CN110501401A - 一种基于钼酸铋/锌掺杂硫化镉/金的光电化学免疫传感器的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种基于钼酸铋/锌掺杂硫化镉/金的光电化学免疫传感器的制备方法。本发明采用锌掺杂的硫化镉敏化钼酸铋纳米片作为光敏基底材料，钼酸铋制备简单，具有良好的光催化效果，经过锌离子掺杂的硫化镉的敏化作用后，获得了良好的光电响应。采用金纳米粒子进一步修饰敏化基底光敏材料，一方面，锌掺杂之后改善了硫化镉的带隙缺陷，使得金的表面等离子体效应作用更加显著，促进了光敏材料表面电子的振动，加速电子传递以获得更加稳定和优异的光电流；另一方面金与生物分子之间很容易形成Au‑NH₂键，为无机半导体纳米材料与生物分子的连接提供了基础，提高了传感器的稳定性和灵敏度。该传感其的检测限达到0.03 pg/mL。

Description

一种基于钼酸铋/锌掺杂硫化镉/金的光电化学免疫传感器的 制备方法

技术领域

本发明涉及一种基于钼酸铋/锌掺杂硫化镉/金的光电化学免疫传感器的制备方法。具体是采用锌掺杂的硫化镉敏化的钼酸铋纳米片作为基底光敏材料提供基础的光电响应，其次采用贵金属金进一步修饰敏化，一方面由于表面等离子共振效应提高光电流，另一方面金与生物分子形成稳固的Au-NH₂，为后续生物免疫传感平台的构建提供了基础。制备了一种检测降钙素原的无标型光电化学传感器，属于新型功能材料与生物传感检测技术领域。

背景技术

降钙素原（PCT）是一种蛋白质，当严重细菌、真菌、寄生虫感染以及脓毒症和多脏器功能衰竭时它在血浆中的水平升高，细菌内毒素在诱导过程中担任了至关重要的作用，局部有限的细菌感染、轻微的感染和慢性炎症不会导致其升高，自身免疫、过敏和病毒感染时PCT也不会升高，因此PCT是严重细菌性炎症和真菌感染的特异性指标，而且也是脓毒症和炎症活动有关的多脏器衰竭的可靠指标，它反映了全身炎症反应的活跃程度。在严重的细菌性感染疾病中如脓毒症和MODS，PCT升高的程度是炎症活动的反映。PCT不仅是用于鉴别诊断的急性指标，而且是监控炎症活动的参数。其优于其他炎症指标的优势在于，严重的感染引起PCT浓度显著升高（>10ug/L），而较轻的感染或不太严重的脓毒症仅引起PCT中度升高。并且，PCT还可以作为严重炎症的愈后监控指标。如果炎性刺激不再存在，PCT在几天内恢复到正常参考范围内。因此，建立一种快速、准确地检测降钙素原的分析方法非常必要。目前已有的降钙素原抗原的检测方法有很多，如利用时间分辨荧光免疫层析方法检测（黄德智,应昊俊,刘飞等.降钙素原时间分辨荧光免疫层析检测方法的建立及性能评价[J].第三军医大学学报, 2019, 41(06):581-586.）；酶联免疫方法（一种唾液降钙素原酶联免疫检测方法，CN201610401787.1）；化学发光免疫方法（基于纳米抗体的降钙素原化学发光检测试剂及检测方法，CN201810235448.X）等等，但由于酶联免疫分析操作繁琐，价格昂贵；荧光分析可控性差、毒性大；电化学发光分析检测时间长等。本发明设计了一种新型的无标型光电化学传感器，其分析速度快，操作简单，稳定性好，检测限低，本发明设计的无标型光电化学传感器对降钙素原抗原的检测限达到0.03 pg/mL。

