CN110903191A

CN110903191A - 一种金银花中提取绿原酸的方法

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Publication number: CN110903191A
Application number: CN201811081961.4A
Authority: CN
Inventors: 梁鑫淼; 叶贤龙; 郭志谋; 王超然; 于伟; 唐圣平; 张华蓉
Original assignee: Taizhou Medicine City Guo Ke Bio Pharmaceutical Science And Technology Co Ltd
Current assignee: Taizhou Medicine City Guo Ke Bio Pharmaceutical Science And Technology Co Ltd
Priority date: 2018-09-17
Filing date: 2018-09-17
Publication date: 2020-03-24

Abstract

本发明提出了一种金银花中提取绿原酸的方法，包括以下步骤：制备粗提干燥粉末：将金银花预处理，加水煎煮，滤取药液，药渣再加水煎煮，滤取药液，弃去药渣；合并两次药液，进行浓缩干燥，即得粗提干燥粉末；精纯，制备绿原酸粉末：溶解粗提干燥粉后，采用滤膜去除颗粒物，之后采用液相色谱技术进行纯化，收集柱洗脱液，得精制绿原酸组分；将其浓缩干燥，获得精制绿原酸粉末。本发明提高了绿原酸的纯度，根据需要，可使绿原酸产品纯度的达50％～98％。本发明从金银花中提取绿原酸的方法工艺操作简单、效率高和适合大规模生产，制备得到的绿原酸成品纯度高，为大量制备高纯度的绿原酸产品提供了一种新方法。

Description

一种金银花中提取绿原酸的方法

技术领域

本发明属于中草药功能性成分的提取技术领域，尤其涉及一种金银花中提取绿原酸的方法。

背景技术

金银花(Lonicera japonica Thunb.)为忍冬科植物的花蕾，药用历史悠久，是中医临床用药之一，具有清热解毒、凉散风热的功能。金银花的药用价值及用途很广泛，社会需求量很大，到目前为止，约有80％的清热解毒杀菌类的中药处方中含有金银花。几千年传统经验及近代药理实验和临床应用都证明金银花对于多种病菌有较强的抗菌作用和极好的治疗效果。金银花中主要含有绿原酸、木犀草素苷等药理活性成分及30多种人体所必需的元素，为清热解毒之常用药。

绿原酸(Chlorogenic acid)，又名氯原酸、咖啡鞣酸，是由咖啡酸(Caffeic acid)和奎尼酸(Quinic acid)生成的缩酚酸。绿原酸既可作为食品中的添加剂、植物生长激素及一些高级化妆品的添加剂等，又是食品、药品、化妆品等工业的重要原料。高纯度的绿原酸价格昂贵，是目前国际公认的“植物黄金”，绿原酸的提取市场前景广阔、发展潜力巨大。因此，对金银花中绿原酸的提取方法进行深入研究具有重要意义。

国内从金银花中提取绿原酸的方法一般有：水提石灰乳法、水提法、水提醇沉淀法、稀醇提取法、石硫法等多种方法，采用絮凝法从从金银花中提取绿原酸的研究和应用也有文献报道；对绿原酸的纯化方法一般有：乙酸乙酯法、正丁醇法、石—硫法和大孔树脂等方法，如：发明名称《金银花中绿原酸的提取纯化方法》，采用稀乙醇对金银花进行二次回流提取，提取物浓缩后再用絮凝法初步除杂纯化，最后采用大孔树脂法或酸性乙酸乙酯萃取法纯化精制。又如：发明名称《大孔树脂吸附提取高含量绿原酸的工艺方法》，由含绿原酸的水提取液的提取、及大孔树脂吸附高含量绿原酸成品的分离工艺所组成。然而这些方法存在绿原酸制备效率低、纯度低、工业化生产应用受限的问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种金银花中提取绿原酸的方法，以解决现有技术中绿原酸的纯度低、成品率低、工业生产应用受限的问题。为实现上述目的，本发明所采用的技术方案为：

