CN110419471B - 一种野生缅甸鲥人工授精及受精卵孵化的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种野生缅甸鲥人工授精及受精卵孵化的方法，包括以下步骤：步骤一，性成熟野生缅甸鲥的捕获、暂养，包括捕获过程和亲鱼暂养；步骤二，进行人工授精，得到受精卵；步骤三，进行受精卵运输；步骤四，对受精卵进行孵化开口。本发明在探明野生缅甸鲥鱼产卵群体洄游规律的基础上，捕获性成熟雌雄亲鱼，通过精卵特殊处理后进行人工授精，获得高质量受精卵，同时保温富氧运输受精卵至孵化桶并进行流水孵化；首次成功开展了缅甸鲥的人工授精和野生鱼苗试养，填补了该项领域的空白。
Description
技术领域
本发明属于鱼类繁殖技术领域，具体涉及一种野生缅甸鲥人工授精及受精卵孵化的方法。
背景技术
缅甸鲥，学名Tenualosa ilisha，隶属鲱形目鲱科鲥属，形秀而扁，微似鲂而长，色白如银，由海入江产卵繁殖，应时而来，是一种溯河产卵洄游性鱼类。它同绝迹二十多年的中国鲥(Tenualosa reevesii)外形相近、肉质相媲美，是目前世界上仅存的鲥属洄游性鱼类，具有很高的经济价值和学术价值。
缅甸鲥主要分布于印度西太平洋区，包括缅甸、孟加拉、印度、安达曼群岛等海域，也被誉为“孟加拉国鱼”。由于缅甸鲥的味道鲜美，营养价值高，需求量非常大。每年冰冻或冰鲜缅甸鲥通过云南临沧清水河口岸出口至中国近五千吨，主要销往上海、广州等大中城市，颇受市场青睐。
就目前而言，市场上的缅甸鲥主要来自于自然界的野生捕捞，还未有人工饲养的缅甸鲥问世。近年来，缅甸、孟加拉等国也曾尝试开展野生缅甸鲥鱼的人工授精和野生鱼苗试养，但均以失败告终。而随着捕捞强度的增大和水域污染的影响，缅甸鲥产量也在逐年下降，突破缅甸鲥人工育苗技术，进而进行人工养殖是保护该重要渔业资源的唯一有效途径。
发明内容
针对现有技术中存在的上述问题，本发明提供了一种野生缅甸鲥人工授精及受精卵孵化的方法，在探明野生缅甸鲥鱼产卵群体洄游规律的基础上，捕获性成熟雌雄亲鱼，通过精卵特殊处理后进行人工授精，获得高质量受精卵，同时保温富氧运输受精卵至孵化桶并进行流水孵化；首次成功开展了缅甸鲥的人工授精和野生鱼苗试养，填补了该项领域的空白。
为此，本发明采用了以下技术方案：
一种野生缅甸鲥人工授精及受精卵孵化的方法，包括以下步骤：
步骤一，性成熟野生缅甸鲥的捕获、暂养，包括捕获过程和亲鱼暂养；
步骤二，进行人工授精，得到受精卵；
步骤三，进行受精卵运输；
步骤四，对受精卵进行孵化开口。
优选地，步骤一中野生缅甸鲥的捕获过程如下：选择水温25-32℃的野生缅甸鲥产卵季节，在潮汐中的大潮于产卵场用网目为3-5cm的渔网捕捞野生缅甸鲥。
优选地，所述渔网为聚乙烯漂流双层刺网，网衣为双死结编织，横目使用，网具上纲每隔一定距离装配泡沫塑料浮子、下纲配备铅质沉子。
优选地，步骤一中亲鱼暂养的具体过程如下：在捕获的缅甸鲥鱼群中先挑选溢精的活雄鱼暂养在直径为1.0m、深度为0.5-0.8m的圆桶中，随后捕抓流卵的活雌鱼暂养至圆桶中，人工不停顺时针搅动水，让鲥鱼顺时针游动，当雌雄比例达1:2-3时，即进行人工授精。
优选地，步骤二中人工授精的具体过程如下：捕获刚出水死亡雄鱼或者暂养期间死亡雄鱼，立刻挤精至***保存液中冰鲜保存备用并进行***制备；采用半干法进行人工授精。
