CN110507680A - 一种治疗面部痤疮、酒糟鼻的复方外用擦剂及其制备方法 - Google Patents

一种治疗面部痤疮、酒糟鼻的复方外用擦剂及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种治疗面部痤疮、酒糟鼻的复方外用擦剂及其制备方法，其中，该擦剂包括氯霉素、甲硝唑、维生素B6、尿囊素、积雪草萃取液、***磷酸钠、乙醇、丙二醇。本发明的复方外用擦剂对面部痤疮和酒糟鼻都有较好的效果，其对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑制活性均较强，对螨虫有强的抑杀作用，同时，可促进组织修复，兼具抗炎消炎功效，且药剂无刺激性，温和性好，适用性广。

Description

一种治疗面部痤疮、酒糟鼻的复方外用擦剂及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种治疗皮肤病的药物，特别是指一种治疗面部痤疮、酒糟鼻的复方外用擦剂及其制备方法。
背景技术
痤疮，俗称粉刺、青春痘，是一种发生于毛囊皮脂腺的皮肤科常见慢性病，多发生于面部、颈部等皮脂腺丰富的部位。它的发生主要与皮脂分泌过多、毛囊皮脂腺导管堵塞、细菌感染和炎症反应等因素密切相关，特别是随着***后人体雄性激素的增多加重皮脂分泌、导管堵塞，为痤疮丙酸杆菌等条件致病菌的大量繁殖创造条件。痤疮后期容易留下痘印和色素沉着，自然消退时间长，且易留下永久性的痘坑，严重影响患者的身心健康。病原学分析认为痤疮的严重程度与痤疮丙酸杆菌、金黄色葡萄球菌的增殖有关，因此目前抗痤疮药物活性评价主要考察对这2种菌的抑菌作用。
螨虫寄生在温度适宜的人体面部皮脂腺内，对皮肤产生机械性理化刺激，使人体免役机能下降，产生皮肤组织***性反映，出现红斑痘形疹等炎症，严重者损害皮面遗留疤痕，毛囊口扩大，增殖性肥厚，甚至产生赘瘤疙瘩红鼻子(酒糟鼻)、红脸蛋，破坏面容健美。
酒渣鼻又名玫瑰痤疮，是一种发生于鼻、面中部，以红斑和毛细血管扩张为主要表现的慢性疾病，伴以丘疹、脓疱和水肿为主的阵发性炎性反应，又叫赤鼻，俗称红鼻子。多发生于中年人，男女均发病，尤以女性多见。内服药治疗疗程长久，容易复发，难以根治，且长期反复治疗易导致菌群失调、耐药发生、损伤肝肾。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种治疗面部痤疮和酒糟鼻的复方外用擦剂及其制备方法，该擦剂可针对性地预防面部痤疮，同时对酒糟鼻的治疗有较好效果。
为解决上述技术问题，本发明通过以下技术方案予以实现：
一种治疗面部痤疮、酒糟鼻的复方外用擦剂，包括氯霉素、甲硝唑、维生素B6、尿囊素、积雪草萃取液、***磷酸钠、乙醇、丙二醇8种组分，其中，氯霉素1-5份、甲硝唑1-4份、维生素B6 0.1-1份、尿囊素0.1-1份、积雪草萃取液5-30份、***磷酸钠0.001-0.02份、乙醇50-90份、丙二醇5-20份。
作为优选地，所述治疗面部痤疮、酒糟鼻的复方外用擦剂中，氯霉素3份、甲硝唑2份、维生素B6 0.5份、尿囊素1份、积雪草萃取液5份、***磷酸钠0.01份、乙醇75份、丙二醇20份。
在上述配方的各种中西药中：
氯霉素：抑菌性广谱抗生素，能够有效抑制存在于人体皮肤表皮组织的痤疮丙酸杆菌。
甲硝唑：硝基咪唑衍生物，可有效杀灭存在于人体皮肤表皮组织的螨虫及其他厌氧微生物。
维生素B6：含吡哆醇或吡哆醛或吡哆胺的B族维生素,抑制组胺，降低毛细血管以及透明质酸酶的活性，具有润肤，促进人体皮肤表皮组织修复的作用。
尿囊素：可降低角质层细胞的粘着力，加速人体皮肤表皮细胞更新，加快伤口愈合。
