CN110483508B - 化合物、制备方法及在制备GSK-3β抑制剂中的应用 - Google Patents
化合物、制备方法及在制备GSK-3β抑制剂中的应用 Download PDFInfo
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Abstract
本公开提供了化合物、制备方法及在制备GSK‑3β抑制剂中的应用，化合物的化学结构如式I所示：
本公开提供的化合物不但具有GSK‑3β抑制活性，还可以直接作用于Aβ，抑制Aβ的聚集，促进Aβ聚集体的解聚，是一种新型的GSK‑3β抑制剂，而且本公开化合物还能够抑制Cu2+诱导的Aβ聚集、以及解聚Cu2+诱导的Aβ聚集体的作用，能够多靶向作用于与AD发病机制相关的多个方面。
Description
技术领域
本公开属于医药领域，涉及化合物、制备方法及在制备GSK-3β抑制剂中的应用。
背景技术
这里的陈述仅提供与本公开有关的背景信息，而不必然构成现有技术。
阿尔茨海默病(Alzheimer's disease，AD)，是一种常见的慢性神经退行性疾病，临床表现为记忆障碍、失语、失用、失认、视空间技能损害、执行功能障碍以及人格和行为改变等。AD的病理特征是大脑中β淀粉样蛋白(Aβ)聚集形成的老年斑、过度磷酸化的tau蛋白聚集而成的神经元纤维缠结(NFTs)、慢性炎症、以及胆碱能神经元退行性病变等。除了衰老、遗传因素之外，AD的病因非常复杂，多种因素相互作用。Aβ在大脑皮层的异常沉积，引发复杂的级联反应，包括神经胶质增生和炎症反应，激酶活性/磷酸化异常，引发神经纤维纠缠结、突触和神经细胞缺失等病理性改变，而tau蛋白异常磷酸化、炎症、氧化应激和金属离子内稳态失衡等，又会增强Aβ的毒性，加速AD疾病进程。
近年来，糖原合成激酶-3(GSK-3)在AD形成中的作用备受注目。研究发现，GSK-3与AD的多个环节密切相关。GSK-3β过度活化引起tau过度磷酸化，引发神经纤维纠缠结；GSK-3β能通过β-分泌酶、δ-分泌酶等介导Aβ的产生，在Aβ沉积中起着非常重要的作用；GSK-3β能活化NF-kB通路，促进释放各种炎症因子，抑制抗炎因子的产生，是炎症反应的重要调节因子；GSK-3是调节细胞凋亡的重要因子，GSK-3β的活化与神经元凋亡的增加直接相关；GSK-3β能抑制乙酰胆碱的合成，造成胆碱能缺失。因此GSK-3β是联结Aβ、tau蛋白、炎症、突触与神经元等的关键分子，是抗AD的药物研究的重要靶点之一。
在AD患者中，一些金属(Cu2+、Zn2+)离子，特别是Cu2+离子，能与Aβ形成Cu2+-Aβ复合物，在Aβ聚集体和NFTs中富集，造成脑内金属离子内稳态失衡，促进高毒性的活性氧物种的产生，加剧氧化应激，引起神经***紊乱、神经元氧化损伤和神经细胞凋亡等。
本公开发明人研究发现，AD的发病机制复杂，各机制之间相互联系、相互影响，单一靶标、单一作用机制药物的作用有限，这可能是目前缺乏有效逆转AD进程药物的重要原因；目前的GSK-3β抑制剂均对Aβ的聚集和解聚缺乏直接的作用。
发明内容
为了解决现有技术的不足，本公开的目的是提供化合物、制备方法及在制备GSK-3β抑制剂中的应用，该化合物不但具有GSK-3β抑制活性，还可以直接作用于Aβ，抑制Aβ的聚集，促进Aβ聚集体的解聚，是一种新型的GSK-3β抑制剂，而且本公开化合物还能够抑制Cu2+诱导的Aβ聚集、以及解聚Cu2+诱导的Aβ聚集体的作用，能够多靶向作用于与AD发病机制相关的多个方面。对抗AD药物活性的进一步评价以及进一步开发，以及对于增强药物的特异性、有效性，减少毒副作用等都有很重要的意义。
为了实现上述目的，本公开的技术方案为：
一方面，本公开提供了一种化合物，化学结构如式I所示：
另一方面，本公开提供了一种上述化合物的制备方法，包括采用化合物1按照以下反应路线制备式I所示化合物：
第三方面，本公开提供了一种药物组合物，含有上述化合物或其药学上可接受的盐。
第四方面，本公开提供了一种药物制剂，包含活性成分和药学上可接受的赋形剂和/或载体；所述活性成分为上述化合物或其溶剂化物或上述药物组合物。
第五方面，本公开提供了一种上述化合物、药物组合物或药物制剂在制备GSK-3β抑制剂中的应用。