钼酸铋是一种典型的半导体光催化纳米材料，其制备简单，成本低，无毒无污染，对可见光有很好的吸收利用效率，具有一定的光稳定性，在可见光照射下，会产生光生电荷，进而形成光电流，但由于其带隙窄，光生电子空穴易于复合，使得其本身光电转换效率并不高。硫化镉作为一种良好的敏化剂能够很好的改善钼酸铋这一光电缺陷，经过硫化镉敏化之后，钼酸铋的光电响应大幅度提升，为后续的光电测试提供了基础。此外经过锌离子掺杂之后，在硫化镉中形成一个中间带隙结构，降低了硫化镉本身的光生电子空穴的复合速率，提高了该传感器的稳定性。其次，采用金纳米粒子进一步修饰敏化，一方面，金具有良好的表面等离子共振效应，能够加速基底材料表面电子的振动，促进电子快速传递；另一方面，金与生物分子之间能够很容易形成Au-NH₂键，实现在不加任何交联剂的前提下无机半导体材料与生物分子连接得目的，为免疫传感平台的构建提供了基础和保障。

光电化学传感器是基于物质的光电转换特性来确定待测物浓度的一类检测装置。光电化学检测方法具有设备简单、灵敏度高、易于微型化的特点，已经发展成为一种极具应用潜力的分析方法，在食品、环境、医药等领域具有广阔的应用前景。钼酸铋材料在光电化学传感器方面的应用未见报道。本发明基于钼酸铋/锌掺杂硫化镉/金纳米粒子材料成功构建了在可见光下检测降钙素原的无标型光电化学传感器。该传感器以锌掺杂硫化镉敏化的片状钼酸铋作为基底光敏材料，用金纳米粒子进一步修饰，根据抗原抗体的特异性免疫识别，实现了对降钙素原的灵敏检测。本发明制备的光电化学传感器，具有低成本、高灵敏、特异性好、快速检测、易于制备等优点，实现了在可见光区域对降钙素原的快速、高灵敏检测，有效克服了目前降钙素原检测方法的不足。

发明内容

本发明目的之一是采用片状的钼酸铋纳米半导体材料作为光敏基底，该材料比表面积大，在可见光下表现出令人满意的光电响应。

本发明目的之二是采用锌掺杂的硫化镉纳米颗粒作为敏化剂敏化片状的钼酸铋材料，钼酸铋的片状结构能够附载大量的敏化剂，同时经过锌离子的掺杂之后改善了硫化镉的带隙缺陷，使得硫化镉与钼酸铋带隙匹配，电子传递更加迅速，可以获得优异的光电流响应，提高传感器的灵敏度。

本发明目的之三是采用贵金属金纳米粒子进一步敏化修饰基底光敏材料，一方面金具有良好的表面等离子体共振效果，使光敏材料表面的电子振动更加剧烈，提高电子的传递速率；另一方面，贵金属金与生物分子之间能够形成牢固的Au-NH₂键，在不需要外加交联剂的条件下就可以实现无机半导体材料与生物分子的结合，为免疫传感平台的构建提供了基础。

本发明目的之四是以锌掺杂的硫化镉敏化的钼酸铋纳米片作为基底，以金纳米粒子进一步修饰敏化，制备一种灵敏度高、稳定性好、检测速度快的光电化学传感器，实现了在可见光条件下对降钙素原灵敏检测的目的。

本发明的技术方案如下：

1. 一种基于钼酸铋/锌掺杂硫化镉/金的光电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）钼酸铋纳米片材料的制备

取1.0 ~ 2.0 g五水合硝酸铋和0.4 ~ 0.6 g二水合钼酸钠在搅拌下共溶于100 ~ 150mL超纯水中，该溶液在室温下搅拌1 ~ 3 h，搅拌均匀后所得到的淡黄色溶液转移至高压反应釜中，于160 ~ 200 °C下反应20 ~ 24 h，反应结束后，自然冷却至室温，产品用超纯水和无水乙醇各洗涤3次，之后于30 ~ 50 °C下真空干燥8 ~ 12 h，制得片状钼酸铋纳米材料；

