CN111053744B - 一种黄芩苷脂质体及应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种黄芩苷脂质体，包括黄芩苷、神经酰胺和脂质材料，黄芩苷作为药物成分，神经酰胺同时作为药物成分和脂质材料成分之一，采用主动载药法制备而成。本发明通过pH差催化黄芩苷脂质体的主动包封形成，解决了黄芩苷稳定性差、溶解性差，难以单独使用而发挥疗效的问题，同时克服黄芩苷脂质体包封率低、以及神经酰胺稳定性差的问题，拓展了黄芩苷的应用范围和使用方式。本发明所述黄芩苷脂质体具有保湿和抗氧化的作用，可以作为一种活性部位应用到化妆品中。

Description

一种黄芩苷脂质体及应用
技术领域
本发明属于药物制剂领域，具体涉及一种黄芩苷脂质体及应用。
背景技术
黄芩苷(Baicalin，BCL)是从双子叶唇形科植物黄芩(Scutellaria baicalensisGeorgi)的干燥根中提取分离出来的一种黄酮类化合物，具有显著的生物活性，包括抗炎、免疫调控、抗***反应、抗肿瘤、抑菌、抗病毒、降压等，其中以抗炎和免疫调控作用尤为突出。在多种炎症和自身免疫性动物模型上黄芩苷显示明确的抗炎和免疫调控作用，这些模型包括：哮喘、急性胰腺炎、急性肺损伤、肝纤维化、日晒性皮炎等。
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黄芩苷结构中含有酚羟基，不稳定，易受空气氧化变色。并且，黄芩苷很难溶解，几乎不溶于水，并难溶于甲醇、乙醇、丙酮、微溶于氯仿等常规溶剂。黄芩苷的不稳定性和难溶解性的问题，使得单独使用黄芩苷作为有效成分的产品屈指可数，而普遍是应用黄芩提取物作为有效成分。黄芩提取物中主要的药效成分为黄芩苷，此外还含有很多其他成分，甚至是杂质，这些成分混合在一起使用，作用机理的阐明很困难，是否含有拮抗作用，甚至毒性也很难说明，风险性相对于单独使用黄芩苷要高很多。鉴于黄芩苷上述特性，使其应用受到很大的限制。
人们对黄芩苷脂质体进行了研究，考察其制备工艺以及稳定性。如《黄芩苷脂质体的制备和稳定性考察》(席枝侠等,中国医院药学杂志2005年第25卷第1期):采用逆相蒸发法、***注入法和薄膜超声法制备黄芩苷脂质体。采用逆相蒸发法制得的脂质体平均粒径为360±42nm，包封率为56.02±5.3％。采用注入法制得的脂质体平均粒径为120nm，包封率为26.14±1.5％。采用薄膜法制得的脂质体平均粒径为260nm，包封率为53.65±4.8％。又如《黄芩苷脂质体的制备及体内外药剂学行为研究》(徐力昆，河北医科大学，硕士论文)采用薄膜分散法、主动载药法、***注入法、逆相蒸发法四种方法制备黄芩苷脂质体,研究中发现薄膜分散法含药磷脂成膜不好,减压挥发溶剂过程中,有药物和胆固醇晶体析出,后考虑在类脂溶液中加入等表面活性剂,效果仍然不理想。采用***注入法时发现条件不易控制,所得脂质体较稀,所制备脂质体的包封率测定结果较差。采用主动载药法所得脂质体包封率不高，仅为26.9±7.4％，这是由于黄芩苷的亲脂性和亲水性均不好,水中几乎不溶。采用逆相蒸发法制备黄芩苷脂质体，所制得的脂质体较均匀,包封率较高为45.4％。《逆相蒸发法制备黄芩苷脂质体工艺的研究》(吕凤娇，中国药学杂志2019年2月第54卷第3期)公开了采用逆相蒸发法制备维生素E和聚山梨酯80联合修饰的黄芩苷脂质体，采用L16(45)正交实验设计法考察各因素对脂质体包封率的影响，确定了黄芩苷脂质体的最佳工艺，包封率为70.22％，载药量3.18％。
