或步骤。在给出范围时，包括端点。此外，除非另外指明或另外从上下文和所属领域的技术人员的理解显而易见，否则表达为范围的值可以在本发明的不同实施例中采用所述范围内的任何特定值或子范围，达到所述范围下限的单位的十分之一，除非上下文另外明确规定。

本申请提及各种颁予的专利、公开的专利申请、杂志文章和其它出版物，其都以引用的方式并入本文中。如果任何并入的参考文献与本说明书之间存在冲突，那么应以本说明书为准。另外，属于现有技术内的本发明的任何具体实施例可以从权利要求中的任何一或多者明确排除。因为此类实施例被认为是所属领域的普通技术人员已知的，所以其可以被排除，即使所述排除在本文中并未明确阐述。本发明的任何特定实施例都可以出于任何原因从任何权利要求排除，无论与现有技术的存在相关与否。

所属领域的技术人员顶多使用常规实验即可识别或能够确定本文所述的特定实施例的许多同等物。本文中所述的本发明的实施例的范围并不打算限于上述描述，而是实际上如所附权利要求书中所阐述。所属领域的技术人员将了解可在不脱离如随附权利要求书中定义的本发明的精神或范围的情况下对本说明书作出各种改变和修改。

序列表

<110> 国立成功大学 (National Cheng Kung University)

<120> IL-20拮抗剂治疗眼病的用途

<130> N0521.70024WO00

<140> Not Yet Assigned

<141> 2018-04-24

<150> US 62/489,611

<151> 2017-04-25

<160> 21

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 363

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成聚核苷酸

<400> 1

gaattgaagc ttgaggagtc tggaggaggc ttggtgcagc ctggaggatc catgaaactc 60

tcttgtgctg cctctggatt cacttttagt gacgcctgga tggactgggt ccgccagtct 120

ccagagaagg ggcttgagtg gattgctgaa attagaagca aagctaataa ttatgcaaca 180

tactttgctg agtctgtgaa agggaggttc accatctcaa gagatgattc caaaagtggt 240

gtctacctgc aaatgaacaa cttaagagct gaggacactg gcatttattt ctgtaccaag 300

ttatcactac gttactggtt cttcgatgtc tggggcgcag ggaccacggt caccgtctcc 360

tca 363

<210> 2

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 2

Glu Leu Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Met Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ala

20 25 30

Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Ala Glu Ile Arg Ser Lys Ala Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Phe Ala Glu

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Gly

65 70 75 80

Val Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Ile Tyr

85 90 95

Phe Cys Thr Lys Leu Ser Leu Arg Tyr Trp Phe Phe Asp Val Trp Gly

100 105 110

Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 3

<211> 339

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成聚核苷酸

<400> 3

gattttgtga tgacccagac tccactcact ttgtcggtta ccattggaca accagcctcc 60

atctcttgca agtcaagtca gagcctcttg gatagtgatg gaaagacata tttgaattgg 120

ttgttacaga ggccaggcca gtctccaaag cacctcatct atctggtgtc taaactggac 180

tctggagtcc ctgacaggtt cactggcagt ggatcaggga ccgatttcac actgagaatc 240

agcagagtgg aggctgagga tttgggagtt tattattgct ggcaaagtac acattttccg 300

tggacgttcg gtggaggcac caagctggaa atcaaacgg 339

<210> 4

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 4

Asp Phe Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Thr Leu Ser Val Thr Ile Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser

20 25 30

Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Lys His Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Arg Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Ser

85 90 95

Thr His Phe Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

Arg

<210> 5

<211> 420

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成聚核苷酸

<400> 5

atgtacttgg gactgaacta tgttttcatc gtttttctcc tgaatggtgt ccagagtgaa 60

gtgcagcttg tggagtctgg aggaggcttg gtgcagcctg gaggatccct gaaactctct 120

tgtgctgcct ctggattcac ttttagtgac gcctggatgg actgggtccg ccaggcttcc 180

gggaaggggc ttgagtggat tgctgaaatt agaagcaaag ctaataatta tgcaacatac 240

tttgctgagt ctgtgaaagg gaggttcacc atctcaagag atgattccaa aaacaccgcc 300

tacctgcaaa tgaacagctt aaaaaccgag gacactgccg tttattactg taccaagtta 360

tcactgcgtt actggttctt cgatgtctgg ggccagggga ccctggtcac cgtctcctca 420

<210> 6

<211> 140

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 6

Met Tyr Leu Gly Leu Asn Tyr Val Phe Ile Val Phe Leu Leu Asn Gly

1 5 10 15

Val Gln Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln

20 25 30

Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe

35 40 45

Ser Asp Ala Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Ser Gly Lys Gly Leu

