CN110488009B - 一种非疾病诊断目的的人体免疫功能的检测方法及应用 - Google Patents

一种非疾病诊断目的的人体免疫功能的检测方法及应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种非疾病诊断目的的人体免疫功能的检测方法及应用，属于免疫功能检测技术领域，所述方法基于淋巴细胞亚群分析，进行免疫功能检测和评价，通过检测淋巴细胞亚群分布变化精确评估人体免疫功能的变化；另外，本发明中待检测样本用量少，单个样品检测时间短。本发明还提供了上述方案所述检测方法得到的检测结果在提供免疫功能信息中的应用，该方案能够针对各项细胞亚群进行评价或组合评价，并根据检测结果清楚判断机体状态，预测影响因素，进而获得免疫功能信息。

Description

一种非疾病诊断目的的人体免疫功能的检测方法及应用
技术领域
本发明涉及免疫功能检测技术领域，尤其涉及一种非疾病诊断目的的人体免疫功能的检测方法及应用。
背景技术
目前健康管理中免疫功能评价多针对早期肿瘤筛查和体液免疫评价，对某些已发生的疾病有较大提示意义，但无法提供免疫功能失调和疾病早期状态的信息。健康管理中免疫功能评价项目包含大量与免疫功能评价相关性较低的检测项目，样本收集繁琐，评价分析周期长。健康管理中免疫功能评价项目给出报告精确性和个性化程度较低，不能针对免疫***状况进行评价，更不能给出健康管理建议。
发明内容
本发明的目的在于提供一种非疾病诊断目的的人体免疫功能的检测方法及应用，该方法得到的检测结果能够用于免疫***状况评价，并依据评价结果给出健康管理建议。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种非疾病诊断目的的人体免疫功能的检测方法，包括以下步骤：
1)将人外周血与不同抗体组分别混合，进行孵育；
所述抗体组包括第一抗体组、第二抗体组、第三抗体组、CD3-FITC、CD28-PE、CD8a-PE-cy7和CD20-APC；
所述第一抗体组包括CD3-FITC、FOXP3-PE和CD4-PE-cy7；所述第二抗体组包括CD3-FITC、CD28-PE、CD8a-PE-cy7和CD20-APC；所述第三抗体组包括CD3-FITC、CD16-PE和CD56-APC；
2)加入红细胞裂解液，进行孵育，离心，弃上清；
3)采用细胞染色缓冲液对沉淀进行第一重悬，离心，弃上清，采用细胞染色缓冲液对沉淀进行第二重悬，得到待检样品；
4)采用流式细胞仪检测步骤3)所述待检样品中FSC/SSC、CD3+、CD3-CD20+、CD3-CD16+CD56+、CD3+CD4+CD3+CD8+、CD3+CD8+CD28+、CD3+CD8+CD28-和CD3+CD4+FOXP3+的数量百分比，并计算CD3+CD4+/CD3+CD8+的数值，得到分析数据；
所述流式细胞仪的检测参数参见下表：
5)参照评估标准比对分析数据，得出人体免疫功能的检测结果；
步骤5)中所述评估标准参照下表：
抗体类型 项目 计算数值
无 淋巴细胞相对计数 淋巴细胞占白细胞百分比
CD3+ T淋巴细胞相对计数 T淋巴细胞占淋巴细胞的数量百分比
CD3-CD20+ B淋巴细胞相对计数 B淋巴细胞占淋巴细胞的数量百分比
CD3-CD16+CD56+ NK细胞相对计数 NK细胞占淋巴细胞的数量百分比
CD3+CD4+ CD4+T细胞相对计数 CD4+T细胞占淋巴细胞的数量百分比
CD3+CD8+ CD8+T细胞相对计数 CD8+T细胞占淋巴细胞的数量百分比
CD3+CD4+/CD3+CD8+ CD4+T/CD8+T CD4+T/CD8+T
CD3+CD8+CD28+ 细胞毒T细胞相对计数 细胞毒T细胞占淋巴细胞的数量百分比
CD3+CD8+CD28- 抑制性T细胞相对计数 抑制性T细胞占淋巴细胞的数量百分比
CD3+CD4+FOXP3+ Treg相对计数 Treg占CD4+T细胞的数量百分比
优选的，步骤1)中所述混合的容器为EDTA抗凝管。
优选的，步骤1)中所述CD20-APC替换为CD19-APC。
优选的，所述孵育的过程避光进行；所述孵育的温度为16～26℃；所述孵育的时间为10～20min。
优选的，所述离心的离心力为300～400g；所述离心的时间为3～8min。
本发明还提供了上述方案所述检测方法得到的检测结果在提供免疫功能信息中的应用；所述应用的步骤为：参照提示标准比对检测结果，得出机体状态分析结果；
所述提示标准与机体免疫状态对照表如下：
提示机体处于免疫抑制状态的数量≥2时，判断机体处于免疫抑制状态；
提示机体处于免疫过度活跃状态的数量≥2时，判断机体处于免疫过度活跃状态；
提示机体处于免疫激活状态的数量≥2或者提示机体处于免疫激活状态状态的检测指标高于参考值高线或低于参考值低线，且超过参考值范围≥10％时，判断机体处于免疫激活状态。
本发明还提供了一种利用上述方案所述机体状态分析结果制定的饮食组方，当判断机体处于免疫抑制状态时，以每日摄入量计，所述饮食组方包括以下成分：糖类18～50岁女性：247.5～390g；18～50岁男性：309～487.5g；51～65岁女性：240～382g；50～65岁男性：289～455g；大于65岁的女性：234～317g；大于65岁的男性：282～382g、氨基酸18～50岁女性：45～210g；18～50岁男性：56～262.5g；51～65岁女性：44～206g；50～65岁男性：52.5～245g；大于65岁的女性：42.5～171g；大于65岁的男性：51～206g、维生素D 10～50μg、维生素C 100～2000mg、维生素E 14～800mg和硒50～400μg；
所述饮食组方还包括维生素A，以黄醇当量计，女性：每日摄入量为700～3000μgRAE，男性：每日摄入量为800～3000μg RAE；
所述饮食组方还包括维生素B6，18～50岁：每日摄入量为1.0～1.4mg，大于50岁：每日摄入量为1.3～1.7mg；
