CN110628660A - 一种乳酸菌组合物用于抑制胃幽门螺旋杆菌引发的胃炎及其用途 - Google Patents

一种乳酸菌组合物用于抑制胃幽门螺旋杆菌引发的胃炎及其用途 Download PDF

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Abstract

本发明是关于保健食品领域,特别指一种乳酸菌组合物用于抑制胃幽门螺旋杆菌引发的胃炎及其用途。本发明提供一种用于抑制胃幽门螺旋杆菌引发的胃炎的医药组合物及食品产品,其包含乳酸菌选自于由鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)GM‑020,又称作GMNL‑74,寄存编号为CCTCC NO:M203098;嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)GMNL‑185,寄存编号为CCTCC NO:M2017764以及植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)GMNL‑662,寄存编号为CCTCC NO:M2016571及其任二以上组合的群组。

Description

一种乳酸菌组合物用于抑制胃幽门螺旋杆菌引发的胃炎及其 用途
技术领域
本发明是关于保健食品领域,特别指一种乳酸菌组合物用于制备抑制胃幽门螺旋杆菌引发的胃炎的组合物中的用途。
背景技术
幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)是一种微需氧的革兰氏阴性菌,可能造成包含:胃溃疡(gastric ulcer)、十二指肠溃疡(duodenal ulcer)、慢性胃炎(chronic gastritis)、胃黏膜相关淋巴瘤(mucosa-associated lymphoid tissuelymphoma)、甚至胃腺癌(gastric adenocarcinoma)…等肠胃道相关疾病。幽门螺旋杆菌主要会利用其尿素酶(urease)分解尿素产生氨(ammonia)及二氧化碳(CO2),氨与水作用产生碱性的氨根离子(NH4+)来中和胃酸,提高黏膜处酸碱值达pH 4.5~7.0,使细菌可以长期存活于胃部环境中(Eaton KA,Suerbaum S,Josenhans C and Krakowka S.1996)。此外,幽门螺旋杆菌会分泌液泡毒素(vacuolating cytotoxin A,VacA),此细胞毒素会使细胞通透性增加,造成细胞胀破引起发炎反应(Atherton JC,Peek RM,Jr.,Tham KT,Cover TL andBlaser MJ.1997)。而另外一个重要的毒素为细胞毒素相关基因A(cytotoxin-associatedgene A,CagA),研究证实CagA能够活化细胞核转录因子κB(NF-κB),以活化下游发炎相关细胞激素表达;并能促进细胞激素介白质-8(interleukine-8,IL-8)分泌,以趋化嗜中性白血球(neutrophils)聚集,因而使胃上皮产生下游发炎反应(Backert S,Schwarz T,MiehlkeS,Kirsch C,Sommer C,et al.2004,Censini S,Lange C,Xiang Z,Crabtree JE,GhiaraP,et al.1996),而造成幽门螺旋杆菌感染后的肠胃道病症。
目前治疗感染幽门螺旋杆菌的方式,通常需合并下列药物同时进行投药:(1)抗生素,如:amoxicillin、clarithromycin、metronidazole等;(2)铋盐(bismuth);(3)抑酸剂或质子帮浦抑制剂(proton pump inhibitor)等。但幽门螺旋杆菌容易对抗生素产生抗药性,故目前是以两种抗生素加上铋盐或质子帮浦抑制剂等三合一或四合一疗法合并投药;这类药物的主要副作用为味觉异常、恶心、腹泻、胀气、头痛、晕眩等明显副作用,如果病患自行停药,更容易导致幽门螺旋杆菌产生抗药性。总体来说,约有10-20%的病人因为上述原因而无法根除幽门螺旋杆菌感染问题,因此,现有治疗幽门螺旋杆菌的感染仍有改善空间。
