CN110893197B - 用于治疗痛风的蔓三七提取物及其制备方法 - Google Patents

用于治疗痛风的蔓三七提取物及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开一种用于治疗痛风的蔓三七提取物及其制备方法，蔓三七提取物是由蔓三七根茎叶的提取物混合而成，其包括以下步骤：(1)将蔓三七根茎叶分开采集，经烘干、粉碎、过筛等步骤得到蔓三七根、茎和叶粉末；(2)蔓三七根茎叶粉末分别经溶剂提取、醇沉、萃取以及柱色谱纯化得到蔓三七根茎叶提取物；(3)将蔓三七根茎叶提取物按照1:1:2‑1:1:3的方式混合、摇匀制备蔓三七提取物，其中绿原酸含量不得低于40％，异绿原酸A、B和C的含量不得低于3％，脑苷脂成分不得低于0.15％。本发明产出来的蔓三七提取物对于高尿酸血症以及急性痛风性关节炎具有良好的预防和治疗作用，具有显著的社会和经济效益。

Description

用于治疗痛风的蔓三七提取物及其制备方法
技术领域
本发明属于植物有效活性成分提取与应用技术领域，尤其是涉及一种用于治疗痛风的蔓三七提取物及其制备方法。
背景技术
痛风，一种由尿酸的代谢紊乱引起的痛苦疾病，已经折磨了人类很久。一旦尿酸的产生和***平衡被打破，血液尿酸水平将显著升高，尿酸水平升高将导致尿酸盐晶体在关节和肾脏中形成，直接导致痛风性关节炎和尿酸肾结石。目前，痛风已由既往的少见病发展为现在的常见病,同人们饮食习惯、生活方式改变密切相关。痛风多见于中年男性，痛风发生有年轻化趋势。痛风的自然病程可分为四期，即无症状高尿酸血症期、急性期、间歇期、慢性期。长期存在的痛风还会累及人体其它组织器官，造成不同程度的并发症，如高血压，心血管疾病，糖尿病，肝肾损伤等。
在治疗上，西医药物多采用秋水仙碱止痛，别嘌呤醇抑制尿酸生成，丙磺舒增加尿酸***。西药服用过程中产生多种副作用，包括恶心、呕吐、腹泻等胃肠道反应，降低白细胞，损害肝肾功能等。治疗患者的同时也损害着患者的身体。因此，寻求具有毒性弱、副作用小且具有优良的治疗效果的天然药物，对于研究者而言急为迫切。
蔓三七学名为“平卧菊三七(Gynura procumbens(Lour.)Merr.)”为菊科，三七属植物，又蛇接骨、续命草、神仙草，味辛、微苦、性凉，为多年生草本药食两用植物，广泛分布在中国、马来西亚、泰国、印度尼西亚、韩国和菲律宾等国家。平卧菊三七具有广泛的药理作用，2009年上半年，中国疾病预防控制中心、国家食品质量监督检验中心、中国食品发酵工业研究院等有关单位完成了平卧菊三七毒理学检验、卫生学检验和多种成分的检验，结论是：无毒、无致畸影响；其有效成份具有通经活络，消炎止咳，散淤消肿，活血生肌，治疗跌打损伤，支气管肺炎、肺结核等功效；能延缓衰老、激活免疫细胞、改善机体免疫功能、提高人体免疫力，增强人体的新陈代谢并对记忆障碍有一定改善作用；具有降血压、降血脂、降血糖、抗氧化、抗溃疡和预防慢性肾病、抑制乙型肝炎的显著效果；对预防和治疗心脑血管疾病、糖尿病等有一定的疗效；还具有抗病毒、抗菌活性、抑制骨髓癌和志贺样毒素细胞的活性。另一方面，平卧菊三七是一种药食兼可的独特植物，具有极好的营养价值，因此，广泛利用于食品医药工业、日用化工工业等领域，是一种极具潜力和高经济价值的药食两用植物。
发明内容
本发明的目的提供用于治疗痛风的蔓三七提取物及其制备方法，其利用溶剂提取、醇沉、溶剂萃取以及柱色谱分离等方法从蔓三七根茎叶中提取活性成分，并考察其在痛风中的应用。
