CN110824094B - 一种墨旱莲药材的梯度全信息薄层鉴别方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种墨旱莲药材的梯度全信息薄层鉴别方法。其特征在于：用简便、快捷的前处理方法得到供试品与对照药材溶液，采用同一供试品溶液，以4种不同极性的展开剂，在4块薄层板上，多种检视条件下，检视了墨旱莲药材的约27种信息斑点。各成分相互交叉，但在各自的检视条件下，互不干扰，都能呈现出清晰的荧光斑点或颜色斑点。完成该梯度薄层鉴别只需药材和对照药材各0.2g、提取溶剂4ml、展开剂40ml、时间1.5小时。简便、快捷、高效，是目前已报道方法都不具备的。为墨旱莲药材的多信息快速质量监督，提供了方法与色谱图；为其组成的复方制剂提供了不同极性成分的鉴别参考。
Description
技术领域
本发明涉及一种墨旱莲药材的梯度全信息薄层鉴别方法。即，按脂溶性、中极性和水溶性的梯度顺序，以薄层鉴别的形式，检视墨旱莲药材中从脂溶性到水溶性全部信息成分斑点。
背景技术
所谓的中药材梯度全信息薄层鉴别，顾名思义就是将高效液相梯度洗脱的内涵，引申到中药薄层鉴别领域，将中药材中的脂溶性、中极性以及水溶性成分，依据相似相容的溶解定律，按非极性、中极性、极性的顺序，在各自极性不同的展开溶剂中，通过反复地吸附与解吸附，将药材中具有检测信息的大部分有效成分，按着极性大小，在极少数的薄层板上，不同的检视条件下，获得尽可能全的斑点信息图谱，由此组成一套从脂溶性到水溶性成分的全信息薄层色谱图和鉴别方法，提供不同来源的墨旱莲药材进行整体质量监督；以及多种工艺制备的复方制剂，作为质量评价参考图谱与方法。
所谓的全信息系指在脂溶性成分的检测部分，其薄层板的最前沿，已经无任何信息斑点呈现，而在水溶性成分的检测部分，在薄层板的基线处，也不再有明显的斑点残痕，说明所有的信息斑点都已经包括在梯度的薄层展开范围内，再配合多种检视条件，使能检视到的信息斑点，在不同的展开剂与检视条件下全部都呈现出来，获取到从脂溶性到水溶性全信息量。
中药墨旱莲为中国药典历版所收载品种，具有滋补肝肾，凉血止血之功效，用于肝肾阴虚，牙齿松动，须发早白，眩晕耳鸣，腰膝酸软，阴虚血热吐血，衄血，尿血，血痢，崩漏下血，外伤出血。是一种临床上滋补与止血的常用药材。含三萜皂苷类，如旱莲皂苷A、旱莲皂苷B、旱莲皂苷C等；黄酮类，如芹菜素、木犀草素、槲皮素及其苷类；噻吩类，如二联噻吩、三联噻吩等等。这些成分从结构分析，既有脂溶性的，又有中极性的，还有水溶性的。但其薄层鉴别中国药典2015年版一部，采用的旱莲皂苷A和对照药材为对照，以二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(30∶40∶15∶3)为展开剂，展开后喷以香草醛硫酸试液显色，检视呈色的斑点。从展开剂的极性分析，检视的信息斑点属于偏水溶性的。有文献报道【1】取墨旱莲粉末1g，加乙醇20ml，浸泡2小时，超声处理30分钟，滤过，滤液挥干，加无水乙醇 1ml溶解残渣，作为供试品溶液。另取墨旱莲对照药材1g，同法制成对照药材溶液。吸取上述两种溶液各2μl，以条带状分别点于高效硅胶预制薄层板(HPTLC-plate Nano-DURASIL-20， MN)，以正己烷-丙酮(9∶1)为展开剂，预平衡15分钟，上行展开，展距8cm，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点。从薄层板的色谱图分析，检视的是偏脂溶性信息成分。还有人报道【2】了2批墨旱莲药材的色谱图，但未报道方法与展开剂，检视条件应是紫外光灯365nm下，在薄层板上呈现了4个荧光斑点。从色谱图的斑点分析，属于脂溶性成分。还未查阅到墨旱莲药材的梯度全信息薄层鉴别方法和鉴别色谱图。
为给墨旱莲药材及其不同工艺制备的多种制剂，提供简便、快捷、低成本、高效率的多信息鉴别方法，对墨旱莲药材进行了专题多信息梯度薄层鉴别研究。获得了一套简便、快捷、无环境污染的全息墨旱莲薄层鉴别方法及图谱。
发明内容
用简便、快捷的前处理方法得到供试品与对照药材溶液，采用同一供试品溶液，以4种不同极性的展开剂，在4块薄层板上，多种检视条件下，检视了墨旱莲药材的约二十七种信息斑点。各成分相互交叉，但在各自的检视条件下，互不干扰，都能呈现出清晰的荧光斑点或颜色斑点。完成该梯度薄层鉴别只需药材和对照药材各0.2g、提取溶剂4ml、展开剂40ml、时间1.5小时。简便、快捷、高效，是目前已报道方法都不具备的。为墨旱莲药材的多信息快速质量监督，提供了方法与色谱图。为不同制备工艺制备的墨旱莲复方制剂，提供了薄层鉴别参考信息。
本发明解决其技术问题所采用的方案为：
(1)墨旱莲药材脂溶性成分薄层鉴别 取墨旱莲药材0.2g，研细，加甲醇2ml，超声处理15分钟，离心，上清液作为供试品溶液；另取墨旱莲对照药材0.2g，同法制备对照药材溶液；吸取供试品溶液和对照药材溶液各4～5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为19∶1的环己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；
(2)墨旱莲药材偏脂溶性成分薄层鉴别 吸取(1)项下的供试品溶液和对照药材溶液各4～5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为12∶3∶0.5的环己烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；再喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；再置日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色斑点；
(3)墨旱莲药材中极性成分的薄层鉴别 吸取(1)项下的供试品溶液和对照药材溶液各4～5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为6∶4∶0.5的环己烷-乙酸乙酯 -甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；
(4)墨旱莲药材水溶性成分的薄层鉴别 吸取(1)项下的供试品溶液和对照药材溶液各4～5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为10∶3∶0.2∶0.3的三氯甲烷- 甲醇-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；再喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点；再置暗室内透过灯光检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。
本发明的原理如下：
依据中药各有效成分的化学结构与性质，遵循相似相容的提取原则，采用适宜的提取溶剂，简便、快捷地制备供试品与对照药材溶液。再采用不同极性的展开剂，进行展开，各种化学成分就会随着不同的展开剂，依据吸附、解吸附、再吸附、再解吸附的能力不同，而在各自的薄层板上得以良好分离。再借助各种极性近似的有效成分，在同一块薄层板上，不同的检视条件下，虽然重叠，但在不同的层次上，互不干扰，呈现出各自不同的斑点颜色，获得多信息的薄层色谱图。按展开剂的极性大小，将各薄层板上分离良好的多信息梯度薄层色谱图，从非极性到极性连接起来，就形成一套全息薄层色谱图。
本发明的创新点及有益效果如下：
1.墨旱莲药材以体积比为19∶1的环己烷-乙酸乙酯为展开剂，将脂溶性成分展开后，将薄层板置紫外光灯365nm下检视到6个清晰的荧光斑点，其中4个是蓝紫色的，1个是亮黄绿色的，1个是浅黄绿色的(图1)；置紫外光灯254nm下无斑点信息；喷雾10％硫酸显色后，也无清晰的斑点。该展开剂获得的脂溶性斑点数目较多，清晰度也比较好。
2.墨旱莲药材以体积比12∶3∶0.5的环己烷-乙酸乙酯-甲酸的为展开剂，展开的偏脂溶性成分在紫外光灯365nm下检视到12个不同颜色的荧光斑点，其中6个与脂溶性成分斑点颜色一致，其Rf值都在0.5以上，在0.5以下又呈现出2个红色荧光斑点、1个蓝紫色荧光斑点，3个粉红色荧光斑点(图2)；喷雾10％硫酸乙醇溶液显色后，再置紫外光灯365nm 下检视，呈现出6个清晰的荧光斑点，其中2个为淡粉色的、2个淡绿色的、1个橙黄色的、 1个橙红色的(图3)；显然与显色前斑点的数量和颜色都不一样了，应该是一些无荧光的化合物，与10％硫酸反应后，激发了荧光，也可以说显色前与显色后的荧光斑点，不是同一化合物；将显色的薄层板再在日光下检视，呈现出5个颜色深浅不一的棕褐色斑点(图4)，其中有4个颜色斑点，从Rf值和斑点大小，又与呈色的荧光斑点不同，应该是一些显色前和显色后都无荧光的化合物。如上计算一下，同一块薄层板在三种检视条件下，共检出不同的信息斑点约21个，减去与脂溶性重复的6个斑点，新检出斑点为15个。不同的检视条件下，检视不同的斑点，虽然相互重叠，但在各自的检视条件下，互不干扰，做到了信息互补与强化。在偏脂溶性成分薄层鉴别中，本鉴别获得信息量是最大的，各斑点间的分离度也是较好的，为初次报道。
3.墨旱莲药材以体积比6∶4∶0.5的环己烷-乙酸乙酯-甲酸的为展开剂，将中极性成分展开后，获得紫外光灯365nm下检视到的9个不同颜色的荧光斑点，其中3个是蓝紫色的、2个亮蓝色的、1个亮黄绿色的、2个红色的、1个淡粉色的(图5)；与偏脂溶性成分的薄层色谱图比较，2个亮蓝色的荧光斑点为新的鉴别特征斑点。
4.墨旱莲药材以体积比为10∶3∶0.2∶0.3的三氯甲烷-甲醇-甲酸-水为展开剂，将水溶性成分展开后，获得紫外光灯365nm下检视到的3个亮蓝色荧光新斑点(图6)；对比中极性成分的薄层色谱图分析，其中2个Rf值较大的是在(3)项下已报道的，1个Rf值小的荧光斑点，为水溶性成分的新斑点；喷雾10％硫酸乙醇溶液显色后，再置紫外光灯365nm下检视，呈现出2个清晰的荧光斑点，从Rf值分析，都与直接检视的荧光斑点不同，不是同一化合物(图7)；将薄层板再置暗室内，通过灯光检视，呈现出1个棕褐色主斑点，该斑点又与显色前和显色后的荧光斑点Rf值不同，不是同一化合物。这样，水溶性成分共检出6个，其中4个为新成分斑点。
5.采用同一供试品溶液和对照药材溶液，以4种不同极性的展开剂，在4块薄层板上，多种检视条件下，检视了墨旱莲药材的约二十七种信息斑点。部分承上启下的斑点，在每块薄层板上都能清晰的识别到，各斑点相互交叉，但在各自的检视条件下，互不干扰，都能呈现出清晰的荧光斑点或颜色斑点。为不同来源、不同产地、不同采收季节的墨旱莲药材进行质量评价和质量对比，提供了方法和图谱；为不同工艺与组方的复方制剂，在进行墨旱莲药材薄层鉴别时，提供了可供选择的多信息色谱图。
6.本鉴别方法与已报道方法的不同之处还在于：非极性、中极性和极性成分的展开剂都是酸性的，而已报道方法都是中性的。酸性的展开剂使一些酸性的物质如黄酮类、噻吩类成分都以分子体形式存在，克服了多酚羟基化合物的拖尾现象，使各斑点收缩、集中，十余种不同颜色的荧光斑点，都能呈现出各自清晰的颜色边界，利于观察判断。
附图说明
图1为墨旱莲药材脂溶性成分在紫外光灯365nm下的薄层TLC图。
图2为墨旱莲药材偏脂溶性成分在紫外光灯365nm下的薄层TLC图。
图3为墨旱莲药材偏脂溶性成分用10％硫酸乙醇溶液显色后，紫外光灯365nm下检视的薄层TLC图。
图4为墨旱莲药材偏脂溶性成分用10％硫酸乙醇溶液显色后，日光下检视的薄层TLC 图。
图5为墨旱莲药材中极性成分在紫外光灯365nm下的薄层TLC图。
图6为墨旱莲药材水溶性成分在紫外光灯365nm下的薄层TLC图。
图7为墨旱莲药材水溶性成分用10％硫酸乙醇溶液显色后，紫外光灯365nm下检视的薄层TLC图。
图8为墨旱莲药材水溶性成分用10％硫酸乙醇溶液显色后，透过灯光检视的薄层TLC 图。
图1中，1墨旱莲对照药材；2.3.4.5为墨旱莲药材。
图2、3、4为同一块薄层板，不同检视条件下的薄层色谱图，其中，1墨旱莲对照药材；2.3.4.5为墨旱莲药材。
图5中，1墨旱莲对照药材；2.3.4.5为墨旱莲药材。
图6、7、8为同一块薄层板，不同检视条件下的薄层色谱图，其中，1.墨旱莲对照药材；2.3.4.5为墨旱莲药材。
本发明具体实施方式如下：
(1)墨旱莲药材脂溶性成分薄层鉴别 取墨旱莲药材0.2g，研细，加甲醇2ml，超声处理15分钟，离心，上清液作为供试品溶液；另取墨旱莲对照药材0.2g，同法制备对照药材溶液；吸取供试品溶液和对照药材溶液各4～5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为19∶1的环己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；
(2)墨旱莲药材偏脂溶性成分薄层鉴别 吸取(1)项下的供试品溶液和对照药材溶液各4～5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为12∶3∶0.5的环己烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色主荧光斑点；再喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；再置日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色斑点；
(3)墨旱莲药材中极性成分的薄层鉴别 吸取(1)项下的供试品溶液和对照药材溶液各4～5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为6∶4∶0.5的环己烷-乙酸乙酯 -甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；