乳酸菌(probiotics)是经由研究证实对于人体健康有益的微生物,其中最广泛使用的是乳酸杆菌属(Lactobacillus spp.)及双歧杆菌属(Bifidobacterium spp.)。在幽门螺旋杆菌感染的辅助治疗上,近年来发现特别是在三合一疗法的效果不彰时(Dang Y,Reinhardt JD,Zhou X and Zhang G.2014),使用特定的乳酸菌菌株可以增加抗生素疗法对幽门螺旋杆菌的清除率。此外,有研究显示使用乳酸菌亦可降低抗生素疗法所造成的副作用,包括恶心、肠胃不适及呕吐等(Gong Y,Li Y and Sun Q.2015,Zhang MM,Qian W,QinYY,He J and Zhou YH.2015,Lv Z,Wang B,Zhou X,Wang F,Xie Y,et al.2015)。因此,找出一新颖的乳酸菌组合物代替抗生素治疗幽门螺旋杆菌感染,为本领域所欲解决的问题。
发明内容
有鉴于此,本发明人深刻了解前案的不足与缺陷,乃亟思加以改良创新,并成功研发完成本件一种抑制胃幽门螺旋杆菌的乳酸菌组合物。
为达成上述目的,本发明提供一种用于抑制胃幽门螺旋杆菌引发的胃炎的医药组合物,其包含乳酸菌选自于由鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)GM-020(又称作GMNL-74),寄存编号为CCTCC NO:M203098、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)GMNL-185,寄存编号为CCTCC NO:M2017764以及植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)GMNL-662,寄存编号为CCTCC NO:M2016571所组成的群组。
其中该医药组合物是供口服投药的剂型,且剂型是选自溶液、悬浮液、乳剂、粉末、锭剂、丸剂、糖浆、***锭、片剂、口嚼胶、浓浆和胶囊所构成的群组。
为达成上述目的,本发明提供另一种食品产品,其包含益生鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)GM-020、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)GMNL-185和植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)GMNL-662以及可食性材料。
其中该可食性材料是选自于由水、流体乳品、浓缩牛奶、酸奶、酸乳、冷冻优格、乳杆菌发酵饮料、奶粉、冰淇淋、奶酪、干酪、豆浆、发酵豆浆、蔬果汁、果汁、运动饮料、甜点、果冻、糖果、婴儿食品、健康食品、动物饲料、中草药组合物以及膳食补充品所组成的群组。
为达成上述目的,本发明提供另一种乳酸菌用于制备治疗胃幽门螺旋杆菌感染的组合物的方法,其中该乳酸菌是选自于由鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)GM-020、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)GMNL-185和植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)GMNL-662所组成的群组。
其中该乳酸菌是透过抑制胃幽门螺旋杆菌吸附或侵入胃部细胞、抑制胃幽门螺旋杆菌诱导的介白质-8(IL-8)与NF-κB转录因子、抑制胃部COX-2蛋白质表现,以达成抑制多重抗药性胃幽门螺旋杆菌及抗生素敏感幽门杆菌螺旋杆菌的功效。
附图说明
图1为226株乳酸菌株吸附至人类胃上皮细胞(AGS)吸附力整理图;
图2A为以ELISA分析IL-8表现量图;
图2B为以NF-κB-冷光酶活性分析NFκB活性图;
图3A乳酸菌抑制幽门螺旋杆菌吸附胃部细胞分析图;
图3B乳酸菌抑制幽门螺旋杆菌侵入胃部细胞分析图;
图4A为小鼠喂食幽门螺旋杆菌流程图;
图4B为以CLO test分析胃组织幽门螺旋杆菌感染程度图;
图4C为利用免疫组织化学分析法分析胃组织发炎蛋白COX-2的表现量图。
具体实施方式
本说明书中所述的所有技术性及科学术语,除非另外有所定义,皆为该所属专业人士领域可共同了解的意义。
本说明书用语「载剂(carrier)」、「赋形剂(vehicle)」、「稀释剂」,是指涉不具毒性的化合物或药剂,其具有协助细胞或组织吸收药物的功能。
