CN110632322B - 载脂蛋白c2校准品的冻干制备工艺 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种载脂蛋白C2校准品的冻干制备工艺，属于医疗器械生化体外诊断技术领域。本发明的冻干制备工艺包括以下步骤：步骤1、使用载脂蛋白C2抗原、及30～50％的乙醇，配制待冻干的液体载脂蛋白C2校准品；步骤2、冻干步骤1制备的液体载脂蛋白C2校准品，冻干参数包括以下步骤：①冷冻控制阶段：冷冻干燥室温度2～8℃，产品预冻10～30min；降温至‑5～‑20℃，产品预冻1～3h；降温至‑30～‑50℃，产品预冻1～3h；②一次干燥阶段：温度升高至‑5～‑20℃，真空条件下，保持5～8h；升温至20～50℃，保持5～8h；③解析干燥阶段：调节温度至30～40℃，真空条件下，保持3～6h。该工艺冻干时间短，制备的冻干校准品水分含量低，效期长，易于溶解、且溶解后液体澄清。

Description

载脂蛋白C2校准品的冻干制备工艺
技术领域
本发明属于医疗器械生化体外诊断技术领域，具体涉及一种载脂蛋白C2校准品的冻干制备工艺。
背景技术
载脂蛋白C是血浆中一组水溶性低分子量蛋白质，包括载脂蛋白C1、C2、C3和新近发现的C4，共四个亚型，它们主要分布在乳糜微粒(CM)、极低密度脂蛋白(VLDL)和高密度脂蛋白(HDL)。其中载脂蛋白C2是CM、VLDL和HDL的结构蛋白之一，分别占其蛋白成份的14％、7％～10％及1％～3％。血清载脂蛋白C2(APOC2)水平的改变可能比血清胆固醇异常更早、能更敏感的反映脂质代谢异常状态。积极控制脂代谢紊乱对脑梗死的防治具有重要作用。
生化用载脂蛋白C2校准品是指在开展人血清中载脂蛋白C2检测项目在临床生化检测使用过程中对检测***进行校准的校准物质；在临床的应用中非常的广泛；由于载脂蛋白C2抗原在溶液中不稳定，所以目前使用的载脂蛋白C2校准品多为冻干剂型。因此能够找到一种合适的冻干制备工艺参数，缩短冻干时间，使冻干品水分含量低，易于溶解，溶解后液体澄清，具有非常好的临床实用性，也非常利于临床的推广及发展。
发明内容
本发明的目的是提供一种载脂蛋白C2校准品的冻干制备工艺，该工艺冻干时间短，制备的冻干校准品水分含量低，效期长，易于溶解、且溶解后液体澄清。
为了实现上述目的，本发明的技术方案具体如下：
本发明提供一种载脂蛋白C2校准品的冻干制备工艺，包括以下步骤：
步骤1、使用载脂蛋白C2抗原、及30～50％的乙醇，配制待冻干的液体载脂蛋白C2校准品；
步骤2、冻干步骤1制备的液体载脂蛋白C2校准品，冻干参数包括以下步骤：
①冷冻控制阶段：
冷冻干燥室温度2～8℃，产品预冻10～30min；
降温至-5～-20℃，产品预冻1～3h；
降温至-30～-50℃，产品预冻1～3h；
②一次干燥阶段：
温度升高至-5～-20℃，真空条件下，保持5～8h；
升温至20～50℃，保持5～8h；
③解析干燥阶段：
调节温度至30～40℃，真空条件下，保持3～6h。
在上述技术方案中，优选一次干燥阶段和解析干燥阶段的真空度均为0.15-0.20mba。
在上述技术方案中，优选冷冻控制阶段在30～60min内降温至-5～-20℃。
在上述技术方案中，优选冷冻控制阶段在40～90min内降温至-30～-50℃。
在上述技术方案中，优选一次干燥阶段在30～60min内升温至-5～-20℃。
在上述技术方案中，优选一次干燥阶段在60～120min内升温至20～50℃。
本发明的有益效果是：
1)本发明提供的载脂蛋白C2校准品的冻干制备工艺中使用30％-50％的乙醇溶液替代水溶液，由于乙醇溶液具有挥发性，可以有效缩短冻干时间及降低冻干品水分含量，从而提高冻干品质量。使用水溶液制备的校准品冻干需要40h以上，而本发明冻干24h即可满足要求，由于干燥时间缩短可以在提高生产效率的同时节约能耗。
2)本发明提供的载脂蛋白C2校准品的冻干制备工艺制备的冻干品外观：呈饼状，瓶塞不粘有冻干品。
3)本发明提供的载脂蛋白C2校准品的冻干制备工艺制备的冻干品水分含量低，避免水分高影响冻干品浓度的稳定性，提高冻干品效期稳定性。
4)本发明提供的载脂蛋白C2校准品的冻干制备工艺制备的冻干品易于溶解，且溶解后液体澄清。
附图说明
下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细说明。
图1是13个月载脂蛋白C2校准品测值稳定性跟踪图。
图2是13个月载脂蛋白C2校准品衰减变化图。
图3是载脂蛋白C2校准品高温37℃加速7天、11天、15天效期加速模拟衰减变化图。
图4是载脂蛋白C2校准品复溶后2-8℃条件下开封6、8天效期模拟衰减变化图。
图5是载脂蛋白C2校准品复溶分装后-20℃条件下31天开封测试结果图。
具体实施方式
下面结合附图对本发明做以详细说明。
实施例1
本实施例描述的是本发明的适用于载脂蛋白C2校准品的冻干制备工艺参数及稳定性的验证方法；
具体冻干制备工艺参数及验证方法及步骤如下：
实验组
在载脂蛋白C2校准品制备工艺中使用40％乙醇溶液替代水溶液，制备出待冻干的液体载脂蛋白C2校准品；
