CN110596260A - 一种基于超声单溶剂提取冻干食品中脂质的分析方法 - Google Patents

一种基于超声单溶剂提取冻干食品中脂质的分析方法 Download PDF

Info

Publication number
CN110596260A
CN110596260A CN201910743380.0A CN201910743380A CN110596260A CN 110596260 A CN110596260 A CN 110596260A CN 201910743380 A CN201910743380 A CN 201910743380A CN 110596260 A CN110596260 A CN 110596260A
Authority
CN
China
Prior art keywords
freeze
lipid
dried food
mobile phase
ultrasonic
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201910743380.0A
Other languages
English (en)
Inventor
魏芳
谢亚
吕昕
陈洪
黄凤洪
邓乾春
郑明明
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Oil Crops Research Institute of Chinese Academy of Agriculture Sciences
Original Assignee
Oil Crops Research Institute of Chinese Academy of Agriculture Sciences
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Oil Crops Research Institute of Chinese Academy of Agriculture Sciences filed Critical Oil Crops Research Institute of Chinese Academy of Agriculture Sciences
Priority to CN201910743380.0A priority Critical patent/CN110596260A/zh
Publication of CN110596260A publication Critical patent/CN110596260A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G01N30/14—Preparation by elimination of some components
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
    • G01N30/28—Control of physical parameters of the fluid carrier
    • G01N30/34—Control of physical parameters of the fluid carrier of fluid composition, e.g. gradient
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
    • G01N30/72—Mass spectrometers
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/86—Signal analysis
    • G01N30/8696—Details of Software
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N2030/042—Standards
    • G01N2030/045—Standards internal
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G01N30/14—Preparation by elimination of some components
    • G01N2030/146—Preparation by elimination of some components using membranes

Landscapes

  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)

Abstract

本发明涉及一种基于超声单溶剂提取冻干食品中脂质的超高效液相色谱‑高分辨四级杆飞行时间质谱分析方法，其特征在于：采用超声辅助单溶剂提取冻干食品中脂质，随后用超高效液相色谱‑高分辨四级杆飞行时间质谱联用在34 min内对正、负离子进行快速扫描，实现脂质的快速定性定量分析。该方法操作快速简单，提取时不受蛋白干扰，提取时间短，溶剂毒性小，重复性好，各类脂质回收率高，达到了高覆盖脂质的目的。