优选地，所述半干法的具体做法如下：操作由2人配合完成，一人擦净鱼体表水分后，一人从左侧以拇指和食指在卵巢上部由上往下轻挤卵巢到白色瓷盆，直至卵粒不能自然流出为止；一人同步从右侧立即挤入***并倒入保存液中的***，充分搅匀后，缓慢加入8‰的生理盐水，继续搅匀，随后先滴加约为精卵体积的1/4-1/3的江水激活***，增加其结合受精机率，然后用洁净矿泉水清洗2-4遍，清除多余***和污物；整个人工授精过程避免阳光直射。
优选地，所述***保存液的配方如下：以去离子水为溶剂，每升保存液中含8.0g的氯化钠、0.4g氯化钾、0.15g氯化钙、0.4g碳酸氢钠、10g葡萄糖；渗透压为340mOsm/kg，pH值为8.5；所述***制备方法如下：用手术剪沿着生殖孔破开腹部露出***，同时用手术剪挑剪出***置于洁净培养皿中；随后剪碎***倒入40目筛绢挤压出***加入10-20倍的***保存液中冰鲜保存。
优选地，步骤三中受精卵的运输过程如下：将洗净的受精卵带水轻轻倒入已预装1/3水的鱼苗运输袋，用随船携带的纯氧罐注氧打包放入泡沫箱加冰瓶保存，每泡沫箱加冰瓶左右各一个，保持运输温度25℃左右。
优选地，步骤四中受精卵的孵化开口过程如下：采用自制的孵化装置进行孵化；孵化温度控制在25-30℃；孵化期间保持水质清新，水流通畅，流速控制在0.3-0.5m/s，及时清除卵膜；鱼苗出膜后降低水的流速至0.1-0.2m/s；孵化96h后鱼苗可以平游，立即将架在上方的灯打开吸引鱼苗到表层摄食。
优选地，所述孵化装置包括过滤砂缸、高位蓄水箱、孵化桶、集苗缸、初级净化缸、多功能净化箱；取水设备包括取水水泵和备用水泵，均与过滤砂缸通过管道和阀门相连，用于取水；所述过滤砂缸用于过滤水中的固体悬浮物并将过滤后的水送到高位蓄水箱；所述高位蓄水箱为塑料材质，箱底铺设微孔增氧管，增氧管外接鼓风机，通过管道和阀门将水输送到孵化桶；所述孵化桶为透明亚克力材质，桶底为锅底型，孵化桶包括进水管及进水阀门、出水管及出水阀门；进水管一头连接高位蓄水箱，另一头伸向孵化桶的底部，距离桶底约10cm；出水管一头穿过桶底中心伸向桶内，为分节拔管，可调节长短，另一头出桶底连接出水阀门与集苗缸相连；所述集苗缸挂不锈钢内框，框上挂60目纱绢制成的网袋，出水口位于集苗缸底部，通过管道和阀门与初级净化缸相连；所述初级净化缸用水种植水生植物，吸收掉部分可溶性营养元；初级净化缸的出水口通过管道和阀门与多功能净化箱连接，所述多功能净化箱内设有生物滤膜，用于除掉水中大部分氨氮及亚硝酸盐和大部分杂菌；多功能净化箱与过滤砂缸通过阀门和管道连接，形成一个封闭的水循环***。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
(1)首次成功开展了缅甸鲥的人工授精和野生鱼苗试养，填补了该项领域的空白；明确了缅甸鲥鱼的捕捞用具和捕捞技术，探索出让出水即死的鲥鱼能够更大限度地多存活的技术，从而克服了缅甸鲥捕捞难、存活难的问题。
(2)找到了最佳的繁殖搭配，最佳的保存***的方法和授精方法，让人工授精工作更合理、科学化，从而克服缅甸鲥受精率低的缺陷。
