CN110484539B

CN110484539B - 一种调控德国小蠊性信息素合成的基因、基因片段、对应的dsRNA及其制备方法与应用

Info

Publication number: CN110484539B
Application number: CN201910796742.2A
Authority: CN
Inventors: 李胜; 陈楠
Original assignee: Guangmeiyuan R & D Center Key Laboratory Of Insect Developmental Biology And Applied Technology Huashi Meizhou City; South China Normal University
Current assignee: Guangmeiyuan R & D Center Key Laboratory Of Insect Developmental Biology And Applied Technology Huashi Meizhou City; South China Normal University
Priority date: 2019-08-27
Filing date: 2019-08-27
Publication date: 2020-11-24
Anticipated expiration: 2039-08-27
Also published as: CN110484539A

Abstract

本发明公开了一种调控德国小蠊性信息素合成的基因、基因片段、对应的dsRNA及其制备方法与应用，所述调控德国小蠊性信息素合成的基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。所述基因片段核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。将以该片段为模板合成的dsRNA导入雌性德国小蠊体内，可显著抑制CYP4PC1基因的表达水平，导致甲基酮类性信息素合成减少，最终使得德国小蠊部分雄虫个体求偶行为消失，本发明为基于蟑螂交配和繁殖的治理策略提供了具有潜力的分子靶标。

Description

一种调控德国小蠊性信息素合成的基因、基因片段、对应的 dsRNA及其制备方法与应用

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种调控德国小蠊性信息素合成的基因、基因片段、对应的dsRNA及其制备方法与应用。

背景技术

德国小蠊是蜚蠊目中最为常见的世界性家居害虫之一，其体型较小，常栖于缝隙和角落，可广泛传播多种病原微生物、携带大量过敏原并诱发哮喘，严重威胁人类健康。由于德国小蠊具有顽强的生命力和惊人的繁殖力，雌虫经单次交配后可多次产卵，每粒卵鞘可孵出约40头若虫，这种超强的繁殖力常使得其种群数量在短时期内快速增长。此外，德国小蠊食性杂，对常用农药容易产生抗性。这些特点都对德国小蠊的有效防治提出了严峻挑战。

RNA干扰(RNAi)是由双链RNA(dsRNA)介导的靶标基因沉默机制，具有高度的序列特异性，基于RNAi技术的害虫防治策略具有专一性，且对非靶标生物安全。基于RNAi技术的害虫防治策略核心是寻找关键的分子靶标基因并获得特异高效的dsRNA片段序列。德国小蠊的生殖方式为两性生殖，其两性的交配行为必须以雄虫求偶为前提。雌虫体表的接触性性信息素直接调控雄虫求偶行为并决定两性的成功交配。基于RNAi技术干扰德国小蠊性信息素合成的关键步骤，可以为着眼于交配繁殖及种群扩张的治理策略开辟新的途径。

细胞色素P450是一类蛋白超家族，广泛参与着内源性生理物质的合成代谢，催化异源物质如杀虫剂、植物次生物质的降解等。然而，关于细胞色素P450参与德国小蠊性信息素合成的控制作用尚未有相关报道。

发明内容

本发明的所要解决的第一个技术问题在于：提供一种能够调控德国小蠊性信息素合成的基因序列。

本发明的所要解决的第二个技术问题在于：提供一种能够调控德国小蠊性信息素合成的基因片段序列。

本发明的所要解决的第三个技术问题在于：提供上述基因片段的制备方法。

本发明的所要解决的第四个技术问题在于：提供基于上述基因片段设计的dsRNA。

本发明的所要解决的第五个技术问题在于：上述dsRNA的制备方法。

本发明的所要解决的第六个技术问题在于：上述dsRNA的应用。

为解决上述第一个技术问题，本发明采用的方案为：一种能够调控德国小蠊性信息素合成的基因(CYP4PC1基因)，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

为解决上述第二个技术问题，本发明采用的方案为：一种能够调控德国小蠊性信息素合成的基因片段，其核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。

为解决上述第三个技术问题，本发明采用的方案为：上述基因片段的制备方法，包括以下步骤：以含有如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列的重组质粒为模板，设计特异引物进行PCR扩增后得到所述基因片段。