第六方面，本公开提供了一种上述化合物、药物组合物或药物制剂在制备治疗抗阿尔茨海默症的药物中的应用。
本公开的有益效果为：
(1)本公开提供的化合物结构新颖，能够作为GSK-3抑制剂，对于增强药物的特异性、有效性，减少毒副作用等都有很重要的意义。
(2)本公开提供的化合物能直接抑制Aβ的聚集，促进Aβ聚集体的解聚。
(3)本公开提供的化合物能抑制Cu2+诱导的Aβ聚集，并具有解聚Cu2+诱导的Aβ聚集体的能力。
(4)本公开提供的化合物能对H2O2诱导的SH-SY5Y细胞氧化损伤具有一定的抗氧化应激和保护作用，因此本发明的化合物可用于抗阿尔茨海默症的活性评价。
附图说明
构成本公开的一部分的说明书附图用来提供对本公开的进一步理解，本公开的示意性实施例及其说明用于解释本公开，并不构成对本公开的不当限定。
图1为实施例3中抑制Aβ聚集实验结果表征图；Aβ1-42与式I化合物或阳性对照药姜黄素(Curcumin)的摩尔比为1：1；数据为三次实验的平均值±标准差(SD)；与Aβ组比较，***p<0.001，**p<0.01。
图2为实施例4中解聚Aβ聚合体的实验结果表征图；Aβ1-42与式I化合物或Curcumin的摩尔比为1：1；数据为三次实验的平均值±标准差(SD)；与Aβ+组比较，***p<0.001。
图3为实施例5中抑制Cu2+诱导的Aβ聚集的实验结果；式I化合物或Curcumin与Aβ1-42、Cu2+的摩尔比为2：1：1；数据为三次实验的平均值±标准差(SD)；与Aβ/Cu2组比较，***p<0.001，**p<0.01。
图4为实施例6中解聚Cu2+诱导的Aβ聚集体的实验结果表征图；式I化合物或Curcumin与Aβ1-42、Cu2+的摩尔比为2：1：1；数据为三次实验的平均值±标准差(SD)；与Aβ/Cu2+组比较，***p<0.001，**p<0.01。
图5为实施例7中H2O2诱导的SH-SY5Y细胞氧化损伤的实验结果表征图；Trolox(10μM)作为阳性对照药；数据为三次实验的平均值±标准差(SD)；与不加H2O2对照组比较，**p<0.01，*p<0.05。
具体实施方式
应该指出，以下详细说明都是示例性的，旨在对本公开提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本公开所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本公开的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。
本公开提出了化合物、制备方法及在制备GSK-3β抑制剂中的应用，该化合物能够作为一种新结构的GSK-3β抑制活性，而且能够直接作用于Aβ，抑制Aβ的聚集，促进Aβ聚集体的解聚。
本公开的一种典型实施方式，提供了一种化合物，化学结构如式I所示：
化学名为：6-(5-(4-((4-吡啶氨基)甲基)苯基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-8-羟基喹啉(B10)。
本公开的另一种实施方式，提供了一种上述化合物的制备方法，包括采用化合物1按照以下反应路线制备式I所示化合物：
该实施方式的一种或多种实施例中，其过程为：
(1)化合物1制备化合物3：以5-溴-3-碘-1-苯磺酰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(化合物1)为原料与8-甲氧基喹啉-6-硼酸频哪醇酯(化合物2)进行Suzuki偶联反应，然后脱去苯磺酰基和甲基保护基获得6-(5-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-8-羟基喹啉(化合物3)；
(2)化合物3制备化合物4：对6-(5-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-8-羟基喹啉(化合物3)的羟基进行叔丁基二甲基硅基(TBS)保护获得6-(5-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-8-(叔丁基二甲基硅氧基)喹啉(化合物4)；
