CN110652780A - 一种用于提取细胞内容物的分离设备及分离方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种用于提取细胞内容物的分离设备及分离方法。具体地，本发明提供了一种分离设备，所述设备包括：第一过滤装置和第二过滤装置；其中，所述第一过滤装置包括一个或多个第一陶瓷膜组件、第一进料泵、料液储液罐，且所述第一陶瓷膜组件内设有1000~3000nm孔径的陶瓷膜；所述第二过滤装置包括一个或多个第二陶瓷膜组件、第二进料泵、清液储液罐，且所述第二陶瓷膜过滤组件内设有10~300nm孔径的陶瓷膜；以及，第一过滤装置和清液储液罐，通过清液管直接连接或者通过清液管和清液暂存罐连接。通过本发明设备及方法得到的细胞内容物中有效物质的活性高，且收率高。

Description

一种用于提取细胞内容物的分离设备及分离方法

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及为用于提取细胞内容物的分离设备及分离方法。

背景技术

细胞内容物成分非常复杂，包含了细胞内的一些细胞器，大分子颗粒，细胞碎片等，这些物质的大小与形态复杂多变，如何在低温状态下既保证其生物活性又能快速将其中的有效成分（例如高活性的细胞内容物）快速分离是一个难题。采用一般的过滤方法，膜表面容易堆积细胞碎片等大颗粒大分子的细胞内容物，易造成膜表面污染，并影响过滤的持续性。因而，目前低温状态下分离细胞内容物除了使用低温高速离心外并无更加有效的办法，但受限于低温高速离心设备的限制，仅可用于实验室小量制备。

目前常规使用的低温高速离心方法处理量较小，处理时间较长，不适合工业级规模提取细胞内容物。现在市场上能够达到低温高速离心的离心机批次处理量仅为0.3L左右，而且每个批次的离心时间在0.5~1h，因此处理大批次细胞内容物（例如，10kg细胞内容物）中采用离心方式提取细胞内容物中有效成分大概需要36h，并且离心后还需将上清液与固体残渣分离，导致提取时间过长使得细胞内容物自身成分降解，造成活性下降。因此，大量提取细胞内容物无法采用低温高速离心的方法。

综上所述，本领域迫切需要开发一种新型工业级提取细胞内容物的分离设备以及分离方法，通过所述设备及方法能够快速、大批量、短时间内分离得到高活性的细胞内容物。

发明内容

本发明的目的就是提供一种新型工业级提取细胞内容物的分离设备以及分离方法，通过所述设备及方法能够快速、大批量、短时间内分离得到高活性的细胞内容物。

在本发明的第一方面，提供了一种用于提取细胞内容物的分离设备，所述分离设备包括：第一过滤装置和第二过滤装置；

其中，所述第一过滤装置包括一个或多个第一陶瓷膜组件（1a）、第一进料泵（6a）、料液储液罐（11a）及使各个第一陶瓷膜组件、第一进料泵和料液储液罐流体连通的第一配套管路，且所述第一陶瓷膜组件内设有1000~3000nm孔径的陶瓷膜；

所述第二过滤装置包括一个或多个第二陶瓷膜组件（1b）、第二进料泵（6b）、清液储液罐（11b）及使各个第二陶瓷膜组件、第二进料泵和清液储液罐流体连通的第二配套管路；且所述第二陶瓷膜过滤组件内设有10~300nm孔径的陶瓷膜；

以及，第一过滤装置中的一个或多个第一陶瓷膜组件和清液储液罐，通过清液管（8a）直接流体连通，或者通过清液管和清液暂存罐（13b）流体连通。

在另一优选例中，所述管路上设有阀门组件。

在另一优选例中，所述第一陶瓷膜组件包括第一膜管和所述1000~3000nm孔径的陶瓷膜，且所述的1000~3000nm孔径的陶瓷膜位于所述第一膜管内。

在另一优选例中，所述第二陶瓷膜组件包括第二膜管和所述10~300nm孔径的陶瓷膜，且所述的10~300nm孔径的陶瓷膜位于所述第二膜管内。

在另一优选例中，料液储液罐、清夜暂存罐和/或清液储液罐设有附属降温装置，所述附属降温装置用于使待分离的料液≤4℃。

在另一优选例中，所述待分离的料液包括未经过滤的料液或经过第一过滤装置过滤后的清液。

在另一优选例中，所述第一配套管路包括：连接第一进料泵及一个或多个第一陶瓷膜组件的第一进料管（5a）、连接料液储液罐及第一进料泵的第一吸液管（7a）以及连接料液储液罐及一个或多个第一陶瓷膜组件的第一回流管（9a）；和/或

