CN110785408A

CN110785408A - 吲哚胺2,3-双加氧酶的调节剂

Info

Publication number: CN110785408A
Application number: CN201880043633.7A
Authority: CN
Inventors: M.A.德拉罗萨; W.M.卡兹米尔斯基
Original assignee: Glaxo Group Ltd
Current assignee: Glaxo Group Ltd; GlaxoSmithKline Intellectual Property Development Ltd
Priority date: 2017-06-28
Filing date: 2018-06-27
Publication date: 2020-02-11
Also published as: WO2019003143A1; JP2020525486A; CA3066973A1; BR112019027363A2; US20210139467A1; EP3645512A1

Abstract

提供的是式I的IDO抑制剂化合物及其药学上可接受的盐、它们的药物组合物、它们的制备方法以及将它们用于预防和/或治疗疾病的方法。式I

Description

吲哚胺2,3-双加氧酶的调节剂

发明领域

公开了用于预防和/或治疗HIV的化合物、方法和药物组合物；包括通过施用治疗有效量的某些吲哚胺2,3-双加氧酶化合物预防AIDS和全身的免疫抑制的进展。还公开了制备此类化合物的方法以及使用所述化合物及其药物组合物的方法。

发明背景

吲哚胺-2,3-双加氧酶1(IDO1)是一种含血红素的酶，其催化色氨酸的吲哚环氧化以生成N-甲酰基犬尿氨酸，该N-甲酰基犬尿氨酸快速地和组成性地转化为犬尿氨酸(Kyn)和一系列下游代谢物。IDO1是该色氨酸代谢的犬尿氨酸途径的限速步骤，并且在炎症的情况下IDO1的表达是可诱导的。诱导IDO1的刺激包括病毒或细菌产物，或与感染、肿瘤或无菌组织损伤有关的炎性细胞因子。Kyn和几种下游代谢物具有免疫抑制作用：Kyn对T细胞和NK细胞具有抗增殖和促凋亡作用(Munn, Shafizadeh等人 1999, Frumento, Rotondo等人2002)，而代谢物如3-羟基邻氨基苯甲酸(3-HAA)或3-HAA氧化二聚产物朱红菌素酸(CA)抑制吞噬细胞功能(Sekkai, Guittet等人 1997)，并诱导免疫抑制性调节性T细胞(Treg)的分化，同时抑制肠道保护性的产生IL-17或IL-22的CD4+ T细胞(Th17和Th22)的分化(Favre, Mold等人 2010)。除了其它机制以外，IDO1诱导可能在限制主动免疫反应期间的免疫病理学，促进免疫反应的分辨(resolution)以及促进胎儿耐受性中是重要的。然而，在慢性场合如癌症或慢性病毒或细菌感染中，IDO1活性会阻止肿瘤或病原体的清除，并且如果活性是全身性的，IDO1活性可能会导致全身性免疫功能障碍(Boasso和Shearer 2008,Li, Huang等人 2012)。除了这些免疫调节作用外，还已知IDO1的代谢物(例如Kyn和喹啉酸)具有神经毒性，并在几种神经功能障碍的病况和抑郁症中被发现升高。因此，IDO1是抑制多种适应症的治疗靶标，例如用以促进肿瘤清除，成功清除难治的病毒或细菌感染，减少全身免疫功能障碍(表现为在HIV感染期间的持续的炎症或在败血症期间的免疫抑制)和预防或逆转神经学病况。

IDO1和HIV感染中的持续的炎症:

尽管抗逆转录病毒疗法(ART)在抑制HIV复制和减少AIDS相关病况的出现方面取得了成功，但接受ART的HIV感染的患者具有比他们的未感染的对应人群更高的非AIDS发病率和死亡率的出现。这些非AIDS病况包括癌症、心血管疾病、骨质疏松症、肝病、肾病、虚弱和神经认知功能障碍(Deeks 2011)。若干研究表明，非AIDS发病率/死亡率与持续的炎症有关，与对应人群相比其在接受ART的HIV感染的患者中保持升高(Deeks 2011)。因此，猜测尽管ART进行了病毒学抑制，但持续的炎症和免疫功能障碍是这些非AIDS定义事件(NADE)的一个原因。

HIV感染并杀死CD4+ T细胞，特别偏好如驻留在粘膜表面的淋巴组织中的那些CD4+ T细胞那样的细胞(Mattapallil, Douek等人 2005)。这些细胞的丧失与对感染的炎症反应相结合，导致宿主与所有病原体(包括HIV本身，但扩展到先前存在的或获得的病毒感染、真菌感染以及皮肤和粘膜表面中的驻留细菌)之间的关系受到干扰。这种功能失调的宿主：病原体关系导致宿主对通常是小问题的过度反应并允许病原体在微生物丛中向外生长。因此，该功能失调的宿主：病原体相互作用会导致炎症加剧，进而导致更严重的功能障碍，从而引发恶性循环。由于炎症被认为会导致非AIDS发病率/死亡率，因此控制改变了的宿主：病原体相互作用的机制是治疗目标。

在未经治疗和治疗的HIV感染以及灵长类SIV感染模型中，IDO1的表达和活性增加(Boasso, Vaccari等人 2007, Favre, Lederer等人 2009, Byakwaga, Boum等人 2014,Hunt, Sinclair等人 2014, Tenorio, Zheng等人 2014)。如酶底物和产物的血浆水平之比(Kyn/Tryp或K:T比)所示，IDO1活性与其它炎症标志物相关并且是非AIDS发病率/死亡率的最强预测因子之一(Byakwaga, Boum等人 2014, Hunt, Sinclair等人 2014, Tenorio,Zheng等人 2014)。此外，与IDO1活性增加对免疫***的预期影响相一致的特征是HIV和SIV诱导的免疫功能障碍的主要特征，例如对抗原的T细胞增殖反应降低以及全身和肠道隔室中Treg:Th17的失衡(Favre, Lederer等人 2009, Favre, Mold等人 2010)。因此，我们和其他人猜测IDO1在驱动免疫功能障碍和与非AIDS发病率/死亡率相关的炎症的恶性循环中起作用。因此，我们提议抑制IDO1将在ART抑制的HIV感染的人中减少炎症并降低NADE的风险。

IDO1和HIV以外的持续的炎症

如上所述，与治疗的慢性HIV感染相关的炎症可能是多种终末器官疾病的驱动因素[Deeks 2011]。但是，这些终末器官疾病并非HIV感染所独有，并实际上是在HIV感染人群中较早发生的常见衰老疾病。在未感染的普通人群中，病因不明的炎症是发病率和死亡率的主要相关因素[Pinti, 2016 #88]。实际上，许多炎症标志物是共享的，例如IL-6和CRP。如果，如上面猜测的那样，IDO1通过在GI道或全身组织中诱导免疫功能障碍而在HIV感染人群中引起持续的炎症，那么IDO1也可能会导致炎症并因此在更广泛的人群中导致终末器官疾病。这些与炎症相关的终末器官疾病的例子有心血管疾病、代谢综合征、肝病(NAFLD，NASH)、肾病、骨质疏松症和神经认知障碍。确实，IDO1途径在文献中与肝病(ItalianAssoc. for the Study of the Liver Conference 2015的Vivoli摘要]、糖尿病[Baban,2010 #89]、慢性肾病[Schefold, 2009 #90]、心血管疾病[Mangge, 2014 #92;Mangge,2014 #91]以及全身性老化和所有原因的死亡率[Pertovaara, 2006 #93]有关。因此，IDO1的抑制可用于减少一般人群的炎症，以减少与炎症和衰老相关的特定终末器官疾病的发生。

IDO1和肿瘤学

IDO表达可在多种人类癌症(例如；黑素瘤、胰腺癌、卵巢癌、AML、CRC、***癌和子宫内膜癌)中检测到，并且与不良预后相关(Munn 2011)。多种免疫抑制作用可归于IDO的作用，包括诱导Treg分化和过度激活，抑制Teff免疫反应和降低的DC功能，所有这些都削弱了免疫识别并促进了肿瘤的生长(Munn 2011)。人脑肿瘤中IDO的表达与存活率降低有关。垂直生长的和转基因的神经胶质瘤小鼠模型证明IDO表达减少与Treg浸润减少以及长期存活率增加之间存在相关性(Wainwright, Balyasnikova等人 2012)。在人类黑素瘤中，高比例的肿瘤(36例中的33例)显示出IDO升高，表明在建立特征在于MDSC以Treg依赖性方式扩展、激活和募集的免疫抑制性肿瘤微环境(TME)中的重要作用(Holmgaard, Zamarin等人2015)。另外，已经在引流***和肿瘤本身中鉴定了表达宿主IDO的免疫细胞(Mellor和Munn 2004)。因此，肿瘤和宿主来源的IDO均被认为有助于TME的免疫抑制状态。

IDO的抑制是为重建针对癌症的免疫原性反应而提出的首要小分子药物策略之一(Mellor和Munn 2004)。1-甲基色氨酸的d-对映体(D-1MT或indoximod)是第一个进入临床试验的IDO抑制剂。尽管该化合物明确地抑制了IDO的活性，但它是分离的酶的非常弱的抑制剂，并且仍在阐明该化合物的体内作用机理。Incyte的研究者将通过筛选过程获得的命中化合物优化为具有足够的口服暴露的有效且选择性的抑制剂，以证明在小鼠黑素瘤模型中肿瘤生长的延迟(Yue, Douty等人 2009)。该系列的进一步发展导致INCB204360，其在瞬时转染人或小鼠酶的细胞系中对IDO-1的抑制具有优于IDO-2和TDO的高度选择性(Liu,Shin等人 2010)。对于内源性地表达IDO1的细胞系和原发性人类肿瘤，观察到相似的效力(IC50s ~ 3-20 nM)。当在DC和初始CD4⁺CD25^- T细胞的共培养物中进行测试时，INCB204360阻断这些T细胞向CD4⁺FoxP3⁺ Tregs的转化。最后，当在具有免疫能力的小鼠的同系模型(PAN02胰腺细胞)中进行测试时，口服给药的INCB204360提供了肿瘤生长的显著剂量依赖性的抑制，但对植入免疫缺陷小鼠的同一肿瘤没有影响。相同研究者的其它研究表明，在具有免疫能力的小鼠的另一同系肿瘤模型中，IDO1的抑制与全身性犬尿氨酸水平的抑制以及肿瘤生长的抑制之间存在相关性。基于这些临床前研究，INCB24360进入了治疗转移性黑色瘤的临床试验(Beatty, O'Dwyer等人 2013)。

鉴于色氨酸的分解代谢在维持免疫抑制中的重要性，因此，并不惊讶的是也已经检测到第二种色氨酸代谢酶TDO2被多种实体瘤(例如膀胱癌和肝癌、黑素瘤)过度表达。对104种人类细胞系的一项调查揭示，20/104具有TDO表达，17/104具有IDO1且16/104表达两者(Pilotte, Larrieu等人 2012)。类似于IDO1的抑制，对TDO2的选择性抑制可有效逆转过度表达TDO2的肿瘤的免疫抵抗(Pilotte, Larrieu等人 2012)。这些结果支持TDO2抑制和/或双重TDO2/IDO1抑制作为改善免疫功能的可行治疗策略。

多项临床前研究已经表明，将IDO-1抑制剂与针对CTLA-4、PD-1和GITR的T细胞检查点调节性mAb结合使用具有重要的，甚至是协同的价值。在每种情况下，在跨越各种鼠类模型的这些研究中均观察到了改善的免疫活性/功能的功效和相关的PD方面(Balachandran, Cavnar等人 2011, Holmgaard, Zamarin等人 2013, M. Mautino 2014,Wainwright, Chang等人 2014)。Incyte IDO1抑制剂(INCB204360, epacadostat)已与CTLA4阻滞剂(伊匹木单抗)联用进行了临床测试，但由于联用所见的剂量限制性不良事件，不清楚是否达到了有效剂量。相反，最近发布的一项组合了Epacadostat与Merck的PD-1mAb (派姆单抗)的正在进行的试验的数据表明了该组合的改善的耐受性，从而允许更高剂量的IDO1抑制剂。存在令人鼓舞的跨跃多种肿瘤类型的若干临床反应。然而，尚不清楚这种组合是否比派姆单抗的单药活性有所改善(Gangadhar, Hamid等人 2015)。类似地，在最近完成了针对晚期肿瘤患者的1a期安全性和PK/PD研究之后，Roche/Genentech正在进行将NGL919/ GDC-0919与PD-L1 (MPDL3280A, Atezo)和OX-40的两种mAb结合使用。

IDO1和慢性感染

IDO1活性会产生犬尿氨酸途径代谢物如Kyn和3-HAA，其至少会损害T细胞、NK细胞和巨噬细胞活性(Munn, Shafizadeh等人 1999, Frumento, Rotondo等人 2002) (Sekkai,Guittet等人 1997, Favre, Mold等人 2010)。Kyn水平或Kyn/Tryp比在慢性HIV感染(Byakwaga, Boum等人 2014, Hunt, Sinclair等人 2014, Tenorio, Zheng等人 2014)、HBV感染(Chen, Li等人 2009)、HCV感染(Larrea, Riezu-Boj等人 2007, Asghar, Ashiq等人 2015)和TB感染(Suzuki, Suda等人 2012)的场合下升高并与抗原特异性T细胞功能障碍相关(Boasso, Herbeuval等人 2007, Boasso, Hardy等人 2008, Loughman 和Hunstad 2012, Ito, Ando等人 2014, Lepiller, Soulier等人 2015)。因此，认为在这些慢性感染的情况下，IDO1介导的病原体特异性T细胞反应的抑制在感染的持续性中起作用，并且IDO1的抑制可能对促进清除和解决感染具有益处。

IDO1和败血症

观察到败血症期间IDO1表达和活性升高，并且Kyn或Kyn/Tryp升高的程度对应于疾病严重性增加，包括死亡率增加(Tattevin, Monnier等人 2010, Darcy, Davis等人 2011)。在动物模型中，对IDO1或IDO1基因敲除的阻断可保护小鼠免受致死剂量的LPS或盲肠结扎/穿孔模型中的死亡的影响(Jung, Lee等人 2009, Hoshi, Osawa等人 2014)。败血症的特征是在严重病例中的免疫抑制期(Hotchkiss, Monneret等人 2013)，这可能表明IDO1作为免疫功能障碍的介质的作用，并表明IDO1的药理学抑制可为败血症提供临床益处。

IDO1和神经学病症

除了免疫学场合外，IDO1活性还与神经学场合中的疾病相关(在LovelaceNeuropharmacology 2016(Lovelace, Varney等人 2016)中综述)。犬尿氨酸途径代谢物(例如3-羟基犬尿氨酸和喹啉酸)具有神经毒性，但与互生的具有神经保护作用的代谢物犬尿烯酸或吡啶甲酸平衡。其中已证明犬尿氨酸途径代谢物与疾病相关的神经变性和精神病症包括多发性硬化症、运动神经元病症如肌萎缩性侧索硬化症、亨廷顿氏病、帕金森氏病、阿尔茨海默氏病、重度抑郁症、精神***症、厌食症(Lovelace, Varney等人 2016)。神经学疾病的动物模型已显示出弱的IDO1抑制剂(例如1-甲基色氨酸)对疾病的某些影响，这表明IDO1抑制可能为预防或治疗神经学和精神病症提供临床益处。

