CN110794131A - 一种白介素-6检测试剂盒及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及生物技术领域,涉及一种白介素‑6检测试剂盒,尤其涉及一种白介素‑6检测试剂盒的制备方法,公开了包括试剂R1和试剂R2的组分和浓度,所述试剂R2由第二缓冲液、保存液以及胶乳微球抗体偶联物组成,其保存液由N,N‑二羟乙基甘氨酸、第二稳定剂、第二防腐剂构成,胶乳微球抗体偶联物由胶乳微球、白介素‑6抗体、1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐构成。本发明的优点是:该方法使用的样本量较少,与其他检测方法相比具有简单、准确、快速的特点,并可在全自动生化分析仪上批量分析实现高通量检测;该试剂盒具有稳定性好、灵敏度高、线性范围宽、特异性高、精密度好、检测时间短等特点,且价格低廉。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域,涉及一种白介素-6检测试剂盒,尤 其涉及一种白介素-6检测试剂盒的制备方法。
背景技术
白介素-6(IL-6)是一种功能广泛的多效性细胞因子。白介素-6 不仅对B细胞有生理活性作用,对T细胞、造血干细胞、肝细胞和脑 细胞均有生理活性作用,其能够诱导B细胞分化产生免疫球蛋白,促 进T细胞的增殖生长,促进骨髓造血干细胞的增殖,增强血细胞的分 化及其抗瘤效应等。白介素-6的生物学功能,在抗感染、肿瘤、免疫 性疾病及免疫调节等方面均发挥重要作用。
研究表明,在发生外伤、外科手术,应激反应,感染,脑死亡, 肿瘤产生以及其他情况的急性炎症反应过程中,白介素-6会快速产生。 连续监测重症监护病人血清或血浆中白介素-6的含量,能有效评估系 统性炎症反应综合征(SIRS)的严重程度,脓毒血症以及脓毒血症性 休克的预后情况。白介素-6能作为脓毒血症的早期预警指标,同时白 介素-6在慢性炎症反应中也扮演着重要角色。
目前在国内,白介素-6的检测在临床应用上主要以国外进口试剂 和酶联免疫吸附试验法(ELISA)为主,进口试剂价格昂贵,对于患 者来说经济负担较大,不利于基层推广;而ELISA方法检测灵敏度较 低,线性范围较窄,检测过程耗时长,并且通常只适用手工操作,不 利于全自动检测仪器的检测,从而限制了该方法的推广应用。目前, 具有自主知识产权的国产白介素-6免疫化学发光试剂盒比较少,因此, 提供一种分析灵敏度高且线性范围较宽的白介素-6国产试剂盒在临 床应用上具有重要的现实意义。
发明内容
本发明的目的是:针对上述不足,提供稳定性好、灵敏度高、线 性范围宽、特异性高、精密度好、检测时间短的一种白介素-6检测 试剂盒及其制备方法。
为达到上述目的,本发明采用的技术方案是:
一种白介素-6检测试剂盒,包括试剂R1和试剂R2,所述试剂R1 的各组分及浓度包括:
所述试剂R2由第二缓冲液、保存液以及胶乳微球抗体偶联物组 成,其保存液由N,N-二羟乙基甘氨酸、第二稳定剂、第二防腐剂构 成,胶乳微球抗体偶联物由胶乳微球、白介素-6抗体、1-(3-二甲氨 基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐构成,各组分的浓度为:
1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐0.01-0.3g/L。
试剂R1中的第一缓冲液包括PBS缓冲液、HEPES缓冲液、MES 缓冲液、Tris缓冲液中的一种或几种。
试剂R1的第一稳定剂以及R2中的第二稳定剂均为酪蛋白、甘 露醇、牛血清白蛋白中的一种或几种以上混合物。
试剂R1中的电解质为氯化钠、氯化钾、氯化镁、硫酸镁中一种 或两种以上混合物。
试剂R1中的表面活性剂为吐温20、曲拉通、聚乙烯吡咯烷酮、 辛基苯基聚氧乙烯醚中的一种或几种以上混合物。
试剂R1中的第一防腐剂以及R2中的第二防腐剂均为叠氮钠、 Proclin-950、Proclin-300、硫柳汞中的一种。
试剂R2中的第二缓冲液为PBS缓冲液、HEPES缓冲液、甘氨酸 缓冲体系、MES缓冲液、Tris缓冲液中的一种或几种。
试剂R2中的胶乳微球所选粒径为80-250nm,其表面修饰集团为 羧基、羟基、醛基、氨基中的一种。
一种白介素-6检测试剂盒的制备方法,包括如下步骤:A)、试剂 R1制备:
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上,调节搅拌子至中 档转速,使溶液保持中速转动状态,边搅拌边投入第一缓冲液、第一 稳定剂、电解质、表面活性剂、聚乙二醇6000和第一防腐剂,搅拌 20-30分钟至物料完全溶解、溶液清澈透明、配液罐底部无沉淀后, 调节pH值到8.30-10.50之间,最后定容至最终体积,存放在成品罐 中,进行标识;
B)、试剂R2制备:
B1缓冲液的制备:在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器 上,调节搅拌子至中档转速,使溶液保持中速转动状态,边搅拌边投 入第二缓冲液,搅拌20-30分钟至物料完全溶解,调节pH值到 6.00-7.50之间,继续搅拌5-10分钟至溶液清澈透明,配液罐底部 无沉淀,定容至最终体积,溶液存放备用,进行标识;
B2保存液的制备:在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器 上,调节搅拌子至中档转速,使溶液保持中速转动状态,边搅拌边投 入N,N-二羟乙基甘氨酸、第二稳定剂和第二防腐剂,搅拌20-30分 钟至物料完全溶解,调节pH值到6.00-7.50之间,继续搅拌5-10分 钟至全部物料完全溶解,溶液清澈透明,配液罐底部无沉淀,定容至 最终体积,溶液存放备用,进行标识;
B3胶乳微球抗体偶联物的制备:将胶乳微球以缓冲液稀释到 0.1-2.0%的浓度,将白介素-6抗体以缓冲液稀释到0.5-3.0g/L的 浓度,二者进行混匀,将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸 盐以缓冲液溶解到0.01-0.3g/L的浓度,边摇匀边滴加入上述混合 溶液中,室温反应120分钟,加入第二稳定剂封闭,振荡混匀,室温 反应60分钟,将混合液以14800rpm的转速离心30分钟,吸去上清, 加入保存液,超声重悬,重复离心清洗3次,最后一次离心去上清后, 加入保存液,超声重悬,将制备好的R2装入成品罐中,进行标识。
与现有技术相比,本发明所达到的技术效果是:该发明首次实现 在生化分析仪上检测白介素-6的含量,其检测范围可达到1.5-3000 pg/mL;该方法使用的样本量较少,与其他检测方法相比具有简单、 准确、快速的特点,并可在全自动生化分析仪上批量分析实现高通量 检测;该试剂盒具有稳定性好、灵敏度高、线性范围宽、特异性高、 精密度好、检测时间短等特点,且价格低廉,可广泛应用大、中、小 医院。
附图说明
图1是本发明实施例4中胶乳微球间接偶联白介素-6抗体定标 曲线图。其中X轴表示标准品浓度,Y轴表示吸光度。
图2是本发明实施例4中线性范围测定图。
具体实施方式
下面结合附图及实施例对本发明作进一步描述:
实施例一:
本发明的一种白介素-6检测试剂盒,包括试剂R1和试剂R2, 所述试剂R1的各组分及浓度包括:作为第一缓冲液的三羟甲基氨基 甲烷,含量为6.0g/L,作为第一稳定剂的牛血清白蛋白,含量为0.5 g/L,作为电解质的氯化钠,含量为5.8g/L,作为表面活性剂的吐温20,含量为1ml/L,聚乙二醇6000,含量为40g/L,作为第一 防腐剂的Proclin-950,含量为0.8ml/L;
所述试剂R2由作为第二缓冲液的2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物、 保存液以及胶乳微球抗体偶联物组成,其保存液由N,N-二羟乙基甘 氨酸、作为第二稳定剂的牛血清白蛋白、作为第二防腐剂的 Proclin-950构成,胶乳微球抗体偶联物由胶乳微球、白介素-6抗体、 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐构成,各组分的浓度为: 2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物,浓度为10.00g/L,N,N-二羟乙基甘氨 酸,浓度为1.26g/L,牛血清白蛋白,浓度为0.5g/L,Proclin-950, 浓度为0.8ml/L,胶乳微球,浓度为0.1%,白介素-6抗体,浓度为 0.5g/L,1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐,浓度为0.01 g/L。