优选地，所述特异引物包括核苷酸序列如SEQ ID No.5所示的上游引物和核苷酸序列如SEQ ID No.6所示的下游引物。

为解决上述第四个技术问题，本发明采用的方案为：基于上述基因片段合成的dsRNA，所述dsRNA由正义链和反义链组成，所述正义链序列如SEQ ID No.4所示，所述dsRNA反义链序列为与SEQ ID No.4所示的序列反向互补的核苷酸序列。

为解决上述第五个技术问题，本发明采用的方案为：上述dsRNA的制备方法，包括以下步骤：将核苷酸序列如SEQ ID No.3所示的基因片段克隆到载体中作为模板，设计引物并通过PCR扩增后体外转录合成得到所述dsRNA。

进一步地，设计的引物包括上游引物和下游引物，其中，所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.7所示，所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.8所示。

优选地，利用T7 RiboMAX^TM Express RNAi System(Promega)试剂盒进行体外转录合成所述dsRNA。

为解决上述第六个技术问题，本发明采用的方案为：上述dsRNA在制备用于防治德国小蠊或控制德国小蠊雌性成虫生殖的产品中的应用。

上述dsRNA在防控德国小蠊中的应用。

一种防控德国小蠊的方法，包括以下步骤：将上述dsRNA导入到德国小蠊体内。

进一步地，所述导入操作为注射操作；优选地，所述导入操作为以显微注射的方式注入到德国小蠊雌虫的腹部血淋巴中。

本发明的有益效果在于：本方案首次将德国小蠊参与其性信息素合成的P450基因(CYP4PC1基因)作为害虫防控的靶标，并基于CYP4PC1基因片段设计了一种能够有效阻断性信息素合成的dsRNA。将该dsRNA导入到德国小蠊雌虫体内，能够显著抑制雌虫体内CYP4PC1基因的表达水平，进而有效减少蛋白的表达，显著降低体表接触性性信息素含量和释放，导致部分雄虫个体求偶行为消失，达到控制德国小蠊交配繁殖，从而实现防控害虫的最终目的。本发明为基于蟑螂交配和繁殖的治理策略提供了具有良好应用潜力的分子靶标。

附图说明

图1为本发明实施例1中CYP4PC1基因序列分析过程示意图；

图2为本发明实施例3中雌虫两次注射dsCYP4PC1后的RNA干扰效率检测结果示意图；

图3为本发明实施例4中接触性性信息素含量变化结果示意图；

图4为本发明实施例4中雄虫求偶举翅行为的统计结果。

具体实施方式

为详细说明本发明的技术内容、所实现目的及效果，以下结合实施方式并配合附图予以说明。

本发明实施例一为：一种调控德国小蠊性信息素合成的基因，按照如图1所示的方式进行生物信息学分析与cDNA序列获得该基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示(CYP4PC1基因)，该基因所编码的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。其具体过程为：基于德国小蠊基因组数据库及差异转录组数据分析，获得CYP4PC1基因序列，该基因由12个外显子剪切而成(如图1A所示，由CYP4PC1基因外显子和内含子组成)，其开放阅读框(ORF)经PCR扩增并测序验证，无任何点突变，序列如SEQ ID No.1所示。该基因编码507个氨基酸残基，含P450基因特征基序(如图1B所示，为CYP4PC1基因氨基酸序列的保守特征基序鉴定)。

