CN110922458B - 大豆抗逆相关蛋白GmNF-YB24及其编码基因的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了大豆抗逆相关蛋白GmNF‑YB24及其编码基因的应用。本发明提供的蛋白质，命名为GmNF‑YB24蛋白，为序列1所示的蛋白质。编码GmNF‑YB24蛋白的基因，命名为GmNF‑YB24基因，也属于本发明的保护范围。本发明还保护GmNF‑YB24蛋白的应用：调控植物的耐逆性；提高植物的耐逆性。本发明还保护一种制备转基因植物的方法，包括如下步骤：在出发植物中导入GmNF‑YB24基因，得到与所述出发植物相比耐逆性增高的转基因植物。本发明提供的蛋白和基因为人为控制抗逆和耐逆相关基因的表达提供了基础，将在培育抗逆性和耐逆性增强的植物中发挥重要的作用。

Description

大豆抗逆相关蛋白GmNF-YB24及其编码基因的应用

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及大豆抗逆相关蛋白GmNF-YB24及其编码基因的应用。

背景技术

干旱、高盐及低温等逆境胁迫是影响大豆生长、发育的障碍因子。因此，了解大豆对逆境条件的应答与信号传导机制，提高大豆品种的抗逆性，成为大豆遗传研究及大豆品种改良的重要任务之一。

在逆境胁迫下植物体内会产生一系列应答反应，伴随着许多生理生化及发育上的变化。明确植物对逆境的反应机制，将为抗逆基因工程研究和应用提供科学论据。目前，植物抗逆性研究已逐渐深入到细胞、分子水平，并与遗传学和遗传工程研究相结合，探索用生物技术来改进植物生长特性，其目的是提高植物对逆境的适应能力。

在干旱、高盐和低温等环境胁迫的逆境条件下，植物能够在分子、细胞和整体水平上做出相应的调整，以最大程度上减少环境所造成的伤害并得以生存。许多基因受胁迫诱导表达，这些基因的产物不仅能够直接参与植物的胁迫应答，而且能够调节其它相关基因的表达或参与信号传导途径，从而使植物避免或减少伤害，增强对胁迫环境的抗性。目前发现植物的耐盐抗旱胁迫信号网络中主要有植物激素信号途径、脂质体信号途径、SnRK2(sucrose non-fermenting1-related protein kinase 2)和MAPK(mitogen-activatedprotein kinase)信号途径、ROS(reactive oxygen species)信号途径以及气孔信号途径。这些信号网络***将植物的激素调节、新陈代谢、能量供应以及生长发育密切联系在一起。这说明植物对高盐干旱等胁迫的适应，不仅依赖于耐逆相关基因的表达，还依赖于由干旱和高盐等胁迫诱导引发的各种信号通路的综合调控作用。与胁迫相关的基因产物可以分为两大类：第一类基因编码的产物包括离子通道蛋白、水通道蛋白、渗透调节因子(蔗糖、脯氨酸和甜菜碱等)合成酶等直接参与植物胁迫应答的基因产物；第二类基因编码的产物包括参与胁迫相关的信号传递和基因表达调节的蛋白因子，如蛋白激酶、转录因子等。其中，转录因子在调节植物胁迫相关基因表达的过程中起着重要作用。当非生物胁迫来临时，转录因子在植物体内活性的变化，使其调控的靶基因的活性也发生相应的改变，即在转录及蛋白水平的表达量发生改变。也就是说，在非生物胁迫刺激植物体的时候，在细胞膜外二级信号分子就会产生，然后该信号分子会刺激细胞内膜使磷酸化蛋白分子相继产生，继而启动转录因子，使其活性增加来调控功能基因。

发明内容

本发明的目的是提供大豆抗逆相关蛋白GmNF-YB24及其编码基因的应用。

本发明提供的蛋白质，获自大豆(Glycine max(Linn.)Merr.)，命名为GmNF-YB24蛋白，为如下(a)或(b)或(c)或(d)：

(a)序列表的序列1所示的蛋白质；

(b)将序列1进行一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的与植物耐逆性相关的由其衍生的蛋白质；