本发明所使用的组合物,可进一步添加一可食性材料,以制备为一种食品产品或保健产品。其中该可食性材料包含,但不限于:水(water)、流体乳品(fluid milkproducts)、牛奶(milk)、浓缩牛奶(concentrated milk);发酵乳品(fermented milk),诸如酸奶(yogurt)、酸乳(sour milk)、冷冻优格(frozen yogurt)、乳杆菌发酵饮料(lacticacid bacteria-fermented beverages);奶粉(milk powder);冰淇淋(icecream);奶酪(cream cheeses);干酪(dry cheeses);豆奶(soybean milk);发酵豆奶(fermentedsoybean milk);蔬果汁(vegetable-fruit juices);果汁(juices);运动饮料(sportsdrinks);甜点(confectionery);果冻(jellies);糖果(candies);婴儿食品(infantformulas);健康食品(health foods);动物饲料(animal feeds);中草药材(Chineseherbals);膳食补充品(dietary supplements)等。
本发明所使用的前述组合物可为膳食补充品,可以下列方式给予服用者:与合适的可饮用液体混合,例如水、酸奶酪、牛奶或果汁;或可与固体或液体食品进行混合。本说明书中,膳食补充品的形式可为锭剂、丸剂、胶囊、药锭糖(lozenge)、颗粒、粉剂、悬浮剂、小药囊、软锭剂、糖果、糖浆及相应的投予形式,通常为单位剂量的形式,并以制备膳食补充品的常规方法制造。
本发明所使用的乳酸菌为死菌或活菌的培养液。
以下实施仅为例示,剂量可依据变异而改变,而不限于使用的化合物的活性、治疗疾病或生理状态、给药方式、个体需求、疾病严重性、及医师判断。
实施例一、筛选可高吸附至人类胃部细胞(AGS)的乳酸菌
将人类胃上皮细胞AGS(ATCC CRL 1739)与活化后的乳酸菌菌液(细菌感染剂量MOI为100)共同培养2小时后,以PBS清洗掉未吸附的菌体,并以Giemsa染剂进行染色。利用显微镜观察乳酸菌吸附于人类胃上皮细胞(AGS)上的数量,以评估菌株吸附力强弱。
图1显示油镜视野下观察,若有40以上只乳酸菌株吸附在细胞上(如图1中A所示),以「++++」表示,表示结合至细胞能力为最强;20只以上乳酸菌株吸附在细胞上(如图1中B所示),以「+++」表示;10只以上乳酸菌株吸附在细胞上(如图1中C所示),以「++」表示;3只以上乳酸菌株吸附在细胞上(如图1中D所示),以「+」表示;若没有乳酸菌株吸附在细胞上(如图1中E所示),以「-」表示,表示无结合至此细胞能力。
最后总共分析226只乳酸菌结合至人类胃上皮细胞(AGS)的能力,选出结合能力最强的乳酸菌18只(图1中F,标示「++++」之处),并比对其耐胃酸能力,最后挑出13株菌株较耐胃酸的乳酸菌,再进行更进一步抗胃幽门螺旋杆菌的菌株筛选。
实施例二、筛选可高度抑制幽门螺旋杆菌诱导IL-8分泌及NF-κB转录因子相关发炎反应的乳酸菌
将胃上皮细胞感染幽门螺旋杆菌在含有不同菌株的乳酸菌(前步骤挑选的13株菌株)下共同培养16小时,再利用ELISA方法分析IL-8的表现量,并且先将NF-κB-冷光酶(NF-κB luciferase)建构体转殖进入胃上皮细胞后,并加入乳酸菌及幽门螺旋杆菌共同培养12小时之后,分析NF-κB-冷光酶活性即可知道幽门螺旋杆菌所引起发炎反应的活性,并进一步分析乳酸菌是否有抑制效果。
分析结果如表一所示,由表中可知,鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)GM-020(又称作GMNL-74,表中以GMNL-74呈现)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)GMNL-185、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)GMNL-662三株菌株具有较佳抑制IL-8分泌的能力,和抑制NF-κB的产生,且抑制效果是优于同菌种不同菌株的乳酸菌。
表一、抑制幽门螺旋杆菌诱导的发炎相关因子的乳酸菌筛选结果
由上表所挑出的三株乳酸菌,该乳酸菌的寄存编号、寄存日期及菌株名称,如表二所示。
表二、本发明的乳杆菌于中国的寄存编号
将胃上皮细胞感染幽门螺旋杆菌在含有不同菌株的乳酸菌(前步骤挑选的13株菌株)下共同培养16小时,再利用ELISA方法分析IL-8的表现量,结果如图2为由表一所挑出的抑制幽门螺旋杆菌最佳的三株菌株,其中三菌株与实验组(HP)相比有统计上意义(*:P<0.01)。图2A为IL-8表现量,并进行统计分析,由图中可知三菌株可经由抑制免疫趋化激素IL-8;图2B为NF-κB转录因子相对活性,并进行统计分析,由图中可知三菌株可抑制发炎反应路径转录因子NF-κB的产生。由上述结论可知,三株菌抑制强度略有差异,表示这三株菌株可经由抑制免疫趋化激素IL-8及发炎反应路径转录因子NF-κB的产生,以减少免疫细胞浸润至胃部及降低产生促进局部发炎反应的严重程度。
