CN110907579A - 一种白头翁散中秦皮甲素、秦皮乙素hplc定量分析方法 - Google Patents

一种白头翁散中秦皮甲素、秦皮乙素hplc定量分析方法 Download PDF

Info

Publication number
CN110907579A
CN110907579A CN201911224122.8A CN201911224122A CN110907579A CN 110907579 A CN110907579 A CN 110907579A CN 201911224122 A CN201911224122 A CN 201911224122A CN 110907579 A CN110907579 A CN 110907579A
Authority
CN
China
Prior art keywords
aesculetin
solution
steps
following
aesculin
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201911224122.8A
Other languages
English (en)
Inventor
赵玉丛
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Henan University of Animal Husbandry and Economy
Original Assignee
Henan University of Animal Husbandry and Economy
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Henan University of Animal Husbandry and Economy filed Critical Henan University of Animal Husbandry and Economy
Priority to CN201911224122.8A priority Critical patent/CN110907579A/zh
Publication of CN110907579A publication Critical patent/CN110907579A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G01N30/14—Preparation by elimination of some components
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/50—Conditioning of the sorbent material or stationary liquid
    • G01N30/52—Physical parameters
    • G01N30/54—Temperature
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N2030/022—Column chromatography characterised by the kind of separation mechanism
    • G01N2030/027—Liquid chromatography
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G01N2030/062—Preparation extracting sample from raw material
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
    • G01N2030/8809—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample

Landscapes

  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)

Abstract

本发明公开了一种白头翁散中秦皮甲素、秦皮乙素HPLC定量分析方法，具体包括以下步骤：步骤一：色谱条件的确立；步骤二：提取工艺：精密称取白头翁散，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇，密塞，称定重量，超声提取，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液；步骤三：溶液的配制：包括对照品贮备溶液、对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液以及对照药材溶液的制备；步骤四：方法学考察：包括专属性试验、线性关系的考察、精密度试验和准确度试验；步骤五：样品测定：包括自制白头翁散样品含量测定和市售白头翁散含量测定。该发明的技术效果为能够实现对白头翁散中的有效成分秦皮甲素、秦皮乙素进行精确定量。