(3)受精卵的孵化使用了最新式的闭合循环水***，通过物理和生态过滤共同保障孵化水质的恒定和清爽，全套***避免了外界因素的干扰，有利于进行缅甸鲥的大规模育种培育。
(4)缅甸鲥受精卵一旦出膜96h后立马开始投喂，避免了缅甸鲥卵黄囊消失后才开始投饵的误区，提高了鱼苗的成活率，为溯河洄游型鱼类提供了重要的参考。
附图说明
图1是捕捞渔网的整体结构示意图。
图2是孵化装置的整体结构示意图。
附图标记说明：1、取水水泵；2、过滤砂缸；3、高位蓄水箱；4、孵化桶；5、集苗缸；6、初级净化缸；7、多功能净化箱；11、备用水泵；41、进水管及进水阀门；42、出水管及出水阀门。
具体实施方式
下面结合附图以及具体实施例来详细说明本发明，其中的具体实施例以及说明仅用来解释本发明，但并不作为对本发明的限定。
实施例
一种野生缅甸鲥人工授精及受精卵孵化的方法，采用以下工艺步骤：
1、性成熟野生缅甸鲥鱼的捕获、暂养
(1)捕获过程。选择水温25-32℃的野生鲥鱼产卵季节，在潮汐中的大潮于产卵场用网目为3-5cm的渔网捕捞野生鲥鱼，一月有两次潮水，月初月末各有一次，每次潮水持续10天左右，每次下网两次，每次持续时间4小时。
所述渔网为聚乙烯漂流双层刺网，渔网主尺寸40m×40m，网衣为双死结编织，横目使用，网具上纲每隔一定距离装配泡沫塑料浮子、下纲配备铅质沉子，如图1所示。
(2)亲鱼暂养。在捕获的缅甸鲥鱼群中先挑选溢精的活雄鱼暂养在直径为1.0m、深度为0.5-0.8m的圆桶中，随后捕抓流卵的活雌鱼暂养至圆桶中，人工不停顺时针搅动水，让鲥鱼顺时针游动，当雌雄比例达1:2-3时，即进行人工授精。
2、人工授精过程
捕获刚出水死亡雄鱼或者暂养期间死亡雄鱼，立刻挤精至***保存液中冰鲜保存备用并进行***制备。***保存液配方：以去离子水为溶剂，每升保存液中含8.0g的氯化钠、0.4g氯化钾、0.15g氯化钙、0.4g碳酸氢钠、10g葡萄糖；渗透压为340mOsm/kg，pH值为8.5。***制备方法：用手术剪沿着生殖孔破开腹部露出***，同时用手术剪挑剪出***置于洁净培养皿中；随后剪碎***倒入40目筛绢挤压出***加入10-20倍的***保存液中冰鲜保存。
采用半干法进行人工授精；盛放精、卵的瓷盆用具应干燥、洁净；操作由2人配合完成，一人擦净鱼体表水分后，一人从左侧以拇指和食指在卵巢上部由上往下轻挤卵巢到白色瓷盆，直至卵粒不能自然流出为止；一人同步从右侧立即挤入***并倒入保存液中的***，充分搅匀后，缓慢加入8‰的生理盐水，继续搅匀，随后先滴加约为精卵体积的1/4-1/3的江水激活***，增加其结合受精机率，然后用洁净矿泉水清洗2-4遍，清除多余***和污物。整个野生鲥鱼人工授精过程避免阳光直射，并尽量在船上完成。
3、受精卵运输过程
将洗净的受精卵带水轻轻倒入已预装1/3水的鱼苗运输袋，用随船携带的纯氧罐注氧打包放入泡沫箱加冰瓶保存，每袋(20L)放受精卵5-10万粒，每泡沫盒加冰瓶左右各一个，保持运输温度25℃左右。上岸后，立刻运往孵化基地，运输距离以车程5小时以内为宜。
4、受精卵孵化开口过程