实施例三、三株筛选出的乳酸菌株同时具有抑制幽门螺旋杆菌黏附(adhesion)与侵入(invasion)胃上皮细胞的活性
为了进一步证实乳酸菌是否有抑制幽门螺旋杆菌对胃上皮细胞吸附(adhesionactivity)的能力。在含有乳酸菌之下,幽门螺旋杆菌以细菌感染剂量100(multiplicityof infection,MOI)感染人类胃上皮细胞(AGS cells,ATCC CRL1739)6小时。清洗细胞之后再利用水将细胞打破,系列稀释之后接种于血液培养基。培养3-4天后计数菌落数(colony-forming units,简称CFU),其中CFU数值越少代表幽门螺旋杆菌黏附细胞的数目被乳酸菌抑制。
利用庆大霉素保护试验(gentamicin protection assay)方法分析乳酸菌影响幽门螺旋杆菌侵入(invasion activity)胃上皮细胞的能力,如果CFU减少,代表乳酸菌具有影响幽门螺旋杆菌侵入胃上皮细胞的效果。将感染后细胞先以PBS清洗三次,并以细胞不可通透的100μg/ml庆大霉素(gentamicin)作用1.5小时,用以杀死表面的幽门螺杆菌(H.pylori),经清洗后,以水打破细胞,系列稀释之后接种于血液培养基,培养3-4天后计数幽门螺旋杆菌菌落数。
图3A为幽门螺旋杆菌吸附胃细胞能力分析;图3B为幽门杆菌侵入胃细胞能力分析,其中将单纯幽门螺旋杆菌吸附及侵入胃部细胞的能力当作100%,并进行统计分析,比较分析后三菌株与实验组(HP)相比有统计上意义(*:P<0.01)。
结果显示此三株乳酸菌均能有效减少幽门螺旋杆菌吸附胃上皮细胞,其抑制程度可高达90%以上(如图3A所示),也能更有效降低幽门螺旋杆菌侵入上皮细胞,其抑制程度提高至99%以上(如图3B所示)。表示此三菌株对于抑制幽门螺旋杆菌吸附并侵入上皮细胞,具有良好效果。此外,在两种分析平台下,三株菌抑制强度略有不同,因此,使用复合菌株应是较佳的策略。
实施例四、三株乳酸菌的组合物具有加成抑制抗生素敏感HP或具多重抗药性的HP菌株的效果
利用琼脂孔洞扩散法(agar-well diffusion method)及抑菌试验分析乳酸菌抗幽门螺旋杆菌菌株的能力。使用的H.pylori病源株包含:H.pylori BCRC 26695(ATCC700392):野生株(wild-typestrain),对抗生素甲硝哒唑(metronidazole)和克拉霉素(clarithromycin)均具敏感性;H.pylori v633:对抗生素metronidazole具抗性(MZR)和clarithromycin具抗性(CHR);H.pylori v2311:对抗生素metronidazole具抗性(MZR),但对clarithromycin具敏感性(CHS)。将H.pylori 置于微好氧条件(85%N2,10%CO2,5%O2)及布鲁氏菌血琼脂平板(BAP)培养基下培养,将病原菌刮下并以磷酸盐缓冲液(PBS)将病原菌浓度调成1×109cells/ml,取100μl稀释的H.pylori均匀涂抹于定量的BAP培养盘上,静置15分钟待培养基表面干燥,并使用11mm直径玻璃管,于上述涂完菌液的BAP培养基挖洞。
经比较全菌液和排除菌体的上清液的抑菌效果,以确认乳酸菌的抑菌能力是来自于菌体表面物质,还是来自于菌体的分泌物质。全菌液的收集方法为:在GM-020、GMNL-185、GMNL-662经活化隔夜后,以1%接菌量二活培养至MRS broth培养基,经培养18小时后,收集全菌液,并同时制作混合全菌液(三株菌比例=1:1:1);排除菌体上清液的收集方法为:在GM-020、GMNL-185、GMNL-662经活化隔夜后,以1%接菌量二活培养至MRS肉汤培养基,经培养18小时后,收集全菌液,经13000rpm离心3分钟后,移除菌体,并将上清液以0.45μm过滤膜过滤,即为上清液,并同时制作混合上清液(三株菌比例=1:1:1)。
最后在抑菌试验中,先添加100μl乳酸菌测试样品于孔洞中,并小心平移培养盘于微好氧条件及37℃培养,在48小时后观察抑菌圈大小,使用电子式光标尺测量抑菌圈内大小。并以Student's t-test统计分析。*,P<0.05表示有显著差异,以确认混合菌株效果是否优于单一菌株。