一种金银花中提取绿原酸的方法，包括以下步骤：

步骤1，制备粗提干燥粉末：将金银花预处理，加水煎煮，滤取药液，药渣再加水煎煮，滤取药液，弃去药渣；合并两次药液，进行浓缩干燥，即得粗提干燥粉末；

步骤2，精纯，制备绿原酸粉末：溶解粗提干燥粉后，采用滤膜去除颗粒物，之后采用液相色谱技术进行纯化，收集柱洗脱液，得精制绿原酸组分；将其浓缩干燥，获得精制绿原酸粉末。

优选地，在步骤1和步骤2中，所述水为纯化水、蒸馏水或注射用水。

优选地，在步骤1和步骤2中，所述浓缩干燥方式为微波干燥、冷冻干燥、真空干燥或喷雾干燥。

优选地，在步骤2中，所述液相色谱技术为一步反相色谱纯化或两步反相色谱纯化。

优选地，反相色谱柱的填料基质为硅胶或高分子聚合物；填料配基的碳原子数为1-30的正链烷基中的一种或多种；色谱柱内径为20mm～1600mm，色谱柱床高度为100mm～1000mm；色谱平衡液中含有有机溶剂和酸，有机溶剂包括甲醇、乙醇或乙腈，有机溶剂的含量为5％-10％，酸包括为磷酸、甲酸或乙酸，酸的浓度为0.01％-0.5％；色谱柱的载样量为固定相重量的0.01％-5.0％；色谱的上样和洗脱流速为140cm/h-350cm/h；色谱纯化洗脱绿原酸目标组分的有机溶剂浓度梯度为等度或线性。

优选地，在步骤1中，所述预处理包括洗净、干燥和粉碎。

与现有技术相比，本发明的优点为：

(1)本发明方法整个绿原酸制备过程均可以在室温下进行，减少了能源消耗的同时避免绿原酸的降解，显著提高绿原酸终产品的质量和收率。

(2)本发明方法采用的高效液相色谱分离技术，可以有效的分离绿原酸与其结构类似物等杂质，实现了绿原酸的高效纯化制备。

(3)本发明方法整个操作过程操作简单，洗脱剂和再生剂均可回收重复利用，节约溶剂，可用于大规模生产。

(4)本发明采用浓缩干燥、粉末溶解后过滤等预处理方式不但可以减小后续处理的难度，而且可以保护液相色谱材料不受颗粒等杂质的影响，延长材料的使用寿命，更适于工业化生产。

附图说明

图1为本发明实施例一的粗提干燥粉末的HPLC分析色谱图；

图2为本发明实施例一的精制绿原酸粉末的HPLC分析色谱图。

具体实施方式

下面将结合示意图对本发明的金银花中提取绿原酸的方法进行更详细的描述，其中表示了本发明的优选实施例，应该理解本领域技术人员可以修改在此描述的本发明，而仍然实现本发明的有利效果。因此，下列描述应当被理解为对于本领域技术人员的广泛知道，而并不作为对本发明的限制。

本实施例提出了一种金银花中提取绿原酸的方法，包括以下步骤：

在本实施例中，在步骤1和步骤2中，水为纯化水、蒸馏水或注射用水。

在本实施例中，在步骤1和步骤2中，浓缩干燥方式为微波干燥、冷冻干燥、真空干燥或喷雾干燥。

在本实施例中，液相色谱技术为一步反相色谱纯化或两步反相色谱纯化。

在本实施例中，反相色谱柱的填料基质为硅胶或高分子聚合物；填料配基的碳原子数为1-30的正链烷基中的一种或多种；粒径为8-100μm；孔径为

比表面积为100-500m²/g。色谱柱内径为20-1600mm，色谱柱床高度为100-1000mm；色谱平衡液中含有一定浓度的有机溶剂和酸，有机溶剂可以为甲醇、乙醇和乙腈，含量可以为5-10％，酸可以为磷酸、甲酸、乙酸，浓度为0.01-0.5％；色谱柱的载样量为固定相重量的0.01-5.0％；色谱的上样和洗脱流速可以为140-350cm/h；色谱纯化洗脱绿原酸目标组分的有机溶剂浓度梯度可以是等度和线性。