德国小蠊CYP4PC1基因序列(SEQ ID No.1)具体如下：

ATGGGACTATTTCTAGCTGTATCGTCAGTGGTCGCAGCATGCCTATTGGTGATCTACTTCTTACCTCGATTGAGGTCCTACTGGCGATATTTGGCAGCAGCAGAAAAATTACCCGCAGCAAAAGGACGCATCCTCATATTTGGAAACGCTCTACAAGTTGCAGTGCCACAGAATCAACTTGTAGCCAAGGTAGAAGAAATGCATAAATCGAACAAATCGCTCTTCGTCGGATGGGCTGGACCAATTCCATTTCTAGTAGTGGTTGATCCAAAATATGTGGAGGTATTTCTTGGTAGTGTCAAACACATAGAAAAAATACAAGAGTACCACTTTTTCGAAAGCTGGCTAGGACAAGGACTCGTAACTAGCAAAGGTTCACGATGGACTGCACACAGAAAAATGCTAACACCAGCTTTCCATTTCAAAATTTTAGAAAACTTTATTGACAGTTTCATCGAGAACAGCAAGATACTGATTAAAAATTTGGAGAAAGAAGTCGGTTCTGCCAGTTTTGACGCTATGCCATACGTGTCGATGTGTATACTTGACATCATTTGTGCGACTGCAATGGGCATAAATGGACATGCACAGGGGATGAAGCAACACTCGGAATACCTCGATGCCCTGACCAGAATTACAGCTGACATAATGTACAGAGCATTTTCGCCATGGTTGTACCCCGACTTCATATTCAACCTGACGCCCAATGGAAGAAGGTTTGCCAAAGACATAAGCACGCTGCACCAAAAGACGTATCAGATAATAAACGAACGCAGAGAGCAATACAGGCTCAACTTGTCCAGAAGTGCAGAAGAGGAAGCTGAATTAGGGAGAAAAAAGAGGCTGGTATTCCTGGATCTTCTCCTGGAGAATTCAGAGAAGGGGATGAAGTTGACTGACGAAGAAATCAGAGAGGAAGTGGACACCTTCATGCTGGGGGGGCACGATACTGTGTCATCTTTGGTATCCTGGGCTCTGCAACTATTAAGCTCCTATCCAGATGTGCAGGAGAAAGTTTACGAGGAACAGGAGAGCATTTTCAAAGGAAGTGACCGAGACCCGAGCATCAAAGACTTGTGTGAGATGAAGTACCTTGAAAGGGTTATCAAGGAGACTTTGAGACTGTATCCAAGTGTGTATGTTTTTGCGAGAGAGGTTGGAGAAGATGTGCAACTCGGTGAGCACAGGGTTCCTGCAGGAATGAGAGTATTAATTGTCCCGTACCTAACTCATCGCTTAGAAGAATATTACCCTAATCCAAAAGTTTTCGACCCAGACCGATTTCTTCCAGAAAAGATTGTCAACAGACATCCATATTCCTTCATCCCTTTCAGCGCAGGGCCTAGGAACTGCATAGGGCAGAAGTTCGCCATGTTGGAAATGAAGACTGTTTTATCATATGTCATACGTCACTACAAATTGCAAGCTACTGGAGAAATCCCTGCTCCTGTTGCGGAAATCGTCCTTCGACCAGAAAACGGAGTCCAAATTAAAATATTTAAGAGGAGAGATTCTTCTGCATAG。

德国小蠊CYP4PC1基因编码的氨基酸序列(SEQ ID No.2)具体如下：

MGLFLAVSSVVAACLLVIYFLPRLRSYWRYLAAAEKLPAAKGRILIFGNALQVAVPQNQLVAKVEEMHKSNKSLFVGWAGPIPFLVVVDPKYVEVFLGSVKHIEKIQEYHFFESWLGQGLVTSKGSRWTAHRKMLTPAFHFKILENFIDSFIENSKILIKNLEKEVGSASFDAMPYVSMCILDIICATAMGINGHAQGMKQHSEYLDALTRITADIMYRAFSPWLYPDFIFNLTPNGRRFAKDISTLHQKTYQIINERREQYRLNLSRSAEEEAELGRKKRLVFLDLLLENSEKGMKLTDEEIREEVDTFMLGGHDTVSSLVSWALQLLSSYPDVQEKVYEEQESIFKGSDRDPSIKDLCEMKYLERVIKETLRLYPSVYVFAREVGEDVQLGEHRVPAGMRVLIVPYLTHRLEEYYPNPKVFDPDRFLPEKIVNRHPYSFIPFSAGPRNCIGQKFAMLEMKTVLSYVIRHYKLQATGEIPAPVAEIVLRPENGVQIKIFKRRDSSA。

本发明实施例二为：德国小蠊CYP4PC1基因片段及其相应dsRNA的获得：

一、引物的合成

利用NCBI数据库Primer-BLAST设计针对CYP4PC1基因片段的特异性引物，其中包括引物对：AGAAGATGTGCAACTCGGTGA(SEQ ID No.5)和CTCCGTTTTCTGGTCGAAGGA(SEQ IDNo.6)以及引物对：TAATACGACTCACTATAGGGAGAAGATGTGCAACTCGGTGA(SEQ ID No.7)和TAATACGACTCACTATAGGGCTCCGTTTTCTGGTCGAAGGA(SEQ ID No.8)。以上引物片段由擎科生物(广州)合成。