积雪草萃取液：为植物积雪草的萃取液，促进肌肤分解酶的产生，有刺激人体皮肤表皮细胞细胞更新、强化血管、毛细管和增加紧实度等作用，加速减退暗疮印。
***磷酸钠：肾上腺皮质激素，具有抗炎，抗过敏，免疫抑制作用。
乙醇：溶剂，同时能够抑制存在于人体皮肤表皮组织的金黄色葡萄球菌。
丙二醇：溶剂。
本发明的治疗面部痤疮、酒糟鼻的复方外用擦剂的制备方法，按比例称取上述中西药品，混合搅拌均匀制成溶液即可。
本发明的上述技术方案的有益效果如下：
本发明的复方外用擦剂对面部痤疮和酒糟鼻都有较好的效果，其对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑制活性均较强，对螨虫有强的抑杀作用，同时，可促进组织修复，兼具抗炎消炎功效，且药剂无刺激性，温和性好，适用性广。
附图说明
图1为样品1对巨噬细胞和中性粒细胞在斑马鱼尾鳍伤口处聚集的影响示意图；
图2为样品2对巨噬细胞和中性粒细胞在斑马鱼尾鳍伤口处聚集的影响示意图；
图3为样品3对巨噬细胞和中性粒细胞在斑马鱼尾鳍伤口处聚集的影响示意图；
图4为样品1对巨噬细胞和中性粒细胞在斑马鱼尾鳍伤口处清除的影响示意图；
图5为样品2对巨噬细胞和中性粒细胞在斑马鱼尾鳍伤口处清除的影响示意图；
图6为样品3对巨噬细胞和中性粒细胞在斑马鱼尾鳍伤口处清除的影响示意图；
图7为样品1对斑马鱼SIVs的影响示意图；
图8为样品2对斑马鱼SIVs的影响示意图；
图9为样品3对斑马鱼SIVs的影响示意图；
图10为样品1对斑马鱼尾鳍损伤修复的影响示意图；
图11为样品2对斑马鱼尾鳍损伤修复的影响示意图；
图12为样品3对斑马鱼尾鳍损伤修复的影响示意图。
具体实施方式
为使本发明要解决的技术问题、技术方案和优点更加清楚，下面将结合具体实施例进行详细描述。
实施例1(样品1)
本实施例的治疗面部痤疮、酒糟鼻的复方外用擦剂，包括氯霉素1份、甲硝唑1份、维生素B6 0.1份、尿囊素0.1份、积雪草萃取液15份、***磷酸钠0.001份、乙醇50份、丙二醇5份。
其制备方法为：按比例称取上述中西药品，混合搅拌均匀制成溶液即可。
实施例2(样品2)
本实施例的治疗面部痤疮、酒糟鼻的复方外用擦剂，包括氯霉素3份、甲硝唑2份、维生素B6 0.5份、尿囊素1份、积雪草萃取液5份、***磷酸钠0.01份、乙醇75份、丙二醇20份。
制备方法同实施例1。
实施例3(样品3)
本实施例的治疗面部痤疮、酒糟鼻的复方外用擦剂，包括氯霉素5份、甲硝唑4份、维生素B6 1份、尿囊素0.5份、积雪草萃取液30份、***磷酸钠0.02份、乙醇90份、丙二醇15份。
制备方法同实施例1。
1、样品1、2和3的抗炎和消炎功效评价
1实验方法
1.1实验用鱼及其受精卵的采集
将性成熟斑马鱼雌雄分缸饲养于斑马鱼养殖单元中。水温：26±2℃；PH6.7；电导率：520μs/cm；光照/黑暗周期：14h:10h。暴露实验开始前一天将雌雄以1:2配对，自然交配产卵。
1.2巨噬细胞和中性粒细胞聚集试验
1)挑选发育至3dpf(days post-fertilization)的健康斑马鱼Tg(corola:eGFP)置于6孔细胞培养板中，20条/孔，加入5mL供试品溶液预处理1h，以养殖水为空白对照组。
2)在体视显微镜下用手术刀将斑马鱼尾鳍切断，再置于6孔细胞培养板中，15条/孔，加入5mL供试品溶液，在曲线控制生化培养箱中孵育。
3)孵育至6h后，用三卡因将斑马鱼麻醉，在荧光显微镜下观察巨噬细胞和中性粒细胞在尾鳍伤口聚集情况并拍照。
4)统计细胞数量，计数范围为离切口200μm以内的区域。
1.3巨噬细胞和中性粒细胞清除试验
1)在体视显微镜下用手术刀将斑马鱼Tg(corola:eGFP)尾鳍切断，然后将斑马鱼置于6孔细胞培养板中，20条/孔，加入5mL的养殖水培养，置于曲线控制生化培养箱中孵育。