目前，黄芩苷脂质体的制备方法主要是薄膜法和逆相蒸发法。由于黄芩苷在水中几乎不溶，在黄芩苷脂质体的制备过程中，黄芩苷主要以粉末的形式作为脂材加入，包裹到磷脂双分子层中，这种脂质体并不稳定，容易析出，加速脂质体降解，而且脂质体的均匀度和粒径受到很大的挑战。
发明内容
本发明针对现有技术不足，提供了一种新的黄芩苷脂质体，通过pH差促进黄芩苷脂质体的主动包封形成，大大提高了黄芩苷脂质体的均匀性和包封率。
本发明具体技术方案如下：
一种黄芩苷脂质体，包括黄芩苷、神经酰胺和脂质材料，黄芩苷作为药物成分，神经酰胺具有药物活性成分和脂质材料的作用，采用主动载药法制备而成，包括如下步骤：
(1)称取神经酰胺和脂质材料，制备空白神经酰胺脂质体；
(2)加入硫酸铵缓冲液，将硫酸铵包于脂质体内水相，除去脂质体外水相的硫酸铵；
(3)加入黄芩苷水溶液，制备得到黄芩苷脂质体。
黄芩苷水溶液本身为酸性，优选使用碱，如NaOH，调节黄芩苷水溶液pH 5-9，更优选黄芩苷水溶液为中性或近中性(pH6.5-7.5)。
一个具体的操作为：
(1)精密称取神经酰胺和脂质材料，制备空白神经酰胺脂质体；
(2)加入硫酸铵缓冲液，40℃水化20分钟，超声辅助溶解；
(3)过滤，将滤液经过高压均质机均质5-15次；
(4)HBS进行透析24h；
(5)加入黄芩苷水溶液，40℃水浴搅拌20分钟即得黄芩苷脂质体。
上述方法先制备空白神经酰胺脂质体，然后用硫酸铵溶液透析，形成脂质体膜的内外pH差，用加入黄芩苷水浓溶液后，因为黄芩苷的内外浓度差使得黄芩苷分子可以主动进入脂质体内水相，在内水相弱酸性条件下，形成胶状沉淀。具体来说，上述方法通过透析除去脂质体外水溶液中的硫酸铵，使得脂质体内外的硫酸铵浓度形成浓度梯度，从而产生pH梯度，即内水相的NH4 +易分解成NH3和H+，而不同离子对双分子层渗透系数的不同，它们对双分子层的渗透性能有如下规律，即(NH4)2SO4<SO4 2-<NH4 +<H+<NH3。随着中性氨分子离开脂质体，质子被保留在脂质体的内水相中，从而导致脂质体内外水相的H+浓度差，即产生了一个pH梯度。黄芩苷类化合物进入内水相后，遇到酸性环境变成离子态，阻止其返回外水相，并与SO4 2-形成的硫酸盐对双分子层有很低渗透系数，提高了脂质体的包封率。同时，NH3分子的逸出造成了铵离子的扩散电势，这个电势成为药物穿过磷脂双分子层进入内水相，并在内水相聚集的驱动力。最终导致黄芩苷类化合物能够保存在脂质体内水相中，完成主动包封过程。
本发明所述的黄芩苷脂质体，优选神经酰胺与脂质材料的质量比为2-4：20-28。
本发明所述的黄芩苷脂质体，优选所述脂质材料包括卵磷脂、氢化卵磷脂、胆固醇、胆固醇油酸酯、三月桂酸甘油酯、单硬脂酸甘油酯、硬脂酸、甘油棕榈酸硬脂酸酯、山嵛酸甘油酯、三油酸甘油酯、中链脂肪酸酯、中链甘油三酯、油酸聚乙二醇甘油酯和辛癸酸甘油酯中的一种或几种。更优选为胆固醇和氢化卵磷脂和/或卵磷脂。
本发明所述的黄芩苷脂质体，优选黄芩苷脂质体各组分的质量比为：神经酰胺：黄芩苷：脂质材料＝2-4：1-2：20-28。
优选的，所述神经酰胺与黄芩苷质量比为2：1。所述神经酰胺、氢化卵磷脂和/或卵磷脂、胆固醇的质量比为2-4：20-28：2-6。
