CN110756578A - 快速培养土著微生物去除土壤有机污染物方法 - Google Patents

快速培养土著微生物去除土壤有机污染物方法 Download PDF

Info

Publication number
CN110756578A
CN110756578A CN201911055223.7A CN201911055223A CN110756578A CN 110756578 A CN110756578 A CN 110756578A CN 201911055223 A CN201911055223 A CN 201911055223A CN 110756578 A CN110756578 A CN 110756578A
Authority
CN
China
Prior art keywords
soil
culture solution
indigenous microorganisms
culturing
organic pollutants
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201911055223.7A
Other languages
English (en)
Inventor
刘金光
李明
程寒飞
王龙
朱巧红
冉景
卢慧中
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Huatian Engineering and Technology Corp MCC
Original Assignee
Huatian Engineering and Technology Corp MCC
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Huatian Engineering and Technology Corp MCC filed Critical Huatian Engineering and Technology Corp MCC
Priority to CN201911055223.7A priority Critical patent/CN110756578A/zh
Publication of CN110756578A publication Critical patent/CN110756578A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B09—DISPOSAL OF SOLID WASTE; RECLAMATION OF CONTAMINATED SOIL
    • B09C—RECLAMATION OF CONTAMINATED SOIL
    • B09C1/00—Reclamation of contaminated soil
    • B09C1/10—Reclamation of contaminated soil microbiologically, biologically or by using enzymes
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B09—DISPOSAL OF SOLID WASTE; RECLAMATION OF CONTAMINATED SOIL
    • B09C—RECLAMATION OF CONTAMINATED SOIL
    • B09C2101/00—In situ

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Soil Sciences (AREA)
  • Environmental & Geological Engineering (AREA)
  • Processing Of Solid Wastes (AREA)

Abstract

本发明公开了一种快速培养土著微生物去除土壤有机污染物方法。包括以下步骤：S1采集有机污染土壤破碎后筛分，制备土壤悬液；S2土著微生物激活培养；S3土著微生物富集培养；S4投加菌液和无机营养剂至污染土壤。本发明利用特定配方的营养液富集培养土著微生物中的有机污染物降解菌，可原地异位培养后直接投加到污染土壤中，整个操作过程简单，周期短，能高效降低场地污染土壤中的有机污染物含量，并能减少化学氧化药剂使用量和避免由引入外源微生物带来的生态风险。

