CN110699850B - 聚羟基脂肪酸酯/聚吡咯复合电纺丝膜的制备方法及电纺丝膜 - Google Patents

聚羟基脂肪酸酯/聚吡咯复合电纺丝膜的制备方法及电纺丝膜 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种聚羟基脂肪酸酯/聚吡咯复合电纺丝膜的制备方法及电纺丝膜,所述制备方法是先通过静电纺丝工艺制备聚羟基脂肪酸酯纤维电纺丝膜,然后再经表面改性技术制备聚羟基脂肪酸酯/聚吡咯复合电纺丝膜。所述制备方法简单快捷,原料易得,制备出的聚羟基脂肪酸酯/聚吡咯复合电纺丝膜具有良好的亲水性和细胞相容性,植入组织后可以提供持久、稳固的骨架结构支撑,电刺激下可以调节细胞的贴附、迁移,诱导组织分化,在组织定向修复等生物工程领域具有广泛的应用前景。

Description

聚羟基脂肪酸酯/聚吡咯复合电纺丝膜的制备方法及电纺 丝膜
技术领域
本发明涉及医用生物材料领域,更具体地,涉及一种聚羟基脂肪酸酯/聚吡咯复合电纺丝膜的制备方法电纺丝膜。
背景技术
静电纺丝是一种特殊的纤维制造工艺,聚合物溶液在强电场作用下,通过喷射纺丝以得到纳米级纤维细丝。其纤维结构可以模拟天然细胞外基质的结构和生物功能,潜在应用涵盖载药支架、组织器官修复支架等等。然而,可用于静电纺丝的聚合物分子种类有限,结构容易遭外力破坏,力学性能和生物相容性常常不尽如人意。
近年来,一类由微生物发酵获得的高分子材料引起广大关注,名为聚羟基脂肪酸酯 (Polyhydroxyalkanoates,PHA),完全由微生物合成,工艺简单绿色,降解周期长达9-12个月,具有良好的可控降解性、生物相容性和热加工性能。其结构多元化,根据单体的不同排列组合方式和链长,可以获得不同的材料学性能。但该材料不溶于水,常规成型工艺很难实现,通过有机溶剂溶解后配合静电纺丝工艺可能获得较为理想的纳米级纤维丝。已有专利技术公开了聚羟基丁酸酯/聚吡咯复合导电纳米纤维膜,但其制备方法比较复杂,且所得的聚羟基丁酸酯/聚吡咯复合导电纳米纤维膜究竟具有什么样的性能也无法确定。
发明内容
本发明旨在克服上述现有技术的至少一种不足,提供一种新的聚羟基脂肪酸酯/聚吡咯复合电纺丝膜的制备方法,所述制备方法简单快捷,原料易得。
本发明的另一目的在于提供一种聚羟基脂肪酸酯/聚吡咯复合电纺丝膜。
本发明采取的技术方案如下:
一种聚羟基脂肪酸酯/聚吡咯复合电纺丝膜的制备方法,包括如下步骤:
S1、聚羟基脂肪酸酯纳米纤维电纺丝膜的制备:将聚羟基脂肪酸酯粉末溶于二氯甲烷和二甲基甲酰胺的复合溶剂中,均匀搅拌配成浓度为90~100mg/mL的聚羟基脂肪酸酯溶液,将其加入到注射器中,注射器用针头喷嘴固定,在室温条件下设置针头与接收器之间距离为 14~16cm,电压为12~18千伏,注射器推进速度为2.8~3.2毫升/小时,通过乙醇溶液收集电纺丝,随后,将获得的电纺丝用去离子水洗涤,真空冷冻干燥过夜后即获得聚羟基脂肪酸酯纳米纤维,将上述纳米纤维热压成膜即获得聚羟基脂肪酸酯电纺丝膜;
S2、聚羟基脂肪酸酯/聚吡咯复合电纺丝膜的制备:将1~5g三氯化铁与50~100mL去离子水搅拌均匀,随后将0.1~0.5g吡咯与50~100mL去离子水混合均匀,然后将三氯化铁溶液、吡咯溶液两种溶液混合均匀得到混合溶液,室温条件下将聚羟基脂肪酸酯电纺丝膜置入混合溶液中,超声震荡0.5~12h,取出后用去离子水洗涤样品3~5次,真空冷冻干燥即获得聚羟基脂肪酸酯/聚吡咯复合电纺丝膜。
本发明制备聚羟基脂肪酸酯/聚吡咯复合电纺丝膜是先通过静电纺丝工艺制备聚羟基脂肪酸酯纤维电纺丝膜,然后再经表面改性技术制备聚羟基脂肪酸酯/聚吡咯复合电纺丝膜,聚吡咯是均匀覆盖于聚羟基脂肪酸酯网络结构表面,外观光滑,微观结构更贴近天然细胞外基质,利于细胞黏附生长。内部聚羟基脂肪酸酯能很好维持骨架支撑,不会因聚吡咯的参杂影响力学性能。所述制备工艺更简单,应用范围普适性高。
优先地,步骤S1中聚羟基脂肪酸酯溶液的浓度为95~105mg/mL。
优选地,步骤S1中二氯甲烷和二甲基甲酰胺的体积比为(2~4):(5~9)。更优选地,二氯甲烷和二甲基甲酰胺的体积比为3:7。
