CN110426520A - 一种磁微粒储存液及其制备 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种磁微粒储存液及其制备，其特征在于，所述磁微粒储存液的组分包括：三羟甲基氨基甲烷、氯化钠、聚乙二醇、Proclin‑300、吐温20、海藻糖、牛血清白蛋白。本发明通过多种配方的组合，实现了磁微粒试剂在灵敏度、测定范围、重复性、稳定性等方面，性能得以提升。通过加入牛血清白蛋白、海藻糖，保护了磁微粒上的结合物；加入Proclin‑300作为防腐剂，抑制了细菌生长，避免试剂被污染，性能受到影响；加入聚乙二醇20000，维持了磁珠悬浮液的稳定性，利于化学发光反应稳定地进行，保证了测试结果的可重复性。综合以上因素，本发明在提升试剂本身性能的同时，保证了磁微粒试剂的长期有效。

Description

一种磁微粒储存液及其制备
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种磁微粒储存液及其制备。
背景技术
磁微粒化学发光法是近些年兴起开始流行的一种新的分析方法。磁微粒化学发光法结合了磁性分离技术、化学发光技术、免疫分析技术，以磁微粒为载体，通过检测化学发光反应的发光强度，计算出被检物的浓度。因灵敏度高、特异性强、测定范围宽、操作简单、无污染等优点，从一系列免疫分析技术中脱颖而出，越来越流行。
然而磁微粒的存储是实现磁微粒化学发光法的一大难点，磁微粒的性能往往能影响到整个试剂的稳定性，从而对试剂性能造成影响。
此外，不同试剂所检测的对象不一，所使用的检测方法随之变化，不同的抗体、抗原对磁珠、磁珠储存液的要求也有一些差异。
发明内容
由于上述现有技术中的不足，本发明针对磁微粒化学发光法所用磁珠，设计了一种储存液，用于磁微粒化学发光试剂里磁珠的储存、运输、使用。
本发明在提升化学发光反应的发光性能的同时，降低了背景值，相应提高了化学发光试剂的灵敏度，线性范围，此外保证了磁微粒存储的稳定性，延长了磁微粒储存液的有效期。
本发明适用于磁微粒化学发光试剂所用磁微粒，特别针对于不偶联生物素标记抗体的链霉亲和素磁微粒，使用本发明效果优于其他磁微粒储存液。
本发明为实现上述目的提供一种磁微粒储存液，本发明采用了以下技术方案：
所述磁微粒储存液的组分包括：
三羟甲基氨基甲烷、氯化钠、聚乙二醇、Proclin-300、吐温20、海藻糖、牛血清白蛋白。
本技术方案中，通过多种配方的组合，实现了磁微粒储存液在灵敏度、测定范围、重复性、稳定性等方面，性能得以提升。譬如，通过加入牛血清白蛋白、海藻糖，保护了磁微粒上的结合物；加入Proclin-300作为防腐剂，抑制了细菌生长，避免试剂被污染，性能受到影响；加入聚乙二醇20000，维持了磁珠悬浮液的稳定性，利于化学发光反应稳定地进行，保证了测试结果的可重复性。综合以上因素，本发明在提升试剂本身性能的同时，保证了磁微粒储存液的长期有效。
优选地，所述组分的含量如下：
0.2wt％～0.5wt％的三羟甲基氨基甲烷、0.7wt％～1.1wt％的氯化钠、0.05w t％～2wt％的聚乙二醇、0.02vol％～0.2vol％的Proclin-300、0.05vol％～0.15vol％的吐温20、0.1wt％的海藻糖、0.2wt％～1wt％的牛血清白蛋白，剩下的含量用水补足至100％。
进一步，所述组分的含量优选如下：
0.3wt％的三羟甲基氨基甲烷、0.88wt％的氯化钠、0.1wt％的聚乙二醇2 0000、0.05vol％的Proclin-300、0.05vol％的吐温20、0.1wt％的海藻糖、0.5w t％的牛血清白蛋白，剩下的含量用水补足至100％。
优选地，所述磁微粒储存液的颜色为淡黄色透明，没有不溶物。
优选地，所述磁微粒储存液的pH范围为7.1～7.3，所述水为超纯水。
本发明还提供了一种磁微粒储存液的制备，其步骤如下：
S1、称取三羟甲基氨基甲烷、氯化钠、聚乙二醇20000缓慢加入至含有水的配制容器中搅拌至完全溶解；
