CN110669678A - 一种灰黄霉素菌种固体培养基 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种灰黄霉素菌种固体培养基，它由下述重量份比例的原料配制而成：土豆淀粉100～150份、蔗糖20～30份、磷酸二氢钾2～4份、氯化钾3～4份、硝酸钠1～2份、硫酸镁0.4～0.5份、硫酸亚铁0.01～0.02份、琼脂15～25份。本发明培养基表面光滑、硬度适中，接种均匀；由本发明培养基培养的菌种菌落饱满，颜色白，形态圆，孢子量大，孢子同步性好，菌种发酵单位稳定；本发明培养基配制方便，简单易学，工作效率高。

Description

一种灰黄霉素菌种固体培养基
技术领域
本发明属于菌种培养基技术领域，尤其是一种灰黄霉素菌种固体培养基。
背景技术
灰黄霉素(griseofulvin)属芳香族衍生物类抗生素，是一种抗真菌抗生素。灰黄霉素普遍应用于临床治疗皮肤和角质层真菌感染；在农业植物保护方面也有着良好的应用前景。国内发酵生产灰黄霉素所使用的菌种均是我国自行筛选的野生型展青霉菌Penicillium patulum 4541菌株，经人工诱变而来的D～756菌种的后代N15～3～40。
目前，国内企业灰黄霉素工业生产菌种制备使用传统的蔗糖配方培养基和PDA固体培养基。蔗糖配方培养基由下述重量百分比的原料配制而成：蔗糖3％、磷酸二氢钾0.5％、氯化钾0.4％、硝酸钠0.2％、硫酸镁0.05％、硫酸亚铁0.001％、琼脂2.5％。PDA固体培养基由下述重量百分比的原料配制而成：马铃薯20％，葡萄糖2％，琼脂粉15～20％。培养基质量是灰黄霉素菌种制备工艺过程中的关键因素之一。传统的蔗糖配方培养基培养周期长，硬度不稳定；传统的PDA培养基配方中的组分马铃薯因品种、季节和产地不同等因素，导致品质有较大区别，也会影响灰黄霉素菌种稳定性。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种灰黄霉素菌种固体培养基，由它培养的菌种质量稳定、菌种培养周期短、菌种发酵单位高。
本发明的技术方案是这样实现的：一种灰黄霉素菌种固体培养基，它由下述重量份比例的原料配制而成：土豆淀粉100～150份、蔗糖20～30份、磷酸二氢钾2～4份、氯化钾3～4份、硝酸钠1～2份、硫酸镁0.4～0.5份、硫酸亚铁0.01～0.02份、琼脂15～25份。
进一步优化的技术方案，所述的灰黄霉素菌种固体培养基，它由下述重量份比例的原料配制而成：土豆淀粉120份、蔗糖20份、磷酸二氢钾4份、氯化钾3份、硝酸钠1份、硫酸镁0.4份、硫酸亚铁0.02份、琼脂20份。
本发明灰黄霉素菌种固体培养基的制备方法：按比例称取各成份，用去离子水充分溶解后，定容至目的体积，最后调pH至5～6，更优选的调pH至5.5，分装后，使用消毒釜在115～125℃温度下灭菌20～30分钟，待温度降至60℃左右时，于无菌室中倒平板或摆斜面。
本发明和现有技术相比的优点为：
不使用马铃薯为培养基原料，克服了马铃薯品种、季节和产地不稳定因素的影响；培养周期由7天缩短至5天；本发明培养基表面光滑、硬度适中，接种均匀；由本发明培养基培养的菌种菌落饱满，颜色白，形态圆，孢子量大，孢子同步性好，菌种发酵单位稳定；本发明培养基配制方便，简单易学，工作效率高。
附图说明
图1本发明菌种和两种传统菌种成熟斜面菌苔菌落外观；
图1中：A为本发明培养基菌种成熟斜面菌苔菌落外观，B为蔗糖配方培养基菌种成熟斜面菌苔菌落外观，C为PDA固体培养基菌种成熟斜面菌苔菌落外观。
图2本发明菌种和两种传统菌种成熟斜面镜检情况；
图2中：D本发明培养基斜面孢子，E为蔗糖配方培养基斜面孢子，F为PDA固体培养基斜面孢子。
具体实施方式
为使本发明的技术方案更加清楚，下面通过具体实施例和对比试验对本发明作进一步地详细描述。
实施例1：一种灰黄霉素菌种固体培养基，它由下述重量份比例的原料配制而成：土豆淀粉120份、蔗糖20份、磷酸二氢钾4份、氯化钾3份、硝酸钠1份、硫酸镁0.4份、硫酸亚铁0.02份、琼脂20份，调pH至5.5。
实施例2：一种灰黄霉素菌种固体培养基，它由下述重量份比例的原料配制而成：土豆淀粉125份、蔗糖25份、磷酸二氢钾3份、氯化钾4份、硝酸钠2份、硫酸镁0.5份、硫酸亚铁0.01份、琼脂18份，调pH至5.3。
实施例3：一种灰黄霉素菌种固体培养基，它由下述重量份比例的原料配制而成：土豆淀粉140份、蔗糖30份、磷酸二氢钾3.5份、氯化钾3.5份、硝酸钠1.5份、硫酸镁0.45份、硫酸亚铁0.02份、琼脂22份，调pH至5.7。
对比试验：
1、制备本发明培养基：
