CN110780007A - 一种hplc法一测多评测定芒果止咳片6种成分含量的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种HPLC法一测多评测定芒果止咳片6种成分含量的方法,本发明采用HPLC法,色谱柱为Phenomenex Gemini C18柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相为乙腈(B)‑0.1%磷酸水溶液(A);梯度洗脱;流速1.0mL/min;检测波长:258nm,柱温30℃;一测多评法以没食子酸为内参物,分别建立原儿茶酸、芒果苷、高芒果苷、金丝桃苷和异槲皮苷的相对校正因子(RCF),通过RCF计算其含量,并将其测定值与外标法测定结果进行对比分析,本发明提供的一测多评法与外标法测定结果并无显著差异(P>0.05),各相对校正因子重复性良好,本发明所建立的高效液相色谱含量测定及一测多评法可用于芒果止咳片中该6个成分的含量测定,且方法准确可靠,重复性好,可用于芒果止咳片的质量控制。
Description
技术领域
本发明涉及中成药复方制剂成分检测技术领域,具体涉及一种HPLC法一测多评测定芒果止咳片6种成分含量的方法。
背景技术
芒果止咳片是由芒果叶干浸膏、鱼腥草素钠、马来酸氯苯那敏制成的中西药复方制剂,具有宣肺化痰、止咳平喘的功效,临床上用于治疗咳嗽、气喘、多痰等症。芒果止咳片长期以来得到广泛应用,并显示出良好的临床疗效。目前的质量标准是参照国家食品药品监督管理总局颁布的国家药品标准(2014)国标字-0154号文进行,该标准只有简单的理化鉴别方法,显然并不能有效控制该制剂的质量。近十多年来虽有一些用高效液相色谱单独测定芒果止咳片中芒果苷、鱼腥草素钠和马来酸氯苯那敏的文献报道,但中成药复方制剂成分复杂,单一成分定量测定难以全面控制其质量和疗效一致性,多指标成分测定已成为相关质量评价的发展趋势;现代药理学研究表明,芒果叶中含有的黄酮类及酚酸类化合物具有明显的平喘、止咳、祛痰、免疫、抗肿瘤等多种活性作用,为该制剂的功效相关成分;因此,本发明采用高效液相色谱法,研究建立了芒果止咳片中原儿茶酸、芒果苷、高芒果苷、金丝桃苷、异槲皮苷多个成分的含量测定方法,并在此基础上,针对该制剂中一些如芒果苷、高芒果苷对照品价格较高,检测成本较高的问题,研究建立了这6个成分的一测多评测定方法。
发明内容
本发明目的在于提供一种HPLC法一测多评测定芒果止咳片6种成分含量的方法。本发明所建立的高效液相色谱一测多评法用于芒果止咳片中原儿茶酸、芒果苷、高芒果苷、金丝桃苷、异槲皮苷6个成分的含量测定,方法准确可靠,重复性好,与外标法测定结果并无显著差异(P>0.05),本方法可为芒果止咳片的质量控制提供参考。
为实现上述目的,本发明是通过以下技术方案实现的:
一种花香型山茶籽油沐浴露的制备方法,包括下列步骤:
一种HPLC法一测多评测定芒果止咳片6种成分含量的方法,包括以下步骤:
(1)对照品溶液的制备:分别取没食子酸、原儿茶酸、芒果苷、高芒果苷、金丝桃苷和异槲皮苷对照品适量,精密称定,加70%甲醇溶解,制成含没食子酸、原儿茶酸、芒果苷、高芒果苷、金丝桃苷、异槲皮苷的质量浓度分别为1.830mg/mL、0.1010mg/mL、2.613mg/mL、0.3623mg/mL、0.1554mg/mL、0.07480mg/mL的混合对照品溶液,备用;
(2)供试品溶液的制备:取芒果止咳片20片,去糖衣,精密称定总片重,研细,取其粉末0.3g,精密称定,精密加入70%甲醇25mL,超声40min,滤过,残渣精密加入70%甲醇25mL,超声40min,滤过,合并滤液,水浴挥干,残渣加70%甲醇溶解,定容至10mL容量瓶,摇匀,13000r/min离心10min,取上清液作为供试品溶液;
(3)阴性供试品溶液的制备:按处方工艺制备缺芒果叶的阴性样品,取适宜的芒果叶阴性样品,并按步骤(2)制备得芒果叶阴性对照溶液;