由结果可知,不论是胃幽门螺旋杆菌菌株(HP wild type,具抗生素敏感)或具单一或多重抗药性的胃幽门螺旋杆菌菌株(HP v2311:MZR;HP v633:MZR、CHR),GM-020(又称作GMNL-74,於表中以GMNL-74呈现)、GMNL-185、GMNL-662的全菌液或排除菌体后的上清液均具有明显的抑菌能力,但抑制每只病原菌的能力不一(如表三及表四所示);且全菌液的抑菌能力较上清液为佳,表示菌体表面物质及菌体分泌物质均具抑制胃幽门螺旋杆菌的能力;较特别的是GM-020、GMNL-185、GMNL-662乳酸菌组合物比起单一菌株的抑菌能力均有明显加强(P<0.05),表示利用此乳酸菌组合物能加强抗幽门螺旋杆菌的效果,且同时此组合物能同时针对多种临床抗药菌株亦有良好的抑制作用,不受临床上以抗生素治疗时所会遇到的限制。
表三、乳酸菌菌株全菌液抑制幽门螺旋杆菌抑菌圈的结果
注:混合菌为GM-020(GMNL-74)、GMNL-185和GMNL-662的混合物。
表四、乳酸菌菌株上清液抑制幽门螺旋杆菌抑菌圈的结果
注:混合菌为GM-020(GMNL-74)、GMNL-185和GMNL-662的混合物。
实施例五、三株乳酸菌组合能明显降低H.pylori感染老鼠胃部组织程度及降低胃部发炎反应
利用幽门螺旋杆菌小鼠试验模式实验分析小鼠的发炎反应评估乳酸菌组合物的保护效果。将六周龄BALB/c小鼠分为三组:第一组为控制组(Mock)、第二组为实验组(接种幽门螺旋菌)、第三组为每日管喂乳酸菌组合物(GM-020+GMNL-185+GMNL-662)。各组实验小鼠预先每日喂食水或乳酸菌(第三组),乳酸菌菌量为2.4×107CFU/次/小鼠,一直持续至第24日。实验小鼠(第二组和第三组)于第8、10、12、14、16、18日下午接种幽门螺旋菌(如图4A所示),总共六次,每次菌量为1×109CFU/次/小鼠。喂食至第十八日即停止接种幽门螺旋菌,仍继续喂食乳酸菌。
于第25天牺牲小鼠,取胃部组织并利用CLO(Campylobacter-like OrganismTest),分析幽门螺旋菌尿素酶活性,若CLO test培养基呈现红色至粉红色,代表小鼠胃里仍感染幽门螺旋菌为阳性反应;如果呈现黄色则表示阴性反应,量化颜色深浅画成柱状图(如图4B所示),并进行统计分析,藉此分析乳酸菌组合物是否能抑制幽门螺旋菌的感染。其CLO test结果如图4B所示,结果发现管喂混合菌株(GM-020+GMNL-185+GMNL-662)这组,其胃部CLO得分与仅接种幽门螺旋菌的组别相较下,数值显著下降,与实验组(HP)相比有统计上意义(*:P<0.05)。
利用免疫组织化学染色法及背景H&E染色分析胃组织的发炎因子cyclooxygenase-2(COX-2)的表现,评估乳酸菌抗幽门螺旋菌的感染时的胃部发炎反应,以推测可能的机制。
图4C结果显示,喂食混合菌株能明显抑制COX-2蛋白质表现。
综上所述,本发明由筛选226株乳酸菌,筛选出一抗幽门螺旋杆菌的乳酸菌组合物,其中包含:鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)GM-020、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)GMNL-185、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)GMNL-662,所述乳酸菌组合物除了能具有高度结合至胃部细胞的能力外,同时具有降低胃幽门螺旋杆菌感染引起的免疫趋化及促发炎反应;此外此乳酸菌组合物能有效抑制胃幽门螺旋杆菌吸附及入侵胃部细胞,而且比起单一菌株,乳酸菌组合物更具有加成抑制多株幽门螺旋杆菌菌株的效果,表示此乳酸菌组合物对于广泛应用于治疗临床上出现的抗生素抗药性的幽门螺旋杆菌菌株,是非常有帮助的。
另外,全菌液及上清液均具有抑制幽门螺旋杆菌菌株的功效,且全菌液抑制幽门螺旋杆菌的效果优于上清液,表示GM-020、GMNL-185、GMNL-662菌体表面物质及菌体分泌物质均具抑制胃幽门螺旋杆菌的能力。再者,此乳酸菌组合物可降低幽门螺旋杆菌造成的免疫趋化细胞激素IL-8的分泌和降低促发炎相关转录因子NF-κB的增加,也可降低幽门螺旋杆菌造成的胃部COX-2的发炎反应增加,此结果说明本案的乳酸菌组合物可用以预防或治疗大量胃幽门螺旋杆菌感染所造成的后续疾病的发生,例如:胃溃疡、十二指肠溃疡、慢性胃炎、胃癌等,加上本案乳酸菌组合物安全无副作用的特性,因此可做为治疗胃幽门螺旋杆菌感染相关疾病的另一极佳选择。