(c)来源于大豆且与(a)具有95％以上同一性且与植物耐逆性相关的蛋白质；

(d)在(a)或(b)或(c)的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质。

标签具体如表1所示。

表1标签的序列

标签	残基	序列
			Poly-Arg	5-6(通常为5个)	RRRRR
Poly-His	2-10(通常为6个)	HHHHHH
			FLAG	8	DYKDDDDK
Strep-tag II	8	WSHPQFEK
			c-myc	10	EQKLISEEDL
HA	9	YPYDVPDYA

蛋白质可人工合成，也可先合成其编码基因，再进行生物表达得到。

编码GmNF-YB24蛋白的基因，命名为GmNF-YB24基因，也属于本发明的保护范围。

GmNF-YB24基因为如下(1)或(2)或(3)或(4)所述的DNA分子：

(1)编码区如序列表中序列2所示的DNA分子；

(2)与(1)具有75％以上同一性且编码植物耐逆性相关蛋白的DNA分子；

(3)来源于大豆且与(1)具有90％以上同一性且编码植物耐逆性相关蛋白的DNA分子；

(4)在严格条件下与(1)杂交且编码植物耐逆性相关蛋白的DNA分子。

所述严格条件是在2×SSC，0.1％SDS的溶液中，在68℃下杂交并洗膜2次，每次5min，又于0.5×SSC，0.1％SDS的溶液中，在68℃下杂交并洗膜2次，每次15min。

上述75％以上同一性，可为80％、85％、90％或95％以上的同一性。

含有GmNF-YB24基因的表达盒、重组载体或重组菌均属于本发明的保护范围。

所述重组载体具体可为重组表达载体。可用现有的表达载体构建含有所述基因的重组表达载体。使用所述基因构建重组表达载体时，可在其转录起始核苷酸前加上任何一种增强型、组成型、组织特异型或诱导型启动子，它们可单独使用或与其它的植物启动子结合使用；此外，使用所述基因构建重组表达载体时，还可使用增强子，包括翻译增强子或转录增强子，这些增强子区域可以是ATG起始密码子或邻接区域起始密码子等，但必需与编码序列的阅读框相同，以保证整个序列的正确翻译。所述翻译控制信号和起始密码子的来源是广泛的，可以是天然的，也可以是合成的。翻译起始区域可以来自转录起始区域或结构基因。为了便于对转基因植物或转基因微生物进行鉴定及筛选，可对所用表达载体进行加工，如加入在植物或微生物中表达可产生颜色变化的酶或发光化合物的基因、具有抗性的抗生素标记物或是抗化学试剂标记基因等。从转基因安全性考虑，可不加任何选择性标记基因，直接以逆境胁迫筛选转化植物或微生物。

所述重组表达载体具体可为在载体pBI121的多克隆位点(例如SmaI酶切位点)***GmNF-YB24基因得到的重组质粒。

所述重组表达载体具体可为在载体pCAMBIA3301的多克隆位点(例如PmlI酶切位点)***GmNF-YB24基因得到的重组质粒。

本发明还保护GmNF-YB24蛋白的应用，为如下(Ⅰ)或(Ⅱ)：

(Ⅰ)调控植物的耐逆性；

(Ⅱ)提高植物的耐逆性。

本发明还保护一种植物育种方法，包括如下步骤：提高目的植物中GmNF-YB24蛋白的活性和/或含量，从而提高植物的耐逆性。

本发明还保护GmNF-YB24基因在培育耐逆性增高的转基因植物中的应用。

本发明还保护一种制备转基因植物的方法，包括如下步骤：在出发植物中导入GmNF-YB24基因，得到与所述出发植物相比耐逆性增高的转基因植物。所述GmNF-YB24基因通过重组表达载体导入所述出发植物。