因此，将有效平衡上述特性的IDO抑制剂发现为降低非AIDS发病率/死亡率的发生的慢性HIV感染的疾病改良疗法；和/或预防败血症的死亡率的疾病改良疗法；和/或增强对HIV、HBV、HCV和其它慢性病毒感染、慢性细菌感染、慢性真菌感染以及对肿瘤的免疫反应的免疫疗法；和/或用于治疗抑郁症或其它神经学/神经精神性病症将是本领域的进步。

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发明概述

简而言之，一方面，本发明公开了式I的化合物

或其药学上可接受的盐，其中：

每个X都是CH，或者一个X是N，且另两个X是CH；

R¹和R²独立地是H或C_1-3烷基，或者R¹和R²可以与它们键合的碳原子一起连接形成3-6元环烷基；

R³是CO₂H或酸电子等排体；

R⁴是含有1-4个选自N、S和O的杂原子的5或6元杂环或杂芳基，其中所述杂环或杂芳基可任选被1或2个取代基取代，所述取代基选自卤素、C_3-6环烷基、CH₂OH、C(O)NH₂、CN、CH₂OC_1-3烷基、任选被1-3个卤素取代的C_1-3烷基，并且其中通过将所述CH₂OH基团转化为CH₂OC(O)CH₃、CH₂OC(O)C(C_1-4烷基)₃或OP(O)(OH)₂基团或OP(O)(OC_1-4烷基)₂基团任选将所述CH₂OH转化为前药；

R⁵是任选被OH或OCH₃基团或1或2个卤素取代的4、5或6元环烷基，或者任选被选自以下的取代基取代的含有O或N的5或6元杂环：卤素、OH、C_1-4烷基；OC_1-3烷基、C(O)C_3-6环烷基、BOC、C(O)C_1-3烷基-O-C_1-3烷基；C(O)C_1-3烷基；C(O)-O-C_1-3烷基，和含有1-4个选自N、S和O的杂原子的4至6元杂环或杂芳基，其中所述杂环或杂芳基可任选被1个取代基取代，所述取代基选自卤素、C_3-6环烷基、CH₂OH、C(O)NH₂、CN、CH₂OC_1-3烷基、任选被1-3个卤素取代的C_1-3烷基。

在另一方面，本发明公开了治疗将从IDO的抑制中受益的疾病或病况的方法。

在另一方面，本发明公开了包含式I的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物。

在另一方面，本发明提供了用于治疗的式I的化合物或其药学上可接受的盐。

在另一方面，本发明提供了用于治疗将从IDO的抑制中受益的疾病或病况的式I的化合物或其药学上可接受的盐。

在另一方面，本发明提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗将从IDO的抑制中受益的疾病或病况的药物中的用途。

在另一方面，本发明公开了一种用于治疗至少部分地由病毒的逆转录病毒家族中的病毒介导的患者中的病毒感染的方法，该方法包括向所述患者施用包含式I的化合物或其药学上可接受的盐的组合物。在一些实施方案中，病毒感染由HIV病毒介导。

在另一方面，本发明的一个具体实施方案提供了一种治疗被HIV感染的对象的方法，该方法包括向该对象施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐。

在又另一方面，本发明的一个具体实施方案提供了一种在具有感染HIV风险的对象中抑制HIV感染的进展的方法，该方法包括向该对象施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐。在下文中进一步描述了那些和其它实施方案。

代表性实施方案的详述

优选地，R¹和R²独立地是H或CH₃，或者R¹和R²与它们键合的碳一起形成环丙基环。

优选地，R³是CO₂H、-C(O)-NH-S(O)₂-CF₃或-C(O)-NH-S(O)₂-CH₃。

优选地，R⁴是吡啶、噻二唑、嘧啶、吡嗪、哒嗪、***或噻唑。

优选地，R⁴是未取代的或者被1或2个取代基取代，所述取代基选自F、Cl和环丙基。

优选地，R⁵是C_1-4烷基或含有O或N的6元杂环。

优选地，R⁵是未取代的。

合适的酸电子等排体的实例包括例如

其中上述电子等排体列表中的R¹和R²独立地是C_1-6烷基或C_1-6氟烷基。

优选的药物组合物包括单位剂型。优选的单位剂型包括片剂。

特别地，预期本发明的化合物和组合物将可用于预防和/或治疗HIV；包括预防AIDS和全身的免疫抑制的进展。预期在许多情况下，这种预防和/或治疗将涉及用本发明的化合物与至少一种被认为对这种预防和/或治疗有用的其它药物组合进行治疗。例如，本发明的IDO抑制剂可以与其它免疫疗法例如免疫检查点(PD1、CTLA4、ICOS等)结合使用，并且可能与生长因子或细胞因子疗法(IL21、IL-7等)结合使用。

在治疗HIV中的常见实践是采用超过一种的有效药剂。因此，根据本发明的另一个实施方案，提供了一种用于预防或治疗至少部分地由病毒的逆转录病毒家族中的病毒介导的哺乳动物中的病毒感染的方法，该方法包括向已经被诊断出患有所述病毒感染或处于发展所述病毒感染的危险中的哺乳动物施用如式I中所定义的化合物，其中所述病毒为HIV病毒，并且进一步包括施用治疗有效量的一种或多种对HIV病毒具有活性的药剂，其中所述对HIV病毒具有活性的药剂选自核苷酸逆转录酶抑制剂；非核苷酸逆转录酶抑制剂；蛋白酶抑制剂；进入、附着和融合抑制剂；整合酶抑制剂；成熟抑制剂；CXCR4抑制剂；和CCR5抑制剂。此类其它药物的例子是多替拉韦、Bictegravir和Cabotegravir。

“药学上可接受的盐”是指衍生自本领域众所周知的多种有机和无机抗衡离子的药学上可接受的盐，并且仅作为示例包括钠、钾、钙、镁、铵和四烷基铵盐，并且当分子含有碱性官能团时，包括有机或无机酸的盐，例如盐酸盐、氢溴酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、乙酸盐、马来酸盐和草酸盐。合适的盐包括P. Heinrich Stahl, Camille G. Wermuth (编),Handbook of Pharmaceutical Salts Properties, Selection, and Use；2002中所述的那些。

本发明还包括本文所述化合物的药学上可接受的盐。如本文所用，“药学上可接受的盐”是指所公开的化合物的衍生物，其中母体化合物通过将现有的酸或碱基团转化为其盐形式而被修饰。药学上可接受的盐的实例包括但不限于碱性残基如胺的无机或有机酸盐；酸性残基如羧酸的碱或有机盐；等等。本发明的药学上可接受的盐包括由例如无毒的无机或有机酸形成的母体化合物的常规无毒的盐。本发明的药学上可接受的盐可以通过常规化学方法由含有碱性或酸性基团的母体化合物合成。通常，这些盐可以通过将这些化合物的游离酸或碱形式与化学计量的合适的碱或酸在水中或在有机溶剂中或在两者的混合物中反应来制备；通常，非水介质如***、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或ACN是优选的。

本文所用的短语“药学上可接受的”是指在合理的医学判断范围内，适用于与人类和动物的组织接触而不具有过度的毒性、刺激性、过敏反应或其它问题或并发症，与合理的获益/风险比相称的那些化合物、材料、组合物和/或剂型。

在一个实施方案中，含有式I的化合物或其盐的药物制剂是适于口服或肠胃外施用的制剂。在另一个实施方案中，所述制剂是长效肠胃外制剂。在另一个实施方案中，所述制剂是纳米颗粒制剂。

本发明涉及可用作免疫抑制的新疗法的化合物、组合物和药物组合物。尽管不希望受到任何特定理论的束缚，但认为本发明的化合物能够利用分子氧或活性氧抑制催化I-Trp对N-甲酰基犬尿氨酸的氧化吡咯环裂解反应的酶。

因此，在本发明的另一个实施方案中，提供了一种用于预防和/或治疗HIV的方法；包括预防AIDS和全身的免疫抑制的进展。

实施例

以下实施例用于更全面地描述制造和使用上述发明的方式。应理解，这些实施例决不是用于限制本发明的真实范围，而是出于说明性目的而给出。在以下实施例和合成方案中，下列缩写具有以下含义。如果没有定义缩写，则它具有其普遍接受的含义。

ACN = 乙腈

AIBN = 偶氮二异丁腈

aq. = 水性

µL或uL = 微升

µM或uM = 微摩尔的

NMR = 核磁共振

boc = 叔丁氧基羰基

br = 宽峰

Cbz = 苄基氧基羰基

CDI = 1,1′-羰基二咪唑

d = 二重峰

δ = 化学位移

℃ = 摄氏度

DCM = 二氯甲烷

dd = 双二重峰

DHP = 二氢吡喃

DIAD = 偶氮二甲酸二异丙酯

DIEA或DIPEA = N,N-二异丙基乙胺

DMAP = 4-(二甲基氨基)吡啶

DMEM = 达尔伯克改良伊格尔培养基

EtOAc = 乙酸乙酯

h或hr = 小时

HATU = 1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-***并[4,5-b]嘧啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐

HCV = 丙型肝炎病毒

HPLC = 高效液相色谱

Hz = 赫兹

IU = 国际单位

IC₅₀ = 50%抑制时的抑制浓度

J = 耦合常数(以Hz给出，除非另外指明)

LCMS = 液相色谱–质谱

m = 多重峰

M = 摩尔的

M+H⁺ = 母体质谱峰加H⁺

MeOH = 甲醇

mg = 毫克

min = 分钟

mL = 毫升

mM = 毫摩尔的

mmol = 毫摩尔

MS = 质谱

MTBE = 甲基叔丁基醚

N = 当量的

NFK = N-甲酰基犬尿氨酸

NBS = N-溴代丁二酰亚胺

nm = 纳摩尔的

PE = 石油醚

ppm = 百万分率

q.s. = 足量

s = 单峰

RT = 室温

Rf = 保留因子

sat. = 饱和

t = 三重峰

TEA = 三乙胺

TFA = 三氟乙酸

TFAA = 三氟乙酸酐

THF = 四氢呋喃。

设备描述

在Bruker Ascend 400光谱仪或Varian 400光谱仪上记录¹H NMR谱。化学位移以百万分率(ppm, δ单位)表示。耦合常数以赫兹(Hz)为单位。***模式描述了明显多重性并被指定为s(单峰)、d(二重峰)、t(三重峰)、q(四重峰)、quint(五重峰)、m(多重峰)、br(宽峰)。

在具有SQ检测器的Waters ACQUITY UPLC上使用Waters BEH C18, 2.1 x 50 mm,1.7 µm，使用梯度洗脱法记录分析型低分辨率质谱(MS)。

溶剂A: 0.1%甲酸(FA)/水；

溶剂B: 0.1% FA/乙腈；

30% B持续0.5分钟，随后是30-100% B历经2.5分钟。

2-(4-氟苯基)乙酸甲酯的制备

将2-(4-氟苯基)乙酸 (10.0 g, 64.9 mmol)和浓H₂SO₄ (1.0 mL)在MeOH (100 mL)中的混合物在回流温度下加热过夜。通过真空蒸发除去溶剂。将残余物用水稀释并用EtOAc萃取。将有机层合并，并依次用饱和NaHCO₃水溶液、水和盐水洗涤，并经MgSO₄干燥。过滤并真空浓缩，得到为浅色油状物的标题化合物(11.2 g，定量)，将其用于下一步骤而不进行纯化。(ESI) m/z C₉H₉FO₂的计算值：168.06. 实测值：169.16 (M+1)⁺。

2-(4-氟苯基)-2-甲基丙酸甲酯的制备

在0℃下，向NaH (6.7 g, 167.7 mmol)在THF (100 mL)中的悬浮液中逐滴加入2-(4-氟苯基)乙酸甲酯 (9.4 g, 55.9 mmol)和碘甲烷 (23.8 g, 167.7 mmol)在THF (50 mL)中的溶液。使所得混合物温热至室温，并搅拌过夜。将残余物用饱和NH₄Cl水溶液淬灭并用EtOAc萃取。将有机物依次用水和盐水洗涤，并经Na₂SO₄干燥。过滤并真空浓缩，得到粗产物，将其通过快速色谱(硅胶, 0-30% EtOAc/PE)纯化，以得到标题化合物 (7.6 g, 69%产率)。(ESI) m/z C₁₁H₁₃FO₂的计算值：196.09. 实测值：197.17 (M+1)⁺。

2-(4-氟-3-硝基苯基)-2-甲基丙酸甲酯的制备

在0℃下，向浓硫酸(11 mL)中一次性加入2-(4-氟苯基)-2-甲基丙酸甲酯 (7.6 g,38.8 mmol)，然后分批加入KNO₃ (3.8 g, 38.8 mmol)。在0℃下搅拌3小时后，将反应混合物倒入冰水中，并用EtOAc萃取。有机层用盐水洗涤并经Na₂SO₄干燥。真空除去溶剂，并将残余物通过快速色谱(硅胶, 0~50% 乙酸乙酯/石油醚)纯化，以得到为黄色油状物的标题化合物 (7.6 g, 81%)。(ESI) m/z C₁₁H₁₂FNO₄的计算值：241.08. 实测值：242.20 (M+1)⁺。

2-(4-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-3-硝基苯基)-2-甲基丙酸甲酯的制备

将2-(4-氟-3-硝基苯基)-2-甲基丙酸甲酯 (7.2 g, 30.0 mmol)和N-异丁基四氢-2H-吡喃-4-胺 (11.8 g, 75 mmol)的混合物在N₂气氛下在160℃下搅拌7小时。通过柱色谱(硅胶, 0-40% EtOAc/PE)纯化反应混合物，以得到为红色油状物的标题化合物 (4.7 g, 42%产率)。(ESI) m/z C₂₀H₃₀N₂O₅的计算值：378.22. 实测值：379.42 (M+1)⁺。

2-(3-氨基-4-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)苯基)-2-甲基丙酸甲酯的制备

将2-(4-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-3-硝基苯基)-2-甲基丙酸甲酯 (4.7 g,12.4 mmol)和10% Pd/C (1.41 g)在EtOAc (50 mL)中的混合物在室温下在H₂气氛(15psi)下搅拌过夜。将得到的混合物通过硅藻土垫过滤，并将滤液减压浓缩，以得到粗产物，将其通过快速色谱(硅胶, 0-50% EtOAc/PE)纯化，以得到为棕色油状物的标题化合物(4.2 g, 96%产率)。(ESI) m/z C₂₀H₃₂N₂O₃的计算值：348.24. 实测值：349.36 (M+1)⁺。

2-(3-((5-氯吡啶-2-基)氨基)-4-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)苯基)-2- 甲基丙酸甲酯的制备

将2-(3-氨基-4-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)苯基)-2-甲基丙酸甲酯 (550mg, 1.59 mmol)、2-溴-5-氯吡啶 (460 mg, 2.39 mmol)、Pd₂(dba)₃ (146 mg, 0.159mmol)、Xantphos (185 mg, 0.318 mmol)和Cs₂CO₃ (1.04 g, 3.18 mmol)在二噁烷 (12mL)中的混合物在100℃在N₂气氛下搅拌过夜。将所得混合物在EtOAc和H₂O之间分配。将有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩，以得到粗产物，将其通过快速色谱 (硅胶, 0-50% EtOAc/PE)纯化以得到标题化合物 (650 mg, 89%产率)。LCMS (ESI) m/z C₂₅H₃₄ClN₃O₃的计算值：459.23. 实测值：460.05/462.42 (M/M+2)⁺。

实施例1

2-(3-((5-氯吡啶-2-基)氨基)-4-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)苯基)-2-甲基 丙酸的制备