以上所述的实施例仅是为说明本发明的技术思想及特点,其目的使熟习此项技艺人士能够了解本发明的内容并据以实施,当不能以的限定本发明的专利范围,即凡大依本发明所揭示的精神所作的均等变化或修饰,仍应涵盖在本发明的专利范围内。
【生物材料寄存】
依寄存国家、机构、日期、号码顺序注记
1.GM-020:中国、中国典型培养物保藏中心、寄存日期为2003年12月18日、寄存编号为CCTCC NO:M 203098。
2.GMNL-662:中国、中国典型培养物保藏中心、寄存日期为2016年10月17日、寄存编号为CCTCC NO:M 2016571。
3.GMNL-185:中国、中国典型培养物保藏中心、寄存日期为2017年11月3日、寄存编号为CCTCC NO:M 2017764。

Claims (21)

1.一种用于抑制胃幽门螺旋杆菌引发之胃炎的嗜酸乳杆菌(Lactobacillusacidophilus)GMNL-185,其寄存编号为CCTCC NO:M2017764。
2.一种用于抑制胃幽门螺旋杆菌菌引发的胃炎的医药组合物,其包含乳酸菌选自于由鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)GM-020(又称作GMNL-74)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)GMNL-185以及植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)GMNL-662及其任二以上组合的群组。
3.根据权利要求2所述的医药组合物,其特征在于,所述鼠李糖乳杆菌的寄存编号为CCTCC NO:NO:M203098,该嗜酸乳杆菌寄存编号为CCTCC NO:M2017764,该植物乳杆菌寄存编号为CCTCC NO:M2016571。
4.根据权利要求2所述的医药组合物,其特征在于,所述医药组合物是一可供口服投药的剂型。
5.根据权利要求4所述的医药组合物,其特征在于,所述剂型是选自溶液、悬浮液、乳剂、粉末、锭剂、丸剂、糖浆、***锭、片剂、口嚼胶、浓浆和胶囊所构成的群组。
6.根据权利要求2所述的医药组合物,其特征在于,所述医药组合物可进一步包括药学上可接受的载剂、赋形剂、稀释剂。
7.根据权利要求2所述的医药组合物,其特征在于,所述乳酸菌是指包含菌体表面物质或菌体分泌物质其中的一或全部组合的培养液。
8.根据权利要求2所述的医药组合物,其特征在于,所述乳酸菌为死菌或活菌。
9.一种食品产品,其包含乳酸菌及一可食性材料,其中该乳酸菌选自于由鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)GM-020(又称作GMNL-74)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillusacidophilus)GMNL-185和植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)GMNL-662及其任二以上组合的群组。
10.根据权利要求9所述的食品产品,其胃幽门螺旋杆菌引发的胃炎鼠李糖乳杆菌的寄存编号为CCTCC NO:M203098,该嗜酸乳杆菌寄存编号为CCTCC NO:M2017764,该植物乳杆菌寄存编号为CCTCC NO:M2016571。
11.根据权利要求9所述的食品产品,其特征在于,进一步包含至少一种选自下列群组中的乳酸菌:乳杆属菌种(Lactobacillus sp.)、双叉杆菌属物种(Bifidobacterium)、链球菌属物种(Streptococcus sp.)及酵母菌(yeasts)。
12.根据权利要求9所述的食品产品,其特征在于,所述可食性材料选自于由水、流体乳品、浓缩牛奶、酸奶、酸乳、冷冻优格、乳杆菌发酵饮料、奶粉、冰淇淋、奶酪、干酪、豆浆、发酵豆浆、蔬果汁、果汁、运动饮料、甜点、果冻、糖果、婴儿食品、健康食品、动物饲料、中草药组合物及膳食补充品所组成的群组。
13.根据权利要求9所述的食品产品,其特征在于,所述乳酸菌是指包含菌体表面物质或菌体分泌物质其中的一或全部组合的培养液。
14.根据权利要求9所述的食品产品,其特征在于,所述乳酸菌为死菌或活菌。