Description

快速培养土著微生物去除土壤有机污染物方法
技术领域
本发明涉及环境微生物技术领域，具体涉及一种快速培养土著微生物去除土壤有机污染物方法。
背景技术
多环芳烃(Polycyclic Aromatic Hydrocarbons，PAHs)是分子中含有两个以上苯环的碳氢化合物，包括萘、蒽、菲、芘等200余种化合物，其中大多具有“三致效应”(致畸、致癌和致突变性)，是土壤环境风险管控的重要目标污染物。土壤中微生物资源丰富，能利用PAHs等有机污染物作为碳源或能源被微生物利用，将其转化为二氧化碳和水。相比其他修复技术，微生物修复技术具有低成本、高效和环境友好等特点。
土壤环境中能够降解有机污染物的微生物菌群较少，工程实施中常通过外源添加微生物的手段增加有机污染物降解菌群。外源微生物需要与土著微生物进行竞争，使得添加的微生物在土壤环境中存在时间较短，同时引入外源微生物可能带来环境生态风险。快速富集土壤样品中的目标微生物菌群可有效提高污染土壤微生物修复的效率。目标微生物菌群的传统富集技术主要采用选择性培养基法，富集过程周期长，难以满足工期紧的需求。
发明内容
针对以上不足之处，本发明的目的在于提供一种快速培养土著微生物去除土壤有机污染物方法，该方法可以在短时间内获得大量土著微生物，配施无机营养剂，能够实现土壤有机污染物去除效率的提高。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：
一种快速培养土著微生物去除土壤有机污染物方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1采集有机污染土壤破碎后筛分，制备土壤悬液；
S2将土壤悬液稀释后接种至第一营养液并培养1d～7d，得到第一培养液；
S3将第一培养液接种至第二营养液后培养1d～3d，得到第二培养液；取部分第二培养液用于收集菌体，菌体回接至S2所述培养体系。
S4将步骤S3所述第二培养液和无机营养剂与污染土壤充分混匀，调节含水率，然后，孵育7d～30d。
进一步地，所述的步骤S1具体为：取有机污染土样50g～500g，置于搅拌池中，所述缓冲液为450mL～4500mL，pH 6.5，含磷酸二氢钾1g/L的无菌磷酸缓冲液，震荡时间为30min～60min，且每10min～15min以47kHz频率超声一次，每次20s～40s；
进一步地，所述的步骤S2具体为：将步骤S1所述土壤悬液进行10倍梯度稀释，取稀释倍数为10或102的稀释液分别接种至第一营养液中，于温度为25℃～32℃、转速为120rpm～180rpm的摇床上培养1d～7d，即得到第一培养液。
进一步地，所述第一营养液为1g/L磷酸二氢钾、0.1g/L硝酸钾、0.1g/L酵母提取物、0.1g/L～1g/L添加剂，pH 6.5～pH 7.5；进一步地，所述添加剂为苯甲酸、苯酚、对羟基苯甲酸、儿茶酚或者对香豆酸中的一种或几种；
进一步地，所述的步骤S3具体为：将步骤S2所述第一培养液接种至第二营养液中，接种量为目标培养液体积1％～10％，于温度为25℃～32℃、发酵罐或转速为120rpm～180rpm的摇床上培养1d～2d，即得到第二培养液；
进一步地，所述第二营养液为2.0g/L～10g/L玉米浆、0.1g/L～2g/L酵母提取物、1.0g/L～10g/L硫酸镁、1.0g/L～10g/L硝酸钾、1～5g/L NaCl，pH 6.5～pH7.5；
优选地，将所述收集的第二培养液菌体回接至S1所述培养体系，接种量为目标培养液体积的1‰～1％；
进一步地，所述的步骤S4具体为：将步骤S3所述第二培养液和无机营养剂与污染土壤充分混匀，调节含水率至25％～35％，25℃～32℃孵育7d～30d；