Description

一种基于超声单溶剂提取冻干食品中脂质的分析方法
技术领域
本发明涉及一种基于超声单溶剂提取冻干食品中脂质的分析方法，及其在定性定量分析不同类型冻干食品脂质中的应用，属于分析检测领域。
技术背景
冻干食品是采用真空冷冻干燥技术，快速冻结，真空下脱水得到的，其营养成分得到了最大限度的保留，且无须添加防腐剂就可长时间保存，备受研究人员关注。脂质作为三大营养素之一，对人体营养和健康有非常重要的意义。脂质的结构和组成与其营养健康品质密切相关，不同类型的脂质在人体内生物利用度不同，因此，在分子水平上深入分析冻干食品中的脂质对其营养价值的研究非常重要。
传统的脂质分析方法主要有薄层色谱法(TLC)，气相色谱法，液相色谱法。但是这些方法只能检测脂肪酸含量或者某一类脂质的总含量，无法在分子水平上实现对脂质的准确定性定量分析。
最经典的脂质提取溶剂是氯仿/甲醇/水体系。然而，这种提取体系的一个重要缺陷是吸取富含脂质的下层氯仿时很容易引入来自两相界面处的蛋白，导致提取重复性差，且氯仿有较强的毒性，是致癌物。为了避免这个问题，Matyash等人提出了甲基叔丁基醚(MTBE) 作为脂质提取的有效溶剂，由于有机溶剂密度较低，因此有机相收集更容易。然而，已经观察到一些脂质类MTBE方法的回收率和重复性不令人满意，因为在收集脂质提取物时不可避免地扰乱水性和脂质层的界面，且甲醇对中枢神经***伤害很大。单相溶剂提取可以消除由两相界面引起的污染和技术差异，通过提取液沉淀蛋白质，再通过离心去除，它们消除了对相的需要。甲醇，丁醇，MTBE及其混合物已用作单相提取溶剂，用于人血浆中脂质的提取，虽然这些提取试剂使得操作简单，通量和重复率提高，但是对于某一些脂质的回收率仍然不太理想。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对上述现有技术存在的不足而提供一种基于超声单溶剂提取冻干食品中脂质的分析方法。该方法通量高，操作简单，覆盖脂质范围广，能够实现冻干食品中脂质的高效、快速检测。
本发明为解决上述提出的问题所采用的技术方案为：
一种基于超声单溶剂提取冻干食品中脂质的分析方法，主要包括如下步骤：
第一步，称取一定量冻干食品，加入内标溶液；
第二步，第一步所得混合物中加入有机溶剂异丙醇，涡旋混匀；
第三步，第二步所得混合物进行超声处理，以辅助提取；
第四步，第三步超声处理完成后，用冷冻离心机离心，离心所得上清液即为提取液；
第五步，定量取第四步所得提取液，用有机溶剂异丙醇稀释，涡旋，然后经有机相滤膜过滤，所得溶液用于超高效液相色谱-高分辨四级杆飞行时间质谱分析，结合质谱数据、内标实现对冻干食品中脂质的定性分析和定量分析。
按上述方案，所述冻干食品包括冻干的肉、水产品、蛋、蔬菜、水果、保健品等，需要冷冻干燥后研磨至粉末状，备用。
按上述方案，第一步中，称取的冻干食品固体重量、内标混合物之间的比例为1mg:(1～1:10)μL。内标混合液包含：TAG 15:0/18:1-D7/15:0、Cer d18:1/17:0、SM d18:1/12:0、 DAG 15:0/18:1-D7、FFA 16:0-D4、PC 15:0/18:1-d7、PE 15:0-18:1-d7、PS 15:0-18:1-d7、PA- 15:0-18:1-d7、PI 15:0-18:1-d7、PG 15:0-18:1-d7和CE-17:0，浓度范围是10-1000μg/mL。注：TAG(triglyceride)：甘油三酯；Cer(ceramide)：神经酰胺；SM(sphingomyeline)：鞘磷脂；DAG(diacylglycerol)：甘油二酯；FFA(free fatty acid)：游离脂肪酸；PC (phosphatidylcholine)：磷脂酰胆碱；PE(phosphatidylethanolamine)：磷脂酰乙醇胺；PS (phosphatidylserine)：磷脂酰丝氨酸；PA(phosphatidic acid)：磷脂酸；PI (phosphatidylinositol)：磷脂酰肌醇；PG(phosphatidylglycerol)：磷脂酰甘油；CE(cholesterol ester)：胆固醇酯。
按上述方案，有机溶剂的体积与第一步中称取冻干食品的质量之间的比例为1mL:(1～5)mg。