2)孵育6h后，将斑马鱼置于到96孔细胞培养板中，在荧光显微镜下挑选伤口处聚集巨噬细胞和中性粒细胞数较多的斑马鱼进行实验。
3)将斑马鱼置于6孔细胞培养板中，15条/孔，加入5mL供试品溶液，以养殖水为空白对照组，置于曲线控制生化培养箱中继续孵育。
4)孵育6h后，即切尾12h后，用三卡因将斑马鱼麻醉，在荧光显微镜下观察巨噬细胞和中性粒细胞在尾鳍伤口聚集情况并拍照记录。
5)统计细胞数量，计数范围为离切口200μm以内的区域。
1.4统计分析
采用SPSS 19.0软件统计处理数据，实验数据均用数据表示，用单因素方差分析。各浓度组与空白对照组两两比较：*P<0.05，**P<0.01，***P<0.005。
2实验结果
2.1样品1对巨噬细胞和中性粒细胞在斑马鱼尾鳍伤口处聚集的影响
基于实验方法1.2，样品1对巨噬细胞和中性粒细胞在斑马鱼尾鳍伤口处聚集的影响如表1和图1所示。
表1 样品1对巨噬细胞和中性粒细胞在斑马鱼尾鳍伤口处聚集的影响
(与空白对照组比较：*P<0.05，**P<0.01，***P<0.005)
(与空白对照组比较：*P<0.05，**P<0.01，***P<0.005)
由图1A可知，空白对照组(Control)的斑马鱼尾鳍伤口处有大量巨噬细胞和中性粒细胞聚集，而样品1实验组的斑马鱼尾鳍伤口处的巨噬细胞和中性粒细胞聚集逐渐减少。另外，从表1和图1B可知，空白对照组(Control)的巨噬细胞和中性粒细胞数为18.08±1.02个。而样品1浓度(v/v)为1.5％、3％和6％实验组的巨噬细胞和中性粒细胞数分别为10.82±0.64、10.82±0.45和8.81±0.65个，与空白对照组(18.08±1.02个)相比较均有显著性差异(P<0.05)。由此可知，1.5％、3％和6％样品1均能显著抑制巨噬细胞和中性粒细胞在斑马鱼尾鳍伤口处聚集，表明样品1具有抗炎功效。
2.2样品2对巨噬细胞和中性粒细胞在斑马鱼尾鳍伤口处聚集的影响
基于实验方法1.2，样品2对巨噬细胞和中性粒细胞在斑马鱼尾鳍伤口处聚集的影响如表2和图2所示：
表2 样品2对巨噬细胞和中性粒细胞在斑马鱼尾鳍伤口处聚集的影响
(与空白对照组比较：*P<0.05，**P<0.01，***P<0.005)
(与空白对照组比较：*P<0.05，**P<0.01，***P<0.005)
由图2A可知，空白对照组(Control)的斑马鱼尾鳍伤口处有大量巨噬细胞和中性粒细胞聚集，而样品2实验组的斑马鱼尾鳍伤口处的巨噬细胞和中性粒细胞聚集逐渐减少。另外，从表2和图2B可知，空白对照组(Control)的巨噬细胞和中性粒细胞数为14.54±0.77个。而样品2浓度(v/v)为5％、10％和20％实验组的巨噬细胞和中性粒细胞数分别为11.09±0.49、8.65±0.81和7.18±0.50个，与空白对照组(14.54±0.77个)相比较均有显著性差异(P<0.05)。由此可知，5％、10％和20％样品2均能显著抑制巨噬细胞和中性粒细胞在斑马鱼尾鳍伤口处聚集，表明样品2具有抗炎功效。
2.3样品3对巨噬细胞和中性粒细胞在斑马鱼尾鳍伤口处聚集的影响
基于实验方法1.2，样品3对巨噬细胞和中性粒细胞在斑马鱼尾鳍伤口处聚集的影响如表3和图3所示：
表3 样品3对巨噬细胞和中性粒细胞在斑马鱼尾鳍伤口处聚集的影响
(与空白对照组比较：*P<0.05，**P<0.01，***P<0.005)
(与空白对照组比较：*P<0.05，**P<0.01，***P<0.005)
