CN110343749A - 一种检测pon1基因snp位点的引物组、引物组的设计方法及其应用 - Google Patents

一种检测pon1基因snp位点的引物组、引物组的设计方法及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种检测PON1基因SNP位点的引物组、引物组的设计方法及其应用，所述引物组的设计方法包括以下步骤：(1)以野生型基因为模板，设计扩增SNP位点的上游引物，所述SNP位点位于上游引物的3’端；(2)在所述上游引物的靠近3’端SNP位点的非SNP位点，突变至少一个碱基，使突变后的上游引物与野生型基因和突变型基因在突变碱基处均不互补；(3)依据设计的上游引物，选择下游引物，得到所述引物组。本发明的上游引物的3’端与突变型基因不互补匹配，同时在上游引物的靠近3’端SNP位点的非SNP位点突变至少一个碱基，使野生型基因和突变型基因不容易被同时扩增出条带，从而使得所述引物组可以成功区分野生型基因和突变型基因。

Description

一种检测PON1基因SNP位点的引物组、引物组的设计方法及其 应用
技术领域
本发明属于生物技术领域，涉及一种检测SNP位点的引物组、引物组的设计方法及其应用，尤其涉及一种检测PON1基因SNP位点的引物组、引物组的设计方法及其应用。
背景技术
PON1基因产物，即血清对氧磷酶，不仅在有机磷神经毒剂解毒中起重要作用，而且与动脉粥样硬化、冠心病和II型糖尿病等疾病有密切关系。PON1是氯吡格雷代谢过程中的一种限速酶，在氯吡格雷转化为有活性的硫醇的过程中起到重要作用。氯吡格雷可用于预防和治疗因血小板高聚集引起的心、脑和其他动脉循环障碍疾病，如近期发作的脑卒中、心肌梗死和确诊的外周动脉疾病。
目前，常用的基因分型方法主要有：1)基于凝胶电泳的基因分型技术，如：PCR反应结合限制性酶切片段长度多态性分析法(PCR-RFLP)、等位基因特异性扩增法等；2)基于荧光标记杂交反应的基因分型技术，如：寡核苷酸连接分析、焦磷酸DNA测序、直接杂合子测序、等位基因特异性引物延伸等；3)基因芯片技术。其中，基于凝胶电泳的基因分型技术和基于荧光标记杂交反应的基因分型技术都是在PCR扩增反应之后，采用不同的方法检测多态性位点，操作繁琐，检测周期长，检测结果准确度低，不能满足临床快速、高效、灵敏的检测要求。基因芯片技术通过将数以万计、乃至百万计的特定DNA片段作为基因探针，有规律地排列固定于硅片、玻片等支持物上，构成一个二维DNA探针阵列，利用芯片与标记的生物样品进行杂交，实现对样品的基因表达谱生物信息进行快速定性和定量分析。基因芯片技术由于高通量等优点在基因多态性检测中得到广泛应用，一次实验即可高通量检测所有待测样本的基因信息，简单、快速，但存在检测时条件难以控制、重复性差、准确性低、检测成本高昂、灵敏度较低等缺点，且现有的基因芯片大多仅能同时检测基因的1个基因型，能够同时检测2个基因型的研究较少。
Jadwiga Oczos等采用DNA测序技术进行PON1基因分型(PMID：22956172)，检测了PON1的多态性位点包括rs705380和rs854572，但所述方法步骤繁琐，成本较高，而且不能同时检测多个位点。
因此，开发一种特异性好、灵敏度高、成本低的同时检测2个PON1的SNP位点rs705380和rs854572的引物组、试剂盒与方法，为临床制定合理用药方案、确定最佳治疗剂量、避免和减少不良反应提供指导依据，具有广阔的应用前景和巨大的市场价值。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供了一种检测PON1基因SNP位点的引物组、引物组的设计方法及其应用，所述引物组特异性针对PON1基因上对氯吡格雷代谢有明显影响的rs705380-126C>G位点和rs854572 95325384C>G位点，可以区分野生型和突变型，实现了根据产物的电泳条带的数量和大小快速准确检测PON1基因的多态性的效果。
为达此目的，本发明采用以下技术方案：
第一方面，本发明提供了一种引物组的设计方法，所述方法包括以下步骤：
(1)以野生型基因为模板，设计扩增SNP位点的上游引物，所述SNP位点位于上游引物的3’端；
(2)在所述上游引物的靠近3’端的SNP位点的非SNP位点，突变至少一个碱基，使突变后的上游引物与野生型基因和突变型基因在突变碱基处均不互补；
(3)依据设计的上游引物，选择下游引物，得到所述引物组。
本发明中，通过在上游引物的靠近3’端SNP位点的非SNP位点突变至少一个碱基，使得野生型基因和突变型基因不易同时扩出条带，并且引物在3’端的SNP位点对于野生型基因和突变型基因的差异有利于通过PCR和琼脂糖凝胶电泳区分野生型基因和突变型基因。
本发明中，利用引物设计软件，选择与上游引物最佳配对的下游引物，控制引物长短以调节Tm值，并调整上下游引物之间的距离以便区分不同的PCR产物的大小，最终得到的引物组可用于多重PCR。
根据本发明，步骤(2)中对上游引物进行碱基突变，突变碱基的个数为至少一个，优选为1-5个，例如可以是1个、2个、3个、4个或5个，进一步优选为1-3个，最优选为最靠近3’端SNP位点的2个非SNP位点里的1-2个。
优选地，所述rs705380-126C>G位点的引物组的设计方法包括以下步骤：
