CN110483656A - 一种三叶青多糖抗菌抑菌漱口水的制备 - Google Patents
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Abstract
本发明属于开发天然产物抑菌漱口水的应用，具体涉及到了中草药三叶青多糖在制备抑菌药物，漱口水产品中的应用。以三叶青地上部分为原材料，按照如下步骤进行提取：（1）使用乙醇50℃提取5h,弃去上清液，使用超纯水50℃提取5h，分离得上清液，65℃浓缩，加入95%乙醇过夜，获得沉淀。（2）用超纯水溶解沉淀，以水：氯仿：正丁醇=8:4:1的比例混合，搅拌20分钟除去混合物中的蛋白质和脂质，重复至无沉淀；（3）超纯水透析两天，冻干得三叶青多糖。本发明涉及的三叶青多糖，可以在短暂的药物作用时间上显著的杀死细菌，并且长时间维持细菌无法增殖，具有很好的抗菌抑菌作用，是一款适合应用在快速灭菌，长时间抑菌的药物。
Description
技术领域
本发明属于中草药植物资源开发利用，具体涉及到一种三叶青多糖抗菌抑菌作用的用途。
背景技术
三叶青（Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg）又名三叶崖爬藤，又名金线吊葫芦、蛇附子，生长于阴湿山坡、山谷等地带，主要分布在我国浙江、福建、广西、云南等地。三叶青全草均可入药，是我国著名的中草药之一，具有显著的药用价值，如治疗病毒性脑膜炎、支气管炎、小儿高热惊厥、预防以及治疗癌症等。
口腔卫生的重点在于控制菌斑,消除污垢和食物残渣,增强生理刺激,使口腔和牙颌***有一个清洁健康的良好环境,从而发挥其生理功能,维护口腔健康。由于目前饮食的多样化以及一些不良的习惯极易导致口腔细菌的滋生，会导致牙斑菌，龋齿，口腔溃疡等疾病，尤其是龋齿被列为世界第三种最主要疾病，仅次于冠心病和癌症，并且许多病患对牙齿疾病的忽视导致晚期治疗的时候不得不切除牙齿神经或者整牙拔除。这样严重损坏人民的牙齿健康。
本发明对比了三叶青多糖对革兰氏阴性菌，大肠杆菌（E.coli）和革兰氏阳性菌，金黄色葡萄球菌（S.aureus）的抑制效果，旨在提供一种基于三叶青多糖在制备抗炎抗菌药物中的应用。
发明内容
由于目前饮食的多样化以及一些不良的习惯极易导致口腔细菌的滋生，会导致牙斑菌，龋齿，口腔溃疡等疾病，尤其是龋齿被列为世界第三种最主要疾病，仅次于冠心病和癌症，并且许多病患对牙齿疾病的忽视导致晚期治疗的时候不得不切除牙齿神经或者整牙拔除。这样严重损坏人民的牙齿健康。而目前以天然植物提取物为原料制备得到的漱口水往往无法在短时间内抑制细菌滋生。
为解决上述技术问题，本发明可以通过以下步骤实现：
一种三叶青多糖的制备方法，具体包括以下步骤：
（1）称取干燥的60目的三叶青粉末 250g，用1L无水乙醇50℃提取5小时，弃去上清液；用1L超纯水50℃提取5小时，抽滤得到滤液，在65℃水浴温度下浓缩至原体积的1/4；加入4倍体积的95%乙醇，沉淀静止过夜；5000转/分离心20分钟收集沉淀，经冷冻干燥后得粗多糖；
（2）称取三叶青粗多糖20g，溶解于1000mL超纯水中，超声溶解完全后，按比例加入氯仿和正丁醇,充分搅拌20min，5000r/min离心20 min,弃去有机层和蛋白层，重复三次，直至无蛋白质白色沉淀产生为止；
（3）使用8000-14000Da透析袋用超纯水透析48h，冷冻干燥获得三叶青精多糖。
步骤（2）所述氯仿和正丁醇的添加比例为，按体积比计：多糖：氯仿：正丁醇=8:4:1。
进一步地，将上述制备得到的三叶青多糖应用于制备抑制口腔菌斑漱口水中，制备方法为：用蒸馏水配制成终浓度为0.05-2.0wt%的漱口水。
本发明的优点在于：本发明涉及的三叶青多糖，可以在短暂的药物作用时间上显著的杀死细菌，并且长时间维持细菌无法增殖，具有很好的抗菌抑菌作用，是一款适合应用在快速灭菌，长时间抑菌的药物，应用于漱口水中能够有效抑制细菌生长，在较短的给药时间（5 min）各浓度都能够在2小时内有效抑制细菌生长。符合口腔抑菌模型所需要的给药时间短，清除性好，持续时间长的特点。
附图说明
图1为三叶青多糖对大肠杆菌作用效果图。
图2为三叶青多糖对菌作用扫描电子显微镜图。
图3为基于口腔抗菌模型三叶青多糖对大肠杆菌效果；其中a-e分别为三叶青多糖水溶液培养菌液5 min,10 min,15 min,20 min,25 min的抑菌效果。