在本实施例中，在步骤1中，预处理包括洗净、干燥和粉碎。

实施例1

称取金银花500g，加水10L放入煎药机中煮(120℃)0.5h，纱布过滤，药渣加水5L再次放入煎药机中煮(120℃)0.3h，纱布过滤，合并滤液，经喷雾干燥得提取物干燥粉。

将C18反相色谱柱(填料重量300g，粒径10μm)连接到高压液相***上，设计流速40ml/min(126cm/h)，采用平衡缓冲液(A:0.1％乙酸水；B:0.1％乙酸无水甲醇；A：B＝90:10)冲洗色谱柱2BV，将平衡缓冲液溶解的15g金银花分级分离干燥粉通过上样环或***泵过色谱柱，通过线性梯度洗脱的方式(10-90％B，25min)纯化目标物，收集各馏分进行HPLC分析，合格馏分合并，即为精制液；将精制液放置于-40℃冰箱冷冻5h，后放入冻干机中，抽真空干燥直至水分全部去除，收集冻干粉末，即为精制绿原酸粉末，称重计算绿原酸纯化。

HPLC分析条件如下：(1)色谱柱填料：Unitary C18(5μm，4.6*150mm)；(2)流动相A：0.1％磷酸水，流动相B：0.1％磷酸乙腈；(3)流速：2ml/min；(4)梯度条件：0-5min 10％B相，5-15min从10-25％B相，10-15min从25-90％B相。(5)柱温：40℃；(6)检测波长：325nm；(7)进样体积：5μl。

实施例2

称取金银花500g，加水5L放入煎药机中煮(120℃)0.5h，纱布过滤，药渣加水2.5L再次放入煎药机中煮(120℃)0.3h，纱布过滤，合并滤液，经喷雾干燥得提取物干燥粉。

将C18反相色谱柱(填料重量300g，粒径10μm)连接到高压液相***上，设计流速40ml/min(126cm/h)，采用平衡缓冲液(A:0.1％乙酸水；B:0.1％乙酸无水甲醇；A：B＝72:28)冲洗色谱柱2BV，将平衡缓冲液溶解的15g金银花分级分离干燥粉通过上样环或***泵过色谱柱，通过等度洗脱的方式(28％B，45min)纯化目标物，收集各馏分进行HPLC分析，合格馏分合并，即为精制液；将精制液放置于-40℃冰箱冷冻5h，后放入冻干机中，抽真空干燥直至水分全部去除，收集冻干粉末，即为精制绿原酸粉末，称重计算绿原酸纯化。HPLC分析条件见实施例1。

实施例3

称取金银花500g，加水10L放入煎药机中煮(120℃)1h，纱布过滤，药渣加水5L再次放入煎药机中煮(120℃)0.5h，纱布过滤，合并滤液，经喷雾干燥得提取物干燥粉。

将C18反相色谱柱(填料重量300g，粒径60μm)连接到高压液相***上，设计流速60ml/min(190cm/h)，采用平衡缓冲液1(A:0.1％乙酸水；B:0.1％乙酸无水甲醇；A：B＝90:10)冲洗色谱柱2BV，将平衡缓冲液1溶解的30g金银花分级分离干燥粉通过上样环或***泵过色谱柱，淋洗完毕后，通过35％B洗脱目标物2BV，70％B再生色谱柱，目标组分减压干燥，得捕获干燥粉。

将平衡缓冲液A溶解的捕获干燥粉通过C18反相色谱柱(填料重量300g，粒径10μm)进一步精细纯化，设计流速40ml/min(126cm/h)，采用平衡缓冲液2(A:0.1％乙酸水；B:0.1％乙酸无水甲醇；A：B＝72:28)冲洗色谱柱2BV，将平衡缓冲液A溶解的15g金银花分级分离干燥粉通过上样环或***泵过色谱柱，通过等度洗脱的方式(28％B，45min)纯化目标物，收集各馏分HPLC分析，合格馏分合并，即为绿原酸精制液；将精制液放置于离浓缩仪中浓缩干燥，收集干燥粉末，即为精制绿原酸粉末，称重计算绿原酸纯化。HPLC分析条件见实施例1。

