CN110845474B - 一种靶向i型prmt的化合物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及化学药物技术领域，尤其是涉及一种靶向I型PRMT的化合物及其制备方法和应用。本发明的化合物A及其药学上可接受的盐，属于靶向Ⅰ型PRMT共价抑制化合物，可通过共价作用持续抑制蛋白功能，具有较高的选择性；其制备方法操作简单，条件温和；可用于制备抑制Ⅰ型PRMT酶活性的药物或制备Ⅰ型PRMT抑制剂，在制备抗肿瘤等药物中具有广泛的应用。

Description

一种靶向I型PRMT的化合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及化学药物技术领域，尤其是涉及一种靶向I型PRMT的化合物及其制备方法和应用。

背景技术

蛋白质精氨酸甲基化是在细胞质和细胞核中广泛存在的高丰度翻译后修饰方式，蛋白质精氨酸甲基转移酶(PRMTs)家族是参与蛋白质精氨酸甲基化过程的关键酶，其主要以S-腺苷甲硫氨酸(SAM)为甲基供体，甲基化修饰蛋白质精氨酸侧链的氮原子，生成S-腺苷同型半胱氨酸和甲基精氨酸。PRMTs家族包含9种PRMT。根据催化反应类型不同，可将PRMT分为Ⅰ型(PRMT1\PRMT2\PRMT3\PRMT4\PRMT6\PRMT8)、Ⅱ型(PRMT5\PRMT9)和Ⅲ型(PRMT7)。Ⅰ型PRMT负责非对称性双甲基化精氨酸(ADMA)、Ⅱ型PRMT负责对称性双甲基化精氨酸(SDMA)、Ⅲ型PRMT负责单甲基化精氨酸(MMA)。

目前已有多篇文献证实Ⅰ型PRMT的表达异常与多种疾病的发生发展密切相关。如PRMT1被发现在白血病、肺癌、肝癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌、胰腺癌、头颈部肿瘤等癌症中发挥致癌功能。在恶性胶质瘤中，发现PRMT2在蛋白水平上高表达，并且与不良预后密切相关。在70％的急性髓性白血病(AML)病人中，都可观察到PRMT4的表达有至少两倍的升高。PRMT6被发现在52.6％的胃癌细胞中高表达，并且其表达量与其底物的修饰水平呈显著正相关。同时，由于Ⅰ型PRMT主要负责催化精氨酸不对称二甲基化，体内不对称二甲基化水平的改变与心血管疾病、糖尿病、肾功能衰竭、哮喘和慢性非阻塞疾病有着密不可分的关系。因此，可以说Ⅰ型PRMT的异常表达与多种疾病的发生发展相关。目前已有部分靶向Ⅰ型PRMT的小分子抑制剂的报道，但是这些小分子均为可逆抑制剂且结构较为单一，靶向Ⅰ型PRMT的共价抑制剂鲜有报道。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一类新型化合物，其是Ⅰ型PRMT共价抑制剂。

本发明的第二目的在于提供上述化合物的制备方法，该制备方法操作简单，条件温和。

本发明的第三目的在于提供一种药物组合物，以上述化合物或其药学上可接受的盐为活性成分。

本发明的第四目的在于提供一种上述化合物在制备用于抑制Ⅰ型PRMT酶活性的药物或制备Ⅰ型PRMT抑制剂中的应用。

一种化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物的结构式如式(A)所示：

其中，Ar选自取代或未取代的六元芳香环、取代或未取代的六元并五元芳香环；Linker选自

X选自亚甲基

或羰基

R₁选自H、C_1～3烷基或者取代磺酰基；R₂选自H或C_1～3烷基；R₃选自可与半胱氨酸发生共价反应的基团；R₄、R₅、R₆、R₇各自独立地选自H或C_1～3烷基；n为1～6之间的整数；m为0～3之间的整数。

具体的，所述Linker中氮原子连接于R₃。

本发明中涉及的波浪线表示Ar与化合物其余部分的连接位置。

在本发明一具体实施方式中，Ar选自

如在不同实施方式中，m可以为0，1，2和3；优选的，m为0、1或2。

在本发明一具体实施方式中，Linker选自

在本发明一具体实施方式中，X为亚甲基。

R₁中的取代磺酰基结构为

R₈选自C_1～3烷基。在本发明一具体实施方式中，所述R₁选自H或甲基。

在本发明一具体实施方式中，R₂为甲基。

在本发明一具体实施方式中，R₃中包括烯基和/或卤素原子基团。R₃选自

如在不同实施方式中，n可以为1、2、3、4、5或6；优选的，n为1、2或3。

在本发明的具体实施方式中，所述化合物可选自如下结构：

本发明还提供了上述化合物的制备方法，包括如下步骤：

(a)化合物B在酸的作用下脱保护基得到化合物A；所述化合物B的结构式如下：

在本发明的具体实施方式中，步骤(a)中，所述酸包括三氟醋酸和盐酸中的一种或两种混合。可选的，所述化合物B与所述酸的摩尔比为1﹕(3～10)。可选的，步骤(a)中的反应温度为15～30℃。可选的，步骤(a)还包括溶剂，所述溶剂包括乙醇、二氯甲烷、二氧六环、乙酸乙酯和甲醇中任一种或多种混合。

所述化合物B的制备方法包括：(b₁)在碱与钯催化剂的作用下，化合物C与化合物D进行Suzuki偶联反应，得到化合物B；所述化合物C和化合物D的结构式如下：

在本发明的具体实施方式中，步骤(b₁)中，所述钯催化剂包括[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物、醋酸钯、四(三苯基膦)钯中的任一种或多种混合。可选的，步骤(b₁)中，所述碱选自无机碱。可选的，所述碱包括碳酸钠、碳酸钾和碳酸铯中的任一种或多种混合。可选的，化合物C、化合物D、钯催化剂和碱的摩尔比为1﹕(1～2)﹕(0.05～0.15)﹕(1～5)。可选的，步骤(b₁)中的反应温度为90～110℃。可选的，步骤(b₁)还包括溶剂，所述溶剂包括二氧六环和水。可选的，所述溶剂中，二氧六环和水的体积比为(1～5)﹕1。

或者，所述化合物B的制备方法包括：(b₂)化合物C₁与化合物Q在缚酸剂作用下反应得到化合物B；所述化合物C₁和化合物Q的结构式如下：

在本发明的具体实施方式中，步骤(b₂)中，所述缚酸剂为碱。可选的，所述碱包括三乙胺、N,N-二异丙基乙胺、碳酸钾和碳酸钠中的任一种或多种混合。可选的，步骤(b₂)中，化合物C₁、化合物Q和缚酸剂的摩尔比为1﹕(1～2)﹕(3～10)。可选的，步骤(b₂)中的反应温度为0～25℃。可选的步骤(b₂)还包括溶剂，所述溶剂包括四氢呋喃、二氯甲烷和氯仿中的任一种或多种混合。

当X为亚甲基，R₁选自H和C_1～3烷基时，所述化合物C的制备方法包括：(c₁)在酸性条件下，化合物E与化合物F在还原剂作用下进行还原胺化反应得到化合物C；所述化合物E和化合物F的结构式如下：

在本发明的具体实施方式中，步骤(c₁)中，所述酸性条件中的酸为冰醋酸。可选的，步骤(c₁)中，所述还原剂包括三乙酰氧基硼氢化钠、氰基硼氢化钠和硼氢化钠中的任一种或多种混合。可选的，步骤(c₁)中，所述化合物E、化合物F、还原剂和酸的摩尔比为1﹕(1.2～2)﹕(2～5)﹕(5～10)。可选的，步骤(c₁)中的反应温度为10～30℃。可选的，步骤(c₁)中还包括溶剂，所述溶剂包括二氯乙烷、氯仿和二氯甲烷中的任一种或多种混合。

当X为羰基，R₁选自H和C_1～3烷基时，所述化合物C的制备方法包括：(c₂)化合物G与化合物F在缩合剂的作用下进行酰胺缩合反应得到化合物C；所述化合物G的结构式如下：

在本发明的具体实施方式中，步骤(c₂)中，所述缩合剂包括1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐、N-羟基-7-氮杂苯并三氮唑、O-(7-氮苯并三氮唑)-N,N,N,N-四甲基脲六氟磷酸酯或1-羟基苯并***中的任一种或多种混合。可选的，步骤(c₂)中，化合物G、化合物F和缩合剂的摩尔比为1﹕(1～2)﹕(1～3)。可选的，步骤(c₂)中的反应温度为15～30℃。可选的，步骤(c₂)中还包括溶剂，所述溶剂包括二甲亚砜、N，N-二甲基甲酰胺、四氢呋喃和二氯甲烷中的任一种或多种混合。

当R₁为取代磺酰基

时，所述化合物C的制备方法包括：(c₃₁)在酸性条件下，化合物E与化合物H在还原剂作用下进行还原胺化反应得到化合物J；(c₃₂)化合物J在酸性条件下脱保护基得到化合物K；(c₃₃)在缚酸剂作用下，化合物K与化合物L反应得到化合物C；

所述化合物H、J、K和L的结构式如下：

在本发明的具体实施方式中，步骤(c₃₁)中，所述酸性条件中的酸为冰醋酸。可选的，步骤(c₃₁)中，所述还原剂包括三乙酰氧基硼氢化钠、氰基硼氢化钠和硼氢化钠中的任一种或多种混合。可选的，步骤(c₃₁)中，所述化合物E、化合物H、还原剂和酸的摩尔比为1﹕(1.2～2)﹕(2～5)﹕(5～10)。可选的，步骤(c₃₁)中的反应温度为10～30℃。可选的，步骤(c₃₁)中还包括溶剂，所述溶剂包括二氯乙烷、氯仿和二氯甲烷中的任一种或多种混合。

在本发明的具体实施方式中，步骤(c₃₂)中，所述酸包括三氟醋酸和盐酸中的一种或两种混合。可选的，所述化合物J与所述酸的摩尔比为1﹕(3～10)。可选的，步骤(c₃₂)中的反应温度为15～30℃。可选的，步骤(c₃₂)还包括溶剂，所述溶剂包括乙醇、二氯甲烷、二氧六环、乙酸乙酯和甲醇中任一种或多种混合。

在本发明的具体实施方式中，步骤(c₃₃)中，所述缚酸剂为碱。可选的，所述碱包括三乙胺、N,N-二异丙基乙胺、碳酸钾和碳酸钠中的任一种或多种混合。可选的，步骤(c₃₃)中，化合物K、化合物L和缚酸剂的摩尔比为1﹕(1～2)﹕(3～10)。可选的，步骤(c₃₃)中的反应温度为0～25℃。可选的，步骤(c₃₃)还包括溶剂，所述溶剂包括四氢呋喃、二氯甲烷和氯仿中的任一种或多种混合。

所述化合物C₁的制备方法包括：(c₃₄)在碱与催化剂的作用下，化合物C与化合物Y进行Suzuki偶联反应，得到化合物C₁；所述化合物Y的结构式如下：

在本发明的具体实施方式中，步骤(c₃₄)中，所述钯催化剂包括[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物、醋酸钯、四(三苯基膦)钯中的任一种或多种混合。可选的，步骤(c₃₄)中，所述碱选自无机碱。可选的，所述碱包括碳酸钠、碳酸钾和碳酸铯中的任一种或多种混合。可选的，步骤(c₃₄)中，化合物C、化合物Y、钯催化剂和碱的摩尔比为1﹕(1～2)﹕(0.05～0.15)﹕(1～5)。可选的，步骤(c₃₄)中的反应温度为90～110℃。可选的，步骤(c₃₄)中还包括溶剂，所述溶剂包括二氧六环和水。可选的，所述溶剂中，二氧六环和水的体积比为(1～5)﹕1。

当Ar为

时，所述化合物C的制备方法包括：(c₄)化合物V与化合物F在碱的作用下反应得到化合物C；所述化合物V的结构式如下：

在本发明的具体实施方式中，步骤(c₄)中，所述碱包括三乙胺、N,N-二异丙基乙胺、碳酸钾和碳酸铯中的任一种或多种混合。可选的，步骤(c₄)中，所述化合物V、化合物F和碱的摩尔比为1﹕(2～4)﹕(1～3)。可选的，步骤(c₄)中的反应温度为15～30℃。可选的，步骤(c₄)中还包括溶剂，所述溶剂包括四氢呋喃、二氯甲烷和氯仿中的任一种或多种混合。

所述化合物D的制备方法包括：(d)化合物Y和化合物Q在缚酸剂的作用下反应得到化合物D。

在本发明的具体实施方式中，步骤(d)中，所述缚酸剂为碱。可选的，所述碱包括三乙胺、N,N-二异丙基乙胺、碳酸钾和碳酸钠中的任一种或多种混合。可选的，步骤(d)中，化合物Y、化合物Q和缚酸剂的摩尔比为1﹕(1～2)﹕(3～10)。可选的，步骤(d)中的反应温度为0～25℃。可选的，步骤(d)还包括溶剂，所述溶剂包括四氢呋喃、二氯甲烷和氯仿中的任一种或多种混合。

所述化合物Y的制备方法包括：(y)化合物S₁、化合物S₂或化合物S₃在酸的作用下脱保护基得到化合物Y；所述化合物S₁、化合物S₂和化合物S₃的结构式分别如下：

在本发明的具体实施方式中，步骤(y)中，所述酸包括三氟醋酸和盐酸中的一种或两种混合。可选的，所述化合物S₁与所述酸的摩尔比为1﹕(3～10)；所述化合物S₂与所述酸的摩尔比为1﹕(3～10)；化合物S₃与所述酸的摩尔比为1﹕(3～10)。可选的，步骤(y)中的反应温度为15～30℃。可选的，步骤(y)还包括溶剂，所述溶剂包括乙醇、二氯甲烷、二氧六环、乙酸乙酯和甲醇中任一种或多种混合。

