CN110663642A - 一种利用粪便移植改变病鸡肠道菌落的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种利用粪便移植改变病鸡肠道菌落的方法,涉及动物医学技术领域。本发明包括以下步骤:粪便的采集与供体的筛选:粪便采集前,向供体鸡喂食1‑2周的调理饲料,采集时供体鸡应为1‑2个月内无病、健康、高生产性且与受体同生长周期、同性别成鸡的新鲜粪便,粪便采集后封口密封保存备用,新鲜粪便经检测后应无鸡类以下常用病原:传染性支气管炎、大肠杆菌病、鸡白痢、鸡霍乱等。本发明在传统粪便菌群移植的基础上,能够通过提前对病鸡胃肠进行清理、降低病鸡胃肠蠕动速度、降低供体与受体间各项差异性等三个方面上显著改善或重建病鸡肠道菌落,继而有利于病鸡的快速康复。
Description
技术领域
本发明属于动物医学技术领域,特别是涉及一种利用粪便移植改变病鸡肠道菌落的方法。
背景技术
粪菌移植是指将健康个体粪便中的功能菌群移植至患者的胃肠道内,重建具有正常功能的肠道菌群,治疗胃肠道内外疾病的方法。首次应用粪菌移植治疗疾病可追溯至1700年前的东晋时代,葛洪在我过第一本急症医学书籍《肘后急备方》中记载:治疗食物中毒、腹泻、发热濒临死亡的患者,“饮粪汁一升,即活”,目前科学研究表明,物种差异、生长发育、饮食习惯等因素都会影响动物体内肠道菌群的结构、数目,并且健康个体和患病个体之间的肠道菌群也不一样。于是,采用健康个体的肠道菌群重建病患个体的肠道菌群正逐渐成为现代医学、生物学的研究热点,如申请号为CN201510442160.6的专利文件公开了一种利用粪菌移植提高雏鸡生长性能和防治鸡白痢的方法,又如申请号为CN201710439896.7的专利文件公开了一种粪便菌群移植技术及其应用。
近年来,粪便菌群液移植越来越多的被用于佐证肠道与表型特征的机理研究;无菌小鼠与正常小鼠相比,表现出异常的应激反应和过多的促肾上腺皮质激素和皮质酮,而将正常菌群移植到无菌动物肠道内使得无菌动物应激恢复正常;无菌条件下饲养的小鼠,移植菌群液后表现出与其供体的宿主类似的焦虑行为和特定病原菌;移植腹泻抵抗力强的仔猪的粪便菌群液,有效的降低了抵抗力低的仔猪的腹泻发生率;肉鸡上,移植高生产性能个体的菌群液,使得低生产性能的个体的生产性能得到显著的提高;粪便菌群液移植改变行为的研究在小鼠上也有报道,肠易激综合征患者的粪便菌群液移植给无菌小鼠,使得小鼠的肠道菌落发生变化和焦虑行为增加,然而,如何利用粪便移植以显著改变或重建病鸡肠道菌落还有待研究。
发明内容
本发明的目的在于提供一种利用粪便移植改变病鸡肠道菌落的方法,通过多个方法及步骤的设计,解决了现有粪便移植技术不能显著改变或重建病鸡肠道菌落的问题。
为解决上述技术问题,本发明是通过以下技术方案实现的:
本发明为一种利用粪便移植改变病鸡肠道菌落的方法,包括以下步骤:
SS001、粪便的采集与筛选:粪便采集前,向供体鸡喂食1-2周的调理饲料,采集时供体鸡应为1-2个月内无病、健康、高生产性且与受体同生长周期、同性别成鸡的新鲜粪便,粪便采集后封口密封保存备用,新鲜粪便经检测后应无鸡类以下常用病原:传染性支气管炎、大肠杆菌病、鸡白痢、鸡霍乱等;
SS002、粪菌悬液的制备、取200-300g、3h内保存周期的供体粪便样本置于搅拌器中,之后向搅拌器中加入500ml的等渗氯化钠溶液,供体粪便与等渗氯化钠溶液搅拌均匀后,逐级过80-100目不锈钢标准筛、250-300目标准筛去除其中的大颗粒物质,过滤后,收集滤液,将初步过滤后的滤液置于匀浆器中进行进一步匀质处理,匀质处理后,逐级过直径为2.0mm、1mm、0.5mm、0.25mm的标准滤网并二次收集滤液以去除粪便中的小颗粒物质,将二次收集后的滤液置入离心机中,离心机以5000-7000转每分钟的速率搅拌15-25min,离心后去除上清液,将离心的沉淀物再悬浮于等渗氯化钠溶液中,得几乎无色无味的粪菌液,向粪菌液中加入无菌甘油后置于-80℃条件下保存,保存周期应限制在1-8周内;
SS003、病鸡受体的准备:治疗前,受体鸡应停用抗生素2-3d,同时治疗前一晚,对受体鸡进行灌肠,以使肠道清洁;