为实现上述发明目的，本发明采用如下技术方案：
一种用于治疗痛风的蔓三七提取物，分别以蔓三七根、茎、叶为原材料，分别提取蔓三七根提取物、蔓三七茎提取物、蔓三七叶提取物，然后将蔓三七根提取物、蔓三七茎提取物、蔓三七叶提取物按1:1:2-1:1:3的比例混合得到蔓三七提取物。
进一步优选，所述蔓三七提取物中中绿原酸含量不得低于40％，异绿原酸A、B和C的含量不得低于3％，脑苷脂成分不得低于0.15％。
一种用于治疗痛风的蔓三七提取物制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1)：分别采集蔓三七根、茎、叶为原材料，粉碎后分别采用乙醇水溶液为提取溶剂，提取温度为常温，超声提取，过滤，滤液经减压浓缩至无醇味；
步骤2)：向步骤1)所得溶液中分别加入乙醇水溶液，进行醇沉，离心收集上清液，减压浓缩至无醇味，分别得到蔓三七根、茎、叶提取液；
步骤3)：用有机溶剂对蔓三七根提取液进行溶剂萃取，萃取三次，合并萃取液减压浓缩后得到蔓三七根提取物；用有机溶剂对蔓三七茎提取液进行溶剂萃取，萃取三次，合并萃取液减压浓缩后得到蔓三七茎提取物；
步骤4)：所得蔓三七叶提取液进行大孔树脂柱色谱分离，收集相同流份合并、减压浓缩、以及干燥得到蔓三七叶提取物；
步骤5)：将蔓三七根、茎、叶提取物按照比例混合、摇匀制备蔓三七提取物。
进一步地，步骤5)中，将蔓三七根、茎、叶提取物按照质量比1:1:2-1:1:3混合、摇匀制备蔓三七提取物。
进一步地，所述蔓三七提取物中绿原酸含量不得低于40％，异绿原酸A、B和C的含量不得低于3％，脑苷脂成分不得低于0.15％。
进一步地，步骤1)中，提取溶剂为PH＝2-7的50-90％乙醇水溶液，液料比为1:10-20，提取温度为常温以及超声提取2小时，滤液经减压浓缩至无醇味。
进一步地，步骤2)向步骤1)所得溶液中分别加入3-6倍体积的80％-100％的乙醇水溶液，放入4℃冰箱过夜进行醇沉。
进一步地，步骤2)中向步骤1)所得溶液中分别加入4倍体积的100％的乙醇水溶液，放入4℃冰箱过夜进行醇沉，离心收集上清液，减压浓缩至无醇味，分别得到蔓三七根、茎、叶提取液。
进一步地，步骤3)中所用有机溶剂为石油醚、正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷/甲醇和石油醚/乙酸乙酯的任意一种。
进一步地，优选地，步骤3)中所用有机溶剂，所选溶剂中对于蔓三七根采用二氯甲烷/甲醇(3:1)、蔓三七茎采用乙酸乙酯最佳。
进一步地，步骤4)中所用大孔树脂为D101，先用纯水进行冲洗，然后采用30％的乙醇水溶液进行洗脱收集、减压浓缩、以及干燥得到蔓三七叶的提取物。
进一步地，步骤5)中将蔓三七根茎叶提取物按照1:1:2-1:1:3的方式混合、摇匀制备蔓三七提取物，其中绿原酸含量不得低于40％，异绿原酸A、B和C的含量不得低于3％，脑苷脂成分不得低于0.15％。
本发明还提供了所制备的蔓三七提取物在制备治疗痛风药物中的应用。
本发明还提供了所制备的蔓三七提取物在制备治疗高尿酸血症药物中的应用。
由于采用如上所述的技术方案，本发明具有如下优越性：