所述第二配套管路包括：连接第二进料泵及一个或多个第二陶瓷膜组件的第二进料管（5b）、连接清清液储液罐及第二进料泵的第二吸液管（7b）以及连接清液储液罐及一个或多个第二陶瓷膜组件的第二回流管（9b）。

在另一优选例中，所述第一回流管上设有第一回流管阀门（14a），和/或，所述第二回流管上设有第二回流管阀门（14b）。

在另一优选例中，所述第一过滤装置还包括第一压力表（4a），及所述第二过滤装置还包括第二压力表（4b）。

在另一优选例中，所述第一过滤装置中，所述第一压力表（4a）设于所述第一进料管。

在另一优选例中，所述第二过滤装置中，所述第二压力表（4b）设于所述第二进料管。

在另一优选例中，所述第二过滤装置还包括透过液储液罐（12b）；其中，所述透过液储液罐通过透过液管（8b）连接至一个或多个第二陶瓷膜组件。

在另一优选例中，所述透过液储液罐中设有所述附属降温装置，所述附属降温装置用于使待分离的料液≤4℃。

在另一优选例中，所述清液暂存罐、所述料液储液罐、和/或所述清液储液罐的底部为锥面结构。

在另一优选例中，所述透过液储液罐的底部为锥面结构。

在另一优选例中，所述清液管上设有清液出口阀。

在另一优选例中，所述第一进料管上设有第一陶瓷膜组件进口阀。

在另一优选例中，所述透过液管上设有透过液出口阀。

在另一优选例中，所述第二进料管上设有第二陶瓷膜组件进口阀。

在另一优选例中，所述的第一进料泵，和/或第二进料泵为气动隔膜泵。

在另一优选例中，所述附属降温装置包括降温夹套，和/或降温盘管。

在另一优选例中，所述降温夹套和/或降温盘管与冷水机相连。

在另一优选例中，所述料液储液罐内设有料液储液罐降温盘管（13a）且所述料液储液罐外部设有降温夹套；

所述清液暂存罐内部设有清液暂存罐降温盘管（13b）且所述清液暂存罐外部设有降温夹套；和/或,

所述清液储液罐内设有清液储液罐降温盘管（13c）且所述清液储液罐外设有降温夹套。

在另一优选例中，所述透过液储液罐内部设有透过液储液罐降温盘管（13d）且所述透过液储液罐外部设有降温夹套。

在另一优选例中，所述第一配套管路的各管之间，以及所述第一配套管路与第一陶瓷膜组件、第一进料泵、料液储液罐及清液暂存罐通过卡盘快装接头（2）连接。

在另一优选例中，所述第二配套管路的各管之间，以及所述第二配套管路与第二陶瓷膜组件、第二进料泵、清液储液罐及透过液储液罐通过卡盘快装接头连接。

本发明的第二方面提供了一种提取细胞内容物的方法，包括步骤：

（1）提供第一方面所述的分离设备；

（2）提供含有细胞内容物的料液；

（3）开启所述附属降温装置，使所述料液保持在≤4℃；

（4）第一级过滤步骤：通过第一进料泵（6a）将所述料液压入一个或多个第一陶瓷膜组件（1a），过滤，收集清液（所述清液即为去除了细胞碎片等大颗粒大分子的细胞内容物）；

（5）第二级过滤步骤：使步骤（4）收集的流入清液储液罐（11b），并通过第二进料泵（6b）将所述清液压入一个或多个第二陶瓷膜组件（1b），过滤，滤去通过所述第二陶瓷膜组件中的陶瓷膜的透过液，收集余下的浓缩液，所述浓缩液即所需的高活性细胞内容物的浓缩液。

在另一优选例中，所述细胞内容物通过破碎经发酵培养微生物细胞得到。

在另一优选例中，所述含有细胞内容物的料液由所述细胞内容物与缓冲液混合得到。

在另一优选例中，细胞内容物与缓冲液的用量比（w/v）为1:（0.1~100）；优选地，为1:（1~20）；更优选地为，1:（5~15）；最优选地为，1:（8~12）。