优选地,步骤S1中针头与接收器之间距离为15cm。
优选地,步骤S1中电压为15千伏。
优选地,步骤S1中注射器推进速度为3毫升/小时。
优选地,步骤S2中三氯化铁和吡咯的质量比为(13~14):(2~3)。
优先地,步骤S2中超声震荡时间为0.5~6h。更优选地,步骤S2中超声震荡时间为1~ 3h。
优选地,步骤S1中聚羟基脂肪酸酯粉末为医用级聚羟基脂肪酸酯粉末,纯度大于99.5%。
优选地,室温条件为温度20℃,湿度45%。
由所述的制备方法制备得到的聚羟基脂肪酸酯/聚吡咯复合电纺丝膜。本发明所述的聚羟基脂肪酸酯/聚吡咯复合电纺丝膜以聚羟基脂肪酸酯为基本骨架,具有良好的力学性能、可控降解性、生物相容性,聚吡咯包覆在聚羟基脂肪酸酯骨架上,使得复合电纺丝膜又具有聚吡咯的良好的亲水性和导电性,从而使所制备的聚羟基脂肪酸酯/聚吡咯复合电纺丝膜同时兼具聚羟基脂肪酸酯和聚吡咯的优异性能,所得的聚羟基脂肪酸酯/聚吡咯复合电纺丝膜外观为光滑平整的膜状,微观纤维结构与天然细胞外基质相似,力学性能和生物相容性优异,植入组织后可以提供持久、稳固的骨架结构支撑,降解周期长达9-12个月,其在电刺激下可以调节细胞的贴附、迁移,诱导组织分化,在组织定向修复等生物工程领域具有广泛的应用前景。
与现有技术相比,本发明的有益效果为:本发明所述的制备方法是先通过静电纺丝工艺制备聚羟基脂肪酸酯纤维电纺丝膜,然后再经表面改性技术制备聚羟基脂肪酸酯/聚吡咯复合电纺丝膜,聚吡咯是均匀覆盖于聚羟基脂肪酸酯网络结构表面,外观光滑,微观结构更贴近天然细胞外基质,利于细胞黏附生长;本发明所制备的聚羟基脂肪酸酯/聚吡咯复合电纺丝膜同时兼具聚羟基脂肪酸酯和聚吡咯的优异性能,力学性能和生物相容性优异,植入组织后可以提供持久、稳固的骨架结构支撑,降解周期长达9-12个月,其在电刺激下可以调节细胞的贴附、迁移,诱导组织分化,在组织定向修复等生物工程领域具有广泛的应用前景;本发明所述制备工艺更简单,应用范围普适性高。
附图说明
图1为实施例1聚羟基脂肪酸酯(PHA)电纺丝膜实物外观图及扫描电镜图。
图2为实施例1聚羟基脂肪酸酯/聚吡咯(PHA/PPY)复合电纺丝膜实物外观图及扫描电镜图。
图3为实施例1PHA电纺丝膜和PHA/PPY复合电纺丝膜的细胞增殖活力柱状图。
图4为实施例1PHA电纺丝膜和PHA/PPY复合电纺丝膜的细胞免疫荧光染色图像。
具体实施方式
本发明附图仅用于示例性说明,不能理解为对本发明的限制。为了更好说明以下实施例,附图某些部件会有省略、放大或缩小,并不代表实际产品的尺寸;对于本领域技术人员来说,附图中某些公知结构及其说明可能省略是可以理解的。
实施例1
一种聚羟基脂肪酸酯/聚吡咯复合电纺丝膜,其制备过程如下:
一种聚羟基脂肪酸酯/聚吡咯复合电纺丝膜的制备方法,包括如下步骤:
S1、聚羟基脂肪酸酯(PHA)纳米纤维电纺丝膜的制备:称取1g医用级PHA粉末溶于10mL二氯甲烷和二甲基甲酰胺的复合溶剂中(二氯甲烷和二甲基甲酰胺的体积比为3:7),均匀搅拌配成浓度为100mg/mL的PHA溶液并加入1mL注射器中,注射器用针头喷嘴固定。在室温条件下设置针头与接收器之间距离为15cm,电压为15千伏,注射器推进速度为3.0 毫升/小时,通过乙醇溶液收集电纺丝。随后,将获得的电纺丝用去离子水洗涤3次,冷冻干燥过夜后即获得聚羟基脂肪酸酯纳米纤维。将上述纳米纤维热压成膜即获得PHA电纺丝膜。
S2、聚羟基脂肪酸酯/聚吡咯(PHA/PPY)复合电纺丝膜的制备:称取1.36g三氯化铁加入100mL烧杯中,加入100mL去离子水搅拌均匀,随后称取0.244g吡咯溶于另外100mL 去离子水中,将上述两种溶液1:1混合均匀。室温条件下,将聚羟基脂肪酸酯电纺丝膜置入混合溶液中,超声震荡1h,取出后用去离子水洗涤样品3次,真空冷冻干燥即获得聚羟基脂肪酸酯/聚吡咯复合电纺丝膜。
实施例2
一种聚羟基脂肪酸酯/聚吡咯复合电纺丝膜的制备方法,包括如下步骤:
S1、聚羟基脂肪酸酯(PHA)纳米纤维电纺丝膜的制备:称取0.95g医用级PHA粉末溶于10mL二氯甲烷和二甲基甲酰胺的复合溶剂中(二氯甲烷和二甲基甲酰胺的体积比为 3:7),均匀搅拌配成浓度为100mg/mL的PHA溶液并加入1mL注射器中,注射器用针头喷嘴固定。在室温条件下设置针头与接收器之间距离为15cm,电压为15千伏,注射器推进速度为3.0毫升/小时,通过乙醇溶液收集电纺丝。随后,将获得的电纺丝用去离子水洗涤3次,冷冻干燥过夜后即获得聚羟基脂肪酸酯纳米纤维。将上述纳米纤维热压成膜即获得PHA电纺丝膜。
S2、聚羟基脂肪酸酯/聚吡咯(PHA/PPY)复合电纺丝膜的制备:称取1.30g三氯化铁加入100mL烧杯中,加入100mL去离子水搅拌均匀,随后称取0.23g吡咯溶于另外100mL 去离子水中,将上述两种溶液1:1混合均匀。室温条件下,将聚羟基脂肪酸酯电纺丝膜置入混合溶液中,超声震荡2h,取出后用去离子水洗涤样品3次,真空冷冻干燥即获得聚羟基脂肪酸酯/聚吡咯复合电纺丝膜。
实施例3
一种聚羟基脂肪酸酯/聚吡咯复合电纺丝膜的制备方法,包括如下步骤:
S1、聚羟基脂肪酸酯(PHA)纳米纤维电纺丝膜的制备:称取1.05g医用级PHA粉末溶于10mL二氯甲烷和二甲基甲酰胺的复合溶剂中(二氯甲烷和二甲基甲酰胺的体积比为 3:7),均匀搅拌配成浓度为100mg/mL的PHA溶液并加入1mL注射器中,注射器用针头喷嘴固定。在室温条件下设置针头与接收器之间距离为15cm,电压为15千伏,注射器推进速度为3.0毫升/小时,通过乙醇溶液收集电纺丝。随后,将获得的电纺丝用去离子水洗涤3次,冷冻干燥过夜后即获得聚羟基脂肪酸酯纳米纤维。将上述纳米纤维热压成膜即获得PHA电纺丝膜。
S2、聚羟基脂肪酸酯/聚吡咯(PHA/PPY)复合电纺丝膜的制备:称取1.40g三氯化铁加入100mL烧杯中,加入100mL去离子水搅拌均匀,随后称取0.25g吡咯溶于另外100mL 去离子水中,将上述两种溶液1:1混合均匀。室温条件下,将聚羟基脂肪酸酯电纺丝膜置入混合溶液中,超声震荡3h,取出后用去离子水洗涤样品3次,真空冷冻干燥即获得聚羟基脂肪酸酯/聚吡咯复合电纺丝膜。
为验证是否成功制备出了PHA/PPY复合电纺丝膜,对实施例1至实施例3的PHA电纺丝膜和PHA/PPY复合电纺丝膜的实物外观和SEM图进行了对比测试。通过实物外观和扫描电镜图对比发现,所制备的PHA/PPY复合电纺丝膜相比于PHA电纺丝膜外观形态发生了变化,颜色由白色变为黑色,外观形态变为更加光滑、平整;SEM微观图下可见光滑、有孔的纤维结构表面成功涂覆超薄膜状物质,纤维直径明显增加,孔结构被包覆,其结构贴近天然细胞外基质,能够模拟的细胞生长环境,有助于细胞增殖长入,以促进组织定向修复再生。如图1所示为实施例1PHA电纺丝膜实物外观图及扫描电镜图;图2所示为实施例1PHA/PPY 复合电纺丝膜实物外观图及扫描电镜图。
为进一步验证PHA/PPY复合电纺丝膜的生物相容性,本发明通过CCK-8细胞毒试验评价了电纺丝膜对细胞增殖的影响。将PHA电纺丝膜和PHA/PPY复合电纺丝膜裁剪至合适大小(圆形,面积约0.32平方厘米),环氧乙烷灭菌后置于96孔板孔底,细胞培养基预培养过夜。调整骨髓间充质干细胞密度至1×105/mL,每孔加入200μL细胞液,共培养过夜至细胞恢复正常贴壁状态;在不同时间点(第1、3、5天)分别加入20uL CCK-8试剂共孵育2h;随后将上清液移至新的96孔板中,通过酶标仪在450nm处测试溶液吸光度值,并通过计算得到细胞增殖活力百分比。如图3为实施例1PHA电纺丝膜和PHA/PPY复合电纺丝膜的细胞增殖活力柱状图,从图中可知PHA/PPY复合电纺丝膜第1、3、5天的细胞增殖活力均超过80%,明显高于PHA电纺丝膜,证明PHA/PPY复合电纺丝膜对于细胞增殖有良好的促进作用,并且PPY涂层改善了PHA电纺丝膜疏水的缺陷,能更好的促进细胞增殖分化。