本发明所述的黄芩苷脂质体具有保湿、抗氧化、抗炎、抗衰老、抗光老化的作用，可以应用于皮肤疾病治疗、皮肤美容、皮肤护理，特别适用于皮炎、湿疹、痤疮、玫瑰痤疮、敏感性皮肤病、光皮肤病、银屑病等疾病的治疗，特别适用于美容护理中的祛皱、祛斑、去疤。
本发明优点：
(1)本发明通过pH差催化黄芩苷脂质体的主动包封形成，大大提高了黄芩苷脂质体的均匀性和包封率。本发明中黄芩苷脂质体的包封率可达94.6％，粒径小且均一，平均粒径90nm。
(2)神经酰胺是细胞间基质的主要部分，在保持角质层水分的平衡中起着重要作用。但是，神经酰胺作为活性物质与其他辅料复配时，容易出现析出的现象，限制了其应用。本发明将神经酰胺加入脂材制备黄芩苷脂质体，能够显著提高神经酰胺在复配制剂中的稳定性，并进一步增加黄芩苷的包封率，且长期放置***漏。另外，神经酰胺可以提高磷脂双分子的厚度，增加质膜弹性，有利于脂质体内水相的保持。
(3)本发明通过多种理化表征途径对黄芩苷脂质体进行了***表征，包括原子力扫描探针显微镜、透射电子显微镜、激光粒度散射仪、高效液相色谱等手段，研究表明该脂质体外形圆整，粒度均一，包封率高，而且在常温下稳定性好。利用人皮肤成纤维细胞、黑色素细胞以及动物实验技术，考察了该脂质体的安全性、保湿性以及抗氧化性能。综合实验结果表明，该复合物安全性好，具有较好的保湿性能，同时可以有效清除氧化自由基。
本发明解决了黄芩苷稳定性差、溶解性差，难以单独使用而发挥疗效的问题，同时克服黄芩苷脂质体包封率低、以及神经酰胺稳定性差的问题，拓展了黄芩苷的应用范围和使用方式。本发明所提供的黄芩苷脂质体具有保湿和抗氧化的作用，可以作为一种活性部位应用到化妆品中。
附图说明
图1.本发明所述黄芩苷脂质体原子力显微镜图片。
图2.本发明所述黄芩苷脂质体透射电镜显微镜图片。
图3.本发明所述黄芩苷脂质体粒径和PDI。
图4.本发明所述黄芩苷脂质体包封率测定结果。
图5.本发明所述黄芩苷脂质体给药后人皮肤成纤维细胞生存率。
图6.本发明所述黄芩苷脂质体给药后人皮肤成纤维细胞显微镜图。
图7.本发明所述黄芩苷脂质体给药后435S细胞生存率。
图8.本发明所述黄芩苷脂质体给药后435S细胞显微镜图。
图9.小鼠皮肤刺激实验本发明所述黄芩苷脂质体给药后小鼠皮肤切片HE染色结果。
图10.小鼠皮肤保湿效果实验本发明所述黄芩苷脂质体给药后小鼠皮肤含水量结果。
图11.本发明所述黄芩苷脂质体抗氧化SOD表达测定结果。
图12.本发明所述黄芩苷脂质体抗氧化ROS表达测定结果。
具体实施方式
以下通过实施例说明本发明的具体步骤，但不局限于实施例范围。
在本发明中使用的术语，除非另有说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。
下面结合具体实施例并参照数据进一步详细描述本发明，应理解，这些实施例只是为了举例说明本发明，而非以任何方式限制本发明的范围。
在以下实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此。
实施例1本发明黄芩苷脂质体Ⅰ的制备
