CN111050815B - 血管新生剂及其制造方法 - Google Patents

Abstract

本发明的课题在于提供一种能够在不使宿主细胞渗透而从免疫排斥反应得到保护的状态下，充分地发挥基于间充质干细胞的血管新生效果的血管新生剂及其制造方法。根据本发明，可提供一种血管新生剂，其包含(A)间充质干细胞及(B)内包上述间充质干细胞的免疫隔离膜。

Description

血管新生剂及其制造方法

技术领域

本发明涉及一种包含间充质干细胞及内包间充质干细胞的免疫隔离膜的血管新生剂。本发明还涉及一种血管新生剂的制造方法。

背景技术

近年来，正积极地对使用了间充质干细胞(MSC)的再生医疗及细胞治疗进行研究。例如，专利文献1中公开了用于通过静脉注射MSC来预防、治疗炎性肠病的方法。还实施了一些临床研究和临床试验。然而，发现实际上未显示充分的治疗效果(非专利文献1)。并且，专利文献2中公开了一种用于通过注射低氧培养的MSC来治疗肝病的方法。而且，专利文献3中公开了在模拟微小重力环境下培养的MSC适于中枢神经***疾病治疗。而且广泛研究了针对缺血性疾病的血管新生用途，例如在专利文献4中公开了一种包含脂肪来源的间充质干细胞的缺血性肢体疾病治疗剂。

考虑到产业利用时，其课题为逐渐以工业方式获得MSC。作为其解决方案，据说实际使用他人的细胞(异体细胞)而不是患者自身的细胞，在实际临床研究或临床试验中也实施了许多使用了异体MSC的研究。然而，与自古以来的器官移植的课题相同地，在使用了异体细胞的治疗中，由于患者自身的免疫反应排斥或排除所移植的异体MSC的情况成为大课题。尽管据说MSC本身具有相对较难接受免疫排斥的性质，但实际上，接受排斥是很自然的，且随着时间的推移会从体内排除。同时使用免疫抑制剂与器官移植的情况相同而成为一个解决方案，但由免疫抑制剂引起的副作用和持续使用会成为大负担，而并不是优选的解决方案。

因此，需要一种不使用免疫抑制剂而可逃避免疫反应的方法。作为一种方法，作为主要假定了糖尿病治疗的胰岛移植用设备而对被称为免疫隔离膜的选择渗透性膜进行了研究。例如，在专利文献5中公开了一种用于移植产生胰岛素的胰岛的免疫隔离膜设备，但未公开移植MSC的方法。

并且，专利文献6中记载有一种设备，其为向有需要的对象提供生物活性物质的能够植入的设备，并具备与将能够产生生物活性物质的一种或多种细胞胶囊化的生物适合性半透明袋接触的微小血管结构体。记载有专利文献6中所记载的设备用于提高移植细胞的生存能力及功能，且其可以为免疫隔离设备的内容。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开2009-007321号公报

专利文献2：日本特开2016-138092号公报

专利文献3：日本专利第5606008号公报

专利文献4：日本专利第5290281号公报

专利文献5：日本特表平7-508187号公报

专利文献6：日本特表2008-541953号公报

非专利文献

非专利文献1：Aliment Pharmacol Ther 2017；45：205-221

发明内容

发明要解决的技术课题

本发明的应解决的课题在于提供一种能够在不使宿主细胞渗透便从免疫排斥反应得到保护的状态下，充分地发挥基于间充质干细胞的血管新生效果的血管新生剂及其制造方法。

用于解决技术课题的手段

本发明人为了解决上述课题而进行了深入研究的结果，发现能够提供一种通过使免疫隔离膜内包间充质干细胞，能够在从免疫排斥反应得到保护的状态下，充分地发挥基于间充质干细胞的血管新生效果的血管新生剂，并完成了本发明。

即，根据本发明，可提供以下发明。

(1)一种血管新生剂，其包含(A)间充质干细胞及(B)内包上述间充质干细胞的免疫隔离膜。

(2)根据(1)所述的血管新生剂，其中，

上述间充质干细胞为脂肪来源的间充质干细胞或骨髄来源的间充质干细胞。

(3)根据(1)或(2)所述的血管新生剂，其中，

上述免疫隔离膜为含有聚合物的多孔膜。

(4)根据(3)所述的血管新生剂，其中，

上述多孔膜的最小孔径为0.02μm～1.5μm。

(5)根据(3)或(4)所述的血管新生剂，其中，

上述多孔膜的厚度为10μm～250μm。

(6)根据(3)至(5)中任一项所述的血管新生剂，其中，

上述多孔膜在内部具有孔径最小的层状致密部位，且孔径在厚度方向上从上述致密部位朝向上述多孔膜的至少一个表面连续地增加。

(7)根据(6)所述的血管新生剂，其中，

上述致密部位的厚度为0.5μm～30μm。

(8)根据(3)至(7)中任一项所述的血管新生剂，其中，

上述多孔膜的最小孔径与最大孔径之比为3.0～20.0。

(9)根据(3)至(8)中任一项所述的血管新生剂，其中，

上述多孔膜含有至少一种聚砜及聚乙烯吡咯烷酮。

(10)根据(1)至(9)中任一项所述的血管新生剂，其包含间充质干细胞来形成细胞结构体，该细胞结构体包含多个生物相容性高分子嵌段物和至少一种多个间充质干细胞，且在多个上述间充质干细胞的间隙配置有至少一个上述生物相容性高分子嵌段物。

(11)根据(10)所述的血管新生剂，其中，

一个上述生物相容性高分子嵌段物的大小为20μm以上且200μm以下。

(12)根据(10)或(11)所述的血管新生剂，其中，

在上述生物相容性高分子嵌段物中，通过热、紫外线或酶而交联有生物相容性高分子。

(13)根据(10)至(12)中任一项所述的血管新生剂，其中，

上述生物相容性高分子嵌段物为不定形生物相容性高分子嵌段物。

(14)根据(10)至(13)中任一项所述的血管新生剂，其中，

上述细胞结构体包含相对于每一个细胞为0.0000001μg以上且1μg以下的生物相容性高分子嵌段物。

(15)一种(1)至(14)中任一项所述的血管新生剂的制造方法，其包括用免疫隔离膜内包间充质干细胞的工序。

而且，根据本发明，可提供以下发明。

(16)一种血管新生方法，其包括将包含(A)间充质干细胞及(B)内包上述间充质干细胞的免疫隔离膜的细胞移植用设备移植到需要血管新生的对象的工序。

(17)一种细胞移植用设备，其用于在用于血管新生的处置中使用，其包含(A)间充质干细胞及(B)内包上述间充质干细胞的免疫隔离膜。

(18)一种细胞移植用设备的使用，该细胞移植用设备用于制造血管新生剂，且包含(A)间充质干细胞及(B)内包上述间充质干细胞的免疫隔离膜。

发明效果

本发明的血管新生剂在移植产生免疫排斥反应的异体或异种间充质干细胞(MSC)而促进血管新生时有用。根据本发明，能够从宿主细胞保护MSC的同时充分地发挥基于MSC的血管新生效果。根据本发明，能够在血管新生剂的周围使血管局部地且高效率地新生。

附图说明

图1表示条件A中所记载的实验的液温分布。

图2表示条件B中所记载的实验的液温分布。

图3表示条件C中所记载的实验的液温分布。

图4表示参考例8的多孔膜的膜截面的SEM拍摄照片。

图5表示参考例8的多孔膜的厚度方向上的孔径分布。

图6表示细胞移植用设备(仅免疫隔离膜)的制作方法。

图7表示参考例10的多孔膜的膜截面的SEM拍摄照片。

图8表示参考例10的多孔膜的厚度方向上的孔径分布。

图9表示参考例12的多孔膜的膜截面的SEM拍摄照片。

图10表示参考例12的多孔膜的厚度方向上的孔径分布。

图11表示移植了包含细胞结构体的细胞移植用设备的组织标本。

图12表示仅移植了细胞结构体的组织标本。

图13表示移植了细胞移植用设备(仅免疫隔离膜)的组织标本。

图14表示每个视野的血管总面积的测量结果。

图15表示每个视野的血管根数的测量结果。

图16表示每个视野的血管总面积的测量结果。

图17表示每个视野的血管根数的测量结果。

图18表示移植了包含细胞结构体的细胞移植用设备或细胞移植用设备(仅免疫隔离膜)的C57BL/6小鼠的组织标本。

图19表示仅移植了细胞移植用设备的C57BL/6小鼠的组织标本。

图20表示每个视野的血管总面积的测量结果。

图21表示每个视野的血管根数的测量结果。

具体实施方式

以下，对用于实施本发明的方式进行详细说明。本说明书中，“～”表示将记载于其前后的数值分别作为最小值及最大值而包含的范围。

本发明的血管新生剂包含(A)间充质干细胞及(B)内包上述间充质干细胞的免疫隔离膜。

本发明的血管新生剂能够在血管新生剂的周围使血管局部地新生，并能够发挥基于移植细胞的长期治疗效果。另外，本发明的血管新生剂其本身不包含微小血管，在该方面与专利文献6中所记载的设备不同。另外，在考虑到产业利用的情况下，实际移植他人的细胞或组织，但在如专利文献6的构成品中，微小血管本身会成为基于宿主的免疫反应的排斥对象。该情况在微小血管包含细胞时尤其显著，在专利文献6中也记载有考虑该情况而使用同种同系的内容。但是，同种同系仅在作为实验动物受基因控制的动物之间成立，在实际使用中，例如以人为对象时同系并不存在而无法使用。另一方面，本发明的血管新生剂在以下方面大不同，即不包含外部来源的微小血管，且归根结底是由宿主细胞制成新的血管，因此能够不受这种限制而使用。

＜细胞＞

本发明中所使用的细胞为间充质干细胞(MSC)。间充质干细胞的来源并无特别限定，但优选为脂肪来源的间充质干细胞或骨髓来源的间充质干细胞，更优选为脂肪来源的间充质干细胞。另外，间充质干细胞是指存在于间充质组织中的成体干细胞，且具有针对属于间充质组织的细胞的分化能力。间充质组织是指骨、软骨、脂肪、血液、骨髓、骨骼肌、真皮、韧带、肌腱、心脏等组织。

＜细胞结构体＞

本发明中所使用的细胞可以直接使用，也可以用作细胞结构体。本说明书中所说的细胞结构体是指包括多个生物相容性高分子嵌段物和至少一种多个细胞，且在多个上述细胞的间隙配置有至少一个上述生物相容性高分子嵌段物的细胞结构体。关于细胞结构体，在本说明书中有时还称为镶嵌细胞块(呈镶嵌状的细胞块)。

(1)生物相容性高分子嵌段物

(1-1)生物相容性高分子

生物相容性是指，在与生物接触时，不会引起如长期且慢性炎症反应等明显的有害反应。若本发明中所使用的生物相容性高分子对生物具有相容性，则对于是否在生物内被分解并无特别限定，担优选为生物降解性高分子。作为非生物降解性材料，具体而言，可举出聚四氟乙烯(PTFE)、聚氨酯、聚丙烯、聚酯、氯乙烯、聚碳酸酯、丙烯酸、不锈钢、钛、硅酮及MPC(2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酸胆碱)等。作为生物降解性材料，具体而言，可举出天然来源的肽、重组肽或化学合成肽等多肽(例如，以下进行说明的明胶等)、聚乳酸、聚乙醇酸、乳酸-乙醇酸共聚物(PLGA)、透明质酸、糖胺聚糖、蛋白聚糖、软骨素、纤维素、琼脂糖、羧甲基纤维素、甲壳素及壳聚糖等。上述中，尤其优选重组肽。这些生物相容性高分子可以被实施提高细胞粘附性的改进。具体而言，能够使用“对基材表面的基于细胞粘附基质(纤连蛋白、玻连蛋白、层粘连蛋白)或细胞粘附序列(以氨基酸单字母符号表示的RGD序列、LDV序列、REDV序列、YIGSR序列、PDSGR序列、RYVVLPR序列、LGTIPG序列、RNIAEIIKDI序列、IKVAV序列、LRE序列、DGEA序列及HAV序列)肽的涂布”、“基材表面的氨基化、阳离子化”或“基材表面的等离子体处理、基于电晕放电的亲水处理”等方法。