(1)孵化装置如图2所示。所述鲥鱼孵化装置包括取水水泵1、过滤砂缸2、高位蓄水箱3、孵化桶4、集苗缸5、初级净化缸6、多功能净化箱7；取水设备还包含备用水泵11；所述过滤砂缸2用于过滤水中的固体悬浮物，且有高压送水功能，能将水送到高位蓄水箱3；所述高位蓄水箱3为塑料材质，长2m、宽2m，深1.2m，箱底铺设微孔增氧管，增氧管外接鼓风机，通过管道和阀门将水输送到孵化桶4；所述孵化桶4为透明亚克力材质，直径0.8m，桶身高1m，桶底为锅底型，深0.5m，所述孵化桶4包括进水管及进水阀门41、出水管及出水阀门42；进水管一头连接高位蓄水箱3，另一头伸向孵化桶4的底部，距离桶底约10cm；出水管一头穿过桶底中心伸向桶内，为分节拔管，可调节长短，另一头出桶底连接出水阀门与集苗缸5相连；所述集苗缸5宽2m，长3m，深0.8m，挂不锈钢内框，框上挂60目纱绢制成的网袋，出水口位于集苗缸5底部通过管道和阀门与初级净化缸6相连；所述初级净化缸6长3m、宽1m，深0.8m，用水种植水生植物，吸收掉部分可溶性营养元；初级净化缸6出水口通过管道和阀门与多功能净化箱7连接，所述多功能净化箱7内有生物滤膜，能除掉水中大部分氨氮及亚硝酸盐和大部分杂菌；多功能净化箱7与过滤砂缸2通过阀门和管道连接，形成一个封闭的水循环***。
(2)孵化温度。孵化温度控制在25-30℃。
(3)孵化水质管理。孵化用水以曝气沉淀并用200目筛绢过滤的江水或清爽的池塘水为优，孵化期间确保水质清新，水流通畅，流速控制在0.3-0.5m/s，及时清除卵膜；鱼苗出膜后要降低孵化桶4中水流速，可控制为0.1-0.2m/s，以防止鱼苗体力过分消耗。
(4)孵化观察。缅甸鲥受精卵在显微镜下观察到受精卵发育度过原肠期后，方可确认为受精成功。受精成功的受精卵在培养皿中用强光照射始终呈现透明球状。缅甸鲥受精卵在水温25-30℃情况下，受精后的第8小时出现胚体，第14-15小时可见膜内有尾部摆动，第16-18小时全部出膜，全透明呈针型随水流而动，与记载的中国鲥受精卵孵化出膜一致。缅甸鲥鱼苗在40h出现胸鳍，63h左右侧游，96h后慢慢平游。
(5)开口。在水温25-30℃下，孵化96h可以平游时起，立即将架在孵化桶4上方的灯打开吸引鱼苗到表层摄食，将蛋黄、微粒子饲料兑水成浆经过200目筛网过滤后进行投喂；经显微镜观察该鱼苗开口，以绿色的单、多细胞藻类和微粒子饲料粉为主。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用于限制本发明，凡在本发明的精神和原则范围之内所作的任何修改、等同替换以及改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (3)
1.一种野生缅甸鲥人工授精及受精卵孵化的方法，其特征在于：包括以下步骤：
步骤一，性成熟野生缅甸鲥的捕获、暂养，包括捕获过程和亲鱼暂养；
步骤二，进行人工授精，得到受精卵；
步骤三，进行受精卵运输；
步骤四，对受精卵进行孵化开口；
步骤一中野生缅甸鲥的捕获过程如下：选择水温25-32℃的野生缅甸鲥产卵季节，在潮汐中的大潮于产卵场用网目为3-5cm的渔网捕捞野生缅甸鲥；
步骤一中亲鱼暂养的具体过程如下：在捕获的缅甸鲥鱼群中先挑选溢精的活雄鱼暂养在直径为1.0m、深度为0.5-0.8m的圆桶中，随后捕抓流卵的活雌鱼暂养至圆桶中，人工不停顺时针搅动水，让鲥鱼顺时针游动，当雌雄比例达1:2-3时，即进行人工授精；
步骤二中人工授精的具体过程如下：捕获刚出水死亡雄鱼或者暂养期间死亡雄鱼，立刻挤精至***保存液中冰鲜保存备用并进行***制备；采用半干法进行人工授精；