由图3A可知，空白对照组(Control)的斑马鱼尾鳍伤口处有大量巨噬细胞和中性粒细胞聚集，而样品3实验组的斑马鱼尾鳍伤口处的巨噬细胞和中性粒细胞聚集逐渐减少。另外，从表3和图3B可知，空白对照组(Control)的巨噬细胞和中性粒细胞数为17.18±0.91个。而样品3浓度(v/v)为1％、2％和4％实验组的巨噬细胞和中性粒细胞数分别为11.50±1.04、9.36±0.93和8.44±0.58个，与空白对照组(17.18±0.91个)相比较均有显著性差异(P<0.05)。由此可知，1％、2％和4％样品3均能显著抑制巨噬细胞和中性粒细胞在斑马鱼尾鳍伤口处聚集，表明样品3具有抗炎功效。
2.4样品1对巨噬细胞和中性粒细胞在斑马鱼尾鳍伤口处清除的影响
基于实验方法1.3，样品1对巨噬细胞和中性粒细胞在斑马鱼尾鳍伤口处清除的影响如表4和图4所示：
表4 样品1对巨噬细胞和中性粒细胞在斑马鱼尾鳍伤口处清除的影响
(与空白对照组比较：*P<0.05，**P<0.01，***P<0.005)
(与空白对照组比较：*P<0.05，**P<0.01，***P<0.005)
从图4A可知，空白对照组(Control)的斑马鱼尾鳍伤口处有大量巨噬细胞和中性粒细胞聚集，而样品1实验组的斑马鱼尾鳍伤口处的巨噬细胞和中性粒细胞聚集逐渐减少。另外，从表4和图4B可知，空白对照组的巨噬细胞和中性粒细胞数为19.91±1.47个。而样品1浓度为1.5％、3％和6％实验组的巨噬细胞和中性粒细胞数分别为11.86±1.06、7.45±0.54和6.59±0.71个，与空白对照组(19.91±1.47个)相比较均有显著性差异(P<0.05)。由此可知，1.5％、3％和6％样品1均能显著促进巨噬细胞和中性粒细胞在斑马鱼尾鳍伤口处清除，表明样品1具有消炎功效，表明样品1具有消炎功效。
2.5样品2对巨噬细胞和中性粒细胞在斑马鱼尾鳍伤口处清除的影响
基于实验方法1.3，样品2对巨噬细胞和中性粒细胞在斑马鱼尾鳍伤口处清除的影响如表5和图5所示：
表5 样品2对巨噬细胞和中性粒细胞在斑马鱼尾鳍伤口处清除的影响
(与空白对照组比较：*P<0.05，**P<0.01，***P<0.005)
(与空白对照组比较：*P<0.05，**P<0.01，***P<0.005)
从图5A可知，空白对照组(Control)的斑马鱼尾鳍伤口处有大量巨噬细胞和中性粒细胞聚集，而样品2实验组的斑马鱼尾鳍伤口处的巨噬细胞和中性粒细胞聚集逐渐减少。另外，从表5和图5B可知，空白对照组的巨噬细胞和中性粒细胞数为14.54±0.85个。而样品2浓度为5％、10％和20％实验组的巨噬细胞和中性粒细胞数分别为10.86±0.73、8.68±0.88和6.67±0.59个，与空白对照组(14.54±0.85个)相比较均有显著性差异(P<0.05)。由此可知，5％、10％和20％样品2均能显著促进巨噬细胞和中性粒细胞在斑马鱼尾鳍伤口处清除，表明样品2具有消炎功效。
2.6样品3对巨噬细胞和中性粒细胞在斑马鱼尾鳍伤口处清除的影响
基于实验方法1.3，样品3对巨噬细胞和中性粒细胞在斑马鱼尾鳍伤口处清除的影响如表6和图6所示：
表6 样品3对巨噬细胞和中性粒细胞在斑马鱼尾鳍伤口处清除的影响
(与空白对照组比较：*P<0.05，**P<0.01，***P<0.005)
(与空白对照组比较：*P<0.05，**P<0.01，***P<0.005)
从图6A可知，空白对照组(Control)的斑马鱼尾鳍伤口处有大量巨噬细胞和中性粒细胞聚集，而样品3实验组的斑马鱼尾鳍伤口处的巨噬细胞和中性粒细胞聚集逐渐减少。另外，从表6和图6B可知，空白对照组的巨噬细胞和中性粒细胞数为19.18±1.02个。而样品32浓度为1％、2％和4％实验组的巨噬细胞和中性粒细胞数分别为15.96±0.70、15.91±0.66和8.00±0.51个，与空白对照组(19.18±1.02个)相比较均有显著性差异(P<0.05)。由此可知，1％、2％和4％样品3均能显著促进巨噬细胞和中性粒细胞在斑马鱼尾鳍伤口处清除，表明样品3具有消炎功效。
