CN110591989A - 一株高产l-色氨酸工程菌株及其应用 - Google Patents

一株高产l-色氨酸工程菌株及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN110591989A
CN110591989A CN201910090483.1A CN201910090483A CN110591989A CN 110591989 A CN110591989 A CN 110591989A CN 201910090483 A CN201910090483 A CN 201910090483A CN 110591989 A CN110591989 A CN 110591989A
Authority
CN
China
Prior art keywords
tryptophan
yield
strain
screening
mutagenesis
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201910090483.1A
Other languages
English (en)
Inventor
张大伟
丁冬芹
刘永飞
柏丹阳
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Tianjin Institute of Industrial Biotechnology of CAS
Original Assignee
Tianjin Institute of Industrial Biotechnology of CAS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Tianjin Institute of Industrial Biotechnology of CAS filed Critical Tianjin Institute of Industrial Biotechnology of CAS
Publication of CN110591989A publication Critical patent/CN110591989A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • C07K14/24—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Enterobacteriaceae (F), e.g. Citrobacter, Serratia, Proteus, Providencia, Morganella, Yersinia
    • C07K14/245—Escherichia (G)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N13/00—Treatment of microorganisms or enzymes with electrical or wave energy, e.g. magnetism, sonic waves
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
    • C12P13/22—Tryptophan; Tyrosine; Phenylalanine; 3,4-Dihydroxyphenylalanine
    • C12P13/227—Tryptophan

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种L‑色氨酸基因工程菌及其构建方法，其保藏编号为：CGMCC NO.15765。通过基因工程的手段将L‑色氨酸分解代谢途径的相关基因进行缺失，同时通过适当的表达载体过表达L‑色氨酸合成途径相关基因，构建一株L‑色氨酸生产底盘细胞TD0。在此基础之上，结合L‑色氨酸生物传感器，通过流式细胞仪筛选出L‑色氨酸高产菌株TD。