Description

一种白头翁散中秦皮甲素、秦皮乙素HPLC定量分析方法
技术领域
本发明涉及药物指标成分含量测定技术领域，具体为一种白头翁散中秦皮甲素、秦皮乙素HPLC定量分析方法。
背景技术
收载于《中华人民共和国兽药典》2015年版二部中的白头翁散是中兽药散剂的一个经典方剂，由白头翁、黄连、黄柏和秦皮组成。其中白头翁为君药，有清热解毒，凉血止痢之功；秦皮、黄柏、黄连清热解毒、燥湿止痢，共为佐药。4味药材合用，共起清热解毒、凉血止痢之效。主治：热毒赤痢、湿热痢疾、赤多白少和发热口渴等。在兽药典的标准中，只规定了白头翁散的显微鉴别方法以及黄连、秦皮、盐酸小檗碱的定性鉴别方法，未对白头翁散中的有效成分进行定量。
但采用传统的性状鉴别和显微鉴别法往往对这种相似无法做出区别，致使该制剂在使用的过程中存在诸多问题，比如药材添加量不足、以次充好等、甚至市售白头翁散中主要成分秦皮甲素、秦皮乙素未能检出等。鉴于药物的定量分析是评价中药制剂质量的一项重要内容。
因此，设计一种白头翁散中秦皮甲素、秦皮乙素HPLC定量分析方法，以期提升白头翁散的质量标准显得非常必要。
发明内容
发明的目的在于提供一种白头翁散中秦皮甲素、秦皮乙素HPLC定量分析方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，发明提供如下技术方案：一种白头翁散中秦皮甲素、秦皮乙素HPLC定量分析方法，具体包括以下步骤：
步骤一：色谱条件的确立：将流动相乙腈-0.1％磷酸水溶液的比例由8:92改为12:88，确定色谱条件为：色谱柱：Waters Symmetry C18柱；流动相：乙腈-0.1％磷酸水溶液12:88；流速：1.0mL/min；波长：334nm；柱温：30℃；进样量：10μL；该色谱条件下理论塔板数按秦皮乙素峰计算不低于5000；
步骤二：提取工艺：精密称取白头翁散1.875g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，密塞，称定重量，超声提取40min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
步骤三：溶液的配制：包括对照品贮备溶液、对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液以及对照药材溶液的制备：
所述对照品贮备溶液的制备方法为：精密称取秦皮甲素、秦皮乙素对照品适量，加甲醇使成每1mL含秦皮甲素408μg、秦皮乙素260μg的混合溶液，作为对照品贮备溶液；
所述对照品溶液的制备方法为：精密量取对照品贮备溶液5mL，加甲醇逐级稀释，得一系列浓度分别为25.5μg/mL秦皮甲素和16.25μg/mL秦皮乙素、51μg/mL秦皮甲素和32.5μg/mL秦皮乙素、102μg/mL秦皮甲素和65μg/mL秦皮乙素、204μg/mL秦皮甲素和130μg/mL秦皮乙素、408μg/mL秦皮甲素和260μg/mL秦皮乙素的混合对照品溶液；
所述供试品溶液的制备方法为：按上述步骤二中的提取工艺制备。
所述阴性对照溶液的制备方法为：取阴性样品粉末1.875g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，密塞，称定重量，超声提取40min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
所述对照药材溶液的制备方法为：取秦皮对照药材粉末1.875g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，密塞，称定重量，超声提取40min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
步骤四：方法学考察：包括专属性试验、线性关系的考察、精密度试验和准确度试验；
所述专属性试验具体为分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液、对照药材溶液适量，按步骤一中的色谱条件测定；
所述线性关系的考察具体为取上述系列浓度的对照品溶液，按步骤一中的色谱条件测定，记录峰面积；
所述精密度试验具体为选取秦皮甲素和秦皮乙素浓度分别为102μg/mL、65μg/mL混合对照品溶液，重复进样6次，记录峰面积并计算相对标准偏差RSD，进行日内精密度测定；
所述准确度试验具体为取同批次的白头翁散供试品共9份，每份约0.5g，分为3组，分别加入一定量的秦皮甲素和秦皮乙素对照品，按步骤一中的色谱条件测定和步骤二中的提取方法处理，记录色谱图，按以下公式计算秦皮甲素和秦皮乙素的平均回收率和RSD：
回收率％＝(C－B)/A×100％；
C为实际测得量；B为已知样品含量；A为对照品加入量；
步骤五：样品测定：包括自制白头翁散样品含量测定和市售白头翁散含量测定；