所述化合物S₁的制备方法包括：(s₁)在碱性条件下，化合物T₁与联硼酸频哪醇酯在钯催化剂作用下反应得到化合物S₁；所述化合物T₁的结构式如下：

在本发明的具体实施方式中，步骤(s₁)中，所述钯催化剂包括[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物、醋酸钯、四(三苯基膦)钯中的任一种或多种混合。可选的，步骤(s₁)中，所述碱性条件中的碱包括醋酸钾、醋酸钠、碳酸钠和碳酸钾中的任一种或多种混合。可选的，步骤(s₁)中，化合物T₁、联硼酸频哪醇酯、钯催化剂和碱的摩尔比为1﹕(1～2)﹕(0.005～0.02)﹕(1～3)。可选的，步骤(s₁)中的反应温度为90～110℃。可选的，步骤(s₁)中还包括溶剂，所述溶剂包括无水二氧六环、无水甲苯和无水乙腈中的任一种或多种混合。

所述化合物T₁的制备方法包括：(t₁)在碱性条件下，化合物U₁与Boc酸酐在碱性条件下反应得到化合物T₁；所述化合物U₁的结构式如下：

在本发明的具体实施方式中，步骤(t₁)中，碱性条件中的碱包括三乙胺、N,N-二异丙基乙胺、碳酸钾和碳酸铯中的任一种或多种混合。可选的，步骤(t₁)中，所述化合物U₁、Boc酸酐和碱的摩尔比为1﹕(1～2)﹕(2～5)。可选的，步骤(t₁)中的反应温度为60～80℃。可选的，步骤(t₁)中还包括溶剂，所述溶剂包括四氢呋喃和水。可选的，所述溶剂中，四氢呋喃和水的体积比为1﹕(1～3)。

所述化合物S₂的制备方法包括：(s₂)在碱性条件下，化合物T₂与频哪醇硼烷在氢氯二茂锆作用下反应得到化合物S₂；所述化合物T₂的结构式如下：

在本发明的具体实施方式中，步骤(s₂)中，碱性条件中的碱包括三乙胺、N,N-二异丙基乙胺中的任一种或两种混合。可选的，步骤(s₂)中，所述化合物T₂、频哪醇硼烷、氢氯二茂锆和碱的摩尔比为1﹕(1～3)﹕(0.05～0.2)﹕(0.05～2)。可选的，步骤(s₂)中的反应温度为60～80℃。

所述化合物T₂的制备方法包括：(t₂)在碱性条件下，化合物U₂与Boc酸酐反应得到化合物T₂；所述化合物U₂的结构式如下：

在本发明的具体实施方式中，步骤(t₂)中，碱性条件中的碱包括三乙胺、N,N-二异丙基乙胺、碳酸钾和碳酸铯中的任一种或多种混合。可选的，步骤(t₂)中，所述化合物U₂、Boc酸酐、碱的摩尔比为1﹕(1～2)﹕(2～5)。可选的，步骤(t₂)中的反应温度为0～25℃。可选的，步骤(t₂)中还包括溶剂，所述溶剂包括四氢呋喃、二氯甲烷和氯仿中的任一种或多种混合。

本发明还提供了一种药物组合物，其包括上述化合物(A)或其药学上可接受的盐。

在本发明的具体实施方式中，所述药物组合物中包括药学上可接受的辅料或辅助性成分。

本发明还提供了上述化合物A或其药学上可接受的盐在制备用于抑制Ⅰ型PRMT酶活性的药物或制备Ⅰ型PRMT抑制剂中的应用。

本发明还提供了上述化合物A或其药学上可接受的盐在制备抗肿瘤药物或制备用于治疗心血管疾病、神经退行性疾病、疟疾、艾滋病、痛风、糖尿病、肾功能衰竭、慢性肺部疾病、眼咽型肌营养不良、***成瘾、肺动脉高压疾病、肌萎缩侧索硬化症和酒精性肝硬化药物中的应用。

具体可选的，所述肿瘤包括脑癌、成胶质细胞瘤、白血病、淋巴瘤、Bannayan-Zonana综合征、考登病、Lhermitte-Duclos病、乳腺癌、炎性乳腺癌、维尔姆斯瘤、尤因肉瘤、横纹肌肉瘤、室管膜瘤、成神经管细胞瘤、结肠癌、胃癌、膀肤癌、头颈癌、肾癌、肺癌、肝癌、黑素瘤、肾脏癌、卵巢癌、胰腺癌、***癌、肉瘤、骨肉瘤、骨巨细胞瘤和甲状腺癌中的任一种。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：

本发明的化合物A及其药学上可接受的盐，属于靶向Ⅰ型PRMT共价抑制化合物，可通过共价作用持续抑制蛋白功能，具有较高的选择性；其制备方法操作简单，条件温和；可用于制备抑制Ⅰ型PRMT酶活性的药物或制备Ⅰ型PRMT抑制剂，在制备抗肿瘤等药物中具有广泛的应用。

附图说明

为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为本发明实验例2中本发明部分化合物及其可逆类似物对PRMT6体外酶活性抑制作用图；其中还包括对应的可逆类似物A₂’、A₆’、A₁₂’的结构图；

图2为本发明实验例3中本发明部分化合物A₁₂及其可逆类似物A₁₂’对PRMT1、PRMT3、PRMT4、PRMT5、PRMT7、PRMT8的体外酶活性抑制作用图；

图3为本发明实验例3中本发明部分化合物A₂₇及其可逆类似物A₂₇’对PRMT1、PRMT3、PRMT4、PRMT5、PRMT7、PRMT8的体外酶活性抑制作用图；其中还包括对应的可逆类似物A₂₇’的结构图。

具体实施方式

下面将结合附图和具体实施方式对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，但是本领域技术人员将会理解，下列所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例，仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

术语定义：

本发明提供的化合物和衍生物可以根据IUPAC(国际纯粹与应用化学联合会)或CAS(化学文摘服务社，Columbus，OH)命名***命名。

术语“烷基”是直链或支链的饱和烃基的基团。C_1～3烷基的实例包括甲基(C₁)、乙基(C₂)、正丙基(C₃)、异丙基(C₃)。

术语“药学上可接受的”是指某载体、运载物、稀释剂、辅料，和/或所形成的盐通常在化学上或物理上与构成某药物剂型的其它成分相兼容，并在生理上与受体相兼容。

术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物与无机和/或有机酸和碱形成的酸式和/或碱式盐，也包括两性离子盐(内盐)，还包括季铵盐，例如烷基铵盐。这些盐可以是在化合物的最后分离和纯化中直接得到。也可以是通过将上述化合物与一定数量的酸或碱适当(例如等当量)进行混合而得到。这些盐可能在溶液中形成沉淀而以过滤方法收集，或在溶剂蒸发后回收而得到，或在水介质中反应后冷冻干燥制得。本发明中所述盐可以是化合物的盐酸盐、硫酸盐、枸橼酸盐、苯磺酸盐、氢溴酸盐、氢氟酸盐、磷酸盐、乙酸盐、丙酸盐、丁二酸盐、草酸盐、苹果酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、马来酸盐、酒石酸盐或三氟乙酸盐。

本发明的某些实施方式中，包括了同位素标记的化合物，所述同位素标记化合物是指与本文中所列化合物相同，但是其中的一个或多个原子被另一个原子取代，该原子的原子质量或质量数不同于自然界中常见的原子质量或质量数。可以引入本发明化合物中的同位素包括氢、碳、氮、氧、硫，即²H,³H、¹³C、¹⁴C、¹⁵N、¹⁷O、¹⁸O、³⁵S。含有上述同位素和/或其它原子同位素的本发明化合物以及该化合物的可药用的盐均应包含在本发明范围之内。

本发明化合物或药物组合物的施用方式没有特别限制，代表性的施用方式包括(但并不限于)：口服、肠胃外(静脉内、肌肉内或皮下)、和局部给药。

用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在这些固体剂型中，活性化合物与至少一种常规惰性赋形剂(或载体)混合，如柠檬酸钠或磷酸二钙，或与下述成分混合：(a)填料或增溶剂，如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(b)粘合剂，如羟甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和***胶；(c)保湿剂，如甘油；(d)崩解剂，如琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐、和碳酸钠；(e)缓溶剂，如石蜡；(f)吸收加速剂，如季胺化合物；(g)润湿剂，如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(h)吸附剂，如高岭土；和(i)润滑剂，如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠，或其混合物。胶囊剂、片剂和丸剂中，剂型也可包含缓冲剂。固体剂型可采用包衣和壳材制备，如肠衣和其它本领域公知的材料。必要时，活性化合物也可与上述赋形剂中的一种或多种形成微胶囊形式。用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆或酊剂。除了活性化合物外，液体剂型可包含本领域中常规采用的惰性稀释剂，如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂，如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特别是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油或这些物质的混合物等。除了这些惰性稀释剂外，组合物也可包含助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香料。除了活性化合物外，悬浮液可包含悬浮剂，如乙氧基化异十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯、微晶纤维素、甲醇铝和琼脂或这些物质的混合物等。用于肠胃外注射的组合物可包含生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、悬浮液或乳液，和用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。适宜的含水和非水载体、稀释剂、溶剂或赋形剂包括水、乙醇、多元醇及其适宜的混合物。用于局部给药的本发明化合物的剂型包括软膏剂、散剂、贴剂、喷射剂和吸入剂。活性成分在无菌条件下与生理上可接受的载体及任何防腐剂、缓冲剂，或必要时可能需要的推进剂一起混合。

本发明所述药学上可接受的辅料是指除活性成分以外包含在剂型中的物质。本发明所述药学上可接受的辅助性成分，它具有一定生理活性，但该成分的加入不会改变上述药物组合物在疾病治疗过程中的主导地位，而仅仅发挥辅助功效，这些辅助功效仅仅是对该成分已知活性的利用，是医药领域惯用的辅助治疗方式。若将上述辅助性成分与本发明药物组合物配合使用，仍然应属于本发明保护的范围。

本发明各实施例对化合物结构的表征数据中，由于化合物结构中多数存在一个或多个与N等相连的较为活泼的氢，活泼氢容易与氘交换；在氘代试剂尤其是氘代甲醇/氘代氯仿作为试剂做核磁检测时，活泼氢与氘交换使得核磁结果有几个氢的偏差。本发明通过核磁数据结合高分辨质谱数据可以进一步作为确定化合物的表征数据。

下述具体实施例中涉及的部分化合物结构如下：

实施例1

本实施例提供了一种化合物A₁的制备方法，合成路线如上：

具体步骤如下：

(1)将(4-溴苯基)甲胺(U_1-1，4.0g，21.50mmol)、Boc酸酐(5.63g，25.80mmol)、碳酸钠(5.13g，48.38mmol)加入到四氢呋喃/水混合溶液(20ml/50ml)中，反应液在60℃下反应12h。TCL监测反应完全后，真空条件下浓缩反应液。加入水和乙酸乙酯萃取，收集有机相。浓缩，真空干燥得目标化合物(4-溴苄基)氨基甲酸叔丁酯T_1-1。白色结晶状固体6.10g，产率：99.15％。

(2)将(4-溴苄基)氨基甲酸叔丁酯(T_1-1，2.6g，9.09mmol)、联硼酸频那醇酯(2.77g，10.91mmol)，醋酸钾(1.07g，10.91mmol)加入到无水二氧六环中，氮气置换五次。随后加入[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(53.16mg，0.073mmol)，氮气置换五次。100℃加热12h时，真空条件下减压浓缩，乙酸乙酯萃取，有机层合并后采用流动相为石油醚：乙酸乙酯＝20：1的柱层析条件提纯得到产物叔丁基(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苄基)氨基甲酸酯S_1-1，透明粘稠状液体3.01g，产率：99.37％。

(3)将叔丁基(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苄基)氨基甲酸酯(S_1-1，2.4g，7.2mmol)加入到二氯甲烷中，加入2.67mL三氟醋酸，室温条件下反应过夜。TCL检测反应完毕后，减压浓缩反应液。得到目标化合物(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯基)甲胺Y_1-1，淡黄色粘稠状液体2.3g(含三氟醋酸)，产率：100％。

(4)将(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯基)甲胺(Y_1-1，1.68g，7.2mmol)、碳酸钾(2.98g，21.6mmol)加入到二氯甲烷中，0℃条件下滴加丙烯酰氯(698μL，8.64mmol)。反应液在室温条件下反应4h。TCL监测反应完全后，加入水和二氯甲烷萃取，收集有机相。柱层析得目标化合物D_1-1，白色结晶状固体1.73g，产率：83.70％。

(5)将3-溴异烟醛(E_1-1，300mg，1.61mmol)、(2-(甲基氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(F_1-1，421mg，2.42mmol)、冰醋酸(552μM，9.66mmol)加入到二氯乙烷中，0℃条件下分批加入三乙酰氧基硼氢化钠(682.45mg，3.22mmol)。反应液在室温条件下反应过夜。TCL监测反应完全后，加入饱和碳酸氢钠溶液调节pH至7～8，加入二氯甲烷萃取，收集有机相。柱层析得目标化合物C_1-1，淡黄色油状液体260mg，产率：46.91％。

(6)将化合物C_1-1(260mg，0.755mmol)，化合物D_1-1(281.9mg，0.982mmol)，碳酸钠(320.12mg，3.02mmol)加入到二氧六环/水＝4：1的混合溶液中，氮气置换五次。随后加入[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(55.2mg，0.076mmol)，氮气置换五次。100℃加热4h，真空条件下减压浓缩，乙酸乙酯萃取，有机层合并后采用流动相为二氯甲烷：甲醇＝15：1的柱层析条件提纯得到产物B_1-1，淡黄色粘稠状液体150mg，产率：46.8％。

(7)将化合物B_1-1(150mg，0.353mmol)加入到1M的盐酸乙醇溶液中，室温搅拌反应8h。TLC检测反应结束后，真空条件下减压浓缩得到粗产品。将粗产物加入干燥乙酸乙酯打浆，有大量灰色固体析出，过滤干燥滤饼得到终产物A₁，褐色固体92mg，产率：72.2％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.65(t,J＝6.0Hz,1H),8.51(d,J＝5.1Hz,1H),8.36(d,J＝0.6Hz,1H),7.59(d,J＝5.1Hz,1H),7.36(s,4H),6.65(t,J＝5.8Hz,1H),6.31(dd,J＝17.1,10.1Hz,1H),6.15(dd,J＝17.1,2.3Hz,1H),5.64(dd,J＝10.1,2.2Hz,1H),4.42(d,J＝6.0Hz,2H),3.45(s,2H),2.99(q,J＝6.4Hz,2H),2.30(t,J＝6.7Hz,2H),2.06(s,3H).ESI-MS m/z325.2026(M+H)⁺，计算值：325.2028。