S2、吸取Proclin-300、吐温20加入至所述步骤S1所得的溶液中搅拌至完全溶解；
S3、用移液器吸取盐酸至所述步骤S2中所得的溶液中调节溶液的pH 值；
S4、称取牛血清白蛋白和BSA加入所述步骤S3中所得的溶液中，搅拌器搅拌至完全溶解；
S5、用水将所述步骤S4所得的溶液定容后混匀；
S6、将经过所述步骤S1-S5配制好的溶液进行过滤得到磁微粒储存液。
优选地，所述盐酸的摩尔浓度为5mol/L。
优选地，所述的用移液器吸取盐酸至所述步骤S2中所得的溶液中调节溶液的pH值至7.2±0.1。
本技术方案中，化学发光反应需要在一定范围的PH下进行，pH值至 7.2±0.1既保证了化学发光反应的顺利进行，也避免了磁微粒的性能因强酸强碱受到破坏。
优选地，所述过滤所需的滤膜孔径为0.22μm。
本发明的有益效果在于：
1、本发明通过多种配方的组合，实现了磁微粒试剂在灵敏度、测定范围、重复性、稳定性等方面，性能得以提升。通过加入牛血清白蛋白、海藻糖，保护了磁微粒上的结合物；加入Proclin-300作为防腐剂，抑制了细菌生长，避免试剂被污染，性能受到影响；加入聚乙二醇20000，维持了磁珠悬浮液的稳定性，利于化学发光反应稳定地进行，保证了测试结果的可重复性。综合以上因素，本发明在提升试剂本身性能的同时，保证了磁微粒试剂的长期有效。
2、本发明在提升化学发光反应的发光性能的同时，降低了背景值，相应提高了化学发光试剂的灵敏度，线性范围，此外保证了磁微粒存储的稳定性，延长了磁微粒试剂的有效期。
3、本发明适用于磁微粒化学发光试剂所用磁微粒，特别针对于不偶联生物素标记抗体的链霉亲和素磁微粒，使用本发明效果优于其他磁微粒储存液。
具体实施方式
下面结合具体实施例来进一步描述本发明，但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本技术领域的普通技术人员应该理解的是，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
磁微粒储存液的组分及含量为：0.2wt％～0.5wt％的三羟甲基氨基甲烷、0.7wt％～1.1wt％的氯化钠、0.05wt％～2wt％的聚乙二醇、0.02vol％～0.2vol％的Proclin-300、0.05vol％～0.15vol％的吐温20、0.1wt％的海藻糖、0.2wt％～1wt％的牛血清白蛋白，剩下的含量用水补足至100％。
本发明还提供了一种磁微粒储存液的制备步骤，所述步骤如下：
S1、称取三羟甲基氨基甲烷、氯化钠、聚乙二醇20000、海藻糖缓慢加入至含有水的配制容器中搅拌至完全溶解；
S2、吸取Proclin-300、吐温20加入至所述步骤S1所得的溶液中搅拌至完全溶解；
S3、用移液器吸取盐酸至所述步骤S2中所得的溶液中调节溶液的pH 值；
S4、称取牛血清白蛋白加入所述步骤S3中所得的溶液中，搅拌器搅拌至完全溶解；
S5、用水将所述步骤S4所得的溶液定容后混匀；
S6、将经过所述步骤S1-S5配制好的溶液进行过滤得到磁微粒储存液。
实施例1
以配制100mL为例：
使用量筒取60mL超纯水放入配制容器中；
使用精密天平称取0.3029g三羟甲基氨基甲烷、0.8775g氯化钠、0.1g 聚乙二醇20000、0.1g海藻糖缓慢加入至配制容器中，搅拌器搅拌至完全溶解；
用移液枪吸取0.05mL Proclin-300、0.05mL吐温20加入至配制容器中，搅拌器搅拌至完全溶解；
用移液器量取适量的5mol/L盐酸调节pH至7.2±0.1；
使用精密天平称取0.5g牛血清白蛋白BSA加入至配制容器中，搅拌器搅拌至完全溶解；
用超纯水将溶液定容至100mL，混匀；
使用过滤器将配制好的溶液进行过滤，滤膜孔径为0.22μm；
观察溶液颜色，应为淡黄色透明，没有不溶物。
本实施例通过多种配方的组合，实现了磁微粒试剂在灵敏度、测定范围、重复性、稳定性等方面，性能得以提升。通过加入BSA、海藻糖，保护了磁微粒上的结合物，加入了Proclin-300作为防腐剂，避免细菌生长，影响性能，加入了聚乙二醇，维持了磁珠悬浮液的稳定性，利于化学发光反应稳定地进行。综合以上因素，本发明在提升试剂本身性能的同时，保证了磁微粒试剂的长期有效。