Description

一株高产L-色氨酸工程菌株及其应用
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种L-色氨酸工程菌及其生产L-色氨酸的方法。
背景技术
L-色氨酸是人体和动物生命活动必需的氨基酸之一，对人和动物的生长发育、新陈代谢起着重要的生理作用，被广泛应用于饲料、医药和食品等领域。在医药领域，色氨酸是氨基酸输液的重要组分和重要的医药中间体，以色氨酸为前体可合成多种具有医用价值的代谢产物，例如5-羟色氨酸，烟酸、生物碱、辅酶、色素等。在饲料中添加L-色氨酸能够有效的提高畜、禽、鱼类日粮内色氨酸的含量，显著提高饲料中蛋白的价值和利用率，促进动物生长。在食品应用领域，色氨酸可用于强化食品，例如可以作为调味剂添加至西式糕点中，也可用于面包促进发酵。由于L-色氨酸的广泛用途，国内外对L-色氨酸的需求量日益增加。但由于长期以来L-色氨酸的生产难度高、价格昂贵，L-色氨酸在诸多领域未能大量得到推广应用。
L-色氨酸发酵研究始于二十世纪60年代初期。虽然对这种方法的研究进行得比较早，但在之后相当长的一段发展时期内，并没有达不到工业化生产的要求。主要原因是从葡萄糖到L-色氨酸的生物合成需要经过二十多步反应，途径比较漫长，其代谢流也相对比较弱，另一方面，L-色氨酸生物合成途径中包含着复杂的调控机制，加重了对菌株改造的难度。从葡萄糖被细菌吸收开始，需要经过细胞膜上的磷酸转运***(PhosphotransferaseSystem,PTS)，糖酵解途径(Embden Meyerhof Parnas,EMP)和磷酸戊碳糖途径(HexoseMonophosphate Pathway,HMP)，分别合成前体磷酸烯醇式丙酮酸(Phosphoenolpyruvate,PEP)和赤藓糖-4-磷酸(D-erythrose-4-phosphate,E4P)，经过共有的莽草酸途径到达分支酸，然后在分支合成三种芳香族氨基酸L-苯丙氨酸，L-酪氨酸，L-色氨酸。
在L-色氨酸代谢过程中，从葡萄糖到L-色氨酸的生物合成途径长，需要多种来自不同代谢流路的前体物(如PEP，E4P，L-丝氨酸，谷氨酰胺，PRPP等)，尤其是PEP与L-丝氨酸来源于EMP途径，E4P与PRPP来源于HMP途径，在强化代谢流路的同时，不易实现代谢平衡。另外，L-色氨酸生物合成途径中的代谢调控机制也比较复杂，存在多种反馈抑制和反馈阻遏。Berry A在大肠杆菌中高表达去除反馈抑制的aroG，trpEDCBA基因，发酵50小时，产色氨酸40-45g/L，对葡萄糖的过程转化率超过22％(Barry A,Improving production ofaromatic compounds in Escherichia coli by metabolic engineering.TrendsBiotechnol,14:250-256,1996)。
1979年Tribe和Pittard首次利用DNA重组技术将trpE引入到大肠杆菌(E.coli)中，L-色氨酸的产量达到了1g/L(Tribe D E et al.,Applied and environmentalmicrobiology,1979,38(2):181-190.)。此后，随着重组DNA技术在微生物育种中的广泛应用，在筛选L-色氨酸生产菌技术方面和产酸菌株方面取得了重大突破。例如，1999年，Ikeda等在产L-色氨酸的谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)pIK9960中高表达tktA基因，增强L-色氨酸合成前体E4P的水平，从而提高L-色氨酸的合成效率，发酵80小时的L-色氨酸产量达到58g/L(Ikeda M et al.,Applied and environmental microbiology,1999,65(6):2497-2502.)。2017年，Zeng等通过基因工程纯理性改造的方法得到高产L-色氨酸菌株S028，通过发酵61h，L-色氨酸产量达到了40.3g/L(Chen L et al.,Appliedmicrobiology and biotechnology,2017,101(2):559-568.)
上述改造方法虽然一定程度上提高了菌株合成L-色氨酸的能力，但由于我们对微生物生理及遗传背景了解的局限性，传统的改造策略并非能达到我们的预期。因此，亟需进一步寻求高产L-色氨酸工程菌的改造策略，以获得满足工业化需求的L-色氨酸工程菌。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一株高产L-色氨酸工程菌株及其发酵生产L-色氨酸的方法，以满足L-色氨酸的大规模工业化生产。
为达到上述目的，第一方面，本发明提供了一种高产L-色氨酸工程菌的构建方法，其包括如下步骤：
(1)在出发菌株中敲除tnaA、mlc基因，过表达aroG基因及trpEDCBA操纵子，获得产L-色氨酸底盘细胞；
(2)构建检测L-色氨酸含量的生物传感器，
(3)将步骤(2)构建得到的生物传感器导入步骤(1)的底盘细胞中；
(4)对步骤(3)带有生物传感器的底盘细胞进行诱变处理；
(5)筛选获得较底盘细胞L-色氨酸产量提高的诱变菌株。
其中步骤(1)中的出发菌株为细菌，更优选为大肠杆菌，进一步优选为MG1655；
优选地，步骤(2)中的生物传感器的核心元件为tanC基因，tanC基因所表达蛋白TnaC作为依赖细胞内色氨酸浓度的输入显示器，将胞内色氨酸的浓度转化为GFP荧光蛋白信号进行检测；
步骤(4)中的诱变方法为化学诱变或物理诱变，优选为物理诱变，进一步优选为ARTP诱变；
优选地，步骤(5)的筛选方法为高通量筛选，优选为采用流式细胞仪进行高通量筛选。
第二方面，本发明提供了一株高产L-色氨酸工程菌，该菌株经鉴定为大肠埃希氏菌(Escherichia coli)，该菌株已于2018年5月16日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101)，保藏编号为CGMCC NO.15765。
第三方面，本发明提供了一种生产L-色氨酸的方法，其包括如下步骤：
(1)在一定温度条件下培养第一方面所获得L-色氨酸产量提高的诱变菌株或第二方面所述菌株；
(2)按2％-10％转接量转接步骤(1)中的菌株至发酵培养基并培养30-60小时；
(3)离心收集步骤(2)中的发酵液，HPLC检测。
其中，步骤(1)的培养温度为30-40℃，优选为37℃；
优选地，步骤(2)中的接种量为5％。
第四方面，本发明提供了高产L-色氨酸菌株在生产L-色氨酸中的应用。
第五方面，本发明提供了高产L-色氨酸菌株在饲料、医药、食品中的应用。
附图说明
图1.Ptrc99a-trp质粒图谱。
图2.L-色氨酸生物传感器对胞外添加丙氨酸-色氨酸的响应结果。
图3.高通量筛选菌株发酵柱状图。
图4.摇瓶发酵结果。
具体实施方式
实施例1：构建L-色氨酸生产底盘细胞
Cas9-tnaA质粒构建：以MG1655为模板，用引物tnaA-up-F、tnaA-up-R扩增带接头的tanA-UP片段，用引物tnaA-down-F、tnaA-down-R扩增带接头的tnaA-Down片段。tnaA-UP片段和tnaA-Down片段通过组装成tnaA-UD片段。以cas9质粒为模板，用引物tnaA-n20-F、tnaA-ver-R扩增质粒骨架tnaA-ver1片段，用引物tnaA-ver-F、tnaA-n20-R扩增质粒骨架tnaA-ver2片段。质粒骨架tnaA-ver1、tnaA-ver2与上面的片段tnaA-UD通过Gibsonassembly(Gibson assembly方法是Gibson等发明的将多个DNA片段在1次反应中实现分子间连接)得到cas9-tnaA质粒。
Cas9-mlc质粒构建：以MG1655为模板，用引物mlc-up-F、mlc-up-R扩增带接头的mlc-UP片段，用引物mlc-down-F、mlc-down-R扩增带接头的mlc-Down片段。mlc-UP片段和mlc-Down片段通过组装成mlc-UD片段。以cas9质粒为模板，用引物mlc-n20-F、mlc-ver-R扩增质粒骨架mlc-ver1片段，用引物mlc-ver-F、mlc-n20-R扩增质粒骨架mlc-ver2片段。质粒骨架mlc-ver1、mlc-ver2与上面的片段mlc-UD通过Gibson assembly得到cas9-mlc质粒。
pH5a-aroG-trpEDCBA质粒构建：以MG1655为模板，用引物aroG-F、aroG-R扩增带接头的aroG片段。以PH5a质粒做模板，pH5a-M-F、pH5a-M-R扩增带接头的pH5a-M片段。以aroG片段和pH5a-M片段为模板，aroG-F、pH5a-M-R引物扩增得到用于Gibson assembly的aroG-M-Gibson片段。以MG1655为模板，用引物trpEDCBA-F、trpEDCBA-R扩增带接头的trpEDCBA-Gibson片段。以pH5a-ver-F、pH5a-ver-R扩增带接头的质粒骨架，与上面的aroG-M-Gibson片段、trpEDCBA-Gibson片段通过Gibson assembly得到pH5a-aroG-trpEDCBA质粒。
本部分所用引物如下：
表1构建L-色氨酸生产底盘细胞所用到的引物
把质粒cas9-tnaA导入到菌株MG1655中，构建菌株MG1655-cas9-tnaA。通过在培养基中添加***糖进行诱导敲除，最终构建敲除tnaA基因后的菌株MG1655△tnaA。
把质粒cas9-mlc导入到菌株MG1655△tnaA中，构建菌株MG1655△tnaA-ptrc99a-mlc。通过在培养基中添加***糖进行诱导敲除，最终构建敲除mlc基因后的菌株MG1655△tnaA△mlc。
把质粒pH5a-aroG-trpEDCBA化转入菌株MG1655△tnaA中△mlc，从而构建菌株TD0。本部分所用到的菌株及质粒如下：
表2构建L-色氨酸生产底盘细胞所用菌株和质粒
实施例2：L-色氨酸生物传感器的构建
Ptrc99a-trp质粒构建：以MG1655为模板，用引物tnaC-F、tanC-R扩增带接头的tnaC-tnaA(tnaC的前24bp到tnaA的启动子后30bp)片段。以pMA5质粒为模板，用引物GFP-F、GFP-R扩增带接头的GFP片段。以tanC-tnaA片段和GFP片段为模板，用引物tanC-F、GFP-R扩增用于Gibson assembly的tnaC-GFP-Gibson片段。以质粒ptrc99a为模板，用引物ptrc99a-ver-F、ptrc99a-ver-R扩增得到ptrc99a质粒骨架，与上面的tnaC-GFP-Gibson片段通过Gibson assembly得到ptrc99a-trp质粒，质粒图谱如图1所示。TnaC作为依赖细胞内色氨酸浓度的输入显示器，将胞内色氨酸的浓度转化为GFP荧光蛋白信号进行检测。
本部分所用引物如下：
表3 L-色氨酸生物传感器的构建所用到的引物
表4 L-色氨酸生物传感器的构建所用菌株及质粒
为了验证ptrc99a-trp的效果，我们把质粒ptrc99a-trp导入到菌株TD0中得到菌株TD0-trp。挑取单菌落于LB中过夜培养，12h后以1:100的比例转接于M9培养基中，待OD长到0.4-0.5时，胞外添加不同浓度的丙氨酸-色氨酸二肽到培养液中进行测试，培养8h后，用酶标仪进行荧光定量(激发483nm，发射525nm)。结果如图2所示，胞内L-色氨酸的浓度与荧光强度呈一定的线性关系。
实施例3：高通量筛选
为了获得一个比较广的突变库，我们对底盘细胞进行了等离子体(ARTP)诱变。诱变后的菌活化后，混合菌液通过两轮流式细胞仪进行筛选。第一轮筛选，经过诱变的细胞经过过夜培养OD长至1.0左右，进行流式筛选，荧光值达到前0.3％的被分选出来，并扩大培养至OD为1.0左右。第二轮筛选，经过第一轮分选出来的细胞经过培养后，通过流式细胞仪把荧光值高达前0.3％的分选到含有500μL培养基的96孔板中过夜培养并涂布于固体培养基中得到单菌落。
实施例4：菌株发酵验证
通过流式细胞仪分选出来的菌株，挑取96个单菌落(包含一个对照菌株)于含有500μL LB的96孔板中过夜培养，然后按5％(v/v)接种量接种到含有500μL发酵培养基的96孔板中(三个平行)，在37℃，200rpm/min条件下培养38h。
实施例5：发酵菌株高效液相色谱法(HPLC)检测
将发酵液在冷冻离心机中5500rpm/min离心15-20min，收集上清，上清经0.22μm滤膜过滤后做HPLC检测。发酵结果如图3所示，T20菌株L-色氨酸产量最高，色氨酸产量达到1.91g/L，是底盘菌株L-色氨酸产量的6.8倍。T20菌株的丢掉质粒ptrc99a-trp后命名为菌株TD。
HPLC条件为：色谱柱为ZORBAX Eclipse AAA(氨基酸分析)色谱柱，流动相A：40mMNa2HPO4，pH 7.8,流动相B：甲醇：乙腈：水＝45:45:10，v/v/v。洗脱梯度为0-1min,100％A；9.8min:43％A+57％B；10min:100％B；12min:100％B；12.5min:100％A。流速2.0mL/min，串联连接RID、VWD检测器，检测池温度控制在40℃，进样量为10μL，分析时间26min，紫外检测波长338nm。
实施例6：L-色氨酸工程菌株TD摇瓶发酵验证
分别挑取基因工程菌株TD和对照菌株TD0的单菌落接种于含5ml LB培养基的试管中，37℃过夜培养，然后按5％的接种量转接至含30ml发酵培养基的250ml摇瓶中进行发酵，于37℃发酵38小时。
将发酵液在冷冻离心机中5500rpm/min离心15-20min，收集上清，上清经0.22μm滤膜过滤后做HPLC检测。发酵结果如图4所示，TD菌株L-色氨酸产量为1.88g/L，较对照菌株产量提高了507％。

Claims (10)

1.一种高产L-色氨酸工程菌的构建方法，包括如下步骤：
(1)在出发菌株中敲除tnaA、mlc基因，过表达aroG基因及trpEDCBA操纵子，获得产L-色氨酸底盘细胞；
(2)构建检测L-色氨酸含量的生物传感器；
(3)将步骤(2)构建得到的生物传感器导入步骤(1)的底盘细胞中；
(4)对步骤(3)带有生物传感器的底盘细胞进行诱变处理；
(5)筛选获得较底盘细胞L-色氨酸产量提高的诱变菌株。
2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(1)中的出发菌株为细菌，更优选为大肠杆菌，进一步优选为MG1655。
3.如权利要求1或2所述的构建方法，其特征在于，步骤(2)中生物传感器的核心元件为tanC基因。
4.如权利要求1-3任一所述的构建方法，其特征在于，步骤(4)中的诱变方法为化学诱变或物理诱变，优选为物理诱变，更优选为ARTP诱变。
5.如权利要求1-4任一所述的构建方法，其特征在于，步骤(5)中的筛选方法为高通量筛选，优选为流式细胞仪筛选。
6.权利要求1-5任一方法筛选得到的L-色氨酸产量提高的诱变菌株。
7.一株高产L-色氨酸工程菌，其特征在于，所述工程菌为大肠埃希氏菌(Escherichiacoli)，保藏编号为CGMCC NO.15765。
8.一种制备L-色氨酸的方法，包括如下步骤：
(1)在一定温度条件下培养权利要求1-5筛选获得的L-色氨酸产量提高的诱变菌株或权利要求7所述工程菌；
(2)按2％-10％转接量转接步骤(1)中的菌株至发酵培养基并培养30-60小时；
(3)离心收集步骤(2)中的发酵液，检测L-色氨酸产量。
9.如权利要求8所述方法，其特征在于，步骤(1)的培养温度为30-40℃，优选为37℃；步骤(2)的接种量为5％。
10.权利要求1-6筛选得到的L-色氨酸产量提高的诱变菌株及权利要求7所述高产L-色氨酸工程菌在生产L-色氨酸中的应用。
CN201910090483.1A 2018-08-03 2019-01-30 一株高产l-色氨酸工程菌株及其应用 Pending CN110591989A (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2018108785395 2018-08-03
CN201810878539 2018-08-03

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN110591989A true CN110591989A (zh) 2019-12-20

Family

ID=68852500

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910090483.1A Pending CN110591989A (zh) 2018-08-03 2019-01-30 一株高产l-色氨酸工程菌株及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110591989A (zh)

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111235136A (zh) * 2020-01-19 2020-06-05 中国科学院天津工业生物技术研究所 异柠檬酸裂合酶突变体及其在制备芳香族氨基酸中的应用
CN113549588A (zh) * 2021-06-25 2021-10-26 天津科技大学 用于产生5-羟基色氨酸的基因工程菌及其构建方法与应用
WO2022007205A1 (zh) * 2020-07-08 2022-01-13 江南大学 一种提高大肠杆菌胞内血红素含量的方法
CN115820633A (zh) * 2022-08-15 2023-03-21 中国科学院天津工业生物技术研究所 一种正向响应葡萄糖吸收速率的生物传感器及其应用
CN115895976A (zh) * 2022-12-20 2023-04-04 黑龙江金象生化有限责任公司 一株产l-色氨酸的大肠杆菌及其生产l-色氨酸的应用

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101307301A (zh) * 2007-05-17 2008-11-19 浙江升华拜克生物股份有限公司 L-色氨酸基因工程菌及其生产l-色氨酸的方法
EP2098597A1 (de) * 2008-03-04 2009-09-09 Evonik Degussa GmbH Verfahren zur Herstellung von L-Aminosäuren unter Verwendung von verbesserten Stämmen der Familie Enterobacteriaceae
CN102140431A (zh) * 2010-12-21 2011-08-03 大成生化科技(松原)有限公司 L-色氨酸基因工程菌,其构建方法以及使用其发酵生产l-色氨酸的方法
CN102453691A (zh) * 2011-12-02 2012-05-16 山东鲁抗生物制造有限公司 高产l-色氨酸的大肠杆菌工程菌
CN104388330A (zh) * 2014-09-26 2015-03-04 廊坊梅花生物技术开发有限公司 一种l-色氨酸发酵菌株及其发酵生产l-色氨酸的方法
CN105543154A (zh) * 2016-01-13 2016-05-04 廊坊梅花生物技术开发有限公司 一种产l-色氨酸基因工程菌及其构建方法与用途

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101307301A (zh) * 2007-05-17 2008-11-19 浙江升华拜克生物股份有限公司 L-色氨酸基因工程菌及其生产l-色氨酸的方法
EP2098597A1 (de) * 2008-03-04 2009-09-09 Evonik Degussa GmbH Verfahren zur Herstellung von L-Aminosäuren unter Verwendung von verbesserten Stämmen der Familie Enterobacteriaceae
CN102140431A (zh) * 2010-12-21 2011-08-03 大成生化科技(松原)有限公司 L-色氨酸基因工程菌,其构建方法以及使用其发酵生产l-色氨酸的方法
CN102453691A (zh) * 2011-12-02 2012-05-16 山东鲁抗生物制造有限公司 高产l-色氨酸的大肠杆菌工程菌
CN104388330A (zh) * 2014-09-26 2015-03-04 廊坊梅花生物技术开发有限公司 一种l-色氨酸发酵菌株及其发酵生产l-色氨酸的方法
CN105543154A (zh) * 2016-01-13 2016-05-04 廊坊梅花生物技术开发有限公司 一种产l-色氨酸基因工程菌及其构建方法与用途

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JACQUELINE PLUMBRIDGE: "Regulation of gene expression in the PTS in Escherichia coli: the role and interactions of Mlc", 《CURRENT OPINION IN MICROBIOLOGY》 *
MICHAEL BOTT ET AL.: "Need for speed - finding productive mutations using transcription factor-based biosensors, fluorescence-activated cell sorting and recombineering", 《MICROBIAL BIOTECHNOLOGY》 *
SUSY BEATRIZ CARMONA ET AL.: "Inactivation of the PTS as a Strategy to Engineer the Production of Aromatic Metabolites in Escherichia coli", 《J MOL MICROBIOL BIOTECHNOL》 *
左祖桢: "大肠杆菌色氨酸高产菌株的构建", 《中国优秀博硕士学位论文全文数据库(硕士) 工程科技Ⅰ辑》 *

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111235136A (zh) * 2020-01-19 2020-06-05 中国科学院天津工业生物技术研究所 异柠檬酸裂合酶突变体及其在制备芳香族氨基酸中的应用
CN111235136B (zh) * 2020-01-19 2021-10-22 中国科学院天津工业生物技术研究所 异柠檬酸裂合酶突变体及其在制备芳香族氨基酸中的应用
WO2022007205A1 (zh) * 2020-07-08 2022-01-13 江南大学 一种提高大肠杆菌胞内血红素含量的方法
CN113549588A (zh) * 2021-06-25 2021-10-26 天津科技大学 用于产生5-羟基色氨酸的基因工程菌及其构建方法与应用
CN113549588B (zh) * 2021-06-25 2023-02-03 天津科技大学 用于产生5-羟基色氨酸的基因工程菌及其构建方法与应用
CN115820633A (zh) * 2022-08-15 2023-03-21 中国科学院天津工业生物技术研究所 一种正向响应葡萄糖吸收速率的生物传感器及其应用
CN115895976A (zh) * 2022-12-20 2023-04-04 黑龙江金象生化有限责任公司 一株产l-色氨酸的大肠杆菌及其生产l-色氨酸的应用
CN115895976B (zh) * 2022-12-20 2024-02-06 哈尔滨象柏生物科技有限公司 一株产l-色氨酸的大肠杆菌及其生产l-色氨酸的应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN110591989A (zh) 一株高产l-色氨酸工程菌株及其应用
CN104342390B (zh) 一种苜蓿中华根瘤菌株及其组合物与应用
CN110591990B (zh) 一株高产核黄素工程菌株及其应用
CN114480173B (zh) 一株大肠埃希氏菌及其在发酵生产l-色氨酸中的应用
CN105385646A (zh) 5-羟色氨酸的前体定向生物合成
WO2023208146A1 (zh) 生物合成麦角硫因的方法及载体
CN116333956A (zh) 一种谷氨酸棒状杆菌及采用谷氨酸棒状杆菌发酵生产l-缬氨酸的方法
EP3533872A1 (en) Method for modifying amino acid attenuator and use of same in production
CN104745520B (zh) 一种高产l‑苯丙氨酸的优良菌株及其应用
CN108642041B (zh) 一种提高重组大肠杆菌发酵生产l-丙氨酸能力的方法
CN109929786B (zh) 发酵法生产酪氨酸的大肠杆菌及其构建方法与应用
CN111926002B (zh) TrpE的突变体及其在产L-色氨酸的基因工程菌中的应用
CN117603896A (zh) 合成酪氨酸及其衍生物的基因工程菌及其构建方法和应用
CN107287197A (zh) 组氨酸衰减子突变体和解决反馈阻遏的组氨酸操纵子以及它们的应用
CN108998401B (zh) 一种生产3-氨基异丁酸的方法
CN104560856B (zh) 一种好氧合成维生素b12的大肠杆菌及其构建与应用
CN108531518A (zh) 一种提高大肠杆菌积累丙酮酸的方法
CN113817757B (zh) 一种生产樱桃苷的重组酵母工程菌株及应用
CN114085801B (zh) 一株生产l-色氨酸的重组大肠杆菌及其应用
CN113801901B (zh) 一种发酵生产l-苯丙氨酸的方法
CN105647950A (zh) 一种提高维生素b12产量重组菌的构建方法及其应用
CN114058635B (zh) 一种用于靛玉红生产的大肠杆菌基因工程菌及其构建方法以及一种靛玉红的生产方法
CN113174393B (zh) 一种改善大肠杆菌耐药性的方法及其应用
CN112899319B (zh) 一种田园除草剂转化为茶氨酸的绿色合成方法
CN117660577B (zh) LtaSA蛋白或其编码基因在核黄素生产中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20191220