15.一种乳酸菌用于制备治疗胃幽门螺旋杆菌感染的组合物的用途,其中该乳酸菌是选自于由鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)GM-020(又称作GMNL-74)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)GMNL-185和植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)GMNL-662其一及其任二以上组合的群组。
16.根据权利要求15所述的用途,其特征在于,所述乳酸菌是透过抑制胃幽门螺旋杆菌吸附或侵入胃部细胞,以达成抑制胃幽门螺旋杆菌的功效。
17.根据权利要求15所述的用途,其特征在于,所述乳酸菌可进一步抑制胃幽门螺旋杆菌诱导的介白质-8(IL-8)与NF-κB转录因子。
18.根据权利要求15所述的用途,其特征在于,所述乳酸菌可进一步抑制胃部COX-2蛋白质表现。
19.根据权利要求15所述的用途,其特征在于,所述乳酸菌是指包含菌体表面物质或菌体分泌物质其中的一或全部组合的培养液。
20.根据权利要求15所述的用途,其特征在于,所述乳酸菌为死菌或活菌。
21.根据权利要求15所述的用途,其特征在于,所述胃幽门螺旋杆菌为多重抗药性幽门螺旋杆菌菌株或抗生素敏感幽门杆菌螺旋杆菌菌株。
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Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112746034A (zh) * 2020-09-14 2021-05-04 河北一然生物科技有限公司 一种协同抑制幽门螺旋杆菌的鼠李糖乳杆菌lr863和鼠李糖乳杆菌lr519及其应用
CN113662192A (zh) * 2021-08-02 2021-11-19 石家庄君乐宝乳业有限公司 抗幽门螺旋杆菌的即食型乳酸菌剂及其制备方法和应用
WO2021238890A1 (zh) * 2020-05-29 2021-12-02 江南大学 一株鼠李糖乳杆菌及其在抑制幽门螺杆菌中的应用
CN114836349A (zh) * 2022-05-13 2022-08-02 江苏新申奥生物科技有限公司 拮抗幽门螺旋杆菌的嗜酸乳杆菌la16及其应用
CN115747090A (zh) * 2021-09-06 2023-03-07 景岳生物科技股份有限公司 乳杆菌组合物及其改善抗生素造成的焦虑症的用途
TWI810805B (zh) * 2022-01-28 2023-08-01 加捷生醫股份有限公司 複合乳酸菌組成物及其用於製備抑制抗藥性腸桿菌之口服組成物的用途

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TW201204372A (en) * 2010-07-19 2012-02-01 Synbio Tech Inc A Novel Strain of Lactobacillus acidophilus LA27 and its use in inhibition of Helicobacter pylori
CN106350468A (zh) * 2016-09-08 2017-01-25 济南康多宝生物技术有限公司 一种新型嗜酸乳杆菌
CN106361778A (zh) * 2016-09-08 2017-02-01 济南康多宝生物技术有限公司 一种乳酸菌制剂及其在小儿腹泻治疗中的应用
CN108624520A (zh) * 2017-03-16 2018-10-09 景岳生物科技股份有限公司 促进骨质再生的植物乳杆菌菌株gmnl-662及其组合物
CN110339216A (zh) * 2018-04-02 2019-10-18 景岳生物科技股份有限公司 可预防及治疗细菌性***炎的乳酸菌组合物
US20200077692A1 (en) * 2018-09-12 2020-03-12 Genmont Biotech Incorporation Lactobacillus composition for inhibiting gastritis induced by gastric helicobacter pylori and use thereof

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TW201204372A (en) * 2010-07-19 2012-02-01 Synbio Tech Inc A Novel Strain of Lactobacillus acidophilus LA27 and its use in inhibition of Helicobacter pylori
