CN110357954A - 易吸收改善皮肤的胶原蛋白及其制备工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种易吸收改善皮肤的胶原蛋白及其制备工艺,所述制备工艺包括以下步骤:(1)鱼皮去鳞、洗净,沥干,依次异丙醇水溶液、氯化钠水溶液、柠檬酸水溶液中浸泡后取出,沥干备用;(2)将鱼皮粉碎后加入水中,酶解;(3)将酶解液离心、收集上清液,将上清液经过滤、超滤、脱腥后浓缩、干燥,即得。本发明的易吸收改善皮肤的胶原蛋白,从鱼皮中提取胶原三肽时,先将鱼皮低温搅拌破壁,释放胶原蛋白分子,低温条件促进胶原蛋白分子结构改变,利于酶解的进行,通过优化酶解条件,将胶原三肽从胶原蛋白分子中酶解出来,胶原三肽含量高,分子量小,能被人体小肠和皮肤直接吸收,利用率高,能提高机体免疫力,改善皮肤弹性。
Description
技术领域
本发明涉及一种易吸收改善皮肤的胶原蛋白及其制备工艺。
背景技术
胶原蛋白主要存在于动物的皮、骨、软骨、牙齿、肌肉、韧带、血管中,是***重要的结构蛋白质,起着支撑器官保护机体的功能。胶原蛋白由3条α多肽链构成三股螺旋结构,其分子结构十分稳定,相对分子量在30KDa以上,不利于人体直接吸收。国内外研究表明,水解胶原蛋白的主要产物胶原多肽,具有保护胃粘膜、抗溃疡、抑制血压上升,促进骨形成、皮肤胶原代谢等营养及生理功能,在食品及医药等领域具有巨大的开发前景。
胶原多肽作为胶原蛋白的水解产物,具有很多优良的性能,它所含氨基酸种类丰富,蛋白质含量高,不含脂肪,符合人们对“低脂高蛋白”的食品需求。近年研究表明,胶原多肽可以在肠道直接被吸收,肽类和氨基酸以不同的途径被吸收,而且类比氨基酸具有更大的吸收量。在日本,胶原蛋白及其水解产物被作为众多功能性食品和蛋白饮料的原料,已普遍地应用于食品工业。在化妆品中,胶原多肽的功效主要有营养性、修复性、保湿性、配伍性、亲和性这几方面。近年来,研究人员还发现胶原多肽具有明显改善胶原合成能力的效果,并具有促进皮肤角质层的代谢回转效果,可见胶原多肽具有很好的美容效果。
胶原三肽(collagen tripeptide,CTP)是胶原蛋白中由3个氨基酸组成的最小生物活性单元,纯度高、无抗原性、低过敏性,具有多种生物功能。胶原三肽相对分子质量小,平均约为280Da,其分子结构可以表示为(Gly-X-Y),其中甘氨酸(Gly)是CTP不可缺少的氨基酸残基,Gly-X-Y序列中的X通常是脯氨酸(Pro),Y通常是羟脯氨酸(Hyp)。胶原三肽由很多生理活性,在皮肤护理方面:胶原三肽能减少皱纹,增加皮肤厚度、皮肤弹性、减少表皮水分流失;在治疗和预防心脑血管疾病方面:通过降低血清TC水平进而抑制炎症过程,包括抑制巨噬细胞和平滑肌细胞的增殖以及减少活性氧簇诱导的氧化应激,抑制动脉粥样硬化斑块形成。
本发明旨在提供一种胶原三肽含量高,分子量小,能被人体小肠和皮肤直接吸收的易吸收改善皮肤的胶原蛋白及其制备工艺。
发明内容
本发明提供了一种易吸收改善皮肤的胶原蛋白及其制备工艺。本发明采用如下技术方案:
一种易吸收改善皮肤的胶原蛋白的制备工艺,包括以下步骤,所述份均为重量份:
(1)鱼皮去鳞、洗净,沥干,将鱼皮用质量为鱼皮质量3-10倍且质量分数为5-15%的异丙醇水溶液浸泡6-18小时,取出鱼皮,沥干,放入质量为鱼皮质量2-8倍且质量分数为3-10%的氯化钠水溶液中浸泡3-15小时,取出鱼皮,沥干,放入质量为鱼皮质量3-9倍且浓度为0.01-1mol/L的柠檬酸水溶液中浸泡3-9小时,然后取出鱼皮,沥干备用;
(2)将鱼皮粉碎后过10-50目筛,得到鱼皮粉,取100-130份鱼皮粉,加入100-500份水,混合均匀后升温至50-60℃,调节pH值至6.8-7.2,加入0.05-0.5份中性蛋白酶,在50-60℃、pH值为6.8-7.2的条件下酶解1.5-4.5小时,调节pH值至8.5-10,加入0.1-0.5份碱性蛋白酶,在50-60℃、pH值为8.5-10的条件下酶解1-4小时,降温至35-45℃,调节pH值至7.2-7.8,加入0.1-0.5份胰蛋白酶,在温度为35-45℃、pH值为7.2-7.8的条件下酶解1-5小时,然后灭酶活性,得到酶解液;
(3)将酶解液离心、收集上清液,将上清液用0.05-0.5μm孔径的滤膜过滤,滤液采用截留分子量为1000-8000Da的超滤膜进行超滤,收集超滤后的滤液,将超滤后的滤液脱腥,将脱腥后的滤液减压浓缩至固形物含量为35-55%,冷冻干燥至干基含水量为3.4-3.7%,即得。
一种易吸收改善皮肤的胶原蛋白的制备工艺,包括以下步骤,所述份均为重量份:
(1)鱼皮去鳞、洗净,沥干,将鱼皮用质量为鱼皮质量3-10倍且质量分数为5-15%的异丙醇水溶液浸泡6-18小时,浸泡温度为25-35℃,取出鱼皮,沥干,放入质量为鱼皮质量2-8倍且质量分数为3-10%的氯化钠水溶液中浸泡3-15小时,浸泡温度为25-35℃,取出鱼皮,沥干,放入质量为鱼皮质量3-9倍且浓度为0.01-1mol/L的柠檬酸水溶液中浸泡3-9小时,浸泡温度为25-35℃,然后取出鱼皮,沥干备用;
(2)将鱼皮粉碎后过10-50目筛,得到鱼皮粉,取100-130份鱼皮粉,加入100-500份水,混合均匀后升温至50-60℃,调节pH值至6.8-7.2,加入0.05-0.5份中性蛋白酶,在50-60℃、pH值为6.8-7.2的条件下酶解1.5-4.5小时,调节pH值至8.5-10,加入0.1-0.5份碱性蛋白酶,在50-60℃、pH值为8.5-10的条件下酶解1-4小时,降温至35-45℃,调节pH值至7.2-7.8,加入0.1-0.5份胰蛋白酶,在温度为35-45℃、pH值为7.2-7.8的条件下酶解1-5小时,然后灭酶活性,得到酶解液;
(3)将酶解液以5000-20000转/分钟的转速离心,收集上清液,将上清液用0.05-0.5μm孔径的滤膜过滤,滤液采用截留分子量为1000-8000Da的超滤膜进行超滤,收集超滤后的滤液,将超滤后的滤液脱腥,将脱腥后的滤液减压浓缩至固形物含量为35-55%,冷冻干燥至干基含水量为3.4-3.7%,即得。
一种易吸收改善皮肤的胶原蛋白的制备工艺,包括以下步骤,所述份均为重量份:
(1)鱼皮去鳞、洗净,沥干,将鱼皮用质量为鱼皮质量3-10倍且质量分数为5-15%的异丙醇水溶液浸泡6-18小时,浸泡温度为25-35℃,取出鱼皮,沥干,放入质量为鱼皮质量2-8倍且质量分数为3-10%的氯化钠水溶液中浸泡3-15小时,浸泡温度为25-35℃,取出鱼皮,沥干,放入质量为鱼皮质量3-9倍且浓度为0.01-1mol/L的柠檬酸水溶液中浸泡3-9小时,浸泡温度为25-35℃,然后取出鱼皮,沥干备用;
(2)将鱼皮粉碎后过10-50目筛,得到鱼皮粉,取100-130份鱼皮粉,加入100-500份粒径为20目、温度为-40~-10℃的冰粉,混合后投入搅拌器中,以800-1500转/分钟的转速搅拌20-50分钟,停止搅拌,升温至50-60℃,调节pH值至6.8-7.2,加入0.05-0.5份中性蛋白酶,在50-60℃、pH值为6.8-7.2的条件下酶解1.5-4.5小时,调节pH值至8.5-10,加入0.1-0.5份碱性蛋白酶,在50-60℃、pH值为8.5-10的条件下酶解1-4小时,降温至35-45℃,调节pH值至7.2-7.8,加入0.1-0.5份胰蛋白酶,在温度为35-45℃、pH值为7.2-7.8的条件下酶解1-5小时,然后灭酶活性,得到酶解液;
(3)将酶解液以5000-20000转/分钟的转速离心,收集上清液,将上清液用0.05-0.5μm孔径的滤膜过滤,滤液采用截留分子量为1000-8000Da的超滤膜进行超滤,收集超滤后的滤液,将超滤后的滤液脱腥,将脱腥后的滤液减压浓缩至固形物含量为35-55%,冷冻干燥至干基含水量为3.4-3.7%,即得。
优选地,所述步骤(2)中加入的冰粉的温度为-30℃。
一种易吸收改善皮肤的胶原蛋白的制备工艺,包括以下步骤,所述份均为重量份:
(1)鱼皮去鳞、洗净,沥干,将鱼皮用质量为鱼皮质量3-10倍且质量分数为5-15%的异丙醇水溶液浸泡6-18小时,浸泡温度为25-35℃,取出鱼皮,沥干,放入质量为鱼皮质量2-8倍且质量分数为3-10%的氯化钠水溶液中浸泡3-15小时,浸泡温度为25-35℃,取出鱼皮,沥干,放入质量为鱼皮质量3-9倍且浓度为0.01-1mol/L的柠檬酸水溶液中浸泡3-9小时,浸泡温度为25-35℃,然后取出鱼皮,沥干备用;
(2)将鱼皮粉碎后过10-50目筛,得到鱼皮粉,取100-130份鱼皮粉,加入100-500份粒径为20目、温度为-40~-10℃的冰粉,混合后投入搅拌器中,以800-1500转/分钟的转速搅拌20-50分钟,停止搅拌,升温至50-60℃,调节pH值至6.8-7.2,加入0.05-0.5份中性蛋白酶,在50-60℃、pH值为6.8-7.2的条件下酶解1.5-4.5小时,调节pH值至8.5-10,加入0.1-0.5份碱性蛋白酶,在50-60℃、pH值为8.5-10的条件下酶解1-4小时,降温至35-45℃,调节pH值至7.2-7.8,加入0.1-0.5份复合酶,在温度为35-45℃、pH值为7.2-7.8的条件下酶解1-5小时,然后灭酶活性,得到酶解液,所述复合酶为胰蛋白酶和梭菌蛋白酶按质量比为3:(1-5)的混合物;
(3)将酶解液以5000-20000转/分钟的转速离心,收集上清液,将上清液用0.05-0.5μm孔径的滤膜过滤,滤液采用截留分子量为1000-8000Da的超滤膜进行超滤,收集超滤后的滤液,将超滤后的滤液脱腥,将脱腥后的滤液减压浓缩至固形物含量为35-55%,冷冻干燥至干基含水量为3.4-3.7%,即得。
优选地,所述步骤(2)中加入的冰粉的温度为-30℃。
优选地,所述复合酶为胰蛋白酶和梭菌蛋白酶按质量比为1:1的混合物。
易吸收改善皮肤的胶原蛋白的制备工艺,包括以下步骤,所述份均为重量份:
(1)鱼皮去鳞、洗净,沥干,将鱼皮用质量为鱼皮质量3-10倍且质量分数为5-15%的异丙醇水溶液浸泡6-18小时,浸泡温度为25-35℃,取出鱼皮,沥干,放入质量为鱼皮质量2-8倍且质量分数为3-10%的氯化钠水溶液中浸泡3-15小时,浸泡温度为25-35℃,取出鱼皮,沥干,放入质量为鱼皮质量3-9倍且浓度为0.01-1mol/L的柠檬酸水溶液中浸泡3-9小时,浸泡温度为25-35℃,然后取出鱼皮,沥干备用;
(2)将鱼皮粉碎后过10-50目筛,得到鱼皮粉,取100-130份鱼皮粉,加入100-500份粒径为20目、温度为-40~-10℃的冰粉,混合后投入搅拌器中,以800-1500转/分钟的转速搅拌20-50分钟,停止搅拌,升温至50-60℃,调节pH值至6.8-7.2,加入0.05-0.5份中性蛋白酶,在50-60℃、pH值为6.8-7.2的条件下酶解1.5-4.5小时,调节pH值至8.5-10,加入0.1-0.5份碱性蛋白酶,在50-60℃、pH值为8.5-10的条件下酶解1-4小时,降温至35-45℃,调节pH值至7.2-7.8,加入0.1-0.5份复合酶,在温度为35-45℃、pH值为7.2-7.8的条件下酶解1-5小时,然后灭酶活性,得到酶解液,所述复合酶为胰蛋白酶和梭菌蛋白酶按质量比为3:(1-5)的混合物;
(3)将酶解液以5000-20000转/分钟的转速离心,收集上清液,将上清液用0.05-0.5μm孔径的滤膜过滤,滤液采用截留分子量为1000-8000Da的超滤膜进行超滤,收集超滤后的滤液,将超滤后的滤液脱腥,将脱腥后的滤液减压浓缩至固形物含量为35-55%,冷冻干燥至干基含水量为3.4-3.7%,向冷冻干燥所得产物中加入质量为产物质量0.0005-0.005倍的保鲜剂,混合均匀,即得。
优选地,所述步骤(2)中加入的冰粉的温度为-30℃。
优选地,所述复合酶为胰蛋白酶和梭菌蛋白酶按质量比为1:1的混合物。
优选地,所述保鲜剂为红景天提取物和/或苍术提取物。
进一步优选地,所述保鲜剂为红景天提取物和苍术提取物按质量比为(1-3):(1-5)的混合物。