(3)化合物4制备式I所示化合物：6-(5-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-8-(叔丁基二甲基硅氧基)喹啉(化合物4)与4-((4-吡啶氨基)甲基)苯硼酸频哪醇酯(化合物5)进行Suzuki偶联反应，然后脱去叔丁基二甲基硅基保护基获得式I所示化合物。
其中，脱去苯磺酰基和脱去甲基保护基的不分先后。
Suzuki偶联反应，也称为铃木反应，该反应在零价钯配合物催化下，芳基或烯基硼酸或硼酸酯与氯、溴、碘代芳烃或烯烃发生交叉偶联。
该系列实施例中，步骤(1)的具体过程为：
向含有化合物1和化合物2的二氧六环与水的溶液中，依次加入1,1'-双二苯基膦二茂铁二氯化钯(Pd(dppf)Cl2)和碳酸钾(K2CO3)，惰性气体保护下，加热搅拌反应，抽滤后浓缩，二氯甲烷萃取，洗涤，无水硫酸钠干燥，抽滤后旋干有机溶剂，得一次粗品；将一次粗品溶于甲醇，加入氢氧化钾水溶液，加热搅拌反应后冷却至室温，调pH至中性；用乙酸乙酯萃取，洗涤，无水硫酸钠干燥；抽滤后旋干有机溶剂，得二次粗品；将二次粗品溶于氢溴酸，加热回流反应，冷却至室温后，调pH至中性，乙酸乙酯萃取，洗涤，无水硫酸钠干燥，抽滤后旋干有机溶剂，硅胶柱层析，得化合物3。
该系列实施例中，步骤(1)中，化合物1、化合物2、Pd(dppf)Cl2和K2CO3的摩尔比为1：1.1～1.2：0.035～0.45：2.5～3.5。
该系列实施例中，步骤(1)中，Suzuki偶联反应体系的溶剂是二氧六环与水的体积比为19～21：1的混合物。
该系列实施例中，步骤(1)中，Suzuki偶联反应的温度为100～105℃，时间为2～3h。
该系列实施例中，步骤(1)中，脱去苯磺酰基的反应中，化合物1与氢氧化钾的摩尔比为1：9～11。
该系列实施例中，步骤(1)中，脱去苯磺酰基的反应的溶剂为甲醇。
该系列实施例中，步骤(1)中，脱去苯磺酰基的反应的温度为60～65℃，反应时间为1～2h。
该系列实施例中，步骤(1)中，脱去甲基保护基的反应的温度为130～135℃，反应时间为20～24h。
该系列实施例中，步骤(2)的具体过程为：
向含有化合物3的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)溶液中，依次加热咪唑和叔丁基二甲基硅氯(TBSCl)，搅拌反应；用乙酸乙酯萃取，洗涤，无水硫酸钠干燥，抽滤后旋干有机溶剂，硅胶柱层析，得化合物4。
该系列实施例中，步骤(2)中，反应体系中化合物3、咪唑、叔丁基二甲基硅氯的摩尔比为1：1.5～2.5：1.5～2.5。
该系列实施例中，步骤(2)中，反应温度为室温，反应时间为30～35min。所述室温是指室内环境温度，一般为15～30℃。
该系列实施例中，步骤(3)的具体过程为：
向含有化合物4和4-((4-吡啶氨基)甲基)苯硼酸频哪醇酯(化合物5)的甲苯、乙醇和水的混合溶液中，加入四(三苯基膦)钯(Pd(PPh3)4)和碳酸钠(Na2CO3)，惰性气体保护下，加热搅拌反应；趁热过滤，旋干有机溶剂，得粗品；将粗品溶于四氢呋喃(THF)，加入四丁基氟化铵(TBAF)，室温搅拌反应；用乙酸乙酯萃取，洗涤，无水硫酸钠干燥，抽滤后旋干有机溶剂，硅胶柱层析，得式I所示化合物。
该系列实施例中，步骤(3)中，化合物4、化合物5、Pd(PPh3)4、Na2CO3的摩尔比为1：1.5～2.5：0.065～0.075：2.5～3.5。
该系列实施例中，步骤(3)中，Suzuki偶联反应体系的溶剂是甲苯、乙醇和水的体积比为2.8～3.2：1：1.8～2.2的混合物。
该系列实施例中，步骤(3)中，Suzuki偶联反应的温度为100～105℃，时间为6～7h。
该系列实施例中，步骤(3)中，脱去叔丁基二甲基硅基保护基的反应时间为10～15min。
本公开的第三种实施方式，提供了一种药物组合物，含有上述化合物或其药学上可接受的盐。
其中，药学上可接受的盐，例如盐酸盐、磺酸盐、枸橼酸盐等。
本公开的第四种实施方式，提供了一种药物制剂，包含活性成分和药学上可接受的赋形剂和/或载体；所述活性成分为上述化合物或其溶剂化物或上述药物组合物。