（2）锌掺杂硫化镉纳米颗粒的制备

按不同比例取二水合乙酸锌和二水合乙酸镉共溶于20 ~ 50 mL超纯水中，使得锌离子和镉离子的摩尔质量一共为0.01 mol，此溶液在室温下搅拌均匀作为溶液A；取1.0 ~ 3.0g九水合硫化钠溶于20 ~ 50 mL超纯水中，搅拌均匀制得溶液B；将溶液A与溶液B混合，在室温下搅拌6 ~ 12 h，之后将混合水溶液倒入高压反应釜中，于150 ~ 200 °C下反应14 ~ 18h，反应结束后自然冷却至室温，产品用超纯水和无水乙醇各洗涤3次，之后于30 ~ 50 °C下真空干燥过夜，得到不同锌掺杂比例的硫化镉纳米颗粒材料；

（3）金纳米粒子的制备

取30 ~ 50 mL质量分数为0.01 % ~ 0.05 %的氯金酸水溶液于120 °C下煮沸5 ~ 10min，之后向煮沸的溶液中加入2.0 ~ 5.0 mL质量分数为1 % ~ 3 %的柠檬酸三钠水溶液，溶液在煮沸条件下持续搅拌，溶液颜色由微微蓝色变成亮红色，继续搅拌，得紫色溶液，制得金纳米粒子；

（4）光电化学传感器的制备

1）将导电玻璃依次用洗洁精、丙酮、乙醇和超纯水超声清洗，氮气吹干；

2）取6 µL、2 ~ 6 mg/mL的钼酸铋水溶液滴加到ITO导电玻璃的导电面，室温下自然晾干；

3）在修饰的电极表面继续滴加6 µL、2 ~ 6 mg/mL的锌掺杂的硫化镉水溶液，自然晾干；

4）在修饰的电极表面继续滴加6 µL金纳米粒子水溶液，室温下自然晾干；

5）滴加4 µL、5 ~ 20 μg/mL的降钙素原抗体，超纯水清洗，室温下自然晾至湿润薄膜状态；

6）滴加3 µL、用pH为7.0的PBS缓冲溶液配置的质量分数为0.1 % ~ 0.3 %的牛血清白蛋白溶液于修饰电极表面，超纯水冲洗电极表面，4 ℃冰箱中晾干；

7）滴加6 µL、用PBS缓冲溶液配置的0.1 pg/mL ~ 1000 ng/mL的降钙素原抗原，超纯水冲洗电极表面，4 ℃冰箱中自然晾干，制得一种检测降钙素原抗原的光电化学传感器。

2. 光电化学传感器的检测方法如下：

（1）使用电化学工作站以三电极体系进行测试，饱和甘汞电极为参比电极，铂丝电极为辅助电极，制备的ITO修饰的传感器为工作电极，在10 mL含有0.01 ~ 0.5 mol/L抗坏血酸的pH为5.0 ~ 8.0的PBS缓冲溶液中进行测试；

（2）用时间-电流法对降钙素原抗原进行检测，设置电压为-0.1 ~ 0.1 V，运行时间120s，光源波长为400 ~ 450 nm；

（3）电极放置好之后，每隔20 s开灯持续照射20 s，记录光电流，绘制工作曲线；

（4）将待测的降钙素原抗原样品溶液代替降钙素原抗原标准溶液进行检测。

本传感器对降钙素原的检测线性范围为0.1 pg/mL ~ 1000 ng/mL，检测限达0.03pg/mL。

材料合成所需要的化学试剂均为当地试剂店购得，没有经过再处理。

本发明的有益成果

（1）本发明成功合成具有一定光电性能的片状钼酸铋半导体纳米材料，该材料成本低，无毒，比表面积大；利用硫化镉良好的敏化作用对钼酸铋进行敏化，获得了极好的光电性能，解决了单纯钼酸铋和单纯硫化镉光电转换效率低的问题。