所述无机营养剂为硝酸钾、尿素、氯化铵、磷酸二氢钾或磷酸氢二钾中的一种或几种；
进一步地，所述投加无机营养剂对处理土壤干重的质量分数为0.5‰～2‰；
进一步地，投加第二培养液对处理土壤的体积分数为1％～10％。
有益效果：
本发明利用特异营养物质和合适的培养条件快速富集土壤中的有机污染物降解菌群，并投加到有机污染土壤中，操作简单，周期短，不会因引入外源微生物带来生态风险且能够大大提高土壤有机污染物的去除效率。
附图说明
图1为本发明快速培养土著微生物去除土壤有机污染物的流程图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1
S1采集污染土壤破碎后筛分，制备土壤悬液：取有机污染土样500g，置于搅拌池中，所述缓冲液为4500mL，pH 6.5，含磷酸二氢钾1g/L的无菌磷酸缓冲液，震荡时间为45min，且每15min以47kHz频率超声一次，每次20s；
S2土著微生物激活培养：将步骤S1所述土壤悬液进行10倍梯度稀释，取稀释倍数为10的稀释液分别接种至第一营养液中，其中，1g/L磷酸二氢钾、0.1g/L硝酸钾、0.1g/L酵母提取物、0.2g/L苯甲酸，pH 6.5～pH 7.5；将培养瓶于温度为30℃、转速为160rpm的摇床上培养2d，即得到第一培养液；
S3土著微生物富集培养：将步骤S2所述第一培养液接种至第二营养液中，其中，5g/L玉米浆、0.5g/L酵母提取物、2.0g/L硫酸镁、5.0g/L硝酸钾、2g/L NaCl，pH 6.5；接种量为目标培养液体积2％，于温度为30℃、发酵罐中培养1d～2d，即得到第二培养液；优选地，将所述收集的第二培养液菌体回接至S2所述培养体系，接种量为目标培养液体积的2‰；
S4投加菌液和无机营养剂至污染土壤：将步骤S3所述第二培养液和无机营养剂与污染土壤充分混匀，其中，无机营养剂为尿素，投加无机营养剂对处理土壤干重的质量分数为1％，投加第二培养液对处理土壤的体积分数为1％；调节含水率至25％，30℃孵育30d。
与对照相比，土壤中二苯并[a,h]蒽去除效率提高31.5％～89.2％，菲去除效率提高45.6％～96.7％。
实施例2
S1采集污染土壤破碎后筛分，制备土壤悬液：取有机污染土样500g，置于搅拌池中，所述缓冲液为4500mL，pH 6.5，含磷酸二氢钾1g/L的无菌磷酸缓冲液，震荡时间为45min，且每15min以47kHz频率超声一次，每次20s；
S2土著微生物激活培养：将步骤S1所述土壤悬液进行10倍梯度稀释，取稀释倍数为10的稀释液分别接种至第一营养液中，其中，1g/L磷酸二氢钾、0.1g/L硝酸钾、0.1g/L酵母提取物、0.2g/L添加剂，pH 6.5～pH 7.5；其中，添加剂为苯甲酸、对羟基苯甲酸和对香豆酸，质量比为1：1：1；将培养瓶于温度为25℃、转速为160rpm的摇床上培养2d，即得到第一培养液；
S3土著微生物富集培养：将步骤S2所述第一培养液接种至第二营养液中，其中，5g/L玉米浆、0.5g/L酵母提取物、2.0g/L硫酸镁、5.0g/L硝酸钾、2g/L NaCl，pH 6.5；接种量为目标培养液体积2％，于温度为25℃、发酵罐中培养1d～2d，即得到第二培养液；将所述收集的第二培养液菌体回接至S2所述培养体系，接种量为目标培养液体积的2‰；
S4投加菌液和无机营养剂至污染土壤：将步骤S3所述第二培养液和无机营养剂与污染土壤充分混匀，其中，无机营养剂为尿素，投加无机营养剂对处理土壤干重的质量分数为1％，投加第二培养液对处理土壤的体积分数为1％；调节含水率至25％，25℃孵育30d。
与对照相比，土壤中二苯并[a,h]蒽去除效率提高20.7％～69.3％，菲去除效率提高30.4％～78.6％。