所述药物制剂可以为口服制剂，例如片剂、丸剂、胶囊剂等。
所述赋形剂选自磷酸钙、硬脂酸镁、滑石粉、糊精、淀粉、凝胶纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠盐和聚乙烯吡咯烷酮。
本公开的第五种实施方式，提供了一种上述化合物、药物组合物或药物制剂在制备GSK-3β抑制剂中的应用。
本公开的第六种实施方式，提供了一种上述化合物、药物组合物或药物制剂在制备治疗抗阿尔茨海默症的药物中的应用。
为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本公开的技术方案，以下将结合具体的实施例详细说明本公开的技术方案。
实施例1：式I化合物的合成。
(1)将化合物1(5.56g，12mmol)和化合物2(4.11g，14.4mmol)溶于二氧六环(16mL)和水(0.8mL)中，加入Pd(dppf)Cl2(0.35g，0.48mmol)、和K2CO3(4.38g，36mmol)，氮气保护下，100℃搅拌反应2.5h。趁热过滤，减压浓缩。向残留物中加入少量水，二氯甲烷萃取。有机相合并后，水洗、饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。过滤、减压浓缩，得灰白色固体粗品。
将上述粗品溶于60mL甲醇，加入20mL氢氧化钾(6.8g，120mmol)水溶液，60℃搅拌反应1.5h。冷却至室温，用饱和硫酸氢钾溶液调pH至中性，乙酸乙酯萃取。有机相合并，水洗、饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。过滤、减压浓缩，得黄色固体粗品。
将上述黄色粗品溶于20mL 40％氢溴酸，130℃回流反应20h。冷却至室温后，用饱和氢氧化钾溶液调pH至中性，乙酸乙酯萃取。有机相合并，水洗、饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。过滤、减压浓缩，硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝80:1，30:1)，得化合物3，粉色固体1.3g，收率47.8％。熔点：>240℃；1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.30(s,1H),9.90(s,1H),8.79(d,J＝2.7Hz,1H),8.67(d,J＝1.9Hz,1H),8.45(d,J＝8.3Hz,1H),8.38(d,J＝1.9Hz,1H),8.15(s,1H),7.80(s,1H),7.56(dd,J＝8.3,4.1Hz,1H),7.50(d,J＝1.4Hz,1H)；HRMS(ESI):Calcd.for C16H10BrN3O[M+H]+:340.0080,found:340.0086.
(2)将化合物3(910mg，2.68mmol)溶于6mL DMF，加入咪唑(806mg，5.35mmol)和TBSCl(364mg，5.35mmol)，室温搅拌反应30min。向反应体系中加入少量水，乙酸乙酯萃取。有机相合并，水洗、饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。过滤、减压浓缩，硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)，得化合物4，白色固体722mg，收率60.0％。熔点：232–234℃；1H NMR(600MHz,DMSO)δ12.32(s,1H),8.82–8.78(m,1H),8.64(d,J＝2.1Hz,1H),8.47–8.43(m,1H),8.38(d,J＝2.1Hz,1H),8.18(s,1H),7.94(d,J＝1.7Hz,1H),7.54–7.50(m,2H),1.06(s,9H),0.27(s,6H)；HRMS(ESI):Calcd.for C22H24BrN3OSi[M+H]+:454.0945,found:454.0953.