向2-(3-((5-氯吡啶-2-基)氨基)-4-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)苯基)-2-甲基丙酸甲酯 (150 mg, 0.33 mmol)在MeOH (3 mL)中的溶液中加入4N NaOH水溶液 (0.5mL)。在70℃搅拌4小时后，将所得混合物用1N HCl中和并用EtOAc萃取。有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩，以得到粗产物，将其通过HPLC (C18, 10-70% MeCN/H₂O(含0.1%甲酸))纯化以得到为白色粉末的标题化合物 (78 mg, 54%产率)。¹H NMR (400 MHz,DMSO) δ 12.33 (s, 1H), 8.23 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.20 - 8.14 (m, 2H), 7.69 -7.63 (m, 1H), 7.20 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.00 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 6.96 - 6.90(m, 1H), 3.85 - 3.77 (m, 2H), 3.14 (t, J = 11.2 Hz, 2H), 2.89 - 2.82 (m, 1H),2.82 - 2.77 (m, 2H), 1.70 - 1.62 (m, 2H), 1.57 - 1.49 (m, 2H), 1.47 (s, 6H),1.37 - 1.30 (m, 1H), 0.82 (d, J = 6.6 Hz, 6H). LCMS (ESI) m/z C₂₄H₃₂ClN₃O₃的计算值：445.21. 实测值：446.38/448.30 (M/M+2)⁺。

实施例2

2-(3-((5-氯吡啶-2-基)氨基)-4-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)苯基)-2-甲基- N-(甲基磺酰基)丙酰胺的制备

向2-(3-((5-氯吡啶-2-基)氨基)-4-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)苯基)-2-甲基丙酸 (150 mg, 0.34 mmol)、甲烷磺酰胺 (36 mg, 0.38 mmol)和DMAP (9 mg, 0.07mmol)在DMF (3 mL)中的溶液中一次性加入DCC (85 mg, 0.41 mmol)。在室温下搅拌5小时后，将所得混合物在EtOAc和H₂O之间分配。将有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩，以得到粗产物，将其通过HPLC (C18, 10-80% MeCN/H₂O(含0.1%甲酸))纯化以得到为白色粉末的标题化合物 (22 mg, 13%产率)。¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.33 (s, 1H),8.20 - 8.13 (m, 2H), 8.08 (s, J = 1.6 Hz, 1H), 7.66 (dd, J = 8.9, 2.7 Hz,1H), 7.24 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.05 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 6.87 (dd, J = 8.3,2.1 Hz, 1H), 3.84 - 3.77 (m, 2H), 3.25 - 3.08 (m, 5H), 2.87 - 2.78 (m, 3H),1.70 - 1.63 (m, 2H), 1.57 - 1.42 (m, 8H), 1.38 - 1.32 (m, 1H), 0.83 (d, J =6.6 Hz, 6H). LCMS (ESI) m/z C₂₅H₃₅ClN₄O₄S的计算值：522.21. 实测值：523.45/525.62(M/M+2)⁺。

实施例3

2-(3-((5-氯吡啶-2-基)氨基)-4-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)苯基)-2-甲基- N-((三氟甲基)磺酰基)丙酰胺的制备

向2-(3-((5-氯吡啶-2-基)氨基)-4-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)苯基)-2-甲基丙酸 (150 mg, 0.34 mmol)、三氟甲烷磺酰胺 (57 mg, 0.38 mmol)和DMAP (9 mg,0.07 mmol)在DMF (3 mL)中的溶液中一次性加入DCC (85 mg, 0.41 mmol)。在室温下搅拌过夜后，将所得混合物在EtOAc和H₂O之间分配。将有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩，以得到粗产物，将其通过HPLC (C18, 10-70% MeCN/H₂O(含0.1%甲酸))纯化以得到为白色粉末的标题化合物 (21 mg, 11%产率)。¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.30 (s, 1H),8.19 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.70 - 7.63 (m, 1H), 7.23 (d, J = 8.4Hz, 1H), 7.04 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 6.99 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 3.87 - 3.76 (m,2H), 3.13 (t, J = 11.2 Hz, 2H), 3.01 - 2.87 (m, 3H), 1.69 - 1.61 (m, 2H),1.56 - 1.48 (m, 2H), 1.39 (s, J = 11.5 Hz, 6H), 1.29 - 1.24 (m, 1H), 0.80 (d,J = 6.6 Hz, 6H). 没有观察到磺酰胺基的质子。LCMS (ESI) m/z C₂₅H₃₂ClF₃N₄O₄S的计算值：576.18. 实测值：577.63/579.64 (M/M+2)⁺。

2-(4-(二异丁基氨基)-3-硝基苯基)-2-甲基丙酸甲酯的制备

将2-(4-氟-3-硝基苯基)-2-甲基丙酸甲酯 (1.0 g, 4.0 mmol)、二异丁胺 (2.2 mL,12.3 mmol)、DIPEA (3.6 mL, 20.5 mmol)和NMP (10 mL)的混合物在110℃在N₂气氛下搅拌17小时。将所得混合物在EtOAc和H₂O之间分配。将有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩，以得到粗产物，将其通过快速色谱 (硅胶, 0-30% EtOAc/PE)纯化以得到标题化合物 (800 mg, 57%产率)l. (ESI) m/z C₁₉H₃₀N₂O₄的计算值： 350.22. 实测值：351.63 (M+1)⁺。

2-(3-氨基-4-(二异丁基氨基)苯基)-2-甲基丙酸甲酯的制备

将2-(4-(二异丁基氨基)-3-硝基苯基)-2-甲基丙酸甲酯 (800 mg, 2.28 mmol)和10%Pd/C (120 mg)在EtOAc (50 mL)中的混合物在50℃在H₂气氛 (15 psi)下搅拌过夜。通过硅藻土垫过滤所得混合物，并将滤液减压浓缩，以得到粗产物，将其通过快速色谱 (硅胶,0-50% EtOAc/PE)以得到标题化合物 (680 mg, 93%产率)纯化。(ESI) m/z C₁₉H₃₂N₂O₂的计算值：320.25. 实测值：321.67 (M+1)⁺。

2-(3-((5-氯吡啶-2-基)氨基)-4-(二异丁基氨基)苯基)-2-甲基丙酸甲酯的制备

将2-(3-氨基-4-(二异丁基氨基)苯基)-2-甲基丙酸甲酯 (250 mg, 0.78 mmol)、2-溴-5-氯吡啶 (301 mg, 1.56 mmol)、Pd₂(dba)₃ (71 mg, 0.156 mmol)、Xantphos (90 mg,0.156 mmol)和Cs₂CO₃ (588 mg, 1.56 mmol)在甲苯 (10 mL)中的混合物在100℃在N₂气氛下搅拌过夜。将所得混合物在EtOAc和H₂O之间分配。将有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩，以得到粗产物，将其通过快速色谱 (硅胶, 0-50% EtOAc/PE)纯化以得到标题化合物 (180 mg, 53%产率)。LCMS (ESI) m/z C₂₄H₃₄ClN₃O₂的计算值：431.23. 实测值：432.64/434.61(M/M+2)⁺。

实施例12

2-(3-((5-氯吡啶-2-基)氨基)-4-(二异丁基氨基)苯基)-2-甲基丙酸的制备

向2-(3-((5-氯吡啶-2-基)氨基)-4-(二异丁基氨基)苯基)-2-甲基丙酸甲酯 (180mg, 0.42 mmol)在MeOH (6 mL)中的溶液中加入1 N NaOH水溶液 (5 mL)。在室温下搅拌过夜后，将所得混合物用1N HCl中和并用EtOAc萃取。将有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩以得到粗产物，将其通过HPLC (C18, 10-60% MeCN/H₂O(含0.1%甲酸))纯化以得到为白色粉末的标题化合物 (78 mg, 54%产率)。U26886-086-1 ¹H NMR (400 MHz, DMSO)δ 12.15 (br, 1H), 8.27 - 8.12 (m, 3H), 7.68 (dd, J = 8.9, 2.7 Hz, 1H), 7.22(d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.94 (dd, J = 8.3, 2.3 Hz, 1H), 6.82 (d, J = 8.9 Hz,1H), 2.60 (d, J = 7.1 Hz, 4H), 1.70 - 1.59 (m, 2H), 1.47 (s, 6H), 0.86 (d, J= 6.6 Hz, 12H). LCMS (ESI) m/z C₂₃H₃₂ClN₃O₂的计算值：417.22. 实测值：418.73/420.71 (M/M+2)⁺。

2-(4-(二异丁基氨基)-3-((3-(三氟甲基)-1,2,4-噻二唑-5-基)氨基)苯基)-2- 甲基丙酸甲酯的制备

将2-(3-氨基-4-(二异丁基氨基)苯基)-2-甲基丙酸甲酯 (200 mg, 0.64 mmol)和5-氯-3-(三氟甲基)-1,2,4-噻二唑 (180 mg, 0.96 mmol)在MeCN (4 mL)中的混合物在90℃在N₂气氛下搅拌过夜。将所得混合物在EtOAc和H₂O之间分配。分离层并将有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩以得到粗产物，将其通过快速色谱 (硅胶, 0-60% EtOAc/PE)纯化以得到标题化合物 (150 mg, 51%产率)。LCMS (ESI) m/z C₂₂H₃₁F₃N₄O₂S的计算值：472.21. 实测值：473.61 (M+1)⁺。

实施例13

2-(4-(二异丁基氨基)-3-((3-(三氟甲基)-1,2,4-噻二唑-5-基)氨基)苯基)-2-甲基 丙酸的制备

将2-(4-(二异丁基氨基)-3-((3-(三氟甲基)-1,2,4-噻二唑-5-基)氨基)苯基)-2-甲基丙酸甲酯 (150 mg, 0.32 mmol)在MeOH (6 mL)和1N NaOH水溶液 (5 mL)中的溶液在室温搅拌过夜。将所得混合物用1N HCl水溶液中和并用EtOAc萃取。将有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩以得到粗产物，将其通过HPLC (C18, 10-100% MeCN/H₂O(含0.1%甲酸))纯化以得到为白色粉末的标题化合物 (103 mg, 70%产率)。¹H NMR (400 MHz, DMSO)δ 12.21 (br, 1H), 10.24 (s, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.28 - 7.06 (m, 2H), 2.77 (d,J = 7.0 Hz, 4H), 1.80 - 1.59 (m, 2H), 1.46 (s, 6H), 0.79 (d, J = 6.6 Hz,12H). LCMS (ESI) m/z C₂₁H₂₉F₃N₄O₂S的计算值：458.20. 实测值：459.59 (M+1)⁺。

1-(4-氟苯基)环丙烷-1-甲腈的制备

向1-(4-氟苯基)乙腈 (20.3 g, 150 mmol)、1-溴-2-氯乙烷 (25 mL, 300 mmol)和苄基三乙基氯化铵 (683 mg, 3.00 mmol)的混合物中加入50% NaOH水溶液 (84 g, 1.05mol)，并将所得混合物在50℃加热过夜。冷却后，将混合物倒入水中，并用二异丙基醚萃取。将有机层依次用水、1 N HCl水溶液和盐水洗涤，并经MgSO₄干燥。过滤，真空浓缩得到为黄色油状物的标题化合物 (16.4 g 68%)，将其用于下一步骤而不经进一步纯化。(ESI) m/zC₁₀H₈FN的计算值：161.06. 实测值：162.28 (M+1)⁺。

1-(4-氟苯基)环丙烷-1-甲酰胺的制备

在室温下向1-(4-氟苯基)环丙烷-1-甲腈 (16.4 g, 102 mmol)在丙酮 (140 mL)中的溶液中加入4 N NaOH水溶液 (100 mL)。在冰水浴中冷却下将30% H₂O₂ (150 mL)逐滴加入到该溶液中。使混合物在室温下静置并搅拌另外2小时。将反应混合物在冰水浴中冷却，并将Na₂SO₃水溶液(10%，于水中, 159 mmol)加入到混合物中。通过真空蒸发除去溶剂，并将沉淀的固体通过过滤收集，并用水和正己烷洗涤，以得到为白色固体的标题化合物 (17.0 g,93%)。(ESI) m/z C₁₀H₁₀FNO的计算值：179.07. 实测值：180.11 (M+1)⁺。

1-(4-氟苯基)环丙烷-1-甲酸的制备

将1-(4-氟苯基)环丙烷-1-甲酰胺 (17.0 g, 94.8 mmol)在6 N HCl水溶液 (95 mL)和1,4-二噁烷 (150 mL)中的混合物在回流温度下加热过夜。通过真空蒸发除去溶剂，并将残余物用EtOAc萃取。将有机层用盐水洗涤并经MgSO₄干燥。过滤并真空浓缩得到为白色固体的标题化合物 (16.8 g, 98%)。(ESI) m/z C₁₀H₉FO₂的计算值：180.06. 实测值：181.12(M+1)⁺。

1-(4-氟苯基)环丙烷-1-甲酸甲酯的制备

将1-(4-氟苯基)环丙烷-1-甲酸 (11.8 g, 65.5 mmol)和浓H₂SO₄ (1.5 mL)在MeOH(100 mL)中的混合物在回流温度下加热8小时。通过真空蒸发除去溶剂。将残余物用水稀释并用EtOAc萃取。将有机物依次用饱和NaHCO₃水溶液、水和盐水洗涤，并经MgSO₄干燥。过滤并真空浓缩得到为黄色油状物的标题化合物 (12.7 g, 定量)，将其用于下一步骤而不进行纯化。(ESI) m/z C₁₁H₁₁FO₂的计算值：194.07. 实测值：195.31 (M+1)⁺。

1-(4-氟-3-硝基苯基)环丙烷-1-甲酸甲酯的制备

在0℃下，向浓硫酸 (8 mL)中一次性加入1-(4-氟苯基)环丙烷-1-甲酸甲酯 (5.6 g,28.8 mmol)，然后分批加入KNO₃ (2.9 g, 28.8 mmol)。在0℃下搅拌3小时后，将反应混合物倒入冰水中，并用EtOAc萃取。有机层用盐水洗涤并经Na₂SO₄干燥。真空除去溶剂，并将残余物通过快速色谱 (硅胶, 0~50% 乙酸乙酯/石油醚)纯化以得到为黄色油状物的标题化合物 (5.7 g, 60%)。(ESI) m/z C₁₁H₁₀FNO₄的计算值： 239.06. 实测值：240.14 (M+1)⁺。

1-(4-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-3-硝基苯基)环丙烷-1-甲酸甲酯的制 备

将1-(4-氟-3-硝基苯基)环丙烷-1-甲酸甲酯(5.7 g, 23.8 mmol)和N-异丁基四氢-2H-吡喃-4-胺 (11.3 g, 71.5 mmol)的混合物在160℃在N₂气氛下搅拌7小时。将反应混合物通过柱色谱 (硅胶, 0-10% EtOAc/PE)纯化以得到为红色油状物的标题化合物 (3.4 g,40%产率)。LCMS (ESI) m/z C₂₀H₂₈N₂O₅的计算值：376.20. 实测值：377.32 (M+1)⁺。

1-(3-氨基-4-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)苯基)环丙烷-1-甲酸甲酯的制 备

将1-(4-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-3-硝基苯基)环丙烷-1-甲酸甲酯 (3.1g, 8.24 mmol)和10% Pd/C (1.1 g)在EtOAc (30 mL)中的混合物在室温在H₂气氛 (15psi)下搅拌6小时。将所得混合物通过硅藻土垫过滤并将滤液减压浓缩以得到粗产物，将其通过快速色谱 (硅胶, 0-20% EtOAc/PE)纯化以得到为黄色油状物的标题化合物 (2.1 g,81%产率)。LCMS (ESI) m/z C₂₀H₃₀N₂O₃的计算值：346.23. 实测值：347.33 (M+1)⁺。