本发明还保护GmNF-YB24蛋白、GmNF-YB24基因或所述方法，在植物育种中的应用。所述育种的目标为获得耐逆性增强的植物。

以上任一所述耐逆性为耐旱性和/或耐盐性。

以上任一所述耐逆性增高体现为如下(e1)、(e2)、(e3)和(e4)中的任意一种或任意组合：

(e1)在逆境胁迫环境中，存活率高；

(e2)在逆境胁迫环境中，电导率低；

(e3)在逆境胁迫环境中，脯氨酸含量高；

(e4)在逆境胁迫环境中，丙二醛含量低。

所述逆境胁迫为干旱胁迫或盐胁迫。

以上任一所述植物为单子叶植物或双子叶植物。

所述双子叶植物具体为拟南芥或大豆。所述拟南芥具体可为哥伦比亚生态型拟南芥。所述大豆具体可为大豆Williams 82。

本发明发现将GmNF-YB24基因导入植物中得到的转基因植物，其对耐逆性显著高于野生型植物，本发明提供的蛋白和基因为人为控制抗逆和耐逆相关基因的表达提供了基础，将在培育抗逆性和耐逆性增强的植物中发挥重要的作用。

附图说明

图1为实施例2中干旱逆境胁迫处理的结果。

图2为实施例2中高盐逆境胁迫处理的结果。

图3为实施例3中GmNF-YB24基因的相对表达量的结果。

图4为实施例3中干旱处理/盐处理后的植株的照片。

图5为实施例3中干旱处理/盐处理后的植株叶片的相对电导率。

图6为实施例3中干旱处理/盐处理后的植株叶片的脯氨酸含量。

图7为实施例3中干旱处理/盐处理后的植株叶片的丙二醛含量。

图8为实施例3中干旱处理/盐处理后的植株叶片的DAB染色照片。

图9为实施例3中干旱处理/盐处理后的植株叶片的NBT染色照片。

图10为实施例3中干旱处理/盐处理后的植株叶片的台盼蓝染色照片。

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。下述实施例中的％，如无特殊说明，均为质量百分含量。

大豆“铁丰8号”，简称铁丰8号：国家种质资源库获得(编号为ZM242)；提及大豆的文献为：Li PS,Yu TF,He GH,Chen M,Zhou YB,Chai SC,Xu ZS and Ma YZ.(2014)Genome-wide analysis of the Hsf family in soybean and functional identification ofGmHsf-34involvement in drought and heat stresses.BMC Genomics.15:1009.。

植物真核表达载体pBI121，简称载体pBI121。农杆菌GV3101：北京拜尔迪生物技术公司。哥伦比亚生态型拟南芥，又称野生型拟南芥，用Col-0表示：美国拟南芥信息资源网，SALK公司。

植物真核表达载体pCAMBIA3301，简称载体pCAMBIA3301。农杆菌K599：北京拜尔迪生物技术公司。大豆Williams 82，简称Williams 82。

实施例1、GmNF-YB24蛋白及其编码基因的获得

正常条件下生长2周左右的铁丰8号四叶期幼苗NaCl处理2小时，用液氮速冻，-80℃保存备用。

采用Trizol法提取大豆叶片总RNA，用反转录酶XL(AMV)合成第一链cDNA。采用SMART法合成ds cDNA，PCR产物进行1.0％琼脂糖凝胶电泳检测。

通过5’RACE和3’RACE的方法获得序列表中的序列2。序列表的序列2所示的DNA分子编码序列表的序列1所示的蛋白质。

将序列表的序列1所示的蛋白质命名为GmNF-YB24蛋白。将编码GmNF-YB24蛋白的基因命名为GmNF-YB24基因，其开放阅读框如序列表的序列2所示。

实施例2、GmNF-YB24蛋白对拟南芥耐逆性的影响

一、重组表达载体的构建

1、提取铁丰8号的叶片的总RNA，反转录得到cDNA。

2、步骤1得到cDNA作为模板，采用B24-F和B24-R组成的引物对进行PCR扩增，回收PCR扩增产物。

B24-F：5'-GTTGTATTTGGTTTGGTGGCATT-3'；

B24-R：5'-CTCAACAACGAAGTTTCAAGCAA-3'。

3、将步骤2得到的PCR扩增产物与Peasyblunt载体(全式金，北京)连接，得到重组质粒Peasyblunt-GmNF-YB24。

4、以重组质粒Peasyblunt-GmNF-YB24为模板，采用GmNF-YB24-121F和GmNF-YB24-121R组成的引物对进行PCR扩增，回收PCR扩增产物。