本发明用于治疗痛风的蔓三七提取物及其制备方法，根据蔓三七根茎叶所含的有效成分不同，对三个器官采用分别提取的方式以获得最大量的有效成分，有的放矢，解决了蔓三七根、茎、叶混合提取后，所提取的有效成分不能充分涵盖绿原酸、异绿原酸A、B、C和脑苷脂三类有效成分的问题。所制备的蔓三七提取物包含了绿原酸、异绿原酸A、B、C和脑苷脂等有效成分，解释了抗痛风的物质基础。所制备的蔓三七提取物对高尿酸血症和急性痛风性关节炎患者具有特别好的效果，用过本提取物的患者痛风基本没有再复发过，明显好于单独的蔓三七根、茎和叶提取物以及蔓三七混合提取物。
附图说明
图1是本发明的流程图。
图2是本发明蔓三七叶提取物的液相色谱图。
图3是本发明蔓三七根提取物的液相色谱图。
图4是本发明蔓三七茎提取物的液相色谱与高分辨质谱图。
图5是抗小鼠高尿酸血症实验结果图，图5A是MSQ对小鼠血尿酸含量的影响，图5B是MSQ对小鼠血清中XO活性的影响，图5C是MSQ对小鼠肝脏XO活性的影响，图5D是MSQ对高尿酸血症小鼠血清SOD活性的影响，图5E是MSQ对高尿酸血症小鼠血清GSH-Px活性的影响，图5F是MSQ对高尿酸血症小鼠血清ROS活性的影响。
图6是抗大鼠急性痛风性关节炎活性实验结果图，图6A是MSQ降低急性痛风关节炎大鼠的踝关节膨胀率，图6B是MSQ对急性痛风关节炎大鼠血清中的IL-1β含量的影响，图6C是MSQ对急性痛风关节炎大鼠血清中的IL-6含量的影响，图6D是MSQ对急性痛风关节炎大鼠血清中的IL-10含量的影响，图6E是MSQ对急性痛风关节炎大鼠血清中的MCP-1含量的影响，图6F是MSQ对急性痛风关节炎大鼠血清中的TNF-α含量的影响。
具体实施方式
参照以下实施例可以对本发明作进一步详细说明；但是，以下实施例仅仅是例证，本发明并不局限于这些实施例。
一种用于治疗痛风的蔓三七提取物制备方法，流程图1所示，包括以下步骤：
步骤1)：分别采集蔓三七根、茎、叶为原材料，粉碎后分别采用PH＝2-7的50％-100％乙醇水溶液为提取溶剂，液料比为1:5—1:20，提取温度为常温以及超声提取2小时，过滤，滤液经减压浓缩至无醇味；
步骤2)：向步骤1)所得溶液中分别加入3-6倍体积的80％-100％的乙醇水溶液，放入4℃冰箱过夜进行醇沉，离心收集上清液，减压浓缩至无醇味，分别得到蔓三七根、茎、叶提取液；
步骤3)：用有机溶剂对蔓三七根提取液进行溶剂萃取，萃取三次，合并萃取液减压浓缩后得到蔓三七根提取物；用有机溶剂对蔓三七茎提取液进行溶剂萃取，萃取三次，合并萃取液减压浓缩后得到蔓三七茎提取物；
步骤4)：所得蔓三七叶提取液进行大孔树脂柱色谱分离，收集相同流份合并、减压浓缩、以及干燥得到蔓三七叶提取物；
步骤5)：将蔓三七根、茎、叶提取物按照1:1:2-1:1:3的质量比混合、摇匀制备蔓三七提取物，其中绿原酸含量不得低于40％，异绿原酸A、B和C的含量不得低于3％，脑苷脂成分不得低于0.15％。
实施例1
取蔓三七叶100g，使用粉碎机粉碎后加入锥形瓶中，提取溶剂为PH＝2的50％乙醇水溶液，液料比为1:20，提取温度为常温以及超声提取2小时，过滤，滤液经减压浓缩至无醇味。向所得溶液中加入4倍体积的100％的乙醇溶液，放入4℃冰箱过夜进行醇沉，离心收集上清液，减压浓缩至无醇味，得到蔓三七叶提取液，蔓三七叶提取液经柱色谱纯化，所用大孔树脂为D101，先用纯水进行冲洗，然后采用30％的乙醇水溶液进行洗脱收集、减压浓缩、以及干燥得到蔓三七叶提取物5.36g，得率为5.36％，蔓三七叶提取物的液相色谱图如图2所示。