试剂R2中的胶乳微球所选粒径为80nm,其表面修饰集团为羧基、 羟基、醛基、氨基中的一种。
一种白介素-6检测试剂盒的制备方法,包括如下步骤:A)、试剂 R1制备:
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上,调节搅拌子至中 档转速,使溶液保持中速转动状态,边搅拌边投入三羟甲基氨基甲烷、 牛血清白蛋白、氯化钠、吐温20、聚乙二醇6000和Proclin-950, 搅拌20分钟至物料完全溶解、溶液清澈透明、配液罐底部无沉淀后, 调节pH值到8.30,最后定容至最终体积,存放在成品罐中,进行标 识;
B)、试剂R2制备:
B1缓冲液的制备:在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器 上,调节搅拌子至中档转速,使溶液保持中速转动状态,边搅拌边投 入2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物,搅拌20分钟至物料完全溶解,调节 pH值到6.00,继续搅拌5分钟至溶液清澈透明,配液罐底部无沉淀, 定容至最终体积,溶液存放备用,进行标识;
B2保存液的制备:在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器 上,调节搅拌子至中档转速,使溶液保持中速转动状态,边搅拌边投 入N,N-二羟乙基甘氨酸、牛血清白蛋白和Proclin-950,搅拌20分 钟至物料完全溶解,调节pH值到6.00之间,继续搅拌5分钟至全部 物料完全溶解,溶液清澈透明,配液罐底部无沉淀,定容至最终体积, 溶液存放备用,进行标识;
B3胶乳微球抗体偶联物的制备:将胶乳微球以缓冲液稀释到0.1 的浓度,将白介素-6抗体以缓冲液稀释到0.5g/L的浓度,二者进 行混匀,将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐以缓冲液溶 解到0.01g/L的浓度,边摇匀边滴加入上述混合溶液中,室温反应 120分钟,加入牛血清白蛋白封闭,振荡混匀,室温反应60分钟, 将混合液以14800rpm的转速离心30分钟,吸去上清,加入保存液, 超声重悬,重复离心清洗3次,最后一次离心去上清后,加入保存液, 超声重悬,将制备好的R2装入成品罐中,进行标识。
实施例二:
本发明的一种白介素-6检测试剂盒,包括试剂R1和试剂R2, 所述试剂R1的各组分及浓度包括:作为第一缓冲液的三羟甲基氨基 甲烷,含量为9g/L,作为第一稳定剂的甘露醇,含量为1.2g/L,作 为电解质的氯化钾,含量为12g/L,作为表面活性剂的曲拉通,含 量为2ml/L,聚乙二醇6000,含量为40-120g/L,作为第一防腐剂 的Proclin-300,含量为1.4ml/L;
所述试剂R2由作为第二缓冲液的2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物、 保存液以及胶乳微球抗体偶联物组成,其保存液由N,N-二羟乙基甘 氨酸、作为第二稳定剂的甘露醇、作为第二防腐剂的Proclin-300构 成,胶乳微球抗体偶联物由胶乳微球、白介素-6抗体、1-(3-二甲氨 基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐构成,各组分的浓度为:2-(N-吗啉) 乙磺酸一水合物,浓度为18g/L,N,N-二羟乙基甘氨酸,浓度为5g/L, 甘露醇,浓度为1g/L,Proclin-300,浓度为1.4ml/L,胶乳微球, 浓度为1%,白介素-6抗体,浓度为2g/L,1-(3-二甲氨基丙基)-3- 乙基碳二亚胺盐酸盐,浓度为0.2g/L。
试剂R2中的胶乳微球所选粒径为160nm,其表面修饰集团为羧 基、羟基、醛基、氨基中的一种。
一种白介素-6检测试剂盒的制备方法,包括如下步骤:A)、试剂 R1制备:
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上,调节搅拌子至中 档转速,使溶液保持中速转动状态,边搅拌边投入三羟甲基氨基甲烷、 甘露醇、氯化钾、曲拉通、聚乙二醇6000和Proclin-300,搅拌25 分钟至物料完全溶解、溶液清澈透明、配液罐底部无沉淀后,调节 pH值到9.3,最后定容至最终体积,存放在成品罐中,进行标识;