实施例4

将C18反相色谱柱(填料重量300g，粒径60μm)连接到高压液相***上，设计流速60ml/min(190cm/h)，采用平衡缓冲液1(A:0.1％乙酸水；B:0.1％乙酸无水甲醇；A：B＝90:10)冲洗色谱柱2BV，将平衡缓冲液1溶解的30g金银花分级分离干燥粉通过上样环或***泵过色谱柱，淋洗完毕后，通过30％B洗脱目标物2BV，80％B再生色谱柱，目标组分减压干燥，得捕获干燥粉。

将平衡缓冲液A溶解的捕获干燥粉通过C18反相色谱柱(填料重量300g，粒径10μm)进一步精细纯化，设计流速40ml/min(126cm/h)，采用平衡缓冲液2(A:0.1％乙酸水；B:0.1％乙酸无水甲醇；A：B＝74:26)冲洗色谱柱2BV，将平衡缓冲液A溶解的15g金银花分级分离干燥粉通过上样环或***泵过色谱柱，通过等度洗脱的方式(28％B，60min)纯化目标物，收集各馏分HPLC分析，合格馏分合并，即为绿原酸精制液；将精制液放置于离浓缩仪中浓缩干燥，收集干燥粉末，即为精制绿原酸粉末，称重计算绿原酸纯化。HPLC分析条件见实施例1。

从外观上看，与现有的金银花提取物相比，本发明的金银花精制干燥粉粉末的色泽均匀、表面光洁、质地细腻。HPLC分析色谱图的分析结果(如图1、2)表明，纯化前后样品的分析谱图中目标峰没有显著变化，根据总体积、积分峰面积及重量计算得知，绿原酸终产品收率达80％以上，纯度可达85％以上。综上结果充分表明了采用本发明方法制备绿原酸精制物具有高收率和高纯度的优势。

综上，本发明通过膜分离和液相色谱技术提取金银花中的绿原酸，可有效去除脂类、色素、重金属、农残等杂质，绿原酸损失少，可显著提高绿原酸的纯度及原料的利用率。由于该方法能够提供更有利于工业生产的制备条件，可确保工艺的稳定性和安全性，适合大规模生产，进而可获得高品质的绿原酸产品；同时本发明避免了有机溶剂的大量使用，进而减少工业生产污染。

上述仅为本发明的优选实施例而已，并不对本发明起到任何限制作用。任何所属技术领域的技术人员，在不脱离本发明的技术方案的范围内，对本发明揭露的技术方案和技术内容做任何形式的等同替换或修改等变动，均属未脱离本发明的技术方案的内容，仍属于本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种金银花中提取绿原酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的金银花中提取绿原酸的方法，其特征在于，在步骤1和步骤2中，所述水为纯化水、蒸馏水或注射用水。

3.根据权利要求1所述的金银花中提取绿原酸的方法，其特征在于，在步骤1和步骤2中，所述浓缩干燥方式为微波干燥、冷冻干燥、真空干燥或喷雾干燥。

4.根据权利要求1所述的金银花中提取绿原酸的方法，其特征在于，在步骤2中，所述液相色谱技术为一步反相色谱纯化或两步反相色谱纯化。

5.根据权利要求4所述的金银花中提取绿原酸的方法，其特征在于，反相色谱柱的填料基质为硅胶或高分子聚合物；填料配基的碳原子数为1-30的正链烷基中的一种或多种；色谱柱内径为20mm～1600mm，色谱柱床高度为100mm～1000mm；色谱平衡液中含有有机溶剂和酸，有机溶剂包括甲醇、乙醇或乙腈，有机溶剂的含量5％-10％，酸包括为磷酸、甲酸或乙酸，酸的浓度为0.01％-0.5％；色谱柱的载样量为固定相重量的0.01％-5.0％；色谱的上样和洗脱流速为140cm/h-350cm/h；色谱纯化洗脱绿原酸目标组分的有机溶剂浓度梯度为等度或线性。

6.根据权利要求1所述的金银花中提取绿原酸的方法，其特征在于，在步骤1中，所述预处理包括洗净、干燥和粉碎。