GmNF-YB24-121F:5'-CTCTAGAGGATCCCCGGGATGGCTGAGTCGGACAA-3'；

GmNF-YB24-121R:5'-ACTAGTGGATCCCCCGGGTTATCTAGTTCTTGCAGAAG-3。

5、用限制性内切酶SmaI酶切步骤4得到的PCR扩增产物，回收酶切产物。

6、用限制性内切酶SmaI酶切载体pBI121，回收载体骨架。

7、将步骤5得到的酶切产物和步骤6得到的载体骨架连接，得到重组质粒pBI121-GmNF-YB24。根据测序结果，对重组质粒pBI121-GmNF-YB24进行结构描述如下：在载体pBI121的SmaI酶切位点***了序列表的序列2所示的DNA分子。

二、转基因拟南芥的获得

1、将重组质粒pBI121-GmNF-YB24导入农杆菌GV3101，得到重组农杆菌。

2、将步骤1得到的重组农杆菌接种于液体YEP培养基，28℃、3000rpm振荡培养约30小时。

3、完成步骤2后，将菌液转至含50μg/L利福平和50μg/L卡那霉素的液体YEP培养基，28℃、300rpm振荡培养至OD_600nm＝1.5-3.0。

4、完成步骤3后，收集菌体,4℃、4000g离心10min，用含10％蔗糖和0.02％silwet的水溶液稀释至OD_600nm约为1.0，即为侵染液。

5、将种植于花盆中的哥伦比亚生态型拟南芥倒扣在盛有侵染液的容器中，使花浸没50s左右，然后取出花盆，侧放于托盘中，盖上黑色塑料布，24小时后揭开塑料布，直立放置花盆，进行正常的光照培养，收获种子，即为T₀代拟南芥的种子。

6、将T₀代拟南芥的种子播种于含50mg/L卡那霉素的固体MS培养基平板上，培养得到的植株即为T₁代拟南芥。

7、T₁代拟南芥自交并收获种子，即为T₁代拟南芥的种子。T₁代拟南芥的种子培养得到的植株即为T₂代拟南芥。T₂代拟南芥自交并收获种子，即为T₂代拟南芥的种子。T₂代拟南芥的种子培养得到的植株即为T₃代拟南芥。

8、对T₂代拟南芥和抽样的T₃代拟南芥进行PCR鉴定。如果某一T₂代拟南芥及其自交获得的T₃代拟南芥均为PCR鉴定阳性，该T₂代拟南芥及其自交后代为1个纯合的转GmNF-YB24基因株系。PCR鉴定的方法：提取叶片的基因组DNA，采用GmNF-YB24-121F和GmNF-YB24-121R组成的引物对进行PCR扩增，如果得到约500bp的扩增产物，为PCR鉴定阳性。

三、转空载体拟南芥的获得

用载体pBI121代替重组质粒pBI121-GmNF-YB24，参照步骤二操作，得到转空载体拟南芥。

四、拟南芥的耐逆性鉴定

1、干旱逆境胁迫处理

待测种子为：GmNF-YB24-1株系T₃代植株的种子、GmNF-YB24-2株系T₃代植株的种子、转空载体拟南芥T₃代植株的种子、野生型拟南芥的种子。GmNF-YB24-1株系和GmNF-YB24-2株系均为纯合的转GmNF-YB24基因株系。

干旱组：将待测种子播种，从种子萌发开始计天数，20天后开始进行干旱处理(即连续一周不浇水)，然后进行复水处理(即恢复正常浇水一周)，然后拍照并统计存活率；

正常组：将待测种子播种，从种子萌发开始计天数，20天后继续正常浇水管理两周，然后拍照。

设置三次重复试验，每次重复试验中每种待测种子对10株植株进行观察统计。

结果见图1。图1A为正常组植株的照片，图1B为干旱组植株的照片，图1C为干旱组植株的存活率。

干旱处理后，出现萎蔫死亡的植株，GmNF-YB24-1株系、GmNF-YB24-2株系植株的长势均显著优于野生型拟南芥，转空载体拟南芥的生长状况与野生型拟南芥无显著差异。干旱组中，GmNF-YB24-1株系植株、GmNF-YB24-2株系植株的存活率显著高于野生型拟南芥，转空载体拟南芥的存活率与野生型拟南芥没有显著差异。