（2）本发明采用锌离子掺杂的硫化镉作为敏化剂，硫化镉具有良好的敏化作用，但硫化镉带隙较窄，光生电子空穴复合快速，经过锌离子掺杂之后，改善了硫化镉的带隙缺陷，提高了硫化镉的带隙宽度，提高了敏化效果。

（3）采用金纳米粒子进一步修饰敏化基底光敏材料，一方面，金具有良好的表面等离子共振效应，能够促进光敏材料表面电子的振动，促进电子的快速传递；另一方面，贵金属金与生物分子之间能够形成稳固的Au-NH₂键，在不采用任何外加交联剂的前提下，使得无机半导体材料与生物分子结合，为免疫传感平台的构建提供了基础。

（4）本发明制备的光电化学传感器，用于降钙素原的检测，响应时间短，线性范围宽，检测限低，稳定性和重现性好，可实现简单、快捷、高灵敏和特异性的检测。本发明对降钙素原的检测线性范围为0.1 pg/mL ~ 1000 ng/mL，检测限达0.03 pg/mL。

具体实施方案

实施例1 光电化学传感器的制备

（1）钼酸铋纳米片材料的制备

取1.0 g五水合硝酸铋和0.4 g二水合钼酸钠在搅拌下共溶于100 mL超纯水中，该溶液在室温下搅拌1 h，搅拌均匀后所得到的淡黄色溶液转移至高压反应釜中，于160 °C下反应20 h，反应结束后，自然冷却至室温，产品用超纯水和无水乙醇各洗涤3次，之后于30 °C下真空干燥8 h，制的片状钼酸铋纳米材料；

（2）锌掺杂硫化镉纳米颗粒的制备

按比例取二水合乙酸锌和二水合乙酸镉试剂共溶于20 mL超纯水中，使得锌离子和镉离子的摩尔质量一共为0.01 mol, 此溶液在室温下搅拌均匀作为溶液A；取1.0g九水合硫化钠溶于20 mL超纯水中，搅拌均匀制得溶液B；将溶液A与溶液B混合，在室温下搅拌6 h，之后将混合水溶液倒入高压反应釜中，于150 °C下反应14 h，反应结束后自然冷却至室温，产品用超纯水和无水乙醇各洗涤3次，之后于30 °C下真空干燥过夜，得到锌掺杂的硫化镉纳米颗粒材料；

（3）金纳米粒子的制备

取30 mL质量分数为0.01 %的氯金酸水溶液于120 °C下煮沸5 min, 之后向煮沸的溶液中加入2.0 mL质量分数为1 %的柠檬酸三钠水溶液，溶液在煮沸条件下持续搅拌，溶液颜色由微微蓝色变成亮红色，继续搅拌，得紫色溶液，制的金纳米粒子；

（4）光电化学传感器的制备

1）将导电玻璃依次用洗洁精、丙酮、乙醇和超纯水超声清洗，氮气吹干；

2）取6 µL、2 mg/mL的钼酸铋水溶液滴加到ITO导电玻璃的导电面，室温下自然晾干；

3）在修饰的电极表面继续滴加6 µL、2 mg/mL的锌掺杂的硫化镉水溶液，自然晾干；

4）在修饰的电极表面继续滴加6 µL金纳米粒子水溶液，室温下自然晾干；

5）滴加4 µL、5 μg/mL的降钙素原抗体，超纯水清洗，室温下自然晾至湿润薄膜状态；

6）滴加3 µL、用pH为7.0的PBS缓冲溶液配置的质量分数为0.1 %的牛血清白蛋白溶液于修饰电极表面，超纯水冲洗电极表面，4 ℃冰箱中晾干；

7）滴加6 µL、用PBS缓冲溶液配置的0.1 pg/mL ~ 1000 ng/mL的降钙素原抗原，超纯水冲洗电极表面，4 ℃冰箱中自然晾干，制得一种检测降钙素原抗原的光电化学传感器。