在另一优选例中，步骤（2）还包括步骤所述细胞内容物料液预先置于所述料液储液罐（11a）中。

在另一优选例中，步骤（3）中，所述细胞内容物料液在料液储液罐中降温至≤4℃。

在另一优选例中，所述第一级过滤步骤包括：

（4.1）启动所述第一进料泵，使所述料液在料液储液罐、第一进料泵及一个或多个第一陶瓷膜组件之间循环流动；

（4.2）调节第一回流管阀门（14a），使第一陶瓷膜组件中膜前膜后的压力差为0.1~0.5MPa（优选地，压力差为0.1~0.3 MPa；更优选地，膜前压力为0.3~0.4 MPa，膜后压力为0.1~0.2MPa）；

（4.3）收集过滤所得清液，收集完毕关闭第一进料泵。

在另一优选例中，所述清液通过清液管流入清液储液罐，或通过清液管流经清液暂存罐（12a）再流入清液储液罐。

在另一优选例中，通过清液管流经清液暂存罐（12a）再流入清液储液罐是指清液流至清液暂存罐并暂存于所述清液暂存罐，之后开启位于清液暂存罐底部的阀门及位于清液储液罐底部的阀门，清液可以从底部管道（15）流至清液储液罐。

在另一优选例中，所述第二级过滤步骤包括：

（5.1）启动所述第二进料泵，使所述清液在清液储液罐、第二进料泵及一个或多个第二陶瓷膜组件之间循环流动；

（5.2）调节第二回流管阀门，使第二陶瓷膜组件中膜前膜后的压力差为0.1~0.5 MPa（优选地，压力差为0.1~0.3 MPa；更优选地，膜前压力为0.3~0.4 MPa，膜后压力为0.1~0.2MPa）；

（5.3）收集清液储液罐中的浓缩液。

在另一优选例中，所述的方法单次处理细胞内容物料液的处理量为100 ~150L。

在另一优选例中，所述的方法单次处理量为10~15kg细胞内容物。

在另一优选例中，所述方法的收率为每Kg细胞1~3L所述浓缩液。

应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。

附图说明

图1是本发明分离设备的一个结构示意图。

图2为卡盘快装接头的结构示意图。

图3为第一过滤装置中的一个或多个第一陶瓷膜组件和清液储液罐直接通过清液管连通的结构示意图。

图4为第一过滤装置中的一个或多个第一陶瓷膜组件和清液储液罐通过清液管和清液暂存罐连通的结构示意图。

图中各标示如下：

1a为第一陶瓷膜组件、1b为第二陶瓷膜组件、2为卡盘快装接头、4a为第一压力表、4b为第二压力表、5a为第一进料管、5b为第二进料管、6a为第一进料泵、6b为第二进料泵、7a第一吸液管、7b为第二吸液管、8a为清液管、8b为透过液管、9a为第一回流管、9b为第二回流管、11a为料液储液罐、11b为清液储液罐、12a为清液暂存罐、12b为透过液储液罐、13a为料液储液罐冷却盘管、13b为清液暂存罐冷却盘管、13c为清液储液罐冷却盘管、13d为透过液储液罐冷却盘管、14a为第一回流管阀门、14b为第二回流管阀门、15为底部管道。

具体实施方式

发明人经过长期而深入的努力，通过在分离装置中设置2种不同孔径的陶瓷膜并配以附属降温装置，通过错流过滤方式，成功的从具有复杂成分的细胞内容物中提取了所需的高活性的细胞内容物，并基于此完成了本发明。

分离设备

如图1所示，一种新型工业级提取细胞内容物分离设备，包括陶瓷膜组件1a及1b、气动隔膜泵6a及6b(例如，使用孔径为50mm的气动隔膜泵)、各个储液罐（例如，料液储液罐11a、清液储液罐11b、清液暂存罐12a及透过液储液罐12b）及附属降温装置（包括降温盘管、降温夹套（附图中未示出）及冷水机（附图中未示出））。各个储液罐的外壁均有降温夹套，内部有降温盘管13a、13b、13c及13d，降温夹套和降温盘管通过软管与冷水机相连，使物料在分离过程中保持低温。