50 55 60

Glu Trp Ile Ala Glu Ile Arg Ser Lys Ala Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr

65 70 75 80

Phe Ala Glu Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser

85 90 95

Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr

100 105 110

Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Lys Leu Ser Leu Arg Tyr Trp Phe Phe Asp

115 120 125

Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

130 135 140

<210> 7

<211> 363

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成聚核苷酸

<400> 7

gaagtgcagc ttgtggagtc tggaggaggc ttggtgcagc ctggaggatc cctgaaactc 60

tcttgtgctg cctctggatt cacttttagt gacgcctgga tggactgggt ccgccaggct 120

tccgggaagg ggcttgagtg gattgctgaa attagaagca aagctaataa ttatgcaaca 180

tactttgctg agtctgtgaa agggaggttc accatctcaa gagatgattc caaaaacacc 240

gcctacctgc aaatgaacag cttaaaaacc gaggacactg ccgtttatta ctgtaccaag 300

ttatcactgc gttactggtt cttcgatgtc tggggccagg ggaccctggt caccgtctcc 360

tca 363

<210> 8

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 8

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ala

20 25 30

Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Ser Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Ala Glu Ile Arg Ser Lys Ala Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Phe Ala Glu

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr

65 70 75 80

Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Thr Lys Leu Ser Leu Arg Tyr Trp Phe Phe Asp Val Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 9

<211> 396

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成聚核苷酸

<400> 9

atgatgagtc ctgcccagtt cctgtttctg ttggtgctct ggattcggga aaccaacggt 60

gatatcgtga tgacccagac tccactctct ttgtccgtta cccctggaca accagcctcc 120

atctcttgca agtcaagtca gagcctcttg gatagtgatg gaaagacata tttgaattgg 180

ttgttacaga agccaggcca gtctccacag cacctcatct atctggtgtc taaactggac 240

tctggagtcc ctgacaggtt cagtggcagt ggatcaggga ccgatttcac actgaaaatc 300

agcagagtgg aggctgagga tgttggagtt tattattgct ggcaaagtac acattttccc 360

tggaccttcg gtggaggcac caaggtggaa atcaaa 396

<210> 10

<211> 132

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 10

Met Met Ser Pro Ala Gln Phe Leu Phe Leu Leu Val Leu Trp Ile Arg

1 5 10 15

Glu Thr Asn Gly Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser

20 25 30

Val Thr Pro Gly Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser

35 40 45

Leu Leu Asp Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Lys

50 55 60

Pro Gly Gln Ser Pro Gln His Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp

65 70 75 80

Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe

85 90 95

Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr

100 105 110

Cys Trp Gln Ser Thr His Phe Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys

115 120 125

Val Glu Ile Lys

130

<210> 11

<211> 336

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成聚核苷酸

<400> 11

gatatcgtga tgacccagac tccactctct ttgtccgtta cccctggaca accagcctcc 60

atctcttgca agtcaagtca gagcctcttg gatagtgatg gaaagacata tttgaattgg 120

ttgttacaga agccaggcca gtctccacag cacctcatct atctggtgtc taaactggac 180

tctggagtcc ctgacaggtt cagtggcagt ggatcaggga ccgatttcac actgaaaatc 240

agcagagtgg aggctgagga tgttggagtt tattattgct ggcaaagtac acattttccc 300

tggaccttcg gtggaggcac caaggtggaa atcaaa 336

<210> 12

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 12

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser

20 25 30

Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln His Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Ser

85 90 95

Thr His Phe Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 13

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 13

Asp Phe Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser

20 25 30

Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln His Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Ser

85 90 95

Thr His Phe Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 14

<211> 457

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 14

Met Arg Val Leu Ile Leu Leu Trp Leu Phe Thr Ala Phe Pro Gly Ile

1 5 10 15

Leu Ser Val Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro

20 25 30

Ser Gln Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr

35 40 45

Ser Asp Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Arg Leu

50 55 60

Glu Trp Met Gly Tyr Ile Asp Tyr Ser Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Pro

65 70 75 80

Ser Leu Lys Ser Arg Ile Ser Val Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln

85 90 95

Phe Phe Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr

100 105 110

Tyr Cys Ala Arg Asp Phe Gly Asp Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