只要具有生物相容性则包含重组肽或化学合成肽的多肽的种类并无特别限定，例如优选明胶、胶原、去端肽胶原、弹性蛋白、纤连蛋白、pronectin、层连蛋白、腱生蛋白、纤维蛋白、丝蛋白、巢蛋白、血小板反应蛋白、Retronectin(注册商标)，最优选为明胶、胶原、去端肽胶原。作为本发明中所使用的明胶，优选为天然明胶、重组明胶或化学合成明胶，进一步优选为重组明胶。在此所说的天然明胶是指由天然来源的胶原制成的明胶。

化学合成肽或化学合成明胶是指人工合成的肽或明胶。明胶等肽的合成可以是固相合成，也可以是液相合成，优选为固相合成。肽的固相合成乃是本领域技术人员所熟知的，例如可举出作为氨基的保护而使用Fmoc基(Fluorenyl-Methoxy-Carbonyl基：芴-甲氧基-羰基)的Fmoc基合成法、以及作为氨基的保护而使用Boc基(tert-Butyl Oxy Carbonyl基：叔丁基氧基羰基)的Boc基合成法等。另外，化学合成明胶的优选方式能够套用本说明书中后述的重组明胶中所记载的内容。

本发明中所使用的生物相容性高分子的亲水性值“1/IOB”值优选0～1.0。更优选为0～0.6，进一步优选为0～0.4。IOB是指基于由藤田穆提出的表示有机化合物的极性/非极性的有机示意图的亲疏水性的指标，其详细内容例如在“Pharmaceutical Bulletin：药学通报”,vol.2,2,pp.163-173(1954)、“化学领域”vol.11,10,pp.719-725(1957)、“Fragrance Journal”,vol.50,pp.79-82(1981)等中进行了说明。简单而言，将所有的有机化合物的来源设为甲烷(CH₄)，且将其他化合物均视为甲烷的衍生物，将其碳原子数、取代基、转变部、环等分别设定为一定数值，相加其分数来求出有机性值(OV)、无机性值(IV)，并将该值标绘在以有机性值作为X轴，以无机性值作为Y轴的图上。有机示意图中的IOB是指，有机示意图中的无机性值(IV)与有机性值(OV)之比、即“无机性值(IV)/有机性值(OV)”。关于有机示意图的详细内容，可参考“新版有机示意图-基础与应用”(甲田善生等编著，三共出版、2008)。本说明书中，以取IOB的倒数的“1/IOB”值表示亲疏水性。是“1/IOB”值越小(接近0)，则越表示亲水性的标注。

推定通过将本发明中所使用的高分子的“1/IOB”值设为上述范围，亲水性变高，且吸水性变高，因此有效地对营养成分的保持起作用，其结果，有助于本发明所涉及的细胞结构体(镶嵌细胞块)中的细胞的稳定化、易生存性。

当本发明中所使用的生物相容性高分子为多肽时，由亲水性平均(Grand averageof hydropathicity)(GRAVY)值表示的亲疏水性指标中，优选为0.3以下且-9.0以上，进一步优选为0.0以下且-7.0以上。亲水性平均(GRAVY)值能够通过“GasteigerE.,HooglandC.,Ga ttikerA.,Duvaud S.,WiIkins M.R.,Appel R.D.,8a irochA.；ProteinIdentification and Analysis Tools on the ExPASy Server；(In)John M.Walker(ed):TheProteomics Protocols Handbook,Humana Press(2005).pp.571-607”及“GasteigerE.,GattikerA.,Hoogland C.,Ivanyi I.,Appel R.D.,Bairoch A.；ExPASy:theproteomics server forin-depth protein knowledge and analysis.；Nucleic AcidsRes.31:3784-3788(2003).”的方法而得到。

推定通过将生物相容性高分子的GRAVY值设为上述范围，亲水性变高，且吸水性变高，因此有效地对营养成分的保持起作用，其结果，有助于本发明所涉及的细胞结构体(镶嵌细胞块)中的细胞的稳定化、易生存性。

(1-2)交联

本发明中所使用的生物相容性高分子可以被交联，也可以不被交联，但优选被交联。通过使用被交联的生物相容性高分子，能够得到防止在培养基中培养时及移植到生物时瞬间降解的效果。作为通常的交联方法，已知有热交联、基于醛类(例如，甲醛、戊二醛等)的交联、基于缩合剂(碳二亚胺、氰胺等)的交联、酶交联、光交联、紫外线交联、疏水性相互作用、氢键及离子性相互作用等，本发明中也能够使用上述交联方法。作为本发明中所使用的交联方法，进一步优选为热交联、紫外线交联或酶交联，尤其优选为热交联。

当进行基于酶的交联时，作为酶，只要具有高分子材料之间的交联作用，则并无特别限制，能够优选使用谷氨酰胺转氨酶或漆酶，最优选使用谷氨酰胺转氨酶来进行交联。作为用谷氨酰胺转氨酶进行酶交联的蛋白质的具体例，只要为具有赖氨酸残基及谷氨酰胺残基的蛋白质，则并无特别限制。谷氨酰胺转氨酶可以是哺乳类来源的谷氨酰胺转氨酶，也可以是微生物来源的谷氨酰胺转氨酶，具体而言，可举出AJINOMOTO CO.,INC.制ACTIVA系列、作为试剂而出售的哺乳类来源的谷氨酰胺转氨酶、例如，Oriental Yeast Co.,ltd.制、Upstate USA Inc.制、Biodesign International制等豚鼠肝脏来源谷氨酰胺转氨酶、山羊来源谷氨酰胺转氨酶、兔子来源谷氨酰胺转氨酶等及人来源凝血因子(Factor XIIIa，Haematologic Technologies,Inc.)等。

进行交联(例如，热交联)时的反应温度只要能够进行交联，则并无特别限定，优选为-100℃～500℃，更优选为0℃～300℃，进一步优选为50℃～300℃，尤其优选为100℃～250℃，最优选为120℃～200℃。

(1-3)重组明胶

本发明中所说的重组明胶是指，通过基因重组技术制成的类似明胶的具有氨基酸序列的多肽或蛋白样物质。本发明中能够使用的重组明胶优选具有胶原中特征性的由Gly-X-Y表示的序列(X及Y分别独立地表示氨基酸中的任一种)的重复。其中，多个Gly-X-Y可以分别相同，也可以不同。优选在一分子中含有两个序列以上的细胞粘附信号。作为本发明中所使用的重组明胶，能够使用具有来源于胶原的部分氨基酸序列的氨基酸序列的重组明胶。例如，能够使用EP1014176、美国专利6992172号、国际公开WO2004/085473、国际公开WO2008/103041等中所记载的重组明胶，但并不限定于这些。作为本发明中所使用的重组明胶而优选的重组明胶为以下形态的重组明胶。

重组明胶因天然明胶原有的性能而生物相容性优异，并且因非天然来源而不存在牛海绵状脑病(BSE)等忧患，且非感染性优异。并且，与天然明胶相比，重组明胶均匀，且序列已确定，因此在强度及降解性方面也能够通过交联等而模糊较少地精密设计。

重组明胶的分子量并无特别限定，优选为2000以上且100000以下(2kDa(千道尔顿)以上且100kDa以下)，更优选为2500以上且95000以下(2.5kDa以上且95kDa以下)，进一步优选为5000以上且90000以下(5kDa以上且90kDa以下)，最优选为10000以上且90000以下(10kDa以上且90kDa以下)。

重组明胶优选具有胶原中特征性的由Gly-X-Y表示的序列的重复。其中，多个Gly-X-Y可以分别相同，也可以不同。Gly-X-Y中，Gly表示甘氨酸，X及Y表示任意氨基酸(优选为除甘氨酸以外的任意氨基酸)。胶原中特征性的由Gly-X-Y表示的序列为明胶-胶原的氨基酸组成及序列中的与其他蛋白质相比非常特殊的部分结构。在该部分，甘氨酸占整体的约3分之1，在氨基酸序列三个中一个为重复。甘氨酸为最简单的氨基酸，对分子链的配置的束缚也较少，且在凝胶化时大大有助于螺旋结构的再生。由X及Y表示的氨基酸含有较多的亚氨基酸(脯氨酸、氧脯氨酸)，优选占整体的10％～45％。优选重组明胶的序列的80％以上，更优选95％以上，最优选99％以上的氨基酸为Gly-X-Y的重复结构。

通常的明胶中，极性氨基酸中的带电荷的氨基酸与无电荷的氨基酸以1:1存在。在此，极性氨基酸具体是指半胱氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、组氨酸、赖氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸及精氨酸，其中极性无电荷氨基酸是指半胱氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸及酪氨酸。本发明中所使用的重组明胶中，所构成的所有的氨基酸中的极性氨基酸的比例为10～40％，优选为20～30％。并且，优选上述极性氨基酸中的无电荷氨基酸的比例为5％以上且小于20％，优选为5％以上且小于10％。而且，优选在序列上不包含丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、酪氨酸及半胱氨酸中的任一个氨基酸，优选不包含两个以上的氨基酸。

通常多肽中，已知作为细胞粘附信号而起作用的最小氨基酸序列(例如，NagaiShoten Co.,Ltd.出版发行的“病态生理”Vol.9、No.7(1990年)527页)。本发明中所使用的重组明胶优选在一分子中具有两个以上的这些细胞粘附信号。作为具体的序列，从粘附的细胞的种类多这一方面考虑，优选以氨基酸单字母符号表示的RGD序列、LDV序列、REDV序列、YIGSR序列、PDSGR序列、RYVVLPR序列、LGTIPG序列、RNIAEIIKDI序列、IKVAV序列、LRE序列、DGEA序列及HAV序列的序列。进一步优选为RGD序列、YIGSR序列、PDSGR序列、LGTIPG序列、IKVAV序列及HAV序列，尤其优选为RGD序列。RGD序列中，优选为ERGD序列。通过使用具有细胞粘附信号的重组明胶，能够提高细胞的基质产生量。

作为重组明胶中的RGD序列的配置，优选RGD之间的氨基酸数在0～100之间而不均匀，更优选RGD之间的氨基酸数在25～60之间而不均匀。

从细胞粘附性、生长性的观点考虑，该最少氨基酸序列的含量在蛋白质1分子中优选为3～50个，进一步优选为4～30个，尤其优选为5～20个，最优选为12个。

重组明胶中，优选RGD基序相对于氨基酸总数的比例至少为0.4％。当重组明胶包含350以上的氨基酸时，优选350个氨基酸的各段至少包含一个RGD基序。RGD基序相对于氨基酸总数的比例更优选至少为0.6％，进一步优选至少为0.8％，进一步更优选至少为1.0％，尤其优选至少为1.2％，最优选至少为1.5％。重组肽内的RGD基序的数量在每250个氨基酸中优选至少为4个，更优选至少为6个，进一步优选至少为8个，尤其优选为12个以上且16个以下。RGD基序的0.4％这一比例对应于在每250个氨基酸中有至少一个RGD序列。RGD基序的数量为整数，因此为了满足0.4％的特征，由251个氨基酸组成的明胶应至少包含两个RGD序列。优选重组明胶在每250个氨基酸中至少包含两个RGD序列，更优选在每250个氨基酸中至少包含三个RGD序列，进一步优选在每250个氨基酸中至少包含四个RGD序列。作为重组明胶的又一方式，优选至少包含4个RGD基序，更优选至少包含6个RGD基序，进一步优选至少包含8个RGD基序，尤其优选包含12以上且16以下的RGD基序。

重组明胶可以部分水解。

优选重组明胶为由式1：A-[(Gly-X-Y)_n]_m-B表示的重组明胶。n个X分别独立地表示氨基酸中的任一种，n个Y分别独立地表示氨基酸中的任一种。m优选为表示2～10的整数，更优选为表示3～5的整数。n优选为3～100的整数，进一步优选为15～70的整数，最优选为50～65的整数。A表示任意的氨基酸或氨基酸序列，B表示任意的氨基酸或氨基酸序列。另外，n个Gly-X-Y可以分别相同，也可以不同。

更优选重组明胶为由Gly-Ala-Pro-[(Gly-X-Y)₆₃]₃-Gly(式中，63个X分别独立地表示氨基酸中的任一种，63个Y分别独立地表示氨基酸中的任一种。另外，63个Gly-X-Y可以分别相同，也可以彼此不同。)表示的重组明胶。

优选重复单元与多个天然存在的胶原的序列单元键合。在此所说的天然存在的胶原只要是天然存在的则可以为任一个，但优选为I型、II型、III型、IV型或V型胶原。更优选为I型、II型或III型胶原。根据另一方式，上述胶原的来源优选为人、牛、猪、小鼠或大鼠，更优选为人。