按上述方案，第三步中，超声时间是5-60min，超声功率是100-400W，超声频率是40kHz。本发明采用中心组合设计(central composite design，CCD)，研究超声提取时间、固液比、超声功率及其相互作用对每一类脂质提取率的影响，应用Design Expert 8.0.6(Stat- Ease Inc.,Minneapolis,USA)软件和响应面分析相结合的方法，预测模型和可信度。
按上述方案，第四步中，离心的条件是：温度是4℃，转速是5000rpm，时间是5 min。
按上述方案，第五步中，用有机溶剂稀释1-5倍；过滤采用2μm的有机相滤膜过滤。
按上述方案，超高效液相色谱是岛津超高效液相色谱仪UPLC-30A (ShimadzuCorporation,Kyoto,Japan)，液相色谱条件是：色谱柱采用Phenomenex Kinetex C18(100mm ×2.1mm×2.6μm)；流动相A为乙腈：甲醇：水＝1:1:1(v:v:v，含5mM乙酸铵)，流动相B 为异丙醇：乙腈＝5:1(v:v:v，含5mM乙酸铵)；梯度***为：0-0.5min，维持20％流动相B；0.5-1.5min，将流动相B从20％提高到40％；1.5-3min，将流动相B从40％提高到60％；3-13min，将流动相B提高到98％；13-13.1min，将流动相B降到20％；13.1-17min，维持20％流动相B；柱温60℃，进样盘温度4℃，流速为0.4mL/min。
按上述方案，质谱仪采用高分辨四级杆飞行时间质谱仪Triple TOF 6600(Applied Biosystems/MDS Sciex,Concord,ON,Canada)，配Turbo VTM电喷雾(ESI)离子源，采用质谱全扫描-信息关联采集-子离子(TOF-MS scan-Information-dependentacquisition(IDA)- product ion scan)扫描模式分别在正、负离子下扫描，IDA触发15个子离子扫描，离子源温度均为600℃，离子源电压分别为：+5500V，-4500V；去簇电压(declustering potential， DP)分别为：+80V和-80V；碰撞能(collision energy，CE)分别为：+30V和-30V，气帘气压力均为：35psi；离子源气体1(Ion Source Gas 1，GS 1)：50psi；离子源气体2：55 psi；质量范围：200-1200m/z；正离子模式下进样体积为1μL，负离子模式下进样体积为3 μL。
按上述方案，定性分析和定量分析的方法如下：质谱采集的原始数据采集用Analyst 1.7.1软件，用ABF converter软件将原始数据转换成后缀为.abf的文件，用MS-DIAL 3.30进行定性分析；用PeakView 2.2，MasterView 1.1、MultiQuant 3.0.3(SCIEX)与对应的内标进行定量分析。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明中采用超声单溶剂提取方法对冻干食品中脂质进行提取，利用超声波具有的机械效应，空化效应和热效应，通过增大介质分子的运动速度、增大介质的穿透力以提取冻干食品中脂质，相对于仅涡旋提取的效率有了很大提高，而且溶剂耗量减少，提取时间变短，操作更为简单快速，提取过程中不会受到蛋白干扰，各类脂质回收率更高；本发明后续的超高效液相色谱-高分辨四级杆飞行时间质谱联用使得脂质检测覆盖范围广，检测时间短，定性定量快速准确，适合冻干食品脂质的广泛应用。综上，本发明具有前处理简单快速、回收率高、溶剂毒性低、检测脂质覆盖范围广、通量高、定性定量快速准确等优点。
综上所述，本发明所述的一种基于超声单溶剂提取冻干食品中脂质的超高效液相色谱- 高分辨四级杆飞行时间质谱分析方法，便于在尽可能高效快速的条件下实现对冻干食品中脂质的大规模覆盖。
附图说明
图1A是实施例1中真空冻干DHA鸡蛋黄粉末在正离子模式下总离子流图；图1B是实施例 1中真空冻干DHA鸡蛋黄粉末在负离子模式下总离子流图；
图2A是实施例1中真空冻干DHA鸡蛋黄粉末在正离子模式下282个脂质的提取离子色谱图；图2B是实施例1中真空冻干DHA鸡蛋黄粉末在负离子模式下231个脂质的提取离子色谱图；
图3A是实施例1中真空冻干DHA鸡蛋黄粉末检测到的12类脂质的数量图；图3B是实施例 1中真空冻干DHA鸡蛋黄粉末检测到的12类脂质的含量图(mg/g)；
图4A是实施例2中冻干藏鸡蛋黄粉末检测到的12类脂质的数量图；图4B是实施例2中冻干藏鸡蛋黄粉末检测到的12类脂质的含量图(mg/g)；
本发明中用到的脂质缩写说明：