分别精密称取磷脂200mg、胆固醇20mg和神经酰胺20mg同时置于500mL圆底烧瓶中，加入适量乙醇超声辅助使其完全溶解。置于50℃水浴旋转蒸发除去乙醇，在烧瓶内壁形成淡黄色膜。加入250ml-1000ml的250mM硫酸铵缓冲液，40℃水化20分钟，超声辅助溶解；然后进行过滤，将滤液经过高压均质机均质5-15次，然后利用HBS进行透析24h，黄芩苷水溶液(5mg/ml，pH6.5-7.5)1ml，40度水浴搅拌20分钟即得黄芩苷脂质体Ⅰ。
实施例2本发明黄芩苷脂质体Ⅱ的制备
分别精密称取磷脂200mg、胆固醇16mg、三油酸甘油酯2mg、胆固醇油酸酯2mg和神经酰胺20mg同时置于500mL圆底烧瓶中，加入适量乙醇超声辅助使其完全溶解。置于50℃水浴旋转蒸发除去乙醇，在烧瓶内壁形成黄色膜。加入250ml-1000ml的250mM硫酸铵缓冲液，40℃水浴水化20分钟，超声辅助溶解；然后进行过滤，将滤液经过高压均质机均质5-15次，然后利用HBS进行透析24h，黄芩苷水溶液(10mg/ml，pH6.5-7.5)1ml，40度水浴搅拌20分钟即得黄芩苷脂质体Ⅱ。
实施例3本发明黄芩苷脂质体Ⅲ的制备
分别精密称取磷脂200mg、胆固醇14mg、三油酸甘油酯2mg、中链甘油三酯2mg、油酸聚乙二醇甘油酯2mg和神经酰胺20mg同时置于500mL圆底烧瓶中，加入适量乙醇超声辅助使其完全溶解。置于50℃水浴旋转蒸发除去乙醇，在烧瓶内壁形成黄色膜。加入250ml-1000ml的250mM硫酸铵缓冲液，40℃水浴水化20分钟，超声辅助溶解；然后进行过滤，将滤液经过高压均质机均质5-15次，然后利用HBS进行透析24h，黄芩苷水溶液(20mg/ml，pH6.5-7.5)1ml，40度水浴搅拌20分钟即得黄芩苷脂质体Ⅲ。
实施例4无神经酰胺的黄芩苷脂质体的制备
分别精密称取磷脂200mg和胆固醇14mg同时置于500mL圆底烧瓶中，加入适量乙醇超声辅助使其完全溶解。置于50℃水浴旋转蒸发除去乙醇，在烧瓶内壁形成黄色膜。加入250ml-1000ml的250mM硫酸铵缓冲液，40℃水浴水化20分钟，超声辅助溶解；然后进行过滤，将滤液经过高压均质机均质5-15次，然后利用HBS进行透析24h，黄芩苷水溶液(5mg/ml，pH6.5-7.5)1ml，40度水浴搅拌20分钟即得黄芩苷脂质体。包封率检测结果表明，该脂质体的包封率低于60％，对黄芩苷的包载性较差。结果表明神经酰胺对于黄芩苷脂质体的制备非常关键。
实施例4神经酰胺联合其它脂质材料制备脂质体
分别精密称取胆固醇14mg、三油酸甘油酯2mg、中链甘油三酯2mg、油酸聚乙二醇甘油酯2mg，分别加入20mg神经酰胺，置于500mL圆底烧瓶中，加入适量乙醇超声辅助使其完全溶解。置于50℃水浴旋转蒸发除去乙醇，在烧瓶内壁形成黄色膜。加入250ml-1000ml的250mM硫酸铵缓冲液，40℃水浴水化20分钟，超声辅助溶解；然后进行过滤，将滤液经过高压均质机均质5-15次。此外利用激光照射发现并未产生丁达尔效应，表明没有形成脂质体，后续测量乳液粒径也证明没有形成纳米尺度的脂质体。结果表明，仅以神经酰胺为基础的双组份脂质材料无法形成脂质体。
实施例6本发明所述黄芩苷脂质体的理化表征
1.原子力扫描探针显微镜
利用原子力扫描探针显微镜对脂质体Ⅰ进行形态学评价。用去离子水作为分散介质将脂质体稀释至100μg/mL磷脂浓度后，过0.22μm的微孔滤膜，取10μL涂于硅片表面，室温静置干燥后，用原子力显微镜进行检测。结果如图1所示。结果显示：脂质体的粒径在100nm左右，呈规则的圆球形且具有光滑表面。