重组明胶的等电点优选为5～10，更优选为6～10，进一步优选为7～9.5。关于重组明胶的等电点的测量，如等电点电泳法(参考Maxey，C.R.(1976)；Phitogr.Gelatin 2，Editor Cox，P.J.Academic，London，Engl.)中所记载，能够通过对将1质量％明胶溶液通入阳离子及阴离子交换树脂的混晶柱之后的pH进行测量来实施。

优选重组明胶没有被脱氨化。

优选重组明胶不具有端肽。

优选重组明胶为由对氨基酸序列进行编码的核酸制作的实质上的纯多肽。

作为重组明胶尤其优选

(1)由序列号1中所记载的氨基酸序列组成的肽；

(2)由序列号1中所记载的氨基酸序列中缺失、取代或加成一个或多个氨基酸而成的氨基酸序列组成，并且具有生物相容性的肽；或

(3)由与序列号1中所记载的氨基酸序列具有80％以上(进一步优选为90％以上,尤其优选为95％以上,最优选为98％以上)的序列同一性的氨基酸序列组成,并且具有生物相容性的肽；

中的任何一个。

本发明中的序列同一性是指通过以下式计算的值。

％序列同一性＝[(相同的残基数)/(对准长度)]×100

能够通过本领域技术人员公知的任意方法来确定2个氨基酸序列中的序列同一性，且能够使用BLAST((Basic Local Alignment Search Tool：本地序列基本搜索工具))程序(J.Mol.Biol.215：403-410,1990)等来确定。

“缺失、取代或加成一个或多个氨基酸而成的氨基酸序列”中的“一个或多个”是指，优选1～20个，更优选1～10个，进一步优选1～5个，尤其优选1～3个。

关于重组明胶，能够通过本领域技术人员公知的基因重组技术而制造，例如能够依照EP1014176A2号公报、美国专利第6992172号公报、国际公开WO2004/085473号、国际公开WO2008/103041号等中所记载的方法来制造。具体而言，获取对规定的重组明胶的氨基酸序列进行编码的基因，将其编入表达载体来制作重组表达载体，并将其导入到适当的宿主来制作转化体。通过使用适当的培养基对所得到的转化体进行培养而产生重组明胶，因此能够通过回收从培养物产生的重组明胶来制作本发明中所使用的重组明胶。

(1-4)生物相容性高分子嵌段物

本发明中，能够使用由上述生物相容性高分子组成的嵌段物(块)。

本发明中的生物相容性高分子嵌段物的形状并无特别限定。例如，为无规则形、球状、粒状(颗粒)、粉状、多孔状、纤维状、纺锤状、扁平状及片状，优选无规则形、球状、粒状(颗粒)、粉状及多孔状。无规则形表示表面形状不均匀的形状，例如表示如岩石那样的具有凹凸的物体。另外，上述形状的例示并不是分别独立的，例如有时还作为粒状(颗粒)的下位概念的一例而成为无规则形。

本发明中的生物相容性高分子嵌段物的形状如上述那样并无特别限定，振实密度优选为10mg/cm³以上且500mg/cm³以下，更优选为20mg/cm³以上且400mg/cm³以下，进一步优选为40mg/cm³以上且220mg/cm³以下，尤其优选为50mg/cm³以上且150mg/cm³以下。

振实密度为表示能够向某一体积紧密地填充多少嵌段物的值，值越小，则越无法紧密地填充，即可知嵌段物的结构复杂。认为生物相容性高分子嵌段物的振实密度表示生物相容性高分子嵌段物的表面结构的复杂性及作为聚集体而聚集生物相容性高分子嵌段物时形成的空隙的量。振实密度越小，生物相容性高分子嵌段物之间的空隙越多，细胞的移植区域越多。并且，认为由于不会过小而能够在细胞彼此之间适当地存在生物相容性高分子嵌段物，且作为细胞结构体时能够向相同结构体内部传递营养成分，因此优选抑制在上述范围内。

本说明书中所说的振实密度并无特别限定而能够如下测量。为了测量而准备(直径6mm、长度21.8mm的圆筒状：容量0.616cm³)的容器(以下，记载为帽)。首先，仅测量帽的质量。然后，将漏斗装在帽上，并使嵌段物从漏斗流入而使其积蓄在帽中。添加充分量的嵌段物之后，将帽部分在桌子等较硬的部位敲击200次并卸下漏斗，并用刮刀刮平。在刮平并装满该帽的状态下测量质量。通过从与帽的净质量之差计算嵌段物的净质量，并除以帽的体积而能够求出振实密度。

本发明中的生物相容性高分子嵌段物的交联度并无特别限定，优选为2以上，进一步优选为2以上且30以下，进一步优选为4以上且25以下，尤其优选为4以上且22以下。

生物相容性高分子嵌段物的交联度(每1分子的交联数)的测量方法并无特别限定，当生物相容性高分子为CBE3时，例如能够通过后述实施例中所记载的TNBS(2,4,6-三硝基苯磺)法进行测量。具体而言，分别制备将生物相容性高分子嵌段物、NaHCO₃水溶液及TNBS水溶液进行混合而在37℃下使它们反应3小时之后使它们停止反应的样品和刚将生物相容性高分子嵌段物、NaHCO₃水溶液及TNBS水溶液进行混合之后停止反应的空白培养基(blank)，并分别测量用纯水进行稀释的样品及空白培养基的吸光度(345nm)，从而能够从以下(式2)及(式3)计算出交联度(每一分子的交联数)。

(式2)(As-Ab)/14600×V/w

(式2)表示每1g生物相容性高分子嵌段物的赖氨酸量(摩尔当量)。

(式中，As表示样品吸光度，Ab表示空白培养基吸光度，V表示反应液量(g)，w表示生物相容性高分子嵌段物质量(mg。)

(式3)1-(样品(式2)/未交联的高分子(式2))×34

(式3)表示每一分子的交联数。

本发明中的生物相容性高分子嵌段物的吸水率并无特别限定，优选300％以上，更优选400％以上，进一步优选500％以上，尤其优选600％以上，最优选700％以上。另外，吸水率的上限并无特别限定，通常为4000％以下或2000％以下。

生物相容性高分子嵌段物的吸水率的测量方法并无特别限定，例如能够通过后述实施例中所记载的方法进行测量。具体而言，在25℃下在3cm×3cm的尼龙网孔制的袋中，填充约15mg的生物相容性高分子嵌段物，并使其在离子交换水中膨润两小时之后，风干10分钟，在每一阶段测量质量，从而能够根据(式4)来求出吸水率。

(式4)

吸水率＝(w2-w1-w0)/w0

(式中，w0表示吸水前的材料的质量，w1表示吸水后的空袋的质量，w2表示包括吸水后的材料的袋整体的质量。)

本发明中的一个生物相容性高分子嵌段物的大小并无特别限定，优选为20μm以上且200μm以下，更优选为20μm以上且150μm以下，进一步优选为50μm以上且120μm以下，尤其优选为53μm以上且106μm以下。

通过将一个生物相容性高分子嵌段物的大小设定在上述范围内，能够良好地从外部向细胞结构体的内部传递营养。另外，一个生物相容性高分子嵌段物的大小并不是指多个生物相容性高分子嵌段物的大小的平均值在上述范围内，而是指对多个生物相容性高分子嵌段物进行过筛而得到的每一个生物相容性高分子嵌段物的尺寸。

一个嵌段物的大小能够由对嵌段物进行区分时所使用的筛子的大小来定义。例如，能够将用180μm的筛子进行过筛，将所通过的嵌段物再用106μm的筛子进行过筛时残留于筛子上的嵌段物设为106～180μm大小的嵌段物。接着，能够使将用106μm的筛子进行过筛，将所通过的嵌段物再用53μm的筛子进行过筛时残留于筛子上的嵌段物设为53～106μm大小的嵌段物。接着，能够使将用53μm的筛子进行过筛，将所通过的嵌段物再用25μm的筛子进行过筛时残留于筛子上的嵌段物设为25～53μm大小的嵌段物。

(1-5)生物相容性高分子嵌段物的制造方法

生物相容性高分子嵌段物的制造方法并无特别限定，例如使用粉碎机(新动力磨机(New Power Mill)等)对含有生物相容性高分子的固态物质(生物相容性高分子的多孔体等)进行粉碎，由此能够得到生物相容性高分子嵌段物。含有生物相容性高分子的固态物质(多孔体等)例如能够通过对含有生物相容性高分子的水溶液进行冻干来得到。

如上所述，能够通过对含有生物相容性高分子的固态物质进行粉碎来制造表面形状不均匀的无规则形生物相容性高分子嵌段物。

作为制造生物相容性高分子的多孔体的方法，并无特别限定，也能够通过冻干包含生物相容性高分子的水溶液而得到。例如，通过包括在溶液内液温最高的部分的液温(内部最高液温)在未冷冻状态下成为“溶剂熔点-3℃”以下的冷冻工序，所形成的冰能够成为球状。经过该工序之后，冰被干燥，由此可得到具有球状的各向同性的空孔(球孔)的多孔体。不包括在未冷冻的状态下，溶液内液温最高的部分的液温(内部最高液温)成为“溶剂融点-3℃”以上的冷冻工序而被冷冻，由此所形成的冰能够成为柱/平板状。经过该工序之后，若冰被干燥，则可得到在单轴或双轴上较长且具有柱状或平板状空孔(柱/平板孔)的多孔体。当将生物相容性高分子的多孔体进行粉碎而制造生物相容性高分子嵌段物时，粉碎之前的多孔体的空孔会影响所得到的生物相容性高分子嵌段物的形状，因此如上所述，能够通过调整冻干的条件来调整所得到的生物相容性高分子嵌段物的形状。

作为生物相容性高分子的多孔体的制造方法的一例，能够举出如下方法，该方法包括：

工序(a)，在溶液内液温最高的部分的温度与在溶液内液温最低的部分的温度之差为2.5℃以下，并且在溶液内液温最高的部分的温度为溶剂的熔点以下，将生物相容性高分子的溶液冷却至未冷冻状态；

工序(b)，对在工序(a)中所得到的生物相容性高分子的溶液进行冷冻；及

工序(c)，对在工序(b)中所得到的已冷冻的生物相容性高分子进行冻干，

但并不限于上述方法。

将生物相容性高分子的溶液冷却至未冷冻状态时，液温最高的部分的温度与在溶液内液温最低的部分的温度之差为2.5℃以下(优选2.3℃以下，更优选2.1℃以下)，即通过减小温度之差，所得到的多孔质孔的大小偏差得以减少。另外，液温最高的部分的温度与在溶液内液温最低的部分的温度之差的下限并无特别限定，只要是0℃以上即可，例如可以是0.1℃以上、0.5℃以上、0.8℃以上或0.9℃以上。由此，使用了用所制造的多孔体而制造的生物相容性高分子嵌段物的细胞结构体可实现表示高细胞数这一效果。

关于工序(a)的冷却，例如优选经由导热率比水低的原材料(优选特氟龙(注册商标))进行冷却，能够将在溶液内液温最高的部分假设为最远离冷却侧的部分，且能够将在溶液内液温最低的部分假设为冷却面的液温。

优选在工序(a)中，在即将产生凝固热之前的、在溶液内液温最高的部分的温度与在溶液内液温最低的部分的温度之差为2.5℃以下，更优选为2.3℃以下，进一步优选为2.1℃以下。其中，“即将产生凝固热之前的温度差”是指，产生凝固热时的1秒钟前～10秒钟前之间温度差变最大的温度差。

优选在工序(a)中，在溶液内液温最低的部分的温度为溶剂熔点-5℃以下，更优选为溶剂熔点-5℃以下且溶剂熔点-20℃以上，进一步优选溶剂熔点-6℃以下且溶剂熔点-16℃以上。另外，溶剂熔点的溶剂为生物相容性高分子的溶液的溶剂。

在工序(b)中，对在工序(a)得到的生物相容性高分子的溶液进行冷冻。在工序(b)用于冷冻的冷却温度并无特别限制，还取决于进行冷却的机器，但优选为比在溶液内液温最低的部分的温度低3℃～30℃的温度，更优选为低5℃～25℃的温度，进一步优选为低10℃～20℃的温度。

在工序(c)中，对在工序(b)得到的已冷冻的生物相容性高分子进行冻干。冻干能够通过常规方法进行，例如能够通过在比溶剂的熔点低的温度下进行真空干燥，进而在室温(20℃)下进行真空干燥来进行冻干。