在另一优选例中，各个储液罐的底部为锥面结构

在另一优选例中，各个储液罐的底部中心设有出液口。

本发明的分离设备采用大小孔径陶瓷膜结合的方式实现工业级提取细胞内容物。细胞破碎后的混合液中含有不同大小的细胞碎片、颗粒、及大分子蛋白、小分子蛋白、色素、盐等各种复杂物质；首先，利用大孔径（如1000~3000nm）的陶瓷膜过滤去除细胞碎片及大颗粒、大分子物质；其次，利用小孔径（如10~300nm）的陶瓷膜过滤除去盐、小分子蛋白、小分子色素等物质，截留得到的细胞内容物溶液（可通过大孔径陶瓷膜但无法通过小孔径陶瓷膜）就是所需分离得到的高活性细胞内容物。这一过程特别适合控制截留的提取物的分子量范围，采用两组陶瓷膜，物料可进一步浓缩（约浓缩到4-6倍）。

在另一优选例中，所述分离设备采用气动隔膜泵作为动力源。

在另一优选例中，管道连接均采用卡盘快装接头（参见图2）。

在另一优选例中，各个储液罐均采用降温夹套和内盘管。其中，内盘管的降温效果很好。

分离方法

将附属降温装置中的降温盘管及降温夹套与冷水机连接，开启冷水机对***进行预冷。细胞内容物经过气动隔膜泵由料液储液罐11a进入具有大孔径（如1000~3000nm）陶瓷膜的第一陶瓷膜组件1a，清液收集至清液储液罐11b，然后清液经过小孔径（如10~300nm）陶瓷膜，收集浓缩液。

如图1所示，进行分离前，首先连接好料液储液罐11a和清液储液罐11b降温夹套和降温盘管13a及13c与冷水机相连管道，开启冷水机，对***进行预冷。

打开大孔径陶瓷膜组件进出口阀门和清液出口阀门，关闭小孔径陶瓷膜进出口管道和清液出口。打开气动隔膜泵，料液（细胞内容物）进入大孔径陶瓷膜开始过滤分离，清液收集至清液储液罐。过滤完毕后停止气动隔膜泵，管道内残留料液回流至料液储液罐，经出料口排出。

然后关闭大孔径陶瓷膜进出口阀门和清液出口阀门，开启小孔径陶瓷膜进出口阀门和清液出口，开启气动隔膜泵6b，清液（去除了细胞碎片等大颗粒、大分子后的细胞内容物料液）经清液储液罐11b进入小孔径陶瓷膜开始过滤分离，透过液流向透过液储液罐12b，收集留在清液储液罐11b内的浓缩液，即为所需的高活性细胞内容物的浓缩液。

本发明的主要优点包括：

（1）本发明的设备及方法能够快速、大批量、短时间内提取高活性细胞内容物；通过不同孔径陶瓷膜组件的结合，可以将高活性细胞内容物成分从成分复杂的细胞破碎产物中有效的分离出来。

（2）本发明的设备膜表面不易积聚细胞内容物大分子颗粒、细胞碎片等，膜表面不易产生污染，增加了过滤的持续性。

（3）本发明结构简单、使用方便，采用气动隔膜泵相较于传统的离心泵运行过程中产热量很低，不需要接电，通过在储液罐和清液罐内设置夹套和内盘管降温***，能够使物料温度保持在4℃或以下；因此本发明设备适合于对热敏感或需要冷却的物料，而且对物料不产生剪切力，利于保证生物活性。

（4）清液储液罐、清液暂存罐、透过液储液罐和料液储液罐的底部为锥面结构，料液不易残留，清洗方便。通过简化设备结构，保证了运行体积达到最小。

（5）本发明设备中残留料液可以自动回流至储液罐，不会干扰下一步工序，

（6）本发明设备的进出口出通过特殊的卡盘快装接头（参见附图2）进行连接，十分易于组装、拆卸，便于检修。

因此，本发明装置十分适合作为工业级提取细胞内容物的分离设备使用。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件。除非另外说明，否则百分比和份数是重量百分比和重量份数。

实施例1

将12kg经过发酵培养收集后的微生物细胞（如酵母细胞）进行破碎处理，然后与缓冲液以1:10（W/V）的比例混合均匀，得到120L左右含有细胞内容物的料液。

料液在储液罐内经过料液储液罐11a内降温盘管13a和降温夹套的降温后温度保持在4℃。此时启动气动隔膜泵6a，料液经过1200nm陶瓷膜（位于第一陶瓷膜组件1a）回流至料液储液罐，缓慢关小回流管道阀门14a，使膜前压力维持在0.3~0.4Mpa，膜后压力维持在0.1~0.2Mpa，此时打开清液出口阀门，清夜通过清液管8a流至清液储液罐11b（参见图3），观察清液流速，待清液基本不再流出时，关闭气动隔膜泵，得到约100L的清液。