2、高盐逆境胁迫处理

待测种子为：GmNF-YB24-1株系T₃代植株的种子、GmNF-YB24-2株系T₃代植株的种子、转空载体拟南芥T₃代植株的种子、野生型拟南芥的种子。GmNF-YB24-1株系和GmNF-YB24-2株系为2个纯合的转GmNF-YB24基因株系。

盐胁迫组：将待测种子播种，从种子萌发开始计天数，20天后开始进行盐胁迫处理(即连续一周用200mM NaCl水溶液浇灌)，然后拍照并统计存活率；

正常组：将待测种子播种，从种子萌发开始计天数，20天后继续正常浇水管理一周，然后拍照。

设置三次重复试验，每次重复试验中每种待测种子对10株植株进行观察统计。

结果见图2。图2A为正常组植株的照片，图2B为盐胁迫组植株的照片，图2C为盐胁迫组植株的存活率。

盐胁迫处理后，GmNF-YB24-1株系、GmNF-YB24-2株系植株的长势均显著优于野生型拟南芥，转空载体拟南芥的生长状况与野生型拟南芥没有显著差异。盐胁迫组中，GmNF-YB24-1株系植株、GmNF-YB24-2株系植株的存活率显著高于野生型拟南芥，转空载体植株的存活率与野生型拟南芥没有显著差异。

实施例3、GmNF-YB24蛋白对大豆耐逆性的影响

一、重组表达载体的构建

1、以重组质粒Peasyblunt-GmNF-YB24为模板，采用GmNF-YB24-3301F和GmNF-YB24-3301R组成的引物对进行PCR扩增，回收PCR扩增产物。

GmNF-YB24-3301F:5'-CCACCACCACCACCACCACGTGATGGCTGAGTCGGACAA-3'；

GmNF-YB24-3301R:5'-GGTCACCTGTAATTCACACGTGTTATCTAGTTCTTGCAGAAG-3。

2、用限制性内切酶PmlI酶切载体pCAMBIA3301，回收载体骨架。

3、将步骤1得到的PCR扩增产物和步骤2得到的载体骨架进行In-Fusion无缝克隆，得到重组质粒pCAMBIA3301-GmNF-YB24。根据测序结果，对重组质粒pCAMBIA3301-GmNF-YB24进行结构描述如下：在载体pCAMBIA3301的PmlI酶切位点***了序列表的序列2所示的DNA分子。

二、转基因大豆的获得

1、将重组质粒pCAMBIA3301-GmNF-YB24导入农杆菌K599，得到重组农杆菌。将重组农杆菌接种于液体YEP培养基，28℃、3000rpm振荡培养18小时。将菌液划线接种于含50μg/L链霉素和50μg/L卡那霉素的固体YEP培养基平板，28℃静置培养2天。

2、将Williams 82的种子经氯气消毒8小时，然后均匀播种于灭菌的蛭石内，培养至子叶形成。

3、完成步骤1后，用注射器的针尖挑取菌落，然后将含有菌落的针尖扎入完成步骤2的大豆的子叶节处，然后培养至大豆毛状根长出，得到大豆转GmNF-YB24基因毛状根复合体植株(简称转GmNF-YB24基因植株)。

三、转空载体大豆的获得

用pCAMBIA3301载体代替重组质粒pCAMBIA3301-GmNF-YB24，按照步骤二进行操作，得到大豆转空载体毛状根复合体植株(简称转空载体植株)。

四、检测GmNF-YB24基因的相对表达量

完成步骤二或步骤三后，取植株的毛状根，提取总RNA并反转录得到cDNA，以cDNA模板进行qRT-PCR，采用Actin基因作为内参基因，检测GmNF-YB24基因的相对表达量。