1-(3-((5-氯吡啶-2-基)氨基)-4-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)苯基)环丙 烷-1-甲酸甲酯的制备

将1-(3-氨基-4-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)苯基)环丙烷-1-甲酸甲酯 (550mg, 1.59 mmol)、2-溴-5-氯吡啶 (460 mg, 2.39 mmol)、Pd₂(dba)₃ (146 mg, 0.159mmol)、Xantphos (185 mg, 0.318 mmol)和Cs₂CO₃ (1.04 g, 3.18 mmol)在二噁烷 (12mL)中的混合物在100℃在N₂气氛下搅拌过夜。将所得混合物在EtOAc和H₂O之间分配。将有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩以得到粗产物，将其通过快速色谱 (硅胶, 0-30%EtOAc/PE)纯化以得到标题化合物 (566 mg, 71%产率)。LCMS (ESI) m/z C₂₅H₃₂ClN₃O₃的计算值：457.21. 实测值：458.33/460.26 (M/M+2)⁺。

实施例5

1-(3-((5-氯吡啶-2-基)氨基)-4-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)苯基)环丙烷- 1-甲酸的制备

向1-(3-氨基-4-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)苯基)环丙烷-1-甲酸甲酯 (566mg, 1.24 mmol)在MeOH (3 mL)中的溶液中加入4N NaOH水溶液 (0.5 mL)。在25℃搅拌4小时后，将所得混合物用1N HCl中和并用EtOAc萃取。将有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩以得到粗产物，将其通过HPLC (C18, 10-100% MeCN/H₂O(含0.1%甲酸))纯化以得到为浅色粉末的标题化合物 (523 mg, 95%产率)。¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.19(br, 1H), 8.24 - 8.20 (m, 2H), 8.16 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.67 (dd, J = 8.9,2.6 Hz, 1H), 7.18 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.01 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 6.90 (dd, J= 8.1, 1.9 Hz, 1H), 3.87 - 3.76 (m, 2H), 3.14 (t, J = 11.3 Hz, 2H), 2.87 -2.77 (m, 3H), 1.71 - 1.62 (m, J = 11.0 Hz, 2H), 1.58 - 1.47 (m, 2H), 1.43(dd, J = 6.4, 3.7 Hz, 2H), 1.38 - 1.30 (m, 1H), 1.16 - 1.10 (m, 2H), 0.83 (d,J = 6.6 Hz, 6H). LCMS (ESI) m/z C₂₄H₃₀ClN₃O₃的计算值：443.20. 实测值：444.30/446.28 (M/M+2)⁺。

实施例4

1-(3-((5-氯吡啶-2-基)氨基)-4-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)苯基)-N-(甲基 磺酰基)环丙烷-1-甲酰胺的制备

向1-(3-((5-氯吡啶-2-基)氨基)-4-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)苯基)环丙烷-1-甲酸 (150 mg, 0.34 mmol)、甲烷磺酰胺 (36 mg, 0.38 mmol)和DMAP (9 mg, 0.07mmol)在DCM (3 mL)中的溶液中一次性加入DCC (85 mg, 0.41 mmol)。在室温搅拌5小时后，将所得混合物在EtOAc和H₂O之间分配。将有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩以得到粗产物，将其通过HPLC (C18, 10-100% MeCN/H₂O(含0.1%甲酸))纯化以得到为白色粉末的标题化合物 (56 mg, 32%产率)。¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.08 (s, 1H),8.30 - 8.08 (m, 3H), 7.67 (dd, J = 8.8, 2.4 Hz, 1H), 7.22 (d, J = 8.2 Hz,1H), 7.06 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 6.86 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 3.82 (d, J = 8.4 Hz,2H), 3.32 (s, 3H), 3.14 (t, J = 11.3 Hz, 2H), 2.91 - 2.74 (m, 3H), 1.74 -1.61 (m, 2H), 1.52 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 1.49 - 1.42 (m, 2H), 1.30 - 1.20 (m,2H), 1.19 - 1.07 (m, 2H), 0.83 (d, J = 6.5 Hz, 6H). LCMS (ESI) m/zC₂₅H₃₃ClN₄O₄S的计算值：520.19. 实测值：521.30/523.27 (M/M+2)⁺。

1-(3-(2-(环丙烷羰基)肼-1-硫代甲酰胺基)-4-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨 基)苯基)环丙烷-1-甲酸甲酯的制备

向1-(3-氨基-4-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)苯基)环丙烷-1-甲酸甲酯 (500mg, 1.45 mmol)在MeCN (5 mL)中的溶液中加入TCDI (517 mg, 2.9 mmol)，并将得到的反应混合物在N₂气氛下于25℃搅拌3小时。将所得混合物浓缩以得到粗制异硫氰酸酯中间体，将其溶于EtOH(10 mL)中，并用环丙烷碳酰肼(218 mg, 2.18 mmol)处理。在50℃搅拌过夜后，将反应混合物浓缩，以得到粗产物，将其通过快速色谱 (硅胶, 0-60% EtOAc/PE)纯化以得到为白色固体的标题化合物 (734 mg, 100%产率)。LCMS (ESI) m/z C₂₅H₃₆N₄O₄S的计算值：488.25. 实测值：489.35 (M+1)⁺。

1-(3-((5-环丙基-1,3,4-噻二唑-2-基)氨基)-4-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基) 氨基)苯基)环丙烷-1-甲酸甲酯的制备

在0℃下，将1-(3-(2-(环丙烷羰基)肼-1-硫代甲酰胺基)-4-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)苯基)环丙烷-1-甲酸甲酯 (734 mg, 1.50 mmol)分批加至浓H₂SO₄ (10 mL)中。在室温搅拌3小时后，将混合物用NaOH水溶液 (4 N)小心中和至pH 5~6并用DCM萃取。将合并的有机层经Na₂SO₄干燥并浓缩以得到粗产物 (639 mg, 90%产率)，将其用于下一步骤而不进行纯化。LCMS (ESI) m/z C₂₅H₃₄N₄O₃S的计算值：470.24. 实测值：471.73 (M+1)⁺。

实施例14

1-(3-((5-环丙基-1,3,4-噻二唑-2-基)氨基)-4-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基) 苯基)环丙烷-1-甲酸的制备

向1-(3-((5-环丙基-1,3,4-噻二唑-2-基)氨基)-4-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)苯基)环丙烷-1-甲酸甲酯 (639 mg, 1.36 mmol)在MeOH (3 mL)中的溶液中加入4 NNaOH水溶液 (1 mL)。在室温搅拌5小时后，将所得混合物用1N HCl中和并用EtOAc萃取。将有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩以得到粗产物，将其通过HPLC (C18, 10-70%MeCN/H₂O(含0.1%甲酸))纯化以得到为浅色粉末的标题化合物 (44 mg, 62%产率)。¹H NMR(400 MHz, DMSO) δ 12.23 (br, 1H), 8.96 (s, 1H), 8.10 (d, J = 1.9 Hz, 1H),7.18 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.94 (dd, J = 8.1, 2.0 Hz, 1H), 3.82 (dd, J = 11.1,3.5 Hz, 2H), 3.17 (t, J = 11.3 Hz, 2H), 2.88 (ddd, J = 11.4, 7.8, 3.8 Hz,1H), 2.78 (d, J = 6.7 Hz, 2H), 2.34 - 2.27 (m, 1H), 1.72 - 1.64 (m, 2H), 1.53- 1.42 (m, 4H), 1.32 (dt, J = 13.2, 6.6 Hz, 1H), 1.14 - 1.06 (m, 4H), 0.95 -0.91 (m, 2H), 0.81 (d, J = 6.6 Hz, 6H). LCMS (ESI) m/z C₂₄H₃₂N₄O₃S的计算值：456.22. 实测值：457.32 (M+1)⁺。

实施例19

1-(3-((5-环丙基-1,3,4-噻二唑-2-基)氨基)-4-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基) 苯基)-N-(甲基磺酰基)环丙烷-1-甲酰胺的制备

向1-(3-((5-环丙基-1,3,4-噻二唑-2-基)氨基)-4-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)苯基)环丙烷-1-甲酸 (150 mg, 0.33 mmol)、甲烷磺酰胺 (35 mg, 0.36 mmol)和DMAP(9 mg, 0.07 mmol)在DCM (1 mL)和DMF (1 mL)中的溶液中一次性加入DCC (83 mg, 0.40mmol)。在室温下搅拌过夜后，将所得混合物在EtOAc和H₂O之间分配。将有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩以得到粗产物，将其通过HPLC (C18, 20-100% MeCN/H₂O(含0.1%甲酸))纯化以得到为白色粉末的标题化合物 (30 mg, 17%产率)。¹H NMR (400 MHz,DMSO) δ 11.12 (s, 1H), 8.98 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.22 (d, J = 8.2 Hz, 1H),6.91 (dd, J = 8.2, 2.1 Hz, 1H), 3.82 (dd, J = 11.1, 3.4 Hz, 2H), 3.26 - 3.07(m, 5H), 2.92 - 2.84 (m, 1H), 2.78 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 2.34 - 2.27 (m, 1H),1.69 (d, J = 10.8 Hz, 2H), 1.55 - 1.42 (m, 4H), 1.28 - 1.19 (m, 1H), 1.16 -1.03 (m, 4H), 0.96 - 0.89 (m, 2H), 0.81 (d, J = 6.6 Hz, 6H). LCMS (ESI) m/zC₂₅H₃₅N₅O₄S₂的计算值：533.21. 实测值：534.28 (M+1)⁺。

5-溴-N-异丁基-3-硝基-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡啶- 2-胺的制备

将5-溴-2-氯-3-硝基吡啶 (15.3 g, 64.5 mmol)、N-异丁基四氢-2H-吡喃-4-胺(15.2 g, 96.7 mmol)和DIPEA (22.5 mL, 129 mmol)在NMP (150 mL )中的混合物在140℃搅拌4小时。将所得混合物在EtOAc和H₂O之间分配。分离层并将有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩以得到粗产物，将其通过快速色谱 (硅胶, 0-10% EtOAc/PE)纯化以得到标题化合物 (9.7 g, 42%产率)。LCMS (ESI) m/z C₁₄H₂₀BrN₃O₃的计算值：357.07.实测值：358.24/360.22 (M/M+2)⁺。

2-(6-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-5-硝基吡啶-3-基)丙二酸二甲酯的制 备

将5-溴-N-异丁基-3-硝基-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡啶-2-胺 (6.0 g, 16.81mmol)、丙二酸二甲酯 (6.66 g, 50.42 mmol)、碘化亚铜 (640 mg, 3.36 mmol)、吡啶甲酸(830 mg, 6.80 mmol)、Cs₂CO₃ (16.4 g, 50.34 mmol)和二噁烷 (60 mL)的混合物在100℃搅拌16小时。冷却至室温后，将反应混合物过滤并将滤液在EtOAc和H₂O之间分配。分离层并将有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩以得到粗产物，将其通过快速色谱 (硅胶,0-30% EtOAc/PE)纯化以得到标题化合物 (2.8 g, 41%产率)。(ESI) m/z C₁₉H₂₇N₃O₇的计算值：409.18. 实测值：410.15 (M+1)⁺。

2-(6-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-5-硝基吡啶-3-基)乙酸乙酯的制备

将2-(6-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-5-硝基吡啶-3-基)丙二酸二甲酯 (2.8g, 6.85 mmol)、KOH (3.84 g, 68.46 mmol)和乙醇 (50 mL)的混合物在回流温度下加热2小时。冷却至室温后，用6 N HCl将反应混合物调节至pH 4~5。通过真空蒸发除去溶剂，并将所得残余物用EtOAc萃取。将有机层用盐水洗涤并经MgSO₄干燥。过滤并真空浓缩得到为红色固体的2-(6-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-5-硝基吡啶-3-基)乙酸。

将上述粗制酸和浓H₂SO₄ (1.5 mL)在EtOH (100 mL)中的混合物在回流温度下加热8小时。通过真空蒸发除去溶剂。将残余物用水稀释并用EtOAc萃取。将有机物依次用饱和NaHCO₃水溶液、水和盐水洗涤，并经Na₂SO₄干燥。过滤并真空浓缩得到粗产物，将其通过快速色谱 (硅胶, 0-30% EtOAc/PE)纯化以得到标题化合物 (2.2 g, 88%产率)。(ESI) m/zC₁₈H₂₇N₃O₅的计算值：365.20. 实测值：366.03 (M+1)⁺。

2-(6-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-5-硝基吡啶-3-基)-2-甲基丙酸乙酯 的制备

在0℃下，向NaH (247 mg, 6.16 mmol)在DMF (8 mL)中的悬浮液中逐滴加入2-(6-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-5-硝基吡啶-3-基)乙酸乙酯 (750 mg, 2.06 mmol)和碘甲烷 (729 mg, 5.14 mmol)在*** (2 mL)中的溶液。使所得混合物温热至室温，并搅拌过夜。将残余物用饱和NH₄Cl水溶液淬灭并用EtOAc萃取。将有机物依次用水和盐水洗涤，并经Na₂SO₄干燥。过滤并真空浓缩得到粗产物，将其通过快速色谱 (硅胶, 0-30% EtOAc/PE)纯化以得到标题化合物 (690 mg, 86%产率)。(ESI) m/z C₂₀H₃₁N₃O₅的计算值：393.23. 实测值：394.23 (M+1)⁺。

2-(5-氨基-6-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)吡啶-3-基)-2-甲基丙酸乙酯 的制备

将2-(6-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-5-硝基吡啶-3-基)-2-甲基丙酸乙酯(690 mg, 1.76 mmol)和10% Pd/C (700 mg)在EtOAc (10 mL)中的混合物在25℃在H₂气氛下搅拌过夜。将所得混合物通过硅藻土垫过滤并将滤液减压浓缩以得到粗产物，将其通过快速色谱 (硅胶, 0-40% EtOAc/PE)纯化以得到为黄色油状物的标题化合物 (620 mg,97%产率)。(ESI) m/z C₂₀H₃₃N₃O₃的计算值：363.25. 实测值：364.02 (M+1)⁺。

2-(5-((5-氯吡啶-2-基)氨基)-6-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)吡啶-3- 基)-2-甲基丙酸乙酯的制备

将2-(5-氨基-6-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)吡啶-3-基)-2-甲基丙酸乙酯(620 mg, 1.71 mmol)、2-溴-5-氯吡啶 (657 mg, 3.42 mmol)、Pd₂(dba)₃ (312 mg, 0.342mmol)、Xantphos (395 mg, 0.683 mmol)和Cs₂CO₃ (1.11 g, 3.42 mmol)在二噁烷 (8 mL)中的混合物在100℃在N₂气氛下搅拌过夜。将所得混合物在EtOAc和H₂O之间分配。将有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩以得到粗产物，将其通过快速色谱 (硅胶, 0-30%EtOAc/PE)纯化以得到标题化合物 (400 mg, 49%产率)。LCMS (ESI) m/z C₂₅H₃₅ClN₄O₃的计算值：474.24. 实测值：475.63/477.70 (M/M+2)⁺。

实施例6

2-(5-((5-氯吡啶-2-基)氨基)-6-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)吡啶-3-基)-2- 甲基丙酸的制备