二、CYP4PC1基因片段的获得

以含有SEQ ID No.1的重组质粒为模板，分别用核苷酸序列如SEQ ID No.5和SEQID No.6(配对使用)所示的引物进行PCR扩增后获得CYP4PC1片段(其核苷酸序列如SEQ IDNo.3所示)。并将扩增的CYP4PC1基因片段克隆至pGEM-T载体，获取含CYP4PC1基因片段的重组质粒。

上述步骤中PCR参数为：94℃3min，然后94℃30s，60℃30s，72℃25s共34个循环，最后72℃5min。

德国小蠊CYP4PC1基因片段的核苷酸序列(SEQ ID No.3)具体如下：

AGAAGATGTGCAACTCGGTGAGCACAGGGTTCCTGCAGGAATGAGAGTATTAATTGTCCCGTACCTAACTCATCGCTTAGAAGAATATTACCCTAATCCAAAAGTTTTCGACCCAGACCGATTTCTTCCAGAAAAGATTGTCAACAGACATCCATATTCCTTCATCCCTTTCAGCGCAGGGCCTAGGAACTGCATAGGGCAGAAGTTCGCCATGTTGGAAATGAAGACTGTTTTATCATATGTCATACGTCACTACAAATTGCAAGCTACTGGAGAAATCCCTGCTCCTGTTGCGGAAATCGTCCTTCGACCAGAAAACGGAG。

二、dsRNA的合成

以含如SEQ ID No.3所示的核苷酸序列基因片段的重组质粒为模板，用引物对SEQID No.5、SEQ ID No.6和引物对SEQ ID No.7、SEQ ID No.8按照T7RiboMAX^TM Express RNAiSystem(Promega)试剂盒方法，体外转录合成并纯化dsRNA，得到dsCYP4PC1(其正义链序列如SEQ ID No.4所示，具体为AGAAGAUGUGCAACUCGGUGAGCACAGGGUUCCUGCAGGAAUGAGAGUAUUAAUUGUCCCGUACCUAACUCAUCGCUUAGAAGAAUAUUACCCUAAUCCAAAAGUUUUCGACCCAGACCGAUUUCUUCCAGAAAAGAUUGUCAACAGACAUCCAUAUUCCUUCAUCCCUUUCAGCGCAGGGCCUAGGAACUGCAUAGGGCAGAAGUUCGCCAUGUUGGAAAUGAAGACUGUUUUAUCAUAUGUCAUACGUCACUACAAAUUGCAAGCUACUGGAGAAAUCCCUGCUCCUGUUGCGGAAAUCGUCCUUCGACCAGAAAACGGAG)。用Nanodrop One分光光度计定量调整浓度为3μg/μL，存于-80℃冰箱。

本发明实施例三为：一种调控德国小蠊性信息素合成的P450基因在德国小蠊防治中的应用：

一、对德国小蠊注射实施例二中可特异抑制P450基因的dsRNA

选取羽化12h内的德国小蠊雌虫60头，随机分为2组，每组各30头。处理组注射dsCYP4PC1，对照组注射以小鼠淋巴毒素蛋白基因对应dsRNA片段(dsMuslta)。用显微注射仪由腹部节间褶注射2μL dsRNA(6μg)，在第2天和第4天重复注射相同剂量dsRNA以维持对靶标基因的持续抑制效果，共注射三次，注射后按正常条件饲养。

二、dsRNA对P450基因干扰效果验证

在第5天解剖出头胸部(含触角、足)和腹部表皮，使用Zymo Direct-zol RNAminiprep试剂盒提取总RNA，以2μg反转录获得第一链cDNA。利用NCBI primer Blast在线工具设计qPCR引物并检测注射dsCYP4PC1后靶标基因的表达量变化。以肌动蛋白基因(actin-5c)为qPCR的内参基因，检测最终CYP4PC1基因相对表达量(CYP4PC1 relativeexpression)，结果如图2所示，图中“**”代表处理组和对照组之间相对表达量有显著差异(P<0.01，Student’s t-test)。从图2中可以看出，多次注射dsCYP4PC1后对CYP4PC1基因表达有显著抑制作用，干扰效率达86.5％(如图2所示)。