步骤三中受精卵的运输过程如下：将洗净的受精卵带水轻轻倒入已预装1/3水的鱼苗运输袋，用随船携带的纯氧罐注氧打包放入泡沫箱加冰瓶保存，每泡沫箱加冰瓶左右各一个，保持运输温度25℃；
步骤四中受精卵的孵化开口过程如下：采用自制的孵化装置进行孵化；孵化温度控制在25-30℃；孵化期间保持水质清新，水流通畅，流速控制在0.3-0.5m/s，及时清除卵膜；鱼苗出膜后降低水的流速至0.1-0.2m/s；孵化96h后鱼苗可以平游，立即将架在上方的灯打开吸引鱼苗到表层摄食；
所述***保存液的配方如下：以去离子水为溶剂，每升保存液中含8.0g的氯化钠、0.4g氯化钾、0.15g氯化钙、0.4g碳酸氢钠、10g葡萄糖；渗透压为340mOsm/kg，pH值为8.5；所述***制备方法如下：用手术剪沿着生殖孔破开腹部露出***，同时用手术剪挑剪出***置于洁净培养皿中；随后剪碎***倒入40目筛绢挤压出***加入10-20倍的***保存液中冰鲜保存；
所述孵化装置包括过滤砂缸（2）、高位蓄水箱（3）、孵化桶（4）、集苗缸（5）、初级净化缸（6）、多功能净化箱（7）；取水设备包括取水水泵（1）和备用水泵（11），均与过滤砂缸（2）通过管道和阀门相连，用于取水；所述过滤砂缸（2）用于过滤水中的固体悬浮物并将过滤后的水送到高位蓄水箱（3）；所述高位蓄水箱（3）为塑料材质，箱底铺设微孔增氧管，增氧管外接鼓风机，通过管道和阀门将水输送到孵化桶（4）；所述孵化桶（4）为透明亚克力材质，桶底为锅底型，孵化桶（4）包括进水管及进水阀门（41）、出水管及出水阀门（42），进水管一头连接高位蓄水箱（3），另一头伸向孵化桶（4）的底部，距离桶底10cm；出水管一头穿过桶底中心伸向桶内，为分节拔管，可调节长短，另一头出桶底连接出水阀门与集苗缸（5）相连；所述集苗缸（5）挂不锈钢内框，框上挂60目纱绢制成的网袋，出水口位于集苗缸（5）底部，通过管道和阀门与初级净化缸（6）相连；所述初级净化缸（6）用水种植水生植物，吸收掉部分可溶性营养元素；初级净化缸（6）的出水口通过管道和阀门与多功能净化箱（7）连接，所述多功能净化箱（7）内设有生物滤膜，用于除掉水中大部分氨氮及亚硝酸盐和大部分杂菌；多功能净化箱（7）与过滤砂缸（2）通过阀门和管道连接，形成一个封闭的水循环***。
2.根据权利要求1所述的一种野生缅甸鲥人工授精及受精卵孵化的方法，其特征在于：所述渔网为聚乙烯漂流双层刺网，网衣为双死结编织，横目使用，网具上纲每隔一定距离装配泡沫塑料浮子、下纲配备铅质沉子。
3.根据权利要求1所述的一种野生缅甸鲥人工授精及受精卵孵化的方法，其特征在于：所述半干法的具体做法如下：操作由2人配合完成，一人擦净鱼体表水分后，一人从左侧以拇指和食指在卵巢上部由上往下轻挤卵巢到白色瓷盆，直至卵粒不能自然流出为止；一人同步从右侧立即挤入***并倒入保存液中的***，充分搅匀后，缓慢加入8‰的生理盐水，继续搅匀，随后先滴加为精卵体积的1/4-1/3的江水激活***，增加其结合受精机率，然后用洁净矿泉水清洗2-4遍，清除多余***和污物；整个人工授精过程避免阳光直射。
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