对比例1
0.02wt％的磷酸二氢钾、0.29wt％的十二水磷酸氢二钠、0.8wt％氯化钠、0.02wt％的氯化钾、0.1vol％的Proclin-300，剩下的含量用水补足至100％。
以配制100mL为例：
1)使用量筒取80mL超纯水放入配制容器中；
2)使用精密天平称取0.02g磷酸二氢钾、0.29g十二水磷酸氢二钠、 0.80g氯化钠、0.02g氯化钾缓慢加入配制容器中，搅拌至完全溶解；
3)用移液器量取0.1mL Proclin-300加入配制容器中，搅拌混匀；
4)用移液器量取适量的5mol/L NaOH调节pH至7.4±0.1；
5)用超纯水将溶液定容至100mL，搅拌混匀15分钟；
6)使用真空过滤器将配制好的溶液进行过滤；
7)观察溶液颜色，应为无色透明，没有不溶物。
下表是不同浓度的实施例1与对比例1的发光值与背景值的差异对比，检测步骤如下：将磁微粒储存液与链霉亲和素磁微粒配置成磁微粒工作液，搭配上海彧成生物科技有限公司生产的C反应蛋白(CRP)测定试剂盒(磁微粒化学发光法)，使用南京迪格诺斯生物技术有限公司生产的ACL2800 全自动化学发光测定仪测试不同浓度的C反应蛋白校准品的发光值，其结果如表1所示。其中，背景值为测量0浓度的物质；CV值表示变异系数(coefficient ofvariation)，亦称离散系数(coefficient ofdispersion)或相对偏差(rsd)，是标准偏差与平均值之比，用百分数表示，计算公式为：CV＝sd/mean×100％。mean表示为发光值的平均值。sd为标准差。
表1
由表1可知，使用本发明的化学发光试剂，相较其他磁微粒储存液，背景值低，发光性能好，高值校准品与低值校准品的发光值比值更大。
本发明在提升化学发光反应的发光性能的同时，降低了背景值，相应提高了化学发光试剂的灵敏度，线性范围。
实施例2
本具体实施例公开了另一种配比，其制备步骤与实施例1相同，其成分的比例为：0.2wt％的三羟甲基氨基甲烷、0.7wt％的氯化钠、0.05wt％的聚乙二醇、0.02vol％的Proclin-300、0.05vol％的吐温20、0.1wt％的海藻糖、0.2wt％的牛血清白蛋白，剩下的含量用水补足至100％。
实施例3
本具体实施例公开了另一种配比，其制备步骤与实施例1相同，其成分的比例为：0.5wt％的三羟甲基氨基甲烷、1.1wt％的氯化钠、2wt％的聚乙二醇、0.2vol％的Proclin-300、0.15vol％的吐温20、0.1wt％的海藻糖、1wt％的牛血清白蛋白，剩下的含量用水补足至100％。
下表是不同浓度的实施例2与对比例3的发光值与背景值的差异对比，检测步骤如下：将磁微粒储存液与链霉亲和素磁微粒配置成磁微粒工作液，搭配上海彧成生物科技有限公司生产的C反应蛋白(CRP)测定试剂盒(磁微粒化学发光法)，使用南京迪格诺斯生物技术有限公司生产的ACL2800 全自动化学发光测定仪测试不同浓度的C反应蛋白校准品，其结果如表2所示。
表2
由表2可知，实施例2与实施例3的背景值比对比例1低，发光值比对比例1高，所以均能在提升化学发光反应的发光性能的同时，降低背景值，相应提高了化学发光试剂的灵敏度，线性范围。
实施例4
本具体实施例公开了将实施例1所制备的磁微粒储存液与链霉亲和素磁微粒配置成磁微粒工作液，分别放入4℃、37℃储存，于第0、2、5、8天拿出来，搭配同一批C反应蛋白生物素标记抗体、吖啶酯标记抗体，测试同一批C反应蛋白校准品，比较发光值差异，其结果如表3所示：
表3
由表3可知，实施例1所制备的磁微粒储存液，搭配链霉亲和素磁微粒配置成磁微粒工作液，在4℃存放8天后与存放第0天的发光值差异在校准品浓度是1mg/L时差异是-3％；在校准品浓度是5mg/L时差异是-5％；在校准品浓度是80mg/L时差异是5％。
实施例5