B)、试剂R2制备:
B1缓冲液的制备:在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器 上,调节搅拌子至中档转速,使溶液保持中速转动状态,边搅拌边投 入2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物,搅拌25分钟至物料完全溶解,调节 pH值到6.5,继续搅拌7分钟至溶液清澈透明,配液罐底部无沉淀, 定容至最终体积,溶液存放备用,进行标识;
B2保存液的制备:在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器 上,调节搅拌子至中档转速,使溶液保持中速转动状态,边搅拌边投 入N,N-二羟乙基甘氨酸、甘露醇和Proclin-300,搅拌25分钟至物 料完全溶解,调节pH值到6.5,继续搅拌7分钟至全部物料完全溶 解,溶液清澈透明,配液罐底部无沉淀,定容至最终体积,溶液存放 备用,进行标识;
B3胶乳微球抗体偶联物的制备:将胶乳微球以缓冲液稀释到1% 的浓度,将白介素-6抗体以缓冲液稀释到2g/L的浓度,二者进行混 匀,将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐以缓冲液溶解到 0.2g/L的浓度,边摇匀边滴加入上述混合溶液中,室温反应120分 钟,加入Proclin-300封闭,振荡混匀,室温反应60分钟,将混合 液以14800rpm的转速离心30分钟,吸去上清,加入保存液,超声重 悬,重复离心清洗3次,最后一次离心去上清后,加入保存液,超声 重悬,将制备好的R2装入成品罐中,进行标识。
实施例三:
本发明的一种白介素-6检测试剂盒,包括试剂R1和试剂R2, 所述试剂R1的各组分及浓度包括:作为第一缓冲液的三羟甲基氨基 甲烷,含量为12.2g/L,作为第一稳定剂的酪蛋白,含量为2g/L, 作为电解质的氯化镁,含量为20.0g/L,作为表面活性剂的聚乙烯 吡咯烷酮,含量为3ml/L,聚乙二醇6000,含量为120g/L,作为 第一防腐剂的叠氮钠,含量为2.0ml/L;
所述试剂R2由作为第二缓冲液的2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物、 保存液以及胶乳微球抗体偶联物组成,其保存液由N,N-二羟乙基甘 氨酸、作为第二稳定剂的酪蛋白、作为第二防腐剂的叠氮钠构成,胶 乳微球抗体偶联物由胶乳微球、白介素-6抗体、1-(3-二甲氨基丙 基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐构成,各组分的浓度为:2-(N-吗啉)乙磺 酸一水合物,浓度为25.30g/L,N,N-二羟乙基甘氨酸,浓度为9.83 g/L,酪蛋白,浓度为1.5g/L,叠氮钠,浓度为2.0ml/L,胶乳微 球,浓度为2.0%,白介素-6抗体,浓度为3.0g/L,1-(3-二甲氨基 丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐,浓度为0.3g/L。
试剂R2中的胶乳微球所选粒径为250nm,其表面修饰集团为羧 基、羟基、醛基、氨基中的一种。
一种白介素-6检测试剂盒的制备方法,包括如下步骤:A)、试剂 R1制备:
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上,调节搅拌子至中 档转速,使溶液保持中速转动状态,边搅拌边投入三羟甲基氨基甲烷、 酪蛋白、氯化镁、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇6000和叠氮钠,搅拌 30分钟至物料完全溶解、溶液清澈透明、配液罐底部无沉淀后,调 节pH值到10.50,最后定容至最终体积,存放在成品罐中,进行标 识;
B)、试剂R2制备:
B1缓冲液的制备:在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器 上,调节搅拌子至中档转速,使溶液保持中速转动状态,边搅拌边投 入2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物,搅拌30分钟至物料完全溶解,调节 pH值到7.50,继续搅拌10分钟至溶液清澈透明,配液罐底部无沉淀, 定容至最终体积,溶液存放备用,进行标识;