SS004、粪便菌圈移植:粪便菌圈移植前,使受体鸡服用适量抑制或减弱胃肠道蠕动的药物,药物服用2-3h后将步骤SS002中制得的6h内的新鲜粪菌液或解冻后的冻存粪菌悬液以口罐服、灌肠或调理饲料混合喂养的方式供入病鸡受体肠道中,粪便菌圈移植应连续进行3-7d。
进一步地,所述SS001步骤和SS004步骤中调理饲料的成分为玉米61.22%、豆粕23.00%、麦麸10.00%、鱼粉2.00%、赖氨酸0.10%、蛋氨酸0.15%、磷酸氢钙1.33%、石粉1.40%、食盐0.30%、复合维生素0.20%和微量元素0.30%。
进一步地,所述SS004步骤中抑制或减弱胃肠道蠕动的药物为复方地芬诺酯;所述复方地芬诺酯的服入量为5mg/kg。
进一步地,所述SS004步骤中调理饲料与新鲜粪菌液或解冻后的冻存粪菌的配料比为4-6ml:200g。
进一步地,所述SS004步骤中粪菌悬液的口腔灌服或罐肠剂量为3-9ml每日。
进一步地,所述SS002步骤中粪菌悬液菌落为供体鸡肠道内的整体生态菌落。
本发明具有以下有益效果:
本发明通过供体的筛选、病鸡受体的准备和减弱胃肠道蠕动药物的喂入,在传统粪便菌圈移植的基础上,能够通过提前对病鸡胃肠进行清理、降低病鸡胃肠蠕动速度、降低供体与受体间各项差异性等三个方面上显著改善或重建病鸡肠道菌落,继而有利于病鸡的快速康复。
当然,实施本发明的任一产品并不一定需要同时达到以上所述的所有优点。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案,下面将对实施例描述所需要使用的附图作简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为一种利用粪便移植改变病鸡肠道菌落的方法的流程示意图;
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例,都属于本发明保护的范围。
请参阅图1,本发明为一种利用粪便移植改变病鸡肠道菌落的方法,包括SS001、粪便的采集与筛选:粪便采集前,向供体鸡喂食2周的调理饲料,采集时供体鸡应为1-2个月内无病、健康、高生产性且与受体同生长周期、同性别成鸡的新鲜粪便,粪便采集后封口密封保存备用,新鲜粪便经检测后应无鸡类以下常用病原:传染性支气管炎、大肠杆菌病、鸡白痢、鸡霍乱等,通过调理饲料的喂食,以保证供体鸡粪便的可用性;
SS002、粪菌悬液的制备、取250g、3h内保存周期的供体粪便样本置于搅拌器中,之后向搅拌器中加入500ml的等渗氯化钠溶液,供体粪便与等渗氯化钠溶液搅拌均匀后,逐级过80-100目不锈钢标准筛、250-300目标准筛去除其中的大颗粒物质,过滤后,收集滤液,将初步过滤后的滤液置于匀浆器中进行进一步匀质处理,匀质处理后,逐级过直径为2.0mm、1mm、0.5mm、0.25mm的标准滤网并二次收集滤液以去除粪便中的小颗粒物质,将二次收集后的滤液置入离心机中,离心机以7000转每分钟的速率搅拌25min,离心后去除上清液,将离心的沉淀物再悬浮于等渗氯化钠溶液中,得几乎无色无味的粪菌液,向粪菌液中加入无菌甘油后置于-80℃条件下保存,保存周期应限制在8周内;
SS003、病鸡受体的准备:治疗前,受体鸡应停用抗生素3d,同时治疗前一晚,对受体鸡进行灌肠,以使肠道清洁;
SS004、粪便菌圈移植:粪便菌圈移植前,使受体鸡服用适量抑制或减弱胃肠道蠕动的药物,药物服用3h后,将步骤SS002中制得的6h内的新鲜粪菌液或解冻后的冻存粪菌悬液以口罐服、灌肠或调理饲料混合喂养的方式供入病鸡受体肠道中,粪便菌圈移植应连续进行7d。
其中,SS001步骤和SS004步骤中调理饲料的成分为玉米61.22%、豆粕23.00%、麦麸10.00%、鱼粉2.00%、赖氨酸0.10%、蛋氨酸0.15%、磷酸氢钙1.33%、石粉1.40%、食盐0.30%、复合维生素0.20%和微量元素0.30%。
其中,SS004步骤中抑制或减弱胃肠道蠕动的药物为复方地芬诺酯;复方地芬诺酯的服入量为5mg/kg。