实施例2

本实施例提供了一种化合物A₂的制备方法：化合物A₂的制备方法参考实施例1中化合物A₁的制备方法，区别在于：将步骤(5)中的F_1-1替换为等摩尔的甲基(2-(甲基氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯F_2-2。制备得到的目标化合物A₂为灰白色固体71mg，最后一步得到化合物A₂的产率为49.1％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.65(t,J＝6.0Hz,1H),8.50(d,J＝5.1Hz,1H),8.37(s,1H),7.53(d,J＝4.9Hz,1H),7.36(s,4H),6.31(dd,J＝17.1,10.1Hz,1H),6.15(dd,J＝17.1,2.3Hz,1H),5.64(dd,J＝10.1,2.3Hz,1H),4.42(d,J＝6.0Hz,2H),3.48(s,2H),3.26–3.14(m,2H),2.74(d,J＝14.6Hz,3H),2.36(s,2H),2.12(s,3H).ESI-MS m/z339.2186(M+H)⁺，计算值：339.2185。

实施例3

本实施例提供了一种化合物A₃的制备方法：化合物A₃的制备方法参考实施例1中化合物A₁的制备方法，区别在于：将步骤(5)中的E_1-1替换为等摩尔的2-溴异烟醛E_2-2。制备得到的目标化合物A₃为灰白色固体78mg，最后一步得到化合物A₃的产率为57.5％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.77(s,1H),8.75(dd,J＝14.7,5.5Hz,2H),8.40(s,1H),8.11(d,J＝8.1Hz,2H),7.65–7.54(m,1H),7.42(d,J＝8.1Hz,2H),6.32(dd,J＝17.1,10.2Hz,1H),6.15(dd,J＝17.1,2.2Hz,1H),5.64(dd,J＝10.1,2.2Hz,1H),4.53(d,J＝36.8Hz,2H),4.43(d,J＝6.0Hz,2H),3.34(d,J＝14.5Hz,4H),2.79(s,3H).ESI-MS m/z 325.2032(M+H)⁺，计算值：325.2028。

实施例4

本实施例提供了一种化合物A₄的制备方法：化合物A₄的制备方法参考实施例1中化合物A₁的制备方法，区别在于：将步骤(5)中的E_1-1替换为等摩尔的2-溴异烟醛E_2-2，将步骤(5)中的F_1-1替换为等摩尔的甲基(2-(甲基氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯F_2-2。制备得到的目标化合物A₄为黄褐色固体59mg，最后一步得到化合物A₄的产率为38.9％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.77(s,1H),8.77(d,J＝5.1Hz,1H),8.73(t,J＝6.0Hz,1H),8.41(s,1H),8.16–8.04(m,2H),7.65(dd,J＝5.1,1.5Hz,1H),7.47–7.35(m,2H),6.32(dd,J＝17.1,10.2Hz,1H),6.15(dd,J＝17.1,2.2Hz,1H),5.64(dd,J＝10.1,2.2Hz,1H),4.59(s,2H),4.43(d,J＝6.0Hz,2H),3.47(s,4H),2.77(s,3H),2.60(t,J＝5.3Hz,3H).ESI-MS m/z 339.2188(M+H)⁺，计算值：339.2185。

实施例5

本实施例提供了一种化合物A₅的制备方法：化合物A₅的制备方法参考实施例1中化合物A₁的制备方法，区别在于：将步骤(5)中的E_1-1替换为等摩尔的5-溴吡啶-3-甲醛。制备得到的目标化合物A₅为黄褐色固体73mg，最后一步得到化合物A₅的产率为54.3％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.77(s,1H),9.06(d,J＝2.2Hz,1H),8.81(d,J＝2.0Hz,1H),8.74(t,J＝6.0Hz,1H),8.68–8.61(m,1H),7.86–7.78(m,2H),7.46–7.39(m,2H),6.32(dd,J＝17.1,10.1Hz,1H),6.14(dd,J＝17.1,2.2Hz,1H),5.64(dd,J＝10.1,2.3Hz,1H),4.57(d,J＝34.7Hz,2H),4.42(d,J＝6.0Hz,2H),3.36(s,4H),2.79(s,3H).ESI-MS m/z 325.2024(M+H)⁺，计算值：325.2028。

实施例6

本实施例提供了一种化合物A₆的制备方法：化合物A₆的制备方法参考实施例1中化合物A₁的制备方法，区别在于：将步骤(5)中的E_1-1替换为等摩尔的5-溴吡啶-3-甲醛，将步骤(5)中的F_1-1替换为等摩尔的甲基(2-(甲基氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯F_2-2。制备得到的目标化合物A₆为黄褐色固体57mg，最后一步得到化合物A₆的产率为41.2％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.58(s,1H),9.05(d,J＝2.1Hz,1H),8.81–8.77(m,1H),8.73(t,J＝6.0Hz,1H),8.60(s,1H),7.81(d,J＝8.2Hz,2H),7.43(d,J＝8.1Hz,2H),6.31(dd,J＝17.1,10.1Hz,1H),6.14(dd,J＝17.1,2.2Hz,1H),5.64(dd,J＝10.1,2.2Hz,1H),4.56(d,J＝60.3Hz,2H),4.42(d,J＝6.0Hz,2H),3.46(s,4H),2.77(s,3H),2.60(d,J＝5.2Hz,3H).ESI-MS m/z339.2181(M+H)⁺，计算值：339.2185。

实施例7

本实施例提供了一种化合物A₇的制备方法：化合物A₇的制备方法参考实施例1中化合物A₁的制备方法，区别在于：不包括步骤(1)-(3)，将步骤(4)中的Y_1-1替换为等摩尔的4-氨基苯硼酸频哪醇酯Y_2-2，将步骤(5)中的E_1-1替换为等摩尔的5-溴吡啶-3-甲醛。制备得到的目标化合物A₇为黄褐色固体98mg，最后一步得到化合物A₇的产率为67.5％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.75(s,1H),10.48(s,1H),9.07(d,J＝2.1Hz,1H),8.79(d,J＝1.9Hz,1H),8.68(s,1H),7.86(s,4H),6.51(dd,J＝16.9,10.2Hz,1H),6.29(dd,J＝17.0,2.0Hz,1H),5.79(dd,J＝10.1,2.0Hz,1H),4.52(s,2H),3.37(s,4H),2.79(s,3H).ESI-MS m/z311.1864(M+H)⁺，计算值：311.1872。

实施例8

本实施例提供了一种化合物A₈的制备方法：化合物A₈的制备方法参考实施例1中化合物A₁的制备方法，区别在于：不包括步骤(1)-(3)，将步骤(4)中的Y_1-1替换为等摩尔的4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯胺Y_2-2，将步骤(5)中的E_1-1替换为等摩尔的5-溴吡啶-3-甲醛，将步骤(5)中的F_1-1替换为等摩尔的甲基(2-(甲基氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯F_2-2。制备得到的目标化合物A₈为黄褐色固体87mg，最后一步得到化合物A₈的产率为60.1％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.55(s,1H),10.44(s,1H),9.05(d,J＝2.2Hz,1H),8.77(d,J＝1.9Hz,1H),8.59(s,1H),7.89–7.81(m,4H),6.50(dd,J＝17.0,10.2Hz,1H),6.29(dd,J＝17.0,1.9Hz,1H),5.79(dd,J＝10.1,2.0Hz,1H),4.52(s,2H),3.45(s,4H),2.77(s,3H),2.64–2.57(m,3H).ESI-MS m/z 325.2023(M+H)⁺，计算值：325.2028。

实施例9

本实施例提供了一种化合物A₉的制备方法：化合物A₉的制备方法参考实施例1中化合物A₁的制备方法，区别在于：将步骤(5)中的E_1-1替换为等摩尔的5-溴吡啶-3-甲醛，将步骤(5)中的F_1-1替换为等摩尔的(2-氨基乙基)氨基甲酸叔丁酯F_3-3。制备得到的目标化合物A₉为黄褐色固体53mg，最后一步得到化合物A₉的产率为57.2％。¹H NMR(400MHz,Methanol-d₄)δ9.36(s,1H),9.30–9.20(m,1H),9.14(s,1H),7.93(d,J＝7.9Hz,2H),7.54(d,J＝7.9Hz,2H),6.43–6.24(m,2H),5.72(dd,J＝9.7,2.2Hz,1H),4.71(s,2H),4.55(s,2H),3.51(d,J＝6.2Hz,2H),2.02(s,2H).ESI-MS m/z 311.1869(M+H)⁺，计算值：311.1872。

实施例10

本实施例提供了一种化合物A₁₀的制备方法：化合物A₁₀的制备方法参考实施例1中化合物A₁的制备方法，区别在于：将步骤(5)中的E_1-1替换为等摩尔的5-溴吡啶-3-甲醛，将步骤(5)中的F_1-1替换为等摩尔的(2-氨基乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯F_4-4。制备得到的目标化合物A₁₀为黄褐色固体68mg，最后一步得到化合物A₁₀的产率为45.6％。¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.70(d,J＝2.2Hz,1H),8.53(d,J＝2.0Hz,1H),7.87(t,J＝2.2Hz,1H),7.59–7.53(m,2H),7.41(d,J＝8.0Hz,2H),6.36(dd,J＝17.0,1.4Hz,1H),6.15(dd,J＝17.0,10.3Hz,1H),5.70(dd,J＝10.3,1.4Hz,1H),4.59(d,J＝5.9Hz,2H),3.90(s,2H),3.39(s,2H),2.87(s,3H),2.83(t,J＝6.3Hz,2H).ESI-MS m/z 325.2025(M+H)⁺，计算值：325.2028。

实施例11

本实施例提供了一种化合物A₁₁的制备方法：化合物A₁₁的制备方法参考实施例1中化合物A₁的制备方法，区别在于：将步骤(1)中的化合物U_1-1替换为等摩尔的3-溴苄胺，将步骤(5)中的E_1-1替换为等摩尔的5-溴吡啶-3-甲醛，将步骤(5)中的F_1-1替换为等摩尔的F_2-2。制备得到的目标化合物A₁₁为灰白色固体51mg，最后一步得到化合物A₁₁的产率为46.9％。¹HNMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.72(s,1H),8.46(d,J＝24.4Hz,1H),7.90(d,J＝27.9Hz,1H),7.64(s,1H),7.52(dt,J＝7.6,1.6Hz,1H),7.43(t,J＝7.6Hz,1H),7.38(d,J＝7.5Hz,1H),7.17(s,1H),6.34(dd,J＝17.1,1.8Hz,1H),6.23(t,J＝13.7Hz,1H),5.62(d,J＝10.3Hz,1H),4.61(d,J＝5.9Hz,2H),3.60(s,2H),3.34(s,2H),2.79(s,3H),2.53(d,J＝36.5Hz,2H),2.32(d,J＝28.5Hz,3H).ESI-MS m/z 339.2183(M+H)⁺，计算值：339.2185。

实施例12

本实施例提供了一种化合物A₁₂的制备方法：化合物A₁₂的制备方法参考实施例1中化合物A₁的制备方法，区别在于：不包括步骤(1)-(3)，将步骤(4)中的Y_1-1替换为等摩尔的3-氨基苯硼酸频哪醇酯，将步骤(5)中的E_1-1替换为等摩尔的5-溴吡啶-3-甲醛，将步骤(5)中的F_1-1替换为等摩尔的F_2-2。制备得到的目标化合物A₁₂为淡黄色固体73mg，最后一步得到化合物A₁₂的产率为71.7％。¹H NMR(400MHz,Methanol-d₄)δ9.60(d,J＝10.1Hz,1H),9.38(s,1H),9.33(s,1H),9.28(s,1H),8.30(s,1H),7.75(dd,J＝16.2,7.8Hz,2H),7.69(s,1H),7.60(t,J＝7.7Hz,1H),6.52(dd,J＝17.0,9.8Hz,1H),6.43(dd,J＝16.9,2.0Hz,1H),5.84(dd,J＝9.8,2.0Hz,1H),3.86–3.79(m,4H),3.71(d,J＝5.7Hz,3H),2.85(s,3H),2.81(s,2H).ESI-MS m/z 325.2025(M+H)⁺，计算值：325.2028。

实施例13

本实施例提供了一种化合物A₁₃的制备方法：化合物A₁₃的制备方法参考实施例1中化合物A₁的制备方法，区别在于：将步骤(5)中的E_1-1替换为等摩尔的5-溴吡啶-3-甲醛，将步骤(5)中的F_1-1替换为等摩尔的2-(甲基氨基)丙基氨基甲酸叔丁酯F_5-5。制备得到的目标化合物A₁₃为褐色固体45mg，最后一步得到化合物A₁₃的产率为39.8％。¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.70(d,J＝2.2Hz,1H),8.49(d,J＝2.0Hz,1H),7.83(t,J＝2.1Hz,1H),7.57(d,J＝8.2Hz,2H),7.44–7.36(m,2H),6.35(dd,J＝16.9,1.4Hz,1H),6.14(dd,J＝17.0,10.3Hz,1H),5.99(s,1H),5.70(dd,J＝10.3,1.4Hz,1H),5.07(s,1H),4.58(d,J＝5.9Hz,2H),3.56(s,2H),3.19(d,J＝6.6Hz,2H),2.48(t,J＝6.7Hz,2H),2.22(s,3H),1.71(t,J＝6.7Hz,2H).ESI-MS m/z 339.2182(M+H)⁺，计算值：339.2185。