115 120 125

Val Thr Val Ser Ala Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu

130 135 140

Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr Leu Gly Cys

145 150 155 160

Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser

165 170 175

Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser

180 185 190

Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser Ser Thr Trp

195 200 205

Pro Ser Glu Thr Val Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr

210 215 220

Lys Val Asp Lys Lys Ile Val Pro Arg Asp Cys Gly Cys Lys Pro Cys

225 230 235 240

Ile Cys Thr Val Pro Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys

245 250 255

Pro Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val

260 265 270

Val Val Asp Ile Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp Phe

275 280 285

Val Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu Glu

290 295 300

Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro Ile Met His

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Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala

325 330 335

Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Arg

340 345 350

Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys Glu Gln Met

355 360 365

Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp Phe Phe Pro

370 375 380

Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu Asn

385 390 395 400

Tyr Lys Asn Thr Gln Pro Ile Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe Val

405 410 415

Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr

420 425 430

Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Glu

435 440 445

Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys

450 455

<210> 15

<211> 1374

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成聚核苷酸

<400> 15

atgagagtgc tgattctttt gtggctgttc acagcctttc ctggtatcct gtctgttgtg 60

cagcttcagg agtcgggacc tggcctggtg aaaccttctc agtctctgtc cctcacctgc 120

actgtcactg gctactcaat caccagtgat tatgcctgga actggatccg gcagtttcca 180

ggaaacagac tggagtggat gggctacata gactacagtg gtagcactaa atacaacccc 240

tctctcaaaa gtcgaatctc tgtcactcga gacacatcca agaaccagtt cttcctgcag 300

ttgaattctg tgactactga ggacacagcc acatattact gtgcaagaga ctttggtgat 360

gcttactggg gccaggggac tctggtcact gtctctgcag ccaaaacgac acccccatct 420

gtctatccac tggcccctgg atctgctgcc caaactaact ccatggtgac cctgggatgc 480

ctggtcaagg gctatttccc tgagccagtg acagtgacct ggaactctgg atccctgtcc 540

agcggtgtgc acaccttccc agctgtcctg cagtctgacc tctacactct gagcagctca 600

gtgactgtcc cctccagcac ctggcccagc gagaccgtca cctgcaacgt tgcccacccg 660

gccagcagca ccaaggtgga caagaaaatt gtgcccaggg attgtggttg taagccttgc 720

atatgtacag tcccagaagt atcatctgtc ttcatcttcc ccccaaagcc caaggatgtg 780

ctcaccatta ctctgactcc taaggtcacg tgtgttgtgg tagacatcag caaggatgat 840

cccgaggtcc agttcagctg gtttgtagat gatgtggagg tgcacacagc tcaaacgcaa 900

ccccgggagg agcagttcaa cagcactttc cgctcagtca gtgaacttcc catcatgcac 960

caggactggc tcaatggcaa ggagttcaaa tgcagggtca acagtgcagc tttccctgcc 1020

cccatcgaga aaaccatctc caaaaccaaa ggcagaccga aggctccaca ggtgtacacc 1080

attccacctc ccaaggagca aatggccaag gataaagtca gtctgacctg catgataaca 1140

gacttcttcc ctgaagacat tactgtggag tggcagtgga atgggcagcc agcggagaac 1200

tacaagaaca ctcagcccat catggacaca gatggctctt acttcgtcta cagcaagctc 1260

aatgtgcaga agagcaactg ggaggcagga aatactttca cctgctctgt gttacatgag 1320

ggcctgcaca accaccatac tgagaagagc ctctcccact ctcctggtaa atga 1374

<210> 16

<211> 240

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 16

Met Asp Ser Gln Ala Gln Val Leu Met Leu Leu Leu Leu Trp Val Ser

1 5 10 15

Gly Ser Cys Gly Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala

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Val Ser Val Gly Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser

35 40 45

Leu Leu Tyr Ser Arg Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Leu

50 55 60

Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg

65 70 75 80

Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp

85 90 95

Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Lys Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr

100 105 110

Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr

115 120 125

Lys Leu Glu Leu Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe

130 135 140

Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys

145 150 155 160

Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile

165 170 175

Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln

180 185 190

Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr

195 200 205

Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His

210 215 220

Lys Thr Ser Thr Ser Pro Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys

225 230 235 240

<210> 17

<211> 723

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成聚核苷酸

<400> 17

atggattcac aggcccaggt tcttatgtta ctgctgctat gggtatctgg ttcctgtggg 60

gacattgtga tgtcacagtc tccatcctcc ctagctgtgt cagttggaga gaaggttact 120

atgagctgca agtccagtca gagcctttta tatagtagga atcaaaagaa ctacttggcc 180

tggtaccagc tgaagccagg gcagtctcct aaactgctga tttactgggc atccactagg 240

gaatctgggg tccctgatcg cttcacaggc agtggatctg ggacagattt cactctcacc 300

atcagcagtg tgaaggctga agacctggca gtttattact gtcagcaata ttatagctat 360

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gtatccatct tcccaccatc cagtgagcag ttaacatctg gaggtgcctc agtcgtgtgc 480