取蔓三七根100g，使用粉碎机粉碎后加入锥形瓶中，提取溶剂为PH＝7的50％乙醇水溶液，液料比为1:20，提取温度为常温以及超声提取2小时，过滤，滤液经减压浓缩至无醇味。向所得溶液中加入4倍体积的100％的乙醇溶液，放入4℃冰箱过夜进行醇沉，离心收集上清液，减压浓缩至无醇味，得到蔓三七根提取液，蔓三七根提取液经溶剂萃取，所用萃取溶剂为二氯甲烷/甲醇(3:1)，合并萃取液、减压浓缩、以及干燥得到蔓三七根提取物3.78g，得率为3.78％，蔓三七根提取物的液相色谱图如图2所示。
取蔓三七茎100g，使用粉碎机粉碎后加入锥形瓶中，提取溶剂为PH＝7的50％乙醇水溶液，液料比为1:20，提取温度为常温以及超声提取2小时，过滤，滤液经减压浓缩至无醇味。向所得溶液中加入4倍体积的100％的乙醇溶液，放入4℃冰箱过夜进行醇沉，离心收集上清液，减压浓缩至无醇味，得到蔓三七茎提取液，蔓三七茎提取液经溶剂萃取，所用萃取溶剂为乙酸乙酯，合并萃取液、减压浓缩、以及干燥得到蔓三七茎提取物2.78g，得率为2.78％，蔓三七茎提取物的液相色谱与高分辨质谱图如图3所示。
将蔓三七根、茎、叶提取物按照1:1:2的方式混合、摇匀制备蔓三七提取物，其中绿原酸含量为41.23％，异绿原酸A、B和C的含量分别为3.12％,3.25％和3.42％，脑苷脂成分为0.21％。
实施例2
取蔓三七叶100g，使用粉碎机粉碎后加入锥形瓶中，提取溶剂为PH＝3的60％乙醇水溶液，液料比为1:15，提取温度为常温以及超声提取2小时，过滤，滤液经减压浓缩至无醇味。向所得溶液中加入5倍体积的100％的乙醇溶液，放入4℃冰箱过夜进行醇沉，离心收集上清液，减压浓缩至无醇味，得到蔓三七叶提取液，蔓三七叶提取液经柱色谱纯化，所用大孔树脂为D101，先用纯水进行冲洗，然后采用30％的乙醇水溶液进行洗脱收集、减压浓缩、以及干燥得到蔓三七叶提取物5.67g，得率为5.67％。
取蔓三七根100g，使用粉碎机粉碎后加入锥形瓶中，提取溶剂为PH＝5的70％乙醇水溶液，液料比为1:20，提取温度为常温以及超声提取2小时，过滤，滤液经减压浓缩至无醇味。向所得溶液中加入4倍体积的100％的乙醇溶液，放入4℃冰箱过夜进行醇沉，离心收集上清液，减压浓缩至无醇味，得到蔓三七根提取液，蔓三七根提取液经溶剂萃取，所用萃取溶剂为二氯甲烷/甲醇(3:1)，合并萃取液、减压浓缩、以及干燥得到蔓三七根提取物3.45g，得率为3.45％。
取蔓三七茎100g，使用粉碎机粉碎后加入锥形瓶中，提取溶剂为PH＝5的80％乙醇水溶液，液料比为1:10，提取温度为常温以及超声提取2小时，过滤，滤液经减压浓缩至无醇味。向所得溶液中加入4倍体积的100％的乙醇溶液，放入4℃冰箱过夜进行醇沉，离心收集上清液，减压浓缩至无醇味，得到蔓三七茎提取液，蔓三七茎提取液经溶剂萃取，所用萃取溶剂为乙酸乙酯，合并萃取液、减压浓缩、以及干燥得到蔓三七茎提取物2.98g，得率为2.98％。
将蔓三七根、茎、叶提取物按照1:1:3的方式混合、摇匀制备蔓三七提取物，其中绿原酸含量为42.35％，异绿原酸A、B和C的含量分别为3.57％,3.42％和3.18％，脑苷脂成分为0.22％。
实施例3
取蔓三七叶100g，使用粉碎机粉碎后加入锥形瓶中，提取溶剂为PH＝4的80％乙醇水溶液，液料比为1:20，提取温度为常温以及超声提取2小时，过滤，滤液经减压浓缩至无醇味。向所得溶液中加入5倍体积的100％的乙醇溶液，放入4℃冰箱过夜进行醇沉，离心收集上清液，减压浓缩至无醇味，得到蔓三七叶提取液，蔓三七叶提取液经柱色谱纯化，所用大孔树脂为D101，先用纯水进行冲洗，然后采用30％的乙醇水溶液进行洗脱收集、减压浓缩、以及干燥得到蔓三七叶提取物5.44g，得率为5.44％。