具体实施方式
实施例1 制备三叶青多糖
（1）称取干燥的60目的三叶青粉末 250g，用1L无水乙醇50℃提取5小时，弃去上清液；用1L超纯水50℃提取5小时，抽滤得到滤液，在65℃水浴温度下浓缩至原体积的1/4；加入4倍体积的95%乙醇，沉淀静止过夜；5000转/分离心20分钟收集沉淀，经冷冻干燥后得粗多糖26.33克；
（2）称取三叶青粗多糖20g，溶解于1000mL超纯水中，超声溶解完全后，按比例加入氯仿和正丁醇,充分搅拌20min，5000r/min离心20 min,弃去有机层和蛋白层，重复三次，直至无蛋白质白色沉淀产生为止；氯仿和正丁醇的添加比例为，按体积比计：多糖：氯仿：正丁醇=8:4:1；
（3）使用8000-14000Da透析袋用超纯水透析48h，冷冻干燥；获得三叶青粗多糖0.984g。
实施例2 三叶青多糖抑菌实验
培养大肠杆菌和金黄色葡萄球菌至对数生长期（1*106个/mL），按照菌液：培养基（体积比）=1:1000使用无菌LB培养基稀释细菌，配制三叶青多糖溶液为（2.0wt%，1.0 wt %，0.5wt %，0.1 wt %，0.05 wt %）200μL，加入200μL稀释菌液，测试OD @ 600 nm。实验结果见图1。由图1可以看出三叶青多糖能够在较短的作用时间上有效抑制细菌数量，在两个小时内有效。
使用扫描电子显微镜观察给药1h后的细菌形貌。实验结果见图2，由图2a可以看出正常大肠杆菌呈现圆柱形棒状形貌，尺度在3μm左右，符合文献所述，图2b可以明显观察到细菌形貌发生了变化，有脓胀和断裂的现象。使用稀释菌液和上述浓度的三叶青多糖水溶液分别培育5 min,10 min,15 min,20 min,25 min。之后离心分离细胞和培养液，使用无菌级1×PBS洗涤三次后加入无菌LB培养基培育测试不同时间上OD600 nm吸光值。实验结果见图3。由图3可以看到各浓度三叶青多糖均能够有效抑制细菌生长，在较短的给药时间（5min）各浓度都能够在2小时内有效抑制细菌生长。符合口腔抑菌模型所需要的给药时间短，清除性好，持续时间长的特点。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (4)
1.一种三叶青多糖的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
（1）称取干燥的60目的三叶青粉末 250g，用1L无水乙醇50℃提取5小时，弃去上清液；用1L超纯水50℃提取5小时，抽滤得到滤液，在65℃水浴温度下浓缩至原体积的1/4；加入4倍体积的95%乙醇，沉淀静止过夜；5000转/分离心20分钟收集沉淀，经冷冻干燥后得粗多糖；
（2）称取三叶青粗多糖20g，溶解于1000mL超纯水中，超声溶解完全后，按比例加入氯仿和正丁醇,充分搅拌20min，5000r/min离心20 min,弃去有机层和蛋白层，重复三次，直至无蛋白质白色沉淀产生为止；
（3）使用8000-14000Da透析袋用超纯水透析48h，冷冻干燥获得三叶青精多糖。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）所述氯仿和正丁醇的添加比例为，按体积比计：多糖：氯仿：正丁醇=8:4:1。
3.一种如权利要求1所述的方法制备得到的三叶青多糖在抑制口腔菌斑中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，以三叶青多糖为溶质，用蒸馏水配制成终浓度为0.05-2.0wt%的漱口水。
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| CN111514295A (zh) * | 2020-05-29 | 2020-08-11 | 中玺(泉州)科技有限公司 | 三叶青多糖修饰的硫掺杂氮化碳纳米片材料的制备方法 |
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| CN108686055A (zh) * | 2018-07-26 | 2018-10-23 | 杭州金域医学检验所有限公司 | 三叶青提取物在抗金黄色葡萄球菌药物的应用 |
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