ttcttgaaca acttctaccc caaagacatc aatgtcaagt ggaagattga tggcagtgaa 540

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gaggccactc acaagacatc aacttcaccc attgtcaaga gcttcaacag gaatgagtgt 720

tag 723

<210> 18

<211> 460

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 18

Met Asn Phe Gly Leu Ser Leu Ile Phe Leu Ala Leu Ile Leu Lys Gly

1 5 10 15

Val Gln Cys Glu Val Gln Leu Val Glu Ala Gly Gly Asp Leu Val Lys

20 25 30

Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu

35 40 45

Ser Asn Tyr Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Asp Lys Arg Leu

50 55 60

Glu Trp Val Ala Ser Ile Ser Ser Gly Gly Arg Phe Thr Ser Tyr Pro

65 70 75 80

Asp Ser Val Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn

85 90 95

Thr Leu Tyr Leu Gln Met Ser Gly Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met

100 105 110

Tyr Tyr Cys Ala Arg His Asp Gly Asn Gly Gly Asp Tyr Trp Gly Gln

115 120 125

Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val

130 135 140

Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr

145 150 155 160

Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr

165 170 175

Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

180 185 190

Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser

195 200 205

Ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr Val Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala

210 215 220

Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile Val Pro Arg Asp Cys Gly Cys

225 230 235 240

Lys Pro Cys Ile Cys Thr Val Pro Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe

245 250 255

Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val

260 265 270

Thr Cys Val Val Val Asp Ile Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe

275 280 285

Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro

290 295 300

Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro

305 310 315 320

Ile Met His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val

325 330 335

Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr

340 345 350

Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys

355 360 365

Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp

370 375 380

Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro

385 390 395 400

Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Pro Ile Met Asp Thr Asp Gly Ser

405 410 415

Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala

420 425 430

Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu His Asn His

435 440 445

His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys

450 455 460

<210> 19

<211> 1383

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成聚核苷酸

<400> 19

atgaacttcg ggctcagcct gattttcctt gccctcattt taaaaggtgt ccagtgtgag 60

gtgcagctgg tggaggctgg gggagactta gtgaagcctg gagggtccct gaaactctcc 120

tgtgcggcct ctggattcag tttgagtaac tatggcatgt cctgggttcg ccagactcca 180

gacaagaggc tggagtgggt cgcaagcatt agtagtggtg gtcgtttcac ctcctatcca 240

gacagtgtga gggggcgatt caccatctcc agagacaatg ccaagaacac cctgtacctg 300

caaatgagcg gtctgaagtc tgaggacaca gccatgtatt actgtgcaag acacgacggc 360

aacggtgggg actactgggg tcaaggaacc tcagtcaccg tctcctcagc caaaacgaca 420

cccccatctg tctatccact ggcccctgga tctgctgccc aaactaactc catggtgacc 480

ctgggatgcc tggtcaaggg ctatttccct gagccagtga cagtgacctg gaactctgga 540

tccctgtcca gcggtgtgca caccttccca gctgtcctgc agtctgacct ctacactctg 600

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gcccacccgg ccagcagcac caaggtggac aagaaaattg tgcccaggga ttgtggttgt 720