本发明中优选能够通过对在上述工序(c)中得到的多孔体进行粉碎而制造生物相容性高分子嵌段物。

(2)细胞结构体

细胞结构体为包括上述多个生物相容性高分子嵌段物和至少一种多个细胞，且在多个上述细胞的间隙配置有至少一个上述高分子嵌段物的细胞结构体。通过使用上述的生物相容性高分子嵌段物和上述的细胞，在多个细胞的间隙以镶嵌状三维配置多个高分子嵌段物，生物相容性高分子嵌段物和细胞以镶嵌状三维配置，由此形成在结构体中细胞均匀地存在的细胞三维结构体，且具有物质渗透性。

细胞结构体在多个细胞的间隙配置有多个高分子嵌段物，其中，“细胞的间隙”是指，被细胞夹住即可，而无需为因所构成的细胞而密闭的空间。另外，无需在所有的细胞存在间隙，也可以存在细胞彼此接触的部位。隔着高分子嵌段物的细胞的间隙的距离、即选择一细胞与存在于离该细胞最短距离处的细胞时的间隙距离并无特别限制，优选为高分子嵌段物的大小，优选的距离也为高分子嵌段物的优选的大小范围。

并且，高分子嵌段物成为被细胞夹住的结构，但无需在所有的高分子嵌段物之间存在细胞，而可以存在高分子嵌段物彼此接触的部位。隔着细胞的高分子嵌段物之间的距离、即选择高分子嵌段物和存在于离该高分子嵌段物最短距离处的高分子嵌段物时的距离并无特别限制，优选为所使用的细胞聚集1～数个时的细胞块的大小，例如为10μm以上且1000μm以下，优选为10μm以上且100μm以下，更优选为10μm以上且50μm以下。

另外，本说明书中使用了“在结构体中细胞均匀存在的细胞三维结构体”等“均匀存在”这一表达方式，但并不是指完全均匀。

细胞结构体的厚度或直径能够设为所希望的大小，作为下限，优选为100μm以上，更优选为215μm以上，进一步优选为400μm以上，最优选为730μm以上。厚度或直径的上限并无特别限定，但作为使用上的通常范围，优选3cm以下，更优选2cm以下，进一步优选1cm以下。并且，作为细胞结构体的厚度或直径的范围，优选为100μm以上且3cm以下，更优选为400μm以上且3cm以下，进一步优选为500μm以上且2cm以下，进一步优选为720μm以上且1cm以下。

细胞结构体优选由高分子嵌段物组成的区域和由细胞组成的区域被配置成镶嵌状。另外，本说明书中的“细胞结构体的厚度或直径”表示以下。选择细胞结构体中的某一点A时，在通过该点A的直线内，将以离细胞结构体外界的距离成为最短距离的方式分割细胞结构体的线段的长度设为线段A。在细胞结构体中选择该线段A成为最长的点A，将此时的线段A的长度作为“细胞结构体的厚度或直径”。

细胞结构体中，细胞与高分子嵌段物的比率并无特别限定，相对于每一细胞的高分子嵌段物的质量优选为0.0000001μg以上且1μg以下，更优选为0.000001μg以上且0.1μg以下，进一步优选为0.00001μg以上且0.01μg以下，最优选为0.00002μg以上且0.006μg以下。通过设为上述范围，能够使细胞更均匀地存在。并且，将下限设定在上述范围内，由此能够在使用于上述用途时发挥细胞的效果，并将上限设定在上述范围内，由此能够向细胞供给任意存在的高分子嵌段物中的成分。在此，高分子嵌段物中的成分并无特别限制，可举出后述的培养基中所含有的成分。

(3)细胞结构体的制造方法

细胞结构体能够通过将生物相容性高分子嵌段物与至少一种细胞进行混合而制造。更具体而言，细胞结构体能够通过将生物相容性高分子嵌段物(由生物相容性高分子组成的块)与细胞交替地配置而制造。另外，交替例如意味着生物相容性高分子嵌段物与细胞混合的状态而不是意味着完全的交替。制造方法并无特别限定，但优选为在形成高分子嵌段物之后，播种细胞的方法。具体而言，能够通过培育生物相容性高分子嵌段物与含细胞培养液的混合物而制造细胞结构体。例如，在容器中、保持于容器的液体中，将细胞和预先制作的生物相容性高分子嵌段物配置成镶嵌状。作为配置方法，优选通过利用自然凝聚、自然下落、离心、搅拌来促进、控制由细胞和生物相容性高分子嵌段物组成的镶嵌状序列的形成。

作为所使用的容器，优选由细胞低粘附性材料、细胞非粘附性材料制成的容器，更优选为由聚苯乙烯、聚丙烯、聚乙烯、玻璃、聚碳酸酯、聚对苯二甲酸乙二酯制成的容器。容器底面的形状优选为平底型、U字型、V字型。

通过上述方法得到的镶嵌状细胞结构体例如能够通过如下方法而制造所希望大小的细胞结构体，即(a)使分开制作的镶嵌细胞块彼此融合或(b)在分化培养基或生长培养基下增量等。融合方法、增量方法并无特别限定。

例如，在对生物相容性高分子嵌段物与含有细胞的培养液的混合物进行培育的工序中，通过将培养基交换为分化培养基或增长培养基，能够对细胞结构体进行增量。优选在对生物相容性高分子嵌段物与含有细胞的培养液的混合物进行培育的工序中，通过进一步添加生物相容性高分子嵌段物，能够制造细胞均匀存在于细胞结构体中的所期望的大小的细胞结构体。

关于上述使分开制作的镶嵌细胞块彼此融合的方法，具体而言是指细胞结构体的制造方法，该方法包括使多个细胞结构体融合的工序，该细胞结构体包含多个生物相容性高分子嵌段物和多个细胞，且在由上述多个细胞形成的多个间隙的一部分或全部配置有一个或多个上述生物相容性高分子嵌段物。

＜免疫隔离膜＞

在本说明书中，免疫隔离膜是指用于免疫隔离的膜。

免疫隔离为免疫排斥反应的防止方法。通常，免疫隔离为防止移植时的受体的免疫排斥反应的方法之一。在此，免疫排斥反应为受体相对于所移植的细胞结构体的排斥反应。通过免疫隔离，从受体的免疫排斥反应隔离细胞结构体。作为免疫排斥反应，可举出基于细胞免疫应答的免疫排斥反应和基于体液免疫应答的免疫排斥反应。

免疫隔离膜为使氧、水、葡萄糖等营养素渗透并阻止参与免疫排斥反应的免疫细胞等的渗透的选择渗透性膜。作为免疫细胞，可举出巨噬细胞，树突细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、自然杀伤细胞、各种T细胞、B细胞、其他淋巴细胞。

免疫隔离膜优选根据用途阻止如免疫球蛋白(IgM或IgG等)及补体的高分子量蛋白质渗透，并优选使胰岛素等相对低分子量的生理活性物质渗透。

免疫隔离膜的选择渗透性只要根据应用而进行调整即可。免疫隔离膜只要为例如遮断分子量500kDa以上、100kDa以上、80kDa以上或50kDa以上等的物质的选择渗透性膜即可。例如，免疫隔离膜优选能够阻止抗体中最小的IgG(分子量约160kDa)的渗透。并且，免疫隔离膜只要为遮断作为球体尺寸直径为500nm以上、100nm以上、50nm以上或10nm以上的物质的选择渗透性膜即可。

免疫隔离膜优选包括含有聚合物的多孔膜。免疫隔离膜可以仅由含有聚合物的多孔膜组成，或者也可以包含其他层。作为其他层，可举出水凝胶膜。关于免疫隔离膜，为了运输等而可以在表面具有能够轻松地剥离的保护膜。

免疫隔离膜的厚度并无特别限定，只要为10μm～500μm即可，优选为20μm～300μm，更优选为30μm～250μm。

[多孔膜]

(多孔膜的结构)

多孔膜是指具有多个孔的膜。可以通过例如膜截面的扫描电子显微镜(SEM)图像或透射电子显微镜(TEM)图像来确认孔。

多孔膜的厚度并无特别限制，优选为10μm～500μm，更优选为10μm～300μm，进一步优选为10μm～250μm。

优选多孔膜在内部具有孔径最小的层状致密部位，且孔径在厚度方向上从该致密部位朝向多孔膜的至少一个表面连续地增加。孔径根据后述的部分的平均孔径来判断。

膜的表面是指主表面(表示膜的面积的表面或背面)，而并不表示膜的端部的厚度方向上的表面。多孔膜的表面可以是与其他层的界面。另外，在免疫隔离膜中，关于孔径或孔径分布(厚度方向上的孔径的差异)，优选多孔膜在整个面积上具有相同的结构。

多孔膜具有孔径分布，由此能够提高免疫隔离膜的寿命。其原因为可得到如使用实质上不同的孔径的膜进行多级过滤的效果，从而能够防止膜的劣化。

孔径只要从通过电子显微镜得到的膜截面的照片进行测量即可。用切片机等切割多孔膜，作成能够观察其截面的薄膜切片，从而能够得到多孔膜截面的照片。

在本说明书中，膜的厚度方向上的孔径的比较通过沿膜的厚度方向分割膜截面的SEM拍摄照片而进行。分割数能够根据膜的厚度而适当选择。分割数至少为5以上，例如为200μm厚的膜时从后述表面X进行20次分割。另外，分割宽度的大小是指膜的厚度方向上的宽度的大小，而不是照片中的宽度的大小。在膜的厚度方向上的孔径的比较中，将孔径作为每个部分的平均孔径而进行比较。每个部分的平均孔径只要为例如膜剖视图的每个部分的50个孔的平均值即可。这种情况下的膜剖视图例如可以以80μm的宽度(在与表面平行的方向上80μm的距离)得到。此时，对于孔大且无法测量的50个部分，只要为仅测量了在该部分中可拍摄的数量份部分即可。并且，此时，当孔大且无法容纳于该部分时，遍及其他部分而测量该孔的大小。

孔径最小的层状致密部位是指相当于在上述膜截面的部分中平均孔径最小的部分的多孔膜的层状部位。致密部位可以由相当于1个部分的部位构成，也可以由相当于2个、3个等具有平均孔径最小的部分的1.1倍以内的平均孔径的多个部分的部位构成。致密部分的厚度只要为0.5μm～50μm即可，优选为0.5μm～30μm。在本说明书中，将致密部分的平均孔径设为多孔膜的最小孔径。多孔膜的最小孔径优选为0.02μm～1.5μm，更优选为0.02μm～1.3μm。其原因为这种多孔膜的最小孔径能够防止至少正常的细胞渗透。在此，致密部分的平均孔径通过ASTM F316-80进行了测量。

多孔膜在内部具有致密部位。内部是指不与膜的表面相接，“在内部具有致密部位”是指致密的部分不是离膜的任何表面最近的部分。在免疫隔离膜中，与使用了与表面相接而具有相同的致密部位的多孔膜的情况相比，通过使用在内部具有致密部位的结构的多孔膜而希望渗透的物质的渗透性不易降低。尽管不受任何理论的束缚，但认为由于通过在内部具有致密部位而变得不易吸附蛋白质。

优选致密部位比多孔膜的厚度的中央部位更偏向任一表面侧。具体而言，致密部位位于从多孔膜的任一表面离多孔膜的厚度的5分之2以内的距离内，更优选位于3分之1以内的距离内，进一步优选位于4分之1以内的距离内。该距离只要在上述膜截面照片中判断即可。在本说明书中，将致密部位更靠近的一侧的多孔膜的表面称为“表面X”。

在多孔膜中，孔径在厚度方向上从致密部位朝向至少任一表面连续增大。在多孔膜中，孔径可以在厚度方向上从致密部位朝向表面X连续地增加，孔径也可以在厚度方向上从致密部位朝向与表面X相反的一侧的表面连续地增加，孔径也可以在厚度方向上从致密部位朝向多孔膜的任意表面连续地增加。其中，优选孔径在厚度方向上至少从致密部位朝向与表面X相反的一侧的表面连续地增加，更优选孔径在厚度方向上从致密部位朝向多孔膜的任意表面连续地增加。“在厚度方向上孔径连续地增加”是指以在厚度方向上相邻的部分之间的平均孔径之差成为最大平均孔径(最大孔径)与最小平均孔径(最小孔径)之差的50％以下，优选为40％以下，更优选为30％以下的方式增加。“连续地增加”是指基本上没有减少而均匀增加，但也可以意外产生减少的部位。例如，在从表面组合各2个部分时，组合的平均值均匀增加(从表面朝向致密部位的情况下均匀减少)的情况下，能够判断为“孔径在厚度方向上从致密部位朝向膜的表面方向连续地增加”。