2、样品1、2和3的抗菌和灭螨活性评价
1实验方法
1.1抑菌环的测定(牛津杯法)
在无菌操作下，取上述菌悬液，用涂布棒均匀涂抹在培养基上。再用无菌镊将牛津杯轻放在凝固的培养基表面，轻压牛津杯(外径8mm)使接触良好。加入供试液于牛津杯中，37℃培养箱培养72h，测量各培养皿中供试液有效抑菌圈的直径。另设空白对照组(生理盐水)、阳性对照组DP300。
参照2015版《中华人民共和国药典》中的抑制微生物生长的内容设定，将抑菌功效以抑菌圈大小分为4个等级。见表1。
表1 抑制痤疮丙酸杆菌功效评价标准
最低抑菌浓度结果判定：培养基混浊者表示有菌生长，药液无抑菌作用；培养基透明者表示无菌生长，药液有抑菌作用。最低抑菌浓度(minimalinhibitory concentration，MIC)即为抑制细菌生长的药液最大稀释倍数时的浓度。
1.2体外抑杀螨虫试验
挑选约600只活泼正常的螨虫置于24孔细胞培养板中，将24孔细胞培养板置于温度为25℃～28℃，相对湿度70％～80％的培养箱中作用48h。死亡判定标准：①虫体收缩或透明者；②虫体破裂外周有油滴样堆积物者；③在高倍镜下连续观察1min，虫体或虫足不活动者。
2实验结果
2.1样品1、2和3的抑菌活性
基于实验方法1.1，样品1、2和3的抑菌效果如表2、3和4所示：
表2 样品1、2和3对不同细菌的MIC的测定
表3 样品3对痤疮丙酸杆菌的MIC的测定
表4 样品3对痤疮丙酸杆菌的抑菌环
由表2可知，样品3对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的MIC均≤500ppm，由此可知，样品3对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑制活性均较强。另外，由表3可知，加入生理盐水的平皿的菌落生长面积为100％，而加入0.1％DP300的阳性对照组的菌落生长面积为0.0％，这说明溶剂生理盐水对样品的抑菌测试结果无干扰，且本实验结果有效。由表3中的数据可知，样品3在6.25％、12.5％、25％、50％和100％的浓度下，对痤疮丙酸杆菌菌落生长面积抑制作用。另外，由表4可知，样品3在25％、50％和100％的浓度下，对痤疮丙酸杆菌的抑菌环直径均值分别为19、26和29mm。由此可知，样品3在25％、50％和100％的浓度下，对痤疮丙酸杆菌的抑制作用分别为中效、高效和高效。
2.2样品3体外杀螨活性
基于实验方法1.2，样3的灭螨活性如表5所示：
表5 样品3杀螨的体外活
由表5可知，样品3对螨虫作用48h时，其灭螨率为96.16％。因此，样品3对螨虫有强的抑杀作用。
3、样品1、2和3对斑马鱼新生血管的影响
1实验方法
1.1实验用鱼及其受精卵的采集
将性成熟斑马鱼雌雄分缸饲养于斑马鱼养殖单元中。水温：26±2℃；PH6.7；电导率：520μs/cm；光照/黑暗周期：14h:10h。暴露实验开始前一天将雌雄以1:2配对，自然交配产卵。
1.2斑马鱼肠下血管新生实验
1)挑选发育至24hpf(hours post-fertilization)的健康斑马鱼Tg(fli1:EGFP)置于6孔细胞培养板中，20条/孔，加入5mL供试品溶液，置于曲线控制生化培养箱中孵育48h。以养殖水为空白对照组。
2)孵育至72hpf后，用三卡因将斑马鱼麻醉，在荧光显微镜下观察肠下静脉血管(SIVs)形成情况并拍照。
1.3统计分析
采用SPSS 19.0软件统计处理数据，实验数据均用数据表示，用单因素方差分析。各浓度组与空白对照组两两比较：*P<0.05，**P<0.01，***P<0.005。
2实验结果
2.1样品1对斑马鱼SIVs的影响
基于实验方法1.2，样品1对斑马鱼SIVs的影响如表1和图7所示：