向2-(5-((5-氯吡啶-2-基)氨基)-6-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)吡啶-3-基)-2-甲基丙酸乙酯 (60 mg, 0.126 mmol)在MeOH (2 mL)中的溶液中加入4N NaOH水溶液(0.32 mL)。在25℃搅拌过夜后，将所得混合物用1N HCl中和并用EtOAc萃取。将有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩以得到粗产物，将其通过HPLC (C18, 60-100% MeCN/H₂O(含0.1%甲酸))纯化以得到为白色粉末的标题化合物 (29 mg, 51%产率)。¹H NMR (400MHz, DMSO) δ 12.51 (s, 1H), 8.23 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.14 (d, J = 2.6 Hz,1H), 8.06 (s, 1H), 8.01 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.65 (dd, J = 8.9, 2.7 Hz, 1H),6.94 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 3.83 - 3.76 (m, 2H), 3.27 - 3.20 (m, 1H), 3.12 -3.03 (m, 2H), 2.95 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 1.67 - 1.52 (m, 4H), 1.49 (s, 6H),1.44 - 1.37 (m, 1H), 0.79 (d, J = 6.6 Hz, 6H). LCMS (ESI) m/z C₂₃H₃₁ClN₄O₃的计算值：446.21. 实测值：447.36/449.67 (M/M+2)⁺。

实施例7

2-(5-((5-氯吡啶-2-基)氨基)-6-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)吡啶-3-基)-2- 甲基-N-(甲基磺酰基)丙酰胺的制备

向2-(5-((5-氯吡啶-2-基)氨基)-6-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)吡啶-3-基)-2-甲基丙酸 (130 mg, 0.29 mmol)、甲烷磺酰胺 (33 mg, 0.35 mmol)和DMAP (7 mg,0.06 mmol)在DCM (3 mL)中的溶液中一次性加入DCC (78 mg, 0.38 mmol)。在室温下搅拌过夜后，将所得混合物在EtOAc和H₂O之间分配。将有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩以得到粗产物，将其通过HPLC (C18, 50-100% MeCN/H₂O(含0.1%甲酸))纯化以得到为白色粉末的标题化合物 (51 mg, 34%产率)。¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.43 (s, 1H),8.13 - 8.08 (m, J = 5.8, 2.5 Hz, 2H), 8.06 (s, 1H), 7.94 (d, J = 2.4 Hz, 1H),7.66 (dd, J = 8.9, 2.6 Hz, 1H), 6.97 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 3.85 - 3.76 (m, J =10.8 Hz, 2H), 3.28 - 3.18 (m, 4H), 3.07 (t, J = 10.8 Hz, 2H), 2.97 (d, J =6.8 Hz, 2H), 1.70 - 1.53 (m, 4H), 1.50 (s, 6H), 1.46 - 1.37 (m, J = 13.2, 6.6Hz, 1H), 0.87 - 0.75 (m, J = 6.6 Hz, 6H). LCMS (ESI) m/z C₂₄H₃₄ClN₅O₄S的计算值：523.20. 实测值：524.25/526.60 (M/M+2)⁺。

实施例8

2-(5-((5-氯吡啶-2-基)氨基)-6-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)吡啶-3-基)-2- 甲基-N-((三氟甲基)磺酰基)丙酰胺的制备

向 2-(5-((5-氯吡啶-2-基)氨基)-6-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)吡啶-3-基)-2-甲基丙酸 (130 mg, 0.29 mmol)、三氟甲烷磺酰胺 (52 mg, 0.35 mmol)和DMAP (7mg, 0.06 mmol)在DCM (3 mL)中的溶液中一次性加入DCC (78 mg, 0.38 mmol)。在室温下搅拌过夜后，将所得混合物在EtOAc和H₂O之间分配。将有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩以得到粗产物，将其通过HPLC (C18, 40-100% MeCN/H₂O(含0.1%甲酸))纯化以得到为白色粉末的标题化合物 (54 mg, 32%产率)。¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.67 (s,1H), 8.23 (s, 1H), 8.09 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.70 (dd, J = 8.9,2.5 Hz, 1H), 6.94 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 3.91 - 3.71 (m, 3H), 3.19 - 3.02 (m,4H), 1.78 - 1.64 (m, 2H), 1.63 - 1.51 (m, 3H), 1.42 (s, 6H), 0.79 (d, J = 6.6Hz, 6H). 没有观察到磺酰胺基的质子。LCMS (ESI) m/z C₂₄H₃₁ClF₃N₅O₄S的计算值：577.17. 实测值：578.25/580.68 (M/M+2)⁺。

1-(6-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-5-硝基吡啶-3-基)环丙烷-1-甲酸乙 酯的制备

向2-(6-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-5-硝基吡啶-3-基)乙酸乙酯 (1 g,2.74 mmol)、1-溴-2-氯乙烷 (784 mg, 548 mmol)和苄基三乙基氯化铵 (4.4 g, 19.31mmol)的混合物中加入50% NaOH水溶液 (20 mL)，并将所得混合物在50℃加热1小时。冷却后，将混合物倒入水中，并用EtOAc萃取。将有机层依次用水、1 N HCl水溶液和盐水洗涤，并经MgSO₄干燥。过滤，真空浓缩得到为黄色油状物的标题化合物 (500 mg, 47%)，将其用于下一步骤而不经进一步纯化。(ESI) m/z C₂₀H₂₉N₃O₅的计算值：391.21. 实测值：392.02 (M+1)⁺。

1-(5-氨基-6-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)吡啶-3-基)环丙烷-1-甲酸乙 酯的制备

将1-(6-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-5-硝基吡啶-3-基)环丙烷-1-甲酸乙酯(500 mg, 1.28 mmol)和10% Pd/C (500 mg)在EtOAc (10 mL)中的混合物在25℃在H₂气氛下搅拌过夜。将所得混合物通过硅藻土垫过滤并将滤液减压浓缩以得到粗产物，将其通过快速色谱 (硅胶, 0-40% EtOAc/PE)纯化以得到为黄色油状物的标题化合物 (420 mg,91%产率)。(ESI) m/z C₂₀H₃₁N₃O₃的计算值：361.24. 实测值：362.40 (M+1)⁺。

1-(5-((5-氯吡啶-2-基)氨基)-6-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)吡啶-3- 基)环丙烷-1-甲酸乙酯的制备

将1-(5-氨基-6-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)吡啶-3-基)环丙烷-1-甲酸乙酯(420 mg, 1.16 mmol)、2-溴-5-氯吡啶 (448 mg, 2.33 mmol)、Pd₂(dba)₃ (213 mg, 0.233mmol)、Xantphos (269 mg, 0.465 mmol)和Cs₂CO₃ (757 mg, 2.33 mmol)在二噁烷 (8 mL)中的混合物在100℃在N₂气氛下搅拌过夜。将所得混合物在EtOAc和H₂O之间分配。将有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩以得到粗产物，将其通过快速色谱 (硅胶, 0-30%EtOAc/PE)纯化以得到标题化合物 (290 mg, 53%产率)。(ESI) m/z C₂₅H₃₃ClN₄O₃的计算值：472.22. 实测值：473.01/475.23 (M/M+2)⁺。

实施例9

1-(5-((5-氯吡啶-2-基)氨基)-6-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)吡啶-3-基)环 丙烷-1-甲酸的制备

向1-(5-((5-氯吡啶-2-基)氨基)-6-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)吡啶-3-基)环丙烷-1-甲酸乙酯 (60 mg, 1.24 mmol)在MeOH (3 mL)中的溶液中加入4N NaOH水溶液(0.32 mL)。在25℃搅拌过夜后，将所得混合物用1N HCl中和并用EtOAc萃取。将有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩以得到粗产物，将其通过HPLC (C18, 10-100% MeCN/H₂O(含0.1%甲酸))纯化以得到为黄色粉末的标题化合物 (22 mg, 39%产率)。¹H NMR (400MHz, DMSO) δ 12.53 (br, 1H), 8.20 (dd, J = 15.4, 2.4 Hz, 2H), 8.03 (s, 1H),7.94 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.66 (dd, J = 8.9, 2.6 Hz, 1H), 6.98 (d, J = 8.9Hz, 1H), 3.85 - 3.76 (m, 2H), 3.22 - 3.16 (m, 1H), 3.13 - 3.05 (m, 2H), 2.95(d, J = 6.8 Hz, 2H), 1.67 - 1.51 (m, 4H), 1.48 - 1.37 (m, 3H), 1.19 - 1.09(m, 2H), 0.80 (d, J = 6.6 Hz, 6H). (ESI) m/z C₂₃H₂₉ClN₄O₃的计算值： 444.19. 实测值：445.11/447.29 (M/M+2)⁺。

实施例10

1-(5-((5-氯吡啶-2-基)氨基)-6-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)吡啶-3-基)-N- (甲基磺酰基)环丙烷-1-甲酰胺的制备

向1-(5-((5-氯吡啶-2-基)氨基)-6-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)吡啶-3-基)环丙烷-1-甲酸 (150 mg, 0.34 mmol)、甲烷磺酰胺 (38 mg, 0.40 mmol)和DMAP (8 mg,0.07 mmol)在DCM (3 mL)中的溶液中一次性加入DCC (90 mg, 0.44 mmol)。在室温下搅拌过夜后，将所得混合物在EtOAc和H₂O之间分配。将有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩以得到粗产物，将其通过HPLC (C18, 50-100% MeCN/H₂O(含0.1%甲酸))纯化以得到为白色粉末的标题化合物 (32 mg, 18%产率)。¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.20 (s, 1H),8.21 - 8.15 (m, 2H), 8.03 (s, 1H), 7.92 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.66 (dd, J =8.9, 2.7 Hz, 1H), 7.00 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 3.84 - 3.77 (m, 2H), 3.26 - 3.21(m, 1H), 3.18 (s, 3H), 3.09 (t, J = 10.3 Hz, 2H), 2.96 (d, J = 6.8 Hz, 2H),1.68 - 1.55 (m, 4H), 1.52 - 1.46 (m, 2H), 1.45 - 1.39 (m, 1H), 1.22 - 1.14(m, 2H), 0.81 (d, J = 6.6 Hz, 6H). (ESI) m/z C₂₄H₃₂ClN₅O₄S的计算值：521.19. 实测值：522.25/524.60 (M/M+2)⁺。

实施例11

1-(5-((5-氯吡啶-2-基)氨基)-6-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)吡啶-3-基)-N- ((三氟甲基)磺酰基)环丙烷-1-甲酰胺的制备

向1-(5-((5-氯吡啶-2-基)氨基)-6-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)吡啶-3-基)环丙烷-1-甲酸 (150 mg, 0.34 mmol)、三氟甲烷磺酰胺 (60 mg, 0.40 mmol)和DMAP (8mg, 0.07 mmol)在DCM (3 mL)中的溶液中一次性加入DCC (90 mg, 0.41 mmol)。在室温下搅拌过夜后，将所得混合物在EtOAc和H₂O之间分配。将有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩以得到粗产物，将其通过HPLC (C18, 10-100% MeCN/H₂O(含0.1%甲酸))纯化以得到为白色粉末的标题化合物 (68 mg, 35%产率)。¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.51 (s,1H), 8.20 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 8.14 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.89 (d, J = 2.1 Hz,1H), 7.69 (dd, J = 8.9, 2.6 Hz, 1H), 6.97 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 3.87 - 3.81(m, 2H), 3.70 - 3.54 (m, 1H), 3.16 - 3.05 (m, 4H), 1.73 - 1.58 (m, 4H), 1.55- 1.46 (m, 1H), 1.41 - 1.35 (m, 2H), 1.07 - 1.00 (m, 2H), 0.79 (d, J = 6.6Hz, 6H). 没有观察到磺酰胺基的质子。LCMS (ESI) m/z C₂₄H₂₉ClF₃N₅O₄S的计算值：575.16. 实测值：576.25/578.68 (M/M+2)⁺。

6-溴-2-硝基吡啶-3-胺的制备

向2-硝基-吡啶-3-基胺 (25.0 g, 179.7 mmol)和乙酸钠 (15.5 g, 188.7 mmol)在乙酸 (150 mL)中的搅拌悬浮液中逐滴加入溴 (13.8 mL, 269.6 mmol)在乙酸 (50 ml)中的溶液并搅拌反应混合物过夜。减压除去乙酸。将残余物冷却至0℃，用饱和碳酸氢钠溶液中和以将pH调节至~7，并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，并在减压下浓缩。将残余物用乙酸乙酯研磨，以得到为黄色固体的化合物 (34.4 g,88%产率)。LCMS (ESI) m/z 6-溴-2-硝基吡啶-3-胺 C₅H₄BrN₃O₂的计算值：216.95. 实测值：218.1/220.1 (M/M+2)⁺。

6-溴-2-硝基-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡啶-3-胺的制备

在0℃下，向6-溴-2-硝基吡啶-3-胺 (34.4 g, 157.8 mmol)、四氢-4H-吡喃-4-酮(39.5 g, 394.5 mmol)、乙酸 (170 mL)和THF(340 mL)的悬浮液中逐滴加入2 M 于Me₂S中的BH₃ (87 mL, 173.6 mmol)。在室温下搅拌另外2小时后，将混合物倒入冰水中。将沉淀的固体通过过滤收集，并在40℃减压干燥过夜，以得到为黄色固体的标题化合物 (39.2 g,83%产率)。LCMS (ESI) m/z C₁₀H₁₂BrN₃O₃的计算值：301.0. 实测值：302.4/304.4 (M/M+2)⁺。

6-溴-N-(2-甲基烯丙基)-2-硝基-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡啶-3-胺的制备

在0℃下，向6-溴-2-硝基-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡啶-3-胺 (8.0 g, 26.6 mmol)在DMF (120 mL)中的溶液中分批加入NaH (2.13 g, 53.2 mmol)，并将所得混合物在0℃下搅拌另外30分钟。逐滴加入3-溴-2-甲基丙-1-烯(7.18 g, 53.2 mmol)，并将其在0℃搅拌2小时。将所得混合物在EtOAc和饱和NH₄Cl水溶液之间分配。将有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩以得到粗产物，将其通过快速色谱 (硅胶, 0-50% EtOAc/PE)纯化以得到标题化合物 (5.8 g, 61%产率)。LCMS (ESI) m/z C₁₄H₁₈BrN₃O₃的计算值：355.05. 实测值：356.24/358.26 (M/M+2)⁺。

2-(5-((2-甲基烯丙基)(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-6-硝基吡啶-2-基)乙酸甲酯 的制备

将6-溴-N-(2-甲基烯丙基)-2-硝基-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡啶-3-胺 (10.0 g,28.2 mmol)、丙二酸二甲酯 (7.46 g, 56.4 mmol)、碘化亚铜 (1.07 g, 5.64 mmol)、吡啶甲酸 (694 mg, 5.64 mmol)、Cs₂CO₃ (18.4 g, 56.4 mmol)和二噁烷 (150 mL)的混合物在100℃搅拌16小时。冷却至室温后，将反应混合物过滤并将滤液在EtOAc和H₂O之间分配。分离层并将有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩以得到粗产物，将其通过快速色谱(硅胶, 0-30% EtOAc/PE)纯化以得到标题化合物 (4.6 g, 47%产率)。(ESI) m/zC₁₇H₂₃N₃O₅的计算值：349.16. 实测值：350.46 (M+1)⁺。

1-(5-((2-甲基烯丙基)(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-6-硝基吡啶-2-基)环丙烷- 1-甲酸的制备

向2-(5-((2-甲基烯丙基)(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-6-硝基吡啶-2-基)乙酸甲酯(3.0 g, 8.59 mmol)、1-溴-2-氯乙烷 (2.46 g, 17.2 mmol)、苄基三乙基氯化铵 (13.9g, 61 mmol)和THF (20 mL)的混合物中加入50% NaOH水溶液 (20 mL)，并将所得混合物在50℃加热1小时。冷却后，将混合物倒入冰水中，并用6 N HCl中和。将所得混合物用EtOAc萃取。将有机层分离，依次用水，1 N HCl水溶液和盐水洗涤，并经MgSO₄干燥。过滤，真空浓缩得到标题化合物 (2.4 g, 77%)，将其用于下一步骤而不经进一步纯化。(ESI) m/zC₁₈H₂₃N₃O₅的计算值：361.16. 实测值：362.43 (M+1)⁺。

1-(5-((2-甲基烯丙基)(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-6-硝基吡啶-2-基)环丙烷- 1-甲酸甲酯的制备

在0℃下，向1-(5-((2-甲基烯丙基)(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-6-硝基吡啶-2-基)环丙烷-1-甲酸 (2.4 g, 6.65 mmol)在MeOH (24 mL)中的溶液中逐滴加入SOCl₂ (1.5 mL,19.95 mmol)。将所得混合物在室温搅拌18小时。通过真空蒸发除去溶剂。将残余物用水稀释并用EtOAc萃取。将有机物依次用饱和NaHCO₃水溶液、水和盐水洗涤，并经Na₂SO₄干燥。过滤并真空浓缩得到粗产物，将其通过快速色谱 (硅胶, 0-50% EtOAc/PE)纯化以得到标题化合物 (2.0 g, 80%产率)。(ESI) m/z C₁₉H₂₅N₃O₅的计算值：375.18. 实测值：376.20 (M+1)⁺。

1-(5-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-6-硝基吡啶-2-基)环丙烷-1-甲酸甲 酯的制备

将1-(5-((2-甲基烯丙基)(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-6-硝基吡啶-2-基)环丙烷-1-甲酸甲酯 (2.0 g, 5.3 mmol)、4-甲基苯磺酰肼 (7.9 g, 42.4 mmol)和二甲苯 (20 mL)的混合物在110℃搅拌16小时。冷却至室温后，将反应混合物过滤并将滤液在EtOAc和H₂O之间分配。分离层并将有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩以得到粗产物，将其通过快速色谱 (硅胶, 0-40% EtOAc/PE)纯化以得到标题化合物 (1.0 g, 50%产率)。(ESI) m/z C₁₉H₂₇N₃O₅的计算值：377.20. 实测值：378.44 (M+1)⁺。

1-(6-氨基-5-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)吡啶-2-基)环丙烷-1-甲酸甲 酯的制备

将1-(5-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-6-硝基吡啶-2-基)环丙烷-1-甲酸甲酯(200 mg, 0.52 mmol)、SnCl₂ (1.08 g, 5.2 mmol)、Et₃N (3.0 mL, 15.6 mmol)和EtOH (6mL)的混合物在80℃搅拌3小时。将所得混合物通过硅藻土垫过滤并将滤液减压浓缩以得到粗产物，将其通过快速色谱 (硅胶, 0-50% EtOAc/PE)纯化以得到标题化合物 (128 mg,71%产率)。(ESI) m/z C₁₉H₂₉N₃O₃的计算值：347.22. 实测值：348.45 (M+1)⁺。

1-(6-((5-氯吡啶-2-基)氨基)-5-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)吡啶-2- 基)环丙烷-1-甲酸甲酯的制备

将1-(6-氨基-5-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)吡啶-2-基)环丙烷-1-甲酸甲酯(130 mg, 0.38 mmol)、2-溴-5-氯吡啶 (147 mg, 0.76 mmol)、Pd₂(dba)₃ (35 mg, 0.038mmol)、Xantphos (44 mg, 0.076 mmol)和Cs₂CO₃ (248 mg, 0.76 mmol)在二噁烷 (3 mL)中的混合物在100℃在N₂气氛下搅拌过夜。将所得混合物在EtOAc和H₂O之间分配。将有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩以得到粗产物，将其通过快速色谱 (硅胶, 0-30%EtOAc/PE)纯化以得到标题化合物 (106 mg, 61%产率)。LCMS (ESI) m/z C₂₄H₃₁ClN₄O₃的计算值：458.21. 实测值：460.48/461.34 (M/M+2)⁺。

实施例15

1-(6-((5-氯吡啶-2-基)氨基)-5-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)吡啶-2-基)环 丙烷-1-甲酸的制备

向1-(6-((5-氯吡啶-2-基)氨基)-5-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)吡啶-2-基)环丙烷-1-甲酸甲酯 (103 mg, 0.224 mmol)在MeOH (1.0 mL)中的溶液中加入4N NaOH水溶液 (1.0 mL)。在25℃搅拌过夜后，将所得混合物用1N HCl中和并用EtOAc萃取。将有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩以得到粗产物，将其通过制备型HPLC (C18, 30-100% MeCN/H₂O(含0.1%甲酸))纯化以得到标题化合物 (90 mg, 90%产率)。¹H NMR (400MHz, DMSO) δ 12.61 (s, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.38 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 8.26 (d,J = 2.5 Hz, 1H), 7.91 - 7.84 (m, 1H), 7.62 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.13 (d, J =8.0 Hz, 1H), 3.88 - 3.78 (m, 2H), 3.25 - 3.17 (m, 2H), 2.92 - 2.77 (m, 3H),1.75 - 1.64 (m, 2H), 1.56 - 1.44 (m, 4H), 1.41 - 1.28 (m, 3H), 0.84 (d, J =6.5 Hz, 6H). LCMS (ESI) m/z C₂₃H₂₉ClN₄O₃的计算值：444.19. 实测值：445.33/447.30(M/M+2)⁺。

实施例16

1-(6-((5-氯吡啶-2-基)氨基)-5-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)吡啶-2-基)-N- (甲基磺酰基)环丙烷-1-甲酰胺的制备

向1-(6-((5-氯吡啶-2-基)氨基)-5-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)吡啶-2-基)环丙烷-1-甲酸 (50 mg, 0.11 mmol)、甲烷磺酰胺 (12 mg, 0.12 mmol)和DMAP (3 mg,0.022 mmol)在THF (1 mL)中的溶液中一次性加入DCC (27 mg, 0.132 mmol)。在室温下搅拌过夜后，将所得混合物在EtOAc和H₂O之间分配。将有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩以得到粗产物，将其通过HPLC (C18, 20-80% MeCN/H₂O(含0.1%甲酸))纯化以得到为白色固体的标题化合物 (21 mg, 36%产率)。¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.88 (s,1H), 8.70 (s, 1H), 8.39 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 8.26 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.86 -7.78 (m, 1H), 7.63 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.80 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 3.90 - 3.78(m, 2H), 3.25 - 3.18 (m, 5H), 2.93 - 2.76 (m, 3H), 1.74 - 1.63 (m, 2H), 1.60- 1.43 (m, 4H), 1.40 - 1.29 (m, 3H), 0.85 (d, J = 6.4 Hz, 6H).LCMS (ESI) m/zC₂₄H₃₂ClN₅O₄S的计算值：521.19. 实测值：522.66/524.64 (M/M+2)⁺。

2-甲基-2-(5-((2-甲基烯丙基)(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-6-硝基吡啶-2-基) 丙酸甲酯的制备

在0℃下，向NaH (510 mg, 12.9 mmol)在DMF (20 mL)中的悬浮液中逐滴加入 2-(5-((2-甲基烯丙基)(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-6-硝基吡啶-2-基)乙酸甲酯 (1.5 g, 4.3mmol)和碘甲烷 (1.8 g, 12.9 mmol)在*** (5 mL)中的溶液。使所得混合物温热至室温，并搅拌过夜。将残余物用饱和NH₄Cl水溶液淬灭并用EtOAc萃取。将有机物依次用水和盐水洗涤，并经Na₂SO₄干燥。过滤并真空浓缩得到粗产物，将其通过快速色谱 (硅胶, 0-30%EtOAc/PE)纯化以得到标题化合物 (1.6 g, 96%产率)。(ESI) m/z C₁₉H₂₇N₃O₅的计算值：377.20. 实测值：378.22 (M+1)⁺。

2-(6-氨基-5-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)吡啶-2-基)-2-甲基丙酸甲酯 的制备

将2-甲基-2-(5-((2-甲基烯丙基)(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-6-硝基吡啶-2-基)丙酸甲酯 (1.6 g, 4.4 mmol)和10% Pd/C (500 mg)在EtOAc (20 mL)中的混合物在25℃在H₂气氛下搅拌过夜。将所得混合物通过硅藻土垫过滤并将滤液减压浓缩以得到粗产物，将其通过快速色谱 (硅胶, 0-40% EtOAc/PE)纯化以得到为黄色油状物的标题化合物 (560mg, 36%产率)。(ESI) m/z C₁₉H₃₁N₃O₃的计算值：349.24. 实测值：350.79 (M+1)⁺。

2-(6-((5-氯吡啶-2-基)氨基)-5-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)吡啶-2- 基)-2-甲基丙酸甲酯的制备

将2-(6-氨基-5-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)吡啶-2-基)-2-甲基丙酸甲酯(560 mg, 1.60 mmol)、2-溴-5-氯吡啶 (544 mg, 3.2 mmol)、Pd₂(dba)₃ (140 mg, 0.16mmol)、Xantphos (196 mg, 0.32 mmol)和Cs₂CO₃ (1.11 g, 0.16 mmol)在二噁烷 (6 mL)中的混合物在100℃在N₂气氛下搅拌过夜。将所得混合物在EtOAc和H₂O之间分配。将有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩以得到粗产物，将其通过快速色谱 (硅胶, 0-30%EtOAc/PE)纯化以得到标题化合物 (400 mg, 49%产率)。LCMS (ESI) m/z C₂₄H₃₃ClN₄O₃的计算值：460.22. 实测值：461.12/463.14 (M/M+2)⁺。

实施例17

2-(6-((5-氯吡啶-2-基)氨基)-5-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)吡啶-2-基)-2- 甲基丙酸的制备

向2-(6-((5-氯吡啶-2-基)氨基)-5-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)吡啶-2-基)-2-甲基丙酸甲酯 (560 mg, 1.21 mmol)在MeOH (4.0 mL)中的溶液中加入4N NaOH水溶液(2.0 mL)。在25℃搅拌过夜后，将所得混合物用1N HCl中和并用EtOAc萃取。将有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩以得到粗产物，将其通过HPLC (C18, 60-100% MeCN/H₂O(含0.1%甲酸))纯化以得到为白色粉末的标题化合物 (510 mg, 94%产率)。¹H NMR (400MHz, DMSO) δ 12.34 (s, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.52 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 8.26 (d,J = 2.2 Hz, 1H), 7.82 (dd, J = 9.0, 2.5 Hz, 1H), 7.66 (d, J = 8.0 Hz, 1H),6.94 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 3.88 - 3.78 (m, 2H), 3.22 (t, J = 11.5 Hz, 2H),2.95 - 2.75 (m, 3H), 1.74 - 1.63 (m, 2H), 1.63 - 1.42 (m, 8H), 1.36 - 1.28(m, 1H), 0.85 (d, J = 6.3 Hz, 6H). LCMS (ESI) m/z C₂₃H₃₁ClN₄O₃的计算值：446.21.实测值：447.18/ 449.23 (M/M+2)⁺。

实施例18

2-(6-((5-氯吡啶-2-基)氨基)-5-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)吡啶-2-基)-2- 甲基-N-(甲基磺酰基)丙酰胺的制备

向2-(6-((5-氯吡啶-2-基)氨基)-5-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)吡啶-2-基)-2-甲基丙酸 (130 mg, 0.29 mmol)、甲烷磺酰胺 (33 mg, 0.35 mmol)和DMAP (7 mg,0.06 mmol)在DCM (3 mL)中的溶液中一次性加入DCC (78 mg, 0.38 mmol)。在室温下搅拌过夜后，将所得混合物在EtOAc和H₂O之间分配。将有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩以得到粗产物，将其通过HPLC (C18, 50-100% MeCN/H₂O(含0.1%甲酸))纯化以得到为白色粉末的标题化合物 (51 mg, 34%产率)。¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.33 (s, 1H),8.69 (s, 1H), 8.45 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 8.25 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.77 (dd, J= 9.0, 2.5 Hz, 1H), 7.70 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.91 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 3.90- 3.79 (m, 2H), 3.29 - 3.10 (m, 5H), 2.98 - 2.78 (m, 3H), 1.76 - 1.65 (m,2H), 1.61 - 1.47 (m, 8H), 1.40 - 1.32 (m, 1H), 0.85 (d, J = 6.4 Hz, 6H). LCMS(ESI) m/z C₂₄H₃₄ClN₅O₄S的计算值：523.20. 实测值：524.49/526.47 (M/M+2)⁺。

实施例20

1-(4-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-3-((2-甲氧基嘧啶-5-基)氨基)苯基)环丙烷-1-甲酸甲酯的制备

将1-(3-氨基-4-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)苯基)环丙烷-1-甲酸甲酯 (550mg, 1.59 mmol)、5-溴-2-甲氧基嘧啶 (385 mg, 2.06mmol)、Pd₂(dba)₃ (143 mg, 0.159mmol)、Xantphos (187 mg, 0.318 mmol)和Cs₂CO₃ (1.55 g, 4.76 mmol)在二噁烷 (10mL)中的混合物在100℃在N₂气氛下搅拌过夜。将所得混合物在EtOAc和H₂O之间分配。将有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩以得到粗产物，将其通过快速色谱 (硅胶, 0-30%EtOAc/PE)纯化以得到标题化合物 (450 mg, 62%产率)。LCMS (ESI) m/z C₂₅H₃₄N₄O₄的计算值：454.26. 实测值：455.37 (M+1)⁺。

1-(4-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-3-((2-甲氧基嘧啶-5-基)氨基)苯基)环丙烷-1-甲酸的制备

向1-(4-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-3-((2-甲氧基嘧啶-5-基)氨基)苯基)环丙烷-1-甲酸甲酯 (450 mg, 0.99 mmol)在MeOH (4 mL)中的溶液中加入4N NaOH水溶液(1 mL)。在25℃搅拌过夜后，将所得混合物用1N HCl中和并用EtOAc萃取。将有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩以得到为浅色固体的标题化合物 (436 mg, 100%产率)，将其用于下一步骤而不进行纯化。LCMS (ESI) m/z C₂₄H₃₂N₄O₄的计算值：440.24. 实测值：441.35 (M+1)⁺。

1-(4-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-3-((2-甲氧基嘧啶-5-基)氨基)苯基)-N-(甲基磺酰基)环丙烷-1-甲酰胺的制备

向1-(4-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-3-((2-甲氧基嘧啶-5-基)氨基)苯基)环丙烷-1-甲酸 (200 mg, 0.454 mmol)在THF (2 mL)中的溶液中加入CDI (110 mg, 0.545mmol)并将所得混合物在50℃加热。2小时后，将混合物冷却至室温，加入于THF (1 mL)中的甲烷磺酰胺 (50 mg, 0.49 mmol)和DBU (0.15 mL, 0.908 mmol)。在室温下搅拌过夜后，将所得混合物在EtOAc和H₂O之间分配。将有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩以得到粗产物，将其通过HPLC (C18, 10-100% MeCN/H₂O(含0.1%甲酸))纯化以得到为白色粉末的标题化合物 (112 mg, 48%产率)。¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ 10.99 (s, 1H), 8.50(s, 2H), 7.16 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.09 (s, 1H), 6.92 (d, J = 2.0 Hz, 1H),6.76 (dd, J = 8.1, 2.0 Hz, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.83 (dd, J = 11.1, 3.6 Hz,2H), 3.22 - 3.11 (m, 5H), 2.92 - 2.84 (m, 1H), 2.79 (d, J = 6.6 Hz, 2H), 1.76- 1.68 (m, 2H), 1.60 - 1.49 (m, 2H), 1.42 - 1.34 (m, 3H), 1.13 - 1.05 (m,2H), 0.83 (d, J = 6.6 Hz, 6H). LCMS (ESI) m/z C₂₅H₃₅N₅O₅S的计算值：517.24. 实测值：518.74 (M+1)⁺。