实施例2 光电化学传感器的制备

（1）钼酸铋纳米片材料的制备

取1.5 g五水合硝酸铋和0.5 g二水合钼酸钠在搅拌下共溶于120 mL超纯水中，该溶液在室温下搅拌2 h，搅拌均匀后所得到的淡黄色溶液转移至高压反应釜中，于180 °C下反应22 h，反应结束后，自然冷却至室温，产品用超纯水和无水乙醇各洗涤3次，之后于40 °C下真空干燥10 h，制得片状钼酸铋纳米材料；

（2）锌掺杂硫化镉纳米颗粒的制备

按比例取二水合乙酸锌和二水合乙酸镉共溶于40 mL超纯水中，使得锌离子和镉离子的摩尔质量一共为0.01 mol，此溶液在室温下搅拌均匀作为溶液A；取2.0g九水合硫化钠溶于30 mL超纯水中，搅拌均匀制得溶液B；将溶液A与溶液B混合，在室温下搅拌8 h，之后将混合水溶液倒入高压反应釜中，于180 °C下反应16 h，反应结束后自然冷却至室温，产品用超纯水和无水乙醇各洗涤3次，之后于40 °C下真空干燥过夜，得到锌掺杂的硫化镉纳米颗粒材料；

（3）金纳米例子的制备

取40 mL质量分数为0.04 %的氯金酸水溶液于120 °C下煮沸6 min，之后向煮沸的溶液中加入4 mL质量分数为2 %的柠檬酸三钠水溶液，溶液在煮沸条件下持续搅拌，溶液颜色由微微蓝色变成亮红色，继续搅拌，得紫色溶液，制得金纳米粒子；

（4）光电化学传感器的制备

1）将导电玻璃依次用洗洁精、丙酮、乙醇和超纯水超声清洗，氮气吹干；

2）取6 µL、4 mg/mL的钼酸铋水溶液滴加到ITO导电玻璃的导电面，室温下自然晾干；

3）在修饰的电极表面继续滴加6 µL、4 mg/mL的锌掺杂的硫化镉水溶液，自然晾干；

4）在修饰的电极表面继续滴加6 µL金纳米粒子水溶液，室温下自然晾干；

5）滴加4 µL、10 μg/mL的降钙素原抗体，超纯水清洗，室温下自然晾至湿润薄膜状态；

6）滴加3 µL、用pH为7.0的PBS缓冲溶液配置的质量分数为0.2 %的牛血清白蛋白溶液于修饰电极表面，超纯水冲洗电极表面，4 ℃冰箱中晾干；

7）滴加6 µL、用PBS缓冲溶液配置的0.1 pg/mL ~ 1000 ng/mL的降钙素原抗原，超纯水冲洗电极表面，4 ℃冰箱中自然晾干，制得一种检测降钙素原抗原的光电化学传感器。

实施例3 光电化学传感器的制备

（1）钼酸铋纳米片材料的制备

取2.0 g五水合硝酸铋和0.6 g二水合钼酸钠在搅拌下共溶于150 mL超纯水中，该溶液在室温下搅拌3 h，搅拌均匀后所得到的淡黄色溶液转移至高压反应釜中，于200 °C下反应24 h，反应结束后，自然冷却至室温，产品用超纯水和无水乙醇各洗涤3次，之后于50 °C下真空干燥12 h，制得片状钼酸铋纳米材料；

（2）锌掺杂硫化镉纳米颗粒的制备

按比例取二水合乙酸锌和二水合乙酸镉共溶于50 mL超纯水中，使得锌离子和镉离子的摩尔质量一共为0.01 mol，此溶液在室温下搅拌均匀作为溶液A；取3.0g九水合硫化钠溶于50 mL超纯水中，搅拌均匀制得溶液B；将溶液A与溶液B混合，在室温下搅拌12 h，之后将混合水溶液倒入高压反应釜中，于200 °C下反应18 h，反应结束后自然冷却至室温，产品用超纯水和无水乙醇各洗涤3次，之后于50 °C下真空干燥过夜，得到锌掺杂的硫化镉纳米颗粒材料；