Claims (10)

1.一种快速培养土著微生物去除土壤有机污染物方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1采集有机污染土壤破碎后筛分，制备土壤悬液；
S2将土壤悬液稀释后接种至第一营养液并培养1d～7d，得到第一培养液；
S3将第一培养液接种至第二营养液并培养1d～3d，得到第二培养液；取部分第二培养液用于收集菌体，菌体回接至S2所述培养体系。
S4将步骤S3所述第二培养液和无机营养剂与污染土壤充分混匀，调节含水率，然后，孵育7d～30d。
2.如权利要求1所述的一种快速培养土著微生物去除土壤有机污染物方法，其特征在于，所述的步骤S1具体为：取有机污染土样50g～500g，置于搅拌池中；投加含磷酸二氢钾1g/L的无菌磷酸缓冲液为450mL～4500mL，pH 6.5；震荡时间为30min～60min，且每10min～15min以47kHz频率超声一次，每次20s～40s。
3.如权利要求1所述的一种快速培养土著微生物去除土壤有机污染物方法，其特征在于，所述第一营养液为1g/L磷酸二氢钾、0.1g/L硝酸钾、0.1g/L酵母提取物、0.1g/L～1g/L添加剂，pH 6.5～pH 7.5。
4.如权利要求1所述的一种快速培养土著微生物去除土壤有机污染物方法，其特征在于，所述的步骤S2具体为：将所述土壤悬液进行10倍梯度稀释，取稀释倍数为10或102的稀释液分别接种至第一营养液中，在温度为25℃～32℃、转速为120rpm～180rpm的摇床上培养1d～7d，即得到第一培养液。
5.如权利要求1所述的一种快速培养土著微生物去除土壤有机污染物方法，其特征在于，步骤S3中，所述第二营养液为2.0g/L～10g/L玉米浆、0.1g/L～2g/L酵母提取物、1.0g/L～10g/L硫酸镁、1.0g/L～10g/L硝酸钾、1～5g/L NaCl，pH 6.5～pH 7.5。
6.如权利要求1所述的一种快速培养土著微生物去除土壤有机污染物方法，其特征在于，所述的步骤S3具体为：将所述第一培养液接种至第二营养液中，接种量为目标培养液体积1％～10％，于温度为25℃～32℃、发酵罐或转速为120rpm～180rpm的摇床上培养1d～2d，即得到第二培养液。
7.如权利要求1所述的一种快速培养土著微生物去除土壤有机污染物方法，其特征在于，步骤S3中，将所述收集的第二培养液菌体回接至S1所述培养体系，接种量为目标培养液体积的1‰～1％。
8.如权利要求1所述的一种快速培养土著微生物去除土壤有机污染物方法，其特征在于，所述的步骤S4具体为：将所述第二培养液和无机营养剂与污染土壤充分混匀，调节含水率至25％～35％，25℃～32℃孵育7d～30d。
9.如权利要求1所述的一种快速培养土著微生物去除土壤有机污染物方法，其特征在于，所述步骤S4中的无机营养剂为硝酸钾、尿素、氯化铵、磷酸二氢钾或磷酸氢二钾中的一种或几种。
10.如权利要求1所述的一种快速培养土著微生物去除土壤有机污染物方法，其特征在于，所述投加无机营养剂对处理土壤干重的质量分数为0.5‰～2‰；投加第二培养液对处理土壤的体积分数为1％～10％。
CN201911055223.7A 2019-10-31 2019-10-31 快速培养土著微生物去除土壤有机污染物方法 Pending CN110756578A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201911055223.7A CN110756578A (zh) 2019-10-31 2019-10-31 快速培养土著微生物去除土壤有机污染物方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201911055223.7A CN110756578A (zh) 2019-10-31 2019-10-31 快速培养土著微生物去除土壤有机污染物方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN110756578A true CN110756578A (zh) 2020-02-07

Family

ID=69335624

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201911055223.7A Pending CN110756578A (zh) 2019-10-31 2019-10-31 快速培养土著微生物去除土壤有机污染物方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110756578A (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111922065A (zh) * 2020-07-31 2020-11-13 中冶华天工程技术有限公司 一种化学氧化联合微生物修复有机污染土壤的方法
CN114467405A (zh) * 2022-02-10 2022-05-13 自然资源部天津海水淡化与综合利用研究所 一种培养土著微生物修复盐碱地土壤的方法及其应用

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102021132A (zh) * 2009-12-03 2011-04-20 北京航空航天大学 一种石油污染土壤生物修复菌剂的筛选及修复方法
CN102250768A (zh) * 2011-06-01 2011-11-23 康源绿洲微生物技术（北京）有限公司 一种处理污水污泥的酶菌复合剂的制备方法
CN102557274A (zh) * 2012-01-16 2012-07-11 宜态科环保技术(苏州)有限公司 一种利用微生物定向产酶处理废水的方法
CN106001104A (zh) * 2016-08-08 2016-10-12 西南石油大学 一种利用土著菌修复石油污染土壤的方法
CN107838187A (zh) * 2017-09-28 2018-03-27 中冶华天南京工程技术有限公司 修复多环芳烃污染土壤的方法
CN108611274A (zh) * 2018-03-29 2018-10-02 中冶华天南京工程技术有限公司 定向筛选土壤目标微生物菌群的方法
CN109576201A (zh) * 2019-01-31 2019-04-05 上海同瑞环保科技有限公司 一种培养土著微生物高效去除水体氨氮的方法
CN109665633A (zh) * 2019-03-01 2019-04-23 北京高能时代环境技术股份有限公司 一种修复酚类污染土壤及地下水的功能菌群的制备方法