aagccttgca tatgtacagt cccagaagta tcatctgtct tcatcttccc cccaaagccc 780

aaggatgtgc tcaccattac tctgactcct aaggtcacgt gtgttgtggt agacatcagc 840

aaggatgatc ccgaggtcca gttcagctgg tttgtagatg atgtggaggt gcacacagct 900

cagacgcaac cccgggagga gcagttcaac agcactttcc gctcagtcag tgaacttccc 960

atcatgcacc aggactggct caatggcaag gagttcaaat gcagggtcaa cagtgcagct 1020

ttccctgccc ccatcgagaa aaccatctcc aaaaccaaag gcagaccgaa ggctccacag 1080

gtgtacacca ttccacctcc caaggagcag atggccaagg ataaagtcag tctgacctgc 1140

atgataacag acttcttccc tgaagacatt actgtggagt ggcagtggaa tgggcagcca 1200

gcggagaact acaagaacac tcagcccatc atggacacag atggctctta cttcgtctac 1260

agcaagctca atgtgcagaa gagcaactgg gaggcaggaa atactttcac ctgctctgtg 1320

ttacatgagg gcctgcacaa ccaccatact gagaagagcc tctcccactc tcctggtaaa 1380

tga 1383

<210> 20

<211> 235

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 20

Met Asp Phe Gln Val Gln Ile Phe Ser Phe Leu Leu Ile Ser Ala Ser

1 5 10 15

Val Ile Met Ser Arg Gly Gln Ile Val Leu Ser Gln Phe Pro Ala Ile

20 25 30

Leu Ser Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Arg

35 40 45

Ser Ser Val Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser

50 55 60

Pro Lys Pro Trp Ile Tyr Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro

65 70 75 80

Pro Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile

85 90 95

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp

100 105 110

Ser Ser Asn Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

115 120 125

Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu

130 135 140

Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe

145 150 155 160

Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg

165 170 175

Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser

180 185 190

Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu

195 200 205

Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser

210 215 220

Pro Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys

225 230 235

<210> 21

<211> 708

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成聚核苷酸

<400> 21

atggattttc aagtgcagat tttcagcttc ctgctaatca gtgcttcagt cataatgtcc 60

agaggacaaa ttgttctctc ccagtttcca gcaatcctgt ctgcatctcc aggggagaag 120

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ccaggatcct cccccaaacc ctggatttat gccacatcca acctggcttc tggagtccct 240

cctcgcttca gtggcagtgg gtctgggacc tcttactctc tcacaatcag cagagtggag 300

gctgaagatg ctgccactta ttactgccag cagtggagta gtaacccata cacgttcgga 360

ggggggacta agctggaaat aaaacgggct gatgctgcac caactgtatc catcttccca 420

ccatccagtg agcagttaac atctggaggt gcctcagtcg tgtgcttctt gaacaacttc 480

taccccaaag acatcaatgt caagtggaag attgatggca gtgaacgaca aaatggcgtc 540

ctgaacagtt ggactgatca ggacagcaaa gacagcacct acagcatgag cagcaccctc 600

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Claims

1.一种对个体治疗眼病或延缓眼病发作的方法，所述方法包含向有需要的个体投与有效量的包含IL-20拮抗剂的药物组合物。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述IL-20拮抗剂为结合IL-20或IL-20受体，由此抑制由IL-20介导的信号传导路径的抗体。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述抗体为结合人类IL-20的抗体。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述抗体为全长抗体或其抗原结合片段。

5.根据权利要求3或4所述的方法，其中所述抗体为人类抗体、人类化抗体、嵌合抗体或单链抗体。

6.根据权利要求3所述的方法，其中所述抗IL-20抗体结合至与单克隆抗体mAb7E相同的人类IL-20的表位或与mAb7E竞争结合至人类IL-20。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述抗体包含与mAb7E相同的重链互补决定区CDR和与mAb7E相同的轻链CDR。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述抗体为mAb7E的人类化抗体。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述人类化抗体包含重链可变区(V_H)，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:8；和轻链可变区(V_L)，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:13。

10.根据权利要求2所述的方法，其中所述抗体为结合人类IL-20受体的抗体。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述抗体结合所述人类IL-20受体的次单元R1。

12.根据权利要求10或11所述的方法，其中所述抗体为全长抗体或其抗原结合片段。

13.根据权利要求10至12中任一权利要求所述的方法，其中所述抗体为人类抗体、人类化抗体、嵌合抗体或单链抗体。

14.根据权利要求11所述的方法，其中结合所述人类IL-20受体的次单元R1的所述抗体为结合与单克隆抗体mAb51D或mAb7GW相同的所述次单元R1的表位，或与mAb51D或mAb7GW竞争结合至所述次单元R1的抗体。

15.根据权利要求14所述的方法，其中所述抗体包含与mAb51D或mAb7GW相同的重链互补决定区CDR，和与mAb51D或mAb7GW相同的轻链CDR。

16.根据权利要求15所述的方法，其中所述抗体为mAb51D或mAb7GW的人类化抗体。

17.根据权利要求1至16中任一权利要求所述的方法，其中所述个体为患有所述眼病或疑似患有所述眼病的人类患者。

18.根据权利要求17所述的方法，其中所述眼病为干眼病DED。

19.根据权利要求18所述的方法，其中所述DED为泪液缺乏性干眼或蒸发过强性干眼。

20.根据权利要求17所述的方法，其中所述眼病为年龄相关性黄斑变性AMD、糖尿病黄斑水肿DME、DME中的糖尿病性视网膜病变DR或视网膜静脉阻塞RVO后的黄斑水肿。

21.根据权利要求20所述的方法，其中所述眼病为AMD，其为湿性AMD。