（3）金纳米粒子的制备

取50 mL质量分数为0.05 %的氯金酸水溶液于120 °C下煮沸10 min，之后向煮沸的溶液中加入5.0 mL质量分数为3 %的柠檬酸三钠水溶液，溶液在煮沸条件下持续搅拌，溶液颜色由微微蓝色变成亮红色，继续搅拌，得紫色溶液，制得金纳米粒子；

（4）光电化学传感器的制备

1）将导电玻璃依次用洗洁精、丙酮、乙醇和超纯水超声清洗，氮气吹干；

2）取6 µL、6 mg/mL的钼酸铋水溶液滴加到ITO导电玻璃的导电面，室温下自然晾干；

3）在修饰的电极表面继续滴加6 µL、6 mg/mL的锌掺杂的硫化镉水溶液，自然晾干；

4）在修饰的电极表面继续滴加6 µL金纳米粒子水溶液，室温下自然晾干；

5）滴加4 µL、20 μg/mL的降钙素原抗体，超纯水清洗，室温下自然晾至湿润薄膜状态；

6）滴加3 µL、用pH为7.0的PBS缓冲溶液配置的质量分数为0.3 %的牛血清白蛋白溶液于修饰电极表面，超纯水冲洗电极表面，4 ℃冰箱中晾干；

7）滴加6 µL、用PBS缓冲溶液配置的0.1 pg/mL ~ 1000 ng/mL的降钙素原抗原，超纯水冲洗电极表面，4 ℃冰箱中自然晾干，制得一种检测降钙素原抗原的光电化学传感器。

实施例4 降钙素原的检测

（1）使用电化学工作站以三电极体系进行测试，饱和甘汞电极为参比电极，铂丝电极为辅助电极，制备的ITO修饰的传感器为工作电极，在10 mL含有0.01 mol/L的抗坏血的pH为5.0的PBS缓冲溶液中进行测试；

（2）用时间-电流法对降钙素原抗原进行检测，设置电压为-0.1 V，运行时间120 s，光源波长为400 nm；

（3）电极放置好之后，每隔20 s开灯持续照射20 s，记录光电流，绘制工作曲线；

（4）将待测的降钙素原抗原样品溶液代替降钙素原抗原标准溶液进行检测。

实施例5 降钙素原的检测

（1）使用电化学工作站以三电极体系进行测试，饱和甘汞电极为参比电极，铂丝电极为辅助电极，制备的ITO修饰的传感器为工作电极，在10 mL含有0.1 mol/L抗坏血酸的pH为7.0的PBS缓冲溶液中进行测试；

（2）用时间-电流法对降钙素原抗原进行检测，设置电压为0 V，运行时间120s，光源波长为430 nm；

（3）电极放置好之后，每隔20 s开灯持续照射20 s，记录光电流，绘制工作曲线；

（4）将待测的降钙素原抗原样品溶液代替降钙素原抗原标准溶液进行检测。

实施例6 降钙素原的检测

（1）使用电化学工作站以三电极体系进行测试，饱和甘汞电极为参比电极，铂丝电极为辅助电极，制备的ITO修饰的传感器为工作电极，在10 mL含有0.5 mol/L抗坏血酸的pH为8.0的PBS缓冲溶液中进行测试；

（2）用时间-电流法对降钙素原抗原进行检测，设置电压为0.1 V，运行时间120s，光源波长为450 nm；

（3）电极放置好之后，每隔20 s开灯持续照射20 s，记录光电流，绘制工作曲线；

（4）将待测的降钙素原抗原样品溶液代替降钙素原抗原标准溶液进行检测。

Claims (2)

1.一种基于钼酸铋/锌掺杂硫化镉/金的光电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）钼酸铋纳米片材料的制备