实施例21

1-(4-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-3-((6-(甲氧基甲基)吡啶-3-基)氨基)苯基)环丙烷-1-甲酸甲酯的制备

将1-(3-氨基-4-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)苯基)环丙烷-1-甲酸甲酯 (500mg, 1.44 mmol)、5-溴-2-甲氧基嘧啶 (437 mg, 2.16 mmol)、Pd₂(dba)₃ (138 mg, 0.15mmol)、Xantphos (168 mg, 0.29 mmol)和Cs₂CO₃ (939 mg, 2.88 mmol)在二噁烷 (5 mL)中的混合物在100℃在N₂气氛下搅拌过夜。将所得混合物在EtOAc和H₂O之间分配。将有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩以得到粗产物，将其通过快速色谱 (硅胶, 0-30%EtOAc/PE)纯化以得到标题化合物 (435 mg, 65%产率)。LCMS (ESI) m/z C₂₇H₃₇N₃O₄的计算值：467.28. 实测值：468.37 (M+1)⁺。

1-(4-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-3-((6-(甲氧基甲基)吡啶-3-基)氨基)苯基)环丙烷-1-甲酸的制备

向1-(4-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-3-((6-(甲氧基甲基)吡啶-3-基)氨基)苯基)环丙烷-1-甲酸甲酯 (435 mg, 0.93 mmol)在MeOH (4 mL)中的溶液中加入4N NaOH水溶液 (1 mL)。在25℃搅拌4小时后，将所得混合物用1N HCl中和并用EtOAc萃取。将有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩以得到为浅色固体的标题化合物 (378 mg, 90%产率)，将其用于下一步骤而不进行纯化。LCMS (ESI) m/z C₂₆H₃₅N₃O₄的计算值：453.26. 实测值：454.38 (M+1)⁺。

1-(4-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-3-((6-(甲氧基甲基)吡啶-3-基)氨基)苯基)-N-(甲基磺酰基)环丙烷-1-甲酰胺的制备

向1-(4-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-3-((6-(甲氧基甲基)吡啶-3-基)氨基)苯基)环丙烷-1-甲酸 (180 mg, 0.4 mmol)在THF (2 mL)中的溶液中加入CDI (130 mg,0.8 mmol)，并将所得混合物在50℃加热。2小时后，将混合物冷却至室温，加入于THF (1mL)中的甲烷磺酰胺 (76 mg, 0.8 mmol)和DBU (122 mg, 0.8 mmol)。在室温下搅拌过夜后，将所得混合物在EtOAc和H₂O之间分配。将有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩以得到粗产物，将其通过HPLC (C18, 10-100% MeCN/H₂O(含0.1%甲酸))纯化以得到为白色粉末的标题化合物 (114 mg, 54%产率)。¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.10 (s, 1H),8.39 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 7.74 (dd, J = 8.6, 2.3 Hz, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.46(d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.23 - 7.16 (m, 2H), 6.91 (dd, J = 8.2, 1.9 Hz, 1H),4.49 (s, 2H), 3.81 (dd, J = 11.0, 3.2 Hz, 2H), 3.35 (s, 3H), 3.22 (s, 3H),3.09 (t, J = 11.0 Hz, 2H), 2.94 - 2.86 (m, 1H), 2.79 (d, J = 6.6 Hz, 2H),1.67 - 1.52 (m, 4H), 1.45 - 1.35 (m, 3H), 1.18 - 1.13 (m, 2H), 0.81 (d, J =6.6 Hz, 6H). LCMS (ESI) m/z C₂₇H₃₈N₄O₅S的计算值：530.26. 实测值：531.33 (M+1)⁺。

实施例22和实施例23

1-(3-((2-氰基嘧啶-5-基)氨基)-4-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)苯基)环丙烷-1-甲酸甲酯的制备

将1-(3-氨基-4-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)苯基)环丙烷-1-甲酸甲酯 (600mg, 1.73 mmol)、5-溴-2-甲氧基嘧啶 (478 mg, 2.60 mmol)、Pd₂(dba)₃ (158 mg, 0.17mmol)、Xantphos (200 mg, 0.35 mmol)和K₂CO₃ (717 mg, 5.20 mmol)在甲苯 (10 mL)中的混合物在100℃在N₂气氛下搅拌过夜。将所得混合物在EtOAc和H₂O之间分配。将有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩以得到粗产物，将其通过快速色谱 (硅胶, 0-30%EtOAc/PE)纯化以得到标题化合物 (720 mg, 93%产率)。LCMS (ESI) m/z C₂₅H₃₁N₅O₃的计算值：449.24. 实测值：450.38 (M+1)⁺。

1-(3-((2-氰基嘧啶-5-基)氨基)-4-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)苯基)环丙烷-1-甲酸的制备

向1-(3-((2-氰基嘧啶-5-基)氨基)-4-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)苯基)环丙烷-1-甲酸甲酯 (720 mg, 1.60 mmol)在THF (7 mL)中的溶液中加入1N LiOH水溶液(6.4mL)。在25℃搅拌过夜后，将所得混合物用1N HCl中和并用EtOAc萃取。将有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩以得到粗产物，将其纯化以得到为浅色固体的标题化合物(270 mg, 39%产率)。LCMS (ESI) m/z C₂₄H₂₉N₅O₃的计算值：435.23. 实测值：436.35 (M+1)⁺。

1-(3-((2-氰基嘧啶-5-基)氨基)-4-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)苯基)-N-(甲基磺酰基)环丙烷-1-甲酰胺的制备

向1-(3-((2-氰基嘧啶-5-基)氨基)-4-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)苯基)环丙烷-1-甲酸 (110 mg, 0.253 mmol)在THF (2 mL)中的溶液中加入CDI (82 mg, 0.505mmol)，并将所得混合物在50℃加热。2小时后，将混合物冷却至室温，加入于THF (1 mL)中的甲烷磺酰胺 (60 mg, 0.631 mmol)和DBU (77 mg, 0.505 mmol)。在室温下搅拌过夜后，将所得混合物在EtOAc和H₂O之间分配。将有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩以得到粗产物，将其通过HPLC (C18, 10-100% MeCN/H₂O(含0.1%甲酸))纯化以得到为白色粉末的标题化合物 (68 mg, 52%产率)。¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.08 (s, 1H), 8.53(s, 2H), 8.28 (s, 1H), 7.28 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.21 (d, J = 8.4 Hz, 1H),7.09 (dd, J = 8.3, 2.1 Hz, 1H), 3.85 - 3.76 (m, 2H), 3.22 (s, 3H), 3.11 -3.02 (m, 2H), 3.01 - 2.94 (m, 1H), 2.77 (d, J = 6.6 Hz, 2H), 1.61 - 1.48 (m,4H), 1.46 - 1.35 (m, 3H), 1.20 - 1.13 (m, 2H), 0.78 (d, J = 6.6 Hz, 6H). LCMS(ESI) m/z C₂₅H₃₂N₆O₄S的计算值：512.22. 实测值：513.45 (M+1)⁺。

5-((2-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-5-(1-((甲基磺酰基)氨基甲酰基)环丙基)苯基)氨基)嘧啶-2-甲酰胺的制备

在0℃下，向1-(3-((2-氰基嘧啶-5-基)氨基)-4-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)苯基)-N-甲基磺酰基)环丙烷-1-甲酰胺 (150 mg, 0.29 mmol)和K2CO3 (121 mg, 0.878mmol)在DMSO (2 mL)中的悬浮液中加入H₂O₂ (0.5 mL)。在室温搅拌30分钟后，将所得混合物在EtOAc和H₂O之间分配。将有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩以得到粗产物，将其通过HPLC (C18, 10-100% MeCN/H₂O(含0.1%甲酸))纯化以得到为黄色粉末的标题化合物 (101 mg, 65%产率)。¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.08 (s, 1H), 8.64 (s, 2H),7.92 (s, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.49 (s, 1H), 7.29 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.22 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.01 (dd, J = 8.3, 2.0 Hz, 1H), 3.81 (d, J = 10.9 Hz, 2H),3.22 (s, 3H), 3.08 (t, J = 10.6 Hz, 2H), 2.97 - 2.91 (m, 1H), 2.79 (d, J =6.7 Hz, 2H), 1.65 - 1.50 (m, 4H), 1.46 - 1.36 (m, 3H), 1.19 - 1.12 (m, 2H),0.81 (d, J = 6.6 Hz, 6H). LCMS (ESI) m/z C₂₅H₃₄N₆O₅S的计算值：530.23. 实测值：531.29 (M+1)⁺。

实施例24和实施例25

2-溴-5-氟吡啶 1-氧化物的制备

将2-溴-5-氟吡啶 (5 g, 28.4 mmol)、三氟乙酸 (23 mL)和过氧化氢 (35%，于水中)(3 mL, 34.1 mmol)在70℃搅拌过夜。将混合物倒入水中，并用二氯甲烷萃取。将有机层用NaHCO3 (aq)洗涤，经MgSO4干燥，并在减压下除去溶剂，以得到标题化合物(6 g, 100%产率)，将其用于下一步骤而不进行纯化。LCMS (ESI) m/z C₅H₃BrFNO的计算值：190.94. 实测值：192.45/194.44 (M/M+2)⁺。

2-溴-5-氟-4-硝基吡啶 1-氧化物的制备

在0℃下，将发烟硝酸 (2.0 mL)加至2-溴-5-氟吡啶 1-氧化物 (6 g, 31.3 mmol)和浓硫酸 (30 mL)的混合物中。在0℃搅拌30分钟后，将混合物加热至100℃并在该温度下搅拌4小时。在0℃将反应混合物倒入水中并通过加入浓氨水调节至pH 2。将沉淀的固体通过过滤收集，用水洗涤并在环境温度下干燥过夜以得到标题化合物 (2.5 g, 34%产率)。LCMS(ESI) m/z C₅H₂BrFN₂O₃的计算值：235.92. 实测值：237.01/238.99 (M/M+2)⁺。

2-溴-5-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-4-硝基吡啶 1-氧化物的制备

将2-溴-5-氟-4-硝基吡啶 1-氧化物 (2 g, 16.9 mmol)、N-异丁基四氢-2H-吡喃-4-胺 (1.6 g, 20.3 mmol)和NMP的混合物在60℃在N₂气氛下搅拌18小时。将所得混合物在EtOAc和H₂O之间分配。分离层并将有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩以得到粗产物，将其通过快速色谱 (硅胶, 0-10% EtOAc/PE)纯化以得到标题化合物 (3 g, 77%产率)。LCMS (ESI) m/z C₁₄H₂₀ BrN₃O₄的计算值：373.06. 实测值：374.32/376.30 (M/M+2)⁺。

6-溴-N-异丁基-4-硝基-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡啶-3-胺的制备

将2-溴-5-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-4-硝基吡啶 1-氧化物 (3 g, 8.0mmol)、双(频哪醇合)二硼 (8 g, 32.1 mmol)和二噁烷的混合物在100℃在N₂气氛下搅拌18小时。将所得混合物在EtOAc和H₂O之间分配。分离层并将有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩以得到粗产物，将其通过快速色谱 (硅胶, 0-10% EtOAc/PE)纯化以得到标题化合物 (1.7 g, 59%产率)。LCMS (ESI) m/z C₁₄H₂₀ BrN₃O₃的计算值：357.07. 实测值：358.12/360.34 (M/M+2)⁺。

2-(5-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-4-硝基吡啶-2-基)乙酸甲酯的制备

将6-溴-N-异丁基-4-硝基-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡啶-3-胺 (23 g, 64.2 mmol)、丙二酸二甲酯 (25.3 g, 191.5 mmol)、碘化亚铜 (11.5 g, 60.4 mmol)、NaI (20 g,107.6 mmol)、N¹,N²-二甲基乙烷-1,2-二胺 (7 g, 79.4 mmol)、Cs₂CO₃ (62 g, 190.3mmol)和二噁烷 (400 mL)的混合物在100℃搅拌16小时。冷却至室温后，将反应混合物过滤并将滤液在EtOAc和H₂O之间分配。分离层并将有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩以得到粗产物，将其通过快速色谱 (硅胶, 0-30% EtOAc/PE)纯化以得到标题化合物 (4g, 18%产率)。(ESI) m/z C₁₇H₂₅N₃O₅的计算值：351.18. 实测值：352.27 (M+1)⁺。

1-(5-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-4-硝基吡啶-2-基)环丙烷-1-甲酸的制备

向2-(6-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-5-硝基吡啶-3-基)乙酸乙酯 (1.5 g,4.27 mmol)、1-溴-2-氯乙烷 (1.2 g, 8.39 mmol)和苄基三乙基氯化铵 (6.9 g, 30.3mmol)的混合物中加入50% NaOH水溶液 (20 mL)，并将所得混合物在室温搅拌1小时。冷却后，将混合物倒入水中，并用二异丙基醚萃取。将有机层依次用水、1N HCl水溶液和盐水洗涤，并经MgSO4干燥。过滤，真空浓缩得到为黄色油状物的标题化合物 (730 mg, 47%)，将其用于下一步骤而不经进一步纯化。(ESI) m/z C₁₈H₂₅N₃O₅的计算值：363.18. 实测值：364.31(M+1)⁺。

1-(5-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-4-硝基吡啶-2-基)环丙烷-1-甲酸甲酯的制备

在0℃下，向1-(5-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-4-硝基吡啶-2-基)环丙烷-1-甲酸 (730 mg, 2.01 mmol)在MeOH (10 mL)中的混合物中逐滴加入SOCl₂ (1 mL)，并且然后将所得混合物在室温搅拌过夜。将混合物倒入水中，并用EtOAc萃取。将有机层用盐水洗涤，经MgSO₄干燥，真空浓缩以得到残余物，将其通过硅胶色谱纯化以得到为黄色油状物的标题化合物 (400 mg, 53%)。(ESI) m/z C₁₉H₂₇N₃O₅的计算值：377.20. 实测值：378.34 (M+1)⁺。

1-(4-氨基-5-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)吡啶-2-基)环丙烷-1-甲酸甲酯的制备

将1-(6-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-5-硝基吡啶-3-基)环丙烷-1-甲酸乙酯(400 mg, 1.06 mmol)、锌粉 (347 mg, 5.30 mmol)和NH₄Cl (284 mg, 5.30 mmol)在MeOH(5 mL)中的悬浮液在65℃在氮气气氛下搅拌过夜。将所得混合物通过硅藻土垫过滤并将滤液减压浓缩以得到粗产物，将其通过快速色谱 (硅胶, 0-40% EtOAc/PE)纯化以得到为黄色油状物的标题化合物 (210 mg, 57%产率)。(ESI) m/z C₁₉H₂₉N₃O₃的计算值：347.22. 实测值：348.43 (M+1)⁺。

1-(4-((5-氯吡啶-2-基)氨基)-5-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)吡啶-2-基)环丙烷-1-甲酸甲酯的制备