CN106350468A (zh) * 2016-09-08 2017-01-25 济南康多宝生物技术有限公司 一种新型嗜酸乳杆菌
CN106361778A (zh) * 2016-09-08 2017-02-01 济南康多宝生物技术有限公司 一种乳酸菌制剂及其在小儿腹泻治疗中的应用
CN108624520A (zh) * 2017-03-16 2018-10-09 景岳生物科技股份有限公司 促进骨质再生的植物乳杆菌菌株gmnl-662及其组合物
CN110339216A (zh) * 2018-04-02 2019-10-18 景岳生物科技股份有限公司 可预防及治疗细菌性***炎的乳酸菌组合物
US20200077692A1 (en) * 2018-09-12 2020-03-12 Genmont Biotech Incorporation Lactobacillus composition for inhibiting gastritis induced by gastric helicobacter pylori and use thereof
US10638784B2 (en) * 2018-09-12 2020-05-05 Genmont Biotech Incorporation Lactobacillus composition for inhibiting gastritis induced by gastric helicobacter pylori and use thereof

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JUE-RONG FENG等: "Efficacy and safety of probiotic-supplemented triple therapy for eradication of Helicobacter pylori in children: a systematic review and network meta-analysis", 《EUROPEAN JOURNAL OF CLINICAL PHARMACOLOGY》 *
YI-HSING CHEN等: "Probiotic Lactobacillus spp. act Against Helicobacter pylori-induced Inflammation", 《JOURNAL OF CLINICAL MEDICINE》 *
马卉等: "复方嗜酸乳杆菌联合常规四联疗法治疗幽门螺旋杆菌感染消化性溃疡的疗效观察", 《中华医院感染学杂志》 *

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021238890A1 (zh) * 2020-05-29 2021-12-02 江南大学 一株鼠李糖乳杆菌及其在抑制幽门螺杆菌中的应用
CN112746034A (zh) * 2020-09-14 2021-05-04 河北一然生物科技有限公司 一种协同抑制幽门螺旋杆菌的鼠李糖乳杆菌lr863和鼠李糖乳杆菌lr519及其应用
CN112746034B (zh) * 2020-09-14 2022-07-29 河北一然生物科技股份有限公司 一种协同抑制幽门螺旋杆菌的鼠李糖乳杆菌lr863和鼠李糖乳杆菌lr519及其应用
CN113662192A (zh) * 2021-08-02 2021-11-19 石家庄君乐宝乳业有限公司 抗幽门螺旋杆菌的即食型乳酸菌剂及其制备方法和应用
CN115747090A (zh) * 2021-09-06 2023-03-07 景岳生物科技股份有限公司 乳杆菌组合物及其改善抗生素造成的焦虑症的用途
TWI810805B (zh) * 2022-01-28 2023-08-01 加捷生醫股份有限公司 複合乳酸菌組成物及其用於製備抑制抗藥性腸桿菌之口服組成物的用途
CN114836349A (zh) * 2022-05-13 2022-08-02 江苏新申奥生物科技有限公司 拮抗幽门螺旋杆菌的嗜酸乳杆菌la16及其应用
CN114836349B (zh) * 2022-05-13 2023-05-12 江苏新申奥生物科技有限公司 拮抗幽门螺旋杆菌的嗜酸乳杆菌la16及其应用

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