2.透射电子显微镜
采用透射电子显微镜，进一步研究脂质体Ⅰ的形态。使用去离子水作为分散介质稀释脂质体，用0.22μm微孔滤膜过滤后，将铺有碳膜的铜网漂放在脂质体溶液上，1min后取出，用滤纸吸干后，将俘获有脂质体粒子的铜网漂放在1％醋酸双氧铀水溶液上，1min后取出，用滤纸吸干。室温放置过夜后，使用透射电镜仪在120kV下进行观察。结果如图2所示。结果显示：脂质体的透射电镜呈现明显的磷脂双分子层结构，脂质体的粒径大约在100nm左右，且呈类圆形结构。
3粒径测定
分别取实施例1-3制得的黄芩苷脂质体加入PBS稀释至1mL，混合均匀后，使用光散射粒径测定仪测定脂质体的粒径。仪器的激光束波长设定为633nm，入射光与散射光束的夹角为90°。每个样品平衡时间30s，测定20个循环时间，测定温度设定为25℃。每个样品最后的测定结果为3次测定结果的平均值。多分散度(PDI)表示粒子大小的均匀程度，多分散度越小则粒子越均匀。结果如图3所示。结果显示各组脂质体的平均粒径在92.74-100.08nm之间，PDI在0.17-0.21之间，表明3种脂质体粒子大小均匀。
3.包封率测定
取实施例1-3制得的黄芩苷脂质体，过0.45μm微孔滤膜，按1:1加甲醇破乳，超声5min，后用HPLC进行测定。计算公式：EE％＝HPLC测得载药量/药物加入量×100％。结果如图4所示，1为脂质体Ⅰ神经酰胺的包封率；2为脂质体Ⅱ神经酰胺的包封率；3为脂质体Ⅲ神经酰胺的包封率；4为脂质体Ⅰ黄芩苷的包封率；5为脂质体Ⅱ黄芩苷的包封率；6为脂质体Ⅲ黄芩苷的包封率。结果显示各组脂质体的包封率均在81％以上，表明脂质体能够较好的包封黄芩苷，包封条件比较合适。
5.体外释放考察
取实施例1-3制得的黄芩苷脂质体2mL放入透析袋(MWCO,12000-14000Da)内，两端扎紧后置于20.0mL释放介质中，37℃、100rpm振摇，分别于12、24、48、72h取出0.5mL释放介质，并每次取样后立即补入同等体积的新鲜释放介质。取出的各份样品，加等体积甲醇破乳后，采用HPLC测定其中神经酰胺和黄芩苷的含量。
计算公式：体外释放率％＝(第ih测得释放介质中药物的量/投药量)×100％。
表1.神经酰胺体外释放
Figure GDA0002396862210000081
表2.黄芩苷体外释放
Figure GDA0002396862210000082
结果如表1和表2所示。结果显示72h时，各组脂质体神经酰胺的体外释放率均小于40％且黄芩苷的体外释放率不大于20％，表明制备的脂质体具有缓慢释放药物的特点，能够有效防止脂质体中药物在使用过程中的泄露。
6.储藏稳定性
取实施例1-3制得的黄芩苷脂质体5mL于西林瓶中，密封。将密封脂质体分别置于常温和4℃冰箱中储存，分别在0、10、20、30和60d取出观察脂质体的外观、粒径及包封率变化。
表3.神经酰胺包封率变化
Figure GDA0002396862210000091
表4.黄芩苷包封率变化
Figure GDA0002396862210000092
表5.粒径变化
Figure GDA0002396862210000093
Figure GDA0002396862210000101
Note：1为“Ⅰ号脂质体”；2为“Ⅱ号脂质体”；3为“Ⅲ号脂质体”。