表1 样品1对斑马鱼SIVs的影响
(与空白对照组比较：*P<0.05，**P<0.01，***P<0.005)
(与空白对照组比较：*P<0.05，**P<0.01，***P<0.005)
由图7A可知，空白对照组(Control)的斑马鱼肠下静脉丛发育平滑和完整。而样品1实验组的斑马鱼肠下静脉丛有缺失。
从表1和图7B可知，空白对照组(Control)的斑马鱼SIVs数为12.39±0.60条。另外，样品1浓度(v/v)为1.5％实验组的斑马鱼SIVs数为10.42±0.41条，与空白对照组(Control)相比较没有显著性差异(P>0.05)。而样品1浓度(v/v)为3％和6％实验组的斑马鱼SIVs数分别为8.35±0.60和7.33±0.51条，与空白对照组(12.39±0.60条)相比较均有显著性差异(P<0.005)。
另外，从表1和图7C可知，空白对照组(Control)的斑马鱼SIVs面积为9839.11±726.50。而样品1浓度(v/v)为1.5％、3％和6％实验组的斑马鱼SIVs面积为5902.47±435.57、4757.50±583.21和3701.73±398.50，与空白对照组相比较均有显著性差异(P<0.005)。
由此可知，1.5％、3％和6％样品1均能显著抑制斑马鱼SIVs的形成。
2.2样品2对斑马鱼SIVs的影响
基于实验方法1.2，样品2对斑马鱼SIVs的影响如表2和图8所示：
表2 样品2对斑马鱼SIVs的影响
(与空白对照组比较：*P<0.05，**P<0.01，***P<0.005)
(与空白对照组比较：*P<0.05，**P<0.01，***P<0.005)
由图8A可知，空白对照组(Control)的斑马鱼肠下静脉丛发育平滑和完整。另外，样品2实验组的斑马鱼肠下静脉丛发育完整，甚至出芽。
从表2和图8B可知，空白对照组(Control)的斑马鱼SIVs数为10.29±0.29条。另外，样品2浓度(v/v)为5％和10％实验组的斑马鱼SIVs数分别为10.85±0.33和11.44±0.3条，与空白对照组(Control)相比较均没有显著性差异(P>0.05)。而样品2浓度(v/v)为20％实验组的斑马鱼SIVs数为12.22±0.39条，与空白对照组(10.29±0.29条)相比较有显著性差异(P<0.005)。
另外，从表2和图8C可知，空白对照组(Control)的斑马鱼SIVs面积为10057.74±792.60。而样品2浓度(v/v)为5％、10％和20％实验组的斑马鱼SIVs面积分别为10123.17±614.90、9194.33±698.96和9097.11±691.57，与空白对照组相比较均没有显著性差异(P>0.05)。
由此可知，20％样品2能够显著促进斑马鱼SIVs的形成。
2.3样品3对斑马鱼SIVs的影响
基于实验方法1.2，样品3对斑马鱼SIVs的影响如表3和图9所示：
表3 样品3对斑马鱼SIVs的影响
(与空白对照组比较：*P<0.05，**P<0.01，***P<0.005)
(与空白对照组比较：*P<0.05，**P<0.01，***P<0.005)
由图9A可知，空白对照组(Control)的斑马鱼肠下静脉丛发育平滑和完整。而样品3实验组的斑马鱼肠下静脉丛有缺失。
从表3和图9B可知，空白对照组(Control)的斑马鱼SIVs数为12.16±0.27条。另外，样品3浓度(v/v)为1％实验组的斑马鱼SIVs数为11.80±0.47条，与空白对照组(Control)相比较没有显著性差异(P>0.05)。而样品3浓度(v/v)为2％和4％实验组的斑马鱼SIVs数分别为9.60±0.36和8.14±0.25条，与空白对照组(12.16±0.27条)相比较均有显著性差异(P<0.005)。