按照以下参数进行冻干：
①冷冻控制阶段：冷冻干燥室温度5℃，产品预冻20min；
40min内降温至-10℃，产品预冻1h；
60min内降温至-40℃，产品预冻2h。
②一次干燥阶段：60min内温度升高至-5℃，真空度为0.18mba条件下，保持5h；
90min内升温至35℃，保持6h。
③解析干燥阶段：调节温度至40℃，真空度为0.18mba条件下，保持4h。
对照组
在载脂蛋白C2校准品制备工艺中使用水溶液，制备出待冻干的液体载脂蛋白C2校准品
按照以下参数进行冻干：
①冷冻控制阶段：冷冻干燥室温度5℃，产品预冻2h；
40min内降温至-10℃，产品预冻4h；
60min内降温至-40℃，产品预冻4h。
②一次干燥阶段：60min内温度升高至-5℃，真空度为0.18mba条件下，保持12h；
90min内升温至35℃，保持12h。
③解析干燥阶段：调节温度至40℃，真空度为0.18mba条件下，保持10h。
实施例2
载脂蛋白C2校准品的性能评价
用卡尔费休水分测定仪测试制备完的载脂蛋白C2校准品，实验组水分为2.9035％，对照组水分为8.7864％。
将制备完的实验组和对照组的载脂蛋白C2校准品分别用1mL纯化水溶解20分钟，观察校准品全部溶解，溶解后液体澄清。
将制备完的实验组和对照组载脂蛋白C2校准品分别平均分成12份，储存在2-8℃的环境中，选取载脂蛋白C2测定试剂盒(免疫比浊法)(选自北京九强生化技术股份有限公司生产的试剂盒)，CS-1200全自动生化分析仪器首先用北京九强载脂蛋白C2校准品进行定标，定标成功后，每3个月分别对制备好的载脂蛋白C2校准品实施检测，连续检测13个月，观察校准品的结果的变化情况，并形成校准品稳定性跟踪图(图1)，并分别在零时间通道下测试，计算衰减，并形成衰减变化图(图2)。高温37℃加速7天、11天、15天效期加速模拟(图3)，复溶后2-8℃条件下开封6、8天效期模拟(图4)，复溶分装后-20℃条件下31天效期模拟(图5)。
本发明的冻干制备工艺制备的校准品水分含量低于5％，溶解时间低于30分钟。并且由图1-5可知：本发明的冻干制备工艺制备的校准品在2-8℃贮存至少可稳定12个月性能不发生改变，37℃至少可稳定15天性能不发生改变，复溶后2-8℃至少可稳定7天性能不发生改变，复溶分装后-20℃条件下至少可稳定30天性能不发生改变，本发明可用于多种冻干剂型试剂使用。
实施例3
在载脂蛋白C2校准品制备工艺中使用30％乙醇溶液替代水溶液，制备出待冻干的液体载脂蛋白C2校准品；
按照以下参数进行冻干：
①冷冻控制阶段：冷冻干燥室温度2℃，产品预冻10min；
30min内降温至-5℃，产品预冻2h；
40min内降温至-30℃，产品预冻1h。
②一次干燥阶段：30min内温度升高至-10℃，真空度为0.16mba条件下，保持6h；
60min内升温至20℃，保持6h。
③解析干燥阶段：调节温度至30℃，真空度为0.16mba条件下，保持3h。
本发明的冻干制备工艺制备的校准品外观：呈饼状，瓶塞不粘有冻干品，水分含量低于5％，溶解时间低于30分钟，溶解后液体澄清。
实施例4
在载脂蛋白C2校准品制备工艺中使用50％乙醇溶液替代水溶液，制备出待冻干的液体载脂蛋白C2校准品；
按照以下参数进行冻干：
①冷冻控制阶段：冷冻干燥室温度8℃，产品预冻30min；
60min内降温至-20℃，产品预冻3h；
90min内降温至-50℃，产品预冻3h。
②一次干燥阶段：40min内温度升高至-20℃，真空度为0.16mba条件下，保持8h；
120min内升温至50℃，保持8h。
③解析干燥阶段：调节温度至35℃，真空度为0.16mba条件下，保持6h。
本发明的冻干制备工艺制备的校准品外观：呈饼状，瓶塞不粘有冻干品，水分含量低于5％，溶解时间低于30分钟，溶解后液体澄清。
应当理解的是，本发明不限于上述的举例，对本领域的普通技术人员来说，可根据上述说明加以改进或变换，所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。

Claims (1)

1.一种载脂蛋白C2校准品的冻干制备工艺，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1、使用载脂蛋白C2抗原、及30～50%的乙醇，配制待冻干的液体载脂蛋白C2校准品；
步骤2、冻干步骤1制备的液体载脂蛋白C2校准品，冻干参数包括以下步骤：
①冷冻控制阶段：
冷冻干燥室温度2～8℃，产品预冻10～30min；
在30～60min内降温至-5～-20℃，产品预冻1～3h；
在40～90min内降温至-30～-50℃，产品预冻1～3h；
②一次干燥阶段：
在30～60min内温度升高至-5～-20℃，真空条件下，保持5～8h；
在60～120min内升温至20～50℃，保持5～8h；
③解析干燥阶段：
调节温度至30～40℃，真空条件下，保持3～6h；
所述一次干燥阶段和解析干燥阶段的真空度均为0.15-0.20mba。
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