本具体实施例公开了对比例1所制备的磁微粒储存液与链霉亲和素磁微粒配置成磁微粒工作液，分别放入4℃、37℃储存，于第0、2、5、8天拿出来，搭配同一批C反应蛋白生物素标记抗体、吖啶酯标记抗体，测试同一批 C反应蛋白校准品，比较发光值差异，其结果如表4所示：
表4
由表4可知，对比例1所制备的磁微粒储存液在4℃存放8天后与存放第0天的发光值差异在校准品浓度是1mg/L时差异是-13％；在校准品浓度是5mg/L时差异是-14％；在校准品浓度是80mg/L时差异是-15％。
通过表3与表4的对比可知，实施例1所制备的磁微粒储存液较对比例 1所制备的磁微粒储存液在37℃存放8天发光值与4℃存放8天差异不大， 4℃存放8天与存放第0天的发光值差异不大，稳定性好。
实施例6
本具体实施例公开了实施例1与对比例1，其检验方法如下：将磁微粒储存液与链霉亲和素磁微粒配置成磁微粒工作液，搭配降钙素原生物素标记抗体、吖啶酯标记抗体，使用南京迪格诺斯生物技术有限公司生产的ACL2 800全自动化学发光测定仪测试不同浓度的降钙素原校准品，其结果如表5 所示。
表5
由表5可知，使用本发明的化学发光试剂，相较其他磁微粒储存液，背景值低，发光性能好，高值校准品与低值校准品的发光值比值更大。
综上可知，本发明适用于大部分磁微粒化学发光法所用磁微粒，特别针对于不偶联生物素标记抗体的链霉亲和素磁微粒，使用本发明效果优于其他磁微粒储存液。
以上所述实施例仅表达了本发明的实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (9)

1.一种磁微粒储存液，其特征在于，所述磁微粒储存液的组分包括：
三羟甲基氨基甲烷、氯化钠、聚乙二醇、Proclin-300、吐温20、海藻糖、牛血清白蛋白。
2.如权利要求1所述的一种磁微粒储存液，其特征在于，所述组分的含量如下：
0.2wt％～0.5wt％的三羟甲基氨基甲烷、0.7wt％～1.1wt％的氯化钠、0.05wt％～2wt％的聚乙二醇、0.02vol％～0.2vol％的Proclin-300、0.05vol％～0.15vol％的吐温20、0.1wt％的海藻糖、0.2wt％～1wt％的牛血清白蛋白，剩下的含量用水补足至100％。
3.如权利要求1所述的一种磁微粒储存液，其特征在于，包括如下组分和含量：
0.3wt％的三羟甲基氨基甲烷、0.88wt％的氯化钠、0.1wt％的聚乙二醇20000、0.05vol％的Proclin-300、0.05vol％的吐温20、0.1wt％的海藻糖、0.5wt％的牛血清白蛋白，剩下的含量用水补足至100％。
4.如权利要求1所述的一种磁微粒储存液，其特征在于：
所述磁微粒储存液的颜色为淡黄色透明，没有不溶物。
5.如权利要求1所述的一种磁微粒储存液，其特征在于：
所述磁微粒储存液的pH范围为7.1～7.3，所述水为超纯水。
6.一种磁微粒储存液的制备包括如权利要求1～5所述的一种磁微粒储存液，其特征在于，包括如下制备步骤：
S1、称取三羟甲基氨基甲烷、氯化钠、聚乙二醇20000缓慢加入至含有水的配制容器中搅拌至完全溶解；
S2、吸取Proclin-300、吐温20加入至所述步骤S1所得的溶液中搅拌至完全溶解；
S3、用移液器吸取盐酸至所述步骤S2中所得的溶液中调节溶液的pH值；
S4、称取牛血清白蛋白加入所述步骤S3中所得的溶液中，搅拌器搅拌至完全溶解；
S5、用水将所述步骤S4所得的溶液定容后混匀；
S6、将经过所述步骤S1-S5配制好的溶液进行过滤得到磁微粒储存液。
7.如权利要求6所述的一种磁微粒储存液的制备，其特征在于，所述步骤S3中：
所述盐酸的摩尔浓度为5mol/L。
8.如权利要求6所述的一种磁微粒储存液的制备，其特征在于，所述步骤S3中：
所述的用移液器吸取盐酸至所述步骤S2中所得的溶液中调节溶液的pH值至7.2±0.1。
9.如权利要求6所述的一种磁微粒储存液的制备，其特征在于，所述步骤S6中：
所述过滤所需的滤膜孔径为0.22μm。
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