用于检测GmNF-YB24基因的引物如下：

GmNF-YB24ygdl-F：5'-GTTGTATTTGGTTTGGTGGCATT-3'；

GmNF-YB24ygdl-R：5'-TTGCGTTCCCCGTGTGACCT-3'。

用于检测Actin基因的引物如下：

Actin-F：5'-CTGTTGGAAGGTGCTGAG-3'；

Actin-R：5'-ACATTGTTCTTAGTGGTGGCT-3'。

结果见图3。图3中，control代表转空载体植株，35S::GmNFYB24-1至35S::GmNFYB24-4代表不同的转GmNF-YB24基因植株。转GmNF-YB24基因植株毛状根中GmNF-YB24基因的表达量是转空载体植株的4-6倍，差异具有显著性。结果表明，外源基因(GmNF-YB24基因)不但已顺利整合到大豆的基因组上，而且能够在转基因大豆中正常转录表达。

五、大豆的耐逆性鉴定

待测植株为：步骤二得到的生长五周大的转GmNF-YB24基因植株、步骤三得到生长五周大的转空载体植株。

干旱胁迫试验组：待测植株进行干旱处理。干旱处理的方法：采用含25％PEG6000的水溶液进行单次浇灌。

盐胁迫试验组：待测植株进行盐胁迫处理。盐胁迫处理的方法：采用200mM NaCl水溶液进行单次浇灌。

对照组：待测植株与试验组待测植株平行，不进行盐胁迫处理也不进行干旱处理，其他同试验组。

设置三次重复试验，每次重复试验中每种待测植株对10株植株进行观察统计。

干旱处理7天后的试验组植株的照片见图4A，平行处理7天后的对照组植株的照片见图4B。盐处理7天后的试验组植株的照片见图4C,平行处理7天后的对照组植株的照片见图4D。

盐胁迫处理3天后的试验组植株的叶片的相对电导率、干旱处理7天后的试验组植株的叶片的相对电导率和平行处理7天后正常组植株的叶片的相对电导率见图5。图5中，A为对照组、B为盐胁迫试验组、C为干旱胁迫试验组。

盐胁迫处理3天后的试验组植株的叶片的脯氨酸含量、干旱处理7天后的试验组植株的叶片的脯氨酸含量和平行处理7天后正常组植株的叶片的脯氨酸含量见图6。图6中，A为对照组、B为盐胁迫试验组、C为干旱胁迫试验组。

盐胁迫处理3天后的试验组植株的叶片的丙二醛含量、干旱处理7天后的试验组植株的叶片的丙二醛含量和平行处理7天后正常组植株的叶片的丙二醛含量见图7。图7中，A为对照组、B为盐胁迫试验组、C为干旱胁迫试验组。

盐胁迫处理3天后的试验组植株的叶片、干旱处理7天后的试验组植株的叶片，DAB染色照片见图8。

盐胁迫处理3天后的试验组植株的叶片、干旱处理7天后的试验组植株的叶片，NBT染色照片见图9。

盐胁迫处理3天后的试验组植株的叶片、干旱处理7天后的试验组植株的叶片，台盼蓝染色照片见图10。

盐胁迫处理后，转空载体植株出现严重的萎蔫，转GmNF-YB24基因植株的长势显著优于转空载体植株。盐胁迫处理后，转GmNF-YB24基因植株叶片的相对电导率显著低于转空载体植株。盐胁迫处理后，转GmNF-YB24基因植株叶片的脯氨酸含量显著高于转空载体植株。盐胁迫处理后，转GmNF-YB24基因植株叶片的丙二醛含量显著低于转空载体的植株。

干旱处理后，转空载体植株出现严重的萎蔫，转GmNF-YB24基因植株的长势显著优于转空载体植株。干旱处理后，转GmNF-YB24基因植株叶片的相对电导率显著低于转空载体植株。干旱处理后，转GmNF-YB24基因植株叶片的脯氨酸含量显著高于转空载体植株。干旱处理后，转GmNF-YB24基因植株叶片的丙二醛含量显著低于转空载体的植株。

相对电导率的测定方法：①取叶片0.2g，将其剪成1cm左右的小长条放于离心管中，向离心管中加入纯净的去离子水5mL，室温静置25min；②取装有纯净去离子水的离心管，用电导仪测量电势并记录为Vc；③取完成步骤①的离心管，用电导仪测量电势，记录为Vo；④取完成步骤③的离心管，在沸水中煮沸30min，然后冷却至室温，用电导仪测量电势，记录为Vm；相对电导率＝(Vo-Vc)×100/(Vm-Vc)。