所述自制白头翁散样品含量测定具体为精密称取3批自制白头翁散各1.875g，按步骤三中的阴性对照溶液的制备方法和步骤一中的色谱条件处理，记录峰面积，并用外标法计算样品含量；
所述市售白头翁散含量测定具体为取8批市售白头翁散样品各精密称取1.875g，按步骤三中的对照药材溶液的制备方法处理，按步骤一中的色谱条件处理，并用外标法计算样品含量。
优选的，步骤二中所述提取工艺的优化方法具体为：进行超声提取和加热回流提取的比较，以提取率更高的超声提取法取代兽药典中规定的加热回流法；提取时间进行20min、40min、60min的对比(结果见表2)，鉴于40min、60min提取的含量较为相近，且都高于20min，将选择时间由兽药典中规定的60min缩短为40min。
优选的，所述阴性样品粉末为自制的无秦皮药材。
优选的，步骤四中的记录峰面积的具体方法为以对照品溶液浓度C为横坐标，峰面积A为纵坐标，进行线性回归。
优选的，步骤四中的记录峰面积并计算相对标准偏差RSD，进行日内精密度测定的具体方法为：选取秦皮甲素25.5μg/mL、秦皮乙素16.25μg/mL，秦皮甲素102μg/mL、秦皮乙素65μg/mL，秦皮甲素408μg/mL、秦皮乙素260μg/mL，3个低中高不同浓度的混合对照品溶液，每个浓度每天进样2次，共进样3天，记录峰面积并计算RSD，进行日间精密度测定。
与现有技术相比，发明的有益效果是：该白头翁散中秦皮甲素、秦皮乙素HPLC定量分析方法，能够实现对白头翁散中的有效成分秦皮甲素、秦皮乙素进行精确定量，以期提升白头翁散的质量标准。
附图说明
图1为实施例中的混合对照品的色谱图；
图2为实施例中的供试品的色谱图；
图3为实施例中的阴性样品的色谱图；
图4为实施例中的秦皮对照药材的色谱图；
图5为实施例中秦皮甲素的标准曲线。
图6为实施例中秦皮乙素的标准曲线。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
发明提供一种技术方案：一种白头翁散中秦皮甲素、秦皮乙素HPLC定量分析方法，具体包括以下步骤：
步骤一：色谱条件的确立：以《中国兽药典》收载的秦皮【含量测定】项下的色谱条件为参考，将流动相乙腈-0.1％磷酸水溶液的比例由8:92改为12:88，从而缩短了秦皮甲素、秦皮乙素的保留时间，其峰形也得到了进一步改善。另一方面因为提高了乙腈的比例，从而降低了流动相极性，减少了对色谱柱的伤害。最终确定色谱条件为：色谱柱：WatersSymmetry C18柱；流动相：乙腈-0.1％磷酸水溶液12:88；流速：1.0mL/min；波长：334nm；柱温：30℃；进样量：10μL；该色谱条件下理论塔板数按秦皮乙素峰计算不低于5000；
步骤二：提取工艺：以《中国兽药典》(2015年版二部)收载的秦皮【供试品溶液的制备】项下的提取工艺为参考，进行了超声提取和加热回流提取的比较，结果见表1所示的不同提取方法的秦皮甲素、秦皮乙素含量：
Figure BDA0002301663880000051
表1
以提取率更高的超声提取法取代了兽药典中规定的加热回流法；提取时间进行了20min、40min、60min的对比，结果见表2不同提取时间的秦皮甲素、秦皮乙素含量：
Figure BDA0002301663880000052
表2
鉴于40min、60min提取的含量较为相近，且都高于20min，将选择时间由兽药典中规定的60min缩短为40min，从而提高了分析效率。最终确定的提取工艺为：精密称取白头翁散1.875g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，密塞，称定重量，超声提取40min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
步骤三：溶液的配制：包括对照品贮备溶液、对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液以及对照药材溶液的制备：
所述对照品贮备溶液的制备方法为：精密称取秦皮甲素、秦皮乙素对照品适量，加甲醇使成每1mL含秦皮甲素408μg、秦皮乙素260μg的混合溶液，作为对照品贮备溶液；
所述对照品溶液的制备方法为：精密量取对照品贮备溶液5mL，加甲醇逐级稀释，得一系列浓度分别为25.5μg/mL秦皮甲素和16.25μg/mL秦皮乙素、51μg/mL秦皮甲素和32.5μg/mL秦皮乙素、102μg/mL秦皮甲素和65μg/mL秦皮乙素、204μg/mL秦皮甲素和130μg/mL秦皮乙素、408μg/mL秦皮甲素和260μg/mL秦皮乙素的混合对照品溶液；
所述供试品溶液的制备方法为：按上述步骤二中的提取工艺制备。
所述阴性对照溶液的制备方法为：取阴性样品粉末1.875g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，密塞，称定重量，超声提取40min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
