CN111103362A - 一种复方大青叶组合物的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种复方大青叶组合物的检测方法,属于中药制剂质量检测的技术领域，本发明通过采用高效液相色谱的方法对复方大青叶组合物进行检测，过程简单、快捷，而且结果准确，可以对复方大青叶组合物进行含量的测定和定性分析，可以提高对复方大青叶组合物质量的有效控制，保证了复方大青叶组合物的使用安全。
Description
技术领域
本发明涉及提取物质量检测技术领域，尤其涉及一种复方大青叶组合物的检测方法。
背景技术
复方大青叶组合物，具有疏风清热，解毒消肿，凉血利胆的作用，可用于感冒发热头痛，咽喉红肿，耳下肿痛，胁痛黄疸等症及流感、腮腺炎、急性病毒性肝炎病症。
目前文献中对该类药的组成的研究众多。此前，申请人已经申请了专利号为200610072997.7的中国发明专利，公开了一种新复方大青叶制剂的检测方法，包含内容物的鉴别和含有成分的含量测定。该内容物为中西药复方，内容物的鉴别是大青叶、大黄、维生素C、羌活的薄层鉴别，高效液相色谱法测定绿原酸、对乙酰氨基酚、咖啡因与异戊巴比妥的含量测定。该方法取口服液10ml，或相应生药量的颗粒剂、片剂、胶囊剂来对多种中药组分进行逐一检测，检测过程繁琐，耗费的时间长
申请人也申请了专利号200910230003.3的发明专利，公开了复方大青叶制剂的制备和质量控制方法，其中质量控制方法为内容物的鉴别和含有成分的含量测定，内容物的鉴别为薄层鉴别法鉴别大青叶、山银花或金银花、大黄、羌活和高效液相色谱法测定大黄中大黄素与大黄酚的含量测定和绿原酸的含量测定。该专利通过取产品内容物，多次对单一的产品组分进行逐一检测，检测过程繁琐，耗费的时间长。
复方大青叶组合物是由大青叶、金银花、羌活、紫参、大黄五味药材经提取、浓缩、干燥等加工工艺制成的半成品，现有技术对多种组份的提取组合物进行检测，都是对组合物进行多次检测，且每次检测都只针对某一种组份进行检测，检测结果单一、不全面、检测繁琐复杂等，容易给偷工减料、参杂使假等不法分子以可乘之机，需要建立一种简捷、高效、全面的检测技术，来确保能对多组分物质、在同一时间、同一图谱中、进行一次性的有效监测。本研究拟建立复方大青叶组合物的HPLC特征图谱的检测技术，以达到全面控制复方大青叶组合物产品质量的目的。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种复方大青叶组合物的检测方法。
本技术方案是针对复方大青叶组合物多组份的特征检测技术，能形象反映出多组份组合物的生物特征，是用单一成分组合所不能取代的特征，对综合反映特定中药组合物有关物质具有专一性。
为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：
一种复方大青叶组合物的检测方法，所述复方大青叶组合物采用高效液相色谱法进行检测，所述检测方法包括以下步骤:
S1、色谱条件：色谱柱为C18柱，甲醇为流动相A, 0.2%的磷酸水溶液为流动相B，检测波长为254nm，流速为0.1ml/min，柱温为35℃；
S2、参照物溶液的制备：精密称取绿原酸为对照溶液，并向绿原酸中添加甲醇溶液；
S3、供试品溶液的制备：精密称取复方大青叶组合物粉末，加甲醇，超声提取，滤过，即得；
S4、分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各20ul，并将参照物溶液与供试品溶液注入液相色谱仪进行色谱分析。
优选的，所述S1中的色谱条件及***适用性实验：色谱柱为Kromasil 100-5 C18色谱柱，且色谱柱的规格为：4.6mm×250mm，5um；磷酸水溶液用质量浓度为10%的氢氧化钠溶液调pH为3.0，进行梯度洗脱。
优选的，所述梯度洗脱的洗脱条件为：在0min-30min时甲醇的体积分数为3%-35%，在30min-50min时甲醇的体积分数为35%-65%，在50min-60min时甲醇的体积分数为65%，在60min-61min时甲醇的体积分数为65%-3%，在61min-65min时甲醇的体积分数为3%。
优选的，所述S2中参照物溶液的制备：精密称取绿原酸对照品适量，加甲醇制成30μg/ml的溶液，即得。
优选的，所述S3中供试品溶液的制备：精密称取复方大青叶组合物粉末0.2g，加30%甲醇，超声提取30min，且超声提取的功率为250W,滤过，即得。
本发明的有益效果是：
1、本发明，通过采用高效液相色谱的方法对复方大青叶组合物进行检测，过程简单、快捷，而且结果准确，可以对复方大青叶组合物进行含量的测定和定性分析，可以提高对复方大青叶组合物质量的有效控制，保证了复方大青叶组合物的使用安全。
2、本发明，通过对复方大青叶组合物和五种药材进行对比检测，可以提高检测结果的准确度。
附图说明
图1为本发明提出的一种复方大青叶组合物的检测方法的标准特征图谱；