取蔓三七根100g，使用粉碎机粉碎后加入锥形瓶中，提取溶剂为PH＝7的75％乙醇水溶液，液料比为1:10，提取温度为常温以及超声提取2小时，过滤，滤液经减压浓缩至无醇味。向所得溶液中加入4倍体积的100％的乙醇溶液，放入4℃冰箱过夜进行醇沉，离心收集上清液，减压浓缩至无醇味，得到蔓三七根提取液，蔓三七根提取液经溶剂萃取，所用萃取溶剂为二氯甲烷/甲醇(3:1)，合并萃取液、减压浓缩、以及干燥得到蔓三七根提取物4.58g，得率为4.58％。
取蔓三七茎100g，使用粉碎机粉碎后加入锥形瓶中，提取溶剂为PH＝6的80％乙醇水溶液，液料比为1:10，提取温度为常温以及超声提取2小时，过滤，滤液经减压浓缩至无醇味。向所得溶液中加入6倍体积的100％的乙醇溶液，放入4℃冰箱过夜进行醇沉，离心收集上清液，减压浓缩至无醇味，得到蔓三七茎提取液，蔓三七茎提取液经溶剂萃取，所用萃取溶剂为二氯甲烷，合并萃取液、减压浓缩、以及干燥得到蔓三七茎提取物2.98g，得率为2.98％。
将蔓三七根、茎、叶提取物按照1:1:3的方式混合、摇匀制备蔓三七提取物，其中绿原酸含量为42.33％，异绿原酸A、B和C的含量分别为3.02％,3.55％和3.62％，脑苷脂成分为0.25％。
实施例4
取蔓三七叶100g，使用粉碎机粉碎后加入锥形瓶中，提取溶剂为PH＝4的70％乙醇水溶液，液料比为1:20，提取温度为常温以及超声提取2小时，过滤，滤液经减压浓缩至无醇味。向所得溶液中加入4倍体积的100％的乙醇溶液，放入4℃冰箱过夜进行醇沉，离心收集上清液，减压浓缩至无醇味，得到蔓三七叶提取液，蔓三七叶提取液经柱色谱纯化，所用大孔树脂为D101，先用纯水进行冲洗，然后采用30％的乙醇水溶液进行洗脱收集、减压浓缩、以及干燥得到蔓三七叶提取物6.35g，得率为6.35％。
取蔓三七根100g，使用粉碎机粉碎后加入锥形瓶中，提取溶剂为PH＝5的85％乙醇水溶液，液料比为1:20，提取温度为常温以及超声提取2小时，过滤，滤液经减压浓缩至无醇味。向所得溶液中加入4倍体积的100％的乙醇溶液，放入4℃冰箱过夜进行醇沉，离心收集上清液，减压浓缩至无醇味，得到蔓三七根提取液，蔓三七根提取液经溶剂萃取，所用萃取溶剂为石油醚/乙酸乙酯(3:1)，合并萃取液、减压浓缩、以及干燥得到蔓三七根提取物4.85g，得率为4.85％。
取蔓三七茎100g，使用粉碎机粉碎后加入锥形瓶中，提取溶剂为PH＝4的90％乙醇水溶液，液料比为1:15，提取温度为常温以及超声提取2小时，过滤，滤液经减压浓缩至无醇味。向所得溶液中加入4倍体积的100％的乙醇溶液，放入4℃冰箱过夜进行醇沉，离心收集上清液，减压浓缩至无醇味，得到蔓三七茎提取液，蔓三七茎提取液经溶剂萃取，所用萃取溶剂为正丁醇，合并萃取液、减压浓缩、以及干燥得到蔓三七茎提取物4.58g，得率为4.58％。
将蔓三七根、茎、叶提取物按照1:1:2的方式混合、摇匀制备蔓三七提取物，其中绿原酸含量为43.65％，异绿原酸A、B和C的含量分别为2.98％,3.86％和3.78％，脑苷脂成分为0.28％。
对比例