(3)将化合物4(150mg，0.33mmol)和化合物5(205mg，0.66mmol)溶于甲苯(4.5mL)、乙醇(1.5mL)和水(3.0mL)中，加入Pd(PPh3)4(27mg，0.023mmol)和Na2CO3(106mg，0.99mmol)，氮气保护下，100℃搅拌反应6h。趁热过滤，减压浓缩，得黄色固体粗品。
将上述粗品用5mL四氢呋喃溶解，加入TBAF(173mg，0.66mmol)，室温搅拌反应10min。向反应体系中加入少量水，乙酸乙酯萃取。有机相合并，水洗、饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。过滤、减压浓缩，硅胶柱层析(乙酸乙酯:甲醇＝20:1)，得式I化合物(B10)，白色固体48mg，收率32.8％。熔点：>240℃；1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.13(d,J＝2.2Hz,1H),8.78(dd,J＝4.1,1.6Hz,1H),8.59(s,2H),8.43(dd,J＝8.4,1.5Hz,1H),8.32(t,J＝5.6Hz,1H),8.11(d,J＝6.8Hz,2H),8.08(d,J＝2.6Hz,1H),7.84(d,J＝1.6Hz,1H),7.81(d,J＝8.2Hz,2H),7.58–7.52(m,2H),7.49(d,J＝8.2Hz,2H),6.78(d,J＝6.8Hz,2H),4.52(d,J＝5.6Hz,2H)；HRMS(ESI):Calcd.for C28H21N5O[M+H]+:444.1819,found:444.1835.
实施例2：GSK-3抑制活性实验。
1、试验方法：
将FAM标记的底物与激酶、ATP和一定浓度的化合物(来自实施例1)溶液在28℃条件下培养1h，用淬灭剂淬灭后，利用Caliper仪器测定底物的转化率，化合物的抑制效果越好，转化率的数值越低。结果见表1。
2、试验结果：
表1实施例1制备的式I化合物对GSK-3β抑制活性
| 化合物 | GSK-3β％抑制率<sup>a</sup> | IC<sub>50</sub>(nM)<sup>b</sup> |
| I | 89.7±1.6 | 66±3.5 |
a表示浓度为1μM时对GSK-3不同亚型的抑制率；b半数有效抑制浓度。
实施例3：Aβ聚集抑制实验。
1、试验方法：
将0.5mg六氟异丙醇处理过的Aβ1-42溶解在二甲基亚砜(DMSO)中配成2mM母液，分装储存置于–20℃下备用。将母液用50mM PBS缓冲液(pH＝7.4，100mMNaCl)稀释至40μM。将式I化合物(B10)和阳性对照药姜黄素(Curcumin)各自溶解在DMSO中形成2mM母液，将母液用50mM PBS缓冲液(pH＝7.4，100mMNaCl)稀释至40μM浓度备用。将Aβ1-42(20μL，40μM)和20μL PBS缓冲液，Aβ1-42(20μL，40μM)和式I化合物(20μL，40μM)，Aβ1-42(20μL，40μM)和Curcumin(20μL，40μM)分别置于96孔黑板中37℃下培养24h。将160μL浓度为5μM的硫磺素T的甘氨酸–氢氧化钠(50mM，pH＝8.0)缓冲液加入到反应孔中，置于多功能酶标仪(Tecan Infinite200PRO)震荡5min，测量在激发波长为450nm，发射波长为490nm处的荧光值。
2、实验结果：
实验结果见图1，以Aβ自身聚合的荧光强度为100％。式I化合物(B10)能显著抑制Aβ聚集，荧光强度降至44.9％，抑制率为55.1％。阳性对照药Curcumin也能显著抑制Aβ聚集，荧光强度降至61.9％，抑制率为38.1％。式I化合物对Aβ聚集的抑制作用优于阳性对照Curcumin。
实施例4：对Aβ聚集体的解聚实验。
1、试验方法：