所述对照药材溶液的制备方法为：取秦皮对照药材粉末1.875g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，密塞，称定重量，超声提取40min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
步骤四：方法学考察：包括专属性试验、线性关系的考察、精密度试验和准确度试验；
所述专属性试验具体为分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液、对照药材溶液适量，按步骤一中的色谱条件测定，结果见图1-图4，其中的图1为混合对照品的色谱图且1为秦皮甲素，2为秦皮乙素；图2为供试品的色谱图且1为秦皮甲素，2为秦皮乙素；图3为阴性样品的色谱图；图4为秦皮对照药材的色谱图且1为秦皮甲素，2为秦皮乙素。由图1、图4可知获得秦皮甲素、秦皮乙素的保留时间为5.883min、11.282min；在此保留时间处，图2显示供试品有秦皮甲素、秦皮乙素相对应的色谱峰，分离度分别为：秦皮甲素4.4，秦皮乙素2.0，均完全分离；图3的阴性对照样品在秦皮甲素、秦皮乙素的相应保留时间处则无色谱峰；结果表明，白头翁散供试品中的其他成分未对秦皮甲素、秦皮乙素的测定产生干扰。
所述线性关系的考察具体为取上述系列浓度的对照品溶液，按步骤一中的色谱条件测定，记录峰面积；以对照品溶液浓度(C)为横坐标，峰面积(A)为纵坐标，进行线性回归，见图5与图6，得回归方程A秦皮甲素＝19700C+116000(R＝0.99989，线性范围：25.5μg/mL～408μg/mL；A秦皮乙素＝34000C+51800(R＝0.99996，线性范围：16.25μg/mL～260μg/mL。
所述精密度试验具体为选取秦皮甲素和秦皮乙素浓度分别为102μg/mL、65μg/mL混合对照品溶液，重复进样6次，记录峰面积并计算相对标准偏差RSD，进行日内精密度测定；选取低(秦皮甲素25.5μg/mL、秦皮乙素16.25μg/mL)、中(秦皮甲素102μg/mL、秦皮乙素65μg/mL)、高(秦皮甲素408μg/mL、秦皮乙素260μg/mL)3个不同浓度的混合对照品溶液，每个浓度每天进样2次，共进样3天，记录峰面积并计算RSD，进行日间精密度测定。结果：秦皮甲素和秦皮乙素的日内精密度均小于0.30％，日间精密度均小于2％，符合要求。
所述准确度试验具体为取同批次的白头翁散供试品共9份，每份约0.5g，分为3组，分别加入一定量的秦皮甲素和秦皮乙素对照品，按步骤一中的色谱条件测定和步骤二中的提取方法处理，记录色谱图，按以下公式计算秦皮甲素和秦皮乙素的平均回收率和RSD：结果见表3。
回收率％＝(C－B)/A×100％
C为实际测得量；B为已知样品含量；A为对照品加入量；
Figure BDA0002301663880000081
表3
由表3可知，秦皮甲素平均回收率为98.3％(RSD1.80％)；秦皮乙素平均回收率为102.8％(RSD2.42％)。
步骤五：样品测定：包括自制白头翁散样品含量测定和市售白头翁散含量测定；
所述自制白头翁散样品含量测定具体为精密称取3批自制白头翁散各1.875g，按步骤三中的阴性对照溶液的制备方法和步骤一中的色谱条件处理，记录峰面积，并用外标法计算样品含量，结果见如下表4：
Figure BDA0002301663880000082
表4
3批自制白头翁散中秦皮甲素含量分别为3874.870μg·g-1、3882.096μg·g-1、3994.053μg·g-1；秦皮乙素含量分别为310.994μg·g-1、315.998μg·g-1、321.263μg·g-1，验证了本试验建立的白头翁散中秦皮甲素和秦皮乙素的提取工艺和HPLC含量测定方法的可靠性。
所述市售白头翁散含量测定具体为取8批市售白头翁散样品的来源见如下表8：
Figure BDA0002301663880000091
表8
各精密称取1.875g，按步骤三中的对照药材溶液的制备方法处理，按步骤一中的色谱条件处理，并用外标法计算样品含量。测定结果见如下表6-7。
市售样品中秦皮甲素的含量(n＝2)
Figure BDA0002301663880000101
表6
市售样品中秦皮乙素的含量(n＝2)
Figure BDA0002301663880000102
表7
由表6、7可见，8批市售样品中秦皮甲素和秦皮乙素的含量参差不齐，除批次Ⅲ样品秦皮甲素的含量、批次Ⅱ样品秦皮乙素的含量高于自制样品外，其他批次市售样品中秦皮甲素和秦皮乙素的含量均明显低于自制样品，尤其是批次Ⅵ和Ⅷ样品含量未检出，且秦皮甲素和秦皮乙素的含量高低与市售样品的价格没有直接关系。
该白头翁散中秦皮甲素、秦皮乙素HPLC定量分析方法，能够实现对白头翁散中的有效成分秦皮甲素、秦皮乙素进行精确定量，以期提升白头翁散的质量标准。
显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。