将蔓三七根、茎、叶使用粉碎机一起粉碎后加入锥形瓶中，提取溶剂为PH＝4的90％乙醇水溶液，液料比为1:15，提取温度为常温以及超声提取2小时，过滤，滤液经减压浓缩至无醇味。向所得溶液中加入4倍体积的100％的乙醇溶液，放入4℃冰箱过夜进行醇沉，离心收集上清液，减压浓缩至无醇味，得到蔓三七混合提取液，蔓三七混合提取液经溶剂萃取，所用萃取溶剂为正丁醇，合并萃取液、减压浓缩、以及干燥得到蔓三七混合提取物1.45g，蔓三七混合提取物中绿原酸含量为35.45％，异绿原酸A、B和C的含量分别为0.12％,0.14％和0.03％，脑苷脂含量为未检出。
蔓三七提取物对氧嗪酸钾盐致小鼠高尿酸血症的影响
取132只雄性BALB/c小鼠，随机分为11组(每组数量n＝12/组)，包括正常对照组(CTRL)和模型对照组(MC组)按照10mL/kg的剂量以灌胃给药的方式给予生理盐水，阳性对照组接受10mL/kg的非布司他片(FBT)灌胃，浓度为0.6mg/mL。蔓三七提取物组(即MSQ给药组，实施例1和实施例2所得，蔓三七根、茎、叶提取物按照1:1:2混合所得蔓三七提取物；蔓三七根、茎、叶提取物按照1:1:3混合所得蔓三七提取物，两个比例各设低剂量组和高剂量组)用75mg(低剂量组)及300mg(高剂量组)的蔓三七提取物粉末溶于10mL生理盐水中进行灌胃给药，剂量为75mg/kg和300mg/kg，蔓三七根提取物组、蔓三七茎提取物组、蔓三七叶提取物组采用300mg(高剂量)粉末溶于10mL生理盐水中进行灌胃给药。对比例所得蔓三七混合提取物采用300mg(高剂量)粉末溶于10mL生理盐水中进行灌胃给药。除正常对照组小鼠外，实验的第1天至第8天，在口服给药前12小时，通过灌胃给药给予20g/kg酵母提取物粉末。从第6天至第8天，在灌胃给药前1小时按照300mg/kg的剂量将氧嗪酸钾(OXO)经腹腔注射到小鼠体内。根据相关方法，试剂盒检测小鼠血尿酸含量，黄嘌呤氧化酶(XO)活性，氧化应激相关因子如超氧化物歧化酶(SOD，Superoxide Dismutase)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px，Glutathione peroxidase)、活性氧簇(ROS，Reactive oxygen species)含量测定。
结果如图5，相较于正常对照组，模型对照组实验小鼠血清中UA水平增加量超过20％，具有明显的差异(P<0.05)，这说明我们已经成功构建出高尿酸血症小鼠模型。两种剂量的MSQ给药组(图5中是蔓三七根、茎、叶提取物按照1:1:2混合所得蔓三七提取物的给药组)分别使高尿酸血症小鼠血清中UA水平降低，说明，MSQ给药组具有治疗高尿酸血症的活性；对于高尿酸血症小鼠血清中XO的活性具有抑制作用；对于肝脏中的XO的活性没有影响；能够显著提高提高小鼠血清SOD和GSH-Px活性；能够使血清中ROS的水平有所下降。
蔓三七根茎叶提取物对氧嗪酸钾致小鼠UA升高的影响见表1(应用SPSS22.0软件进行统计学分析，所有检测结果以均数±标准差表示，多组间比较采用方差分析)，结果表明，单独的蔓三七根、茎和叶给药组以及蔓三七混合提取物组对高尿酸血症小鼠血清中UA水平并没有影响，蔓三七根、茎、叶提取物按照1:1:2混合所得蔓三七提取物和蔓三七根、茎、叶提取物按照1:1:3混合所得蔓三七提取物的低剂量组与模型对照组相比具有显著性(P<0.05)，蔓三七根、茎、叶提取物按照1:1:2混合所得蔓三七提取物和蔓三七根、茎、叶提取物按照1:1:3混合所得蔓三七提取物的高剂量组与模型对照组相比具有极显著性(P<0.01)，表明蔓三七根、茎、叶分提取，并且蔓三七根、茎、叶提取物按比例混合得到的蔓三七提取物使高尿酸血症小鼠血清中UA水平降低，说明，MSQ给药组具有治疗高尿酸血症的活性，而单独的蔓三七根、茎和叶给药组以及蔓三七混合提取物对治疗高尿酸血症无明显活性。