(4)***适应性试验:分别取混合对照品溶液、芒果止咳片供试品溶液和芒果叶阴性对照溶液,按一定的色谱条件进样分析测定,理论塔板数按金丝桃苷峰计算应不少于120000;
(5)标准曲线的绘制:精密吸取步骤(1)制得的混合对照品溶液适量,分别置于5mL容量瓶中,加70%甲醇稀释至刻度,摇匀,分别制得6个不同浓度的混合对照品溶液,取上述对照品溶液,按一定的色谱条件进样5μL分析测定,记录峰面积,以质量浓度(μg/mL)为横坐标(X),峰面积为纵坐标(Y),绘制标准曲线;
(6)精密度试验:分别精密吸取步骤(1)制得的混合对照品溶液1.25mL置于5mL容量瓶中,70%甲醇稀释至刻度,摇匀;按一定的色谱条件进样,连续进样6次,记录峰面积及保留时间;
(7)稳定性试验:精密称取芒果止咳片样品0.3g,按步骤(2)的方法制备供试品溶液,按一定的色谱条件进样分析,分别在0h、2h、4h、8h、12h、24h进样,记录峰面积及保留时间;
(8)重复性试验:精密称取芒果止咳片粉末6份,每份0.3g,按步骤(2)的方法制备得6份供试品溶液,按一定的色谱条件进样5μL测定分析,记录相应峰面积;
(9)加样回收试验:精密称取各组份含量已知的芒果止咳片粉末0.15g,共6份,分别精密加入含没食子酸、原儿茶酸、芒果苷、高芒果苷、金丝桃苷、异槲皮苷的混合对照品溶液3.00ml,按步骤(2)的方法制备供试品溶液,在一定的色谱条件下进样5μL分析。
优选地,步骤(4)~步骤(9)中所述的色谱条件为:色谱柱:Phenomenex GeminiC18柱(4.6mm×250mm,5μm);以乙腈为流动相B,0.1%磷酸水溶液为流动相A;梯度洗脱(0~10min,5~7%B;10~20min,7~11%B;20~25min,11~13%B;25~40min,13~16%B;40~50min,16~20%B:50~60min,20~25%B;60~70min,25~35%B;70~75min,35%B);流速1.0mL/min;柱温30℃;进样量为5μL;检测波长:258nm。
优选地,步骤(9)中所述的混合对照品溶液中没食子酸、原儿茶酸、芒果苷、高芒果苷、金丝桃苷、异槲皮苷的质量浓度分别为:0.9536mg/mL、0.0490mg/mL、2.187mg/mL、0.1300mg/mL、0.0700mg/mL、0.0500mg/mL。
本发明的有益效果:
本发明采用HPLC法,色谱柱为Phenomenex Gemini C18柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相为乙腈(B)-0.1%磷酸水溶液(A);梯度洗脱;流速1.0mL/min;检测波长:258nm,柱温30℃;一测多评法以没食子酸为内参物,分别建立原儿茶酸、芒果苷、高芒果苷、金丝桃苷和异槲皮苷的相对校正因子(RCF),通过RCF计算其含量,并将其测定值与外标法测定结果进行对比分析,本发明提供的一测多评法与外标法测定结果并无显著差异(P>0.05),各相对校正因子重复性良好,本发明所建立的高效液相色谱含量测定及一测多评法可用于芒果止咳片中该6个成分的含量测定,且方法准确可靠,重复性好,可用于芒果止咳片的质量控制。
附图说明
图1为混合对照品溶液(A)、芒果止咳片供试品溶液(B)及芒果叶阴性对照溶液(C)的HPLC图谱,其中1.没食子酸;2.原儿茶酸;3.芒果苷;4.高芒果苷;5.金丝桃苷;6.异槲皮苷。
具体实施方式
1.实验材料
1.1实验试剂、药品与药材
11批芒果止咳片均由广西中医药大学制药厂提供(批号:20161201,20161202,20170304,20170401,20170501,20170901,20180601,20180602,20180701,20180702,20181001)。没食子酸(批号:110831-201605,质量分数以90.8%计)、原儿茶酸(批号:110809-201205,质量分数以99.9%计)均购于中国食品药品检定研究所;高芒果苷(批号ST216701,纯度≥98%)、金丝桃苷(批号ST008801,纯度≥98%)、异槲皮苷(批号:ST114401,纯度≥98%)均购于上海诗丹德标准技术有限公司;芒果苷(批号wkq18050201,HPLC≥98%)购于四川维克奇生物科技有限公司。芒果叶对照药材(批号:121507-200501),购于中国药品生物制品检定所。乙腈(色谱纯,Fisher公司);超纯水由实验室自制;甲醇(分析纯,成都市科隆化学品有限公司)。