取1.0 ~ 2.0 g五水合硝酸铋和0.4 ~ 0.6 g二水合钼酸钠在搅拌下共溶于100 ~ 150mL超纯水中，该溶液在室温下搅拌1 ~ 3 h，搅拌均匀后所得到的淡黄色溶液转移至高压反应釜中，于160 ~ 200 °C下反应20 ~ 24 h，反应结束后，自然冷却至室温，产品用超纯水和无水乙醇各洗涤3次，之后于30 ~ 50 °C下真空干燥8 ~ 12 h，制得片状钼酸铋纳米材料；

（2）锌掺杂硫化镉纳米颗粒的制备

按不同比例取二水合乙酸锌和二水合乙酸镉试剂共溶于20 ~ 50 mL超纯水中，使得锌离子和镉离子的摩尔质量一共为0.01 mol，此溶液在室温下搅拌均匀作为溶液A；取1.0 ~3.0 g九水合硫化钠溶于20 ~ 50 mL超纯水中，搅拌均匀制得溶液B；将溶液A与溶液B混合，在室温下搅拌6 ~ 12 h，之后将混合水溶液倒入高压反应釜中，于150 ~ 200 °C下反应14~ 18 h，反应结束后自然冷却至室温，产品用超纯水和无水乙醇各洗涤3次，之后于30 ~ 50°C下真空干燥过夜，得到不同锌掺杂比例的硫化镉纳米颗粒材料；

（3）金纳米粒子的制备

取30 ~ 50 mL质量分数为0.01 % ~ 0.05 %的氯金酸水溶液于120 °C下煮沸5 ~ 10min，之后向煮沸的溶液中加入2.0 ~ 5.0 mL质量分数为1 % ~ 3 %的柠檬酸三钠水溶液，溶液在煮沸条件下持续搅拌，溶液颜色由微微蓝色变成亮红色，继续搅拌，得紫色溶液，制得金纳米粒子；

（4）光电化学传感器的制备

1）将导电玻璃依次用洗洁精、丙酮、乙醇和超纯水超声清洗，氮气吹干；

2）取6 µL、2 ~ 6 mg/mL的钼酸铋水溶液滴加到ITO导电玻璃的导电面，室温下自然晾干；

3）在修饰的电极表面继续滴加6 µL、2 ~ 6 mg/mL的锌掺杂的硫化镉水溶液，自然晾干；

4）在修饰的电极表面继续滴加6 µL金纳米粒子水溶液，室温下自然晾干；

5）滴加4 µL、5 ~ 20 μg/mL的降钙素原抗体，超纯水清洗，室温下自然晾至湿润薄膜状态；

6）滴加3 µL、用pH为7.0的PBS缓冲溶液配置的质量分数为0.1 % ~ 0.3 %的牛血清白蛋白溶液于修饰电极表面，超纯水冲洗电极表面，4 ℃冰箱中晾干；

7）滴加6 µL、用PBS缓冲溶液配置的0.1 pg/mL ~ 1000 ng/mL的降钙素原抗原，超纯水冲洗电极表面，4 ℃冰箱中自然晾干，制得一种检测降钙素原抗原的光电化学传感器。

2.如权利要求1所述制备的光电化学传感器的检测方法，其特征在于，步骤如下：

（1）使用电化学工作站以三电极体系进行测试，饱和甘汞电极为参比电极，铂丝电极为辅助电极，制备的ITO修饰的传感器为工作电极，在10 mL含有0.01 ~ 0.5 mol/L抗坏血酸的pH为5.0 ~ 8.0的PBS缓冲溶液中进行测试；

（2）用时间-电流法对降钙素原抗原进行检测，设置电压为-0.1 ~ 0.1 V，运行时间120s，光源波长为400 ~ 450 nm；

（3）电极放置好之后，每隔20 s开灯持续照射20 s，记录光电流，绘制工作曲线；

（4）将待测的降钙素原抗原样品溶液代替降钙素原抗原标准溶液进行检测。