得到的清夜经过50nm陶瓷膜（位于第二陶瓷膜组件1b）（操作同上述1200nm陶瓷膜），小分子蛋白、盐、色素等小分子物质透过50nm陶瓷膜成为透过液，收集浓缩后的浓缩液，此步骤得到约20L高活性的细胞内容物的浓缩液。

经过活性检测，将实施例1中所得的生物活性细胞内容物应用于酵母体外蛋白表达体系中，合成的增强型绿色荧光蛋白(eGFP) 的相对荧光单位值(RFU)为3000~3500RFU，活性为与实验室小规模制备标准样品相当。

实施例1中处理了约12kg破碎后的细胞内容物耗时约3小时，收率为每Kg细胞约1.7L高活性的细胞内容物的浓缩液。

实施例2

将15kg经过发酵培养收集后的微生物细胞（如酵母细胞）进行破碎处理，然后与缓冲液以1:8（W/V）的比例混合均匀，得到120L左右含有细胞内容物的料液。

料液在储液罐内经过料液储液罐11a内降温盘管13a和降温夹套的降温后温度保持在4℃。此时启动气动隔膜泵6a，料液经过3000nm陶瓷膜（位于第一陶瓷膜组件1a）回流至料液储液罐，缓慢关小回流管道阀门14a，使膜前压力维持在0.3~0.4Mpa，膜后压力维持在0.1~0.2Mpa，此时打开清液出口阀门，清液先流至清液暂存罐12a，再通过底部管道15流至清液储液罐11b（参见图4），观察清液流速，待清液基本不再流出时，关闭气动隔膜泵，得到约110L的清液。

得到的清夜经过300nm陶瓷膜（位于第二陶瓷膜组件1b）（操作同上述3000nm陶瓷膜），小分子蛋白、盐、色素等小分子物质透过300nm陶瓷膜成为透过液，收集浓缩后的浓缩液，此步骤得到约25L高活性的细胞内容物的浓缩液。

经过活性检测，将实施例2中所得的生物活性细胞内容物应用于酵母体外蛋白表达体系中，合成的增强型绿色荧光蛋白(eGFP) 的相对荧光单位值(RFU)为2500~3500RFU，活性为与实验室小规模制备标准样品相当。

实施例2中处理了约15kg破碎后的细胞内容物耗时约3小时，收率为每Kg细胞约1.7L高活性的细胞内容物的浓缩液。

实施例3

将10kg经过发酵培养收集后的微生物细胞（如酵母细胞）进行破碎处理，然后与缓冲液以1:12（W/V）的比例混合均匀，得到120L左右含有细胞内容物的料液。

料液在储液罐内经过料液储液罐11a内降温盘管13a和降温夹套的降温后温度保持在4℃。此时启动气动隔膜泵6a，料液经过1000nm陶瓷膜（位于第一陶瓷膜组件1a）回流至料液储液罐，缓慢关小回流管道阀门14a，使膜前压力维持在0.3~0.4Mpa，膜后压力维持在0.1~0.2Mpa，此时打开清液出口阀门，清液先流至清液暂存罐12a，再通过底部管道15流至清液储液罐11b（参见图4），观察清液流速，待清液基本不再流出时，关闭气动隔膜泵，得到约80L的清液。

得到的清夜经过10nm陶瓷膜（位于第二陶瓷膜组件1b）（操作同上述1000nm陶瓷膜），小分子蛋白、盐、色素等小分子物质透过10nm陶瓷膜成为透过液，收集浓缩后的浓缩液，此步骤得到约20L高活性的细胞内容物的浓缩液。

经过活性检测，将实施例3中所得的生物活性细胞内容物应用于酵母体外蛋白表达体系中，合成的增强型绿色荧光蛋白(eGFP) 的相对荧光单位值(RFU)为3000~3500RFU，活性为与实验室小规模制备标准样品相当。

实施例3中处理了约10kg破碎后的细胞内容物耗时约3~5小时，收率为每Kg细胞约2L高活性的细胞内容物的浓缩液。

对比例1 离心分离

分离0.3L（0.15Kg酵母细胞）（最大处理量）的破碎处理后的细胞内容物。离心时间0.5~1h。离心后分离上清液与固体残渣分离，得到细胞内容物浓缩液约0.15L，收率为每Kg细胞约1L细胞内容物的浓缩液。

经过活性检测，将对比例1中所得的细胞内容物应用于酵母体外蛋白表达体系中，合成的增强型绿色荧光蛋白(eGFP) 的相对荧光单位值(RFU)为2000~2500RFU。