所述饮食组方还包括叶酸，以叶酸当量计，400～1000μg DFE；
所述饮食组方还包括铁，18～50岁女性：每日摄入量为20～50mg，男性及大于50岁的女性：每日摄入量为15～50mg；
所述饮食组方还包括锌，女性：每日摄入量为11.5～37mg，男性：每日摄入量为15.5～45mg；
当判断机体处于免疫过度活跃状态时，以每日摄入量计，所述饮食组方包括以下成分：饱和脂肪酸18～50岁女性：＜20g；18～50岁男性：＜25g；51～65岁女性：＜19g；50～65岁男性：＜23g；大于65岁的女性：＜19g；大于65岁的男性：＜23g、长链多不饱和脂肪酸8～50岁女性：6～29g；18～50岁男性：7.5～37g；51～65岁女性：6～29g；50～65岁男性：7～34g；大于65岁的女性：6～24g；大于65岁的男性：7～29g、氨基酸18～50岁女性：45～210g；18～50岁男性：56～262.5g；51～65岁女性：44～206g；50～65岁男性：52.5～245g；大于65岁的女性：42.5～171g；大于65岁的男性：51～206g和纤维素25～35g；
所述饮食组方还包括维生素A，以黄醇当量计，女性：每日摄入量为700～3000μgRAE，男性：每日摄入量为800～3000μg RAE。
优选的，按照性别和年龄分类，所述饮食组方中每日所需能量为：18～50岁女性：1800～2400kcal；18～50岁男性：2250～3000kcal；51～65岁女性：1750～2350kcal；50～65岁男性：2100～2800kcal；大于65岁的女性：1700～1950kcal；大于65岁的男性：2050～2350kcal。
本发明还提供了上述方案所述检测方法得到的检测结果在早期临床干预中的应用，所述应用的步骤为：参照提示标准比对检测结果，得出影响因素分析结果，为早期临床干预提供依据；
所述提示标准与影响因素对照表如下：
本发明的有益效果：本发明提供了一种非疾病诊断目的的人体免疫功能的检测方法及应用，该方法基于淋巴细胞亚群分析，进行免疫功能检测和评价，通过检测淋巴细胞亚群分布变化精确评估人体免疫功能的变化，同时提供针对免疫功能的健康管理建议，为健康管理和早期临床干预提供准确的免疫功能信息；另外，本发明中待检测样本用量少，仅需2mL外周血样品；其次，采用本发明的方法检测单个样品仅需1h(其中样品制备时间50min，上机时间5～10min)；多样本同时检测可同时进行样品制备，进一步缩短检测时间；单个样品评价分析周期仅需0.5h，大幅缩短免疫评价所需时间。
本发明还提供了上述方案所述检测方法得到的检测结果在提供免疫功能信息和早期临床干预中的应用，包括提示标准与机体免疫状态对照表和提示标准与影响因素对照表，依据上述两个对照表能够针对各项细胞亚群进行评价或组合评价，并根据检测结果清楚判断机体状态，预测影响因素，进而为早期临床干预提供依据。
附图说明
图1为本发明检测方法流程图；
图2为实施例1中样品流式细胞上机检测结果；
图3为实施例2中样品流式细胞上机检测结果；
图4为实施例3中样品流式细胞上机检测结果。
具体实施方式
本发明提供了一种非疾病诊断目的的人体免疫功能的检测方法，包括以下步骤：
1)将人外周血与不同抗体组分别混合，进行孵育；
所述抗体组包括第一抗体组、第二抗体组、第三抗体组、CD3-FITC、CD28-PE、CD8a-PE-cy7和CD20-APC；
所述第一抗体组包括CD3-FITC、FOXP3-PE和CD4-PE-cy7；所述第二抗体组包括CD3-FITC、CD28-PE、CD8a-PE-cy7和CD20-APC；所述第三抗体组包括CD3-FITC、CD16-PE和CD56-APC；
2)加入红细胞裂解液，进行孵育，离心，弃上清；
3)采用细胞染色缓冲液对沉淀进行第一重悬，离心，弃上清，采用细胞染色缓冲液对沉淀进行第二重悬，得到待检样品；
4)采用流式细胞仪检测步骤3)所述待检样品中FSC/SSC、CD3+、CD3-CD20+、CD3-CD16+CD56+、CD3+CD4+CD3+CD8+、CD3+CD8+CD28+、CD3+CD8+CD28-和CD3+CD4+FOXP3+的数量百分比，并计算CD3+CD4+/CD3+CD8+的数值，得到分析数据；5)参照评估标准比对分析数据，得出人体免疫功能的检测结果。
本发明中，所述检测方法流程图参见图1，其中虚线为辅助参考项目。
本发明首先将人外周血与不同抗体组分别混合，进行孵育；所述混合的容器优选为EDTA抗凝管；本发明具体实施过程中，所述EDTA抗凝管优选为2mL抗凝管，每只EDTA抗凝管中人外周血的含量优选为1.5～2mL；所述抗体组中每种抗体与人外周血的体积比优选为1∶1000。
本发明中，所述抗体组包括第一抗体组、第二抗体组、第三抗体组、CD3-FITC、CD28-PE、CD8a-PE-cy7和CD20-APC；其中CD3-FITC、CD28-PE、CD8a-PE-cy7和CD20-APC依次为FITC单染管、PE单染管、PE-cy7单染管和APC单染管，用于流式细胞术中调节各荧光素补偿电压。
本发明中，所述第一抗体组包括CD3-FITC、FOXP3-PE和CD4-PE-cy7；所述第二抗体组包括CD3-FITC、CD28-PE、CD8a-PE-cy7和CD20-APC；所述第三抗体组包括CD3-FITC、CD16-PE和CD56-APC。
本发明中，所述CD20-APC优选的替换为CD19-APC。
本发明中，所述孵育的过程避光进行；所述孵育的温度优选为16～26℃，更优选为20℃；所述孵育的时间优选为10～20min，更优选为15min。
本发明加入红细胞裂解液，进行孵育，离心，弃上清；所述孵育的过程避光进行；所述孵育的温度优选为16～26℃，更优选为20℃；所述孵育的时间优选为10～20min，更优选为15min；所述离心的离心力优选为300～400g，更优选为350g；所述离心的时间优选为3～8min，更优选为5min。