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102021132A (zh) * 2009-12-03 2011-04-20 北京航空航天大学 一种石油污染土壤生物修复菌剂的筛选及修复方法
CN102250768A (zh) * 2011-06-01 2011-11-23 康源绿洲微生物技术（北京）有限公司 一种处理污水污泥的酶菌复合剂的制备方法
CN102557274A (zh) * 2012-01-16 2012-07-11 宜态科环保技术(苏州)有限公司 一种利用微生物定向产酶处理废水的方法
CN106001104A (zh) * 2016-08-08 2016-10-12 西南石油大学 一种利用土著菌修复石油污染土壤的方法
CN107838187A (zh) * 2017-09-28 2018-03-27 中冶华天南京工程技术有限公司 修复多环芳烃污染土壤的方法
CN108611274A (zh) * 2018-03-29 2018-10-02 中冶华天南京工程技术有限公司 定向筛选土壤目标微生物菌群的方法
CN109576201A (zh) * 2019-01-31 2019-04-05 上海同瑞环保科技有限公司 一种培养土著微生物高效去除水体氨氮的方法
CN109665633A (zh) * 2019-03-01 2019-04-23 北京高能时代环境技术股份有限公司 一种修复酚类污染土壤及地下水的功能菌群的制备方法

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111922065A (zh) * 2020-07-31 2020-11-13 中冶华天工程技术有限公司 一种化学氧化联合微生物修复有机污染土壤的方法
CN114467405A (zh) * 2022-02-10 2022-05-13 自然资源部天津海水淡化与综合利用研究所 一种培养土著微生物修复盐碱地土壤的方法及其应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN107497850B (zh) 一种用于修复污染土壤的复配生物制剂
CN110756578A (zh) 快速培养土著微生物去除土壤有机污染物方法
CN106701732B (zh) 一种藤黄球菌固定化小球的制备方法及其应用
CN103484447A (zh) 一种石油降解酶制剂的制备方法与应用
US8241499B2 (en) Control of filamentous bacteria induced foaming in wastewater systems
CN110904057A (zh) 一种土壤中噬菌体提取富集的方法
CN102373191B (zh) 一种用于降解城市废水的优势菌群及其制备方法
CN110656079A (zh) 一种石油烃污染土壤中萘修复降解菌剂的制备方法
CN103627657A (zh) 一种用于降解木质素废水的复合菌群及其制备方法
CN104307870A (zh) 一种多溴联苯醚污染土壤的生物泥浆修复方法及专用设备
CN109609428A (zh) 多环芳烃降解菌的筛选方法
CN102417226A (zh) 一种可同步去除铁锰、氨氮、有机物的絮凝剂及制备方法
CN111909885A (zh) 一种耐盐降cod菌种、培养方法及应用
CN103243057B (zh) 一株三乙胺降解假单胞菌株sya-1及其应用
CN108546659B (zh) 一种烷烃和多环芳烃降解复合菌剂及其制备方法
CN110511975A (zh) 一种含溴废水处理高效菌筛选培养实验方法
CN202347005U (zh) 一种在线菌种培养的投菌装置
CN106365310B (zh) 一种粘土矿物与腐殖酸协同促进生物还原硝基苯的方法
Tu et al. Treatment of wastewater containing linear alkylbenzene sulfonate by bacterial-microalgal biological turntable
CN105752955B (zh) 一种利用活性污泥微生物菌群溶解中低品位磷矿的方法
CN109370931A (zh) 一种高效降解多环芳烃的复合菌剂及其应用
CN103114066B (zh) 一株二乙胺降解假单胞菌株eya-2及其应用
CN110846248A (zh) 一种用于多环芳烃降解的人工混菌体系及其应用方法
CN106350451A (zh) 一种“三苯”废气处理用微生物驯化方法
CN113322196B (zh) 一株利用芳香族硝基化合物生产单细胞蛋白的甲基营养型芽孢杆菌

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20200207