丙二醛(MDA)含量检测试剂盒、脯氨酸含量检测试剂盒均为北京索莱宝科技有限公司(北京)的产品，按说明书操作。

SEQUENCE LISTING

<110> 中国农业科学院作物科学研究所

<120> GNCYX181948

<130> 大豆抗逆相关蛋白GmNF-YB24及其编码基因的应用

<160> 2

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 171

<212> PRT

<213> Glycine max

<400> 1

Met Ala Glu Ser Asp Asn Glu Ser Gly Gly His Thr Gly Asn Ala Ser

1 5 10 15

Gly Ser Asn Glu Phe Ser Gly Cys Arg Glu Gln Asp Arg Phe Leu Pro

20 25 30

Ile Ala Asn Val Ser Arg Ile Met Lys Lys Ala Leu Pro Ala Asn Ala

35 40 45

Lys Ile Ser Lys Glu Ala Lys Glu Thr Val Gln Glu Cys Val Ser Glu

50 55 60

Phe Ile Ser Phe Ile Thr Gly Glu Ala Ser Asp Lys Cys Gln Lys Glu

65 70 75 80

Lys Arg Lys Thr Ile Asn Gly Asp Asp Leu Leu Trp Ala Met Thr Thr

85 90 95

Leu Gly Phe Glu Glu Tyr Val Glu Pro Leu Lys Val Tyr Leu His Lys

100 105 110

Tyr Arg Glu Leu Glu Gly Glu Lys Thr Ala Met Met Gly Arg Pro His

115 120 125

Glu Arg Asp Glu Gly Tyr Gly His Ala Thr Pro Met Met Ile Met Met

130 135 140

Gly His Gln Gln Gln Gln His Gln Gly His Val Tyr Gly Ser Gly Thr

145 150 155 160

Thr Thr Gly Ser Ala Ser Ser Ala Arg Thr Arg

165 170

<210> 2

<211> 516

<212> DNA

<213> Glycine max

<400> 2

atggctgagt cggacaacga gtccggaggt cacacgggga acgcaagcgg aagcaacgaa 60

ttctccggtt gcagggagca agacaggttc cttccgatag cgaacgtgag caggatcatg 120

aagaaggcgt tgccggcgaa cgcgaagatc tcgaaggagg cgaaggagac ggtgcaggag 180

tgcgtgtcgg agttcatcag cttcataaca ggagaagcgt ccgataagtg ccagaaggag 240

aagaggaaga cgatcaacgg cgatgatctg ctgtgggcca tgaccacgct gggattcgag 300

gagtacgtgg agcctctcaa ggtttatctg cataagtata gggagctgga aggggagaaa 360

actgctatga tgggaaggcc acatgagagg gatgagggtt atggtcatgc aactcctatg 420

atgatcatga tggggcatca acagcagcag catcagggac acgtgtatgg atctggaact 480

actactggat cagcatcttc tgcaagaact agataa 516

Claims (4)

1.编码GmNF-YB24蛋白的基因在培育耐逆性增高的转基因植物中的应用；

所述GmNF-YB24蛋白为如下（a）或（d）：

（a）序列表的序列1所示的蛋白质；

（d）在（a）的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质；

所述植物为拟南芥或大豆；

所述耐逆性为耐旱性和/或耐盐性。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于：编码GmNF-YB24蛋白的基因为编码区如序列表中序列2所示的DNA分子。

3.一种制备转基因植物的方法，包括如下步骤：在出发植物中导入编码GmNF-YB24蛋白的基因，得到与所述出发植物相比耐逆性增高的转基因植物；

所述GmNF-YB24蛋白为如下（a）或（d）：

（a）序列表的序列1所示的蛋白质；

（d）在（a）的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质；

所述植物为拟南芥或大豆；

所述耐逆性为耐旱性和/或耐盐性。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于：编码GmNF-YB24蛋白的基因为编码区如序列表中序列2所示的DNA分子。

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