另外，从表3和图9C可知，空白对照组(Control)的斑马鱼SIVs面积为9952.79±758.02。样品3浓度(v/v)为1％实验组的斑马鱼SIVs面积为7915.95±686.73，与空白对照组(Control)相比较没有显著性差异(P>0.05)。而样品3浓度(v/v)为2％和4％实验组的斑马鱼SIVs面积为6494.30±601.34和5815.76±371.23，与空白对照组相比较均有显著性差异(P<0.005)。
由此可知，2％和4％样品3均能显著抑制斑马鱼SIVs的形成。
4、样品1、2和3对组织损伤修复的影响
1实验方法
1.1实验用鱼及其受精卵的采集
将性成熟斑马鱼雌雄分缸饲养于斑马鱼养殖单元中。水温：26±2℃；PH6.7；电导率：520μs/cm；光照/黑暗周期：14h:10h。暴露实验开始前一天将雌雄以1:2配对，自然交配产卵。
1.2促进组织修复功效评价
1)挑选发育健康的斑马鱼幼鱼置于6孔细胞培养板中，切去斑马鱼尾鳍。置于体视显微镜下拍照记录。
2)转移至96孔细胞培养板，加入200μL供试物溶液，置于曲线控制生化培养箱中继续孵育72h。实验设置空白对照组和实验组，每个浓度组20条。
3)72h后，置于体视显微镜下对斑马鱼拍照记录，并计算尾鳍的长度。
1.3统计分析
采用SPSS 19.0软件统计处理数据，实验数据均用数据表示，用单因素方差分析。各浓度组与空白对照组两两比较：*P<0.05，**P<0.01，***P<0.005。
2实验结果
2.1样品1对斑马鱼尾鳍损伤修复的影响
基于实验方法1.2，样品1对斑马鱼尾鳍损伤修复的影响如表1和图10所示：
表1 样品1对斑马鱼尾鳍损伤修复的影响
(与空白对照组比较：*P<0.05，**P<0.01，***P<0.005)
(与空白对照组比较：*P<0.05，**P<0.01，***P<0.005)
由表1和图10可知，样品1浓度(v/v)为1.5％、3％和6％实验组的斑马鱼尾鳍相对长度分别为0.99±0.05、0.97±0.05和0.91±0.03，与空白对照组(1.00±0.06)相比较均没有显著性差异(P＞0.05)。由此可知，1.5％、3％和6％样品1对斑马鱼尾鳍的损伤修复未有影响。
2.2样品2对斑马鱼尾鳍损伤修复的影响
基于实验方法1.2，样品2对斑马鱼尾鳍损伤修复的影响如表2和图11所示：
表2 样品2对斑马鱼尾鳍损伤修复的影响
(与空白对照组比较：*P<0.05，**P<0.01，***P<0.005)
(与空白对照组比较：*P<0.05，**P<0.01，***P<0.005)
由表2和图11可知，样品2浓度(v/v)为5％实验组的斑马鱼尾鳍相对长度为0.91±0.05，与空白对照组(1.00±0.03)相比较没有显著性差异(P>0.05)。而样品2浓度(v/v)为10％和20％实验组的斑马鱼尾鳍相对长度分别为0.86±0.02和0.69±0.03，与空白对照组(1.00±0.03)相比较均有显著性差异(P<0.05)。由此可知，10％和20％样品2能够显著抑制斑马鱼尾鳍的损伤修复。
2.3样品3对斑马鱼尾鳍损伤修复的影响
基于实验方法1.2，样品3对斑马鱼尾鳍损伤修复的影响如表3和图12所示：
表3 样品3对斑马鱼尾鳍损伤修复的影响
(与空白对照组比较：*P<0.05，**P<0.01，***P<0.005)
(与空白对照组比较：*P<0.05，**P<0.01，***P<0.005)
由表3和图12可知，样品3浓度(v/v)为1％、2％和4％实验组的斑马鱼尾鳍相对长度分别为0.94±0.03、0.93±0.03和0.90±0.04，与空白对照组(1.00±0.05)相比较均没有显著性差异(P＞0.05)。由此可知，1％、2％和4％样品3对斑马鱼尾鳍的损伤修复未有影响。