游离脂肪酸(FFA)、磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰甘油(PG)、磷脂酸(PA)、磷脂酰丝氨酸(PS)、鞘磷脂(SM)、神经酰胺(Cer)、胆固醇酯(CE)、一酰甘油(MAG)、二酰甘油(DAG)、三酰甘油(TAG)。
具体实施方式
以下实施例进一步说明本发明的内容，但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换均属于本发明的范围。
下述实施例中，超高效液相色谱是岛津超高效液相色谱仪UPLC-30A(ShimadzuCorporation,Kyoto,Japan)，液相色谱条件是：色谱柱采用Phenomenex Kinetex C18(100mm ×2.1mm×2.6μm)；流动相A为乙腈：甲醇：水＝1:1:1(v:v:v，含5mM乙酸铵)，流动相B 为异丙醇：乙腈＝5:1(v:v:v，含5mM乙酸铵)；梯度***为：0-0.5min，维持20％流动相 B；0.5-1.5min，将流动相B从20％提高到40％；1.5-3min，将流动相B从40％提高到60％；3-13min，将流动相B提高到98％；13-13.1min，将流动相B降到20％；13.1-17min，维持20％流动相B；柱温60℃，进样盘温度4℃，流速为0.4mL/min。
下述实施例中，质谱仪采用高分辨四级杆飞行时间质谱仪Triple TOF 6600(Applied Biosystems/MDS Sciex,Concord,ON,Canada)，配Turbo VTM电喷雾(ESI)离子源，采用质谱全扫描-信息关联采集-子离子(TOF-MS scan-Information-dependentacquisition(IDA)- product ion scan)扫描模式分别在正、负离子下扫描，IDA触发15个子离子扫描，离子源温度均为600℃，离子源电压分别为：+5500V，-4500V；去簇电压(declustering potential， DP)分别为：+80V和-80V；碰撞能(collision energy，CE)分别为：+30V和-30V，气帘气压力均为：35psi；离子源气体1(Ion Source Gas 1，GS 1)：50psi；离子源气体2：55 psi；质量范围：200-1200m/z；正离子模式下进样体积为1μL，负离子模式下进样体积为3 μL。
实施例1
一种基于超声单溶剂提取真空冻干DHA鸡蛋黄粉末中脂质的超高效液相色谱-高分辨四级杆飞行时间质谱分析方法，该方法具体包括如下步骤：
1)超声单溶剂提取冻干食品中脂质：将由恩施土家族苗族自治州农业科学院提供的 DHA鸡蛋中蛋黄分离出来，真空冷冻干燥后得到蛋黄固体，研磨成粉状后称量10mg，加入内标混合液10μL，内标包含：TAG 15:0/18:1-D7/15:0、Cer d18:1/17:0、SM d18:1/12:0、DAG 15:0/18:1-D7、FFA 16:0-D4、PC 15:0/18:1-d7、PE 15:0-18:1-d7、PS 15:0-18:1-d7和PA- 15:0-18:1-d7均为100μg/mL，PI 15:0-18:1-d7和PG 15:0-18:1-d7均为10μg/mL，CE17:0为1000 μg/mL；随后加入5.2mL单溶剂提取液——异丙醇，涡旋混匀，然后超声辅助提取43min，超声功率是182W，超声频率是40KHz；
2)超高效液相色谱-高分辨四级杆飞行时间质谱分析：在实施例1步骤1)提取完后用冷冻离心机在4℃下离心5000rpm×5min，用移液枪定量移取520μL提取液，用异丙醇稀释至 1mL，涡旋20s，然后经过2μm的有机相滤膜过滤，用于超高效液相色谱-高分辨四级杆飞行时间质谱分析，34min内可快速完成所有脂质的正、负离子检测，它们的总离子流图如附图1所示。质谱原始数据采集用Analyst 1.7.1软件，用ABF converter软件将原始数据转换成后缀为.abf的文件，用MS-DIAL 3.30进行定性分析，PeakView 2.2，MasterView 1.1、MultiQuant 3.0.3(SCIEX)与对应的内标进行定量分析。
对比例1：甲基叔丁基醚(methyl tert-butyl ether,MTBE)提取法：将上述冻干食品称量 10mg，加入内标混合液10μL和1.2mL甲醇，涡旋10s，再加入4mL MTBE，1800转下涡旋1 h，随后加入1mL水，再用冷冻离心机在4℃下离心5000rpm×5min，取上清，氮吹后用氯仿：甲醇(1:1，v:v)稀释至1mg/mL。