图2为本发明提出的一种复方大青叶组合物的检测方法的从生产车间取5批复方大青叶组合物进行检测峰图；
图3为本发明提出的一种复方大青叶组合物的检测方法的取金银花提取物溶液、大青叶提取物溶液、紫参提取物溶液、羌活提取物溶液和大黄提取物溶液各20ul的检测峰图；
图4为本发明提出的一种复方大青叶组合物的检测方法的分别取金银花提取物、大青叶提取物、紫参提取物、羌活提取物和大黄提取物检测峰图。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。
本发明照高效液相色谱法（2010年版药典附录VI D）测定。
供试品特征图谱中应有15个峰，与参照物峰相对应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间及相对峰面积，其相对保留时间应在规定值的±10%之内，相对保留时间都在相对保留时间值的10%以内，
其他各特征峰的相对保留时间规定值为：0.21（峰1）、0.40（峰2）、0.45（峰3）、0.60（峰4）、0.67（峰5）、0.73（峰6）、1.00[峰7（S）]、1.08（峰8）、1.30（峰9）、1.46（峰10）、1.64（峰11）、1.74（峰12）、1.78（峰13）、1.82（峰14）、2.19（峰15），特征图谱见图1。
实施例一：从生产车间取5批复方大青叶组合物进行检测，对复方大青叶组合物采用高效液相色谱法进行检测（高效液相色谱法选用Kromasil 100-5 C18色谱柱进行检测，且C18色谱柱的长度为250mm，C18色谱柱的内径为4.6mm，C18色谱柱的填料颗粒直径为5um），检测方法包括以下步骤:
S1、色谱条件：色谱柱为C18柱，甲醇为流动相A, 0.2%的磷酸水溶液（用10%氢氧化钠溶液调pH为3.0）为流动相B，检测波长为254nm，流速为0.1ml/min，柱温为35℃；
S2、参照物溶液的制备：精密称取绿原酸为对照溶液，并向绿原酸中添加甲醇溶液，使得绿原酸的浓度为30ug/ml；
S3、供试品溶液的制备：分别取金银花、大青叶、紫参、羌活和大黄各0.2g，精密加入30%甲醇25ml，超声提取30min，制得各药材的供试品溶液，各取20μl注入色谱仪按照上述色谱条件进行检测；
S4、分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各20ul，并将参照物溶液与供试品溶液注入液相色谱仪进行色谱分析。
色谱分析的流动相梯度洗脱表如下所示：
| 时间（min） | 流动相A（%） | 流动相B（%） |
| 0-30 | 3-35 | 97-65 |
| 30-50 | 35-65 | 65-35 |
| 50-60 | 65 | 35 |
| 60-61 | 65-3 | 35-97 |
| 61-65 | 3 | 97 |
检测结果如图2所示；
从图2中的检测结果可以发现，在生产车间5批复方大青叶组合物中都含有1-15号色谱峰。
实施例二：分别取金银花、大青叶、紫参、羌活和大黄进行色谱检测，检测方法包括以下步骤:
S1、色谱条件：色谱柱为C18柱，甲醇为流动相A, 0.2%的磷酸水溶液（用10%氢氧化钠溶液调pH为3.0）为流动相B，检测波长为254nm，流速为0.1ml/min，柱温为35℃；
S2、参照物溶液的制备：精密称取绿原酸为对照溶液，并向绿原酸中添加甲醇溶液，使得绿原酸的浓度为30ug/ml；
S3、供试品溶液的制备：分别取金银花、大青叶、紫参、羌活和大黄各0.2g，精密加入30%甲醇25ml，超声提取30min，制得各药材的供试品溶液，各取20μl注入色谱仪按照上述色谱条件进行检测；
S4、分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各20ul，并将参照物溶液与供试品溶液注入液相色谱仪进行色谱分析，
色谱分析的流动相梯度洗脱表如下所示：
| 时间（min） | 流动相A（%） | 流动相B（%） |
| 0-30 | 3-35 | 97-65 |
| 30-50 | 35-65 | 65-35 |
| 50-60 | 65 | 35 |
| 60-61 | 65-3 | 35-97 |
| 61-65 | 3 | 97 |
检测结果如图3所示；
从图3的检测结果中可以发现，在已知的15的个色谱峰中，有8个来自金银花（1，2，5，7-绿原酸，8，9，12，13），7个来自大青叶（1，2，4，6，10，11，13），3个来自紫参（1，3，4），4个来自羌活（1，2，13，14），3个来自大黄（11，13，15），具体分布情况见表1所示：
| 峰号 | 对应药材 |
| 1 | 金银花、大青叶、紫参、羌活 |
| 2 | 金银花、大青叶、羌活 |
| 3 | 紫参 |
| 4 | 大青叶、紫参 |
| 5 | 金银花 |
| 6 | 大青叶 |
| 7-绿原酸 | 金银花 |
| 8 | 金银花 |