进一步地,本发明还通过细胞免疫荧光染色观察上述细胞增殖状态,具体实验步骤如下:将PHA电纺丝膜和PHA/PPY复合电纺丝膜裁剪至合适大小,环氧乙烷灭菌后置于48孔板孔底,调整骨髓间充质干细胞密度至1×105/mL,每孔加入1mL细胞液,共培养3天;吸弃培养液,PBS清洗细胞3次;4%多聚甲醛溶液冰上固定15min,随后PBS清洗3次;用含0.5%Triton X-100的PBS溶液在室温下透化细胞10min,随后PBS清洗3次;每孔加入 5μL F-actin鬼笔环肽工作液,室温避光孵育30min进行染色,随后PBS清洗3次;最后每孔加入4-5滴即用型DAPI溶液,进行复染色30s后,吸去多余水分,荧光显微镜下观察。图4 为实施例1PHA电纺丝膜和PHA/PPY复合电纺丝膜的细胞免疫荧光染色图像,从图中可知 PHA/PPY复合电纺丝膜上细胞增殖数目明显多于PHA电纺丝膜和空白对照组,细胞骨架和细胞核结构清晰,证明PHA/PPY复合电纺丝膜对于细胞增殖、分化有良好的促进作用。
显然,本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明技术方案所作的举例,而并非是对本发明的具体实施方式的限定。凡在本发明权利要求书的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等,均应包含在本发明权利要求的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种聚羟基脂肪酸酯/聚吡咯复合电纺丝膜的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
S1、聚羟基脂肪酸酯纳米纤维电纺丝膜的制备:将聚羟基脂肪酸酯粉末溶于二氯甲烷和二甲基甲酰胺的复合溶剂中,均匀搅拌配成浓度为90~100mg/mL的聚羟基脂肪酸酯溶液,将其加入到注射器中,注射器用针头喷嘴固定,在室温条件下设置针头与接收器之间距离为14~16cm,电压为12~18千伏,注射器推进速度为2.8~3.2毫升/小时,通过乙醇溶液收集电纺丝,随后,将获得的电仿纺丝用去离子水洗涤,真空冷冻干燥过夜后即获得聚羟基脂肪酸酯纳米纤维,将上述纳米纤维热压成膜即获得聚羟基脂肪酸酯电纺丝膜;
S2、聚羟基脂肪酸酯/聚吡咯复合电纺丝膜的制备:将1~5g三氯化铁与50~100mL去离子水搅拌均匀,随后将0.1~0.5g吡咯与50~100mL去离子水混合均匀,然后将三氯化铁溶液、吡咯溶液两种溶液混合均匀得到混合溶液,室温条件下,将聚羟基脂肪酸酯电纺丝膜置入混合溶液中,超声震荡0.5~12h,取出后用去离子水洗涤样品3~5次,真空冷冻干燥即获得聚羟基脂肪酸酯/聚吡咯复合电纺丝膜。
2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤S1中聚羟基脂肪酸酯溶液的浓度为95~105mg/mL。
3.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤S1中二氯甲烷和二甲基甲酰胺的体积比为(2~4):(5~9)。
4.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤S1中针头与接收器之间距离为15cm。
5.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤S1中电压为15千伏。
6.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤S1中注射器推进速度为3毫升/小时。
7.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤S2中三氯化铁和吡咯的质量比为(13~14):(2~3)。
8.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤S2中超声震荡时间为0.5~6h。
9.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤S1中聚羟基脂肪酸酯粉末为医用级聚羟基脂肪酸酯粉末,纯度大于99.5%。
10.由权利要求1至9任一权利要求所述的制备方法制备得到的聚羟基脂肪酸酯/聚吡咯复合电纺丝膜。
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