优选地,所述红景天提取物的制备工艺如下:将红景天粉碎后过10-50目筛,取红景天粉末20-40g加入到200-400g质量分数为15-45%的乙醇水溶液中,在温度为55-85℃、转速为100-500转/分钟的条件下搅拌12-48小时,过50-200目筛,得到一次滤液和一次滤渣,将一次滤渣加入到80-150g质量分数为35-55%的乙醇水溶液中,在温度为45-75℃、转速为200-400转/分钟的条件下搅拌2-6小时,过50-200目筛,得到二次滤液和二次滤渣,合并一次滤液和二次滤液,加热蒸发浓缩至测定50℃时相对密度为1.45-1.47的浸膏,将浸膏减压干燥,得到红景天提取物。所述减压干燥为在50-70℃、压力为0.02-0.08MPa的条件下干燥2-8小时。
优选地,所述苍术提取物的制备工艺如下:将苍术粉碎后过10-50目筛,得到苍术粉,取80-120g苍术粉加入到1500-3000毫升质量分数为75-90%的乙醇水溶液中,升温至40-50℃,在40-50℃浸泡2-6小时,然后在40-50℃、以150-450转/分钟的转速搅拌4-12小时,过50-200目筛,得到一次滤液和一次滤渣,保留一次滤液,将一次滤渣加入到500-1000g水中,升温至60-80℃,在60-80℃、以200-500转/分钟的转速搅拌2-6小时,过100-300目筛,得到二次滤液和二次滤渣,合并一次滤液和二次滤液,加热蒸发浓缩至相对密度为1.35-1.37的浸膏,将浸膏减压干燥,得到苍术提取物。所述减压干燥为在温度为45-60℃、压力为0.02-0.06MPa的条件下干燥5-10小时。
本发明中所述灭酶活性优选为:酶解结束后升温至85-95℃,在85-95℃保温5-20分钟灭酶活性。
本发明中所述减压浓缩至固形物含量为35-55%具体为:在35-55℃、0.02-0.08MPa条件下减压浓缩至固形物含量为35-55%。
本发明中所述调节pH值时优选使用0.5-5mol/L的氢氧化钠或0.5-1.5mol/L的盐酸进行调节。
本发明中所述脱腥具体为:向超滤后的滤液中加入质量为超滤后的滤液质量1-10%的活性炭,在35-50℃以50-200转/分钟的转速搅拌20-60分钟,然后过500-800目筛除去活性炭粉末,保留滤液即可。
本发明中所述冷冻干燥为本领域常规操作,优选地,所述冷冻干燥的条件参数为:预冻温度设定为-45~-30℃,升华温度设定为2-6℃,解析温度设定为30-40℃,绝对压强为10-20Pa。
本发明中所述“沥干”,指沥干表面液体,即表面没有液体垂落即可。
本发明还提供一种易吸收改善皮肤的胶原蛋白,采用上述方法制备而成。
在符合本领域常识的基础上,上述各优选条件,可以任意组合,即得本发明各较佳实施例。
本发明的易吸收改善皮肤的胶原蛋白,从鱼皮中提取胶原三肽时,先将鱼皮低温搅拌破壁,释放胶原蛋白分子,低温条件促进胶原蛋白分子结构改变,利于酶解的进行,通过优化酶解条件,将胶原三肽从胶原蛋白分子中酶解出来,胶原三肽含量高,分子量小,能被人体小肠和皮肤直接吸收,利用率高,配方科学,能提高机体免疫力,无毒副作用,在保健食品、药品中有广泛的应用。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明,但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法,按照常规方法和条件,或按照商品说明书选择。
下述实施例中,所用主要原料及仪器如下:
鱼皮,具体使用鲶形目、鲿科、鮠属鮰鱼(拉丁学名:Leiocassis longirostris)鱼皮。
中性蛋白酶,酶活力10万U/g。
碱性蛋白酶,英文名称:Basic protease,由细菌原生质体诱变选育出的地衣芽孢杆菌2709,经深层发酵、提取及精制而成的一种蛋白水解酶,又被成为2709碱性蛋白酶。酶活力20万U/g。
胰蛋白酶,酶活力10万U/g。
梭菌蛋白酶,英文名称:Clostripain,酶活力5万U/g。
活性炭,具体使用上海吉宝活性炭有限公司生产,型号YD-720,粒径:200目。
苍术,菊科植物茅苍术(拉丁学名:Atractylodes lancea(Thunb.)DC.)的干燥根茎。具有燥湿健脾、祛风散寒、明目的作用。
红景天,为景天科大花红景天(拉丁学名:Rhodiola crenulata(HK.f.et.Thoms)H.Ohba)的干燥根,具有益气活血,通脉平喘之功效。
下面通过实施例的方式进一步说明本发明,如无特殊说明,所采用的份数均为重量份数。
实施例1
易吸收改善皮肤的胶原蛋白的制备工艺,包括以下步骤,所述份均为重量份:
(1)鱼皮去鳞、洗净,沥干,将鱼皮用质量为鱼皮质量6倍且质量分数为10%的异丙醇水溶液浸泡12小时,浸泡温度为30℃,取出鱼皮,沥干,放入质量为鱼皮质量4倍且质量分数为6.5%的氯化钠水溶液中浸泡6小时,浸泡温度为25℃,取出鱼皮,沥干,放入质量为鱼皮质量6倍且浓度为0.5mol/L的柠檬酸水溶液中浸泡6小时,浸泡温度为25℃,然后取出鱼皮,沥干备用;
(2)将鱼皮粉碎后过20目筛,得到鱼皮粉,取100份鱼皮粉,加入250份水,混合均匀后升温至52℃,调节pH值至7.0,加入0.08份中性蛋白酶,在52℃、pH值为7.0的条件下酶解3.5小时,调节pH值至9.5,加入0.15份碱性蛋白酶,在52℃、pH值为9.5的条件下酶解1.5小时,降温至40℃,调节pH值至7.5,加入0.15份胰蛋白酶,在温度为40℃、pH值为7.5的条件下酶解1.5小时,酶解结束后升温至95℃,在95℃保温10分钟灭酶活性,得到酶解液;
(3)将酶解液以8000转/分钟的转速离心,收集上清液,将上清液用0.2μm孔径的滤膜过滤,滤液采用截留分子量为5000Da的超滤膜进行超滤,收集超滤后的滤液,向超滤后的滤液中加入质量为超滤后的滤液质量5%的活性炭,在45℃以100转/分钟的转速搅拌45分钟进行脱腥,然后过500目筛除去活性炭粉末,所得滤液在45℃、0.05MPa条件下减压浓缩至固形物含量为40%,冷冻干燥至干基含水量为3.4%,即得。
所述冷冻干燥的条件参数为:预冻温度设定为-35℃,升华温度设定为5℃,解析温度设定为35℃,绝对压强为15Pa。所述调节pH值时使用1mol/L的氢氧化钠或1mol/L的盐酸进行调节。
实施例2
易吸收改善皮肤的胶原蛋白的制备工艺,包括以下步骤,所述份均为重量份:
(1)鱼皮去鳞、洗净,沥干,将鱼皮用质量为鱼皮质量6倍且质量分数为10%的异丙醇水溶液浸泡12小时,浸泡温度为30℃,取出鱼皮,沥干,放入质量为鱼皮质量4倍且质量分数为6.5%的氯化钠水溶液中浸泡6小时,浸泡温度为25℃,取出鱼皮,沥干,放入质量为鱼皮质量6倍且浓度为0.5mol/L的柠檬酸水溶液中浸泡6小时,浸泡温度为25℃,然后取出鱼皮,沥干备用;
(2)将鱼皮粉碎后过20目筛,得到鱼皮粉,取100份鱼皮粉,加入250份粒径为20目、温度为-40℃的冰粉,混合后投入搅拌器中,以1000转/分钟的转速搅拌30分钟,停止搅拌,升温至52℃,调节pH值至7.0,加入0.08份中性蛋白酶,在52℃、pH值为7.0的条件下酶解3.5小时,调节pH值至9.5,加入0.15份碱性蛋白酶,在52℃、pH值为9.5的条件下酶解1.5小时,降温至40℃,调节pH值至7.5,加入0.15份胰蛋白酶,在温度为40℃、pH值为7.5的条件下酶解1.5小时,酶解结束后升温至95℃,在95℃保温10分钟灭酶活性,得到酶解液;
(3)将酶解液以8000转/分钟的转速离心,收集上清液,将上清液用0.2μm孔径的滤膜过滤,滤液采用截留分子量为5000Da的超滤膜进行超滤,收集超滤后的滤液,向超滤后的滤液中加入质量为超滤后的滤液质量5%的活性炭,在45℃以100转/分钟的转速搅拌45分钟进行脱腥,然后过500目筛除去活性炭粉末,所得滤液在45℃、0.05MPa条件下减压浓缩至固形物含量为40%,冷冻干燥至干基含水量为3.4%,即得。
所述冷冻干燥的条件参数为:预冻温度设定为-35℃,升华温度设定为5℃,解析温度设定为35℃,绝对压强为15Pa。所述调节pH值时使用1mol/L的氢氧化钠或1mol/L的盐酸进行调节。
实施例3
易吸收改善皮肤的胶原蛋白的制备工艺,包括以下步骤,所述份均为重量份:
(1)鱼皮去鳞、洗净,沥干,将鱼皮用质量为鱼皮质量6倍且质量分数为10%的异丙醇水溶液浸泡12小时,浸泡温度为30℃,取出鱼皮,沥干,放入质量为鱼皮质量4倍且质量分数为6.5%的氯化钠水溶液中浸泡6小时,浸泡温度为25℃,取出鱼皮,沥干,放入质量为鱼皮质量6倍且浓度为0.5mol/L的柠檬酸水溶液中浸泡6小时,浸泡温度为25℃,然后取出鱼皮,沥干备用;
(3)将鱼皮粉碎后过20目筛,得到鱼皮粉,取100份鱼皮粉,加入250份粒径为20目、温度为-30℃的冰粉,混合后投入搅拌器中,以1000转/分钟的转速搅拌30分钟,停止搅拌,升温至52℃,调节pH值至7.0,加入0.08份中性蛋白酶,在52℃、pH值为7.0的条件下酶解3.5小时,调节pH值至9.5,加入0.15份碱性蛋白酶,在52℃、pH值为9.5的条件下酶解1.5小时,降温至40℃,调节pH值至7.5,加入0.15份胰蛋白酶,在温度为40℃、pH值为7.5的条件下酶解1.5小时,酶解结束后升温至95℃,在95℃保温10分钟灭酶活性,得到酶解液;
(3)将酶解液以8000转/分钟的转速离心,收集上清液,将上清液用0.2μm孔径的滤膜过滤,滤液采用截留分子量为5000Da的超滤膜进行超滤,收集超滤后的滤液,向超滤后的滤液中加入质量为超滤后的滤液质量5%的活性炭,在45℃以100转/分钟的转速搅拌45分钟进行脱腥,然后过500目筛除去活性炭粉末,所得滤液在45℃、0.05MPa条件下减压浓缩至固形物含量为40%,冷冻干燥至干基含水量为3.4%,即得。
所述冷冻干燥的条件参数为:预冻温度设定为-35℃,升华温度设定为5℃,解析温度设定为35℃,绝对压强为15Pa。所述调节pH值时使用1mol/L的氢氧化钠或1mol/L的盐酸进行调节。
实施例4
易吸收改善皮肤的胶原蛋白的制备工艺,包括以下步骤,所述份均为重量份:
(1)鱼皮去鳞、洗净,沥干,将鱼皮用质量为鱼皮质量6倍且质量分数为10%的异丙醇水溶液浸泡12小时,浸泡温度为30℃,取出鱼皮,沥干,放入质量为鱼皮质量4倍且质量分数为6.5%的氯化钠水溶液中浸泡6小时,浸泡温度为25℃,取出鱼皮,沥干,放入质量为鱼皮质量6倍且浓度为0.5mol/L的柠檬酸水溶液中浸泡6小时,浸泡温度为25℃,然后取出鱼皮,沥干备用;
(4)将鱼皮粉碎后过20目筛,得到鱼皮粉,取100份鱼皮粉,加入250份粒径为20目、温度为-20℃的冰粉,混合后投入搅拌器中,以1000转/分钟的转速搅拌30分钟,停止搅拌,升温至52℃,调节pH值至7.0,加入0.08份中性蛋白酶,在52℃、pH值为7.0的条件下酶解3.5小时,调节pH值至9.5,加入0.15份碱性蛋白酶,在52℃、pH值为9.5的条件下酶解1.5小时,降温至40℃,调节pH值至7.5,加入0.15份胰蛋白酶,在温度为40℃、pH值为7.5的条件下酶解1.5小时,酶解结束后升温至95℃,在95℃保温10分钟灭酶活性,得到酶解液;
(3)将酶解液以8000转/分钟的转速离心,收集上清液,将上清液用0.2μm孔径的滤膜过滤,滤液采用截留分子量为5000Da的超滤膜进行超滤,收集超滤后的滤液,向超滤后的滤液中加入质量为超滤后的滤液质量5%的活性炭,在45℃以100转/分钟的转速搅拌45分钟进行脱腥,然后过500目筛除去活性炭粉末,所得滤液在45℃、0.05MPa条件下减压浓缩至固形物含量为40%,冷冻干燥至干基含水量为3.4%,即得。
所述冷冻干燥的条件参数为:预冻温度设定为-35℃,升华温度设定为5℃,解析温度设定为35℃,绝对压强为15Pa。所述调节pH值时使用1mol/L的氢氧化钠或1mol/L的盐酸进行调节。
实施例5
易吸收改善皮肤的胶原蛋白的制备工艺,包括以下步骤,所述份均为重量份:
(1)鱼皮去鳞、洗净,沥干,将鱼皮用质量为鱼皮质量6倍且质量分数为10%的异丙醇水溶液浸泡12小时,浸泡温度为30℃,取出鱼皮,沥干,放入质量为鱼皮质量4倍且质量分数为6.5%的氯化钠水溶液中浸泡6小时,浸泡温度为25℃,取出鱼皮,沥干,放入质量为鱼皮质量6倍且浓度为0.5mol/L的柠檬酸水溶液中浸泡6小时,浸泡温度为25℃,然后取出鱼皮,沥干备用;
(5)将鱼皮粉碎后过20目筛,得到鱼皮粉,取100份鱼皮粉,加入250份粒径为20目、温度为-10℃的冰粉,混合后投入搅拌器中,以1000转/分钟的转速搅拌30分钟,停止搅拌,升温至52℃,调节pH值至7.0,加入0.08份中性蛋白酶,在52℃、pH值为7.0的条件下酶解3.5小时,调节pH值至9.5,加入0.15份碱性蛋白酶,在52℃、pH值为9.5的条件下酶解1.5小时,降温至40℃,调节pH值至7.5,加入0.15份胰蛋白酶,在温度为40℃、pH值为7.5的条件下酶解1.5小时,酶解结束后升温至95℃,在95℃保温10分钟灭酶活性,得到酶解液;