对比例2：Folch提取法：将上述冻干食品称量10mg，加入内标混合液10μL和5mL甲醇：氯仿(1:2，v:v)，1800转下涡旋1h，随后加入1.33mL水，再用冷冻离心机在4℃下离心5000rpm×5min，取下清，氮吹后用氯仿：甲醇(1:1，v:v)稀释至1mg/mL。
对比例3：MMC(MeOH/MTBE/CHCl3)提取法：将上述冻干食品称量10mg，加入内标混合液10μL和6mL甲醇：甲基叔丁基醚：氯仿(1.33:1:1，v:v:v)，1800转下涡旋1h，再用冷冻离心机在4℃下离心5000rpm×5min，取上清，氮吹后用氯仿：甲醇(1:1，v:v)稀释至1mg/mL。
对比例4：异丙醇提取法：将上述冻干食品称量10mg，加入内标混合液10μL和6mL异丙醇，1800转下涡旋1h，再用冷冻离心机在4℃下离心5000rpm×5min，取上清，用异丙醇稀释至1mg/mL。
表1为该实施例1步骤1)所述提取方法与其他对比例1-4四种传统涡旋方法的回收率比较。跟传统涡旋方法相比，超声单溶剂提取方法不仅操作简单，用时短，而且回收率均有不同程度的提高。表2为本实施例所述方法中各类脂质的线性范围(测定方法：将浓度范围为0.00005-100μg/mL的标准品进行梯度稀释后进样，以标准品含量为横坐标，对应峰面积为纵坐标，以y＝a+bx进行线性拟合)，本实施例所述方法的动态范围宽，各类脂质的动态范围达3-4个数量级，R2均大于0.99，对于各类脂质均具有很好的回收率，且能够检测到的脂质数量多。
表1五种脂质提取方法的回收率比较
表2不同种类脂质的线性范围
图1A是真空冻干DHA鸡蛋黄粉末中正离子模式下总离子流图；图1B是真空冻干DHA鸡蛋黄粉末中负离子模式下总离子流图；图2A是真空冻干DHA鸡蛋黄粉末在正离子模式下282 个脂质的提取离子流色谱图，其中包含157个TAG，64个PC，35个DAG和MAG，22个SM，4 个CE；图2B是真空冻干DHA鸡蛋黄粉末在负离子模式下231个脂质的提取离子流色谱图，其中包含62个Cer，33个FFA，71个PE，33个PI，17个PG，8个PA，7个PS，图3A是真空冻干DHA鸡蛋黄粉末检测到的12类脂质的数量图；通过加入的内标对12类脂质进行定量分析，真空冻干DHA鸡蛋黄粉末检测到的12类脂质的总含量图(mg/g)结果如图3B所示，每个脂质的脂肪酸组成、含量如表3所示。
实施例2
实施例2与实施例1的不同之处在于：用藏鸡蛋替换DHA鸡蛋作为待测样品。冻干藏鸡蛋黄粉末在正离子模式下检测到184个脂质，其中包含99个TAG，44个PC，23个DAG和 MAG，14个SM，4个CE(图4A)；冻干藏鸡蛋黄粉末在负离子模式下共检测到218个脂质，其中包含61个Cer，33个FFA，66个PE，31个PI，12个PG，8个PA，7个PS(图4A)；通过加入的内标对12类脂质进行定量分析，冻干藏鸡蛋黄粉末检测到的12类脂质的含量图(mg/g) 结果如图4B所示，每个脂质的脂肪酸组成、含量如表3所示。
表3样本中脂质定性定量结果
上述数据表明本发明提出的基于超声单溶剂提取的质谱分析方法操作简单可靠、溶剂毒性小、不受蛋白污染、动态范围宽、通量高、覆盖脂质范围广、回收率高。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出对于领域普通技术人员来说，在不脱离本发明创造构思的前提下，还可以做出若干改进和变换这些都属于本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种基于超声单溶剂提取冻干食品中脂质的分析方法，其特征在于主要包括如下步骤：
第一步，称取一定量冻干食品，加入内标混合液；
第二步，第一步所得混合物中加入有机溶剂异丙醇，涡旋混匀；
第三步，第二步所得混合物进行超声处理，以辅助提取；
第四步，第三步超声处理完成后，用冷冻离心机离心，离心所得上清液即为提取液；
第五步，定量取第四步所得提取液，用有机溶剂异丙醇稀释，涡旋，然后经有机相滤膜过滤，所得溶液用于超高效液相色谱-高分辨四级杆飞行时间质谱分析，结合质谱数据、内标实现对冻干食品中脂质的定性分析和定量分析。
2.根据权利要求1所述的一种基于超声单溶剂提取冻干食品中脂质的分析方法，其特征在于所述冻干食品包括冻干的肉、蛋、水产品、蔬菜、水果、保健品，预先处理为粉末状。