1.2仪器
Agilent-1260高效液相色谱仪,包括UV型紫外检测器、安捷伦工作站(美国安捷伦公司);Waters e2695高效液相色谱仪;KQ5200B型超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司);密思博超纯水器;电子分析天平(十万分之一,SQP,赛多利斯科学仪器有限公司);TGL-16G离心机(上海安亭科学仪器厂);HWS-26型电热恒温水浴锅(上海一恒科学仪器有限公司)。
2.方法与结果
2.1色谱条件
色谱柱:Phenomenex Gemini C18柱(4.6mm×250mm,5μm);以乙腈为流动相B,0.1%磷酸水溶液为流动相A;梯度洗脱(0~10min,5~7%B;10~20min,7~11%B;20~25min,11~13%B;25~40min,13~16%B;40~50min,16~20%B:50~60min,20~25%B;60~70min,25~35%B;70~75min,35%B);流速1.0mL/min;柱温30℃;进样量为5μL;检测波长:258nm。
2.2方法学考察及结果
2.2.1对照品溶液的制备
分别取没食子酸、原儿茶酸、芒果苷、高芒果苷、金丝桃苷和异槲皮苷对照品适量,精密称定,加70%甲醇溶解,制成含没食子酸、原儿茶酸、芒果苷、高芒果苷、金丝桃苷、异槲皮苷的质量浓度分别为1.830mg/mL、0.1010mg/mL、2.613mg/mL、0.3623mg/mL、0.1554mg/mL、0.07480mg/mL的混合对照品溶液,备用。
2.2.2供试品溶液的制备
取芒果止咳片20片,去糖衣,精密称定总片重,研细,取其粉末0.3g,精密称定,精密加入70%甲醇25mL,超声40min,滤过,残渣精密加入70%甲醇25mL,超声40min,滤过,合并滤液,水浴挥干,残渣加70%甲醇溶解,定容至10mL容量瓶,摇匀,13000r/min离心10min,取上清液作为供试品溶液。
2.2.3阴性供试品溶液的制备
按处方工艺制备缺芒果叶的阴性样品,取适宜的芒果叶阴性样品,并按“2.2.2”项下制备得芒果叶阴性对照溶液。
2.2.4***适应性试验
分别取混合对照品溶液、芒果止咳片供试品溶液和芒果叶阴性对照溶液,按“2.1”项下色谱条件进样分析测定,实验结果显示,混合对照品色谱图与样品色谱图在相同的保留时间处都有相应的色谱峰出现,而芒果叶阴性对照溶液在相应的保留时间处没有色谱峰出现。理论塔板数按金丝桃苷峰计算应不少于120000,结果见图1。
2.2.5标准曲线的绘制
精密吸取“2.2.1”项下的混合对照品溶液适量,分别置于5mL容量瓶中,加70%甲醇稀释至刻度,摇匀,分别制得6个不同浓度的混合对照品溶液;取上述对照品溶液,按“2.1”项下色谱条件进样5μL分析测定,记录峰面积。以质量浓度(μg/mL)为横坐标(X),峰面积为纵坐标(Y),绘制标准曲线,得到没食子酸、原儿茶酸、芒果苷、高芒果苷、金丝桃苷和异槲皮苷的线性关系如表1所示。
表1 各组分线性关系
2.2.6精密度试验
分别精密吸取“2.2.1”项下的混合对照品溶液1.25mL置于5mL容量瓶中,70%甲醇稀释至刻度,摇匀。按“2.1”项下色谱条件进样,连续进样6次,记录峰面积及保留时间,计算得各峰的峰面积RSD值分别为0.17%、0.18%、0.19%、0.22%、0.17%、0.27%,保留时间的RSD值分别为0.90%、1.0%、0.58%、0.49%、0.55%、0.50%,结果表明仪器的精密度良好。
2.2.7稳定性试验