在厚度方向上孔径连续地增加的多孔膜的结构例如能够通过后述的制造方法来实现。

多孔膜的最大孔径优选为大于1.5μm且25μm以下，更优选为1.8μm～23μm，进一步优选为2.0μm～21μm。在本说明书中，将在上述膜截面的部分中平均孔径最大的部分的其平均孔径设为多孔膜的最大孔径。

致密部位的平均孔径与多孔膜的最大孔径之比(多孔膜的最小孔径与最大孔径之比，即最大孔径除以最小孔径而得的值，在本说明书中有时还称为“各向异性比“。)优选为3以上，更优选为4以上，进一步优选为5以上。其原因为通过增加除了致密部位以外的平均孔径而提高多孔膜的物质渗透性。并且，各向异性比优选为25以下，更优选为20以下。多孔膜的最小直径与最大直径之比例如能够设为3.0～20.0。

平均孔径最大的部分优选为最接近膜的任意表面的部分或与该部分相接的部分。

在最接近膜的任意表面的部分中，平均孔径优选大于0.05μm且25μm以下，更优选大于0.08μm且23μm以下，进一步优选为大于0.5μm且21μm以下。并且，最靠近膜的任意表面的部分的平均孔径与致密部位的平均孔径之比优选为1.2以上且20以下，更优选为1.5以上且15以下，进一步优选为2以上且13以下。

(多孔膜中的元素分布)

多孔膜优选在至少一个表面上满足式(I)和式(II)。

B/A≤0.7(I)

A≥0.015(II)

式中，A表示膜的表面上的N元素(氮原子)与C元素(碳原子)的比率，B表示离相同表面30nm深度处的N元素与C元素的比率。

式(II)表示在多孔膜的至少一个表面上存在一定量以上的N元素，且式(I)表示多孔膜中的N元素偏在于离表面小于30nm处。N元素优选由含氮聚合物衍生。而且，含氮聚合物优选为聚乙烯吡咯烷酮。

表面满足式(I)和式(II)时，由此多孔膜的生物相容性，尤其满足式(I)和式(II)的表面侧的生物相容性得以提高。

在多孔膜中，可以是仅任一表面满足式(I)和式(II)，或者可以是两个表面均满足式(I)和式(II)，但优选两个表面均满足式(I)和式(II)。当仅一个表面满足式(I)和式(II)时，该表面在后述的移植用腔室可以为内侧，或者也可以为外侧，但优选为内侧。并且，当任一表面满足式(I)及式(II)时，满足式(I)及式(II)的表面优选为表面X。

在本说明书中，利用XPS测量结果计算膜表面上的N元素与C元素的比率(A值)及离表面30nm深度处的N元素与C元素的比率(B值)。XPS测量为X射线光电子能谱法，为通过对膜表面照射X射线并测量从膜表面发射的光电子的动能来分析构成膜表面的元素的组成的方法。在实施例中所记载的使用了单色Al-Kα射线的条件下，根据溅射开始时的结果计算A值，并根据溅射速率测量的计算为从膜表面离30nm的时间的结果计算B值。

B/A只要为0.02以上即可，优选为0.03以上，更优选为0.05以上。

A优选为0.050以上，更优选为0.080以上。并且，A只要为0.20以下即可，优选为0.15以下，更优选为0.10以下。

B只要为0.001～0.10即可，优选为0.002～0.08，更优选为0.003～0.07。

关于多孔膜的元素分布、尤其N元素的分布，在后述的多孔膜的制造方法中，能够根据调温湿风中所含有的水分浓度、吹送调温湿风的时间、凝固液的温度、浸渍时间、用于清洗的二乙二醇浴的温度、向用于清洗的二乙二醇浴的浸渍时间、多孔膜制造生产线的速度等来进行控制。另外，N元素的分布还可以根据成膜原液中的含有水量来进行控制。

(多孔膜的组成)

多孔膜包含聚合物。多孔膜优选基本上由聚合物构成。

形成多孔膜的聚合物优选为生物适合性聚合物。在此，“生物适合性”是指包括无毒性、非致敏性，但不包括聚合物在生物内被封装的性质。

聚合物的数均分子量(Mn)优选为1,000～10,000,000，更优选为5,000～1,000,000。

作为聚合物的例，可举出热塑性或热固性聚合物。作为聚合物的具体例，能够举出聚砜、纤维素酰化物、硝基纤维素、磺化聚砜、聚醚砜、聚丙烯腈、苯乙烯-丙烯腈共聚物、苯乙烯-丁二烯共聚物、乙烯-乙酸乙烯酯共聚物的皂化物、聚乙烯醇、聚碳酸酯、有机硅氧烷-聚碳酸酯共聚物、聚酯碳酸酯、有机聚硅氧烷、聚苯醚、聚酰胺、聚酰亚胺、聚酰胺酰亚胺、聚苯并咪唑、乙烯-乙烯醇共聚物、聚四氟乙烯(PTFE)等。从溶解性、光学物理性质、电物理性质、强度、弹性等观点考虑，这些可以为均聚物，也可以为共聚物或聚合物共混物、聚合物合金。

这些中，优选为聚砜、纤维素酰化物，更优选为聚砜。

多孔膜可以包含除了聚合物以外的其他成分来作为添加剂。

作为添加剂的例，能够举出氯化钠、氯化锂、硝酸钠、硝酸钾、硫酸钠、氯化锌等无机酸的金属盐、乙酸钠、甲酸钠等有机酸的金属盐、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮等高分子、聚苯乙烯磺酸钠、聚乙烯基苄基三甲基铵氯化物等高分子电介质、二辛基磺基琥珀酸钠、烷基甲基牛磺酸钠等离子表面活性剂等。添加剂可以作为用于多孔结构的溶胀剂而发挥作用。

多孔膜优选为作为单层由一种组合物形成的膜，且优选不是多层层叠结构。

(多孔膜的制造方法)

关于多孔膜的制造方法，只要能够形成上述结构的多孔膜，则并无特别限定，而能够利用任何通常的聚合物膜形成方法。作为聚合物膜形成方法，可举出拉伸法及流延法。

例如，在流延法中，能够通过调节成膜原液中所使用的溶剂的种类及量或流延后的干燥方法来制作具有上述结构的多孔膜。

通过流延法进行的多孔膜的制造能够通过例如依次包含以下的(1)～(4)的方法来进行。

(1)以溶解状态将含有聚合物，根据需要而含有添加剂，以及根据需要含有溶剂的成膜原液流延于支撑体上。

(2)对所流延的液膜的表面吹送调温湿风。

(3)将吹送调温湿风之后得到的膜浸渍于凝固液中。

(4)根据需要剥离支撑体。

调温湿风的温度为4℃～60℃，优选为10℃～40℃。调温湿风的相对湿度为30％～70％，优选为40％～50％。调温湿风的绝对湿度优选为1.2～605g/kg空气，更优选为2.4～300g/kg空气。调温湿风以0.1m/秒～10m/秒的风速吹送0.1秒～30秒，优选吹送1秒～10秒。

致密部位的平均孔径及位置能够根据调温湿风中所含有的水分浓度、吹送调温湿风的时间来进行控制。另外，致密部位的平均孔径还可以根据成膜原液中的含有水量来进行控制。

通过如上所述对液膜表面吹送调温湿风，控制溶剂的蒸发，从而能够引起从液膜表面朝向内部的凝聚。在这种状态下通过浸渍于收容聚合物的溶解性低但与聚合物溶剂相容的溶剂的凝固液中，将上述凝聚相固定为微孔而能够形成除了微孔以外的细孔。

在浸渍于凝固液的过程中，凝固液的温度只要为-10℃～80℃即可。通过在该期间使温度发生变化，能够调节比致密部位更靠支撑体表面侧的凝聚相的形成至凝固为止的时间，并能够控制直至支撑体表面侧为止的孔径的大小。若升高凝固液的温度，则凝聚相的形成变早且直至凝固为止的时间变长，因此朝向支撑体表面侧的孔径容易变大。另一方面，若降低凝固液的温度，则凝聚相的形成变慢且直至凝固为止的时间变短，因此朝向支撑体表面侧的孔径不易变大。

作为支撑体，只要使用塑料薄膜或玻璃板即可。作为塑料薄膜的材料的例，可举出聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)等聚酯、聚碳酸酯、丙烯酸树脂、环氧树脂、聚氨酯、聚酰胺、聚烯烃、纤维素衍生物及硅氧烷等。作为支撑体，优选为玻璃板或PET，更优选为PET。

成膜原液可以含有溶剂。溶剂只要根据聚合物而使用所使用的聚合物的溶解性高的溶剂(以下，有时称为“良好的溶剂”)即可。良好的溶剂优选为浸渍于凝固液时迅速替换成凝固液的溶剂。作为溶剂的例，当聚合物为聚砜等时，可举出N-甲基-2-吡咯啶酮、二噁烷、四氢呋喃、二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺或它们的混合溶剂，当聚合物为聚丙烯晴等时，可举出二噁烷、N-甲基-2-吡咯啶酮、二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、二甲基亚砜或它们的混合溶剂，当聚合物为聚酰胺等时，可举出二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺或它们的混合溶剂，当聚合物为乙酸纤维素等时，可举出丙酮、二噁烷、四氢呋喃、N-甲基-2-吡咯啶酮或它们的混合溶剂。

关于成膜原液，除了良好的溶剂以外，优选使用聚合物溶解度低但与聚合物溶剂相容的溶剂(以下，有时称为“非溶剂”)。作为非溶剂，可举出水、溶纤剂类、甲醇、乙醇、丙醇、丙酮、四氢呋喃、聚乙二醇、甘油等。这些中，优选使用水。

作为成膜原液的聚合物浓度为5质量％以上且35质量％以下，优选只要为10质量％以上且30质量％以下即可。为35质量％以下，由此能够对所得到的多孔膜赋予充分的渗透性(例如，水的渗透性)，通过设为5质量％以上，能够确保选择性地渗透物质的多孔膜的形成。关于添加剂的添加量，只要不因添加而损失成膜原液的均匀性则并无特别限制，通常相对于溶剂为0.5质量％以上且10质量％以下。当成膜原液含有非溶剂和良好的溶剂时，关于非溶剂与良好的溶剂的比例，只要为混合溶液保持均匀状态的范围则并无特别限制，但优选为1.0质量％～50质量％，更优选为2.0质量％～30质量％，进一步优选为3.0质量％～10质量％。

作为凝固液，优选使用所使用的聚合物的溶解度低的溶剂。作为这种溶剂的例，可举出水、甲醇、乙醇、丁醇等醇类；乙二醇、二乙二醇等二醇类；醚、正己烷、正庚烷等脂肪族烃类；丙三醇等甘油类等。作为优选的凝固液的例，可举出水、醇类或它们的两种以上的混合物。这些中，优选使用水。

还优选在浸渍于凝固液之后，用与所使用的凝固液不同的溶剂进行清洗。清洗能够通过浸渍于溶剂而进行。作为清洗溶剂优选为二乙二醇。作为清洗溶剂而使用二乙二醇，并通过调节浸渍薄膜的二乙二醇的温度及浸渍时间中的任一个或两个，能够调节多孔膜中N元素的分布。尤其，当在多孔膜的成膜原液中使用聚乙烯吡咯烷酮时，能够控制膜中的聚乙烯吡咯烷酮的残留量。用二乙二醇清洗之后，还可以进一步用水清洗。

作为多孔膜的制膜原液，优选将聚砜和聚乙烯吡咯烷酮溶解在N-甲基-2-吡咯烷酮中并添加水而得到的制膜原液。

关于多孔膜的制造方法，能够参考日本特开平4-349927号公报、日本特公平4-068966号公报、日本特开平04-351645号公报、日本特开2010-235808号公报等。

[其他层]

免疫隔离膜可以包含除了多孔膜以外的其他层。作为其他层，可举出水凝胶膜。水凝胶膜优选为生物适合性膜，作为例，可举出藻酸盐凝胶膜、琼脂糖凝胶膜、聚异丙基丙烯酰胺膜、含纤维素的膜、含有纤维素衍生物(例如甲基纤维素)的膜、聚乙烯醇膜等。作为水凝胶膜，优选为藻酸盐凝胶膜。作为海藻酸盐凝胶膜的具体例，能够举出海藻酸-聚-L-赖氨酸-海藻酸的聚离子复合膜。