实施例14

本实施例提供了一种化合物A₁₄的制备方法：化合物A₁₄的制备方法参考实施例1中化合物A₁的制备方法，区别在于：不包括步骤(1)，将步骤(2)中的T_1-1替换为等摩尔的N-BOC-2-四溴苯乙胺T_2-2，将步骤(5)中的E_1-1替换为等摩尔的5-溴吡啶-3-甲醛。制备得到的目标化合物A₁₄为褐色固体55mg，最后一步得到化合物A₁₄的产率为42.6％。¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.73(d,J＝2.2Hz,1H),8.49(d,J＝2.0Hz,1H),7.82(d,J＝2.2Hz,1H),7.56(d,J＝8.2Hz,2H),7.32(d,J＝8.0Hz,2H),6.28(dd,J＝17.0,1.4Hz,1H),6.05(dd,J＝17.0,10.3Hz,1H),5.64(dd,J＝10.3,1.4Hz,1H),4.94(s,1H),3.65(q,J＝6.7Hz,2H),3.59(s,2H),3.31–3.24(m,2H),2.93(t,J＝7.0Hz,2H),2.55(t,J＝6.1Hz,2H),2.24(s,3H).ESI-MS m/z 339.2182(M+H)⁺，计算值：339.2185。

实施例15

本实施例提供了一种化合物A₁₅的制备方法：化合物A₁₅的制备方法参考实施例1中化合物A₁的制备方法，区别在于：不包括步骤(1)，将步骤(2)中的T_1-1替换为等摩尔的N-BOC-2-四溴苯乙胺T_2-2，将步骤(5)中的E_1-1替换为等摩尔的5-溴吡啶-3-甲醛，将步骤(5)中的F_1-1替换为等摩尔的F_2-2。制备得到的目标化合物A₁₅为褐色固体61mg，最后一步得到化合物A₁₅的产率为45.8％。¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.72(d,J＝2.2Hz,1H),8.48(d,J＝2.0Hz,1H),7.85(s,1H),7.59–7.50(m,2H),7.31(d,J＝8.0Hz,2H),6.28(dd,J＝17.0,1.5Hz,1H),6.06(dd,J＝17.0,10.3Hz,1H),5.63(dd,J＝10.3,1.4Hz,1H),3.65(q,J＝6.8Hz,2H),3.61(s,2H),3.37(d,J＝27.3Hz,2H),2.92(t,J＝6.9Hz,2H),2.84(s,3H),2.56(s,2H),2.29(s,3H).ESI-MS m/z 353.2340(M+H)⁺，计算值：353.2341。

实施例16

本实施例提供了一种化合物A₁₆的制备方法：化合物A₁₆的制备方法参考实施例1中化合物A₁的制备方法，区别在于：不包括步骤(1)-(3)，将步骤(4)中的Y_1-1替换为等摩尔的3-氨基苯硼酸频哪醇酯，将步骤(5)中的E_1-1替换为等摩尔的5-溴吡啶-3-甲醛。制备得到的目标化合物A₁₆为褐色固体83mg，最后一步得到化合物A₁₆的产率为67.2％。¹H NMR(400MHz,Methanol-d₄)δ9.37–9.31(m,2H),9.26(d,J＝1.7Hz,1H),8.32(t,J＝1.9Hz,1H),7.74(ddd,J＝10.0,8.2,1.9Hz,2H),7.60(t,J＝8.0Hz,1H),6.52(dd,J＝16.9,9.7Hz,1H),6.44(dd,J＝16.9,2.1Hz,1H),5.85(dd,J＝9.7,2.2Hz,1H),3.72(t,J＝6.7Hz,2H),3.62(dd,J＝6.8,2.8Hz,4H),3.02(s,3H).ESI-MS m/z311.1870(M+H)⁺，计算值：311.1872。

实施例17

本实施例提供了一种化合物A₁₇的制备方法：化合物A₁₇的制备方法参考实施例1中化合物A₁的制备方法，区别在于：将步骤(1)中的化合物U_1-1替换为等摩尔的3-溴苄胺，将步骤(5)中的E_1-1替换为等摩尔的5-溴吡啶-3-甲醛。制备得到的目标化合物A₁₇为褐色固体47mg，最后一步得到化合物A₁₇的产率为51.3％。¹H NMR(400MHz,Methanol-d₄)δ9.42(t,J＝1.9Hz,1H),9.35(d,J＝1.9Hz,1H),9.25(d,J＝1.7Hz,1H),7.93(d,J＝1.8Hz,1H),7.91–7.87(m,1H),7.61(t,J＝7.6Hz,1H),7.55(d,J＝8.2Hz,1H),6.37(dd,J＝17.1,9.8Hz,1H),6.28(dd,J＝17.1,2.2Hz,1H),5.72(dd,J＝9.8,2.3Hz,1H),5.12(s,1H),4.59(d,J＝3.3Hz,2H),3.75(t,J＝6.8Hz,2H),3.63(td,J＝6.8,4.4Hz,2H),3.03(s,3H),3.00(d,J＝6.6Hz,2H).ESI-MS m/z 325.2028(M+H)⁺，计算值：325.2028。

实施例18

本实施例提供了一种化合物A₁₈的制备方法：化合物A₁₈的制备方法参考实施例1中化合物A₁的制备方法，区别在于：将步骤(5)中的E_1-1替换为等摩尔的5-溴吡啶-3-甲醛，将步骤(5)中的F_1-1替换为等摩尔的4-(甲基氨基)丁基氨基甲酸叔丁酯F_6-6。制备得到的目标化合物A₁₈为淡黄色固体41mg，最后一步得到化合物A₁₈的产率为39.3％。¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.59(d,J＝2.3Hz,1H),8.45(d,J＝2.0Hz,1H),7.82(s,1H),7.51(d,J＝8.0Hz,2H),7.38(d,J＝7.8Hz,2H),6.88(s,1H),6.34(dd,J＝17.1,1.7Hz,1H),6.21(dd,J＝16.9,10.1Hz,1H),5.66(dd,J＝10.1,1.7Hz,1H),4.97(s,1H),4.55(d,J＝5.8Hz,2H),3.53(s,2H),3.10(d,J＝6.8Hz,2H),2.40(d,J＝7.0Hz,2H),2.20(s,3H),1.53(h,J＝5.9,5.5Hz,4H).ESI-MS m/z 353.2337(M+H)⁺，计算值：353.2341。

实施例19

本实施例提供了一种化合物A₁₉的制备方法：化合物A₁₉的制备方法参考实施例1中化合物A₁的制备方法，区别在于：直接采用市售的Y_1-1，将步骤(4)中的Q_1-1替换为等摩尔的反式-4-二甲基胺基巴豆酰氯盐酸盐，将步骤(5)中的E_1-1替换为等摩尔的5-溴吡啶-3-甲醛，将步骤(5)中的F_1-1替换为等摩尔的F_2-2。制备得到的目标化合物A₁₉为黄褐色固体50mg，最后一步得到化合物A₁₉的产率为42.7％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.71(s,1H),10.76(s,1H),9.05(s,1H),8.93(s,1H),8.81(s,1H),8.65(s,1H),7.82(d,J＝7.9Hz,2H),7.44(d,J＝7.9Hz,2H),6.70(dt,J＝14.7,7.1Hz,1H),6.35(d,J＝15.4Hz,1H),4.48(s,2H),4.43(d,J＝5.9Hz,2H),3.87(t,J＝6.1Hz,2H),3.47(s,4H),2.77(s,3H),2.73(d,J＝4.8Hz,6H),2.60(t,J＝5.2Hz,3H).ESI-MS m/z 396.2767(M+H)⁺，计算值：396.2763。

实施例20

本实施例提供了一种化合物A₂₀的制备方法：化合物A₂₀的制备方法参考实施例1中化合物A₁的制备方法，区别在于：不包括步骤(1)，将步骤(2)中的T_1-1替换为等摩尔的N-Boc-1,2,5,6-四氢吡啶-4-硼酸频哪醇酯，将步骤(5)中的E_1-1替换为等摩尔的5-溴吡啶-3-甲醛。制备得到的目标化合物A₂₀为黄褐色固体69mg，最后一步得到化合物A₂₀的产率为51.3％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.55(s,1H),8.38(d,J＝1.9Hz,1H),7.73(s,1H),6.95–6.77(m,1H),6.69(s,1H),6.30(s,1H),6.19–6.05(m,1H),5.71(dd,J＝10.5,2.4Hz,1H),4.24(d,J＝35.2Hz,2H),3.77(d,J＝8.2Hz,2H),3.52(s,2H),3.28(s,2H),3.07(d,J＝6.7Hz,2H),2.38(s,2H),2.14(s,3H).ESI-MS m/z301.2029(M+H)⁺，计算值：301.2028。

实施例21

本实施例提供了一种化合物A₂₁的制备方法：化合物A₂₁的制备方法参考实施例1中化合物A₁的制备方法，区别在于：不包括步骤(1)，将步骤(2)中的T_1-1替换为等摩尔的N-Boc-1,2,5,6-四氢吡啶-4-硼酸频哪醇酯，将步骤(5)中的E_1-1替换为等摩尔的5-溴吡啶-3-甲醛，将步骤(5)中的F_1-1替换为等摩尔的F_2-2。制备得到的目标化合物A₂₁为黄褐色固体72mg，最后一步得到化合物A₂₁的产率为50.4％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.55(s,1H),8.37(d,J＝2.0Hz,1H),7.70(s,1H),6.86(dq,J＝26.1,14.8,12.6Hz,1H),6.29(s,1H),6.14(d,J＝16.6Hz,1H),5.71(dd,J＝10.4,2.4Hz,1H),4.23(d,J＝35.9Hz,2H),3.77(s,2H),3.53(s,2H),3.28(s,2H),2.74(d,J＝16.6Hz,4H),2.44(s,3H),2.20(s,3H).ESI-MSm/z 315.2183(M+H)⁺，计算值：315.2185。

实施例22

本实施例提供了一种化合物A₂₂的制备方法：化合物A₂₂的制备方法参考实施例1中化合物A₁的制备方法，区别在于：不包括步骤(1)-(3)，将步骤(4)中的Y_1-1替换为等摩尔的3-氨基苯硼酸频哪醇酯，将步骤(5)中的E_1-1替换为等摩尔的5-溴吲哚-3-甲醛，将步骤(5)中的F_1-1替换为等摩尔的F_2-2。制备得到的目标化合物A₂₂为黄褐色固体88mg，最后一步得到化合物A₂₂的产率为89.3％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.98(s,1H),10.18(s,1H),7.94(s,1H),7.82(s,1H),7.64(s,1H),7.44–7.32(m,4H),7.25(d,J＝2.2Hz,1H),6.47(dd,J＝17.0,10.1Hz,1H),6.28(dd,J＝16.8,2.1Hz,1H),5.79–5.74(m,1H),3.68(s,2H),3.28(s,3H),2.75(s,3H),2.43–2.49(m,2H),2.19(s,2H).ESI-MS m/z 363.2184(M+H)⁺，计算值：363.2185。

实施例23

本实施例提供了一种化合物A₂₃的制备方法：化合物A₂₃的制备方法参考实施例1中化合物A₁的制备方法，区别在于：将步骤(5)中的E_1-1替换为等摩尔的5-溴吲哚-3-甲醛，将步骤(5)中的F_1-1替换为等摩尔的F_2-2。制备得到的目标化合物A₂₃为淡黄色固体79mg，最后一步得到化合物A₂₃的产率为76.9％。¹H NMR(400MHz,Methanol-d₄)δ8.06(t,J＝1.2Hz,1H),7.73(d,J＝2.0Hz,1H),7.71(s,2H),7.54(dd,J＝2.4,1.2Hz,2H),7.40(d,J＝8.2Hz,2H),6.38–6.29(m,2H),5.72(dd,J＝9.0,3.1Hz,1H),4.74(d,J＝9.2Hz,2H),4.51(s,2H),3.52(d,J＝4.8Hz,2H),3.37(s,2H),2.98(d,J＝1.8Hz,3H),2.76(s,3H).ESI-MS m/z 377.2337(M+H)⁺，计算值：377.2341。

实施例24

本实施例提供了一种化合物A₂₄的制备方法：化合物A₂₄的制备方法参考实施例1中化合物A₁的制备方法，区别在于：不包括步骤(1)-(3)，将步骤(4)中的Y_1-1替换为等摩尔的3-氨基苯硼酸频哪醇酯，将步骤(5)中的E_1-1替换为等摩尔的6-溴咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲醛。制备得到的目标化合物A₂₄为黄褐色固体67mg，最后一步得到化合物A₂₄的产率为60.3％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.30(s,1H),8.62(s,1H),8.05(s,1H),7.70–7.62(m,2H),7.55–7.50(m,2H),7.49–7.40(m,2H),6.48(dd,J＝17.0,10.1Hz,1H),6.30(dd,J＝17.0,2.0Hz,1H),5.79(dd,J＝10.1,2.1Hz,1H),3.90(s,2H),3.07(q,J＝6.5Hz,2H),2.44(t,J＝6.9Hz,2H),2.18(s,3H).ESI-MS m/z350.1981(M+H)⁺，计算值：350.1981。

实施例25

本实施例提供了一种化合物A₂₅的制备方法：化合物A₂₅的制备方法参考实施例1中化合物A₁的制备方法，区别在于：将步骤(5)中的E_1-1替换为等摩尔的6-溴咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲醛。制备得到的目标化合物A₂₅为黄褐色固体61mg，最后一步得到化合物A₂₅的产率为57.8％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.64(t,J＝6.1Hz,1H),8.60(t,J＝1.4Hz,1H),7.68(d,J＝7.9Hz,2H),7.64(d,J＝9.3Hz,1H),7.56(dd,J＝9.4,1.8Hz,1H),7.50(s,1H),7.40(d,J＝8.0Hz,2H),6.30(dd,J＝17.1,10.1Hz,1H),6.14(dd,J＝17.1,2.3Hz,1H),5.63(dd,J＝10.1,2.3Hz,1H),4.40(d,J＝5.8Hz,2H),3.89(s,2H),3.05(d,J＝6.7Hz,2H),2.43(t,J＝6.8Hz,2H),2.16(s,3H).ESI-MS m/z 364.2141(M+H)⁺，计算值：364.2137。