本发明实施例四为：上述操作注射德国小蠊CYP4PC1基因片段dsRNA后的性信息素含量测定及求偶行为观察：

一、接触性性信息素的提取与色谱分析

取dsRNA注射后第5天蟑螂进行性信息素含量检测。用正己烷浸泡法(5min×2次)提取表皮脂类，样品提取前加入1μg 14-二十七酮作为内标化合物。将正己烷提取物用氮气浓缩至约300μL。利用色谱硅胶柱分离纯化性信息素组分，依次用正己烷、含2％***的正己烷洗脱硅胶柱，获得甲基酮相。将洗脱液用氮气吹干后复溶至100μL正己烷，采用气相色谱质谱联用仪(GC-MS)(Thermo Scientific)进行性信息素的色谱分析，结果图3所示(图中“**”代表处理组和对照组之间性信息素的含量有显著差异(P<0.01，Student’s t-test))，其中，图3A为处理组和对照组的性信息含量柱形图，图3B为上述操作提取出的表皮脂类气相色谱图，对象为对照组(dsMuslta)中可以激发雄虫举翅行为的雌虫和处理组(dsCYP4PC1)中不能激发雄虫举翅行为的雌虫。从图3A中可以看出，由图可见，注射dsCYP4PC1可显著降低雌虫体表性信息素组分(3,11-二甲基二十九-2-酮)的含量，发现注射dsCYP4PC1可使雌虫体表性信息素含量降低90.6％。

对不能激发雄虫举翅行为的雌虫体表性信息素提取分析，结果如图3B所示，图中，IS表示内标化合物14-二十七酮。从图3B可以看出，这些雌虫个体体表性信息素含量降至色谱检出下限。由图3B可以看出，注射dsCYP4PC1能够导致雌虫体表性信息素含量降低至色谱检测阈值。由此表明注射dsRNA能够有效抑制德国小蠊雌虫个体性信息素的合成。

二、雄虫求偶行为分析

将新羽化的雄虫进行性隔离饲养至2周龄左右用于检测其对雌虫的求偶反应。取注射dsCYP4PC1第5天的雌虫单头置于玻璃培养皿(直径12cm)，1min后引入一头雄虫使雌雄虫相互识别，雌雄触角充分接触识别后若雄虫原地旋转180度并迅速举翅为阳性反应，反之为阴性。实验组和对照组中雄性德国小蠊举翅率，如图4所示。从图4中可以看出，注射dsCYP4PC1的处理组中33.3％的雌虫不能激发雄虫举翅行为。由此表明，注射dsRNA能够有效降低雄性对该雌虫的举翅行为，减少德国小蠊之间交配繁殖的几率。

以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书及附图内容所作的等同变换，或直接或间接运用在相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。