本发明采用细胞染色缓冲液对离心后收集的沉淀进行第一重悬，离心，弃上清，采用细胞染色缓冲液对沉淀进行第二重悬，得到待检样品。本发明具体实施过程中，所述第一重悬时细胞染色缓冲液的用量优选为1.5～2.5mL，更优选为2mL；所述离心的离心力优选为300～400g，更优选为350g；所述离心的时间优选为3～8min，更优选为5min；所述第二重悬时细胞染色缓冲液的用量优选为0.3～0.8mL，更优选为0.5mL。
本发明在得到待检样品后，采用流式细胞仪检测待检样品中FSC/SSC、CD3+、CD3-CD20+、CD3-CD16+CD56+、CD3+CD4+CD3+CD8+、CD3+CD8+CD28+、CD3+CD8+CD28-和CD3+CD4+FOXP3+的数量百分比，并计算CD3+CD4+/CD3+CD8+的数值，得到分析数据。
本发明中，所述流式细胞仪的检测过程优选的按照以下步骤进行：
A)阴性对照管上机调节总电压，使事件点在FSC(A)-SSC(A)直方图大致沿斜率为(1，1)的线分布，分群为三群细胞；调节FITC通道电压使事件点在FITC(A)-SSC(A)直方图全部落在FITC(A)102以内；调节PE通道电压使事件点在PE(A)-SSC(A)直方图全部落在PE(A)102以内；调节PE-cy7通道电压使事件点在PE-cy7(A)-SSC(A)直方图全部落在PE-cy7(A)102以内；调节APC通道电压使事件点在APC(A)-SSC(A)直方图全部落在APC(A)102以内；
B)FITC单染管、PE单染管、PE-cy7单染管和APC单染管分别上机，调节调节各荧光素补偿电压；
PE单染管上机：事件点在PE(A)-PE-cy7(A)直方图分为2-3群，沿直方图左下的双阴性群边缘外侧分别画平行于横、纵坐标的线段，调节PE-cy7通道电压及PE通道电压，使事件点全部落在平行线段与坐标轴之间；事件点在PE(A)-FITC(A)直方图分为2-3群，沿直方图左下的阴性群边缘外侧分别画平行于横、纵坐标的线段，调节FITC通道电压及PE通道电压，使事件点全部落在平行线段与坐标轴之间；事件点在PE(A)-APC(A)直方图分为2-3群，沿直方图左下的阴性群边缘外侧分别画平行于横、纵坐标的线段，调节APC通道电压及PE通道电压，使事件点全部落在平行线段与坐标轴之间；
PE-cy7单染管上机：事件点在PE-cy7(A)-PE(A)直方图分为2-3群，沿直方图左下的双阴性群边缘外侧分别画平行于横、纵坐标的线段，调节PE通道电压及PE-cy7通道电压，使事件点全部落在平行线段与坐标轴之间；事件点在PE-cy7(A)-FITC(A)直方图分为2-3群，沿直方图左下的阴性群边缘外侧分别画平行于横、纵坐标的线段，调节FITC通道电压及PE-cy7通道电压，使事件点全部落在平行线段与坐标轴之间；事件点在PE-cy7(A)-APC(A)直方图分为2-3群，沿直方图左下的阴性群边缘外侧分别画平行于横、纵坐标的线段，调节APC通道电压及PE-cy7通道电压，使事件点全部落在平行线段与坐标轴之间；
FITC单染管上机：事件点在FITC(A)-PE(A)直方图分为2-3群，沿直方图左下的双阴性群边缘外侧分别画平行于横、纵坐标的线段，调节PE通道电压及FITC通道电压，使事件点全部落在平行线段与坐标轴之间；事件点在FITC(A)-PE-cy7(A)直方图分为2-3群，沿直方图左下的阴性群边缘外侧分别画平行于横、纵坐标的线段，调节FITC通道电压及PE-cy7通道电压，使事件点全部落在平行线段与坐标轴之间；事件点在FITC(A)-APC(A)直方图分为2-3群，沿直方图左下的阴性群边缘外侧分别画平行于横、纵坐标的线段，调节APC通道电压及FITC通道电压，使事件点全部落在平行线段与坐标轴之间；
APC单染管上机：事件点在APC(A)-PE(A)直方图分为2-3群，沿直方图左下的双阴性群边缘外侧分别画平行于横、纵坐标的线段，调节PE通道电压及APC通道电压，使事件点全部落在平行线段与坐标轴之间；事件点在APC(A)-PE-cy7(A)直方图分为2-3群，沿直方图左下的阴性群边缘外侧分别画平行于横、纵坐标的线段，调节APC通道电压及PE-cy7通道电压，使事件点全部落在平行线段与坐标轴之间；事件点在APC(A)-FITC(A)直方图分为2-3群，沿直方图左下的阴性群边缘外侧分别画平行于横、纵坐标的线段，调节APC通道电压及FITC通道电压，使事件点全部落在平行线段与坐标轴之间；
C)样品上机检测；所述检测参数参见表1：
表1 流式细胞仪的检测参数
本发明参照评估标准比对分析数据，得出人体免疫功能的检测结果；所述评估标准参见表2：
表2 人体免疫功能评估标准
本发明还提供了上述方案所述检测方法得到的检测结果在提供免疫功能信息中的应用；所述应用的步骤为：参照提示标准比对检测结果，得出机体状态分析结果；
所述提示标准与机体状态对照表参见表3：
表3 提示标准与机体状态对照表
提示机体处于免疫抑制状态的数量≥2时，判断机体处于免疫抑制状态；
提示机体处于免疫过度活跃状态的数量≥2时，判断机体处于免疫过度活跃状态；
提示机体处于免疫激活状态的数量≥2或者提示机体处于免疫激活状态状态的检测指标高于参考值高线或低于参考值低线，且超过参考值范围≥10％时，判断机体处于免疫激活状态。
本发明还提供了一种利用上述方案所述机体状态分析结果制定的饮食组方；