| 9 | 金银花 |
| 10 | 大青叶 |
| 11 | 大青叶、大黄 |
| 12 | 金银花 |
| 13 | 金银花、大青叶、羌活、大黄 |
| 14 | 羌活 |
| 15 | 大黄 |
表1：金银花、大青叶、紫参、羌活和大黄五味药的药材对应色谱峰的分布情况
实施例三：分别取金银花、大青叶、紫参、羌活和大黄进行检测，检测方法包括以下步骤:
S1、色谱条件：色谱柱为C18柱，甲醇为流动相A, 0.2%的磷酸水溶液（用10%氢氧化钠溶液调pH为3.0）为流动相B，检测波长为254nm，流速为0.1ml/min，柱温为35℃
S2、参照物溶液的制备：精密称取绿原酸为对照溶液，并向绿原酸中添加甲醇溶液，使得绿原酸的浓度为30ug/ml；
S3、供试品溶液的制备：分别取金银花、大青叶、紫参、羌活和大黄各0.2g，精密加入30%甲醇25ml，超声提取30min，制得各药材的供试品溶液，各取20μl注入色谱仪按照上述色谱条件进行检测；
S4、分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各20ul，并将参照物溶液与供试品溶液注入液相色谱仪进行色谱分析，
色谱分析的流动相梯度洗脱表如下所示：
| 时间（min） | 流动相A（%） | 流动相B（%） |
| 0-30 | 3-35 | 97-65 |
| 30-50 | 35-65 | 65-35 |
| 50-60 | 65 | 35 |
| 60-61 | 65-3 | 35-97 |
| 61-65 | 3 | 97 |
检测结果如图4所示；
从图4的检测结果中可以发现，在已知的15的个色谱峰中对应药材的具体分布情况见表2所示（表2和图4中色谱峰序号与表1和图3中色谱峰序号不一致，没有对应关系）：
表2：金银花、大青叶、紫参、羌活和大黄五味药的药材提取物对应色谱峰的分布情况
从图4及表2可知，发现的17个色谱峰中，有7个来自金银花（2，6，7-绿原酸，8，10，11，13，），3个来自大青叶（1，2，4），5个来自紫参（3-没食子酸，5，6，7-绿原酸，8），4个来自羌活（1，2，8，17），9个来自大黄（3-没食子酸，9，10，11，12，13，14，15，16）。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (5)
1.一种复方大青叶组合物的检测方法，其特征在于，所述复方大青叶组合物采用高效液相色谱法进行检测，所述检测方法包括以下步骤:
S1、色谱条件：色谱柱为C18柱，甲醇为流动相A, 0.2%的磷酸水溶液为流动相B，检测波长为254nm，流速为0.1ml/min，柱温为35℃；
S2、参照物溶液的制备：精密称取绿原酸为对照溶液，并向绿原酸中添加甲醇溶液；
S3、供试品溶液的制备：精密称取复方大青叶组合物粉末，加甲醇，超声提取，滤过，即得；
S4、分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各20ul，并将参照物溶液与供试品溶液注入液相色谱仪进行色谱分析。
2.根据权利要求1所述的一种复方大青叶组合物的检测方法，其特征在于,所述S1中的色谱条件及***适用性实验：色谱柱为Kromasil 100-5 C18色谱柱，且色谱柱的规格为：4.6mm×250mm，5um；磷酸水溶液用质量浓度为10%的氢氧化钠溶液调pH为3.0，进行梯度洗脱。
3.据权利要求2所述的一种复方大青叶组合物的检测方法，其特征在于,所述梯度洗脱的洗脱条件为：在0min-30min时甲醇的体积分数为3%-35%，在30min-50min时甲醇的体积分数为35%-65%，在50min-60min时甲醇的体积分数为65%，在60min-61min时甲醇的体积分数为65%-3%，在61min-65min时甲醇的体积分数为3%。
4.根据权利要求1所述的一种复方大青叶组合物的检测方法，其特征在于，所述S2中参照物溶液的制备：精密称取绿原酸对照品适量，加甲醇制成30μg/ml的溶液，即得。
5.根据权利要求1所述的一种复方大青叶组合物的检测方法，其特征在于，所述S3中供试品溶液的制备：精密称取复方大青叶组合物粉末0.2g，加30%甲醇，超声提取30min，且超声提取的功率为250W,滤过，即得。
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| CN1857434A (zh) * | 2006-04-10 | 2006-11-08 | 山东鲁泰环中制药有限公司 | 一种新复方大青叶制剂的质量控制方法 |
| CN101708223A (zh) * | 2009-11-04 | 2010-05-19 | 山东鲁泰环中制药有限公司 | 中药复方大青叶制剂的制备方法、质量控制方法和应用 |
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