结果如表3、4、5所示。结果显示各脂质体在室温及4℃储存30d后，包封率、粒径及PDI变化在合理范围内，表明3种脂质体具有良好的稳定性。
实施例7本发明所述黄芩苷脂质体的安全性评价
1.细胞毒评价
人皮肤成纤维细胞的培养条件为DMEM培养基，内含10％胎牛血清，双抗(青霉素100U/ml和链霉素100μg/ml)，4-5天传代1次。435S细胞的培养条件为DMEM培养基，内含10％胎牛血清，双抗(青霉素100U/ml和链霉素100μg/ml)，2-3天传代1次。两种细胞均在37℃、含5％CO2细胞培养箱中培养，取对数生长期的细胞进行实验。分别取对数生长期的人皮肤成纤维细胞和435S细胞制成单细胞悬液，200μL细胞悬液加入96孔板，每孔5×103个细胞，细胞贴壁后分别加入脂质体Ⅰ-Ⅲ组和空白脂质体组，各实验组，设置7个浓度梯度，浓度1-7依次为5、2.5、1.25、0.63、0.32、0.16和0.08μM，继续培养40h后，取出培养板。弃去培养液，每孔加入200μL预冷的三氯乙酸溶液(TCA，10％)，在4℃冰箱中放置1h固定细胞。然后用蒸馏水洗涤5遍，以去除三氯乙酸。在空气中干燥后，每孔加0.4％的SRB染液100μL，室温下染色20min，弃去染液后，用1％乙酸洗涤5遍，除去未结合的染料。空气中干燥后，每孔加入200μL的Tris溶液(pH 10.5、10mmol/l)溶解，在平板振荡器上振荡30min，至SRB染料全部溶解。将96孔板放入酶标仪中，于540nm波长下测定每孔光密度值(optical density,OD)。采用细胞的存活百分数(cell survival rate,％)来评价各制剂组对细胞的细胞毒作用。细胞存活百分数按照如下公式计算：
Figure GDA0002396862210000111
结果如图5所示。结果显示各脂质体制剂测定浓度范围内对人皮肤成纤维细胞的存活率均无明显影响，表明各脂质体制剂在测定浓度范围内对人皮肤成纤维细胞几乎不产生细胞毒性。
人皮肤成纤维细胞给药后显微镜图如图6所示。结果显示各脂质体制剂组人皮肤成纤维细胞形态正常，生长状态良好，表明各脂质体制剂对人皮肤成纤维细胞几乎无细胞毒性作用。
435S细胞生存率结果如图7所示。结果显示在测定浓度范围内，各脂质体制剂组435S细胞的生存率均在75-100％之间，表明各脂质体制剂对435S细胞无明显的细胞毒性作用。
435S细胞给药后显微镜图如图8所示。结果显示各脂质体制剂组在测定浓度范围内435S细胞生长状态良好，形态正常，表明各脂质体制剂对435S细胞几乎无细胞毒性作用。
2.小鼠皮肤刺激实验
小鼠30只，3组实验组、1组空白组和1个生理盐水组，每组随机分配6只。用10％硫化钠脱毛剂腹部脱毛，脱毛面积2×2cm2。分别涂抹黄芩苷脂质体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ(黄芩苷含量0.2mg/ml)、空白脂质体和生理盐水0.5mL，每天涂抹1次，共10天。之后处死小鼠，常规方法制作冰冻切片，HE染色考察皮肤情况。
结果如图9所示。其中1为生理盐水组；2为空白脂质体组；3为脂质体Ⅰ组”；4为脂质体Ⅱ组；5为号脂质体Ⅲ组。结果显示各组小鼠皮肤结构完整，表皮厚度较均匀，细胞排列紧密，细胞核形态正常，皮肤附属器形态正常且数量较多，表明各种脂质体对小鼠皮肤无刺激性。