当判断机体处于免疫抑制状态时，以每日摄入量计，所述饮食组方包括以下成分：糖类18～50岁女性：247.5～390g；18～50岁男性：309～487.5g；51～65岁女性：240～382g；50～65岁男性：289～455g；大于65岁的女性：234～317g；大于65岁的男性：282～382g、氨基酸18～50岁女性：45～210g；18～50岁男性：56～262.5g；51～65岁女性：44～206g；50～65岁男性：52.5～245g；大于65岁的女性：42.5～171g；大于65岁的男性：51～206g、维生素D10～50μg、维生素C 100～2000mg、维生素E 14～800mg和硒50～400μg；所述饮食组方还包括维生素A，以黄醇当量计，女性：每日摄入量为700～3000μg RAE，男性：每日摄入量为800～3000μg RAE；所述饮食组方还包括维生素B6，18～50岁：每日摄入量为1.0～1.4mg，大于50岁：每日摄入量为1.3～1.7mg；所述饮食组方还包括叶酸，以叶酸当量计，400～1000μgDFE；所述饮食组方还包括铁，18～50岁女性：每日摄入量为20～50mg，男性及大于50岁的女性：每日摄入量为15～50mg；所述饮食组方还包括锌，女性：每日摄入量为11.5～37mg，男性：每日摄入量为15.5～45mg。
本发明中，所述饮食组方包括糖类18～50岁女性：247.5～390g；18～50岁男性：309～487.5g；51～65岁女性：240～382g；50～65岁男性：289～455g；大于65岁的女性：234～317g；大于65岁的男性：282～382g；所述糖类的热值优选为3～5kcal/g，更优选为4kcal/g；所述糖类优选的来源于低升糖指数食物；所述低升糖指数食物优选的包括全麦面包、马铃薯、黄豆及黄豆制品、青豆、四季豆、黑豆、燕麦、芋头和魔芋；所述糖类的作用是维持血糖稳定，为身体提供足够能量的同时，减少高糖风险。
本发明中，所述饮食组方包括氨基酸18～50岁女性：45～210g；18～50岁男性：56～262.5g；51～65岁女性：44～206g；50～65岁男性：52.5～245g；大于65岁的女性：42.5～171g；大于65岁的男性：51～206g；所述氨基酸的热值优选为3～5kcal/g，更优选为4kcal/g；所述氨基酸优选的来源于牛奶及奶制品、大豆及豆制品、蛋、鱼、禽和瘦肉中的一种或几种。氨基酸中的精氨酸、谷氨酸和半胱氨酸作为T细胞激活的共刺激因子，直接影响T细胞的免疫反应能力，而色氨酸使DC细胞分化、增加Th17分化同时抑制Treg细胞分化，从而使免疫***产生正常效应所必需的因子。
本发明中，所述饮食组方包括维生素D 10～50μg，优选为20～40μg，更优选为30μg；所述维生素D优选的来源于海水鱼、动物肝脏、奶油和蛋黄中的一种或几种，或者通过晒太阳在皮肤生成。本发明中，维生素D促进单核细胞分化，杀死有害细菌和肿瘤细胞；维生素D调节一些具有杀伤作用的T细胞，如NKT细胞和CD8+T细胞的分化，调节细胞因子的释放。
本发明中，所述饮食组方包括维生素C 100～2000mg，优选为300～1500mg，更优选为500～1000mg；所述维生素C优选的来源于新鲜蔬菜水果；所述新鲜蔬菜水果优选的包括枣、沙棘、柿子椒、番石榴、猕猴桃、菜花、苦瓜、山楂和西兰花。本发明中，维生素C促进细胞吞噬，增强细胞免疫。
本发明中，所述饮食组方包括维生素E 14～800mg，优选为50～500mg，更优选为100～300mg；所述维生素E优选的来源于油料种子及油制品、谷类、坚果和豆；本发明具体实施过程中所述维生素E来源于玉米、小麦胚油、菜籽油、豆油、芝麻、葵花籽和花生。
本发明中，所述饮食组方包括硒50～400μg，优选为100～300μg；所述硒优选的来源于芝麻、大蒜、蘑菇、鱼、虾、贝类、海藻、海参和动物肝脏；本发明中，硒和维生素E、β-胡萝卜素搭配可以增强人体免疫功能、抗氧化、延缓衰老，并能有效抑制肿瘤生长。
本发明中，所述饮食组方包括维生素A，以黄醇当量计，女性：700～3000μg RAE，男性：800～3000μg RAE；优选的，所述维生素A以黄醇当量计，女性：1000～2000μg RAE，男性：1100～2000μg RAE；所述维生素A优选的来源于动物肝脏、蛋黄、奶油和植物性食物中红、黄、绿蔬菜水果中的一种或几种；所述植物性食物中红、黄、绿蔬菜水果优选的包括西洋菜、芒果、西兰花、桔、胡萝卜、甘蓝菜、芹菜、菠菜和荠菜。本发明中，维生素A保护表皮和黏膜的完整性，阻止微生物入侵；维生素A能够直接作用于免疫细胞，增强细胞杀伤作用，促进树突状细胞抗原呈递作用，促进T细胞增殖，调节T细胞亚群分布；维生素A是对抗细胞外细菌及霉菌的免疫反应的Th17细胞分化所必需的。
本发明中，所述饮食组方包括维生素B6，18～50岁：1.0～1.4mg，大于50岁：每日摄入量为1.3～1.7mg；优选的，18～50岁：1.2～1.3mg，大于50岁：每日摄入量为1.4～1.5mg；所述维生素B6优选的来源于蛋黄、豆类及豆制品、肉、鱼、奶和全谷中的一种或几种。本发明中，维生素B6的摄入能够防止因维生素B6缺乏引起的T细胞增殖能力与功能下降。
本发明中，所述饮食组方包括叶酸，以叶酸当量计，400～1000μg DFE，优选为500～800μg DFE，最优选为600～700μg DFE；所述叶酸优选的来源于动物肝脏、蛋、豆类及豆制品、菠菜、芹菜和花菜中的一种或几种。本发明中，叶酸的摄入的摄入能够防止因叶酸缺乏抑制CD8+T细胞和NK细胞活性，引起抵抗力下降。
本发明中，所述饮食组方包括铁，18～50岁女性：20～50mg，男性及大于50岁的女性：15～50mg；优选的，18～50岁女性：30～40mg，男性及大于50岁的女性：25～40mg；所述铁优选的来源于动物肝脏、全血、畜肉、鱼类、黑木耳和芝麻中的一种或几种。本发明中，铁作为血红蛋白的重要组成成分，是人体细胞能量供应所必需的，为整个免疫***提供能量；同时，铁是T细胞激活的重要共刺激因子，铁缺乏导致免疫激活受到抑制，血清IgM、IgG的水平降低。
本发明中，所述饮食组方包括锌，女性：11.5～37mg，男性：15.5～45mg；优选的，女性：15～25mg，男性：20～30mg；所述锌优选的来源于贝壳类海产品、动物内脏、红肉和牛奶；本发明中，锌是核酸、蛋白质、碳水化合物的合成和维生素A利用的必需物质；锌缺乏会降低T细胞反应，降低免疫***功能。