(3)将酶解液以8000转/分钟的转速离心,收集上清液,将上清液用0.2μm孔径的滤膜过滤,滤液采用截留分子量为5000Da的超滤膜进行超滤,收集超滤后的滤液,向超滤后的滤液中加入质量为超滤后的滤液质量5%的活性炭,在45℃以100转/分钟的转速搅拌45分钟进行脱腥,然后过500目筛除去活性炭粉末,所得滤液在45℃、0.05MPa条件下减压浓缩至固形物含量为40%,冷冻干燥至干基含水量为3.4%,即得。
所述冷冻干燥的条件参数为:预冻温度设定为-35℃,升华温度设定为5℃,解析温度设定为35℃,绝对压强为15Pa。所述调节pH值时使用1mol/L的氢氧化钠或1mol/L的盐酸进行调节。
实施例6
易吸收改善皮肤的胶原蛋白的制备工艺,包括以下步骤,所述份均为重量份:
(1)鱼皮去鳞、洗净,沥干,将鱼皮用质量为鱼皮质量6倍且质量分数为10%的异丙醇水溶液浸泡12小时,浸泡温度为30℃,取出鱼皮,沥干,放入质量为鱼皮质量4倍且质量分数为6.5%的氯化钠水溶液中浸泡6小时,浸泡温度为25℃,取出鱼皮,沥干,放入质量为鱼皮质量6倍且浓度为0.5mol/L的柠檬酸水溶液中浸泡6小时,浸泡温度为25℃,然后取出鱼皮,沥干备用;
(2)将鱼皮粉碎后过20目筛,得到鱼皮粉,取100份鱼皮粉,加入250份粒径为20目、温度为-30℃的冰粉,混合后投入搅拌器中,以1000转/分钟的转速搅拌30分钟,停止搅拌,升温至52℃,调节pH值至7.0,加入0.08份中性蛋白酶,在52℃、pH值为7.0的条件下酶解3.5小时,调节pH值至9.5,加入0.15份碱性蛋白酶,在52℃、pH值为9.5的条件下酶解1.5小时,降温至40℃,调节pH值至7.5,加入0.15份复合酶,在温度为40℃、pH值为7.5的条件下酶解1.5小时,酶解结束后升温至95℃,在95℃保温10分钟灭酶活性,得到酶解液,所述复合酶为胰蛋白酶和梭菌蛋白酶按质量比为3:1的混合物;
(3)将酶解液以8000转/分钟的转速离心,收集上清液,将上清液用0.2μm孔径的滤膜过滤,滤液采用截留分子量为5000Da的超滤膜进行超滤,收集超滤后的滤液,向超滤后的滤液中加入质量为超滤后的滤液质量5%的活性炭,在45℃以100转/分钟的转速搅拌45分钟进行脱腥,然后过500目筛除去活性炭粉末,所得滤液在45℃、0.05MPa条件下减压浓缩至固形物含量为40%,冷冻干燥至干基含水量为3.4%,即得。
所述冷冻干燥的条件参数为:预冻温度设定为-35℃,升华温度设定为5℃,解析温度设定为35℃,绝对压强为15Pa。所述调节pH值时使用1mol/L的氢氧化钠或1mol/L的盐酸进行调节。
实施例7
易吸收改善皮肤的胶原蛋白的制备工艺,包括以下步骤,所述份均为重量份:
(1)鱼皮去鳞、洗净,沥干,将鱼皮用质量为鱼皮质量6倍且质量分数为10%的异丙醇水溶液浸泡12小时,浸泡温度为30℃,取出鱼皮,沥干,放入质量为鱼皮质量4倍且质量分数为6.5%的氯化钠水溶液中浸泡6小时,浸泡温度为25℃,取出鱼皮,沥干,放入质量为鱼皮质量6倍且浓度为0.5mol/L的柠檬酸水溶液中浸泡6小时,浸泡温度为25℃,然后取出鱼皮,沥干备用;
(2)将鱼皮粉碎后过20目筛,得到鱼皮粉,取100份鱼皮粉,加入250份粒径为20目、温度为-30℃的冰粉,混合后投入搅拌器中,以1000转/分钟的转速搅拌30分钟,停止搅拌,升温至52℃,调节pH值至7.0,加入0.08份中性蛋白酶,在52℃、pH值为7.0的条件下酶解3.5小时,调节pH值至9.5,加入0.15份碱性蛋白酶,在52℃、pH值为9.5的条件下酶解1.5小时,降温至40℃,调节pH值至7.5,加入0.15份复合酶,在温度为40℃、pH值为7.5的条件下酶解1.5小时,酶解结束后升温至95℃,在95℃保温10分钟灭酶活性,得到酶解液,所述复合酶为胰蛋白酶和梭菌蛋白酶按质量比为1:1的混合物;
(3)将酶解液以8000转/分钟的转速离心,收集上清液,将上清液用0.2μm孔径的滤膜过滤,滤液采用截留分子量为5000Da的超滤膜进行超滤,收集超滤后的滤液,向超滤后的滤液中加入质量为超滤后的滤液质量5%的活性炭,在45℃以100转/分钟的转速搅拌45分钟进行脱腥,然后过500目筛除去活性炭粉末,所得滤液在45℃、0.05MPa条件下减压浓缩至固形物含量为40%,冷冻干燥至干基含水量为3.4%,即得。
所述冷冻干燥的条件参数为:预冻温度设定为-35℃,升华温度设定为5℃,解析温度设定为35℃,绝对压强为15Pa。所述调节pH值时使用1mol/L的氢氧化钠或1mol/L的盐酸进行调节。
实施例8
易吸收改善皮肤的胶原蛋白的制备工艺,包括以下步骤,所述份均为重量份:
(1)鱼皮去鳞、洗净,沥干,将鱼皮用质量为鱼皮质量6倍且质量分数为10%的异丙醇水溶液浸泡12小时,浸泡温度为30℃,取出鱼皮,沥干,放入质量为鱼皮质量4倍且质量分数为6.5%的氯化钠水溶液中浸泡6小时,浸泡温度为25℃,取出鱼皮,沥干,放入质量为鱼皮质量6倍且浓度为0.5mol/L的柠檬酸水溶液中浸泡6小时,浸泡温度为25℃,然后取出鱼皮,沥干备用;
(2)将鱼皮粉碎后过20目筛,得到鱼皮粉,取100份鱼皮粉,加入250份粒径为20目、温度为-30℃的冰粉,混合后投入搅拌器中,以1000转/分钟的转速搅拌30分钟,停止搅拌,升温至52℃,调节pH值至7.0,加入0.08份中性蛋白酶,在52℃、pH值为7.0的条件下酶解3.5小时,调节pH值至9.5,加入0.15份碱性蛋白酶,在52℃、pH值为9.5的条件下酶解1.5小时,降温至40℃,调节pH值至7.5,加入0.15份复合酶,在温度为40℃、pH值为7.5的条件下酶解1.5小时,酶解结束后升温至95℃,在95℃保温10分钟灭酶活性,得到酶解液,所述复合酶为胰蛋白酶和梭菌蛋白酶按质量比为3:5的混合物;