实施例8本发明黄芩苷脂质体的实验效应评价
1.小鼠皮肤保湿效果评价
小鼠30只，3组实验组、1组空白组和1个生理盐水组，每组随机分配6只。用10％硫化钠脱毛剂腹部脱毛，脱毛面积2×2cm2。每次涂抹不同处方的神经酰胺脂质体、空白脂质体和生理盐水0.5mL，每天涂抹1次，共10天。并分别于给药前、涂抹后2h、6h和12h用皮肤含水量测试仪检测小鼠腹部水分值，并记录其数值(每个数值重复测量3次，取平均值)。
结果如图10所示。其中1为生理盐水组；2为空白脂质体组；3为脂质体Ⅰ组；4为脂质体Ⅱ组；5为号脂质体Ⅲ组。结果显示各组小鼠皮肤含水量无显著性差异，表明各种脂质体对小鼠皮肤含水量无明显影响。
2.抗氧化自由基的试验
活性氧(ROS)是含氧的化学反应性化学物质，在环境压力(如紫外线)期间，ROS水平会急剧增加。这可能会对细胞结构造成严重损害，这被称为氧化应激。超氧化物歧化酶(SOD)是一种金属酶，能够清除体内自由基，其活力越高，生物体清除自由基的能力相对越强。
取对数生长期皮肤成纤维细胞接种于24孔培养板中，37℃，5％CO2环境中培养过夜。紫外(UVA)照射剂量(5J/cm2)。分别给予黄芩苷脂质体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ(黄芩苷含量0.1mg/ml)、空白脂质体(对照组)。3h后测定SOD和ROS的变化。
SOD表达测定结果如图11所示，1为空白脂质体组；2为脂质体Ⅰ组；3为脂质体Ⅱ组；4为号脂质体Ⅲ组。结果显示脂质体Ⅱ及脂质体Ⅲ能够显著增加皮肤成纤维细胞中SOD活性，而脂质体Ⅰ对SOD活性无明显影响，表明脂质体Ⅱ及脂质体Ⅲ能够提高皮肤成纤维细胞中SOD活性，增强其抗氧化能力。
ROS表达测定结果如图12所示，1为空白脂质体；2为阳性对照(试剂盒提供，Rosup50mg/ml)；3为脂质体Ⅰ；4为脂质体Ⅱ；5为号脂质体Ⅲ。结果显示脂质体Ⅰ-Ⅲ均能够明显降低皮肤成纤维细胞中ROS含量，且彼此之间无显著性差异，表明3种脂质体均能够抑制ROS的产生，降低皮肤成纤维细胞氧化应激水平。

Claims (6)

1.一种黄芩苷脂质体，其特征在于包括黄芩苷、神经酰胺和脂质材料，采用主动载药法制备而成，所述神经酰胺与脂质材料的质量比为2-4：20-28，所述脂质材料包括胆固醇、卵磷脂和/或氢化卵磷脂，采用如下方法制备而成：
（1） 称取神经酰胺和脂质材料，制备空白神经酰胺脂质体；
（2） 加入硫酸铵缓冲液，将硫酸铵包于脂质体内水相，除去脂质体外水相的硫酸铵；
（3） 加入黄芩苷水溶液，制备得到黄芩苷脂质体。
2.如权利要求 1所述的黄芩苷脂质体，其特征在于所述黄芩苷水溶液pH为5-9。
3.如权利要求 1 所述的黄芩苷脂质体，其特征在于所述黄芩苷脂质体各组分的质量比为：神经酰胺：黄芩苷：脂质材料=2-4：1-2：20-28。
4.如权利要求 1所述的黄芩苷脂质体，其特征在于所述神经酰胺与黄芩苷质量比为2：1。
5.如权利要求 1所述的黄芩苷脂质体，其特征在于所述神经酰胺、卵磷脂和/或氢化卵磷脂、胆固醇的质量比为 2-4：20-28：2-6。
6.如权利要求 1-5任一项所述的黄芩苷脂质体在制备用于皮肤疾病治疗、皮肤美容、皮肤护理产品中的应用。
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