当判断机体处于免疫过度活跃状态时，以每日摄入量计，所述饮食组方包括以下成分：饱和脂肪酸18～50岁女性：＜20g；18～50岁男性：＜25g；51～65岁女性：＜19g；50～65岁男性：＜23g；大于65岁的女性：＜19g；大于65岁的男性：＜23g、长链多不饱和脂肪酸8～50岁女性：6～29g；18～50岁男性：7.5～37g；51～65岁女性：6～29g；50～65岁男性：7～34g；大于65岁的女性：6～24g；大于65岁的男性：7～29g、氨基酸18～50岁女性：45～210g；18～50岁男性：56～262.5g；51～65岁女性：44～206g；50～65岁男性：52.5～245g；大于65岁的女性：42.5～171g；大于65岁的男性：51～206g和纤维素25～35g；所述饮食组方还包括维生素A，以黄醇当量计，女性：700～3000μg RAE，男性：800～3000μg RAE。
本发明中，所述饮食组方包括饱和脂肪酸18～50岁女性：＜20g；18～50岁男性：＜25g；51～65岁女性：＜19g；50～65岁男性：＜23g；大于65岁的女性：＜19g；大于65岁的男性：＜23g；所述饱和脂肪酸的热值优选为8～10kcal/g，更优选为9kcal/g；所述饱和脂肪酸优选的来源于肉、奶、奶酪和奶油中的一种或几种。本发明中，饱和脂肪酸及其代谢能够调节Th1、Th2比例，抑制树突状细胞过度反应，从而抑制哮喘的2型过敏反应，并减轻特应性皮炎症状。
本发明中，所述饮食组方包括长链多不饱和脂肪酸8～50岁女性：6～29g；18～50岁男性：7.5～37g；51～65岁女性：6～29g；50～65岁男性：7～34g；大于65岁的女性：6～24g；大于65岁的男性：7～29g；所述长链多不饱和脂肪酸的热值优选为8～10kcal/g，更优选为9kcal/g；所述长链多不饱和脂肪酸优选的来源于深海鱼类；所述深海鱼类优选的包括野鳕鱼、鲱鱼和鲑鱼。本发明中，长链多不饱和脂肪酸有助于减轻哮喘和特应性皮炎患者症状，抑制IgE及B细胞反应，抑制Th2细胞同时促进Th1细胞功能，并维持Treg细胞正常功能，从而抑制2型超敏反应，缓解过敏及自身免疫疾病。
本发明中，所述饮食组方包括氨基酸18～50岁女性：45～210g；18～50岁男性：56～262.5g；51～65岁女性：44～206g；50～65岁男性：52.5～245g；大于65岁的女性：42.5～171g；大于65岁的男性：51～206g；所述氨基酸的热值优选为3～5kcal/g，更优选为4kcal/g；所述氨基酸优选的来源于牛奶及奶制品、大豆及豆制品、蛋、鱼、禽和瘦肉中的一种或几种。本发明中，氨基酸中的精氨酸、谷氨酸和半胱氨酸作为T细胞激活的共刺激因子，直接影响T细胞的免疫反应能力，而色氨酸促进DC细胞分化，增加Th17分化同时抑制Treg细胞分化，从而使免疫***产生正常效应所必需的因子。本发明中，注意避免摄入蛋白质同时摄入过多脂肪(如肥肉、鸡皮、油炸烹饪等)，避免摄入自身过敏或不耐受的食物(如乳糖不耐受人群选择无乳糖奶、海鲜过敏人群避免海产品摄入等)。
本发明中，所述饮食组方包括纤维素25～35g；优选的，每日摄入总能量＜1800kcal时，所述饮食组方包括纤维素25g；每日摄入总能量为1800kcal～2800kcal时，所述饮食组方包括纤维素30g；每日摄入总能量＞2800kcal时，所述饮食组方包括纤维素35g；所述纤维素优选的来源于食用菌、笋、蔬菜、全谷和豆类中的一种或几种；所述食用菌包括蘑菇、木耳和银耳。本发明中，纤维素摄取量直接影响人体肠道菌群的分布和代谢状况，肠道菌群代谢纤维素产生短链脂肪酸，降低呼吸道过敏。
本发明中，所述饮食组方包括维生素A，以黄醇当量计，女性：700～3000μg RAE，男性：800～3000μg RAE；优选的，女性：1000～2000μg RAE，男性：1100～2000μg RAE；所述维生素A优选的来源于动物肝脏、蛋黄、奶油和植物性食物中红、黄、绿蔬菜水果中的一种或几种；所述植物性食物中红、黄、绿蔬菜水果优选的包括西洋菜、芒果、西兰花、桔、胡萝卜、甘蓝菜、芹菜、菠菜和荠菜。本发明中，维生素A保护表皮和黏膜的完整性，阻止微生物入侵。维生素A缺乏加重呼吸道、皮肤、过敏反应。
本发明中，避免摄入中链脂肪酸，原因是在过敏反应中，中链脂肪酸促进过敏原进入***，激活Th2细胞反应，加重食物过敏症状。
本发明中，按照性别和年龄分类，所述饮食组方中每日所需能量优选为：18～50岁女性：1800～2400kcal；18～50岁男性：2250～3000kcal；51～65岁女性：1750～2350kcal；50～65岁男性：2100～2800kcal；大于65岁的女性：1700～1950kcal；大于65岁的男性：2050～2350kcal；更优选的，18～50岁女性：轻、中、重体力活动人群每日所需总能量分别为1800kcal、2100kcal、2400kcal；18～50岁男性：轻、中、重体力活动人群每日所需总能量分别为2250kcal、2600kcal、3000kcal；50～65岁女性：轻、中、重体力活动人群每日所需总能量分别为1750kcal、2050kcal、2350kcal；50～65岁男性：轻、中、重体力活动人群每日所需总能量分别为2100kcal、2450kcal、2800kcal；65岁以上女性：轻、中体力活动人群每日所需总能量分别为1700kcal、1950kcal；65岁以上男性：轻、中体力活动人群每日所需总能量分别为2050kcal、2350kcal。
本发明中，轻、中、重体力活动根据调查问卷中工作信息及运动习惯的自我评价：
轻体力活动：运动习惯：“几乎不运动”或“偶尔运动”；工作：“轻体力活动工作(以坐姿工作为主，走动较少)”。
中度体力活动：运动习惯：“经常运动”或“几乎每天运动”；工作：“中体力活动工作(具有一定劳动强度，走动较多)”