其中,SS004步骤中调理饲料与新鲜粪菌液或解冻后的冻存粪菌的配料比为6ml:200g。
其中,SS004步骤中粪菌悬液的口腔灌服或罐肠剂量为7ml每日。
其中,SS002步骤中粪菌悬液菌落为供体鸡肠道内的整体生态菌落。
在本说明书的描述中,参考术语“一个实施例”、“示例”、“具体示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中,对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且,描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
以上公开的本发明优选实施例只是用于帮助阐述本发明。优选实施例并没有详尽叙述所有的细节,也不限制该发明仅为所述的具体实施方式。显然,根据本说明书的内容,可作很多的修改和变化。本说明书选取并具体描述这些实施例,是为了更好地解释本发明的原理和实际应用,从而使所属技术领域技术人员能很好地理解和利用本发明。本发明仅受权利要求书及其全部范围和等效物的限制。
Claims (6)
1.一种利用粪便移植改变病鸡肠道菌落的方法,其特征在于:包括以下步骤:
SS001、粪便的采集与供体的筛选:粪便采集前,向供体鸡喂食1-2周的调理饲料,采集时供体鸡应为1-2个月内无病、健康、高生产性且与受体同生长周期、同性别成鸡的新鲜粪便,粪便采集后封口密封保存备用,新鲜粪便经检测后应无鸡类以下常用病原:传染性支气管炎、大肠杆菌病、鸡白痢、鸡霍乱等;
SS002、粪菌悬液的制备、取200-300g、3h内保存周期的供体粪便样本置于搅拌器中,之后向搅拌器中加入500ml的等渗氯化钠溶液,供体粪便与等渗氯化钠溶液搅拌均匀后,逐级过80-100目不锈钢标准筛、250-300目标准筛去除其中的大颗粒物质,过滤后,收集滤液,将初步过滤后的滤液置于匀浆器中进行进一步匀质处理,匀质处理后,逐级过直径为2.0mm、1mm、0.5mm、0.25mm的标准滤网并二次收集滤液以去除粪便中的小颗粒物质,将二次收集后的滤液置入离心机中,离心机以5000-7000转每分钟的速率搅拌15-25min,离心后去除上清液,将离心的沉淀物再悬浮于等渗氯化钠溶液中,得几乎无色无味的粪菌液,向粪菌液中加入无菌甘油后置于-80℃条件下保存,保存周期应限制在1-8周内;
SS003、病鸡受体的准备:治疗前,受体鸡应停用抗生素2-3d,同时治疗前一晚,对受体鸡进行灌肠,以使肠道清洁;
SS004、粪便菌圈移植:粪便菌圈移植前,使受体鸡服用适量抑制或减弱胃肠道蠕动的药物,药物服用2-3h后将步骤SS002中制得的6h内的新鲜粪菌液或解冻后的冻存粪菌悬液以口罐服、灌肠或调理饲料混合喂养的方式供入病鸡受体肠道中,粪便菌圈移植应连续进行3-7d。
2.根据权利要求1所述的一种利用粪便移植改变病鸡肠道菌落的方法,其特征在于,所述SS001步骤和SS004步骤中调理饲料的成分为玉米61.22%、豆粕23.00%、麦麸10.00%、鱼粉2.00%、赖氨酸0.10%、蛋氨酸0.15%、磷酸氢钙1.33%、石粉1.40%、食盐0.30%、复合维生素0.20%和微量元素0.30%。
3.根据权利要求1所述的一种利用粪便移植改变病鸡肠道菌落的方法,其特征在于,所述SS004步骤中抑制或减弱胃肠道蠕动的药物为复方地芬诺酯;所述复方地芬诺酯的服入量为5mg/kg。
4.根据权利要求1所述的一种利用粪便移植改变病鸡肠道菌落的方法,其特征在于,所述SS004步骤中调理饲料与新鲜粪菌液或解冻后的冻存粪菌的配料比为4-6ml:200g。
5.根据权利要求1所述的一种利用粪便移植改变病鸡肠道菌落的方法,其特征在于,所述SS004步骤中粪菌悬液的口腔灌服或罐肠剂量为3-9ml每日。
6.根据权利要求1所述的一种利用粪便移植改变病鸡肠道菌落的方法,其特征在于,所述SS002步骤中粪菌悬液菌落为供体鸡肠道内的整体生态菌落。
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