3.根据权利要求1所述的一种基于超声单溶剂提取冻干食品中脂质的分析方法，其特征在于第一步中，称取的冻干食品固体重量、内标混合物之间的比例为1 mg:（1~1:10）μL。
4.根据权利要求1所述的一种基于超声单溶剂提取冻干食品中脂质的分析方法，其特征在于第一步中，内标混合液包含：TAG 15:0/18:1-D7/15:0、Cer d18:1/17:0、SM d18:1/12:0、DAG 15:0/18:1-D7、FFA 16:0-D4、PC 15:0/18:1-d7、PE 15:0-18:1-d7、PS 15:0-18:1-d7、PA-15:0-18:1-d7、PI 15:0-18:1-d7、PG 15:0-18:1-d7和CE-17:0，浓度范围是10-1000 μg/mL。
5.根据权利要求1所述的一种基于超声单溶剂提取冻干食品中脂质的分析方法，其特征在于第二步中，有机溶剂的体积与第一步中称取冻干食品的质量之间的比例为1 mL:（1~5）mg。
6.根据权利要求1所述的一种基于超声单溶剂提取冻干食品中脂质的分析方法，其特征在于第三步中，超声时间是5~60 min，超声功率是100~400 W，超声频率是35~45 kHz。
7.根据权利要求1所述的一种基于超声单溶剂提取冻干食品中脂质的分析方法，其特征在于第四步中，离心的条件是：温度是1~6 ℃，转速是4000~6000 rpm，时间是3~8 min；第五步中，用有机溶剂稀释1-5倍；过滤采用2 μm的有机相滤膜过滤。
8.根据权利要求1所述的一种基于超声单溶剂提取冻干食品中脂质的分析方法，其特征在于第五步中，超高效液相色谱是岛津超高效液相色谱仪UPLC- 30A，液相色谱条件是：色谱柱采用Phenomenex Kinetex C18，100 mm×2.1 mm×2.6 μm；流动相A为乙腈、甲醇、水按体积比1:1:1组成，并且含有5 mM的乙酸铵；流动相B为异丙醇与乙腈按体积比5:1组成，并且含有5 mM的乙酸铵；梯度***为：0-0.5 min，维持20%流动相B；0.5-1.5 min，将流动相B从20%提高到40%；1.5-3 min，将流动相B从40%提高到60%；3-13 min，将流动相B提高到98%；13-13.1 min，将流动相B降到20%；13.1-17 min，维持20%流动相B；柱温60℃，进样盘温度4℃，流速为0.4 mL/min。
9.根据权利要求1所述的一种基于超声单溶剂提取冻干食品中脂质的分析方法，其特征在于第五步中，质谱仪采用高分辨四级杆飞行时间质谱仪Triple TOF 6600，配Turbo VTM电喷雾离子源，采用质谱全扫描-信息关联采集-子离子扫描模式分别在正、负离子下扫描，IDA触发15个子离子扫描，离子源温度均为600℃，离子源电压分别为：+5500 V，-4500 V；去簇电压分别为：+80 V和-80 V；碰撞能分别为：+30 V和-30 V，气帘气压力均为：35 psi；离子源气体1：50 psi；离子源气体2：55 psi；质量范围：200-1200 m/z；正离子模式下进样体积为1 μL，负离子模式下进样体积为3 μL。
10.根据权利要求1所述的一种基于超声单溶剂提取冻干食品中脂质的分析方法，其特征在于第五步中，定性分析和定量分析的方法如下：质谱采集的原始数据采集用Analyst1.7.1软件，用ABF converter软件将原始数据转换成后缀为.abf的文件，用MS-DIAL 3.30进行定性分析；用PeakView 2.2，MasterView 1.1、MultiQuant 3.0.3与对应的内标进行定量分析。
CN201910743380.0A 2019-08-13 2019-08-13 一种基于超声单溶剂提取冻干食品中脂质的分析方法 Pending CN110596260A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910743380.0A CN110596260A (zh) 2019-08-13 2019-08-13 一种基于超声单溶剂提取冻干食品中脂质的分析方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910743380.0A CN110596260A (zh) 2019-08-13 2019-08-13 一种基于超声单溶剂提取冻干食品中脂质的分析方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN110596260A true CN110596260A (zh) 2019-12-20