重体力活动：工作：“重体力活动工作(全身力量工作(搬运或粉刷工人、农民、运动员等))”。
本发明还提供了上述方案所述检测方法得到的检测结果在早期临床干预中的应用，所述应用的步骤为：参照提示标准比对检测结果，得出影响因素分析结果，为早期临床干预提供依据；
所述提示标准与影响因素对照表参见表4：
表4 提示标准与影响因素对照表
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下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
调查对象：女，29岁，轻体力活动(问卷显示“很少锻炼”)
材料：2mL外周血样本(EDTA抗凝管采集)；
流程：
1.样品制备：
按照表5的分组加入抗体，避光室温孵育15min；红细胞裂解液避光室温孵育15min；350g离心5min，弃上清；2mL cell staining buffer重悬，350g离心5min，弃上清；0.5mL cell staining buffer重悬。
表5 样品制备的抗体组
阴性对照管 无
FITC单染管 CD3-FITC
PE单染管 CD28-PE
PE-cy7单染管 CD8a-PE-cy7
APC单染管 CD20-APC
样品管-第一组 CD3-FITC；FOXP3-PE；CD4-PE-cy7
样品管-第二组 CD3-FITC；CD28-PE；CD8a-PE-cy7；CD20-APC
样品管-第三组 CD3-FITC；CD16-PE；CD56-APC
2.流式细胞上机检测
以阴性对照管调节电压；以单染管调节个荧光素补偿电压(12项)
阴性对照管上机：调节总电压，使事件点在FSC(A)-SSC(A)直方图大致沿斜率为(1，1)的线分布，分群为三群细胞。调节FITC通道电压使事件点在FITC(A)-SSC(A)直方图全部落在FITC(A)102以内。调节PE通道电压使事件点在PE(A)-SSC(A)直方图全部落在PE(A)102以内。调节PE-cy7通道电压使事件点在PE-cy7(A)-SSC(A)直方图全部落在PE-cy7(A)102以内。调节APC通道电压使事件点在APC(A)-SSC(A)直方图全部落在APC(A)102以内。
补偿电压调节：
PE单染管上机：事件点在PE(A)-PE-cy7(A)直方图分为2-3群，沿直方图左下的双阴性群边缘外侧分别画平行于横、纵坐标的线段，调节PE-cy7通道电压及PE通道电压，使事件点全部落在平行线段与坐标轴之间；事件点在PE(A)-FITC(A)直方图分为2-3群，沿直方图左下的阴性群边缘外侧分别画平行于横、纵坐标的线段，调节FITC通道电压及PE通道电压，使事件点全部落在平行线段与坐标轴之间；事件点在PE(A)-APC(A)直方图分为2-3群，沿直方图左下的阴性群边缘外侧分别画平行于横、纵坐标的线段，调节APC通道电压及PE通道电压，使事件点全部落在平行线段与坐标轴之间。
PE-cy7单染管上机：事件点在PE-cy7(A)-PE(A)直方图分为2-3群，沿直方图左下的双阴性群边缘外侧分别画平行于横、纵坐标的线段，调节PE通道电压及PE-cy7通道电压，使事件点全部落在平行线段与坐标轴之间；事件点在PE-cy7(A)-FITC(A)直方图分为2-3群，沿直方图左下的阴性群边缘外侧分别画平行于横、纵坐标的线段，调节FITC通道电压及PE-cy7通道电压，使事件点全部落在平行线段与坐标轴之间；事件点在PE-cy7(A)-APC(A)直方图分为2-3群，沿直方图左下的阴性群边缘外侧分别画平行于横、纵坐标的线段，调节APC通道电压及PE-cy7通道电压，使事件点全部落在平行线段与坐标轴之间。
FITC单染管上机：事件点在FITC(A)-PE(A)直方图分为2-3群，沿直方图左下的双阴性群边缘外侧分别画平行于横、纵坐标的线段，调节PE通道电压及FITC通道电压，使事件点全部落在平行线段与坐标轴之间；事件点在FITC(A)-PE-cy7(A)直方图分为2-3群，沿直方图左下的阴性群边缘外侧分别画平行于横、纵坐标的线段，调节FITC通道电压及PE-cy7通道电压，使事件点全部落在平行线段与坐标轴之间；事件点在FITC(A)-APC(A)直方图分为2-3群，沿直方图左下的阴性群边缘外侧分别画平行于横、纵坐标的线段，调节APC通道电压及FITC通道电压，使事件点全部落在平行线段与坐标轴之间。
APC单染管上机：事件点在APC(A)-PE(A)直方图分为2-3群，沿直方图左下的双阴性群边缘外侧分别画平行于横、纵坐标的线段，调节PE通道电压及APC通道电压，使事件点全部落在平行线段与坐标轴之间；事件点在APC(A)-PE-cy7(A)直方图分为2-3群，沿直方图左下的阴性群边缘外侧分别画平行于横、纵坐标的线段，调节APC通道电压及PE-cy7通道电压，使事件点全部落在平行线段与坐标轴之间；事件点在APC(A)-FITC(A)直方图分为2-3群，沿直方图左下的阴性群边缘外侧分别画平行于横、纵坐标的线段，调节APC通道电压及FITC通道电压，使事件点全部落在平行线段与坐标轴之间。
3.样品上机检测
上机参数：
BD FACSDiva Software
通道 电压 阈值
FSC 422 200
SSC 517 200
FITC 458 200
PE 446 200
PE-Cy7 545 200
APC 528 200
4.结果分析
检测结果参见图2和表6。
表6 样品流式细胞上机检测结果
依据表6和图2的检测结果进行评价，机体状态分析结果如下：
淋巴细胞相对计数高，大于40％：提示免疫激活状态。可能受到如下因素影响：某些急性病毒感染；慢性感染；移植排异反应；再生障碍贫血；淋巴性白血病；
细胞毒T细胞相对计数高，大于15.50％：提示机体处于免疫过度活跃状态；可能受到如下因素影响：慢性炎症反应；提示自身免疫疾病倾向；
抑制性T细胞相对计数低，小于9.90％：提示免疫衰老程度较低。