精密称取芒果止咳片样品(批号:20180601)0.3g,按“2.2.2”项下的方法制备供试品溶液,按“2.1”项下色谱条件进样分析,分别在0h、2h、4h、8h、12h、24h进样,记录峰面积及保留时间,计算得各峰的峰面积RSD值分别为0.29%、0.76%、0.32%、0.48%、0.70%、2.0%,保留时间的RSD值分别为0.27%、0.34%、0.31%、0.34%、0.32%、0.29%,结果表明,样品溶液在24h内稳定。
2.2.8重复性试验
精密称取芒果止咳片(批号:20180601)粉末6份,每份0.3g,按“2.2.2”项下方法制备得6份供试品溶液,按“2.1”项下的色谱条件进样5μL测定分析,记录相应峰面积,计算得6份样品中没食子酸、原儿茶酸、芒果苷、高芒果苷、金丝桃苷和异槲皮苷的平均含量分别为4.823mg/片、0.2269mg/片、10.89mg/片、1.198mg/片、0.3813mg/片和0.1836mg/片,6份样品测得各成分含量的RSD值分别为0.39%、0.33%、0.59%、0.50%、1.7%、2.3%,结果表明本实验方法重复性良好。
2.2.9加样回收试验
精密称取各组份含量已知的芒果止咳片粉末(批号20180601)0.15g,共6份,分别精密加入含没食子酸(0.9536mg/mL)、原儿茶酸(0.0490mg/mL),芒果苷(2.187mg/mL),高芒果苷(0.1300mg/mL),金丝桃苷(0.0700mg/mL),异槲皮苷(0.0500mg/mL)的混合对照品溶液3.00ml,按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,在“2.1”项色谱条件下进样5μL分析,结果见表2,表明该方法准确性良好。
表2 各组分加样回收率试验结果(n=6)
2.3一测多评法
2.3.1不同浓度相对校正因子的测定
取“2.2.1”项下混合对照品溶液0.5ml、1.0、2.0、3.0、4.0ml分别置于5mL容量瓶中,70%甲醇稀释至刻度,摇匀,加上“2.2.1”项下的混合对照品溶液即得6个系列浓度的混合对照品溶液,按“2.1”项下色谱条件进样5μL分析测定,记录峰面积。以没食子酸色谱峰作为内标峰(S),分别计算没食子酸相对于原儿茶酸、芒果苷、高芒果苷、金丝桃苷和异槲皮苷的相对校正因子,计算得不同浓度下各组分相对校正因子的RSD均小于2.5%,结果见表3。
表3 不同浓度各组分相对校正因子测定结果(n=6)
2.3.2不同色谱柱相对校正因子的测定
采用安捷伦1260型高效液相色谱仪,分别考察了岛津Shim-pack CLC-ODS C18(6.0mmID×15cm)、Waters SunFireRC18(4.6×250mm,5.0μm)、Phenomenex Gemini C18(4.6mm×250mm,5.0μm)3根不同色谱柱对各成分相对校正因子的影响,以没食子酸色谱峰作为内标峰(S),分别计算其它各组分的相对校正因子,结果各组分相对校正因子的RSD值均小于1.5%,结果详见表4。测定结果表明不同色谱柱测得的相对校正因子并无显著性差异。
表4 不同色谱柱相对校正因子测定结果(n=3)
2.3.3不同仪器相对校正因子的测定
本实验分别考察了岛津Shim-pack CLC-ODS C18(6.0mmID×15cm)、WatersSunFireRC18(4.6×250mm,5.0μm)、Phenomenex Gemini C18(4.6mm×250mm,5.0μm)3根不同色谱柱在Agilent 1260型和Waters e2695型高效液相色谱仪两台不同实验仪器上对各成分相对校正因子的影响;以没食子酸色谱峰作为内标峰(S),分别计算其它各组分的相对校正因子,结果各组分的相对校正因子RSD值均小于3.0%,详见表5。实验结果表明3根不同色谱柱在两台不同仪器上测得的相对校正因子并无显著性差异。
表5 不同色谱柱及不同仪器各组分相对校正因子测定结果(n=3)
2.3.4不同柱温和流速相对校正因子的计算