将Aβ1-42、式I化合物(B10)和阳性对照药姜黄素(Curcumin)制备成40μM溶液。先将Aβ1-42(20μL,40μM)放置在96孔黑板中，37℃下孵育24h。然后将20μL PBS缓冲液(pH＝7.4，100mMNaCl)、式I化合物(B10)(20μL，40μM)和Curcumin(20μL，40μM)加入到含有Aβ1-42的各自的培养孔中，继续培养24h。将160μL浓度为5μM的硫磺素T的甘氨酸–氢氧化钠(50mM，pH＝8.0)缓冲液加入到反应孔中，置于多功能酶标仪(Tecan Infinite 200PRO)震荡5min，测量在激发波长为450nm，发射波长为490nm处的荧光值。
2、实验结果：
实验结果见图2，以Aβ聚合体的荧光强度为100％。式I化合物(B10)能显著促进Aβ聚集体的解聚，荧光强度降至38.2％，解聚率为61.8％。阳性对照药Curcumin也能促进Aβ聚集体的解聚，荧光强度降至64.7％，解聚率为35.3％。式I化合物对Aβ聚集体的解聚作用优于阳性对照Curcumin。
实施例5Cu2+诱导的Aβ聚集抑制实验。
1、试验方法：
取HEPES作为空白对照，取20μL 40μM的Aβ42单体溶液和20μL 40μM的CuCl2溶液置于96孔板中，加入40μL的HEPES或40μM的化合物(来自实施例1)溶液，在37℃摇床下孵育24h。加入120μL硫黄素T溶液，置于多功能酶标仪中，振荡2min，测定在激发波长为450nm，发射波长为485nm的荧光值。
2、实验结果：
实验结果见图3，以Aβ自身聚合的荧光强度为100％。Cu2+能诱导Aβ的聚集，加聚Aβ的聚合，荧光强度值升高到222％。当加入式I化合物或阳性对照药氯碘羟喹(CQ)后，Cu2+诱导的Aβ聚集明显受到抑制，荧光强度分别由222％分别降至56.5％和74.4％，相较于CQ的荧光强度为61.2％，式I化合物对Cu2+诱导的Aβ聚集的抑制作用显著优于阳性药CQ。
实施例6：Cu2+诱导的Aβ聚集体的解聚实验。
1、试验方法：
取HEPES作为空白对照，取20μL 40μM的Aβ42单体溶液和20μL 40μM的CuCl2溶液置于96孔板中，在37℃摇床下孵育24h后，加入40μL的HEPES或40μM的式1化合物(B10)或CQ溶液，在37℃摇床下继续孵育24h。加入120μL硫黄素T溶液，置于多功能酶标仪中，振荡2min，测定在激发波长为450nm，发射波长为485nm的荧光值。
2、实验结果：
实验结果见图4，以Cu2+诱导的Aβ聚合体的荧光强度为100％。式I化合物(B10)能显著促进Cu2+诱导的Aβ聚合体的解聚，荧光强度降至39.7％，解聚率为60.3％。阳性对照药CQ也能显著促进Cu2+诱导的Aβ聚集体的解聚，荧光强度降至39.6％，解聚率为60.4％。
实施例7：H2O2诱导的细胞氧化损伤的神经保护实验。
1、试验方法：
将SH-SY5Y细胞(1×105)接种于96孔板上，置37℃，5％CO2的培养箱中孵育24h，吸出培养基，加入不同浓度的式I化合物(来自实施例1)或阳性对照药水溶性维生素E(Trolox)和150μM H2O2，置37℃，5％CO2的培养箱中孵育24h，用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定SH-SY5Y细胞的存活率。
2、实验结果：
实验结果见图5。H2O2对SH-SY5细胞具有一定的氧化损伤，神经细胞存活率降至58.2％。阳性药Trolox在10μM对H2O2造成的SH-SY5细胞氧化损伤具有一定的保护作用，细胞存活率为86.6％。当式I化合物也对SH-SY5细胞具有一定的保护作用，在1μM、2μM和4μM时，细胞存活率分别为73.8％、76.7％和82％。
以上所述仅为本公开的优选实施例而已，并不用于限制本公开，对于本领域的技术人员来说，本公开可以有各种更改和变化。凡在本公开的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本公开的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种化合物，其特征是，化学结构如式I所示：
2.一种权利要求1所述的化合物的制备方法，其特征是，包括采用化合物1按照以下反应路线制备式I所示化合物：
3.如权利要求2所述的化合物的制备方法，其特征是，其过程为：
(1)化合物1制备化合物3：化合物1与化合物2进行Suzuki偶联反应，然后脱去苯磺酰基和甲基保护基获得化合物3；