Family

ID=68854057

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910743380.0A Pending CN110596260A (zh) 2019-08-13 2019-08-13 一种基于超声单溶剂提取冻干食品中脂质的分析方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110596260A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112816573A (zh) * 2020-12-28 2021-05-18 嘉必优生物技术（武汉）股份有限公司 一种同时检测藻油中磷脂、糖脂及甘油酯的方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104698104A (zh) * 2015-03-20 2015-06-10 中国农业科学院油料作物研究所 一种液相色谱-质谱联用分析长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的方法
CN106153763A (zh) * 2016-06-17 2016-11-23 浙江工商大学 刀额新对虾中磷脂的亲水色谱‑串联质谱检测方法
US20170131300A1 (en) * 2015-11-05 2017-05-11 Macau University Of Science And Technology Methods of identifying and quantifying sphingolipids
CN109001360A (zh) * 2018-10-09 2018-12-14 南京财经大学 一种高通量检测油脂中磷脂含量的方法
CN109444316A (zh) * 2018-12-27 2019-03-08 中国农业大学 基于高效液相色谱串联高分辨质谱的弓形虫的脂质组学分析方法及应用

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104698104A (zh) * 2015-03-20 2015-06-10 中国农业科学院油料作物研究所 一种液相色谱-质谱联用分析长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的方法
US20170131300A1 (en) * 2015-11-05 2017-05-11 Macau University Of Science And Technology Methods of identifying and quantifying sphingolipids
CN106153763A (zh) * 2016-06-17 2016-11-23 浙江工商大学 刀额新对虾中磷脂的亲水色谱‑串联质谱检测方法
CN109001360A (zh) * 2018-10-09 2018-12-14 南京财经大学 一种高通量检测油脂中磷脂含量的方法
CN109444316A (zh) * 2018-12-27 2019-03-08 中国农业大学 基于高效液相色谱串联高分辨质谱的弓形虫的脂质组学分析方法及应用