Treg相对计数低，小于4％：提示正常的免疫抑制作用较弱，可能存在免疫过度活跃状态，如自身免疫疾病倾向、慢性炎症、排异反应等。
5.建议
饮食建议：每日总能量建议：1800kcal，以每日摄入量计，饮食组方包括表7中的成分：
表7 每日饮食组方
注：饮食指导仅为日常饮食的建议。如疾病发生风险较高，或希望使用各类免疫补剂，请咨询专业医师或营养师。
生活建议：
保持良好心情；适量运动，避免运动强度过大；避免接触过敏原，减少紫外线接触，户外活动使用防晒。
免疫评估结果与个体主诉一致性评价：
问卷显示样本来源个体有中等程度(3/5)的“季节变化时流涕、流泪”及中高程度(4/5)的“身上起小包，又红又痒”，与免疫细胞评估反应的免疫激活状态结果相一致。
实施例2
女，28岁，中等体力活动(问卷显示“有时锻炼”)
材料与流程与实施例1中一致。
结果分析：
检测结果参见图3和表8。
表8 样品流式细胞上机检测结果
依据表8和图3的检测结果进行评价，机体状态分析结果如下：
1)CD8+T细胞相对计数低，小于15％：提示机体对感染抵抗能力及损伤修复能力较弱。
2)抑制性T细胞相对计数低，小于9.90％：同时细胞毒T细胞相对计数正常：提示免疫衰老程度较弱。
3)Treg相对计数低，小于4％：提示正常的免疫抑制作用较弱，可能存在免疫过度活跃状态，如自身免疫疾病倾向、慢性炎症、排异反应等。
饮食建议：每日总能量建议：2100kcal，以每日摄入量计，饮食组方包括表9中的成分：
表9 每日饮食组方
注：饮食指导仅为日常饮食的建议。如疾病发生风险较高，或希望使用各类免疫补剂，请咨询专业医师或营养师。
生活建议：
保持良好心情；适量运动，避免运动强度过大；避免接触过敏原，减少紫外线接触，户外活动使用防晒；注意防范消化道感染，避免烟、酒、刺激性食物或坚硬食物对消化道黏膜的刺激和破坏；注意防范呼吸道感染。
免疫评估结果与个体主诉一致性评价：
问卷显示样本来源个体有中等程度(3/5)的“季节变化时流涕、流泪”，与免疫细胞评估反映的免疫激活状态结果相一致；中等程度(3/5)的“口腔溃疡”，与免疫细胞评估反映的对感染抵抗能力及损伤修复能力较弱结果相一致。
实施例3
男，31岁，中等体力活动(问卷显示“有时锻炼”)
材料与流程与实施例1中一致。
结果分析：
检测结果参见图4和表10。
表10 样品流式细胞上机检测结果
依据表10和图4的检测结果进行评价，机体状态分析结果如下：
1)CD4+T/CD8+T稍低：提示机体处于免疫抑制状态，可能受到如下因素影响：免疫缺陷、病毒感染、再生障碍性贫血等。
2)细胞毒T细胞相对计数高，大于15.50％：提示机体处于免疫过度活跃状态；可能受到如下因素影响：慢性感染等引起的机体免疫激活状态。
3)抑制性T细胞相对计数低，小于9.90％：提示免疫衰老程度较弱。
4)Treg相对计数高：提示免疫抑制状态，抗肿瘤免疫力降低。
饮食建议：每日总能量建议：2100kcal，以每日摄入量计，饮食组方包括表11中的成分：
表11 每日饮食组方
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注：饮食指导仅为日常饮食的建议。如疾病发生风险较高，或希望使用各类免疫补剂，请咨询专业医师或营养师。
生活建议：
保持良好心情；适量运动，避免运动强度过大；注意防范消化道感染，避免烟、酒、刺激性食物或坚硬食物对消化道黏膜的刺激和破坏；注意防范呼吸道感染。
免疫评估结果与个体主诉一致性评价：
问卷显示样本来源个体有中等程度(3/5)的易发生呼吸道感染倾向(“周围的同事、家人感冒时也感冒”)；中等程度(3/5)的“疲乏感”；与免疫细胞评估反映的对感染抵抗能力及损伤修复能力较弱结果相一致。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (7)

1.一种非疾病诊断目的的人体免疫功能的检测方法得到的检测结果在提供免疫功能信息中的应用；
所述应用的步骤为：参照提示标准比对检测结果，得出机体状态分析结果；
所述提示标准与机体免疫状态对照表如下：
序号 提示标准 机体状态 1 淋巴细胞相对计数＜20％ 提示机体处于免疫抑制状态 2 淋巴细胞相对计数＞40％ 提示机体处于免疫激活状态 3 T淋巴细胞相对计数＜50％ 提示机体处于免疫抑制状态 4 T淋巴细胞相对计数＞84％ 提示机体处于免疫过度活跃状态 5 B淋巴细胞相对计数＜5％ 提示机体处于免疫抑制状态 6 B淋巴细胞相对计数＞18％ 提示机体处于免疫激活状态 7 NK细胞相对计数＜7％ 提示机体处于免疫抑制状态 8 NK细胞相对计数＞40％ 提示机体处于免疫激活状态 9 CD4+T细胞相对计数＜27％ 提示机体处于免疫抑制状态 10 CD4+T细胞相对计数＞51％ 提示机体处于免疫抑制状态 11 CD8+T细胞相对计数＜15％ 提示机体处于免疫抑制状态 12 CD8+T细胞相对计数＞44％ 提示机体处于免疫过度活跃状态 13 CD4+T/CD8+T＜0.71 提示机体处于免疫抑制状态 14 CD4+T/CD8+T＞2.78 提示机体处于免疫过度活跃状态 15 细胞毒T细胞相对计数＜8.60％ 提示机体处于免疫抑制状态 16 细胞毒T细胞相对计数＞15.50％ 提示机体处于免疫过度活跃状态 17 抑制性T细胞相对计数＜9.90％ 提示机体免疫衰老程度较低 18 抑制性T细胞相对计数＞24.80％ 提示机体免疫衰老程度较高 19 Treg相对计数＜4％ 提示机体处于免疫过度活跃状态 20 Treg相对计数＞9％ 提示机体处于免疫抑制状态
；
提示机体处于免疫抑制状态的数量≥2时，判断机体处于免疫抑制状态；
提示机体处于免疫过度活跃状态的数量≥2时，判断机体处于免疫过度活跃状态；
提示机体处于免疫激活状态的数量≥2或者提示机体处于免疫激活状态状态的检测指标高于参考值高线或低于参考值低线，且超过参考值范围≥10％时，判断机体处于免疫激活状态；
所述检测方法包括以下步骤：
1)将人外周血与不同抗体组分别混合，进行孵育；