实施例26

本实施例提供了一种化合物A₂₆的制备方法：化合物A₂₆的制备方法参考实施例1中化合物A₁的制备方法，区别在于：不包括步骤(1)-(3)，将步骤(4)中的Y_1-1替换为等摩尔的3-氨基苯硼酸频哪醇酯，将步骤(5)中的E_1-1替换为等摩尔的5-溴-1H-吲哚-3-甲醛。制备得到的目标化合物A₂₆为黄褐色固体59mg，最后一步得到化合物A₂₆的产率为45.2％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.67(s,1H),11.12(s,1H),10.35(s,1H),8.31(s,1H),8.12(d,J＝2.0Hz,1H),7.71(s,1H),7.63(dd,J＝7.7,2.0Hz,1H),7.46(dt,J＝15.5,7.7Hz,2H),6.52(dd,J＝17.0,10.1Hz,1H),6.29(dd,J＝17.0,2.0Hz,1H),5.78(dd,J＝10.1,2.1Hz,1H),4.85(s,2H),3.31(s,4H),2.89(s,3H).ESI-MS m/z 350.1974(M+H)⁺，计算值：350.1981。

实施例27

本实施例提供了一种化合物A₂₇的制备方法：化合物A₂₇的制备方法参考实施例1中化合物A₁的制备方法，区别在于：将步骤(5)中的E_1-1替换为等摩尔的5-溴-1H-吲哚-3-甲醛。制备得到的目标化合物A₂₇为黄褐色固体64mg，最后一步得到化合物A₂₇的产率为49.1％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.64(s,1H),11.30(s,1H),8.67(t,J＝6.0Hz,1H),8.38(s,1H),7.75(dd,J＝8.6,1.7Hz,2H),7.68(d,J＝8.8Hz,1H),7.38(d,J＝8.0Hz,2H),6.31(dd,J＝17.1,10.2Hz,1H),6.14(dd,J＝17.1,2.2Hz,1H),5.63(dd,J＝10.1,2.2Hz,1H),4.84(s,2H),4.40(d,J＝5.8Hz,2H),3.37–3.27(m,4H),2.88(s,3H).ESI-MS m/z 364.2136(M+H)⁺，计算值：364.2137。

实施例28

本实施例提供了一种化合物A₂₈的制备方法：化合物A₂₈的制备方法参考实施例1中化合物A₁的制备方法，区别在于：将步骤(5)中的E_1-1替换为等摩尔的5-溴-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-甲醛。制备得到的目标化合物A₂₈为灰白色固体73mg，最后一步得到化合物A₂₈的产率为78.5％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.19(s,1H),8.65(t,J＝6.0Hz,1H),8.29–8.15(m,2H),7.96(dd,J＝14.8,8.4Hz,3H),7.69(t,J＝8.6Hz,2H),7.42(d,J＝8.1Hz,2H),7.36(d,J＝8.1Hz,2H),6.30(dd,J＝17.1,10.1Hz,1H),6.13(dd,J＝17.1,2.3Hz,1H),5.63(dd,J＝10.2,2.3Hz,1H),4.62(d,J＝19.2Hz,2H),4.39(d,J＝5.9Hz,2H),3.33(s,4H),2.78(s,3H),2.33(s,3H).ESI-MS m/z 517.2276(M+H)⁺，计算值：517.2273。

实施例29

本实施例提供了一种化合物A₂₉的制备方法：化合物A₂₉的制备方法参考实施例1中化合物A₁的制备方法，区别在于：不包括步骤(1)-(3)，将步骤(4)中的Y_1-1替换为等摩尔的4-氨基苯硼酸频哪醇酯Y_2-2，将步骤(5)中的E_1-1替换为等摩尔的5-溴-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-甲醛。制备得到的目标化合物A₂₉为灰白色固体79mg，最后一步得到化合物A₂₉的产率为81.2％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.30(s,1H),10.32(s,1H),8.22(s,1H),7.95(t,J＝9.0Hz,3H),7.82–7.66(m,5H),7.42(d,J＝8.2Hz,2H),6.48(dd,J＝17.0,10.1Hz,1H),6.27(dd,J＝17.0,2.0Hz,1H),5.77(dd,J＝10.1,2.1Hz,1H),4.63(d,J＝22.0Hz,2H),3.34(s,4H),2.78(s,3H),2.33(s,3H).ESI-MS m/z503.2174(M+H)⁺，计算值：503.2117。

实施例30

本实施例提供了一种化合物A₃₀的制备方法：化合物A₃₀的制备方法参考实施例1中化合物A₁的制备方法，区别在于：不包括步骤(1)-(3)，将步骤(4)中的Y_1-1替换为等摩尔的3-氨基苯硼酸频哪醇酯，将步骤(5)中的E_1-1替换为等摩尔的5-溴-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-甲醛，将步骤(5)中的F_1-1替换为等摩尔的F_2-2。制备得到的目标化合物A₃₀为灰白色固体57mg，最后一步得到化合物A₃₀的产率为53.8％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.25(s,1H),10.39(s,1H),8.16(s,1H),8.09–8.00(m,2H),7.98–7.91(m,3H),7.64(td,J＝8.9,8.4,3.9Hz,2H),7.48–7.40(m,4H),6.52(dd,J＝17.0,10.1Hz,1H),6.27(dd,J＝17.0,2.0Hz,1H),5.77(dd,J＝10.1,2.1Hz,1H),4.65(d,J＝31.2Hz,2H),2.75(d,J＝16.8Hz,4H),2.60(s,6H),2.34(s,3H).ESI-MS m/z 517.2265(M+H)⁺，计算值：517.2273。

实施例31

本实施例提供了一种化合物A₃₁的制备方法：化合物A₃₁的制备方法参考实施例1中化合物A₁的制备方法，区别在于：不包括步骤(1)-(3)，将步骤(4)中的Y_1-1替换为等摩尔的3-氨基苯硼酸频哪醇酯，将步骤(5)中的E_1-1替换为等摩尔的5-溴-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-甲醛。制备得到的目标化合物A₃₁为灰白色固体68mg，最后一步得到化合物A₃₁的产率为58.8％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.36(s,1H),10.40(s,1H),8.16(s,1H),8.08–7.99(m,2H),7.98–7.91(m,2H),7.65(ddd,J＝13.4,8.1,1.8Hz,2H),7.43(t,J＝6.5Hz,4H),6.52(dd,J＝17.0,10.2Hz,1H),6.28(dd,J＝17.0,2.0Hz,1H),5.77(dd,J＝10.2,2.1Hz,1H),4.64(d,J＝20.1Hz,2H),3.35(s,4H),2.84(s,3H),2.34(s,3H).ESI-MS m/z 503.2121(M+H)⁺，计算值：503.2117。

实施例32

本实施例提供了一种化合物A₃₂的制备方法，合成路线如下：

具体步骤如下：

(a)C_3-3的合成：将5-溴烟酸(E_3-3，500mg，2.48mmol)、(2-氨基乙基)氨基甲酸叔丁酯(F_3-3，475.3mg，2.73mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI)(855.0mg，4.46mmol)、1-羟基-7-偶氮苯并三氮唑(HOAT)(607.1mg，4.46mmol)、N-甲基吗啉(1.36mL，12.40mmol)加入20ml二甲基亚砜(DMSO)中，室温反应过夜。TLC检测反应完毕后，将反应液倒入冰水中，加入二氯甲烷萃取。收集有机相，浓缩，柱层析得到目标产物C_3-3，淡黄色粘稠液体570mg，产率：66.8％。

(b)B_3-3的合成：将化合物C_3-3(200mg，0.58mmol)，化合物D_1-1(200mg，0.70mmol)，碳酸钠(246mg，2.32mmol)加入到二氧六环/水＝4：1的混合溶液中，氮气置换五次。随后加入[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(43mg，0.06mmol)，氮气置换五次。100℃加热4h，真空条件下减压浓缩，乙酸乙酯萃取，有机层合并后采用流动相为二氯甲烷：甲醇＝15：1的柱层析条件提纯得到产物B_3-3，淡黄色粘稠状液体118mg，产率：47.9％。

(c)A₃₂的合成：参考实施例1中的步骤(7)，将化合物B_1-1替换为化合物B_3-3(118mg，0.278mmol)，其余条件相同，得到终产物A₃₂，褐色固体90mg，产率：89.7％。¹H NMR(400MHz,Methanol-d₄)δ8.05(s,1H),8.03(s,1H),7.97(d,J＝1.8Hz,1H),6.63(d,J＝8.0Hz,2H),6.27(d,J＝8.0Hz,2H),5.10–4.94(m,2H),4.42(dd,J＝9.3,2.7Hz,1H),3.26(s,2H),2.49(t,J＝5.9Hz,2H),1.98(t,J＝5.9Hz,2H).ESI-MS m/z 325.1658(M+H)⁺，计算值：325.1664。

实施例33

本实施例提供了一种化合物A₃₃的制备方法：化合物A₃₃的制备方法参考实施例32中化合物A₃₂的制备方法，区别在于：将步骤(a)中的F_3-3替换为等摩尔的F_4-4。制备得到的目标化合物A₃₃为黄褐色固体82mg，最后一步得到化合物A₃₃的产率为80.3％。¹H NMR(400MHz,Methanol-d₄)δ9.35(t,J＝1.9Hz,1H),9.33(d,J＝2.0Hz,1H),9.27(d,J＝1.7Hz,1H),7.99–7.88(m,2H),7.58(d,J＝8.2Hz,2H),6.40–6.26(m,2H),5.73(dd,J＝9.3,2.8Hz,1H),4.57(s,2H),3.83(dd,J＝6.2,5.0Hz,2H),3.36(d,J＝5.7Hz,2H),2.80(s,3H).ESI-MS m/z339.1816(M+H)⁺，计算值：339.1821。

实施例34

本实施例提供了一种化合物A₃₄的制备方法：化合物A₃₄的制备方法参考实施例32中化合物A₃₂的制备方法，区别在于：将步骤(a)中的F_3-3替换为等摩尔的F_1-1。制备得到的目标化合物A₃₄为黄褐色固体54mg，最后一步得到化合物A₃₄的产率为46.3％。¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.85(d,J＝2.2Hz,1H),8.64(s,1H),7.93(s,1H),7.56(d,J＝8.0Hz,2H),7.42(d,J＝7.9Hz,2H),6.36(dd,J＝17.0,1.4Hz,1H),6.15(dd,J＝17.0,10.3Hz,1H),5.96(s,1H),5.71(dd,J＝10.3,1.4Hz,1H),4.59(d,J＝5.9Hz,2H),3.71(s,2H),3.47(s,2H),3.13(s,3H).ESI-MS m/z 339.1818(M+H)⁺，计算值：339.1821。

实施例35

本实施例提供了一种化合物A₃₅的制备方法：化合物A₃₅的制备方法参考实施例32中化合物A₃₂的制备方法，区别在于：将步骤(a)中的F_3-3替换为等摩尔的F_2-2。制备得到的目标化合物A₃₅为黄褐色固体59mg，最后一步得到化合物A₃₅的产率为52.4％。¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.84(s,1H),8.64(s,1H),7.91(d,J＝11.6Hz,1H),7.55(d,J＝7.8Hz,2H),7.42(d,J＝7.7Hz,2H),6.36(dd,J＝17.0,1.5Hz,1H),6.15(dd,J＝16.9,10.3Hz,1H),5.96(s,1H),5.70(dd,J＝10.3,1.4Hz,1H),4.59(d,J＝5.9Hz,2H),3.66(s,3H),3.14(s,3H),2.96(s,2H),2.54(s,2H).ESI-MS m/z 353.1975(M+H)⁺，计算值：353.1977。

实施例36

本实施例提供了一种化合物A₃₆的制备方法，化合物A₃₆的制备方法参考实施例32中化合物A₃₂的制备方法，区别在于：将步骤(a)中的F_3-3替换为等摩尔的F_4-4，将步骤(a)中的E_3-3替换为等摩尔的6-溴-1H-吲哚-4-羧酸，将步骤(b)中的D_1-1替换为等摩尔的3-丙烯酰胺基苯硼酸频呐醇酯D_2-2。制备得到的目标化合物A₃₆为黄褐色固体67mg，最后一步得到化合物A₃₆的产率为59.3％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.46(s,1H),10.35(s,1H),8.62(t,J＝5.6Hz,1H),8.12(t,J＝1.9Hz,1H),7.84–7.76(m,2H),7.68–7.61(m,1H),7.54–7.40(m,4H),6.93(t,J＝2.5Hz,1H),6.57–6.44(m,1H),6.29(dd,J＝17.0,2.1Hz,1H),5.78(dd,J＝10.1,2.0Hz,1H),3.64(q,J＝5.9Hz,2H),3.15(q,J＝6.1Hz,2H),2.61(t,J＝5.5Hz,3H).ESI-MS m/z 363.1822(M+H)⁺，计算值：363.1821。

实施例37

本实施例提供了一种化合物A₃₇的制备方法：化合物A₃₇的制备方法参考实施例32中化合物A₃₂的制备方法，区别在于：将步骤(a)中的F_3-3替换为等摩尔的F_4-4，将步骤(a)中的E_3-3替换为等摩尔的6-溴-1H-吲哚-4-羧酸。制备得到的目标化合物A₃₇为黄褐色固体57mg，最后一步得到化合物A₃₇的产率为49.8％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.39(s,1H),8.78(s,1H),8.67(d,J＝5.9Hz,1H),7.83(d,J＝1.5Hz,1H),7.79(s,1H),7.76–7.71(m,2H),7.48(t,J＝2.7Hz,1H),7.40–7.35(m,2H),6.94–6.90(m,1H),6.32(dd,J＝17.1,10.2Hz,1H),6.22–6.01(m,1H),5.63(dd,J＝10.1,2.3Hz,1H),4.40(d,J＝5.9Hz,2H),3.63(q,J＝5.9Hz,2H),3.13(d,J＝5.8Hz,2H),2.61(t,J＝5.4Hz,3H).ESI-MS m/z 377.1974(M+H)⁺，计算值：377.1977。