序列表

<110> 梅州市华师昆虫发育生物学与应用技术重点实验室广梅园研发中心

华南师范大学

<120> 一种调控德国小蠊性信息素合成的基因、基因片段、对应的dsRNA及其制备方法与应用

<160> 8

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1524

<212> DNA

<213> Blattella germanica

<400> 1

atgggactat ttctagctgt atcgtcagtg gtcgcagcat gcctattggt gatctacttc 60

ttacctcgat tgaggtccta ctggcgatat ttggcagcag cagaaaaatt acccgcagca 120

aaaggacgca tcctcatatt tggaaacgct ctacaagttg cagtgccaca gaatcaactt 180

gtagccaagg tagaagaaat gcataaatcg aacaaatcgc tcttcgtcgg atgggctgga 240

ccaattccat ttctagtagt ggttgatcca aaatatgtgg aggtatttct tggtagtgtc 300

aaacacatag aaaaaataca agagtaccac tttttcgaaa gctggctagg acaaggactc 360

gtaactagca aaggttcacg atggactgca cacagaaaaa tgctaacacc agctttccat 420

ttcaaaattt tagaaaactt tattgacagt ttcatcgaga acagcaagat actgattaaa 480

aatttggaga aagaagtcgg ttctgccagt tttgacgcta tgccatacgt gtcgatgtgt 540

atacttgaca tcatttgtgc gactgcaatg ggcataaatg gacatgcaca ggggatgaag 600

caacactcgg aatacctcga tgccctgacc agaattacag ctgacataat gtacagagca 660

ttttcgccat ggttgtaccc cgacttcata ttcaacctga cgcccaatgg aagaaggttt 720

gccaaagaca taagcacgct gcaccaaaag acgtatcaga taataaacga acgcagagag 780

caatacaggc tcaacttgtc cagaagtgca gaagaggaag ctgaattagg gagaaaaaag 840

aggctggtat tcctggatct tctcctggag aattcagaga aggggatgaa gttgactgac 900

gaagaaatca gagaggaagt ggacaccttc atgctggggg ggcacgatac tgtgtcatct 960

ttggtatcct gggctctgca actattaagc tcctatccag atgtgcagga gaaagtttac 1020

gaggaacagg agagcatttt caaaggaagt gaccgagacc cgagcatcaa agacttgtgt 1080

gagatgaagt accttgaaag ggttatcaag gagactttga gactgtatcc aagtgtgtat 1140

gtttttgcga gagaggttgg agaagatgtg caactcggtg agcacagggt tcctgcagga 1200

atgagagtat taattgtccc gtacctaact catcgcttag aagaatatta ccctaatcca 1260

aaagttttcg acccagaccg atttcttcca gaaaagattg tcaacagaca tccatattcc 1320

ttcatccctt tcagcgcagg gcctaggaac tgcatagggc agaagttcgc catgttggaa 1380

atgaagactg ttttatcata tgtcatacgt cactacaaat tgcaagctac tggagaaatc 1440

cctgctcctg ttgcggaaat cgtccttcga ccagaaaacg gagtccaaat taaaatattt 1500

aagaggagag attcttctgc atag 1524

<210> 2

<211> 507

<212> PRT

<213> Blattella germanica

<400> 2

Met Gly Leu Phe Leu Ala Val Ser Ser Val Val Ala Ala Cys Leu Leu

1 5 10 15

Val Ile Tyr Phe Leu Pro Arg Leu Arg Ser Tyr Trp Arg Tyr Leu Ala

20 25 30

Ala Ala Glu Lys Leu Pro Ala Ala Lys Gly Arg Ile Leu Ile Phe Gly

35 40 45

Asn Ala Leu Gln Val Ala Val Pro Gln Asn Gln Leu Val Ala Lys Val

50 55 60

Glu Glu Met His Lys Ser Asn Lys Ser Leu Phe Val Gly Trp Ala Gly

65 70 75 80

Pro Ile Pro Phe Leu Val Val Val Asp Pro Lys Tyr Val Glu Val Phe

85 90 95

Leu Gly Ser Val Lys His Ile Glu Lys Ile Gln Glu Tyr His Phe Phe

100 105 110

Glu Ser Trp Leu Gly Gln Gly Leu Val Thr Ser Lys Gly Ser Arg Trp

115 120 125

Thr Ala His Arg Lys Met Leu Thr Pro Ala Phe His Phe Lys Ile Leu

130 135 140

Glu Asn Phe Ile Asp Ser Phe Ile Glu Asn Ser Lys Ile Leu Ile Lys

145 150 155 160

Asn Leu Glu Lys Glu Val Gly Ser Ala Ser Phe Asp Ala Met Pro Tyr

165 170 175

Val Ser Met Cys Ile Leu Asp Ile Ile Cys Ala Thr Ala Met Gly Ile

180 185 190

Asn Gly His Ala Gln Gly Met Lys Gln His Ser Glu Tyr Leu Asp Ala

195 200 205

Leu Thr Arg Ile Thr Ala Asp Ile Met Tyr Arg Ala Phe Ser Pro Trp

210 215 220

Leu Tyr Pro Asp Phe Ile Phe Asn Leu Thr Pro Asn Gly Arg Arg Phe

225 230 235 240