＜血管新生剂的制造方法＞

本发明的血管新生剂能够通过包括用免疫隔离膜内包间充质干细胞的工序的方法来制造。

在本发明中，免疫隔离膜用作用于内包间充质干细胞的移植用腔室的构成部件。关于移植用腔室，将间充质干细胞移植到受体时，用作用于内包间充质干细胞的容器。免疫隔离膜能够配置于形成移植用腔室的内部和外部的表面的至少一部分上。通过如此配置，能够从存在于外部的免疫细胞等保护移植用腔室中内包的间充质干细胞的同时从移植用腔室的外部向内部带入水、氧、葡萄糖等营养素。

免疫隔离膜可以配置在形成移植用腔室内部和外部的整个表面上，也可以配置在相对于整个表面例如相当于1～99％、5～90％、10～80％、20～70％、30％～60％、40％～50％等的面积的一部分。配置免疫隔离膜的表面可以是一个连续部分，也可以分成两个以上的部分。

移植用腔室的形态并无限定，只要为袋状、包状、管状、微囊状、鼓状即可。例如，鼓状移植用腔室能够通过将免疫隔离膜粘附在硅酮环的上下来形成。移植用腔室的形状优选为用作血管新生剂时能够防止在受体内移动的形状。作为移植用腔室的形状的具体例，可举出圆筒形、圆盘形、矩形、蛋形、星形、圆形等。移植用腔室可以为片状、股线状、螺旋状等。关于移植用腔室，可以在内包细胞或细胞结构体而作为血管新生剂时，首次成为上述形状。

移植用腔室可以包含用于维持作为容器的形状和强度的生物适合性塑料等。例如，形成移植用腔室的内部和外部的表面可以由免疫隔离膜及与免疫隔离膜不对应的生物适合性塑料组成。或者，关于实质上在形成内部和外部的整个表面上配置有免疫隔离膜的移植用腔室，从强度的观点考虑，还可以进一步在形成内部和外部的表面的外侧配置有网状结构的生物适合性塑料。

在移植用腔室内，优选多孔膜的表面X存在于内部侧。即，优选配置有免疫隔离膜，以便免疫隔离膜中的多孔膜的致密部位更靠近移植用腔室的内部。通过将表面X设为移植用腔室的内部侧，能够进一步提高生理活性物质的渗透性。

＜血管新生剂＞

本发明的血管新生剂包括间充质干细胞及免疫隔离膜。在血管新生剂中，可以在免疫隔离膜中内包间充质干细胞。

在血管新生剂中，可以在免疫隔离膜中仅内包间充质干细胞(或间充质干细胞的细胞结构体)，或者除此以外，还可以内包除了细胞结构体以外的其他构成物或成分。例如，间充质干细胞(或间充质干细胞的细胞结构体)可以与水凝胶一起内包于免疫隔离膜中，优选在内包在水凝胶中的状态内包于免疫隔离膜中。血管新生剂可以含有pH缓冲剂、无机盐、有机溶剂、白蛋白等蛋白质、肽。

在血管新生剂中，间充质干细胞(或间充质干细胞的细胞结构体)可以仅包含一种，也可以包含两种以上。

血管新生剂只要为例如移植到受体的腹腔内或皮下等即可。在本说明书中，受体是指接受移植的生物。受体优选为哺乳动物，更优选为人。

关于血管新生剂的移植次数，可以仅移植1次，也能够根据需要而进行2次以上的移植。

＜各种用途＞

根据本发明，提供一种血管新生方法，该方法包括如下工序，即将包含(A)间充质干细胞及(B)内包上述间充质干细胞的免疫隔离膜的细胞移植用设备移植到需要新生血管的对象者。

根据本发明，提供一种细胞移植用设备，其为用于在用于血管新生的处置中使用的细胞移植用设备，所述细胞移植用设备包含(A)间充质干细胞及(B)内包上述间充质干细胞的免疫隔离膜。

根据本发明，提供一种用于制造血管新生剂的包含(A)间充质干细胞及(B)内包上述间充质干细胞的免疫隔离膜的细胞移植用设备的使用。

在上述各种用途中，优选的范围如上所述。

通过以下实施例对本发明进行更具体的说明，但本发明并不限定于实施例。

实施例

[参考例1]重组肽(重组明胶)

作为重组肽(重组明胶)准备了以下CBE3(记载于国际公开WO2008/103041号公报中)。

CBE3：

分子量：51.6kDa

结构：GAP[(GXY)₆₃]₃G

氨基酸数：571个

RGD序列数：12个

亚氨基酸含量：33％

大致100％的氨基酸为GXY的重复结构。CBE3的氨基酸序列中不包含丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、酪氨酸及半胱氨酸。CBE3具有ERGD序列。

等电点：9.34

GRAVY值：-0.682

1/IOB值：0.323

氨基酸序列(序列表的序列号1)(与国际公开WO2008/103041号公报的序列号3相同。但将末尾的X修正为“P”)

GAP(GAPGLQGAPGLQGMPGERGAAGLPGPKGERGDAGPKGADGAPGAPGLQGMPGERGAAGLPGPKGERGDAGPKGADGAPGKDGVRGLAGPIGPPGERGAAGLPGPKGERGDAGPKGADGAPGKDGVRGLAGPIGPPGPAGAPGAPGLQGMPGERGAAGLPGPKGERGDAGPKGADGAPGKDGVRGLAGPP)₃G

[参考例2]重组肽多孔体的制作

[PTFE厚/圆筒形容器]

准备了底面厚度3mm、直径51mm、侧面厚度8mm、高度25mm的聚四氟乙烯(PTFE)制圆筒杯状容器。圆筒杯中，当将曲面设为侧面时，侧面被8mm的PTFE密封，且底面(平板的圆形)也被3mm的PTFE密封。另一方面，上面呈开放的形状。从而，圆筒杯的内径成为43mm。以下，将该容器称为PTFE厚/圆筒形容器。

[铝玻璃板/圆筒形容器]

准备了厚度1mm、直径47mm的铝制圆筒杯状容器。圆筒杯中，当将曲面设为侧面时，侧面被1mm的铝密封，且底面(平板圆形)也被1mm的铝密封。另一方面，上面呈开放的形状。并且，仅在侧面的内部均匀地铺满了壁厚1mm的特氟龙(注册商标)，其结果，圆筒杯的内径成为45mm。并且，将该容器的底面设为在铝的外侧接合2.2mm的玻璃板的状态。以下，将该容器称为铝玻璃板/圆筒形容器。

[温度差小的冷冻工序及干燥工序]

使CBE3水溶液流入PTFE厚/圆筒形容器或铝玻璃板/圆筒形容器，并在真空冻干机(TF5-85ATNNN：TAKARA.Co.Ltd)内使用冷却搁板从底面冷却了CBE3水溶液。此时的容器、CBE3水溶液的最终浓度、液量及搁板温度的设定的组合按照如下所记载的方式进行了准备。

条件A：

PTFE厚/圆筒形容器、CBE3水溶液的最终浓度4质量％、水溶液量4mL。关于搁板温度的设定，冷却至-10℃，并在-10℃下进行了1小时，然后在-20℃下进行了2小时，进而在-40℃下进行了3小时，最后在-50℃下进行了1小时冷冻。对本冷冻产品，在此之后将搁板温度返回设定到-20℃而在-20℃下进行了24小时的真空干燥，在24小时之后直接在持续进行真空干燥的状态下使搁板温度上升至20℃，并直至真空度充分降低(1.9×10⁵Pa)为止，进一步在20℃下实施48小时的真空干燥之后，从真空冻干机取出。由此得到了多孔体。

条件B：

铝/玻璃板/圆筒形容器、CBE3水溶液的最终浓度4质量％、水溶液量4mL。

关于搁板温度的设定，冷却至-10℃，并在-10℃下进行了1小时，然后在-20℃下进行了2小时，进而在-40℃下进行了3小时，最后在-50℃下进行了1小时冷冻。对本冷冻产品，在此之后将搁板温度返回设定到-20℃而在-20℃下进行了24小时的真空干燥，在24小时之后直接在持续进行真空干燥的状态下使搁板温度上升至20℃，并直至真空度充分降低(1.9×10⁵Pa)为止，进一步在20℃下实施48小时的真空干燥之后，从真空冻干机取出。由此得到了多孔体。

条件C：

PTFE厚/圆筒形容器、CBE3水溶液的最终浓度4质量％、水溶液量10mL。关于搁板温度的设定，冷却至-10℃，并在-10℃下进行了1小时，然后在-20℃下进行了2小时，进而在-40℃下进行了3小时，最后在-50℃下进行了1小时冷冻。对本冷冻产品，在此之后将搁板温度返回设定到-20℃而在-20℃下进行了24小时的真空干燥，在24小时之后直接在持续进行真空干燥的状态下使搁板温度上升至20℃，并直至真空度充分降低(1.9×10⁵Pa)为止，进一步在20℃下实施48小时的真空干燥之后，从真空冻干机取出。由此得到了多孔体。

[各冷冻工序中的温度测量]

关于条件A～条件C的每一个，作为在溶液内最远离冷却侧的部位的液温(非冷却面液温)测量了容器内的圆中心部的水表面液温，并且，作为在溶液内最接近冷却侧的液温(冷却面液温)测量了容器内的底部的液温。

其结果，各自的温度与其温度差的分布成为如图1～图3。

从图1、图2、图3可知，在条件A、条件B、条件C下，液温在搁板温度-10℃设定区间(降低到-20℃之前)低于熔点即0℃，并且为在其状态不会发生冷冻(未冷冻/过冷却)状态。并且，在该状态下，冷却面液温与非冷却面液温的温度差为2.5℃以下。另外，本说明书中，“温度差”是指“非冷却面液温”-“冷却面液温”。然后，将搁板温度进一步降低到-20℃，由此确认到液温向0℃附近急速上升的时刻，可知是在此产生凝固热而开始进行冷冻的。并且，还确认到是在该时刻实际上开始形成冰的。然后，温度在0℃附近经过一定时间。在此，成为存在水与冰的混合物的状态。最后，温度从0℃再次开始下降，但此时，液体部分消失而成为冰。从而，所测量的温度成为冰内部的固态温度，即并非液温。

以下，关于条件A、条件B、条件C，记载非冷却面液温成为熔点(0℃)时的温度差、将搁板温度从-10℃降低至-20℃紧前的温度差及产生凝固热紧前的温度差。另外，本发明中所说的“紧前的温度差”表示能够在活动(产生凝固热等)的1秒钟前～20秒钟前的期间检测出的温度差内的最高温度。

条件A

非冷却面液温成为熔点(0℃)时的温度差：1.1℃

从-10℃降低至-20℃紧前的温度差：0.2℃

产生凝固热紧前的温度差：1.1℃

条件B

非冷却面液温成为熔点(0℃)时的温度差：1.0℃

从-10℃降低至-20℃紧前的温度差：0.1℃

产生凝固热紧前的温度差：0.9℃

条件C

非冷却面液温成为熔点(0℃)时的温度差：1.8℃

从-10℃降低至-20℃紧前的温度差：1.1℃

产生凝固热紧前的温度差：2.1℃

[参考例3]生物相容性高分子嵌段物的制作(多孔体的粉碎和交联)

利用新动力磨机(New Power Mill)(OSAKA CHEMICAL Co.,Ltd.，新动力磨机(NewPower Mill)PM-2005)粉碎了在参考例2中得到的条件A及条件B的CBE3多孔体。关于粉碎，以最大转速1分钟×5次，合计进行了5分钟的粉碎。对所得到的粉碎物，利用不锈钢制筛子进行了尺寸分类，从而得到了25～53μm、53～106μm、106～180μm的未交联嵌段物。然后，在减压下以160℃实施热交联(实施了交联时间为8小时、16小时、24小时、48小时、72小时、96小时这6种)来得到了生物相容性高分子嵌段物(CBE3嵌段物)。

以下，将实施了48小时交联的条件A的多孔体来源嵌段物称为E，将实施了48小时交联的条件B的多孔体来源嵌段物称为F。E及F为由通过温度差小的冷冻工序制造的多孔体制成的温度差小的嵌段物。另外，未发现交联时间的不同在本实施例的评价中会影响性能，因此以下以实施了48小时交联的嵌段物为代表而使用。并且，E及F中在性能方面未发现差异。以下的参考例、实施例及比较例中，使用了在条件A、尺寸53～106μm、交联时间48小时下制作的生物相容性高分子嵌段物。