本实验考察了不同柱温(25、30、35℃)及不同流速(0.80、1.0、1.2mL/min)对相对校正因子的影响,结果各待测成分的RCF的所对应的RSD值均小于1.5%,结果详见表6。实验结果表明在不同色谱柱温及不同流速下测得各组分相对校正因子无显著性差异。
表6 不同色谱柱温及不同流速相对校正因子测定结果(n=3)
2.3.5色谱峰的定位
一测多评法(QAMS)用于多指标成分同时定量可行的前提是对各待测成分色谱峰的准确定位。目前文献[18-20]中较多采用的方法为相对保留时间定位法或保留时间差值定位法。本实验在Agilent 1260型和Waters e2695高效液相色谱仪上分别用3种不同色谱柱考察了各待测组分色谱峰的相对保留时间和保留时间差值的重现性;实验结果表明,在相同的色谱条件下,芒果苷、高芒果苷、金丝桃苷和异槲皮苷采用相对保留时间和保留时间差定位的RSD值均小于5%,但原儿茶酸采用相对保留时间与保留时间差定位的RSD值均大于5%,因此原儿茶酸的定位只能采用定性对照品定位,结果见表7和表8。
表7 不同色谱柱及不同仪器各组分相对保留时间测定结果(n=3)
表8 不同仪器和不同色谱柱各组分保留时间差值(n=3)
2.3.6一测多评法与外标法测定结果比较
取不同批号芒果止咳片11批,按“2.1”项下色谱条件进样,记录各待测成分保留时间及峰面积,分别用外标法(ESM)和所建立的一测多评法(QAMS)计算各成分的测量结果,并将两种方法的含量测定结果进行比较,用相对误差(RE)评价两种方法含量测定结果的差异,结果两种方法含量测定结果相对误差均小于4%,结果详见表9。将测量结果用SPSS22.0软件对两种方法测得的数据进行独立样本t检验分析,结果两种方法的测定结果差异无统计学意义(P>0.05),显示本实验建立的同时测定芒果止咳片中6种成分的一测多评法准确性良好。
表9 11批次芒果止咳片样品中6种成分一测多评法与外标法的测定结果(mg/片,n=2)
2.4讨论
最佳检测波长的确定:本实验通过Waters PDA检测器进行全波长扫描,结果显示在258nm下各待测成分均有较好的吸收,且芒果苷、高芒果苷、金丝桃苷和异槲皮苷的最大吸收波长为258nm,故选择258nm为测定波长。
供试品制备方法的确定:本实验通过对水、甲醇、乙醇、40%甲醇、70%甲醇、40%乙醇、70%乙醇7个提取溶剂进行考察,结果显示70%甲醇对各个成分的总体提取效率更好,故选择70%甲醇作为提取溶剂;考察了静置、超声、回流3个提取方式,发现超声和回流的提取效率差异不大,但超声提取操作简单,故本实验选择超声提取法;考察了提取时间20、30、40、50、60min,发现提取时间为40min时,各待测成分提取效率不再增加,对不同提取溶剂体积和提取次数进行考察,发现提取次数为两次,每次加入溶剂体积为25mL时,各成分已基本提取完全。
从本试验数据看,不同批次芒果止咳片中各组分的含量有明显的差异,其中芒果苷和高芒果苷的含量差异尤为明显。从2016年起的前5个批次中芒果苷和高芒果苷的含量较低,可能与制剂存放较久有关,造成其含量下降;也可能是11个批次制剂采用的原料药芒果叶药材来源于不同产地或在不同季节采收,造成芒果苷和高芒果苷的含量差异较大[22-23],建议加强对原料的相关性指标成分的含量进行检测,并同时严格控制提取生产工艺参数。
酚酸类成分和黄酮类成分为芒果叶的重要活性物质,具有抗肿瘤、抗炎、止咳平喘等作用。没食子酸为芒果叶含量相对较高的酚酸类成分,在芒果止咳片中含量较高,且稳定性好,同时没食子酸对照品价格便宜易得。因此,本实验选择没食子酸为内标物,符合一测多评法对内标物的要求。
本实验以没食子酸为内标物,测定了原儿茶酸、芒果苷、高芒果苷、金丝桃苷、异槲皮苷的相对校正因子,并分别考察了不同柱温、流速、仪器色谱柱对测定结果的影响,结果RSD均小于5%,表明一测多评法建立的校正因子耐用性良好。11批芒果止咳片的含量测定结果表明,一测多评法测得结果与外标法测定结果并无显著性差异;两组数据经采用SPSS22.0软件分析,差异无统计学意义(P>0.05),表明本方法准确性良好,方法可行,结果可靠。本研究为芒果止咳片的质量控制提供了新的方法与思路。