(3)将酶解液以8000转/分钟的转速离心,收集上清液,将上清液用0.2μm孔径的滤膜过滤,滤液采用截留分子量为5000Da的超滤膜进行超滤,收集超滤后的滤液,向超滤后的滤液中加入质量为超滤后的滤液质量5%的活性炭,在45℃以100转/分钟的转速搅拌45分钟进行脱腥,然后过500目筛除去活性炭粉末,所得滤液在45℃、0.05MPa条件下减压浓缩至固形物含量为40%,冷冻干燥至干基含水量为3.4%,即得。
所述冷冻干燥的条件参数为:预冻温度设定为-35℃,升华温度设定为5℃,解析温度设定为35℃,绝对压强为15Pa。所述调节pH值时使用1mol/L的氢氧化钠或1mol/L的盐酸进行调节。
实施例9
易吸收改善皮肤的胶原蛋白的制备工艺,包括以下步骤,所述份均为重量份:
(1)鱼皮去鳞、洗净,沥干,将鱼皮用质量为鱼皮质量6倍且质量分数为10%的异丙醇水溶液浸泡12小时,浸泡温度为30℃,取出鱼皮,沥干,放入质量为鱼皮质量4倍且质量分数为6.5%的氯化钠水溶液中浸泡6小时,浸泡温度为25℃,取出鱼皮,沥干,放入质量为鱼皮质量6倍且浓度为0.5mol/L的柠檬酸水溶液中浸泡6小时,浸泡温度为25℃,然后取出鱼皮,沥干备用;
(2)将鱼皮粉碎后过20目筛,得到鱼皮粉,将100份鱼皮粉、250份粒径为20目、温度为-30℃的冰粉投入搅拌器中,以1000转/分钟的转速搅拌30分钟,停止搅拌,升温至52℃,调节pH值至7.0,加入0.08份中性蛋白酶,在52℃、pH值为7.0的条件下酶解3.5小时,调节pH值至9.5,加入0.15份碱性蛋白酶,在52℃、pH值为9.5的条件下酶解1.5小时,降温至40℃,调节pH值至7.5,加入0.15份复合酶,在温度为40℃、pH值为7.5的条件下酶解1.5小时,酶解结束后升温至95℃,在95℃保温10分钟灭酶活性,得到酶解液,所述复合酶为胰蛋白酶和梭菌蛋白酶按质量比为1:1的混合物;
(3)将酶解液以8000转/分钟的转速离心,收集上清液,将上清液用0.2μm孔径的滤膜过滤,滤液采用截留分子量为5000Da的超滤膜进行超滤,收集超滤后的滤液,向超滤后的滤液中加入质量为超滤后的滤液质量5%的活性炭,在45℃以100转/分钟的转速搅拌45分钟进行脱腥,然后过500目筛除去活性炭粉末,所得滤液在45℃、0.05MPa条件下减压浓缩至固形物含量为40%,冷冻干燥至干基含水量为3.4%,向冷冻干燥所得产物中加入质量为产物质量0.002倍的保鲜剂,混合均匀,即得。
所述冷冻干燥的条件参数为:预冻温度设定为-35℃,升华温度设定为5℃,解析温度设定为35℃,绝对压强为15Pa。所述调节pH值时使用1mol/L的氢氧化钠或1mol/L的盐酸进行调节。
所述保鲜剂为红景天提取物。所述红景天提取物的制备工艺如下:将红景天粉碎后过20目筛,取红景天粉末30g加入到350g质量分数为30%的乙醇水溶液中,在温度为70℃、转速为300转/分钟的条件下搅拌24小时,过200目筛,得到一次滤液和一次滤渣,将一次滤渣加入到100g质量分数为45%的乙醇水溶液中,在温度为70℃、转速为300转/分钟的条件下搅拌5小时,过200目筛,得到二次滤液和二次滤渣,合并一次滤液和二次滤液,加热蒸发浓缩至测定50℃时相对密度为1.45的浸膏,将浸膏减压干燥,得到红景天提取物。所述减压干燥为在55℃、压力为0.06MPa的条件下干燥4小时。
实施例10
与实施例9基本相同,区别仅在于,在本实施例10中,所述保鲜剂为苍术提取物。所述苍术提取物的制备工艺如下:将苍术粉碎后过20目筛,得到苍术粉,取100g苍术粉加入到2000毫升质量分数为85%的乙醇水溶液中,升温至45℃,在45℃浸泡3小时,然后在45℃、以300转/分钟的转速搅拌6小时,过100目筛,得到一次滤液和一次滤渣,保留一次滤液,将一次滤渣加入到800g水中,升温至65℃,在65℃、以200转/分钟的转速搅拌3小时,过100目筛,得到二次滤液和二次滤渣,合并一次滤液和二次滤液,加热蒸发浓缩至相对密度为1.35的浸膏,将浸膏减压干燥,得到苍术提取物。所述减压干燥为在温度为55℃、压力为0.04MPa的条件下干燥6小时。
实施例11
与实施例9基本相同,区别仅在于,在本实施例11中,所述保鲜剂为红景天提取物和苍术提取物按质量比为3:5的混合物。
所述红景天提取物的制备工艺如下:将红景天粉碎后过20目筛,取红景天粉末30g加入到350g质量分数为30%的乙醇水溶液中,在温度为70℃、转速为300转/分钟的条件下搅拌24小时,过200目筛,得到一次滤液和一次滤渣,将一次滤渣加入到100g质量分数为45%的乙醇水溶液中,在温度为70℃、转速为300转/分钟的条件下搅拌5小时,过200目筛,得到二次滤液和二次滤渣,合并一次滤液和二次滤液,加热蒸发浓缩至测定50℃时相对密度为1.45的浸膏,将浸膏减压干燥,得到红景天提取物。所述减压干燥为在55℃、压力为0.06MPa的条件下干燥4小时。
所述苍术提取物的制备工艺如下:将苍术粉碎后过20目筛,得到苍术粉,取100g苍术粉加入到2000毫升质量分数为85%的乙醇水溶液中,升温至45℃,在45℃浸泡3小时,然后在45℃、以300转/分钟的转速搅拌6小时,过100目筛,得到一次滤液和一次滤渣,保留一次滤液,将一次滤渣加入到800g水中,升温至65℃,在65℃、以200转/分钟的转速搅拌3小时,过100目筛,得到二次滤液和二次滤渣,合并一次滤液和二次滤液,加热蒸发浓缩至相对密度为1.35的浸膏,将浸膏减压干燥,得到苍术提取物。所述减压干燥为在温度为55℃、压力为0.04MPa的条件下干燥6小时。
测试例1
将本发明的易吸收改善皮肤的胶原蛋白进行分子量分布测试,测试结果见表1。
蛋白质含量的测定:按照GB/T5009.5-2016进行测试。
分子量分布测定:采用HPLC法进行测定。色谱柱:TSKgel G2000swxl300mm×7.8mm,柱温:室温,流动相:乙腈+水+三氟乙酸=45+55+0.1,波长220nm,体积流量0.8mL/min。通过分子量分布测试计算胶原三肽(平均分子量280Da)占蛋白质的质量百分比。
表1:蛋白质含量和分子量分布测试结果表