[参考例4]生物相容性高分子嵌段物的振实密度测量

振实密度为表示能够向某一体积紧密地填充多少嵌段物的值，且值越小，则越无法紧密地填充，即可以说嵌段物的结构复杂。如下测量了振实密度。首先，准备在漏斗的前端带帽(直径6mm、长度21.8mm的圆筒状：容量0.616cm³)的漏斗，并仅测量了帽的质量。然后，将帽装在漏斗上，并使嵌段物从漏斗流入而使其积蓄在帽中。添加充分量的嵌段物之后，将帽部分在桌子等较硬的部位敲击200次并卸下漏斗，并用刮刀刮平。在刮平并装满该帽的状态下测量了质量。通过从与仅帽的质量之差计算仅嵌段物的质量，并除以帽的体积而求出了振实密度。

其结果，参考例3的生物相容性高分子嵌段物的振实密度为98mg/cm³。

[参考例5]生物相容性高分子嵌段物的交联度测量

计算出在参考例3中交联的嵌段物的交联度(每一分子的交联数)。测量利用了TNBS(2,4,6-三硝基苯磺酸)法。

＜样品制作＞

向玻璃小瓶添加样品(约10mg)、4质量％的NaHCO₃水溶液(1mL)及1质量％的TNBS水溶液(2mL)，在37℃下将混合物摇晃了3小时。然后，加入37质量％的盐酸(10mL)及纯水(5mL)之后，在37℃下将混合物静置16小时以上来作为样品。

＜空白培养基制备＞

向玻璃小瓶添加样品(约10mg)、4质量％的NaHCO₃水溶液(1mL)及1质量％的TNBS水溶液(2mL)，紧接着加入37质量％的盐酸(3mL)，在37℃下将混合物摇晃了3小时。然后，加入37质量％的盐酸(7mL)及纯水(5mL)之后，在37℃下将混合物静置16小时以上来作为空白培养基。

对用纯水稀释了10倍的样品及空白培养基的吸光度(345nm)进行测量，并从以下(式2)及(式3)计算出交联度(每一分子的交联数)。

(式2)(As-Ab)/14600×V/w

(式2)表示每1g重组肽的赖氨酸量(摩尔当量)。

(式中，As表示样品吸光度，Ab表示空白培养基吸光度，V表示反应液量(g)，w表示重组肽质量(mg)。

(式3)1-(样品(式2)/未交联重组肽(式2))×34

(式3)表示每一分子的交联数。

其结果，参考例3的生物相容性高分子嵌段物的交联度为4.2。

[参考例6]生物相容性高分子嵌段物的吸水率测量

计算出在参考例3中制作的生物相容性高分子嵌段物的吸水率。

在25℃下，在3cm×3cm的尼龙网孔制袋中，填充约15mg的生物相容性高分子嵌段物，并使其在离子交换水中膨润两小时之后，风干了10分钟。在每一阶段测量质量，并根据(式4)求出了吸水率。

(式4)

吸水率＝(w2-w1-w0)/w0

(式中，w0表示吸水前的材料的质量，w1表示吸水后的空袋的质量，w2表示包括吸水后的材料的袋整体的质量。)

其结果，参考例3的嵌段物的吸水率为786％。

[参考例7]细胞结构体的制作

使小鼠脂肪来源的间充质干细胞(mADSC)悬浮于含有10％FBS(胎牛血清)的D-MEM培养基(Dulbecco改良的Eagle培养基)，对其添加在参考例3中制作的生物相容性高分子嵌段物(53-106μm)，最终以mADSC(1.2×10⁸个细胞)和生物相容性高分子嵌段物(0.25mg)悬浮在4mL的培养基中的状态播种到细胞非粘附性35mm培养皿即EZSPHERE(注册商标)培养皿Type903(球体井口径800μm、球体井深度300μm、球体井为数井～约1,200井。在底面具有凹陷部的培养面且具有立设在培养面的周围的侧外壁部。AGC TECHNO GLASS CO.,LTD.制)。将上述培养皿在CO₂恒温箱中在37℃下静置48小时而得到了约1,200个均匀的细胞结构体。

[参考例8]免疫隔离膜的制作和孔径评价

＜多孔膜的制作＞

将聚砜(Solvay制P3500)15质量份、聚乙烯吡咯烷酮(Nippon Shokubai Co.,Ltd.制K-30)15质量份，氯化锂1质量份及水2质量份溶解在N-甲基-2-吡咯啶酮67质量份中而得到了成膜原液。将该成膜原液以干燥厚度成为50μm的湿膜厚度流延在PET(聚对苯二甲酸乙二醇酯)膜表面上。对上述所流延的液膜表面以2m/秒吹送了调整至30℃、相对湿度80％RH的空气5秒钟。然后立刻浸渍到装满水的65℃的凝固液槽中。剥离PET薄膜而得到了多孔膜。然后，在80℃的二乙二醇浴中浸渍120秒钟之后，用纯水清洗而得到了干燥厚度50μm的多孔膜。将该多孔膜作为免疫隔离膜。

＜气泡点评价＞

关于气泡点，对使用棕榈孔度计(Seika Sangyo Co.,Ltd.制CFE-1200AEX)进行的细孔径分布测量试验中，由GALWICK(Porous Materials，Inc.制)完全润湿的膜样品，以5cm³/分钟增加气压而进行了评价。

参考例8的多孔膜的气泡点为0.58kg/cm²。

＜厚度及孔径评价＞

使用膜截面的SEM拍摄照片对多孔膜的厚度进行了测量。

通过将膜截面的SEM拍摄照片在膜厚度方向上分成20个时的19条分割线的孔径的比较进行了多孔膜的厚度方向上的孔径的比较。连续地选择50个以上的与分界线交叉或相接的孔，测量各自的孔径，并计算平均值来设为平均孔径。在此，孔径不是所选择的孔与分割线交叉的部分的长度，而使用通过使用数字化仪从膜的截面的SEM拍摄照片描绘孔而计算面积，并将所得到的面积作为正圆的面积而计算的直径。此时，关于孔大且无法选择50个以上的分割线，扩展得到膜截面的SEM拍摄照片的视野而测量50个。通过按分割线比较所得到的平均孔径而进行了膜的厚度方向上的孔径的比较。此时将最小的平均孔径作为致密部位的平均孔径。

多孔膜的致密部位的厚度由以下式算出。

(式)膜厚×[(成为最小孔径×1.3倍以内的孔径的分割线数)÷19]

将膜的截面的SEM拍摄照片示于图4，并将厚度方向上的孔径分布示于图5。参考例8的多孔膜的厚度及孔径评价的结果如下。

多孔膜厚度：55μm

致密部位的平均孔径(多孔膜的最小孔径的平均值)：0.8μm

多孔膜的最小孔径与最大孔径之比：7.5

致密部位的厚度：10.5μm

在图5中，关于参考例8的多孔膜，分割线No.5～8为致密部位，且能够从本说明书的0097段的定义判断在分割线No.1～5及分割线No.8～19中“孔径在厚度方向上从致密部位朝向膜的表面连续地增大”。

[参考例9]细胞移植用设备(仅免疫隔离膜)的制作

将在参考例8中制作的聚砜多孔膜切成3cm×5cm。将在制造时吹送空气的一侧的表面作为内侧而对折。

然后，使用Fuji Impulse Co.,Ltd.制茶袋封口机(T-230K)，将3cm×2.5cm的长方形的长边2个边及短边1个边这3个边加热至260℃。另外，用热电偶测量温度。然后，以将金属棒***到Intramedic聚乙烯管(PE200)的内侧的状态***于剩余的1个边，并以该状态使用相同的密封剂分别在相同的温度下进行了加热。然后，用刀切割周边部分以使端部密封部的宽度成为1mm，从而制作了成为1cm×2cm的细胞移植用设备(仅免疫隔离膜)。将制作方法示于图6。

[参考例10]免疫隔离膜的制作和孔径评价

将聚砜(Solvay制P3500)15质量份、聚乙烯吡咯烷酮(Nippon Shokubai Co.,Ltd.制K-30)15质量份、氯化锂1质量份及水2质量份溶解在N-甲基-2-吡咯啶酮67质量份中而得到了成膜原液。将该成膜原液以干燥厚度成为83μm的湿膜厚度流延在PET薄膜表面上。对上述所流延的液膜表面以2m/秒吹送调整至30℃、相对湿度57％RH的空气5秒钟。然后立刻浸渍到装满水的70℃的凝固液槽中。剥离PET薄膜而得到了多孔膜。然后，在80℃的二乙二醇浴中浸渍120秒钟之后，用纯水清洗而得到了多孔膜。将该多孔膜作为免疫隔离膜。

参考例10的多孔膜的气泡点为0.66kg/cm²。

以与参考例8相同的方式对厚度及孔径进行了评价。将膜的截面的SEM拍摄照片示于图7，并将厚度方向上的孔径分布示于图8。参考例10的多孔膜的厚度及孔径评价的结果如下。

多孔膜厚度：85μm

致密部位的平均孔径(多孔膜的最小孔径的平均值)：0.73μm

多孔膜的最小孔径与最大孔径之比：11.1

致密部位的厚度：21.8μm

在图8中，关于参考例10的多孔膜，分割线No.4～8为致密部位，且能够从本说明书的0097段的定义判断在分割线No.1～4及分割线No.8～19中“孔径在厚度方向上从致密部位朝向膜的表面连续地增大”。

[参考例11]细胞移植用设备的制作

使用在参考例10中制作的聚砜多孔膜替代在参考例8中制作的聚砜多孔膜来作为多孔膜，并以与参考例9相同的方式制作了细胞移植用设备。

[参考例12]免疫隔离膜的制作和孔径评价

将聚砜(Solvay制P3500)18质量份、聚乙烯吡咯烷酮(K-30)12质量份、氯化锂0.5质量份及水1质量份溶解在N-甲基-2-吡咯啶酮68.5质量份中而得到了成膜原液。将该成膜原液以干燥厚度成为130μm的湿膜厚度流延在PET薄膜表面上。对上述所流延的液膜表面以2m/秒吹送调整至30℃、相对湿度50％RH的空气5秒钟。然后立刻浸渍到装满水的50℃的凝固液槽中。剥离PET薄膜而得到了多孔膜。然后，在80℃的二乙二醇浴中浸渍120秒钟之后，用纯水清洗而得到了多孔膜。将该多孔膜作为免疫隔离膜。

参考例12的多孔膜的气泡点为1.3kg/cm²。

以与参考例8相同的方式对厚度及孔径进行了评价。将膜的截面的SEM拍摄照片示于图9，并将厚度方向上的孔径分布示于图10。参考例12的多孔膜的厚度及孔径评价的结果如下。

多孔膜厚度：142μm

致密部位的平均孔径(多孔膜的最小孔径的平均值)：0.45μm

多孔膜的最小孔径与最大孔径之比：12.2

致密部位的厚度：27.4μm

在图10中，关于参考例12的多孔膜，分割线No.2～5为致密部位，且能够从本说明书的0097段的定义判断在分割线No.1～2及分割线No.5～19中“孔径在厚度方向上从致密部位朝向膜的表面连续地增大”。

[参考例13]细胞移植用设备(仅免疫隔离膜)的制作

使用在参考例12中制作的聚砜多孔膜替代在参考例8中制作的聚砜多孔膜来作为多孔膜，并以与参考例9相同的方式制作了细胞移植用设备(仅免疫隔离膜)。

[实施例1]生物内的针对设备周围的血管诱导能的评价

将在参考例7中制作的1,600个mADSC的细胞结构体封装在参考例9、参考例11及参考例13中制作的细胞移植用设备(仅免疫隔离膜)中，并将注入部分密封而完成了细胞移植用设备(细胞新生剂)。将它们植入NOD/SCID小鼠的背部皮下，经过两周后制作移植部位的组织切片而实施了组织学评价。将移植到两个个体中的代表性组织标本示于图11。其结果，得知在包含间充质干细胞(MSC)的细胞结构体的细胞移植用设备中，在设备附近局部诱导了大量的新生血管。

[比较例1]生物内的针对设备周围的血管诱导能的评价

仅将在参考例7中制作的mADSC的细胞结构体植入到NOD/SCID小鼠的背部皮下，经过两周之后制作移植部位的组织切片，并实施了组织学评价。将移植到2个个体的代表性组织标本示于图12。其结果，仅在间充质干细胞(mADSC)的细胞结构体中，新生血管被诱导到无规则部位。

[比较例2]生物内的针对设备周围的血管诱导能的评价

将参考例9、11和13中制备的细胞移植设备植入NOD/SCID小鼠的背部皮下，经过2周后制作移植部位的组织切片而实施了组织学评价。将移植到两个个体中的代表性组织标本示于图13。结果，发现在不包含间充质干细胞(mADSC)的细胞结构体的细胞移植用设备中，新血管的诱导非常少。

[实施例2]

关于实施例1及比较例1、2的结果，以每个视野的血管的总面积及每个视野的血管根数进行了定量评价。在评价中，分析了4个个体的数据，并且计算了平均值和标准偏差。结果，在“细胞结构体+细胞移植用设备”(实施例1)的移植结果中，在设备的周围，每个视野的血管总面积为13,391±4,329μm²，每个视野的血管根数为28.5±7.0。另一方面，在“仅细胞结构体”(比较例1)的移植结果中，每个视野的血管总面积为1,571±1,264μm²，每个视野的血管根数为8.0±3.2。在“仅细胞移植用设备”(比较例2)的移植结果中，每个视野的血管总面积为3,519±3,826μm²，每个视野的血管根数为8.5±7.1。由此，定量地明确了与“仅细胞结构体”或“仅细胞移植用设备”的情况相比，在“细胞结构体+细胞移植用设备”，在设备周围诱导了明显多的新生血管(参考图14～图17)。另外，关于统计学分析，通过t检验也可知在血管总面积评价结果与血管根数评价结果中的任一个中，“仅细胞结构体”或“仅细胞移植用设备”和“细胞结构体+细胞移植用设备”之间存在明显差异。(p＜0.05)

[实施例3]生物内的针对设备周围的血管诱导评价(受体动物不同)

将在参考例7中制作的1,600个mADSC的细胞结构体封装在参考例9中制作的细胞移植用设备(仅免疫隔离膜)中，并将注入部分密封而完成了细胞移植用设备。将它们植入C57BL/6小鼠的背部皮下，经过两周后制作移植部位的组织切片而实施了组织学评价。另外，与仅移植了在参考例9中制作的细胞移植用设备的情况进行了比较的组织标本示于图18。其结果，可知在包含细胞结构体的细胞移植用设备中，即使在移植到C57BL/6小鼠的情况下，与移植了细胞移植用设备(仅免疫隔离膜)的情况相比，在该设备附近诱导了大量的新生血管。

[参考例14]球体的制备

以使小鼠脂肪来源的间充质干细胞(mADSC)1.2×10⁸个细胞悬浮于含有10％FBS(胎牛血清)的D-MEM培养基(Dulbecco改良的Eagle培养基)4ml的状态播种到细胞非粘附性35mm培养皿即EZSPHERE(注册商标)培养皿Type903(球体井口径800μm、球体井深度300μm、球体井为数井～约1,200井。在底面具有凹陷部的培养面且具有立设在培养面的周围的侧外壁部。AGC TECHNO GLASS CO.,LTD.制)。将上述培养皿在CO₂恒温箱中在37℃下静置48小时而得到了约1,200个均匀的球体。

[实施例4]生物内的针对设备周围的血管诱导能的评价

将在参考例14中制作的1,600个mADSC的球体封装在参考例9中制作的细胞移植用设备(仅免疫隔离膜)中，并将注入部分密封而完成了细胞移植用设备(仅血管新生剂)。将它们植入C57BL/6小鼠的背部皮下，经过两周后制作移植部位的组织切片而实施了组织学评价。将移植到两个个体中的代表性组织标本示于图19。其结果，得知在包含间充质干细胞(MSC)的细胞移植用设备中，在设备附近诱导了新生血管。

[实施例5]

关于实施例4的结果，以每个视野的血管的总面积及每个视野的血管根数进行了定量评价。在评价中，分析了4个个体的数据，并且计算了平均值和标准偏差。结果，在“细胞移植用设备(实施例4)”的移植结果中，每个视野的血管总面积为5871±1053μm²，每个视野的血管根数为16±5.6根。从实施例2及实施例4的结果明确了与“仅细胞移植用设备”的情况相比，在“细胞+细胞移植用设备”中诱导了明显多的新生血管(参考图20及图21)。

序 列 表

<110> 富士胶片株式会社

<120> 血管新生剂及其制造方法

<130> 17F02810W1

<160> 10

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 571

<212> PRT

<213> 重组体

<400> 1

Gly Ala Pro Gly Ala Pro Gly Leu Gln Gly Ala Pro Gly Leu Gln Gly

1 5 10 15

Met Pro Gly Glu Arg Gly Ala Ala Gly Leu Pro Gly Pro Lys Gly Glu

20 25 30

Arg Gly Asp Ala Gly Pro Lys Gly Ala Asp Gly Ala Pro Gly Ala Pro

35 40 45

Gly Leu Gln Gly Met Pro Gly Glu Arg Gly Ala Ala Gly Leu Pro Gly

50 55 60

Pro Lys Gly Glu Arg Gly Asp Ala Gly Pro Lys Gly Ala Asp Gly Ala

65 70 75 80

Pro Gly Lys Asp Gly Val Arg Gly Leu Ala Gly Pro Ile Gly Pro Pro

85 90 95

Gly Glu Arg Gly Ala Ala Gly Leu Pro Gly Pro Lys Gly Glu Arg Gly

100 105 110

Asp Ala Gly Pro Lys Gly Ala Asp Gly Ala Pro Gly Lys Asp Gly Val

115 120 125

Arg Gly Leu Ala Gly Pro Ile Gly Pro Pro Gly Pro Ala Gly Ala Pro

130 135 140

Gly Ala Pro Gly Leu Gln Gly Met Pro Gly Glu Arg Gly Ala Ala Gly

145 150 155 160

Leu Pro Gly Pro Lys Gly Glu Arg Gly Asp Ala Gly Pro Lys Gly Ala

165 170 175

Asp Gly Ala Pro Gly Lys Asp Gly Val Arg Gly Leu Ala Gly Pro Pro

180 185 190

Gly Ala Pro Gly Leu Gln Gly Ala Pro Gly Leu Gln Gly Met Pro Gly

195 200 205

Glu Arg Gly Ala Ala Gly Leu Pro Gly Pro Lys Gly Glu Arg Gly Asp

210 215 220

Ala Gly Pro Lys Gly Ala Asp Gly Ala Pro Gly Ala Pro Gly Leu Gln

225 230 235 240

Gly Met Pro Gly Glu Arg Gly Ala Ala Gly Leu Pro Gly Pro Lys Gly

245 250 255

Glu Arg Gly Asp Ala Gly Pro Lys Gly Ala Asp Gly Ala Pro Gly Lys

260 265 270

Asp Gly Val Arg Gly Leu Ala Gly Pro Ile Gly Pro Pro Gly Glu Arg

275 280 285

Gly Ala Ala Gly Leu Pro Gly Pro Lys Gly Glu Arg Gly Asp Ala Gly

290 295 300

Pro Lys Gly Ala Asp Gly Ala Pro Gly Lys Asp Gly Val Arg Gly Leu

305 310 315 320

Ala Gly Pro Ile Gly Pro Pro Gly Pro Ala Gly Ala Pro Gly Ala Pro

325 330 335

Gly Leu Gln Gly Met Pro Gly Glu Arg Gly Ala Ala Gly Leu Pro Gly

340 345 350

Pro Lys Gly Glu Arg Gly Asp Ala Gly Pro Lys Gly Ala Asp Gly Ala

355 360 365

Pro Gly Lys Asp Gly Val Arg Gly Leu Ala Gly Pro Pro Gly Ala Pro

370 375 380

Gly Leu Gln Gly Ala Pro Gly Leu Gln Gly Met Pro Gly Glu Arg Gly

385 390 395 400

Ala Ala Gly Leu Pro Gly Pro Lys Gly Glu Arg Gly Asp Ala Gly Pro

405 410 415

Lys Gly Ala Asp Gly Ala Pro Gly Ala Pro Gly Leu Gln Gly Met Pro

420 425 430

Gly Glu Arg Gly Ala Ala Gly Leu Pro Gly Pro Lys Gly Glu Arg Gly

435 440 445

Asp Ala Gly Pro Lys Gly Ala Asp Gly Ala Pro Gly Lys Asp Gly Val

450 455 460

Arg Gly Leu Ala Gly Pro Ile Gly Pro Pro Gly Glu Arg Gly Ala Ala

465 470 475 480

Gly Leu Pro Gly Pro Lys Gly Glu Arg Gly Asp Ala Gly Pro Lys Gly

485 490 495

Ala Asp Gly Ala Pro Gly Lys Asp Gly Val Arg Gly Leu Ala Gly Pro

500 505 510

Ile Gly Pro Pro Gly Pro Ala Gly Ala Pro Gly Ala Pro Gly Leu Gln

515 520 525

Gly Met Pro Gly Glu Arg Gly Ala Ala Gly Leu Pro Gly Pro Lys Gly

530 535 540

Glu Arg Gly Asp Ala Gly Pro Lys Gly Ala Asp Gly Ala Pro Gly Lys

545 550 555 560

Asp Gly Val Arg Gly Leu Ala Gly Pro Pro Gly

565 570

<210> 2

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：细胞粘附信号

<400> 2

Arg Glu Asp Val

1

<210> 3

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：细胞粘附信号

<400> 3

Tyr Ile Gly Ser Arg

1 5

<210> 4

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：细胞粘附信号

<400> 4

Pro Asp Ser Gly Arg

1 5

<210> 5

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：细胞粘附信号

<400> 5

Arg Tyr Val Val Leu Pro Arg

1 5

<210> 6

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：细胞粘附信号

<400> 6

Leu Gly Thr Ile Pro Gly

1 5

<210> 7

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：细胞粘附信号

<400> 7

Arg Asn Ile Ala Glu Ile Ile Lys Asp Ile

1 5 10

<210> 8

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：细胞粘附信号

<400> 8

Ile Lys Val Ala Val

1 5

<210> 9

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：细胞粘附信号

<400> 9

Asp Gly Glu Ala

1

<210> 10

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：细胞粘附信号

<400> 10

Glu Arg Gly Asp

1

Claims (14)

1.一种血管新生剂，其包含(A)间充质干细胞及(B)内包所述间充质干细胞的免疫隔离膜，

所述免疫隔离膜为含有聚合物的多孔膜，

所述多孔膜在不与膜的表面相接的内部具有孔径最小的层状致密部位。

2.根据权利要求1所述的血管新生剂，其中，

所述间充质干细胞为脂肪来源的间充质干细胞或骨髄来源的间充质干细胞。

3.根据权利要求1或2所述的血管新生剂，其中，

所述多孔膜的最小孔径为0.02μm～1.5μm。

4.根据权利要求1所述的血管新生剂，其中，

所述多孔膜的厚度为10μm～250μm。

5.根据权利要求1所述的血管新生剂，其中，

所述多孔膜的孔径在厚度方向上从所述致密部位朝向所述多孔膜的至少一个表面连续地增加。

6.根据权利要求1所述的血管新生剂，其中，

所述致密部位的厚度为0.5μm～30μm。

7.根据权利要求1所述的血管新生剂，其中，

所述多孔膜的最小孔径与最大孔径之比为3.0～20.0。

8.根据权利要求1所述的血管新生剂，其中，

所述多孔膜含有至少一种聚砜及聚乙烯吡咯烷酮。

9.根据权利要求1或2所述的血管新生剂，其包含间充质干细胞来形成细胞结构体，所述细胞结构体包含多个生物相容性高分子嵌段物和至少一种多个间充质干细胞，且在多个所述间充质干细胞的间隙配置有至少一个所述生物相容性高分子嵌段物。

10.根据权利要求9所述的血管新生剂，其中，

一个所述生物相容性高分子嵌段物的大小为20μm以上且200μm以下。

11.根据权利要求9所述的血管新生剂，其中，

在所述生物相容性高分子嵌段物中，通过热、紫外线或酶而交联有生物相容性高分子。

12.根据权利要求9所述的血管新生剂，其中，

所述生物相容性高分子嵌段物为不定形生物相容性高分子嵌段物。

13.根据权利要求9所述的血管新生剂，其中，

所述细胞结构体包含相对于每一个细胞为0.0000001μg以上且1μg以下的生物相容性高分子嵌段物。

14.一种权利要求1或2所述的血管新生剂的制造方法，其包括用免疫隔离膜内包间充质干细胞的工序。

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