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ABDELMONEIM H. ALI ET AL.: "Identification of phospholipids classes and molecular species in different types of egg yolk by using UPLC-Q-TOF-MS", 《FOOD CHEMISTRY》 *
何扬波等: "UPLC-Triple-TOF-MS/MS法分析中国东北地区人乳磷脂的组成", 《现代食品科技》 *
张敏等: "大黄鱼鱼卵油溶剂提取法的比较及其品质分析", 《福建农林大学学报（自然科学版）》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112816573A (zh) * 2020-12-28 2021-05-18 嘉必优生物技术（武汉）股份有限公司 一种同时检测藻油中磷脂、糖脂及甘油酯的方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Pilařová et al. Recent developments in supercritical fluid chromatography–mass spectrometry: is it a viable option for analysis of complex samples?
Carrasco-Pancorbo et al. From lipid analysis towards lipidomics, a new challenge for the analytical chemistry of the 21st century. Part I: Modern lipid analysis
Šala et al. Determination of triacylglycerol regioisomers using differential mobility spectrometry
CN106153763B (zh) 刀额新对虾中磷脂的亲水色谱-串联质谱检测方法
Camera et al. Comprehensive analysis of the major lipid classes in sebum by rapid resolution high-performance liquid chromatography and electrospray mass spectrometry [S]
Baglai et al. Comprehensive lipidomic analysis of human plasma using multidimensional liquid-and gas-phase separations: two-dimensional liquid chromatography–mass spectrometry vs. liquid chromatography–trapped-ion-mobility–mass spectrometry
Lacaze et al. Solid-phase extraction and liquid chromatography–mass spectrometry for the determination of free fatty acids in shellfish
Kaiser et al. LC–MS method for screening unknown microbial carotenoids and isoprenoid quinones
Samburova et al. Analysis of triacylglycerols and free fatty acids in algae using ultra-performance liquid chromatography mass spectrometry
Leggio et al. Simultaneous extraction and derivatization of amino acids and free fatty acids in meat products
Donato et al. Advances in LC–MS for food analysis
Beccaria et al. Highly informative multiclass profiling of lipids by ultra-high performance liquid chromatography–Low resolution (quadrupole) mass spectrometry by using electrospray ionization and atmospheric pressure chemical ionization interfaces
Jarne et al. High-Performance thin-layer chromatography coupled with electrospray ionization tandem mass spectrometry for identifying neutral lipids and sphingolipids in complex samples
Rocha et al. Separation and identification of neutral cereal lipids by normal phase high-performance liquid chromatography, using evaporative light-scattering and electrospray mass spectrometry for detection
Takahashi et al. Quantitation and structural determination of glucosylceramides contained in sake lees
Sandra et al. Evaluation of micro-pillar array columns (µPAC) combined with high resolution mass spectrometry for lipidomics
Donot et al. Analysis of neutral lipids from microalgae by HPLC-ELSD and APCI-MS/MS
CN107389847B (zh) 一种快速分析蜂花粉中脂类成分的方法
Zhou et al. Determination of phosphatidylethanolamine molecular species in various food matrices by liquid chromatography–electrospray ionization–tandem mass spectrometry (LC–ESI–MS 2)
Tang et al. Comparison of lipid content and fatty acid composition between tuber fermentation mycelia and natural fruiting bodies
Costa et al. Sample preparation techniques coupled to advanced chromatographic methods for marine organisms investigation
CN110596260A (zh) 一种基于超声单溶剂提取冻干食品中脂质的分析方法
Franklin et al. Structural elucidation of triacylglycerol using online acetone Paternò–Büchi reaction coupled with reversed-phase liquid chromatography mass spectrometry
Corso et al. Characterization of pigments and ligands in a wall painting fragment from L iternum archaeological park (I taly)
Jutanom et al. Effects of sphingolipid fractions from golden oyster mushroom (Pleurotus citrinopileatus) on apoptosis induced by inflammatory stress in an intestinal tract in vitro model

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination