CN110577976A - 一种绿豆低聚肽粉及其制备方法 - Google Patents
一种绿豆低聚肽粉及其制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种绿豆低聚肽粉及其制备方法，所述绿豆低聚肽粉的肽含量在85wt％以上，其中98％以上绿豆肽的分子量小于1000Dalton。其制备方法包括蛋白提取、生物酶酶解、过滤、浓缩和干燥，操作工序简单、对环境无污染、对人体无伤害，产品率高、成本低，此工艺较为适合大规模生产。所述低聚肽粉具有较好的清除自由基活性等功效。
Description
技术领域
本发明属于食品加工领域，涉及一种绿豆低聚肽粉，其纯度高、活性好。本发明还涉及到一种绿豆低聚肽粉的制备工艺，工艺操作简便、绿色环保，适合大规模生产。
背景技术
近年来，随着药学、医学、医学免疫学以及分子生物学理论及技术的不断发展，人们对多肽类物质的生物活性有了更深刻的认识，对该类物质的研究也涉及到很多新的领域。由植物来源的活性多肽目前已经引起人们的关注，我国已经从植物中通过酶解、分离、纯化获得了很多活性肽并开发为新药和保健品。可见，植物肽在逐渐成为研究热点。
绿豆(Vigna radiata(Linn.)Wilczek.)是一种豆科豇豆属植物绿豆的成熟的种子，别名青小豆、菉豆、植豆等。绿豆是我国主要食用豆类作物，食用方式多种多样，既可以煮制用来做绿豆粥，又可以磨粉做糕，还可以发芽后作菜用。绿豆也是我国传统的药食兼用的食材，有“食中佳品，济世长谷”之美称。中医认为“绿豆，甘，寒，无毒。入心、胃经。主丹毒烦热，风疹，热气奔豚，生研绞汁服，亦煮食，消肿下气，压热解毒。”绿豆中含有丰富的蛋白质、碳水化合物、膳食纤维、多种维生素和矿物质。每100g绿豆含有21.6g的蛋白质和55.6g的碳水化合物。绿豆蛋白大多是球蛋白类，其氨基酸组成中赖氨酸含量丰富，而蛋氨酸、色氨酸和酪氨酸较少。长久以来，对绿豆的加工利用主要是以淀粉利用为主，绿豆中的蛋白质等其他营养成分未得到充分利用。近年来，由于功能食品受人们欢迎，对绿豆蛋白的生理功能和产品开发的研究也越来越多。
专利CN 103409490 A将含量为60％以上的绿豆蛋白粉复溶后，依次经过酶解、过滤、离子交换、浓缩干燥得到绿豆蛋白肽。工艺中使用到离子交换工艺，离子交换工艺需要酸碱再生，其再生频率大，酸碱用量大，对周围的水和大气环境均有较大程度的影响。专利CN 101979655 B发明人在蛋白酶解之前，将绿豆蛋白粉使用乙醇和亚硫酸钠进行预处理，亚硫酸钠会对眼睛、皮肤、粘膜有刺激作用，污染水源，受高热分解产生有毒的硫化物烟气，容易造成环境污染和人体健康。专利CN 103290086 B发明人通过两次酶解、活性炭吸附、过滤三遍制得绿豆蛋白肽，方法繁琐，成本增加。由此以上可知，开发一种方法简便、绿色环保、低成本的绿豆蛋白肽制备工艺成为研究热点。
本发明针对现有技术的不足，提供了一种绿豆低聚肽的制备方法，制备工艺中不需要任何有机溶剂和有害化学物质的加入，仅用单酶一步酶解，两步过滤法即可获得高纯绿豆低聚肽。本发明所提供的方法简便、易于操作、绿色环保、成本低、高收率，尤其适合大规模生产。
发明内容
本发明提供了一种高纯度、低分子量的绿豆低聚肽粉，同时提供一种操作简便、绿色环保、成本低、高收率的绿豆低聚肽粉的制备工艺。所制备的绿豆低聚肽粉具有较好的清除自由基活性，提高睡眠质量，提高机体对脂肪代谢，修复肌肉损伤并促进其生长，调节肠道pH值以改善有益菌群，增强营养吸收，润肠通便，修复肝损伤并提高其功能的功效。
一种绿豆低聚肽粉，其特征在于：肽含量在85wt％以上，其中98％以上绿豆肽的分子量小于1000Dalton。
所述绿豆低聚肽粉的肽含量检测方法是参照中华人民共和国国家标准GB/T22492-2008附录B和GB/T 22729-2008所述的肽含量的测定方法进行。
所述绿豆低聚肽粉的肽相对分子量分布测定方法是参照中华人民共和国国家标准GB/T 22492-2008附录A和GB/T 22729-2008附录A所述的高效凝胶过滤色谱法(GPC)进行。
所述绿豆低聚肽粉的制备方法，包括下述步骤：将绿豆蛋白粉加水复溶，依次经过酶解、纯化、浓缩和干燥后，得到绿豆低聚肽粉。
所述的制备方法中用于蛋白酶解的生物酶可以为中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、碱性蛋白酶、酸性蛋白酶、胃蛋白酶、胰酶、罗汉果蛋白酶、无花果蛋白酶中的一种或者它们的混合物。
所述的制备方法中的纯化方法可以为滤膜过滤法和树脂分离法，优选地使用滤膜过滤法。
所述的制备方法中的浓缩方法可以为真空浓缩、常压浓缩、膜浓缩法，优选地使用真空浓缩法。
所述的制备方法中的干燥方法可以为真空干燥、加热干燥、晾干、风干、冷冻干燥和喷雾干燥法。
所述的绿豆低聚肽粉是通过下述方法制备得到的：
绿豆蛋白粉预处理：将绿豆蛋白粉与水按重量比为1:20～1:30混合，记录此时体积为V，调整pH为8～12，搅拌20～30min后，加酸调整pH为3～5，去除上清液，沉淀物再加水至体积V，搅拌均匀，得到绿豆蛋白液；
酶解：将绿豆蛋白液加热至35～60℃，将pH值调节至中性，加入至少绿豆蛋白粉重量的0.1wt％以上的蛋白酶，搅拌酶解至少3h，煮沸灭活至少2min，得到蛋白酶解液。
分离纯化：将蛋白酶解液经微滤膜处理，浓缩干燥后得到绿豆低聚肽粉。
一种组合物，其含有本发明所述的绿豆低聚肽粉和，药物或食品上可接受的助剂。
根据现有技术，本发明可将所述的组合物制备成任意所述剂型，如素片、薄膜包衣片、糖衣片、肠衣片、分散片、胶囊、颗粒剂、口服溶液或口服混悬液，以及液体、乳液、膏霜、粉、块状等化妆品剂型。
本发明所述的绿豆低聚肽粉用于制备预防或治疗自由基过多引起的症状的食品、保健食品或药品；用于制备提高脂肪代谢的食品、保健食品或药品；用于制备预防肌肉流失、修复肌肉损伤、增长肌肉组织的食品、保健食品或药品；用于制备调节肠道有益菌群、提高肠胃动力、促进营养吸收的食品、保健食品或药品；用于制备预防、改善、或治疗肝损伤引起的相关疾病的食品、保健食品或药品。
与现有产品和技术相比，本发明具有如下优点：
(1)本发明提供的绿豆低聚肽粉具有纯度高、分子量小的特点，更易吸收，功效更强。
(2)本发明提供的绿豆低聚肽粉水溶性很好，其水溶液澄清，口感好，尤其适合用作液体饮料等。
(3)本发明提供的绿豆低聚肽粉的制备工艺，仅用一步酶解、一种酶即可，无需多种酶多步水解。使用到的生物酶种类越多，前期酶活力检测工作量也就越大，生物酶的购买成本也就越高，从而造成成本的上升。多步酶解造成工艺步骤复杂，水解时间延长，成本增加。
(4)本发明提供的绿豆低聚肽粉的制备工艺，不需要任何有机溶剂，不需要任何有毒或有害的化学物质的加入，产品也就不可能有任何有机溶剂或者任何有毒或有害的化学物质的残留，绿色环保，对人体无害，产品可以放心食用。
(5)本发明使用的蛋白酶均为食用酶，并且来源广泛、成本低、添加量少。
(6)本发明参照中华人民共和国国家标准GB/T 22492-2008附录B和GB/T 22729-2008所述的肽含量和相对分子量分布的测定方法进行检测，此方法公认度高。
附图说明
图1：绿豆肽处理后斑马鱼肠道中的短乳杆菌生长的影响；
图2：绿豆肽处理后斑马鱼肝脏脂肪信号强度典型图；
图3：绿豆肽处理后斑马鱼肌纤维H&E染色结果。
实施例
下面通过实施例对本发明作进一步说明。应该理解的是，本发明实施例所述方法仅仅是用于说明本发明，而不是对本发明的限制，在本发明的构思前提下对本发明制备方法的简单改进都属于本发明要求保护的范围。如无特别说明，实施例中用到的所有原料和溶剂均为市售产品。
制备实施例1
将100kg绿豆蛋白粉(蛋白含量为30wt％以上)，加水2000L，加入浓度约为2mol/L的食品级氢氧化钠以调整pH为8.5～9.5，搅拌30min后，边搅拌边加入浓度约为1mol/L食品级盐酸以调整pH为3.5～4.0，静置至沉淀物与上清液分离后，弃去上清液后，再加水至2000L，搅拌均匀，即为绿豆蛋白液。将绿豆蛋白液加热至45℃，将pH值调节至中性，加入100g食品级中性蛋白酶(酶活力为30万u/g)，搅拌酶解至3h后，煮沸灭活2min，得到蛋白酶解液。将蛋白酶解液经孔径为0.1μm的微滤膜处理后，在温度约60℃下浓缩至固含为5wt％时，喷雾干燥，得到18.5kg绿豆低聚肽粉(批号L-1)，产率为18.5wt％。采用GB/T22492-2008附录A与附录B的检测方法，测得肽含量为87.7％，小于1000Dalton分子量占98.1％。
制备实施例2
将100kg绿豆蛋白粉(蛋白含量为70wt％以上)，加水3000L，加入浓度约为2mol/L的食品级氢氧化钠以调整pH为10.5～11.0，搅拌30min后，边搅拌边加入浓度约为1mol/L食品级盐酸以调整pH为4.5～5.0，静置至沉淀物与上清液分离后，弃去上清液后，再加水至3000L，搅拌均匀，即为绿豆蛋白液。将绿豆蛋白液加热至45℃，将pH值调节至中性，加入100g食品级木瓜蛋白酶(酶活力为40万u/g)，搅拌酶解至3h后，煮沸灭活5min，得到蛋白酶解液。将蛋白酶解液经孔径为0.5μm的微滤膜处理后，在温度约50℃下浓缩至固含为5wt％时，喷雾干燥，得到42.2kg绿豆低聚肽粉(批号L-2)，产率为42.2wt％。采用GB/T22492-2008附录A与附录B的检测方法，测得肽含量为85.8％，小于1000Dalton分子量占98.4％。
制备实施例3
将100kg绿豆蛋白粉(蛋白含量为80wt％以上)，加水3000L，搅拌均匀，即为绿豆蛋白液。将绿豆蛋白液加热至45℃，将pH值调节至中性，加入100g食品级中性蛋白酶(酶活力为30万u/g)，搅拌酶解至3h后，煮沸灭活5min，得到蛋白酶解液。将蛋白酶解液经孔径为0.5μm的微滤膜处理后，在温度约80℃下浓缩至固含为5wt％时，喷雾干燥，得到63.4kg绿豆低聚肽粉(批号L-3)，产率为63.4wt％。采用GB/T22492-2008附录A与附录B的检测方法，测得肽含量为86.0％，小于1000Dalton分子量占99.0％。
制备实施例4
将100kg绿豆蛋白粉(蛋白含量为80wt％以上)，加水3000L，搅拌均匀，即为绿豆蛋白液。将绿豆蛋白液加热至55℃，将pH值调节至中性，加入100g食品级菠萝蛋白酶(酶活力为30万u/g)，搅拌酶解至3h后，煮沸灭活5min，得到蛋白酶解液。将蛋白酶解液经孔径为0.5μm的微滤膜处理后，在温度约80℃下浓缩至固含为5wt％时，真空干燥后，得到62kg绿豆低聚肽粉(批号L-4)，产率为62wt％。采用GB/T22492-2008附录A与附录B的检测方法，测得肽含量为85.1％，小于1000Dalton分子量占98.4％。
制备实施例5
将100kg绿豆蛋白粉(蛋白含量为80wt％以上)，加水3000L，搅拌均匀，即为绿豆蛋白液。将绿豆蛋白液加热至50℃，将pH值调节至8.0～9.0，加入100g食品级碱性蛋白酶(酶活力为20万u/g)，搅拌酶解至3h后，煮沸灭活5min，得到蛋白酶解液。将蛋白酶解液经孔径为10μm的微滤膜处理后，在温度约80℃下浓缩至固含为5wt％时，冷冻干燥后，得到64.4kg绿豆低聚肽粉(批号L-5)，产率为64.4wt％。采用GB/T 22492-2008附录A与附录B的检测方法，测得肽含量为86.6％，小于1000Dalton分子量占99.1％。
制备实施例6
将100kg绿豆蛋白粉(蛋白含量为80wt％以上)，加水3000L，搅拌均匀，即为绿豆蛋白液。将绿豆蛋白液加热至45℃，将pH值调节至8.5～9.0，加入100g食品级胰蛋白酶(酶活力为20万u/g)，搅拌酶解至4h后，煮沸灭活2min，得到蛋白酶解液。将蛋白酶解液经孔径为5μm的微滤膜处理后，在温度约60℃下浓缩至固含为5wt％时，常压干燥，得到65.4kg绿豆低聚肽粉(批号L-6)，产率为65.4wt％。采用GB/T22492-2008附录A与附录B的检测方法，测得肽含量为85.9％，小于1000Dalton分子量占98.8％。
制备实施例7
将100kg绿豆粉，加水3000L，加入浓度约为2mol/L的食品级氢氧化钠以调整pH为9.5～10.0，搅拌60min后，边搅拌边加入浓度约为1mol/L食品级盐酸以调整pH为3.5～4.0，静置至沉淀物与上清液分离后，弃去上清液后，再加水至3000L，搅拌均匀，即为绿豆蛋白液。将绿豆蛋白液加热至45℃，将pH值调节至中性，加入100g食品级中性蛋白酶(酶活力为30万u/g)，搅拌酶解至5h后，煮沸灭活20min，得到蛋白酶解液。将蛋白酶解液经孔径为0.5μm的微滤膜处理后，在温度约50℃下浓缩至固含为5wt％时，喷雾干燥，得到11.1kg绿豆低聚肽粉(批号L-7)，产率为11.1wt％。采用GB/T 22492-2008附录A与附录B的检测方法，测得肽含量为85.3％，小于1000Dalton分子量占98.4％。生物活性实施例1(抗氧化活性作用评价)
1.ABTS+自由基清除实验
PBS缓冲液的配制：称取氯化钠8g，氯化钾0.2g，磷酸二氢钾0.24g，十二水合磷酸氢二钠3.62g，置于1000mL烧杯中，加入800mL蒸馏水，搅怑使其溶解，用盐酸或氢氧化钠调节pH至7.4，转移至1000mL容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀，待用。
ABTS+贮存溶液的配制：精密称取ABTS+78mg左右，置于20mL棕色容量瓶中，加入15mL蒸馏水，超声5min，用蒸馏水定容至刻度，摇匀。精密称取过硫酸钾76mg左右，置于2mL棕色容量瓶中，加入1mL蒸馏水，超声使其溶解，用蒸馏水定容至刻度，摇匀。精确吸取352μL过硫酸钾溶液加入至ABTS溶液中，摇匀，静置过夜。
ABTS+工作溶液的配制：精确吸取贮存溶液1mL，加入65mL左右PBS缓冲液，摇匀。
供试品溶液的配制：取绿豆肽粉(L-1)适量，精密称定，置于20mL棕色容量瓶中，加入15mL PBS缓冲液，超声5min，用PBS缓冲液定容至刻度，摇匀，即得。
操作步骤：准确吸取0.5mL供试品溶液和5mL ABTS工作溶液混合均匀；准确吸取0.5mL供试品溶液和5mL PBS缓冲液混合均匀；准确吸取5mL ABTS工作溶液和0.5mL PBS缓冲液混合均匀，立即在734nm处测定吸光度，并根据以下公式计算自由基清除率：
IR％＝[1-(Ai-Aj)/A0]*100％；
其中，Ai表示待测溶液和ABTS混合后溶液的吸光度；
Aj表示待测溶液和溶剂混合后溶液的吸光度；
A0表示ABTS和溶剂混合后溶液的吸光度。
2.SRSA超氧阴离子自由基清除实验
0.1moL/L PBS缓冲液(pH 7.4)的配制：称取氯化钠80g，氯化钾2g，磷酸二氢钾2.4g，三水合磷酸氢二钾23.1g，置于1000mL烧杯中，加入600mL蒸馏水，搅怑使其溶解，用盐酸或氢氧化钠调节pH至7.2，转移至1000mL容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀，待用。
150μmoL/L NBT溶液的配制：准确称取NBT 12.5mg置于100mL棕色容量瓶中，加入蒸馏水，超声使其溶解，并用蒸馏水定容至刻度，摇匀，即得。
60μmoL/L PMS溶液的配制：准确称取PMS 18.8mg，置于1000mL的容量瓶中，加入蒸馏水，超声使其溶解，并用蒸馏水定容至刻度，摇匀，即得。
468μmoL/L NADH溶液的配制：准确称取NADH 33.9mg，置于100mL的容量瓶中，加入蒸馏水，超声使其溶解，并用蒸馏水定容至刻度，摇匀，即得。
供试品溶液的配制：取绿豆肽粉(L-1)适量，精密称定，加水超声溶解，混匀，待测。
工作液的配制：取1mL 0.1moL/L PBS缓冲液(pH 7.4)于容量瓶中，加入1mL 150μmoL/L NBT溶液，加入2mL 468μmoL/L NADH溶液，加入1mL 60μmoL/L PMS溶液，搅拌均匀，25℃下反应5min，与560nm波长处测定其吸光度值。
操作步骤：准确吸取0.5mL供试品溶液和5mL上述工作溶液混合均匀；准确吸取0.5mL供试品溶液和5mL蒸馏水混合均匀；准确吸取5mL上述工作溶液和0.5mL蒸馏水混合均匀，立即在560nm处测定吸光度，并根据以下公式计算自由基清除率：
IR％＝[1-(Ai-Aj)/A0]*100％；
其中，Ai表示待测溶液和SRSA混合后溶液的吸光度；
Aj表示待测溶液和溶剂混合后溶液的吸光度；
A0表示SRSA和溶剂混合后溶液的吸光度。
配制绿豆肽粉(L-1)浓度为500μg/mL和1000μg/mL，以维生素C为阳性对照(浓度为100μg/mL)，测试结果如表1所示：
表1绿豆肽粉清除自由基测试结果
由表1可知，本发明方法所制备的绿豆肽粉对ABTS和SRSA自由基显示了较好的清除作用，具有较好的抗氧化活性。
生物活性实施例2(肠道菌群调节作用评价)
使用CM-DiI标记短乳杆菌，以6×106个/mL浓度短乳杆菌饲喂5dpf无菌野生型AB品系斑马鱼，建立斑马鱼肠道共生性细菌模型；将饲喂短乳杆菌的无菌斑马鱼放置35℃培养至6dpf。6dpf时，移除短乳杆菌并随机分配至6孔板中，每孔30尾，每孔养鱼水容量为3mL。用水溶绿豆肽粉(L-1)浓度为2000μg/mL浓度，同时设置模型对照组和正常对照组。将各实验组斑马鱼继续置于35℃培养6h后，每个实验组随机选择10尾斑马鱼在荧光显微镜下采集图片，计算斑马鱼肠道内短乳杆菌荧光强度(S，该荧光强度表示肠道短乳杆菌数量)，以荧光强度的统计分析结果评价绿豆肽粉对肠道菌群的调节作用。公式如下：肠道菌群调节作用(％)＝(S供试品-S模型组)/S模型组×100％，统计学分析采用单因素方差分析和T检验，p<0.05表明具有显著性差异，结果如表2所示。
表2绿豆肽粉对肠道内短乳杆菌调节作用(n＝10)
与模型对照组比较，*p<0.05
如表2所示，模型对照组斑马鱼肠道荧光强度为4189048像素，与正常对照组(1517330像素)比较p<0.001，表明肠道内有短乳杆菌生存，模型建立成功。绿豆肽粉浓度为2000μg/mL时，斑马鱼肠道荧光强度为5479110像素，与模型对照组418904像素比较p<0.05，肠道菌群调节作用为31％。表明绿豆肽粉可以促进肠道内短乳杆菌的生长，有明显的肠道菌群调节作用。
生物活性实施例3(保肝作用评价)
随机选取180尾受精后5天(5dpf)黑色素等位基因突变型半透明Albino品系斑马鱼于六孔板中，每孔(实验组)均处理30尾斑马鱼，用无水乙醇诱导斑马鱼建立酒精性脂肪肝模型。用水溶给予绿豆肽62.5μg/mL浓度，阳性对照药“RU21”100μg/mL浓度，同时设置正常对照组(养鱼用水处理斑马鱼)和模型对照组，每孔药液容量为3mL。除正常对照组外，其余实验组分别与无水乙醇共同处理30h。处理结束后，将斑马鱼置入4％多聚甲醛中固定，4℃过夜后取出，用PBS冲洗3遍，用丙二醇进行梯度脱水，再使用新鲜配制并过滤后的0.5％油红O工作液中染色过夜，染色结束后每组随机取10尾斑马鱼在解剖显微镜下观察斑马鱼肝脏，拍照并保存图片。用NIS-Elements D 3.10高级图像处理软件进行图像分析并采集数据，分析统计斑马鱼肝脏中的脂肪信号强度(S)，以肝脏脂肪信号强度的统计学分析结果评价供试品对无水乙醇诱导的酒精性脂肪肝的保护作用，统计学处理结果用mean±SE表示。保肝作用计算公式如下：保肝作用(％)＝(S模型-S供试品)/(S模型-S正常)×100％，用T-test检验进行统计学分析，p<0.05表明具有显著性差异，结果如表3所示。
表3绿豆肽粉的斑马鱼保肝作用(n＝10)
与正常对照组比较，***p<0.001；与模型对照组比较，△△△p<0.001
如表3所示，模型对照组斑马鱼肝脏脂肪信号强度(17863像素)与正常对照组(11883像素)比较p<0.001，表明模型建立成功。阳性对照药“RU21”100μg/mL浓度组斑马鱼肝脏脂肪信号强度为12742像素，与模型对照组比较p<0.001，保肝作用为86％，说明“RU21”对斑马鱼酒精性脂肪肝具有保护作用。绿豆肽62.5μg/mL浓度组斑马鱼肝脏脂肪信号强度为12901像素，与模型对照组比较为p<0.001，保肝作用分别为83％。提示在本实验浓度条件下，绿豆肽对斑马鱼酒精性脂肪肝具有明显的保护作用。
生物活性实施例4(增强肌纤维作用评价)
随机选取150尾受精后2天(2dpf)野生型AB品系斑马鱼于六孔板中，每孔均处理30尾斑马鱼，用无水乙醇诱导斑马鱼建立酒精性肌损伤模型。分别水溶给予绿豆肽(L-1)浓度为62.5μg/mL，同时设置正常对照组和模型对照组，每孔药液容量为3mL。除正常对照组外，其余实验组分别与无水乙醇共同处理30h。供试品处理结束后，对斑马鱼进行H&E染色(固定-脱水-包埋-切片-染色)，并进行病理学分析，如图3所示。
由图3可知，正常对照组斑马鱼骨骼肌细胞呈均一长条状，且横纹清晰；模型对照组肌纤维松弛伴炎细胞浸润，但无坏死。绿豆肽组肌纤维呈均一长条状，横纹清晰，并无肌炎或坏死，与正常对照组相似，提示在本实验浓度条件下，绿豆肽具有肌纤维保护作用。
Claims (8)
1.一种绿豆低聚肽粉，其特征在于：肽含量在80wt％以上，其中80％以上绿豆低聚肽的分子量小于700Dalton，优选地，85％以上绿豆低聚肽的分子量小于700Dalton，90％以上绿豆低聚肽的分子量小于700Dalton，95％以上绿豆低聚肽的分子量小于700Dalton；
分子量Dalton分布
优选地，
分子量Dalton分布
优选地，
分子量Dalton分布
数均分子量范围：20～1100，重均分子量范围：45～1300；优选地，数均分子量范围：100～1000，重均分子量范围：100～1200；优选地，数均分子量范围：200～900，重均分子量范围：150～1100；优选地，数均分子量范围：300～800，重均分子量范围：200～1000；优选地，数均分子量范围：400～700，重均分子量范围：300～900；肽含量的检测方法是参照GB/T22492-2008附录B和GB/T 22729-2008所述的肽含量的测定方法进行；肽分子量的测定方法是参照GB/T 22492-2008附录A和GB/T 22729-2008附录A所述的高效凝胶过滤色谱法(GPC)进行。
2.权利要求1所述的绿豆低聚肽粉的制备方法，其特征在于包括下述步骤：将绿豆蛋白粉加水复溶，依次经过酶解、分离纯化、浓缩和干燥后，得到绿豆低聚肽粉；所述绿豆蛋白粉为市售绿豆蛋白粉。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述的酶解所用的生物酶可以为中性蛋白酶(酶活力≥30万u/g)、木瓜蛋白酶(酶活力≥40万u/g)、菠萝蛋白酶(酶活力≥30万u/g)、碱性蛋白酶(酶活力≥20万u/g)、酸性蛋白酶、胃蛋白酶(酶活力≥50万u/g)、胰酶(酶活力≥3000u/g)、无花果蛋白酶(酶活力≥5万u/g)、罗汉果蛋白酶(酶活力≥5万u/g)中的一种或者它们的混合物，优选地使用食品级的中性蛋白酶；所述酶的混合物的比例为1:1～1:10。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述的纯化方法可以为滤膜过滤法和树脂分离法，优选地使用滤膜过滤法；所述的浓缩方法可以为真空浓缩、常压浓缩、膜浓缩法，优选地使用真空浓缩法；所述的干燥方法可以为真空干燥、加热干燥、晾干、风干、冷冻干燥和喷雾干燥法，优选地使用喷雾干燥法。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于包括下述操作步骤：
绿豆蛋白粉预处理：将绿豆蛋白粉与水按重量比为1:20～1:30混合，记录此时体积为V，调整pH为8～12，搅拌20～30min后，加酸调整pH为3～5，去除上清液，沉淀物再加水至体积V，搅拌均匀，得到绿豆蛋白液；
酶解：将绿豆蛋白液加热至35～60℃，将pH值调节至中性，加入至少绿豆蛋白粉重量的0.1wt％以上的中性蛋白酶，搅拌酶解至少3h，煮沸灭活至少2min，得到蛋白酶解液。
分离纯化：将蛋白酶解液依次经孔径为0.1～0.5μm的微滤膜、2000～20000Dalton处理后；
浓缩和干燥：在40～80℃下浓缩至固含为3～5wt％时，喷雾干燥，进口温度为140～160℃，出口温度为55～65℃，得到绿豆低聚肽粉，产率50wt％以上。
6.一种绿豆低聚肽粉，肽含量在70wt％以上，其中80％以上绿豆低聚肽的分子量小于700Dalton，其特征在于：通过权利要求2-5任一所述的方法制备所得；肽含量的检测方法是参照GB/T 22492-2008附录B和GB/T 22729-2008所述的肽含量的测定方法进行；肽分子量的测定方法是参照GB/T 22492-2008附录A和GB/T 22729-2008附录A所述的高效凝胶过滤色谱法(GPC)进行。
7.一种组合物，其特征在于：含有权利要求1所述的绿豆低聚肽粉和，药物或食品上可接受的助剂；优选地，其剂型选自素片、薄膜包衣片、糖衣片、肠衣片、分散片、胶囊、颗粒剂、口服溶液或口服混悬液，以及液体、乳液、膏霜、粉、块状等化妆品剂型。
8.权利要求1所述的绿豆低聚肽粉或权利要求7所述的组合物用于制备治疗或预防自由基过多引起的症状的食品、保健食品或药品的应用；用于制备调节肠道有益菌群、提高肠胃动力、促进营养吸收的食品、保健食品或药品的应用；用于制备预防、改善、或治疗肝肺损伤引起的相关疾病的食品、保健食品或药品的应用；用于制备预防肌肉流失、修复肌肉损伤、增长肌肉组织的食品、保健食品或药品的应用。
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