(4)墨旱莲药材极性成分的薄层鉴别 吸取(1)项下的供试品溶液和对照药材溶液各4～5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为10∶3∶0.2∶0.3的三氯甲烷-甲醇-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；再喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点；再置暗室内透过灯光检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。
参考文献
【1】色谱图库-中药材-薄层色谱-墨旱莲-不同薄层板薄层色谱图比较(1)～(6)
【2】孙传花2016.1.14上传到百度文库的文献“2个批次的墨旱莲薄层色谱图”。
Claims (2)
1.一种墨旱莲药材的梯度全信息薄层鉴别方法，其特征在于：
(1)墨旱莲药材脂溶性成分薄层鉴别：取墨旱莲药材0.2g，研细，加甲醇2ml，超声处理15分钟，离心，上清液作为供试品溶液；另取墨旱莲对照药材0.2g，同法制备对照药材溶液；吸取供试品溶液和对照药材溶液各4～5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为19∶1的环己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；
(2)墨旱莲药材偏脂溶性成分薄层鉴别：吸取(1)项下的供试品溶液和对照药材溶液各4～5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为12∶3∶0.5的环己烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色主荧光斑点；再喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；再置日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色斑点；
(3)墨旱莲药材的中极性成分薄层鉴别：吸取(1)项下的供试品溶液和对照药材溶液各4～5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为6∶4∶0.5的环己烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；
(4)墨旱莲药材极性成分的薄层鉴别：吸取(1)项下的供试品溶液和对照药材溶液各4～5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为10∶3∶0.2∶0.3的三氯甲烷-甲醇-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；再喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点；再置暗室内透过灯光检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。
2.根据权利要求1所述的一种墨旱莲药材的梯度全信息薄层鉴别方法，其特征在于以4种不同的展开剂，在4块薄层板上共检出特征性斑点约27个，共花费时间约1.5小时、提取溶剂4ml、展开剂40ml。
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Denomination of invention: A gradient full information thin-layer identification method for the medicinal herb of Echinochloa grandiflorus Effective date of registration: 20231114 Granted publication date: 20210601 Pledgee: Bank of Jinhua Limited by Share Ltd. science and Technology Branch Pledgor: ZHEJIANG DKCOM ANIMAL HEALTH PRODUCTS Co.,Ltd. Registration number: Y2023980065314 |