表1蔓三七根茎叶提取物对氧嗪酸钾致小鼠UA升高的影响
Figure BDA0002304642800000101
Figure BDA0002304642800000111
与正常对照组相比，##P<0.01；与模型组相比，*P<0.05,**P<0.01和***P<0.001。
蔓三七提取物抗大鼠急性痛风性关节炎活性
取132只雄性Wistar大鼠，随机分为11组(每组数量n＝12)，包括正常对照组(CTRL组)和模型对照组(MC组)，用5mL/kg生理盐水进行灌胃。阳性对照组为秋水仙碱(COL)将COL溶于生理盐水中，给药剂量为0.4mg/kg，给药体积为5mL/kg。MSQ给药组(蔓三七根、茎、叶提取物按照1:1:2混合所得蔓三七提取物和蔓三七根、茎、叶提取物按照1:1:3混合所得蔓三七提取物各两组)用蔓三七提取物粉末生理盐水中进行灌胃给药，给药剂量为0.05g/kg(低剂量组)和0.2g/kg(高剂量组)，蔓三七根提取物组、蔓三七茎提取物组、蔓三七叶提取物组给药剂量为0.2g/kg，蔓三七混合提取物(按对比例提取所得)采用给药剂量为0.2g/kg。所有给药组每天均灌胃给药一次，给药时间为8天。给药的第6天，在下午4:00向大鼠右侧踝关节滑膜间隙注射0.1mL 30mg/m L尿酸钠晶体(MSU)，持续3天。正常对照大鼠注射同等体积的生理盐水处理。利用游标卡尺测定大鼠右侧的踝关节周长肿胀率、利用酶联免疫吸附法(ELISA)测定大鼠血清中与炎症相关的生化因子：IL-1β、IL-6、IL-10、MCP-1、TNF-α。
结果如图6所示，在注射尿酸钠晶体后的24h，48h。相较于正常对照组，模型组急性痛风性关节炎大鼠右踝关节的肿胀度均显著增加，这个结果表明在大鼠右踝关节注射尿酸钠晶体成功建立了大鼠急性痛风性关节炎模型。在注射尿酸钠晶体后的第48h时，MSQ给药组(根:茎:叶＝1:1:2)能够显著抑制尿酸钠晶体引起的踝关节肿胀，抑制效果显著；MSQ给药组能够降低急性痛风性关节炎大鼠血清中的IL-1β、IL-6和TNF-α含量；能够升高急性痛风性关节炎大鼠血清中IL-10的含量；能够降低大鼠血清中MCP-1的水平。
应用SPSS22.0软件进行统计学分析，所有检测结果以均数±标准差表示，多组间比较采用方差分析，由表2可知，单独的蔓三七根、茎和叶以及蔓三七混合提取物给药组对尿酸钠晶体引起的踝关节肿胀抑制效果不明显，而MSQ给药组(根:茎:叶＝1:1:2组、根:茎:叶＝1:1:3组)能够显著抑制尿酸钠晶体引起的踝关节肿胀，抑制效果显著。
表2蔓三七根茎叶提取物对尿酸钠致大鼠右踝关节的肿胀度的影响
Figure BDA0002304642800000121
与正常对照组相比，##P<0.01，###P<0.001；与模型组相比，*P<0.05。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (6)

1.一种用于治疗痛风、高尿酸血症的蔓三七提取物，其特征是：分别以蔓三七根、茎、叶为原材料，分别提取蔓三七根提取物、蔓三七茎提取物、蔓三七叶提取物，然后将蔓三七根提取物、蔓三七茎提取物、蔓三七叶提取物按1:1:2-1:1:3的比例混合得到蔓三七提取物；所述蔓三七提取物中绿原酸含量不得低于40%，异绿原酸A、B和C的含量不得低于3%，脑苷脂成分不得低于0.15%；所述蔓三七提取物的制备方法为