Claims (5)

1.一种白头翁散中秦皮甲素、秦皮乙素HPLC定量分析方法，其特征在于：具体包括以下步骤：
步骤一：色谱条件的确立：将流动相乙腈-0.1％磷酸水溶液的比例由8:92改为12:88，确定色谱条件为：色谱柱：Waters Symmetry C18柱；流动相：乙腈-0.1％磷酸水溶液12:88；流速：1.0mL/min；波长：334nm；柱温：30℃；进样量：10μL；该色谱条件下理论塔板数按秦皮乙素峰计算不低于5000；
步骤二：提取工艺：精密称取白头翁散1.875g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，密塞，称定重量，超声提取40min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
步骤三：溶液的配制：包括对照品贮备溶液、对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液以及对照药材溶液的制备：
所述对照品贮备溶液的制备方法为：精密称取秦皮甲素、秦皮乙素对照品适量，加甲醇使成每1mL含秦皮甲素408μg、秦皮乙素260μg的混合溶液，作为对照品贮备溶液；
所述对照品溶液的制备方法为：精密量取对照品贮备溶液5mL，加甲醇逐级稀释，得一系列浓度分别为25.5μg/mL秦皮甲素和16.25μg/mL秦皮乙素、51μg/mL秦皮甲素和32.5μg/mL秦皮乙素、102μg/mL秦皮甲素和65μg/mL秦皮乙素、204μg/mL秦皮甲素和130μg/mL秦皮乙素、408μg/mL秦皮甲素和260μg/mL秦皮乙素的混合对照品溶液；
所述供试品溶液的制备方法为：按上述步骤二中的提取工艺制备。
所述阴性对照溶液的制备方法为：取阴性样品粉末1.875g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，密塞，称定重量，超声提取40min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
所述对照药材溶液的制备方法为：取秦皮对照药材粉末1.875g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，密塞，称定重量，超声提取40min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
步骤四：方法学考察：包括专属性试验、线性关系的考察、精密度试验和准确度试验；
所述专属性试验具体为分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液、对照药材溶液适量，按步骤一中的色谱条件测定；
所述线性关系的考察具体为取上述系列浓度的对照品溶液，按步骤一中的色谱条件测定，记录峰面积；
所述精密度试验具体为选取秦皮甲素和秦皮乙素浓度分别为102μg/mL、65μg/mL混合对照品溶液，重复进样6次，记录峰面积并计算相对标准偏差RSD，进行日内精密度测定；
所述准确度试验具体为取同批次的白头翁散供试品共9份，每份约0.5g，分为3组，分别加入一定量的秦皮甲素和秦皮乙素对照品，按步骤一中的色谱条件测定和步骤二中的提取方法处理，记录色谱图，按以下公式计算秦皮甲素和秦皮乙素的平均回收率和RSD：
回收率％＝(C－B)/A×100％；
C为实际测得量；B为已知样品含量；A为对照品加入量；
步骤五：样品测定：包括自制白头翁散样品含量测定和市售白头翁散含量测定；
所述自制白头翁散样品含量测定具体为精密称取3批自制白头翁散各1.875g，按步骤三中的阴性对照溶液的制备方法和步骤一中的色谱条件处理，记录峰面积，并用外标法计算样品含量；
所述市售白头翁散含量测定具体为取8批市售白头翁散样品各精密称取1.875g，按步骤三中的对照药材溶液的制备方法处理，按步骤一中的色谱条件处理，并用外标法计算样品含量。
2.如权利要求1所述的一种白头翁散中秦皮甲素、秦皮乙素HPLC定量分析方法，其特征在于：步骤二中所述提取工艺的优化方法具体为：进行超声提取和加热回流提取的比较，以提取率更高的超声提取法取代兽药典中规定的加热回流法；提取时间进行20min、40min、60min的对比(结果见表2)，鉴于40min、60min提取的含量较为相近，且都高于20min，将选择时间由兽药典中规定的60min缩短为40min。
3.如权利要求1所述的一种白头翁散中秦皮甲素、秦皮乙素HPLC定量分析方法，其特征在于：所述阴性样品粉末为自制的无秦皮药材。
4.如权利要求1所述的一种白头翁散中秦皮甲素、秦皮乙素HPLC定量分析方法，其特征在于：步骤四中的记录峰面积的具体方法为以对照品溶液浓度C为横坐标，峰面积A为纵坐标，进行线性回归。
5.如权利要求1所述的一种白头翁散中秦皮甲素、秦皮乙素HPLC定量分析方法，其特征在于：步骤四中的记录峰面积并计算相对标准偏差RSD，进行日内精密度测定的具体方法为：选取秦皮甲素25.5μg/mL、秦皮乙素16.25μg/mL，秦皮甲素102μg/mL、秦皮乙素65μg/mL，秦皮甲素408μg/mL、秦皮乙素260μg/mL，3个低中高不同浓度的混合对照品溶液，每个浓度每天进样2次，共进样3天，记录峰面积并计算RSD，进行日间精密度测定。
CN201911224122.8A 2019-12-04 2019-12-04 一种白头翁散中秦皮甲素、秦皮乙素hplc定量分析方法 Pending CN110907579A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201911224122.8A CN110907579A (zh) 2019-12-04 2019-12-04 一种白头翁散中秦皮甲素、秦皮乙素hplc定量分析方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201911224122.8A CN110907579A (zh) 2019-12-04 2019-12-04 一种白头翁散中秦皮甲素、秦皮乙素hplc定量分析方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN110907579A true CN110907579A (zh) 2020-03-24

Family

ID=69822025

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201911224122.8A Pending CN110907579A (zh) 2019-12-04 2019-12-04 一种白头翁散中秦皮甲素、秦皮乙素hplc定量分析方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110907579A (zh)