(2)化合物3制备化合物4：对化合物3的羟基进行叔丁基二甲基硅基保护获得化合物4；
(3)化合物4制备式I所示化合物：化合物4与化合物5进行Suzuki偶联反应，然后脱去叔丁基二甲基硅基保护基获得式I所示化合物。
4.如权利要求3所述的化合物的制备方法，其特征是，步骤(1)的具体过程为：
向含有化合物1和化合物2的二氧六环与水的溶液中，依次加入1,1'-双二苯基膦二茂铁二氯化钯和碳酸钾，惰性气体保护下，加热搅拌反应，抽滤后浓缩，二氯甲烷萃取，洗涤，无水硫酸钠干燥，抽滤后旋干有机溶剂，得一次粗品；将一次粗品溶于甲醇，加入氢氧化钾水溶液，加热搅拌反应后冷却至室温，调pH至中性；用乙酸乙酯萃取，洗涤，无水硫酸钠干燥；抽滤后旋干有机溶剂，得二次粗品；将二次粗品溶于氢溴酸，加热回流反应，冷却至室温后，调pH至中性，乙酸乙酯萃取，洗涤，无水硫酸钠干燥，抽滤后旋干有机溶剂，硅胶柱层析，得化合物3；
或，步骤(1)中，化合物1、化合物2、Pd(dppf)Cl2和K2CO3的摩尔比为1：1.1～1.2：0.035～0.45：2.5～3.5；
或，步骤(1)中，Suzuki偶联反应体系的溶剂是二氧六环与水的体积比为19～21：1的混合物；
或，步骤(1)中，Suzuki偶联反应的温度为100～105℃，时间为2～3h；
或，步骤(1)中，脱去苯磺酰基的反应中，化合物1与氢氧化钾的摩尔比为1：9～11；
或，步骤(1)中，脱去苯磺酰基的反应的溶剂为甲醇；
或，步骤(1)中，脱去苯磺酰基的反应的温度为60～65℃，反应时间为1～2h；
或，步骤(1)中，脱去甲基保护基的反应的温度为130～135℃，反应时间为20～24h。
5.如权利要求3所述的化合物的制备方法，其特征是，步骤(2)的具体过程为：
向含有化合物3的N,N-二甲基甲酰胺溶液中，依次加热咪唑和叔丁基二甲基硅氯，搅拌反应；用乙酸乙酯萃取，洗涤，无水硫酸钠干燥，抽滤后旋干有机溶剂，硅胶柱层析，得化合物4；
或，步骤(2)中，反应体系中化合物3、咪唑、叔丁基二甲基硅氯的摩尔比为1：1.5～2.5：1.5～2.5；
或，步骤(2)中，反应温度为室温，反应时间为30～35min。
6.如权利要求3所述的化合物的制备方法，其特征是，步骤(3)的具体过程为：
向含有化合物4和化合物5的甲苯、乙醇和水的混合溶液中，加入四(三苯基膦)钯和碳酸钠，惰性气体保护下，加热搅拌反应；趁热过滤，旋干有机溶剂，得粗品；将粗品溶于四氢呋喃，加入四丁基氟化铵，室温搅拌反应；用乙酸乙酯萃取，洗涤，无水硫酸钠干燥，抽滤后旋干有机溶剂，硅胶柱层析，得式I所示化合物；
或，步骤(3)中，化合物4、化合物5、Pd(PPh3)4、Na2CO3的摩尔比为1：1.5～2.5：0.065～0.075：2.5～3.5；
或，步骤(3)中，Suzuki偶联反应体系的溶剂是甲苯、乙醇和水的体积比为2.8～3.2：1：1.8～2.2的混合物；
或，步骤(3)中，Suzuki偶联反应的温度为100～105℃，时间为6～7h；
或，步骤(3)中，脱去叔丁基二甲基硅基保护基的反应时间为10～15min。
7.一种药物组合物，其特征是，含有权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐。
8.一种药物制剂，其特征是，包含活性成分和药学上可接受的赋形剂和/或载体；所述活性成分为权利要求1所述的化合物或权利要求7所述的药物组合物。
9.一种权利要求1所述的化合物、权利要求7所述的药物组合物或权利要求8所述的药物制剂在制备GSK-3β抑制剂中的应用。
10.一种权利要求1所述的化合物、权利要求7所述的药物组合物或权利要求8所述的药物制剂在制备治疗抗阿尔茨海默症的药物中的应用。
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| CN104884059A (zh) * | 2012-11-30 | 2015-09-02 | 罗切斯特大学 | 用于hiv/aids治疗的混合谱系激酶抑制剂 |
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