将1-(5-氨基-6-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)吡啶-3-基)环丙烷-1-甲酸乙酯(170 mg, 0.49 mmol)、2-溴-5-氯吡啶 (153 mg, 0.80 mmol)、Pd₂(dba)₃ (51 mg, 0.056mmol)、Xantphos (64 mg, 0.11 mmol)和Cs₂CO₃ (460 mg, 1.41 mmol)在二噁烷 (4 mL)中的混合物在100℃在N₂气氛下搅拌过夜。将所得混合物在EtOAc和H₂O之间分配。将有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩以得到粗产物，将其通过快速色谱 (硅胶, 0-30%EtOAc/PE)纯化以得到标题化合物 (110 mg, 49%产率)。(ESI) m/z C₂₄H₃₁ClN₄O₃的计算值：458.21. 实测值：459.34/461.33(M/M+2)⁺。

1-(4-((5-氯吡啶-2-基)氨基)-5-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)吡啶-2-基)环丙烷-1-甲酸的制备

向1-(4-((5-氯吡啶-2-基)氨基)-5-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)吡啶-2-基)环丙烷-1-甲酸甲酯 (40 mg, 0.087 mmol)在MeOH (1 mL)中的溶液中加入4N NaOH水溶液(1 mL)。在25℃搅拌过夜后，将所得混合物用1N HCl中和并用EtOAc萃取。将有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩以得到粗产物，将其通过HPLC (C18, 10-100% MeCN/H₂O(含0.1%甲酸))纯化以得到为白色固体的标题化合物 (18 mg, 46%产率)。¹H NMR (400MHz, CDCl₃) δ 8.48 (s, 1H), 8.32 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.14 (s, 1H), 8.10 (s,1H), 7.59 (dd, J = 8.7, 2.6 Hz, 1H), 6.70 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.05 - 3.93(m, 2H), 3.39 - 3.26 (m, 2H), 3.01 - 2.79 (m, 3H), 2.12 - 2.03 (m, 2H), 1.74- 1.58 (m, 4H), 1.53 - 1.49 (m, 1H), 1.47 - 1.43 (m, 2H), 0.98 - 0.81 (m,6H). 没有发现羧基的质子。(ESI) m/z C₂₃H₂₉ClN₄O₃的计算值：444.19. 实测值：445.31/447.30 (M/M+2)⁺。

1-(4-((5-氯吡啶-2-基)氨基)-5-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)吡啶-2-基)-N-(甲基磺酰基)环丙烷-1-甲酰胺的制备

向1-(4-((5-氯吡啶-2-基)氨基)-5-(异丁基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)吡啶-2-基)环丙烷-1-甲酸 (40 mg, 0.090 mmol)在THF中的溶液中加入CDI (22 mg, 0.135 mmol)、甲烷磺酰胺 (13 mg, 0.135 mmol)和DBU (27 mg, 0.18 mmol)。在室温搅拌所得混合物2小时后，加入DCC (28 mg, 0.135 mmol)。在室温下搅拌过夜后，将所得混合物在EtOAc和H₂O之间分配。将有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩以得到粗产物，将其通过HPLC (C18, 10-100% MeCN/H₂O(含0.1%甲酸))纯化以得到为白色粉末的标题化合物 (13mg, 28%产率)。¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.69 (s, 1H), 8.41 - 8.30 (m, 3H), 7.85(dd, J = 8.8, 2.7 Hz, 1H), 7.36 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 3.88 - 3.81 (m, 2H),3.25 - 3.20 (m, 2H), 3.11 (s, 3H), 3.00 - 2.86 (m, 3H), 1.84 - 1.75 (m, 2H),1.57 - 1.44 (m, 4H), 1.43 - 1.30 (m, 3H), 0.85 (d, J = 6.5 Hz, 6H). 没有发现磺酰胺基的质子。LCMS (ESI) m/z C₂₄H₃₂ClN₅O₄S的计算值：521.19. 实测值：522.32/524.37 (M+1)⁺。

IDO1 HeLa RapidFire MS测定

通过高通量细胞测定，利用犬尿氨酸(通过质谱)和细胞毒性的检测作为终点对本发明的化合物进行测试。为了进行质谱和细胞毒性测定，用人干扰素-γ (IFN-γ) (Sigma-Aldrich Corporation, St. Louis, MO)刺激人上皮HeLa细胞(CCL-2; ATCC®,Manassas, VA)以诱导吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO1)的表达。具有IDO1抑制特性的化合物减少了细胞通过色氨酸分解代谢途径产生的犬尿氨酸的量。使用CellTiter-Glo®试剂(CTG)(Promega Corporation, Madison, WI)(其基于ATP的发光检测，ATP是代谢活性细胞的指示剂)测量由于化合物处理的作用导致的细胞毒性。

在测定准备中，将测试化合物在DMSO中从1 mM或5 mM的典型最高浓度3倍连续稀释，并以0.5 μL铺板在384孔聚苯乙烯透明底部组织培养处理的带盖板(Greiner Bio-One,Kremsmünster, Austria)中以生成11点剂量响应曲线。低对照孔(0%犬尿氨酸或100%细胞毒性)在存在未刺激的(-IFN-γ)HeLa细胞的情况下含有0.5 μL DMSO(用于质谱测定)或者在没有细胞的情况下含有0.5 μL DMSO(用于细胞毒性测定)，并且高对照孔(100%犬尿氨酸或0%细胞毒性)在存在刺激的(+IFN-γ)HeLa细胞的情况下含有0.5 μL DMSO(用于质谱和细胞毒性测定二者)。

洗涤HeLa细胞的冷冻原液，并在补充了10% v/v认证的胎牛血清(FBS) (ThermoFisher Scientific, Inc., Waltham, MA)和1X青霉素-链霉素抗生素溶液(ThermoFisher Scientific, Inc., Waltham, MA)的具有HEPES的DMEM高葡萄糖培养基(ThermoFisher Scientific, Inc., Waltham, MA)中回收。在补充的DMEM培养基中将细胞稀释至100,000个细胞/mL。将50μL的细胞悬液(用于质谱测定)或单独的培养基(用于细胞毒性测定)添加到先前制备的384孔化合物板上的低对照孔中，分别产生5,000个细胞/孔或0个细胞/孔。将IFN-γ以10 nM的终浓度添加到剩余的细胞悬液中，并且将50μL的刺激的细胞添加到384孔化合物板上的所有剩余的孔中。然后将带盖板置于37℃、5% CO₂的增湿培养箱中保持2天。

温育后，将384孔板从培养箱中移出并使其平衡至室温保持30分钟。对于细胞毒性测定，根据制造商的指示制备CellTiter-Glo^®，并向每个板孔中添加10 μL。在室温下温育20分钟后，在EnVision^® Multilabel Reader (PerkinElmer Inc., Waltham, MA)上读取发光。对于质谱测定，在384孔聚丙烯V形底板(Greiner Bio-One, Kremsmünster,Austria)中，将来自化合物处理的板的每个孔的10μL上清液添加到40μL乙腈(含有10μM内标以进行归一化)中以提取有机分析物。在以2000 rpm离心10分钟后，将来自乙腈提取板的每孔的10μL添加到384孔聚丙烯V形底板中的90μL无菌蒸馏水中，以在RapidFire 300(Agilent Technologies, Santa Clara, CA)和4000 QTRAP MS (SCIEX, Framingham,MA)上分析犬尿氨酸和内标。使用Agilent Technologies的RapidFire Integrator 软件对MS数据进行积分，并对数据进行了归一化以作为犬尿氨酸与内标的比进行分析。

在使用公式100-(100*((U-C2)/(C1-C2)))(其中U是未知值，C1是高(100%犬尿氨酸； 0%抑制)对照孔的平均值并且C2是低(0%犬尿氨酸；100%抑制)对照孔的平均值)归一化后，将质谱测定中的剂量响应的数据标绘为IDO1抑制百分比与化合物浓度的关系。在使用公式100-(100*((U-C2)/(C1-C2)))(其中U是未知值，C1是高(0%细胞毒性)对照孔的平均值并且C2是低(100%细胞毒性)对照孔的平均值)归一化后，将细胞毒性测定中的剂量响应的数据标绘为细胞毒性百分比与化合物浓度的关系。

使用方程y=A+((B-A)/(1+(10x/10C)D))(其中A是最小响应，B是最大响应，C是log(XC₅₀)并且D是希尔斜率(Hill slope))进行曲线拟合。将每种测试化合物的结果记录为质谱测定的pIC50值和细胞毒性测定的pCC50值(上面的方程中的-C)。

IDO1 PBMC RapidFire MS测定

通过高通量细胞测定，利用犬尿氨酸(通过质谱)和细胞毒性的检测作为终点对本发明的化合物进行测试。为了进行质谱和细胞毒性测定，用人干扰素-γ(IFN-γ) (Sigma-Aldrich Corporation, St. Louis, MO)和来自明尼苏达沙门菌(Salmonella minnesota)的脂多糖(LPS)(Invivogen, San Diego, CA)刺激人外周血单核细胞(PBMC) (PB003F;AllCells^®, Alameda, CA)以诱导吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO1)的表达。具有IDO1抑制特性的化合物减少了细胞通过色氨酸分解代谢途径产生的犬尿氨酸的量。使用CellTiter-Glo^®试剂(CTG)(Promega Corporation, Madison, WI)(其基于ATP的发光检测，ATP是代谢活性细胞的指示剂)测量由于化合物处理的作用导致的细胞毒性。

在测定准备中，将测试化合物在DMSO中从1 mM或5 mM的典型最高浓度3倍连续稀释，并以0.5 μL铺板在384孔聚苯乙烯透明底部组织培养处理的带盖板(Greiner Bio-One,Kremsmünster, Austria)中以生成11点剂量响应曲线。低对照孔(0%犬尿氨酸或100%细胞毒性)在存在未刺激的(-IFN-γ/-LPS)PBMC的情况下含有0.5 μL DMSO(用于质谱测定)或者在没有细胞的情况下含有0.5 μL DMSO(用于细胞毒性测定)，并且高对照孔(100%犬尿氨酸或0%细胞毒性)在存在刺激的(+IFN-γ/+LPS)PBMC的情况下含有0.5 μL DMSO(用于质谱和细胞毒性测定二者)。

洗涤PBMC的冷冻原液，并在补充了10% v/v热灭活的胎牛血清(FBS) (ThermoFisher Scientific, Inc., Waltham, MA)和1X青霉素-链霉素抗生素溶液(ThermoFisher Scientific, Inc., Waltham, MA)的RPMI 1640培养基(Thermo FisherScientific, Inc., Waltham, MA)中回收。在补充的RPMI 1640培养基中将细胞稀释至1,000,000个细胞/mL。将50μL的细胞悬液(用于质谱测定)或单独的培养基(用于细胞毒性测定)添加到先前制备的384孔化合物板上的低对照孔中，分别产生50,000个细胞/孔或0个细胞/孔。将IFN-γ和LPS分别以100 ng/ml和50 ng/ml的终浓度添加到剩余的细胞悬液中，并且将50μL的刺激的细胞添加到384孔化合物板上的所有剩余的孔中。然后将带盖板置于37℃、5% CO₂的增湿培养箱中保持2天。

温育后，将384孔板从培养箱中移出并使其平衡至室温保持30分钟。对于细胞毒性测定，根据制造商的指示制备CellTiter-Glo^®，并向每个板孔中添加40 μL。在室温下温育20分钟后，在EnVision^® Multilabel Reader (PerkinElmer Inc., Waltham, MA)上读取发光。对于质谱测定，在384孔聚丙烯V形底板(Greiner Bio-One, Kremsmünster,Austria)中，将来自化合物处理的板的每个孔的10μL上清液添加到40μL乙腈(含有10μM内标以进行归一化)中以提取有机分析物。在以2000 rpm离心10分钟后，将来自乙腈提取板的每孔的10μL添加到384孔聚丙烯V形底板中的90μL无菌蒸馏水中，以在RapidFire 300(Agilent Technologies, Santa Clara, CA)和4000 QTRAP MS (SCIEX, Framingham,MA)上分析犬尿氨酸和内标。使用Agilent Technologies的RapidFire Integrator 软件对MS数据进行积分，并对数据进行了归一化以作为犬尿氨酸与内标的比进行分析。

表1 PBMC或HeLa测定中化合物的IDO1效力

专利实施例	IDO1 PBMC pIC<sub>50</sub>	IDO1 HeLa pIC<sub>50</sub>
			1	8.5
2	8.8
			3	7.7
4	9.1
			5	8.2
6	8.2
			7	8.3
8	7.7
			9	8.1
10	8.3
			11	7.5
12	7.6
			13	7.9
14	7.8
			15	n/a	6.8
16	n/a	8.0
			17	8.2
18	8.5
			19	8.3
20	7.9
			21	7.4
22	<5
			23	7.3
24	8.6
			25	7.3

Claims

1.式I的化合物

或其药学上可接受的盐，其中：

每个X都是CH，或者一个X是N，且另两个X是CH；

R³是CO₂H或酸电子等排体；

2.根据权利要求1的化合物或盐，其中R¹和R²独立地是H或CH₃，或者R¹和R²与它们键合的碳一起形成环丙基环。

3.根据权利要求1或2的化合物或盐，其中R³是CO₂H、-C(O)-NH-S(O)₂-CF₃或-C(O)-NH-S(O)₂-CH₃。

4.根据权利要求1-3中任一项的化合物或盐，其中R⁴是任选被1或2个选自F、Cl和环丙基的取代基取代的吡啶、噻二唑、嘧啶、吡嗪、哒嗪、***或噻唑。

5.根据权利要求1-4中任一项的化合物或盐，其中R⁵是C_1-4烷基或含有O或N的6-元杂环。

6.根据权利要求5的化合物或盐，其中R⁵是未取代的。

7.根据权利要求1的化合物或盐，其中R¹和R²独立地是H或CH₃，或者R¹和R²与它们键合的碳一起形成环丙基环；R³是CO₂H、-C(O)-NH-S(O)₂-CF₃或-C(O)-NH-S(O)₂-CH₃；R⁴是任选被1或2个选自F、Cl和环丙基的取代基取代的吡啶、噻二唑、嘧啶、吡嗪、哒嗪、***或噻唑；和R⁵是C_1-4烷基或含有O或N的6-元杂环。

8.药物组合物，其包含根据权利要求1-7中任一项的化合物或盐。

9.治疗将从IDO1的抑制中受益的疾病或病况的方法，该方法包括施用根据权利要求8的组合物的步骤。

10.根据权利要求9的方法，其中在所述疾病或病况中，IDO活性的生物标志物升高。

11.根据权利要求9的方法，其中所述生物标志物是血浆犬尿氨酸或血浆犬尿氨酸/色氨酸比率。

12.根据权利要求9的方法，其中所述疾病或病况是慢性病毒感染；慢性细菌感染；癌症；败血症或神经学病症。

13.根据权利要求9的方法，其中所述慢性病毒感染是涉及HIV、HBV或HCV的那些；所述慢性细菌感染是结核病或人工关节感染；并且所述神经学病症是重度抑郁症、亨廷顿氏病或帕金森氏病。

14.根据权利要求13的方法，其中所述疾病或病况是与HIV感染有关的炎症；涉及乙型肝炎病毒或丙型肝炎病毒的慢性病毒感染；癌症；或败血症。

15.根据权利要求1-7中任一项的化合物或盐，其用于治疗将从IDO1的抑制中受益的疾病或病况。

16.根据权利要求1-7中任一项的化合物或盐在制备用于治疗将从IDO1的抑制中受益的疾病或病况的药物中的用途。