Ala Lys Asp Ile Ser Thr Leu His Gln Lys Thr Tyr Gln Ile Ile Asn

245 250 255

Glu Arg Arg Glu Gln Tyr Arg Leu Asn Leu Ser Arg Ser Ala Glu Glu

260 265 270

Glu Ala Glu Leu Gly Arg Lys Lys Arg Leu Val Phe Leu Asp Leu Leu

275 280 285

Leu Glu Asn Ser Glu Lys Gly Met Lys Leu Thr Asp Glu Glu Ile Arg

290 295 300

Glu Glu Val Asp Thr Phe Met Leu Gly Gly His Asp Thr Val Ser Ser

305 310 315 320

Leu Val Ser Trp Ala Leu Gln Leu Leu Ser Ser Tyr Pro Asp Val Gln

325 330 335

Glu Lys Val Tyr Glu Glu Gln Glu Ser Ile Phe Lys Gly Ser Asp Arg

340 345 350

Asp Pro Ser Ile Lys Asp Leu Cys Glu Met Lys Tyr Leu Glu Arg Val

355 360 365

Ile Lys Glu Thr Leu Arg Leu Tyr Pro Ser Val Tyr Val Phe Ala Arg

370 375 380

Glu Val Gly Glu Asp Val Gln Leu Gly Glu His Arg Val Pro Ala Gly

385 390 395 400

Met Arg Val Leu Ile Val Pro Tyr Leu Thr His Arg Leu Glu Glu Tyr

405 410 415

Tyr Pro Asn Pro Lys Val Phe Asp Pro Asp Arg Phe Leu Pro Glu Lys

420 425 430

Ile Val Asn Arg His Pro Tyr Ser Phe Ile Pro Phe Ser Ala Gly Pro

435 440 445

Arg Asn Cys Ile Gly Gln Lys Phe Ala Met Leu Glu Met Lys Thr Val

450 455 460

Leu Ser Tyr Val Ile Arg His Tyr Lys Leu Gln Ala Thr Gly Glu Ile

465 470 475 480

Pro Ala Pro Val Ala Glu Ile Val Leu Arg Pro Glu Asn Gly Val Gln

485 490 495

Ile Lys Ile Phe Lys Arg Arg Asp Ser Ser Ala

500 505

<210> 3

<211> 323

<212> DNA

<213> Blattella germanica

<400> 3

agaagatgtg caactcggtg agcacagggt tcctgcagga atgagagtat taattgtccc 60

gtacctaact catcgcttag aagaatatta ccctaatcca aaagttttcg acccagaccg 120

atttcttcca gaaaagattg tcaacagaca tccatattcc ttcatccctt tcagcgcagg 180

gcctaggaac tgcatagggc agaagttcgc catgttggaa atgaagactg ttttatcata 240

tgtcatacgt cactacaaat tgcaagctac tggagaaatc cctgctcctg ttgcggaaat 300

cgtccttcga ccagaaaacg gag 323

<210> 4

<211> 323

<212> RNA

<213> Blattella germanica

<400> 4

agaagaugug caacucggug agcacagggu uccugcagga augagaguau uaauuguccc 60

guaccuaacu caucgcuuag aagaauauua cccuaaucca aaaguuuucg acccagaccg 120

auuucuucca gaaaagauug ucaacagaca uccauauucc uucaucccuu ucagcgcagg 180

gccuaggaac ugcauagggc agaaguucgc cauguuggaa augaagacug uuuuaucaua 240

ugucauacgu cacuacaaau ugcaagcuac uggagaaauc ccugcuccug uugcggaaau 300

cguccuucga ccagaaaacg gag 323

<210> 5

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

agaagatgtg caactcggtg a 21

<210> 6

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

ctccgttttc tggtcgaagg a 21

<210> 7

<211> 41

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

taatacgact cactataggg agaagatgtg caactcggtg a 41

<210> 8

<211> 41

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

taatacgact cactataggg ctccgttttc tggtcgaagg a 41

Claims

1.一种调控德国小蠊性信息素合成的基因，其特征在于：所述基因的核苷酸序列如SEQID No.1所示。

2.一种dsRNA，其特征在于：所述dsRNA基于核苷酸序列如Seq ID No.3所示的基因片段设计得到，所述dsRNA由正义链和反义链组成，所述正义链的序列如SEQ ID No.4所示，所述反义链的序列为与SEQ ID No.4所示的序列反向互补的核苷酸序列。

3.如权利要求2所述的dsRNA的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：将核苷酸序列如Seq ID No.3所示的基因片段克隆到载体中作为模板，设计引物并通过PCR扩增后体外转录合成得到所述dsRNA。

4.如权利要求3所述的dsRNA的制备方法，其特征在于：设计的引物包括上游引物和下游引物，其中，所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.7所示，所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.8所示。

5.如权利要求2所述的dsRNA在制备用于防治德国小蠊或控制德国小蠊雌性成虫生殖的产品中的应用。

6.如权利要求2所述的dsRNA在防控德国小蠊中的应用。

7.一种防控德国小蠊的方法，其特征在于：包括以下步骤：如权利要求2所述的dsRNA导入到德国小蠊体内。

8.根据权利要求7所述的防控德国小蠊的方法，其特征在于：所述导入操作为体内注射。