对比例2 板框过滤

使用不锈钢板框过滤器和不同孔径微滤膜提取细胞内容物中有效成分。

（1）当采用3μm孔径的微滤膜时，细胞内容物直接穿过滤膜，微滤膜起不到任何拦截效果。

（2）当采用1μm孔径的微滤膜时，过滤操作开始之后不久，滤膜表面形成致密的滤饼层，难以继续过滤。

可见，板框过滤不适用于过滤提取细胞内容物中的有效成分。

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims (10)

1.一种用于提取细胞内容物的分离设备，其特征在于，所述分离设备包括：第一过滤装置和第二过滤装置；

其中，所述第一过滤装置包括一个或多个第一陶瓷膜组件（1a）、第一进料泵（6a）、料液储液罐（11a）及使各个第一陶瓷膜组件、第一进料泵和料液储液罐流体连通的第一配套管路，且所述第一陶瓷膜组件内设有1000~3000nm孔径的陶瓷膜；

所述第二过滤装置包括一个或多个第二陶瓷膜组件（1b）、第二进料泵（6b）、清液储液罐（11b）及使各个第二陶瓷膜组件、第二进料泵和清液储液罐流体连通的第二配套管路；且所述第二陶瓷膜过滤组件内设有10~300nm孔径的陶瓷膜；

以及，第一过滤装置中的一个或多个第一陶瓷膜组件和清液储液罐，通过清液管（8a）直接流体连通，或者通过清液管和清液暂存罐（13b）流体连通。

2. 如权利要求1所述的分离设备，其特征在于，料液储液罐、清夜暂存罐和/或清液储液罐设有附属降温装置，所述附属降温装置用于使待分离的料液≤4℃。

3.如权利要求1所述的分离设备，其特征在于，所述第一配套管路包括：连接第一进料泵及一个或多个第一陶瓷膜组件的第一进料管（5a）、连接料液储液罐及第一进料泵的第一吸液管（7a）以及连接料液储液罐及一个或多个第一陶瓷膜组件的第一回流管（9a）；和/或

所述第二配套管路包括：连接第二进料泵及一个或多个第二陶瓷膜组件的第二进料管（5b）、连接清清液储液罐及第二进料泵的第二吸液管（7b）以及连接清液储液罐及一个或多个第二陶瓷膜组件的第二回流管（9b）。

4.如权利要求3所述的分离设备，其特征在于，所述第一回流管上设有第一回流管阀门（14a）；和/或，所述第二回流管上设有第二回流管阀门（14b）。

5.如权利要求1所述的分离设备，其特征在于，所述第一过滤装置还包括第一压力表（4a），及所述第二过滤装置还包括第二压力表（4b）。

6.如权利要求1所述的分离设备，其特征在于，所述第二过滤装置还包括透过液储液罐（12b）；其中，所述透过液储液罐通过透过液管（8b）连接至一个或多个第二陶瓷膜组件。

7.如权利要求1所述的分离设备，其特征在于，所述的第一进料泵，和/或第二进料泵为气动隔膜泵。

8.如权利要求1所述的分离设备，其特征在于，所述附属降温装置包括降温夹套，和/或降温盘管。

9.如权利要求1所述的分离设备，其特征在于，所述料液储液罐内设有料液储液罐降温盘管（13a）且所述料液储液罐外部设有降温夹套；

所述清液暂存罐内部设有清液暂存罐降温盘管（13b）且所述清液暂存罐外部设有降温夹套；和/或,

所述清液储液罐内设有清液储液罐降温盘管（13c）且所述清液储液罐外设有降温夹套。

10.一种提取细胞内容物的方法，其特征在于，包括步骤：

（1）提供如权利要求1所述的分离设备；

（2）提供含有细胞内容物的料液；

（3）开启所述附属降温装置，使所述料液保持在≤4℃；

（4）第一级过滤步骤：通过第一进料泵（6a）将所述料液压入一个或多个第一陶瓷膜组件（1a），过滤，收集清液；

（5）第二级过滤步骤：使步骤（4）收集的流入清液储液罐（11b），并通过第二进料泵（6b）将所述清液压入一个或多个第二陶瓷膜组件（1b），过滤，滤去通过所述第二陶瓷膜组件中的陶瓷膜的透过液，收集余下的浓缩液，所述浓缩液即所需的高活性细胞内容物的浓缩液。

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