按着实施例1的配方比例制备本发明的一种灰黄霉素菌种固体培养基：
1)按着实施例1的配方比例分别称取土豆淀粉120g、蔗糖20g、磷酸二氢钾4g、氯化钾3g、硝酸钠1g、硫酸镁0.4g、硫酸亚铁0.02g，加入到2000ml的烧杯中；
2)在烧杯中加入去离子水，将烧杯中的各组分充分溶解后，定容至1000ml；
3)在烧杯中滴加10％NaOH溶液，调pH至5.5，制得培养基营养液；
4)倒平板方法：称取4g琼脂于500ml锥形瓶中，再量取200ml培养基营养液分装于每个锥形瓶中，塞上棉塞，并用牛皮纸包扎好；
茄瓶斜面方法：每支茄瓶加入1g琼脂，再量取50ml培养基营养液分装于每个茄瓶中，塞上棉塞，并用牛皮纸包扎好；
5)使用消毒釜121℃灭菌25分钟，待温度降至60℃左右时，于无菌室中倒平板或摆斜面。
2、制备蔗糖配方培养基：
1)按传统配方比例称取分别蔗糖30g、磷酸二氢钾5g、氯化钾4g、硝酸钠2g、硫酸镁0.5g、硫酸亚铁0.01g，加入到2000ml的烧杯中；
2)在烧杯中加入去离子水，将烧杯中的各组分充分溶解后，定容至1000ml，制得培养基营养液；
3)倒平板方法：称取4g琼脂于500ml锥形瓶中，再量取200ml培养基营养液分装于每个锥形瓶中，塞上棉塞，并用牛皮纸包扎好；
茄瓶斜面方法：每支茄瓶加入1g琼脂，再量取50ml培养基营养液分装于每个茄瓶中，塞上棉塞，并用牛皮纸包扎好；
4)使用消毒釜121℃灭菌25分钟，待温度降至60℃左右时，于无菌室中倒平板或摆斜面。
3、制备PDA固体培养基：
1)取新鲜马铃薯，去皮，用刀切成1cm见方的小块，称量200g放入锅中，加水1000ml，加热沸腾后转小火，维持30min后，用2层纱布趁热在2000ml烧杯上过滤，弃滤渣，取滤液；
2)称取20g葡萄糖，加入到滤液中，充分溶解后，定容至1000ml，制得培养基营养液；
3)倒平板方法：称取4g琼脂于500ml锥形瓶中，再量取200ml培养基营养液分装于每个锥形瓶中，塞上棉塞，并用牛皮纸包扎好；
茄瓶斜面方法：每支茄瓶加入1g琼脂，再量取50ml培养基营养液分装于每个茄瓶中，塞上棉塞，并用牛皮纸包扎好；
4)使用消毒釜121℃灭菌25分钟，待温度降至60℃左右时，于无菌室中倒平板或摆斜面。
4、孢子计数和发酵验证
分别在本发明培养基、蔗糖配方培养基和PDA固体培养基的茄瓶斜面上接种灰黄霉素菌种，并保证每支斜面接种量一致，接种后，28±0.5℃培养，培养成熟后，三种培养基的孢子计数和发酵单位的对比验证试验结果见表1。
表1孢子计数和发酵单位验证对比数据
培养基 周期 孢子计数(个) 发酵单位μ/ml
本发明培养基 5天 3.27×10<sup>8</sup> 21712
蔗糖配方培养基 7天 2.4×10<sup>8</sup> 20873
PDA固体培养基 5天 1.9×10<sup>8</sup> 20563
从试验结果来看，本发明培养基培养的斜面菌种孢子量和发酵单位都有一定优势，且培养周期短，兼顾两种传统培养基优点。
5、孢子镜检观察
分别在本发明培养基、蔗糖配方培养基和PDA固体培养基的茄瓶斜面上接种灰黄霉素菌种，并保证每支斜面接种量一致，接种后，28±0.5℃培养，培养成熟后，观察三种培养基的斜面菌苔菌落外观，并镜检观察孢子形态及生长同步性。成熟斜面菌苔菌落外观见附图1，镜检情况见附图2。
从三种成熟斜面菌苔菌落外观来看，本发明培养基斜面菌苔较白，单菌落饱满、大小均一。从孢子镜检情况来看，三种斜面孢子形态都比较均一，同步性好。因此，综合来看，本发明培养基适合灰黄霉素菌种，可以替代传统培养基。

Claims (4)

1.一种灰黄霉素菌种固体培养基，它由下述重量份比例的原料配制而成：土豆淀粉100～150份、蔗糖20～30份、磷酸二氢钾2～4份、氯化钾3～4份、硝酸钠1～2份、硫酸镁0.4～0.5份、硫酸亚铁0.01～0.02份、琼脂15～25份。
2.根据权利要求1所述的灰黄霉素菌种固体培养基，其特征在于：它由下述重量份比例的原料配制而成：土豆淀粉120份、蔗糖20份、磷酸二氢钾4份、氯化钾3份、硝酸钠1份、硫酸镁0.4份、硫酸亚铁0.02份、琼脂20份。
3.根据权利要求1或2所述的灰黄霉素菌种固体培养基，其特征在于：它采用如下方法制备：按比例称取各成份，用去离子水充分溶解后，定容至目的体积，最后调pH至5～6，分装后，使用消毒釜在115～125℃温度下灭菌20～30分钟，待温度降至60℃左右时，于无菌室中倒平板或摆斜面。
4.根据权利要求3所述的灰黄霉素菌种固体培养基，其特征在于：调pH至5.5。
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