本发明的易吸收改善皮肤的胶原蛋白,通过酶解反应截取胶原蛋白分子中的易于被人体吸收的小分子结构胶原三肽,胶原三肽的平均分子量为280道尔顿,是一种含有甘氨酸、脯氨酸(或羟脯氨酸)外加一个其他氨基酸的三肽,能够快速被小肠、人体皮肤等直接吸收,利用率高。本发明的易吸收改善皮肤的胶原蛋白中蛋白质含量高达96%以上,其中胶原三肽占蛋白质的质量百分比高达52.9%,远高于市场同类产品。从鱼皮中提取胶原三肽时,先将鱼皮低温搅拌破壁,释放胶原蛋白分子,低温条件促进胶原蛋白分子结构改变,利于酶解的进行,通过优化酶解条件,将胶原三肽从胶原蛋白分子中截取出来。
测试例2
将本发明的易吸收改善皮肤的胶原蛋白进行清除超氧阴离子效果测试。测试结果见表2。
清除超氧阴离子(O2-)的能力参考《超氧化物歧化酶模型化合物的合成,表征和活性测定》(苗志伟,周卫红,有机化学,1999,19:537-541)进行。
表2:自由基清除率测试结果表
测试例3
将本发明的易吸收改善皮肤的胶原蛋白进行抗菌效果测试,测试结果见表3。
抗菌效果测试:将本发明的易吸收改善皮肤的胶原蛋白置于25℃,相对湿度85%环境下保藏一年,然后进行大肠杆菌(ATYCC 25922)菌落总数测试,测试方法参照GB/T4789.3。
表3:大肠杆菌菌落总数测试结果表
本发明的易吸收改善皮肤的胶原蛋白含有抗菌、消炎功效的保鲜剂,能抑制大肠杆菌的生长繁殖,且对人体无毒副作用,安全卫生得到了保障。
以上详细描述了本发明的较佳具体实施例。应当理解,本领域的普通技术人员无需创造性劳动就可以根据本发明的构思作出诸多修改和变化。因此,凡本技术领域中技术人员依本发明的构思在现有技术的基础上通过逻辑分析、推理或者有限的实验可以得到的技术方案,皆应在由权利要求书所确定的保护范围内。
Claims (10)
1.一种易吸收改善皮肤的胶原蛋白的制备工艺,其特征在于,包括以下步骤,所述份均为重量份:
(1)鱼皮去鳞、洗净,沥干,将鱼皮用质量为鱼皮质量3-10倍且质量分数为5-15%的异丙醇水溶液浸泡6-18小时,取出鱼皮,沥干,放入质量为鱼皮质量2-8倍且质量分数为3-10%的氯化钠水溶液中浸泡3-15小时,取出鱼皮,沥干,放入质量为鱼皮质量3-9倍且浓度为0.01-1mol/L的柠檬酸水溶液中浸泡3-9小时,然后取出鱼皮,沥干备用;
(2)将鱼皮粉碎后过10-50目筛,得到鱼皮粉,取100-130份鱼皮粉,加入100-500份水,混合均匀后升温至50-60℃,调节pH值至6.8-7.2,加入0.05-0.5份中性蛋白酶,在50-60℃、pH值为6.8-7.2的条件下酶解1.5-4.5小时,调节pH值至8.5-10,加入0.1-0.5份碱性蛋白酶,在50-60℃、pH值为8.5-10的条件下酶解1-4小时,降温至35-45℃,调节pH值至7.2-7.8,加入0.1-0.5份胰蛋白酶,在温度为35-45℃、pH值为7.2-7.8的条件下酶解1-5小时,然后灭酶活性,得到酶解液;
(3)将酶解液离心、收集上清液,将上清液用0.05-0.5μm孔径的滤膜过滤,滤液采用截留分子量为1000-8000Da的超滤膜进行超滤,收集超滤后的滤液,将超滤后的滤液脱腥,将脱腥后的滤液减压浓缩至固形物含量为35-55%,冷冻干燥至干基含水量为3.4-3.7%,即得。
2.一种易吸收改善皮肤的胶原蛋白的制备工艺,其特征在于,包括以下步骤,所述份均为重量份:
(1)鱼皮去鳞、洗净,沥干,将鱼皮用质量为鱼皮质量3-10倍且质量分数为5-15%的异丙醇水溶液浸泡6-18小时,浸泡温度为25-35℃,取出鱼皮,沥干,放入质量为鱼皮质量2-8倍且质量分数为3-10%的氯化钠水溶液中浸泡3-15小时,浸泡温度为25-35℃,取出鱼皮,沥干,放入质量为鱼皮质量3-9倍且浓度为0.01-1mol/L的柠檬酸水溶液中浸泡3-9小时,浸泡温度为25-35℃,然后取出鱼皮,沥干备用;
(2)将鱼皮粉碎后过10-50目筛,得到鱼皮粉,取100-130份鱼皮粉,加入100-500份水,混合均匀后升温至50-60℃,调节pH值至6.8-7.2,加入0.05-0.5份中性蛋白酶,在50-60℃、pH值为6.8-7.2的条件下酶解1.5-4.5小时,调节pH值至8.5-10,加入0.1-0.5份碱性蛋白酶,在50-60℃、pH值为8.5-10的条件下酶解1-4小时,降温至35-45℃,调节pH值至7.2-7.8,加入0.1-0.5份胰蛋白酶,在温度为35-45℃、pH值为7.2-7.8的条件下酶解1-5小时,然后灭酶活性,得到酶解液;
(3)将酶解液以5000-20000转/分钟的转速离心,收集上清液,将上清液用0.05-0.5μm孔径的滤膜过滤,滤液采用截留分子量为1000-8000Da的超滤膜进行超滤,收集超滤后的滤液,将超滤后的滤液脱腥,将脱腥后的滤液减压浓缩至固形物含量为35-55%,冷冻干燥至干基含水量为3.4-3.7%,即得。
3.一种易吸收改善皮肤的胶原蛋白的制备工艺,其特征在于,包括以下步骤,所述份均为重量份:
(1)鱼皮去鳞、洗净,沥干,将鱼皮用质量为鱼皮质量3-10倍且质量分数为5-15%的异丙醇水溶液浸泡6-18小时,浸泡温度为25-35℃,取出鱼皮,沥干,放入质量为鱼皮质量2-8倍且质量分数为3-10%的氯化钠水溶液中浸泡3-15小时,浸泡温度为25-35℃,取出鱼皮,沥干,放入质量为鱼皮质量3-9倍且浓度为0.01-1mol/L的柠檬酸水溶液中浸泡3-9小时,浸泡温度为25-35℃,然后取出鱼皮,沥干备用;
(2)将鱼皮粉碎后过10-50目筛,得到鱼皮粉,取100-130份鱼皮粉,加入100-500份粒径为20目、温度为-40~-10℃的冰粉,混合后投入搅拌器中,以800-1500转/分钟的转速搅拌20-50分钟,停止搅拌,升温至50-60℃,调节pH值至6.8-7.2,加入0.05-0.5份中性蛋白酶,在50-60℃、pH值为6.8-7.2的条件下酶解1.5-4.5小时,调节pH值至8.5-10,加入0.1-0.5份碱性蛋白酶,在50-60℃、pH值为8.5-10的条件下酶解1-4小时,降温至35-45℃,调节pH值至7.2-7.8,加入0.1-0.5份胰蛋白酶,在温度为35-45℃、pH值为7.2-7.8的条件下酶解1-5小时,然后灭酶活性,得到酶解液;
(3)将酶解液以5000-20000转/分钟的转速离心,收集上清液,将上清液用0.05-0.5μm孔径的滤膜过滤,滤液采用截留分子量为1000-8000Da的超滤膜进行超滤,收集超滤后的滤液,将超滤后的滤液脱腥,将脱腥后的滤液减压浓缩至固形物含量为35-55%,冷冻干燥至干基含水量为3.4-3.7%,即得。
