CN110833547A - 吡唑并嘧啶衍生物在治疗类风湿关节炎的用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及药物技术领域，特别是吡唑并嘧啶衍生物在治疗类风湿关节炎的用途。本发明吡唑并嘧啶衍生物对类风湿关节炎有较好的治疗作用，能显著降低血清中TNF‑α、IL‑1β、IL‑6、IL‑17等促炎性因子的水平，提高血清中抗炎症因子IL‑10的含量水平，抑制炎症细胞对骨质、关节的浸润及侵蚀，对骨关节有较好的保护作用。本发明吡唑并嘧啶衍生物对类风湿关节炎的治疗作用与甲氨蝶呤相当。

Description

吡唑并嘧啶衍生物在治疗类风湿关节炎的用途

技术领域

本发明涉及药物技术领域，特别是吡唑并嘧啶衍生物在治疗类风湿关节炎的用途。

背景技术

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是一种慢性自身免疫性疾病，会增加关节畸形和残疾的风险，其显著特征是在疾病早期即出现关节骨破坏或骨侵蚀。而大量基础研究证明，包括滑膜炎在内的关节局部持续炎症过程是导致RA患者骨破坏的重要原因之一。

吡唑并嘧啶衍生物(式Ⅰ)是一种靶向作用于FLT3激酶的小分子抑制剂，是申请人自主研发的新型化合物，目前化合物专利已经在中国、美国、日本等地区获得了授权。

目前仅有关于吡唑并嘧啶衍生物在治疗急性髓性白血病及银屑病方面的报道，而未见有在治疗类风湿关节炎方面的用途。

发明内容

为了克服现有技术存在的不足，本发明提供吡唑并嘧啶衍生物在治疗类风湿关节炎的用途。

本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：

一种如式Ⅰ所示的吡唑并嘧啶衍生物或其药学上可接受的盐、水合物在制备治疗类风湿关节炎药物方面的用途

优选地，所述类风湿关节炎表现为血清中促炎症细胞因子水平升高。

优选地，所述促炎症细胞因子包括TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17。

优选地，所述类风湿关节炎表现为血清中抗炎症细胞因子水平下降。

优选地，所述抗炎症细胞因子包括IL-4、IL-10。

优选地，所述类风湿关节炎表现为关节组织中有炎症细胞浸润。

优选地，所述类风湿关节炎表现为关节组织中有淋巴细胞浸润。

优选地，所述类风湿关节炎表现为滑膜炎病变。

优选地，所述类风湿关节炎表现为骨质吸收、溶解、破坏。

优选地，所述药学上可接受的盐包括盐酸盐、硫酸盐、甲磺酸盐、磷酸盐。

本发明还提供一种药物组合物在制备治疗类风湿关节炎药物方面的用途，其特征在于，所述药物组合物包含如式Ⅰ所示吡唑并嘧啶衍生物或其药学上可接受的盐、水合物作为有效成分，和药学上可接受的赋形剂。

优选地，所述所述药物组合物为注射制剂、口服制剂、外用制剂、缓释制剂、控释制剂。

优选地，所述所述口服制剂包括片剂、颗粒剂、胶囊剂。

优选地，所述药物组合物为控释制剂、缓释制剂、速释制剂。

TNF-α在RA病人的炎症组织和滑液中的含量都比较高，之前其他研究证明了

TNF-α在RA中的重要作用。TNF-α可促进包括IL-1、IL-6、IL-8等细胞因子的产生，促进MCP-1等趋化因子的释放，促进其他类型炎性细胞向关节炎部位的趋化。TNF-α可上调整合素和粘附分子，促进内皮细胞的激活，诱导血管新生的形成。此外TNF-α还可激活破骨细胞，导致RA病人炎症关节部位骨质的破坏。所以，减少炎症部位TNF-α的含量对于治疗RA非常重要。

IL-6是在炎症中有多重作用，可通过自分泌作用促进中性粒细胞迁移至炎症部位，诱导中性粒细胞释放水解酶以及其他活性介质，导致RA组织和关节的破坏。IL-6可以促进VEGF的表达，诱导血管翳的形成，促进血管新生。IL-6还可以通过增加RANKL的表达，促进滑膜细胞的增殖，并且促进滑膜细胞分泌MMPs，导致关节软骨破坏。IL-6与***性炎症反应密切相关。RA相关的全身症状如发热、疲劳、贫血均与IL-6有关。

RA骨破坏与滑膜炎导致的破骨细胞功能亢进有密切关系，而在这一炎症过程中，IL-17的作用可以说是核心性的。广泛来说，IL-17由活化的CD4+和CD8+淋巴细胞、自然杀伤T细胞等产生，可诱导多种趋化因子、促炎因子和基质金属蛋白酶的表达，从而刺激炎症的发生发展。因此IL-17被评价为一种促进滑膜炎的强效细胞因子。具体到对破骨细胞的作用，IL-17能够促进破骨细胞形成和破骨细胞分化:IL-17作用于破骨细胞分化的支持细胞，如滑膜成纤维细胞和成骨细胞，使其表达RANKL，进而促进破骨细胞分化；引导破骨细胞功能亢进：IL-17还可通过广泛促炎及其他细胞因子途径引发破骨细胞功能亢进。

本发明吡唑并嘧啶衍生物原为FLT3抑制剂，通过研究发现，本发明吡唑并嘧啶衍生物对类风湿关节炎有较好的治疗作用，能显著降低血清中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17等促炎性因子的水平，提高血清中抗炎症因子IL-10的含量水平，抑制炎症细胞对骨质、关节的浸润及侵蚀，对骨关节有较好的保护作用。本发明吡唑并嘧啶衍生物对类风湿关节炎的治疗作用与甲氨蝶呤相当。

与现有技术比较，本发明的方法具有以下优点：

本发明提供的吡唑并嘧啶衍生物，是一种新的治疗类风湿关节炎的药物，不但扩展了现有治疗类风湿关节炎的药物选择性，为该病的有效治疗提供了更多的药物选择，也进一步扩展了本发明吡唑并嘧啶衍生物作为FLT3抑制剂的应用范围。

附图说明

图1为空白对照组大鼠后足踝关节X线片。

图2为模型组大鼠后足踝关节X线片。

图3为甲氨蝶呤组大鼠后足踝关节X线片。

图4为吡唑并嘧啶衍生物高剂量组大鼠后足踝关节X线片。

图5为吡唑并嘧啶衍生物低剂量组大鼠后足踝关节X线片。

图6为空白对照组大鼠后足踝关节拍照图片。

图7为模型组大鼠后足踝关节拍照图片。

图8为甲氨蝶呤组大鼠后足踝关节拍照图片。

图9为吡唑并嘧啶衍生物高剂量组大鼠后足踝关节拍照图片。

图10为吡唑并嘧啶衍生物低剂量组大鼠后足踝关节拍照图片。

图11为空白对照组大鼠后足踝关节组织HE染色结果(100倍)。

图12为模型组大鼠后足踝关节组织HE染色结果(100倍)。

图13为甲氨蝶呤组大鼠后足踝关节组织HE染色结果(100倍)。

图14为吡唑并嘧啶衍生物高剂量组大鼠后足踝关节组织HE染色结果(100倍)。

图15为吡唑并嘧啶衍生物低剂量组大鼠后足踝关节组织HE染色结果(100倍)。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1对类风湿关节炎模型大鼠的作用研究

1.实验动物：清洁级SD大鼠，雌性，体质量180～220g，购于北京维通利华实验动物技术有限公司。

2.实验材料：吡唑并嘧啶衍生物由发明人合成。吡唑并嘧啶衍生物由发明人合成。将蓖麻油与乙醇1：1混合后经过0.22μm的无菌滤膜，得到ELE溶液，称取一定质量的本发明吡唑并嘧啶衍生物粉末，用ELE溶液溶解粉末，待粉末完全溶解后，加入一定体积的灭菌水，混匀待用。ELE溶液与无菌水的体积比为1：3。免疫源性牛Ⅱ型胶原(Chondrex，inc)。

3.动物分组、造模、给药：所有动物随机分以下组别：空白对照组、模型组、甲氨蝶呤组(5mg/kg/week)、吡唑并嘧啶衍生物高剂量组(以下简称高剂量组，12mg/kg/d，1.2mg/mL药液)、吡唑并嘧啶衍生物低剂量组(以下简称低剂量组，6mg/kg/d，0.6mg/mL药液)，每组15只。除空白对照组外，各组大鼠第1次免疫于尾根部左侧皮内注射0.2ml制备好的胶原乳剂，含牛Ⅱ型胶原200μg。初次免疫后第7天加强免疫1次，注射部位是尾根部右侧皮内，注射剂量为0.2ml胶原乳剂，含牛Ⅱ型胶原200μg。初次免疫后第14天开始灌胃给药，持续给药6周，空白对照组与模型对照组灌胃给予ELE溶液和蒸馏水1:3体积比的混合液10mL/kg。

4.检测指标：(1)炎性因子水平的测定：各组最后1次灌胃后开始禁食，第2天取血，采用股动脉放血法取血后处死，血液静置2h，3000r/min离心10min取上清。采用ELISA法测定血清中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10、IL-17的含量。

(2)后足踝关节X线片检查：处死各组大鼠进行取材，手术方法取出各组大鼠整体胫骨下段和足部，仔细剥去皮肤和表层肌肉，及时标注每一标本，立即取后足踝关节拍摄X侧位片，观察大鼠后足软组织肿胀程度、关节间隙清晰程度及关节完整性和关节骨质破坏情况。

(3)类风湿关节炎大鼠后足、踝关节大体观察：连续观察各组大鼠后足、踝关节皮肤色泽、皮肤温度、皮肤感染状况，后足行动、踝关节肿胀状况。

(4)常规HE染色，观察病理组织形态。

5.统计学方法：采用SPSS17.0处理数据，计量数据采用(均数±标准差)表示，组间比较用单因素方差分析，P<0.05为差异有统计学意义。

6.实验结果

(1)对血清中炎性因子水平的影响

表1对血清中炎性因子水平的影响

组别	TNF-α(pg/mL)	IL-1β(pg/mL)	IL-6(pg/mL)	IL-10(pg/mL)	IL-17(pg/mL)
						空白对照组	26.38±5.75	21.86±6.48	42.60±10.26	1325.7±102.3	110.86±10.13
模型组	215.72±35.42*	65.23±15.92*	175.41±25.36*	418.2±132.6*	165.84±20.41*
						甲氨蝶呤组	126.81±21.60△	46.18±5.28△	126.75±18.16△	688.5±86.4△	136.45±15.18△
高剂量组	78.40±15.35△	25.92±8.73△	84.72±15.82△	1126.4±125.8△	124.71±16.37△
						低剂量组	135.78±26.72△	39.77±9.45△	148.29±20.14	629.3±110.5△	148.30±12.62

与空白对照组比较，*P＜0.05；与模型组比较，△P＜0.05。

由表1可知，与模型组比较，高、低剂量组均能显著降低大鼠血清中TNF-α、IL-1β的水平(P<0.05)；同时，均能显著升高大鼠血清中IL-10的水平(P<0.05)。高剂量组能显著降低大鼠血清中IL-6和IL-17的水平(P<0.05)，低剂量组仅表现出降低趋势，并无统计学意义。同时，本发明吡唑并嘧啶衍生物高剂量组对上述炎症因子的作用与甲氨蝶呤相当。

(2)后足踝关节X线片检查结果

如图1所示，空白对照组结果正常，软组织无肿胀，关节间隙清晰，关节完整，骨质未出现破坏现象。

如图2所示，模型组出现严重的软组织肿胀和骨质吸收、溶解现象，胫骨、距骨、跟骨三者的关节结构破坏严重，关节已经基本损毁。

如图3、5所示，甲氨蝶呤组、低剂量组出现关节结构破坏，骨质吸收溶解及软组织肿胀表现，但程度较模型组降低。

如图4所示，高剂量组可显著保留关节结构并使其免受侵蚀，未出现明显软组织肿胀表现。

(3)大鼠后足、踝关节大体观察结果

如图6所示，空白对照组大鼠均表现正常。

如图7所示，模型组大鼠普遍后足皮肤温度高、皮肤发红、软组织肿胀明显并且伴有关节强直、不能负重，少数足部出现红斑和溃疡。

如图8、10所示，甲氨蝶呤组和低剂量组整体均有所改善，但仍然可出现后足皮肤温度高、皮肤发红、关节肿胀。

如图9所示，高剂量组较其他组大鼠皮肤均明显降低，关节红肿消失，肿胀不显著，行动自如。

(4)HE染色结果

如图11所示，空白对照组染色结果正常，软骨成粉红淡染色，骨质颜色较深，关节间隙圆滑清晰，关节间隙中没有炎症细胞存在。

如图12所示，模型组出现大片炎症细胞，炎症细胞呈片状，呈深染蓝色，原本关节关系分辨不清，炎症细胞严重侵蚀骨质，关节间隙消失，完整被炎症细胞浸润填充。

如图13、15所示，甲氨蝶呤组及低剂量组均出现大量炎症细胞，分布于关节间隙和软骨及骨质中，关节间隙分辨不清，炎症细胞同样严重侵蚀骨质，软骨骨质几乎可见，但已经被破坏殆尽，关节间隙几乎消失，被大量炎症细胞充斥。

如图14所示，出现少量炎症细胞，呈零星分布于关节间隙，关节间隙正常、清晰，炎症细胞未严重侵蚀骨质，粉红色软骨、深红色骨质均清晰可见，很少破坏。

结论

本发明吡唑并嘧啶衍生物对类风湿关节炎有较好的治疗作用，能显著降低血清中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17等促炎性因子的水平，提高血清中抗炎症因子IL-10的含量水平，抑制炎症细胞对骨质、关节的浸润及侵蚀，对骨关节有较好的保护作用。

虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (13)

1.一种如式Ⅰ所示的吡唑并嘧啶衍生物或其药学上可接受的盐、水合物在制备治疗类风湿关节炎药物方面的用途

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述类风湿关节炎表现为血清中促炎症细胞因子水平升高。

3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述促炎症细胞因子包括TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17。

4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述类风湿关节炎表现为血清中抗炎症细胞因子水平下降。

5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于，所述抗炎症细胞因子包括IL-4、IL-10。

6.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述类风湿关节炎表现为关节组织中有炎症细胞或淋巴细胞浸润。

7.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述类风湿关节炎表现为滑膜炎病变。

8.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述类风湿关节炎表现为骨质吸收、溶解、破坏。

9.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述药学上可接受的盐包括盐酸盐、硫酸盐、甲磺酸盐、磷酸盐。

10.一种药物组合物在制备治疗类风湿关节炎药物方面的用途，其特征在于，所述药物组合物包含如权利要求1所述的如式Ⅰ所示吡唑并嘧啶衍生物或其药学上可接受的盐、水合物作为有效成分，和药学上可接受的赋形剂。

11.根据权利要求10所述的用途，所述药物组合物为注射制剂、口服制剂、外用制剂、缓释制剂、控释制剂。

12.根据权利要求11所述的用途，所述口服制剂包括片剂、颗粒剂、胶囊剂。

13.根据权利要求10所述的用途，所述药物组合物为控释制剂、缓释制剂、速释制剂。

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