B2保存液的制备:在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器 上,调节搅拌子至中档转速,使溶液保持中速转动状态,边搅拌边投 入N,N-二羟乙基甘氨酸、酪蛋白和叠氮钠,搅拌30分钟至物料完全 溶解,调节pH值到7.50,继续搅拌10分钟至全部物料完全溶解,溶液清澈透明,配液罐底部无沉淀,定容至最终体积,溶液存放备用, 进行标识;
B3胶乳微球抗体偶联物的制备:将胶乳微球以缓冲液稀释到 2.0%的浓度,将白介素-6抗体以缓冲液稀释3.0g/L的浓度,二者 进行混匀,将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐以缓冲液 溶解到0.3g/L的浓度,边摇匀边滴加入上述混合溶液中,室温反应 120分钟,加入酪蛋白封闭,振荡混匀,室温反应60分钟,将混合 液以14800rpm的转速离心30分钟,吸去上清,加入保存液,超声重 悬,重复离心清洗3次,最后一次离心去上清后,加入保存液,超声 重悬,将制备好的R2装入成品罐中,进行标识。
实施例四:
胶乳微球间接偶联白介素-6抗体,使用标准品进行定标,结果 如表1和图1所示。
表1:胶乳微球间接偶联白介素-6抗体定标结果:
选取待测样本用生理盐水进行稀释,产生接近于方法线性范围低 限浓度水平的样本,一般为4个浓度水平,分别为:1.0pg/mL、1.2 pg/mL、1.5pg/mL和2.0pg/mL,每个浓度水平样本重复测定10次, 以CV≤8%为可接受界值,由数据中选取CV值等于或小于可接受界值 的最低浓度水平做为检测范围低限,结果如表2所示。
选取待测样本用生理盐水进行稀释,产生接近于方法线性范围高 限浓度水平的样本,一般为4个浓度水平,分别为:2500pg/mL、3000 pg/mL、3500pg/mL和4000pg/mL,每个浓度水平样本重复测定10 次,以CV≤8%为可接受界值,由数据中选取CV值等于或小于可接受 界值的最高浓度水平做为检测范围高限,结果如表3所示。
表2:
当样本浓度低于1.2pg/mL时,CV>8%;当样本浓度高于1.5 pg/mL时,CV<8%;故线性范围低限定为1.5pg/mL。
表3:
当样本浓度高于3500pg/mL时,CV>8%;当样本浓度低于3000 pg/mL时,CV<8%;故线性范围高限定为3000pg/mL。
综上所述,该发明的线性范围可做到1.5-3000pg/mL。
实施例五:
精密度CV检测:
胶乳微球间接偶联白介素-6抗体,对五个样本本重复检测10次, 检测结果如表4所示:
表4:
1 | 1.7 | 84.4 | 393.4 | 1497.2 | 2879.9 |
2 | 1.8 | 83.3 | 370.5 | 1403.0 | 2689.6 |
3 | 1.7 | 76.4 | 368.0 | 1405.0 | 2909.0 |
4 | 1.6 | 80.0 | 380.3 | 1442.2 | 2719.9 |
5 | 1.9 | 76.8 | 386.8 | 1469.1 | 2854.7 |
6 | 1.9 | 79.6 | 388.2 | 1470.8 | 2979.3 |
7 | 1.7 | 79.6 | 359.6 | 1416.3 | 2726.9 |
8 | 1.9 | 75.1 | 400.0 | 1421.1 | 2703.7 |
9 | 1.9 | 79.4 | 391.3 | 1438.2 | 2779.2 |
10 | 1.7 | 77.4 | 396.6 | 1465.0 | 2971.6 |
均值 | 1.8 | 79.2 | 383.5 | 1442.8 | 2821.4 |
SD | 0.11 | 2.95 | 13.44 | 31.86 | 111.52 |
CV | 6.38% | 3.73% | 3.51% | 2.21% | 3.95% |
精密度CV较小,8%以内。
现有的白介素-6试剂与本发明的相关性测试:
对照试剂与本发明试剂盒按照各自的参数同时检测20例临床血 清,对测定结果进行相关性分析,结果如图所示,R2>0.95,符合临