4.一种易吸收改善皮肤的胶原蛋白的制备工艺,其特征在于,包括以下步骤,所述份均为重量份:
(1)鱼皮去鳞、洗净,沥干,将鱼皮用质量为鱼皮质量3-10倍且质量分数为5-15%的异丙醇水溶液浸泡6-18小时,浸泡温度为25-35℃,取出鱼皮,沥干,放入质量为鱼皮质量2-8倍且质量分数为3-10%的氯化钠水溶液中浸泡3-15小时,浸泡温度为25-35℃,取出鱼皮,沥干,放入质量为鱼皮质量3-9倍且浓度为0.01-1mol/L的柠檬酸水溶液中浸泡3-9小时,浸泡温度为25-35℃,然后取出鱼皮,沥干备用;
(2)将鱼皮粉碎后过10-50目筛,得到鱼皮粉,取100-130份鱼皮粉,加入100-500份粒径为20目、温度为-40~-10℃的冰粉,混合后投入搅拌器中,以800-1500转/分钟的转速搅拌20-50分钟,停止搅拌,升温至50-60℃,调节pH值至6.8-7.2,加入0.05-0.5份中性蛋白酶,在50-60℃、pH值为6.8-7.2的条件下酶解1.5-4.5小时,调节pH值至8.5-10,加入0.1-0.5份碱性蛋白酶,在50-60℃、pH值为8.5-10的条件下酶解1-4小时,降温至35-45℃,调节pH值至7.2-7.8,加入0.1-0.5份复合酶,在温度为35-45℃、pH值为7.2-7.8的条件下酶解1-5小时,然后灭酶活性,得到酶解液,所述复合酶为胰蛋白酶和梭菌蛋白酶按质量比为3:(1-5)的混合物;
(3)将酶解液以5000-20000转/分钟的转速离心,收集上清液,将上清液用0.05-0.5μm孔径的滤膜过滤,滤液采用截留分子量为1000-8000Da的超滤膜进行超滤,收集超滤后的滤液,将超滤后的滤液脱腥,将脱腥后的滤液减压浓缩至固形物含量为35-55%,冷冻干燥至干基含水量为3.4-3.7%,即得。
5.一种易吸收改善皮肤的胶原蛋白的制备工艺,其特征在于,包括以下步骤,所述份均为重量份:
(1)鱼皮去鳞、洗净,沥干,将鱼皮用质量为鱼皮质量3-10倍且质量分数为5-15%的异丙醇水溶液浸泡6-18小时,浸泡温度为25-35℃,取出鱼皮,沥干,放入质量为鱼皮质量2-8倍且质量分数为3-10%的氯化钠水溶液中浸泡3-15小时,浸泡温度为25-35℃,取出鱼皮,沥干,放入质量为鱼皮质量3-9倍且浓度为0.01-1mol/L的柠檬酸水溶液中浸泡3-9小时,浸泡温度为25-35℃,然后取出鱼皮,沥干备用;
(2)将鱼皮粉碎后过10-50目筛,得到鱼皮粉,取100-130份鱼皮粉,加入100-500份粒径为20目、温度为-40~-10℃的冰粉,混合后投入搅拌器中,以800-1500转/分钟的转速搅拌20-50分钟,停止搅拌,升温至50-60℃,调节pH值至6.8-7.2,加入0.05-0.5份中性蛋白酶,在50-60℃、pH值为6.8-7.2的条件下酶解1.5-4.5小时,调节pH值至8.5-10,加入0.1-0.5份碱性蛋白酶,在50-60℃、pH值为8.5-10的条件下酶解1-4小时,降温至35-45℃,调节pH值至7.2-7.8,加入0.1-0.5份复合酶,在温度为35-45℃、pH值为7.2-7.8的条件下酶解1-5小时,然后灭酶活性,得到酶解液,所述复合酶为胰蛋白酶和梭菌蛋白酶按质量比为3:(1-5)的混合物;
(3)将酶解液以5000-20000转/分钟的转速离心,收集上清液,将上清液用0.05-0.5μm孔径的滤膜过滤,滤液采用截留分子量为1000-8000Da的超滤膜进行超滤,收集超滤后的滤液,将超滤后的滤液脱腥,将脱腥后的滤液减压浓缩至固形物含量为35-55%,冷冻干燥至干基含水量为3.4-3.7%,向冷冻干燥所得产物中加入质量为产物质量0.0005-0.005倍的保鲜剂,混合均匀,即得。
6.根据权利要求5所述的易吸收改善皮肤的胶原蛋白的制备工艺,其特征在于,所述保鲜剂为红景天提取物和/或苍术提取物。
7.根据权利要求6所述的易吸收改善皮肤的胶原蛋白的制备工艺,其特征在于,所述红景天提取物的制备工艺如下:将红景天粉碎后过10-50目筛,取红景天粉末20-40g加入到200-400g质量分数为15-45%的乙醇水溶液中,在温度为55-85℃、转速为100-500转/分钟的条件下搅拌12-48小时,过50-200目筛,得到一次滤液和一次滤渣,将一次滤渣加入到80-150g质量分数为35-55%的乙醇水溶液中,在温度为45-75℃、转速为200-400转/分钟的条件下搅拌2-6小时,过50-200目筛,得到二次滤液和二次滤渣,合并一次滤液和二次滤液,加热蒸发浓缩至测定50℃时相对密度为1.45-1.47的浸膏,将浸膏减压干燥,得到红景天提取物。
8.根据权利要求6所述的易吸收改善皮肤的胶原蛋白的制备工艺,其特征在于,所述苍术提取物的制备工艺如下:将苍术粉碎后过10-50目筛,得到苍术粉,取80-120g苍术粉加入到1500-3000毫升质量分数为75-90%的乙醇水溶液中,升温至40-50℃,在40-50℃浸泡2-6小时,然后在40-50℃、以150-450转/分钟的转速搅拌4-12小时,过50-200目筛,得到一次滤液和一次滤渣,保留一次滤液,将一次滤渣加入到500-1000g水中,升温至60-80℃,在60-80℃、以200-500转/分钟的转速搅拌2-6小时,过100-300目筛,得到二次滤液和二次滤渣,合并一次滤液和二次滤液,加热蒸发浓缩至相对密度为1.35-1.37的浸膏,将浸膏减压干燥,得到苍术提取物。
9.根据权利要求1-5中任一项所述的易吸收改善皮肤的胶原蛋白的制备工艺,其特征在于,所述脱腥具体如下:向超滤后的滤液中加入质量为超滤后的滤液质量1-10%的活性炭,在35-50℃以50-200转/分钟的转速搅拌20-60分钟,然后过500-800目筛除去活性炭粉末,保留滤液即可。
10.一种易吸收改善皮肤的胶原蛋白,其特征在于,采用权利要求1-9中任一项所述易吸收改善皮肤的胶原蛋白的制备工艺制备而成。
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