实施例38

本实施例提供了一种化合物A₃₈的制备方法：化合物A₃₈的制备方法参考实施例32中化合物A₃₂的制备方法，区别在于：将步骤(a)中的F_3-3替换为等摩尔的F_1-1，将步骤(a)中的E_3-3替换为等摩尔的6-溴-1H-吲哚-4-羧酸，将步骤(b)中的D_1-1替换为等摩尔的D_2-2。制备得到的目标化合物A₃₈为黄褐色固体81mg，最后一步得到化合物A₃₈的产率为78.4％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.46(s,1H),10.36(s,1H),8.12(s,1H),7.71(t,J＝1.2Hz,1H),7.63(dt,J＝6.5,2.3Hz,1H),7.50(t,J＝2.8Hz,1H),7.43–7.38(m,2H),6.52(dd,J＝17.0,10.1Hz,1H),6.41(s,1H),6.29(dd,J＝17.0,2.0Hz,1H),5.78(dd,J＝10.1,2.0Hz,1H),3.77(s,2H),3.13(s,2H),2.96(d,J＝8.7Hz,3H).ESI-MS m/z 363.1820(M+H)⁺，计算值：363.1821。

实施例39

本实施例提供了一种化合物A₃₉的制备方法：化合物A₃₉的制备方法参考实施例32中化合物A₃₂的制备方法，区别在于：将步骤(a)中的F_3-3替换为等摩尔的F_1-1，将步骤(a)中的E_3-3替换为等摩尔的6-溴-1H-吲哚-4-羧酸。制备得到的目标化合物A₃₉为黄褐色固体63mg，最后一步得到化合物A₃₉的产率为56.9％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.41(s,1H),8.67(t,J＝6.0Hz,1H),8.04(s,2H),7.70(t,J＝1.2Hz,1H),7.67(s,1H),7.65(s,1H),7.47(t,J＝2.8Hz,1H),7.36(d,J＝8.1Hz,2H),6.39(s,1H),6.32(dd,J＝17.1,10.1Hz,1H),6.14(dd,J＝17.1,2.2Hz,1H),5.63(dd,J＝10.1,2.2Hz,1H),4.40(d,J＝5.9Hz,2H),3.13(s,3H),2.96(d,J＝10.9Hz,4H).ESI-MS m/z 377.1974(M+H)⁺，计算值：377.1977。

实施例40

本实施例提供了一种化合物A₄₀的制备方法：化合物A₄₀的制备方法参考实施例32中化合物A₃₂的制备方法，区别在于：将步骤(a)中的F_3-3替换为等摩尔的F_1-1，将步骤(a)中的E_3-3替换为等摩尔的4-溴-1H-吲唑-6-羧酸，将步骤(b)中的D_1-1替换为等摩尔的D_2-2。制备得到的目标化合物A₄₀为黄褐色固体74mg，最后一步得到化合物A₄₀的产率为63.8％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.38(s,1H),8.49(s,1H),8.17(s,1H),8.11(d,J＝8.8Hz,1H),7.91–7.74(m,2H),7.68(q,J＝4.1,3.3Hz,1H),7.58(s,1H),7.46(d,J＝5.1Hz,2H),7.44(d,J＝6.4Hz,1H),6.51(dd,J＝17.0,10.2Hz,1H),6.29(dd,J＝16.9,2.0Hz,1H),5.79(dd,J＝10.1,2.1Hz,1H),3.79(s,2H),2.98(s,5H).ESI-MS m/z 364.1790(M+H)⁺，计算值：364.1773。

实施例41

本实施例提供了一种化合物A₄₁的制备方法：化合物A₄₁的制备方法参考实施例32中化合物A₃₂的制备方法，区别在于：将步骤(a)中的F_3-3替换为等摩尔的F_1-1，将步骤(a)中的E_3-3替换为等摩尔的4-溴-1H-吲唑-6-羧酸。制备得到的目标化合物A₄₁为黄褐色固体57mg，最后一步得到化合物A₄₁的产率为53.4％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.28(s,1H),8.65(t,J＝6.0Hz,1H),8.03(s,1H),7.76(s,1H),7.71(d,J＝8.2Hz,2H),7.38(d,J＝8.0Hz,3H),6.30(dd,J＝17.1,10.1Hz,1H),6.14(dd,J＝17.1,2.2Hz,1H),5.63(dd,J＝10.1,2.2Hz,1H),4.41(d,J＝6.0Hz,2H),3.28(s,2H),3.07(s,2H),2.90(s,3H).ESI-MS m/z 378.1925(M+H)⁺，计算值：378.1930。

实施例42

本实施例提供了一种化合物A₄₂的制备方法：化合物A₄₂的制备方法参考实施例32中化合物A₃₂的制备方法，区别在于：将步骤(a)中的F_3-3替换为等摩尔的F_4-4，将步骤(a)中的E_3-3替换为等摩尔的4-溴-1H-吲唑-6-羧酸，将步骤(b)中的D_1-1替换为等摩尔的D_2-2。制备得到的目标化合物A₄₂为黄褐色固体85mg，最后一步得到化合物A₄₂的产率为75.3％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.30(s,1H),10.28(s,1H),8.73(s,1H),8.40(s,1H),8.09(s,1H),7.85(d,J＝13.8Hz,2H),7.75–7.67(m,1H),7.54–7.44(m,2H),6.48(dd,J＝16.9,10.1Hz,1H),6.30(dd,J＝17.0,2.1Hz,1H),5.79(dd,J＝10.1,2.1Hz,1H),3.46(t,J＝5.3Hz,2H),3.42(d,J＝5.2Hz,2H),2.85(s,3H).ESI-MS m/z 364.1775(M+H)⁺，计算值：364.1773。

实施例43

本实施例提供了一种化合物A₄₃的制备方法：化合物A₄₃的制备方法参考实施例32中化合物A₃₂的制备方法，区别在于：将步骤(a)中的F_3-3替换为等摩尔的F_4-4，将步骤(a)中的E_3-3替换为等摩尔的4-溴-1H-吲唑-6-羧酸。制备得到的目标化合物A₄₃为黄褐色固体62mg，最后一步得到化合物A₄₃的产率为56.8％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.26(s,1H),8.72(s,1H),8.65(t,J＝6.1Hz,1H),8.39(s,1H),7.86(s,1H),7.77(d,J＝8.1Hz,2H),7.41(d,J＝8.0Hz,2H),6.31(dd,J＝17.1,10.1Hz,1H),6.15(dd,J＝17.1,2.3Hz,1H),5.64(dd,J＝10.1,2.3Hz,1H),4.42(d,J＝5.9Hz,2H),3.45(t,J＝5.4Hz,2H),3.42(d,J＝5.1Hz,2H),2.84(s,3H).ESI-MS m/z 378.1927(M+H)⁺，计算值：378.1930。

实施例44

本实施例提供了一种化合物A₄₄的制备方法，合成路线如上所示。

具体步骤如下：

(a₁)T₂的合成：0℃条件下，向装有Boc酸酐(4.8g,22mmol)的二氯甲烷溶液中滴加炔丙胺(U₂，1.1g,20mmol)，随后滴加三乙胺(4.05g,40mmol)。滴加完毕后，反应体系移至室温下继续反应2h。TLC检测反应完毕后，加入饱和氯化铵溶液/乙酸乙酯萃取。收集有机相，用饱和氯化铵、饱和碳酸氢钠、饱和氯化钠溶液洗涤，收集有机相，真空条件下减压浓缩得到目标化合物T₂，2.6g黄色油状液体，产率：83.9％。

(b₁)S₂的合成：将化合物T₂(1g,6.4mmol)、频那醇硼烷(1.4mL，9.6mmol)、三乙胺(100μL,0.64mmol)和双(环戊二烯)二氯氢化锆(165mg,0.64mmol)加入到圆底烧瓶中，65℃下反应16h。反应完成后，将反应体系冷却至室温，用饱和氯化铵溶液/乙酸乙酯萃取，收集有机相。有机相用饱和碳酸氢钠溶液、饱和氯化钠溶液洗涤后，收集有机相，浓缩，柱层析得到目标产物S₂，1.3g油状液体，产率：71.7％。

(c₁)Y_3-3的合成：将化合物S₂(200mg，0.71mmol)加入到二氯甲烷中，加入400μL三氟醋酸，室温条件下反应过夜。TCL检测反应完毕后，减压浓缩反应液。得到目标化合物Y_3-3，淡黄色粘稠状液体210mg(含三氟醋酸)，产率：100％。

(d₁)D_3-3的合成：将化合物D_3-3(129.4mg，0.71mmol)、碳酸钾(292.7mg，2.13mmol)加入到二氯甲烷中，0℃条件下滴加丙烯酰氯(Q_1-1，86μL，1.06mmol)。反应液在室温条件下反应4h。TCL监测反应完全后，加入水和二氯甲烷萃取，收集有机相。柱层析(二氯甲烷/甲醇＝30：1)得目标化合物D_3-3，淡黄色粘稠液体130mg，产率：77.2％。

(e₁)B_4-4的合成：将化合物C_4-4(200mg，0.58mmol)，化合物D_3-3(165mg，0.70mmol)，碳酸钠(246mg，2.32mmol)加入到二氧六环/水＝4：1的混合溶液中，氮气置换五次。随后加入[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(43mg，0.06mmol)，氮气置换五次。100℃加热4h，真空条件下减压浓缩，乙酸乙酯萃取，有机层合并后采用流动相为二氯甲烷：甲醇＝15：1的柱层析条件提纯得到产物B_4-4，黄褐色油状状液体150mg，产率：46.8％。

其中，C_4-4的合成参考实施例1的步骤(5)，区别在于：将E_1-1替换为5-溴吡啶-3-甲醛。得到淡黄色油状液体1.5g，产率：67.6％

(f₁)A₄₄的合成：参考实施例1中的步骤(7)，将化合物B_1-1替换为化合物B_4-4(150mg，0.40mmol)，其余条件相同，得到终产物A₄₄，淡黄色固体43mg，产率：39.1％。¹H NMR(400MHz,Methanol-d₄)δ9.14(d,J＝13.2Hz,1H),9.05(s,1H),9.00(s,1H),8.97(s,1H),8.93(d,J＝1.8Hz,1H),6.77(t,J＝5.2Hz,1H),6.67(d,J＝1.5Hz,1H),6.66–6.62(m,1H),6.24–6.17(m,2H),5.62(dd,J＝9.5,2.4Hz,1H),4.68(s,2H),3.58(t,J＝6.8Hz,2H),3.50(dd,J＝11.6,6.8Hz,2H),2.88(d,J＝4.4Hz,2H),2.86(s,3H).ESI-MS m/z 275.1871(M+H)⁺，计算值：275.1872。

实施例45

本实施例提供了一种化合物A₄₅的制备方法：化合物A₄₅的制备方法参考实施例44中化合物A₄₄的制备方法，区别在于：步骤(e₁)中的C_4-4的合成参考实施例1的步骤(5)，将E_1-1替换为5-溴吡啶-3-甲醛，F_3-3替换为等摩尔的F_4-4。制备得到的目标化合物为黄褐色固体62mg，最后一步得到化合物A₄₅的产率：50.8％。¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.40(s,2H),8.32(s,1H),7.81(s,1H),6.54(d,J＝16.1Hz,2H),6.41–6.28(m,2H),5.67(s,2H),4.15(t,J＝5.6Hz,2H),3.53(s,3H),3.30(s,2H),2.81(s,4H),2.37(s,3H).ESI-MS m/z289.2027(M+H)⁺，计算值：289.2028。

实施例46

本实施例提供了一种化合物A₄₆的制备方法：化合物A₄₆的制备方法参考实施例44中化合物A₄₄的制备方法，区别在于：步骤(e₁)中的C_4-4的合成参考实施例1的步骤(5)，将步骤(5)中的E_1-1替换为等摩尔的5-溴-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-甲醛。制备得到的目标化合物为褐色固体71mg，最后一步得到化合物A₄₆的产率：67.2％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.26(s,1H),8.41(t,J＝5.7Hz,1H),8.21(s,1H),7.97(s,1H),7.91(d,J＝8.2Hz,2H),7.85(d,J＝8.7Hz,1H),7.46(dd,J＝8.9,1.6Hz,1H),7.40(d,J＝8.2Hz,2H),6.54(d,J＝15.9Hz,1H),6.38–6.24(m,2H),6.11(dd,J＝17.1,2.3Hz,1H),5.61(dd,J＝10.2,2.3Hz,1H),4.61–4.50(m,2H),3.95(dt,J＝6.4,3.2Hz,2H),3.32(s,4H),2.73(s,3H),2.33(s,3H).ESI-MS m/z 467.2113(M+H)⁺，计算值：467.2117。

实施例47

本实施例提供了一种化合物A₄₇的制备方法：化合物A₄₇的制备方法参考实施例44中化合物A₄₄的制备方法，区别在于：步骤(e₁)中的C_4-4的合成参考实施例1的步骤(5)，将步骤(5)中的E_1-1替换为等摩尔的5-溴-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-甲醛，F_1-1替换为等摩尔的F_2-2。制备得到的目标化合物为褐色固体47mg，最后一步得到化合物A₄₇的产率：48.3％。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.17(s,1H),8.41(t,J＝5.8Hz,1H),8.22(s,1H),7.97(s,1H),7.91(d,J＝8.3Hz,2H),7.85(d,J＝8.6Hz,1H),7.46(dd,J＝8.8,1.6Hz,1H),7.40(d,J＝8.1Hz,2H),6.55(d,J＝16.0Hz,1H),6.38–6.31(m,1H),6.31–6.23(m,1H),6.11(dd,J＝17.1,2.2Hz,1H),5.61(dd,J＝10.2,2.3Hz,1H),4.57(d,J＝41.0Hz,2H),3.97–3.92(m,2H),2.73(s,4H),2.59(s,6H),2.33(s,3H).ESI-MS m/z481.2281(M+H)⁺，计算值：481.2273。

实施例48

本实施例提供了一种化合物A₄₈的制备方法，合成路线如下：

具体步骤如下：

(a₂)化合物K_4-4的合成：将化合物C_4-4(1g，2.90mmol)加入到二氯甲烷中，加入1mL三氟醋酸，室温条件下反应过夜。TCL检测反应完毕后，减压浓缩反应液。得到目标化合物K_4-4，淡黄色粘稠状液体1100mg(含三氟醋酸)，产率：100％。