Claims (3)
1.一种HPLC法一测多评测定芒果止咳片6种成分含量的方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)对照品溶液的制备:分别取没食子酸、原儿茶酸、芒果苷、高芒果苷、金丝桃苷和异槲皮苷对照品适量,精密称定,加70%甲醇溶解,制成含没食子酸、原儿茶酸、芒果苷、高芒果苷、金丝桃苷、异槲皮苷的质量浓度分别为1.830mg/mL、0.1010mg/mL、2.613mg/mL、0.3623mg/mL、0.1554mg/mL、0.07480mg/mL的混合对照品溶液,备用;
(2)供试品溶液的制备:取芒果止咳片20片,去糖衣,精密称定总片重,研细,取其粉末0.3g,精密称定,精密加入70%甲醇25mL,超声40min,滤过,残渣精密加入70%甲醇25mL,超声40min,滤过,合并滤液,水浴挥干,残渣加70%甲醇溶解,定容至10mL容量瓶,摇匀,13000r/min离心10min,取上清液作为供试品溶液;
(3)阴性供试品溶液的制备:按处方工艺制备缺芒果叶的阴性样品,取适宜的芒果叶阴性样品,并按步骤(2)制备得芒果叶阴性对照溶液;
(4)***适应性试验:分别取混合对照品溶液、芒果止咳片供试品溶液和芒果叶阴性对照溶液,按一定的色谱条件进样分析测定,理论塔板数按金丝桃苷峰计算应不少于120000;
(5)标准曲线的绘制:精密吸取步骤(1)制得的混合对照品溶液适量,分别置于5mL容量瓶中,加70%甲醇稀释至刻度,摇匀,分别制得6个不同浓度的混合对照品溶液,取上述对照品溶液,按一定的色谱条件进样5μL分析测定,记录峰面积,以质量浓度(μg/mL)为横坐标(X),峰面积为纵坐标(Y),绘制标准曲线;
(6)精密度试验:分别精密吸取步骤(1)制得的混合对照品溶液1.25mL置于5mL容量瓶中,70%甲醇稀释至刻度,摇匀;按一定的色谱条件进样,连续进样6次,记录峰面积及保留时间;
(7)稳定性试验:精密称取芒果止咳片样品0.3g,按步骤(2)的方法制备供试品溶液,按一定的色谱条件进样分析,分别在0h、2h、4h、8h、12h、24h进样,记录峰面积及保留时间;
(8)重复性试验:精密称取芒果止咳片粉末6份,每份0.3g,按步骤(2)的方法制备得6份供试品溶液,按一定的色谱条件进样5μL测定分析,记录相应峰面积;
(9)加样回收试验:精密称取各组份含量已知的芒果止咳片粉末0.15g,共6份,分别精密加入含没食子酸、原儿茶酸、芒果苷、高芒果苷、金丝桃苷、异槲皮苷的混合对照品溶液3.00ml,按步骤(2)的方法制备供试品溶液,在一定的色谱条件下进样5μL分析。
2.根据权利要求1所述的一种HPLC法一测多评测定芒果止咳片6种成分含量的方法,其特征在于,步骤(4)~步骤(9)中所述的色谱条件为:色谱柱:Phenomenex Gemini C18柱(4.6mm×250mm,5μm);以乙腈为流动相B,0.1%磷酸水溶液为流动相A;梯度洗脱(0~10min,5~7%B;10~20min,7~11%B;20~25min,11~13%B;25~40min,13~16%B;40~50min,16~20%B;50~60min,20~25%B;60~70min,25~35%B;70~75min,35%B);流速1.0mL/min;柱温30℃;进样量为5μL;检测波长:258nm。
3.根据权利要求1所述的一种HPLC法一测多评测定芒果止咳片6种成分含量的方法,其特征在于,步骤(9)中所述的混合对照品溶液中没食子酸、原儿茶酸、芒果苷、高芒果苷、金丝桃苷、异槲皮苷的质量浓度分别为:0.9536mg/mL、0.0490mg/mL、2.187mg/mL、0.1300mg/mL、0.0700mg/mL、0.0500mg/mL。
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