步骤1）：分别采集蔓三七根、茎、叶为原材料，粉碎后分别采用乙醇水溶液为提取溶剂，提取温度为常温，超声提取，过滤，滤液经减压浓缩至无醇味；
步骤2）：向步骤1）所得溶液中分别加入乙醇水溶液，进行醇沉，离心收集上清液，减压浓缩至无醇味，分别得到蔓三七根、茎、叶提取液；
步骤3）：用有机溶剂对蔓三七根提取液进行溶剂萃取，萃取三次，合并萃取液减压浓缩后得到蔓三七根提取物；用有机溶剂对蔓三七茎提取液进行溶剂萃取，萃取三次，合并萃取液减压浓缩后得到蔓三七茎提取物；所用有机溶剂为石油醚、正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷/甲醇和石油醚/乙酸乙酯的任意一种；
步骤4）：所得蔓三七叶提取液进行大孔树脂柱色谱分离，所用大孔树脂为D101，先用纯水进行冲洗，然后采用30%的乙醇水溶液进行洗脱收集，收集的相同流份合并、减压浓缩、以及干燥得到蔓三七叶提取物；
步骤5）：将蔓三七根、茎、叶提取物按照质量比1:1:2-1:1:3混合、摇匀制备蔓三七提取物。
2.一种用于治疗痛风、高尿酸血症的蔓三七提取物制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1）：分别采集蔓三七根、茎、叶为原材料，粉碎后分别采用乙醇水溶液为提取溶剂，提取温度为常温，超声提取，过滤，滤液经减压浓缩至无醇味；
步骤2）：向步骤1）所得溶液中分别加入乙醇水溶液，进行醇沉，离心收集上清液，减压浓缩至无醇味，分别得到蔓三七根、茎、叶提取液；
步骤3）：用有机溶剂对蔓三七根提取液进行溶剂萃取，萃取三次，合并萃取液减压浓缩后得到蔓三七根提取物；用有机溶剂对蔓三七茎提取液进行溶剂萃取，萃取三次，合并萃取液减压浓缩后得到蔓三七茎提取物；所用有机溶剂为石油醚、正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷/甲醇和石油醚/乙酸乙酯的任意一种；
步骤4）：所得蔓三七叶提取液进行大孔树脂柱色谱分离，所用大孔树脂为D101，先用纯水进行冲洗，然后采用30%的乙醇水溶液进行洗脱收集，收集的相同流份合并、减压浓缩、以及干燥得到蔓三七叶提取物；
步骤5）：将蔓三七根、茎、叶提取物按照质量比1:1:2-1:1:3混合、摇匀制备蔓三七提取物；所述蔓三七提取物中绿原酸含量不得低于40%，异绿原酸A、B和C的含量不得低于3%，脑苷脂成分不得低于0.15%。
3.根据权利要求2所述的用于治疗痛风、高尿酸血症的蔓三七提取物制备方法，其特征在于，步骤1）中，提取溶剂为pH=2-7的50-90%乙醇水溶液，液料比为1:10-20，提取温度为常温以及超声提取2小时，滤液经减压浓缩至无醇味。
4.根据权利要求2所述的用于治疗痛风、高尿酸血症的蔓三七提取物制备方法，其特征在于，步骤2）向步骤1）所得溶液中分别加入3-6倍体积的80%-100%的乙醇水溶液，放入4℃冰箱过夜进行醇沉。
5.一种权利要求1～4中任意一项所述的蔓三七提取物在制备治疗痛风药物中的应用。
6.一种权利要求1～4中任意一项所述的蔓三七提取物在制备治疗高尿酸血症药物中的应用。
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