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006026713A2 (en) * 2004-08-31 2006-03-09 Tracie Martyn International, Llc Topical benfotiamine and pyridoxamine compositions
CN102608252A (zh) * 2012-03-29 2012-07-25 山东阿如拉药物研究开发有限公司 一种中药组合物秦皮接骨胶囊及其制剂的质量检测方法
CN103389343A (zh) * 2012-05-09 2013-11-13 滇虹药业集团股份有限公司 白头翁汤颗粒可变波长指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱
CN107441086A (zh) * 2017-07-27 2017-12-08 哈尔滨珍宝制药有限公司 一种药物组合物及其制备方法和用途
CN109001336A (zh) * 2018-09-20 2018-12-14 哈尔滨珍宝制药有限公司 秦皮配方颗粒特征图谱、其建立方法以及质量检测方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006026713A2 (en) * 2004-08-31 2006-03-09 Tracie Martyn International, Llc Topical benfotiamine and pyridoxamine compositions
CN102608252A (zh) * 2012-03-29 2012-07-25 山东阿如拉药物研究开发有限公司 一种中药组合物秦皮接骨胶囊及其制剂的质量检测方法
CN103389343A (zh) * 2012-05-09 2013-11-13 滇虹药业集团股份有限公司 白头翁汤颗粒可变波长指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱
CN107441086A (zh) * 2017-07-27 2017-12-08 哈尔滨珍宝制药有限公司 一种药物组合物及其制备方法和用途
CN109001336A (zh) * 2018-09-20 2018-12-14 哈尔滨珍宝制药有限公司 秦皮配方颗粒特征图谱、其建立方法以及质量检测方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
何燕飞 等: "RP-HPLC 法同时测定白头翁汤中 8 种成分", 《中成药》 *
周虹 等: "藏骨宝胶囊的质量标准研究", 《西北药学杂志》 *
庄晓洪等: "HPLC测定秦皮胶囊的主要成分 ", 《华西药学杂志》 *
赵碧清 等: "HPLC 法测定九香止泻片中秦皮甲素和秦皮乙素的含量", 《中国药房》 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN105738546B (zh) 毛郁金药材指纹图谱的建立方法及其指纹图谱
CN102928523B (zh) 一种野菊花指纹图谱的测定方法和野菊花的检测方法
CN103926351A (zh) 生血宝制剂质量检测方法及其标准指纹图谱的构建方法
CN104764820A (zh) 测定半夏糖浆中活性成分盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱含量的方法
CN100437112C (zh) 一种治疗中老年眼部疾病中药制剂的质量检测方法
CN101028460B (zh) 一种中药制剂金嗓清音丸的质量检测方法
CN104316613B (zh) 一种疏风解毒胶囊指纹图谱的建立方法
CN110243988B (zh) 壮药白花九里明hplc指纹图谱的建立方法
CN112748201B (zh) 葛根八宝茶指纹图谱的检测方法
CN104007198B (zh) 一种灵芝皇制剂hplc标准指纹图谱及其构建方法和应用
CN110806457B (zh) 四君甘露饮指纹图谱的检测方法
CN103575821A (zh) 一种糖敏灵制剂中14种化学成分的检测方法
CN105675761A (zh) 同时测定小檗皮中四种生物碱成分含量的hplc方法
CN110907579A (zh) 一种白头翁散中秦皮甲素、秦皮乙素hplc定量分析方法
CN102706984A (zh) 采用高效液相测定清肺消炎丸中盐酸麻黄碱含量的方法
CN104535513A (zh) 一种九节茶提取物及其制剂的检测方法
CN103575823B (zh) 一种糖敏灵制剂中8种化学成分的检测方法
Chen et al. Simultaneous determination of 5 phenolic acids in fried Fructus xanthii from different production sites and its dispensing granules by using ultra-pressure liquid chromatography
CN104155399A (zh) 一种四制香附饮片的质量控制方法
CN100432670C (zh) 一种中药制剂金嗓开音丸的质量检测方法
CN114113425A (zh) 利用高效液相色谱鉴别芩连制剂中关黄柏替代黄柏入药的方法
CN104165959B (zh) 一种治疗小儿发热药物的检测方法
CN100571755C (zh) 一种感冒清热制剂的检测方法
CN103837627A (zh) 一种落花生茎叶药材的指纹图谱建立方法
CN110118841A (zh) 一种肝胆双清口服液的hplc特征图谱的构建方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20200324