(b₂)化合物C_5-5的合成：将化合物K_4-4(220mg，0.614mmol)、三乙胺(427μM，3.07mmol)加入到二氯甲烷中，冰浴条件下加入乙基磺酰氯(L_4-4，70μM，0.74mmol)，室温条件下反应5h。TCL检测反应完毕后，加入水和二氯甲烷萃取，收集有机相，减压浓缩反应液。柱层析得到目标化合物C_5-5，淡黄色油状液体100mg，产率：48.5％。

(c₂)化合物A₄₈的合成：将化合物C_5-5(100mg，0.30mmol)，化合物D_2-2(97.5mg，0.36mmol)，碳酸钠(126mg，1.2mmol)加入到二氧六环/水＝4：1的混合溶液中，氮气置换五次。随后加入[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(22mg，0.03mmol)，氮气置换五次。100℃加热4h，真空条件下减压浓缩，乙酸乙酯萃取，有机层合并后采用流动相为二氯甲烷：甲醇的柱层析条件提纯得到产物A₄₈，淡黄色粘稠状液体50mg，产率：41.4％。¹HNMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.77(d,J＝2.2Hz,1H),8.41(d,J＝2.0Hz,1H),8.34(s,1H),8.18(d,J＝8.1Hz,1H),7.98(t,J＝2.2Hz,1H),7.51(t,J＝2.0Hz,1H),7.45(t,J＝7.9Hz,1H),7.37(dt,J＝7.9,1.3Hz,1H),6.46(dd,J＝16.9,1.5Hz,1H),6.32(dd,J＝16.9,10.1Hz,1H),5.75(dd,J＝10.1,1.6Hz,1H),5.16(s,1H),3.64(s,2H),3.49(s,2H),3.22(s,2H),2.61–2.53(m,2H),2.37(s,3H),1.37(t,J＝7.4Hz,3H).ESI-MS m/z 403.1809(M+H)⁺，计算值：403.1804。

实施例49

本实施例提供了一种化合物A₄₉的制备方法：化合物A₄₉的制备方法参考实施例48中化合物A₄₈的制备方法，区别在于：将步骤(c₂)中D_2-2替换为等摩尔的D_1-1。制备得到的目标化合物为淡黄色粘稠状液体42mg，最后一步得到化合物A₄₉的产率：40.1％。¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.73(d,J＝2.2Hz,1H),8.48(d,J＝2.0Hz,1H),7.81(t,J＝2.2Hz,1H),7.59–7.53(m,2H),7.42(d,J＝8.1Hz,2H),6.35(dd,J＝17.0,1.5Hz,1H),6.15(dd,J＝17.0,10.3Hz,1H),6.00(s,1H),5.70(dd,J＝10.3,1.5Hz,1H),4.82(s,1H),4.58(d,J＝5.9Hz,2H),3.62(s,2H),3.22(s,2H),2.63(dd,J＝6.6,5.0Hz,2H),2.25(s,3H),1.32(t,J＝7.4Hz,3H).ESI-MS m/z 417.1952(M+H)⁺，计算值：417.1960。

实施例50

本实施例提供了一种化合物A₅₀的制备方法：化合物A₅₀的制备方法参考实施例48中化合物A₄₈的制备方法，区别在于：将步骤(b₂)中的乙基磺酰氯L_4-4替换为等摩尔的甲烷磺酰氯。制备得到的目标化合物A₅₀为淡黄色粘稠状液体62mg，最后一步得到化合物A₅₀的产率：57.2％。¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.80(s,1H),8.68(s,1H),8.38(s,1H),8.06(d,J＝8.2Hz,1H),7.93(s,1H),7.56(s,1H),7.38(t,J＝7.8Hz,1H),7.28(d,J＝8.2Hz,1H),6.50–6.34(m,2H),5.83(s,1H),5.72(d,J＝9.5Hz,1H),3.59(s,2H),3.23(t,J＝5.6Hz,2H),2.97(s,3H),2.54(t,J＝5.6Hz,2H),2.32(s,3H).ESI-MS m/z 389.1642(M+H)⁺，计算值：389.1647。

实施例51

本实施例提供了一种化合物A₅₁的制备方法：化合物A₅₁的制备方法参考实施例48中化合物A₄₈的制备方法，区别在于：将步骤(c₂)中D_2-2替换为等摩尔的D_1-1，将步骤(b₂)中的乙基磺酰氯L_4-4替换为等摩尔的甲烷磺酰氯。制备得到的目标化合物A₅₁为淡黄色粘稠状液体48mg，最后一步得到化合物A₅₁的产率：43.9％。¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.58(d,J＝2.2Hz,1H),8.42(d,J＝2.0Hz,1H),7.80(t,J＝2.1Hz,1H),7.48(d,J＝7.9Hz,2H),7.35(d,J＝7.9Hz,2H),7.01(t,J＝6.0Hz,1H),6.32(dd,J＝17.0,1.9Hz,1H),6.21(dd,J＝17.0,10.0Hz,1H),5.64(dd,J＝9.9,1.9Hz,1H),5.48–5.35(m,1H),4.50(d,J＝5.8Hz,2H),3.58(s,2H),3.23(t,J＝5.8Hz,2H),2.89(s,3H),2.62(t,J＝5.9Hz,2H),2.24(s,3H).ESI-MS m/z 403.1807(M+H)⁺，计算值：403.1804。

实施例52

本实施例提供了一种化合物A₅₂的制备方法，合成路线如下：

具体步骤如下：

(a₃)化合物V_1-1的合成：将(3-溴苯基)甲醇(1g，5.35mmol)、三乙胺(967μM，6.95mmol)加入到二氯甲烷中，冰浴条件下加入甲烷磺酰氯(497μM，6.42mmol)，室温条件下反应2h。TCL检测反应完毕后，加入饱和碳酸氢钠溶液萃取，收集有机相，减压浓缩反应液。柱层析得到目标化合物V_1-1，淡黄色油状液体1.12g，产率：79.0％。

(b₃)化合物C_6-6的合成：将化合物V_1-1(300mg，1.13mmol)、化合物F_2-2(638mg，3.39mmol)、碳酸钾(156.2mg，1.13mmol)加入到干燥四氢呋喃中，回流条件下反应过夜。TCL检测反应完毕后，加入饱和氯化铵/乙酸乙酯萃取，收集有机相，减压浓缩。柱层析得到目标化合物C_6-6，淡黄色油状液体392mg，产率：97.1％。

(c₃)化合物B₅₂的合成：将化合物C_6-6(186mg，0.52mmol)，化合物D_1-1(178mg，0.62mmol)，碳酸钠(221mg，2.08mmol)加入到二氧六环/水＝4：1的混合溶液中，氮气置换五次。随后加入[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(38mg，0.05mmol)，氮气置换五次。100℃加热4g，真空条件下减压浓缩，乙酸乙酯萃取，有机层合并后采用流动相为二氯甲烷：甲醇的柱层析条件提纯得到产物B₅₂，淡黄色粘稠状液体133mg，产率：58.5％。

(d₃)A₅₂的合成：参考实施例1中的步骤(7)，将化合物B_1-1替换为化合物B₅₂(133mg，0.30mmol)，其余条件相同，得到终产物A₅₂，灰白色固体74mg，产率：56.4％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.22(s,1H),8.67(t,J＝5.9Hz,1H),8.00(s,1H),7.76(d,J＝7.0Hz,1H),7.72(d,J＝8.1Hz,2H),7.57(s,1H),7.38(d,J＝8.0Hz,2H),6.31(dd,J＝17.1,10.2Hz,1H),6.14(dd,J＝17.1,2.2Hz,1H),5.63(dd,J＝10.1,2.2Hz,1H),4.40(d,J＝6.0Hz,2H),3.55(s,2H),3.40–3.34(m,2H),2.81–2.69(m,3H),2.62–2.57(m,3H),2.43–2.48(m,2H).ESI-MSm/z 338.2226(M+H)⁺，计算值：338.2432。

实施例53

本实施例提供了一种化合物A₅₃的制备方法：化合物A₅₃的制备方法参考实施例52中化合物A₅₂的制备方法，区别在于：将步骤(b₃)中的F_2-2替换为等摩尔的F_1-1。制备得到的目标化合物A₅₃为灰白色固体68mg，最后一步得到化合物A₅₃的产率：50.1％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.39(s,1H),8.01(s,1H),7.74(dd,J＝13.6,7.3Hz,3H),7.55(d,J＝7.4Hz,2H),7.38(d,J＝8.0Hz,2H),6.31(dd,J＝17.0,10.0Hz,1H),6.14(d,J＝17.0Hz,1H),5.63(d,J＝10.3Hz,1H),4.57–4.48(m,2H),4.40(d,J＝6.2Hz,2H),3.42–3.37(m,2H),2.76(d,J＝4.1Hz,3H),2.61–2.50(m,2H).ESI-MS m/z 324.2077(M+H)⁺，计算值：324.2076。

实施例54

本实施例提供了一种化合物A₅₄的制备方法，合成路线如下：

具体步骤如下：

(a₄)化合物C_7-7的合成：化合物E_1-1、化合物F_2-2、冰醋酸加入到二氯乙烷中，0℃条件下分批加入三乙酰氧基硼氢化钠)。反应液在室温条件下反应过夜。TCL监测反应完全后，加入饱和碳酸氢钠溶液调节pH至7～8，加入二氯甲烷萃取，收集有机相。柱层析得目标化合物C_7-7。

(b₄)化合物C_1-7-7的合成：将化合物C_7-7(500mg，1.4mmol)，3-氨基苯硼酸频哪醇酯(368mg，1.68mmol)，碳酸钠(592mg，5.6mmol)加入到二氧六环/水＝4：1的混合溶液中，氮气置换五次。随后加入[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(102mg，0.14mmol)，氮气置换五次。100℃加热4h时，真空条件下减压浓缩，乙酸乙酯萃取，有机层合并后采用流动相为二氯甲烷：甲醇的柱层析条件提纯得到产物C_1-7-7，褐色油状液体240mg，产率：46.3％。

(c₄)化合物B₅₄的合成：将化合物C_1-7-7(75mg，0.20mmol)、碳酸钾(83mg，0.6mmol)加入到二氯甲烷中，0℃条件下加入3-氯丙酰氯(29μL，0.3mmol)。反应液在室温条件下反应4h。TCL监测反应完全后，加入水和二氯甲烷萃取，收集有机相。柱层析(二氯甲烷/甲醇＝25：1)得目标化合物B₅₄，淡黄色粘稠液体71mg，产率：77.0％。

(d₄)化合物A₅₄的合成：参考实施例1中的步骤(7)，将化合物B_1-1替换为化合物B₅₄(71mg，0.154mmol)，其余条件相同，得到终产物A₅₄，褐色固体49mg，产率：80.0％。¹H NMR(400MHz,Methanol-d₄)δ9.60(d,J＝10.1Hz,1H),9.38(s,1H),9.33(s,1H),9.28(s,1H),8.30(s,1H),7.75(dd,J＝16.2,7.8Hz,2H),7.69(s,1H),7.60(t,J＝7.7Hz,1H),3.89(t,J＝2.4Hz,2H),3.86–3.79(m,4H),3.71(d,J＝5.7Hz,3H),2.85(s,3H),2.83(t,J＝3.1Hz,2H),2.81(s,2H).ESI-MS m/z361.1789(M+H)⁺，计算值：361.1795。

实施例55

本实施例提供了一种化合物A₅₅的制备方法：化合物A₅₅的制备方法参考实施例54中化合物A₅₄的制备方法，区别在于：将步骤(c₄)中的3-氯丙酰氯替换为等摩尔的氯乙酰氯。制备得到的目标化合物A₅₅为黄褐色固体61mg，最后一步得到化合物A₅₅的产率：57.3％。¹HNMR(400MHz,Methanol-d₄)δ9.63(d,J＝10.1Hz,1H),9.36(s,1H),9.32(s,1H),9.28(s,1H),8.31(s,1H),7.70(dd,J＝16.2,7.8Hz,2H),7.64(s,1H),7.60(t,J＝7.7Hz,1H),4.32(s,2H),3.86–3.79(m,4H),3.71(d,J＝5.1Hz,3H),2.84(s,3H),2.80(s,2H).ESI-MS m/z347.1632(M+H)⁺，计算值：347.1638

实施例56

本实施例提供了一种化合物A₅₆的制备方法：化合物A₅₆的制备方法参考实施例54中化合物A₅₄的制备方法，区别在于：将步骤(c₄)中的3-氯丙酰氯替换为等摩尔的二氯乙酰氯。制备得到的目标化合物A₅₆为黄褐色固体49mg，最后一步得到化合物A₅₆的产率：39.8％。¹H NMR(400MHz,Methanol-d₄)δ9.85(s,1H),9.53(s,1H),9.30(s,1H),9.28(s,1H),8.47(s,1H),7.89(dd,J＝16.2,7.8Hz,2H),7.76(s,1H),7.63(t,J＝6.8Hz,1H),3.89–3.81(m,4H),3.71(d,J＝5.1Hz,3H),2.80(s,3H),2.78(s,2H).ESI-MS m/z 381.1243(M+H)⁺，计算值：381.1249。

实施例57

本实施例提供了一种化合物A₅₇的制备方法：化合物A₅₇的制备方法参考实施例54中化合物A₅₄的制备方法，区别在于：将步骤(c₄)中的3-氯丙酰氯替换为等摩尔的氯甲基磺酰氯。制备得到的目标化合物A₅₇为黄褐色固体43mg，最后一步得到化合物A₅₇的产率：35.1％。¹H NMR(400MHz,Methanol-d₄)δ10.21(s,1H),9.49(s,1H),9.38(s,1H),9.36(s,1H),8.58(s,1H),7.68(dd,J＝16.2,7.8Hz,2H),7.62(s,1H),7.57(t,J＝7.7Hz,1H),5.12(s,2H),3.76–3.70(m,4H),3.66(d,J＝5.1Hz,3H),2.95(s,3H),2.83(s,2H).ESI-MS m/z383.1303(M+H)⁺，计算值：383.1308。