5、样品1、2和3的温和刺激评价
1实验方法
1.1实验用鱼及其受精卵的采集
将性成熟斑马鱼雌雄分缸饲养于斑马鱼养殖单元中。水温：26±2℃；PH6.7；电导率：520μs/cm；光照/黑暗周期：14h:10h。暴露实验开始前一天将雌雄以1:2配对，自然交配产卵。
1.2温和刺激性试验
挑选发育至24hpf(hours post-fertilization)的健康AB系斑马鱼置于24孔细胞培养板中，20枚/孔，加入1mL供试品溶液，SDS和AES为阳性对照，养殖水为空白对照组。于曲线控制生化培养箱中孵育10min后，置于体系显微镜下观察。
2实验结果
2.1样品1对斑马鱼胚胎的影响
基于实验方法1.2，样品1对斑马鱼胚胎的影响如表1所示：
表1 样品1对斑马鱼胚胎的影响
注：10％(m/m)≈10.4％(v/v)；15％(m/m)≈15.6％(v/v)；20％(m/m)≈20.7％(v/v)
从表1可知，空白对照组的斑马鱼胚胎无畸形和死亡现象。而阳性对照组(SDS和AES)的斑马鱼胚胎全部死亡。另外，样品1浓度(m/m)为10％、15％和20％实验组的斑马鱼胚胎无畸形和死亡现象。由此可知，10％、15％和20％样品1对斑马鱼胚胎均无刺激性。
2.2样品2对斑马鱼胚胎的影响
基于实验方法1.2，样品2对斑马鱼胚胎的影响如表2所示：
表2 样品2对斑马鱼胚胎的影响
注：40％(m/m)≈41.1％(v/v)；45％(m/m)≈46.1％(v/v)；50％(m/m)≈51.1％(v/v)
从表2可知，空白对照组的斑马鱼胚胎无畸形和死亡现象。而阳性对照组(SDS和AES)的斑马鱼胚胎全部死亡。另外，样品2浓度(m/m)为40％、45％和50％实验组的斑马鱼胚胎无畸形和死亡现象。由此可知，40％、45％和50％样品2对斑马鱼胚胎均无刺激性。
2.3样品3对斑马鱼胚胎的影响
基于实验方法1.2，样品3对斑马鱼胚胎的影响如表3所示：
表3 样品3对斑马鱼胚胎的影响
注：5％(m/m)≈5.2％(v/v)；7.5％(m/m)≈7.8％(v/v)；10％(m/m)≈10.4％(v/v)
从表3可知，空白对照组的斑马鱼胚胎无畸形和死亡现象。而阳性对照组(SDS和AES)的斑马鱼胚胎全部死亡。另外，样品3浓度(m/m)为5％、7.5％和10％实验组的斑马鱼胚胎无畸形和死亡现象。由此可知，5％、7.5％和10％样品3对斑马鱼胚胎均无刺激性。
以上所述是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明所述原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (4)

1.一种治疗面部痤疮、酒糟鼻的复方外用擦剂，其特征在于，包括氯霉素、甲硝唑、维生素B6、尿囊素、积雪草萃取液、***磷酸钠、乙醇、丙二醇。
2.根据权利要求1所述的治疗面部痤疮、酒糟鼻的复方外用擦剂，其特征在于，所述复方外用擦剂中，氯霉素1-5份、甲硝唑1-4份、维生素B6 0.1-1份、尿囊素0.1-1份、积雪草萃取液5-30份、***磷酸钠0.001-0.02份、乙醇50-90份、丙二醇5-20份。
3.根据权利要求1或2所述的治疗面部痤疮、酒糟鼻的复方外用擦剂，其特征在于，所述复方外用擦剂中，氯霉素3份、甲硝唑2份、维生素B6 0.5份、尿囊素1份、积雪草萃取液5份、***磷酸钠0.01份、乙醇75份、丙二醇20份。
4.根据权利要求1或2所述的治疗面部痤疮、酒糟鼻的复方外用擦剂的制备方法，其特征在于，按比例称取上述中西药品，混合搅拌均匀制成溶液即可。
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