综上所述:与现有技术相比,本发明所达到的技术效果是:该发 明首次实现在生化分析仪上检测白介素-6的含量,其检测范围可达 到1.5-3000pg/mL;该方法使用的样本量较少,与其他检测方法相 比具有简单、准确、快速的特点,并可在全自动生化分析仪上批量分 析实现高通量检测;该试剂盒具有稳定性好、灵敏度高、线性范围宽、 特异性高、精密度好、检测时间短等特点,且价格低廉,可广泛应用 大、中、小医院。
上述实施例只为说明本发明的技术构思及特点,其目的在于让熟悉此 项技术的人士能够了解本发明的内容并据以实施,并不能以此限制本 发明的保护范围。凡根据本发明精神实质所作的等效变化或修饰,都 应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (9)
2.根据权利要求1所述的一种白介素-6检测试剂盒,其特征在于:所述试剂R1中的第一缓冲液包括PBS缓冲液、HEPES缓冲液、MES缓冲液、Tris缓冲液中的一种或几种。
3.根据权利要求1所述的一种白介素-6检测试剂盒,其特征在于:所述试剂R1的第一稳定剂以及R2中的第二稳定剂均为酪蛋白、甘露醇、牛血清白蛋白中的一种或几种以上混合物。
4.根据权利要求1所述的一种白介素-6检测试剂盒,其特征在于:所述试剂R1中的电解质为氯化钠、氯化钾、氯化镁、硫酸镁中一种或两种以上混合物。
5.根据权利要求1所述的一种白介素-6检测试剂盒,其特征在于:所述试剂R1中的表面活性剂为吐温20、曲拉通、聚乙烯吡咯烷酮、辛基苯基聚氧乙烯醚中的一种或几种以上混合物。
6.根据权利要求1所述的一种白介素-6检测试剂盒,其特征在于:所述试剂R1中的第一防腐剂以及R2中的第二防腐剂均为叠氮钠、Proclin-950、Proclin-300、硫柳汞中的一种。
7.根据权利要求1所述的一种白介素-6检测试剂盒,其特征在于:所述试剂R2中的第二缓冲液为PBS缓冲液、HEPES缓冲液、甘氨酸缓冲体系、MES缓冲液、Tris缓冲液中的一种或几种。
8.根据权利要求1所述的一种白介素-6检测试剂盒,其特征在于:所述试剂R2中的胶乳微球所选粒径为80-250nm,其表面修饰集团为羧基、羟基、醛基、氨基中的一种。
9.如权利要求1-8中任一一种白介素-6检测试剂盒的制备方法,其特征在于:包括如下步骤:A)、试剂R1制备:
在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上,调节搅拌子至中档转速,使溶液保持中速转动状态,边搅拌边投入第一缓冲液、第一稳定剂、电解质、表面活性剂、聚乙二醇6000和第一防腐剂,搅拌20-30分钟至物料完全溶解、溶液清澈透明、配液罐底部无沉淀后,调节pH值到8.30-10.50之间,最后定容至最终体积,存放在成品罐中,进行标识;
B)、试剂R2制备:
B1 缓冲液的制备:在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上,调节搅拌子至中档转速,使溶液保持中速转动状态,边搅拌边投入第二缓冲液,搅拌20-30分钟至物料完全溶解,调节pH值到6.00-7.50之间,继续搅拌5-10分钟至溶液清澈透明,配液罐底部无沉淀,定容至最终体积,溶液存放备用,进行标识;
B2 保存液的制备:在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上,调节搅拌子至中档转速,使溶液保持中速转动状态,边搅拌边投入N,N-二羟乙基甘氨酸、第二稳定剂和第二防腐剂,搅拌20-30分钟至物料完全溶解,调节pH值到6.00-7.50之间,继续搅拌5-10分钟至全部物料完全溶解,溶液清澈透明,配液罐底部无沉淀,定容至最终体积,溶液存放备用,进行标识;
B3 胶乳微球抗体偶联物的制备:将胶乳微球以缓冲液稀释到0.1-2.0%的浓度,将白介素-6抗体以缓冲液稀释到0.5-3.0g/L的浓度,二者进行混匀,将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐以缓冲液溶解到0.01-0.3g/L的浓度,边摇匀边滴加入上述混合溶液中,室温反应120分钟,加入第二稳定剂封闭,振荡混匀,室温反应60分钟,将混合液以14800rpm的转速离心30分钟,吸去上清,加入保存液,超声重悬,重复离心清洗3次,最后一次离心去上清后,加入保存液,超声重悬,将制备好的R2装入成品罐中,进行标识。
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