实验例1本发明化合物抑制PRMT6体外酶活性及抑制淋巴瘤细胞株Toledo、胰腺癌细胞株Capan-2的增殖

(1)由于本发明涉及PRMT家族靶点较多，为节约时间及成本，化合物初筛选择PRMT6酶，对于活性较优化合物进行多种PRMTs的体外酶活测试。本发明化合物抑制PRMT6酶活性：采用AlphaLISA筛选方法对化合物进行PRMT6酶活性测试。方法如下：分别取100μL不同浓度的化合物溶液加入到384孔检测板中，采用五倍稀释法，最高浓度为5000nM，最低浓度为0.32nM，每个药物浓度设置2个复孔。然后分别在各孔中加入5μL的PRMT6酶溶液，1000rpm/min离心1min后孵育15min。再加入5μL底物(SAM：S-腺苷甲硫氨酸)，1000rpm/min分离心1min，室温孵育1h。孵育结束后加入5μL受体磁珠来终止酶反应，同样1000rpm/min离心1min，室温孵育1h，最后再避光条件下加入10μL供体磁珠，1000rpm/min离心1min，室温孵育30min，采用EnSpire的Alpha模式检测信号强度。计算化合物对PRMT6酶活性的半数抑制浓度(IC₅₀)。

(2)本发明化合物抑制细胞增殖：淋巴瘤细胞株Toledo、胰腺癌细胞株Capan-2购自于美国标准生物品收藏中心(American Type Culture Collection，ATCC)，RPMI 1640培养基，胎牛血清(FBS)均购买自美国GIBICO公司；青霉素和链霉素购自大连宝生物公司；培养细胞用平皿和96孔板等购买于Corning公司；各种规格的离心管购自BD公司；MTT试剂购自日本同仁化学研究所(Donjindo)。

淋巴瘤细胞株Toledo、胰腺癌细胞株Capan-2用含10％胎牛血清(FBS)、100IU/mL青霉素、100μg/ml链霉素的常规高糖RPMI1640或DMEM完全培养基培养于37℃、5％CO₂的培养箱中培养。本实验的目的是检测本发明化合物对淋巴瘤细胞株Toledo、胰腺癌细胞株Capan-2增殖影响。收集处于对数生长期的细胞，调整细胞浓度为1000～2000个/mL的单细胞悬液，按照每孔100uL接种于96孔板中。将化合物储备液(10mM/L溶于DMSO)用培养基稀释成不同浓度，采用三倍稀释法。按每孔100uL的体积加入96孔板中，最高浓度为50μM,最低浓度为0.08μM，每个药物浓度设置2个复孔，并用含0.1％DMSO培养基和纯培养基处理细胞作为阴性对照，置细胞培养箱中继续培养6天，采用MTT检测细胞线粒体琥珀酸脱氢酶活性，并计算新化合物对肿瘤细胞的半数有效抑制浓度(IC₅₀)值。

本发明化合物抑制PRMT6体外酶活性及抑制淋巴瘤细胞Toledo、胰腺癌细胞株Capan-2的增殖结果见下表1，其中，字母α表示IC₅₀值≤50nM；字母β表示50nM<IC₅₀值≤500nM；字母γ表示0.5μM<IC₅₀值≤5μM；字母δ表示5μM<IC₅₀值≤50μM；字母ε表示IC₅₀值>50μM。

表1对PRMT6体外酶活性、淋巴瘤细胞Toledo及胰腺癌细胞株Capan-2增殖的影响

化合物

PRMT6

Toledo

Capan-2

化合物

PRMT6

Toledo

Capan-2

A<sub>1</sub>

β

γ

δ

A<sub>30</sub>

δ

δ

ε

A<sub>2</sub>

α

γ

δ

A<sub>31</sub>

δ

δ

ε

A<sub>3</sub>

γ

δ

δ

A<sub>32</sub>

β

γ

δ

A<sub>4</sub>

γ

δ

δ

A<sub>33</sub>

β

δ

γ

A<sub>5</sub>

α

γ

δ

A<sub>34</sub>

β

γ

δ

A<sub>6</sub>

α

δ

γ

A<sub>35</sub>

β

δ

δ

A<sub>7</sub>

β

δ

δ

A<sub>36</sub>

δ

γ

γ

A<sub>8</sub>

β

γ

δ

A<sub>37</sub>

γ

δ

γ

A<sub>9</sub>

β

δ

δ

A<sub>38</sub>

δ

γ

γ

A<sub>10</sub>

α

δ

δ

A<sub>39</sub>

δ

γ

γ

A<sub>11</sub>

α

δ

δ

A<sub>40</sub>

γ

γ

δ

A<sub>12</sub>

α

γ

γ

A<sub>41</sub>

β

γ

γ

A<sub>13</sub>

β

δ

δ

A<sub>42</sub>

β

γ

γ

A<sub>14</sub>

α

δ

δ

A<sub>43</sub>

β

γ

γ

A<sub>15</sub>

α

γ

δ

A<sub>44</sub>

β

δ

δ

A<sub>16</sub>

β

δ

δ

A<sub>45</sub>

α

δ

δ

A<sub>17</sub>

α

γ

γ

A<sub>46</sub>

δ

δ

ε

A<sub>18</sub>

γ

δ

δ

A<sub>47</sub>

δ

ε

ε

A<sub>19</sub>

γ

δ

δ

A<sub>48</sub>

δ

ε

δ

A<sub>20</sub>

α

δ

γ

A<sub>49</sub>

δ

ε

ε

A<sub>21</sub>

β

δ

δ

A<sub>50</sub>

δ

ε

ε

A<sub>22</sub>

β

γ

γ

A<sub>51</sub>

δ

δ

ε

A<sub>23</sub>

β

γ

γ

A<sub>52</sub>

β

δ

δ

A<sub>24</sub>

γ

γ

δ

A<sub>53</sub>

β

δ

δ

A<sub>25</sub>

β

γ

γ

A<sub>54</sub>

α

δ

δ

A<sub>26</sub>

β

δ

γ

A<sub>55</sub>

β

δ

δ

A<sub>27</sub>

α

γ

γ

A<sub>56</sub>

β

δ

δ

A<sub>28</sub>

δ

ε

δ

A<sub>57</sub>

β

γ

γ

A<sub>29</sub>

δ

δ

δ

从表1中可以看出，本发明中多数化合物在纳摩尔浓度下能够有效抑制PRMT6体外酶活性，其中十多个化合物的半数抑制浓度低于50nM，化合物A₁₂、A₁₅等化合物的半数抑制浓度低于10nM。说明本发明化合物对PRMT6有明显的抑制作用。

同时，表1数据显示本发明中化合物可有效抑制淋巴瘤和胰腺癌增殖，其中，A₂、A₁₇、A₂₇、A₄₂、A₄₃、A₅₇等多个受试化合物对淋巴瘤细胞Toledo及胰腺癌细胞株Capan-2增殖抑制活性均较好，IC₅₀值为微摩尔水平。

实验例2本发明化合物的可逆类似物对PRMT6体外酶活性抑制作用明显弱于共价抑制剂

本发明中共价抑制剂的设计采用丙烯酰胺等基团为亲电反应基团，与PRMT6蛋白Cys50位富电子巯基发生反应形成共价键。若将抑制剂对应位置的丙烯酰胺替换为丙烷酰胺，则抑制剂与Cys50位的巯基无法发生加成反应，其IC₅₀值会大大增加。据此，本发明设计合成了A₂、A₆、A₁₂的丙烷酰基可逆类似物A₂’、A₆’、A₁₂’(如图1所示)。采用AlphaLISA方法测试化合物对PRMT6酶活性抑制作用，结果见图1。

如图1所示，共价抑制剂A₂、A₆、A₁₂对PRMT6酶活性抑制作用明显强于其可逆类似物A₂’、A₆’、A₁₂’。表明本发明中化合物通过与PRMT6蛋白发生共价作用是其具有较高抑制活性的关键。实验例3本发明化合物对其他TpyeⅠ类PRMTs的体外酶活性抑制作用明显优于TpyeⅡ类、TpyeⅢ类PRMTs，且其对应可逆类似物抑制活性明显差于共价抑制剂

采用AlphaLISA方法测试化合物对除PRMT6其他Ⅰ型(PRMT1\PRMT3\PRMT4\PRMT8)、Ⅱ型(PRMT5)和Ⅲ型(PRMT7)PRMTs的酶活性抑制作用，结果见图2和图3。

如图2和3所示，化合物A₁₂、A₂₇对除PRMT6的其他Ⅰ型(PRMT1\PRMT3\PRMT4\PRMT8)PRMTs的体外酶抑制活性要明显高于Ⅱ型(PRMT5)和Ⅲ型(PRMT7)PRMTs。表明化合物A₁₂、A₂₇可选择性作用于TpyeⅠ类PRMTs，选择性较优。同时，化合物A₁₂、A₂₇的可逆类似物A₁₂’、A₂₇’对其他Ⅰ型(PRMT1\PRMT3\PRMT4\PRMT8)PRMTs的抑制活性大大差于共价抑制剂，表明本发明化合物通过与PRMT1、PRMT3、PRMT4、PRMT8蛋白发生共价作用发挥抑制活性。

最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

Claims (20)

1.一种靶向I型PRMT的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述化合物的结构式如式(A)所示：

其中，Linker选自

Linker中NH一侧连接于R₃，苯环一侧连接于Ar；X选自亚甲基和羰基；R₁选自H、C_1～3烷基或

R₈选自C_1～3烷基；R₂选自H或C_1～3烷基；R₄、R₅、R₆、R₇各自独立地选自H和C_1～3烷基；n为1～6之间的整数；m为0～3之间的整数；

R₃选自

Ar选自

中的任一种。

2.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，m为0、1或2。

3.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，Linker选自

中的任一种。

4.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，X为亚甲基。

5.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，R₂为甲基。

6.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，n为1、2或3。

7.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述化合物选自如下结构：

8.权利要求1-7任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(a)化合物B在酸的作用下脱保护基得到化合物A；

所述化合物B的结构式如下：

所述化合物B的制备方法包括：(b₁)在碱与钯催化剂的作用下，化合物C与化合物D进行Suzuki偶联反应，得到化合物B；

所述化合物C和化合物D的结构式如下：

或者，所述化合物B的制备方法包括：(b₂)化合物C₁与化合物Q在缚酸剂作用下反应得到化合物B；

所述化合物C₁和化合物Q的结构式如下：

9.根据权利要求8所述的化合物或其药学上可接受的盐的制备方法，其特征在于，当X为亚甲基，R₁选自H和C_1～3烷基时，所述化合物C的制备方法包括：(c₁)在酸性条件下，化合物E与化合物F在还原剂作用下进行还原胺化反应得到化合物C；

所述化合物E和化合物F的结构式如下：

当X为羰基，R₁选自H和C_1～3烷基时，所述化合物C的制备方法包括：(c₂)化合物G与化合物F在缩合剂的作用下进行酰胺缩合反应得到化合物C；

所述化合物G的结构式如下：

当R₁为

时，所述化合物C的制备方法包括：(c₃₁)在酸性条件下，化合物E与化合物H在还原剂作用下进行还原胺化反应得到化合物J；(c₃₂)化合物J在酸性条件下脱保护基得到化合物K；(c₃₃)在缚酸剂作用下，化合物K与化合物L反应得到化合物C；

所述化合物H、J、K和L的结构式如下：

当Ar为

时，所述化合物C的制备方法包括：(c₄)化合物V与化合物F在碱的作用下反应得到化合物C；

所述化合物V的结构式如下：

10.根据权利要求8所述的化合物或其药学上可接受的盐的制备方法，其特征在于，所述化合物C₁的制备方法包括：(c₃₄)在碱与催化剂的作用下，化合物C与化合物Y进行Suzuki偶联反应，得到化合物C₁；

所述化合物Y的结构式如下：

11.根据权利要求10所述的化合物或其药学上可接受的盐的制备方法，其特征在于，化合物D的制备方法包括：(d)化合物Y和化合物Q在缚酸剂的作用下反应得到化合物D。

12.根据权利要求10所述的化合物或其药学上可接受的盐的制备方法，其特征在于，所述化合物Y的制备方法包括：(y)化合物S₁在酸的作用下脱保护基得到化合物Y；

所述化合物S₁的结构式如下：

13.根据权利要求12所述的化合物或其药学上可接受的盐的制备方法，其特征在于，所述化合物S₁的制备方法包括：(s₁)在碱性条件下，化合物T₁与联硼酸频哪醇酯在钯催化剂作用下反应得到化合物S₁；

所述化合物T₁的结构式如下：

14.根据权利要求13所述的化合物或其药学上可接受的盐的制备方法，其特征在于，所述化合物T₁的制备方法包括：(t₁)在碱性条件下，化合物U₁与Boc酸酐在碱性条件下反应得到化合物T₁；

所述化合物U₁的结构式如下：

15.药物组合物，其特征在于，包括权利要求1-7任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。

16.根据权利要求15所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物中还包括药学上可接受的辅料。

17.权利要求1-7任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于抑制Ⅰ型PRMT酶活性的药物或制备Ⅰ型PRMT抑制剂中的应用。

18.权利要求1-7任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备抗肿瘤药物、或制备用于治疗心血管疾病、神经退行性疾病、疟疾、艾滋病、痛风、糖尿病、肾功能衰竭、慢性肺部疾病、眼咽型肌营养不良、***成瘾、肺动脉高压疾病、肌萎缩侧索硬化症或酒精性肝硬化药物中的应用。

19.根据权利要求18所述的应用，其特征在于，所述肿瘤选自脑癌、成胶质细胞瘤、白血病、淋巴瘤、Bannayan-Zonana综合征、考登病、Lhermitte-Duclos病、乳腺癌、维尔姆斯瘤、尤因肉瘤、横纹肌肉瘤、室管膜瘤、成神经管细胞瘤、结肠癌、胃癌、膀肤癌、头颈癌、肾癌、肺癌、肝癌、黑素瘤、卵巢癌、胰腺癌、***癌、肉瘤、骨肉瘤、骨巨细胞瘤和甲状腺癌中的任一种。

20.根据权利要求18所述的应用，其特征在于，所述肿瘤为炎性乳腺癌。

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