所述抗体组包括第一抗体组、第二抗体组、第三抗体组、CD3-FITC、CD28-PE、CD8a-PE-cy7和CD20-APC；
所述第一抗体组包括CD3-FITC、FOXP3-PE和CD4-PE-cy7；所述第二抗体组包括CD3-FITC、CD28-PE、CD8a-PE-cy7和CD20-APC；所述第三抗体组包括CD3-FITC、CD16-PE和CD56-APC；
2)加入红细胞裂解液，进行孵育，离心，弃上清；
3)采用细胞染色缓冲液对沉淀进行第一重悬，离心，弃上清，采用细胞染色缓冲液对沉淀进行第二重悬，得到待检样品；
4)采用流式细胞仪检测步骤3)所述待检样品中FSC/SSC、CD3+、CD3-CD20+、CD3-CD16+CD56+、CD3+CD4+CD3+CD8+、CD3+CD8+CD28+、CD3+CD8+CD28-和CD3+CD4+FOXP3+的数量百分比，并计算CD3+CD4+/CD3+CD8+的数值，得到分析数据；
所述流式细胞仪的检测参数参见下表：
5)参照评估标准比对分析数据，得出人体免疫功能的检测结果；
步骤5)中所述评估标准参照下表：
抗体类型 项目 计算数值 无 淋巴细胞相对计数 淋巴细胞占白细胞的数量百分比 CD3+ T淋巴细胞相对计数 T淋巴细胞占淋巴细胞的数量百分比 CD3-CD20+ B淋巴细胞相对计数 B淋巴细胞占淋巴细胞的数量百分比 CD3-CD16+CD56+ NK细胞相对计数 NK细胞占淋巴细胞的数量百分比 CD3+CD4+ CD4+T细胞相对计数 CD4+T细胞占淋巴细胞的数量百分比 CD3+CD8+ CD8+T细胞相对计数 CD8+T细胞占淋巴细胞的数量百分比 CD3+CD4+/CD3+CD8+ CD4+T/CD8+T CD4+T/CD8+T CD3+CD8+CD28+ 细胞毒T细胞相对计数 细胞毒T细胞占淋巴细胞的数量百分比 CD3+CD8+CD28- 抑制性T细胞相对计数 抑制性T细胞占淋巴细胞的数量百分比 CD3+CD4+FOXP3+ Treg相对计数 Treg占CD4+T细胞的数量百分比
。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，步骤1)中所述混合的容器为EDTA抗凝管。
3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，步骤1)中所述CD20-APC替换为CD19-APC。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述孵育的过程避光进行；所述孵育的温度为16～26℃；所述孵育的时间为10～20min。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述离心的离心力为300～400g；所述离心的时间为3～8min。
6.一种利用权利要求1～5任意一项所述应用得到的机体状态分析结果制定的饮食组方，其特征在于：
当判断机体处于免疫抑制状态时，以每日摄入量计，所述饮食组方包括以下成分：糖类18～50岁女性：247.5～390g；18～50岁男性：309～487.5g；51～65岁女性：240～382g；50～65岁男性：289～455g；大于65岁的女性：234～317g；大于65岁的男性：282～382g、氨基酸18～50岁女性：45～210g；18～50岁男性：56～262.5g；51～65岁女性：44～206g；50～65岁男性：52.5～245g；大于65岁的女性：42.5～171g；大于65岁的男性：51～206g、维生素D 10～50μg、维生素C 100～2000mg、维生素E 14～800mg和硒50～400μg；
所述饮食组方还包括维生素A，以黄醇当量计，女性：每日摄入量为700～3000μg RAE，男性：每日摄入量为800～3000μg RAE；
所述饮食组方还包括维生素B6，18～50岁：每日摄入量为1.0～1.4mg，大于50岁：每日摄入量为1.3～1.7mg；
所述饮食组方还包括叶酸，以叶酸当量计，400～1000μg DFE；
所述饮食组方还包括铁，18～50岁女性：每日摄入量为20～50mg，男性及大于50岁的女性：每日摄入量为15～50mg；
所述饮食组方还包括锌，女性：每日摄入量为11.5～37mg，男性：每日摄入量为15.5～45mg；
当判断机体处于免疫过度活跃状态时，以每日摄入量计，所述饮食组方包括以下成分：饱和脂肪酸18～50岁女性：＜20g；18～50岁男性：＜25g；51～65岁女性：＜19g；50～65岁男性：＜23g；大于65岁的女性：＜19g；大于65岁的男性：＜23g、长链多不饱和脂肪酸8～50岁女性：6～29g；18～50岁男性：7.5～37g；51～65岁女性：6～29g；50～65岁男性：7～34g；大于65岁的女性：6～24g；大于65岁的男性：7～29g、氨基酸18～50岁女性：45～210g；18～50岁男性：56～262.5g；51～65岁女性：44～206g；50～65岁男性：52.5～245g；大于65岁的女性：42.5～171g；大于65岁的男性：51～206g和纤维素25～35g；
所述饮食组方还包括维生素A，以黄醇当量计，女性：每日摄入量为700～3000μg RAE，男性：每日摄入量为800～3000μg RAE。
7.根据权利要求6所述的饮食组方，其特征在于，按照性别和年龄分类，所述饮食组方中每日所需能量为：18～50岁女性：1800～2400kcal；18～50岁男性：2250～3000kcal；51～65岁女性：1750～2350kcal；50～65岁男性：2100～2800kcal；大于65岁的女性：1700～1950kcal；大于65岁的男性：2050～2350kcal。
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