(1)以野生型PON1基因为模板，设计扩增rs705380-126C>G位点的上游引物，所述rs705380-126C>G位点位于上游引物的3’端；
(2)在所述上游引物的靠近3’端rs705380-126C>G位点的非rs705380-126C>G位点，突变至少一个碱基，使突变后的上游引物与野生型PON1基因和突变型基因在突变碱基处均不互补；
(3)依据设计的上游引物，选择下游引物，得到所述rs705380-126C>G位点的引物组。
根据本发明，步骤(2)中对上游引物进行碱基突变，突变碱基的个数为至少一个，优选为1-5个，例如可以是1个、2个、3个、4个或5个，进一步优选为1个。
优选地，所述rs854572 95325384C>G位点的引物组的设计方法包括以下步骤：
(1)以野生型PON1基因为模板，设计扩增rs854572 95325384C>G位点的上游引物，所述rs854572 95325384C>G位点位于上游引物的3’端；
(2)在所述上游引物的靠近3’端rs854572 95325384C>G位点的非rs85457295325384C>G位点，突变至少一个碱基，使突变后的上游引物与野生型PON1基因和突变型基因在突变碱基处均不互补；
(3)依据设计的上游引物，选择下游引物，得到所述rs854572 95325384C>G位点的引物组。
根据本发明，步骤(2)中对上游引物进行碱基突变，突变碱基的个数为至少一个，优选为1-5个，例如可以是1个、2个、3个、4个或5个，进一步优选为1个。
第二方面，本发明提供了一种检测SNP位点的引物组，所述引物组采用如第一方面所述的方法设计得到。
优选地，所述引物组包括针对rs705380-126C>G位点的引物组和/或针对rs85457295325384C>G位点的引物组；
其中，针对rs705380-126C>G位点的上游引物如SEQ ID NO:1所示，针对rs85457295325384C>G位点的上游引物如SEQ ID NO:3所示；
SEQ ID NO:1所示的核酸序列为：
5’-CCCTCCCCGCCGGGACC-3’；
SEQ ID NO:3所示的核酸序列为：
5’-TGCCTCTGTACAACCATGAC-3’。
优选地，针对rs705380-126C>G位点的下游引物如SEQ ID NO:2所示，针对rs854572 95325384C>G位点的下游引物如SEQ ID NO:4所示；
SEQ ID NO:2所示的核酸序列为：
5’-CCCTCCCTTCCGCACCTTTT-3’；
SEQ ID NO:4所示的核酸序列为：
5’-CTCATAGCCACATTGGACACAGA-3’。
本发明中，特异性选择PON1基因上对氯吡格雷代谢有明显影响的rs705380-126C>G位点和rs854572 95325384C>G位点设计引物组，进行多重PCR，根据产物的电泳条带的数量和大小实现了快速准确检测PON1基因的多态性的效果，结果可靠稳定，操作简便。
本发明中，rs705380-126C>G位点的PCR产物为320bp，rs85457295325384C>G位点的PCR产物为588bp，长度相差悬殊，可以通过琼脂糖凝胶电泳进行区分。
第三方面，本发明提供了一种SNP位点检测试剂盒，所述试剂盒包括如第二方面所述的引物组。
优选地，所述试剂盒还包括Mg2+缓冲液、dNTPs、DNA聚合酶和去离子水。
优选地，所述试剂盒还包括阳性对照和/或阴性对照。
优选地，所述阳性对照为野生型质粒和/或突变型质粒。
优选地，所述突变型质粒同时含有至少两个SNP位点、优选为同时含有rs705380-126C>G位点和rs854572 95325384C>G位点。
本发明中，所述引物组是根据野生型基因进行设计的，上游引物的3’端与突变型质粒在rs705380-126C>G位点和rs854572 95325384C>G位点不互补匹配，在靠近3’端SNP位点的3个非SNP位点处增加突变位点，使得野生型基因和突变型基因不能同时扩出，因此在以野生型质粒为模板进行PCR扩增时可以得到扩增产物，而在以突变型质粒为模板进行PCR扩增，无法得到扩增产物。
优选地，所述野生型质粒的核酸序列如SEQ ID NO:5所示；
SEQ ID NO:5所示的核酸序列为：
上述SEQ ID NO:5的序列中加粗加下划线有阴影的碱基分别为rs705380-126C>G位点和rs854572 95325384C>G位点。
优选地，所述突变型质粒的核酸序列为SEQ ID NO:6所示；
SEQ ID NO:6所示的核酸序列为：
上述SEQ ID NO:6的序列中加粗加下划线有阴影的碱基分别为rs705380-126C>G位点和rs854572C>G位点。
优选地，所述阴性对照为去离子水。
第四方面，本发明提供了一种检测体系，所述检测体系包括如第二方面所述的引物组。
优选地，所述检测体系还包括Mg2+缓冲液、模板、dNTPs、DNA聚合酶和去离子水。
优选地，所述引物组中每条引物的终浓度为0.8-1.2pmol/μL，例如可以是0.8pmol/μL、0.9pmol/μL、1.0pmol/μL、1.1pmol/μL或1.2pmol/μL。
优选地，所述模板的终浓度为1.4-1.8ng/μL，例如可以是1.4ng/μL、1.5ng/μL、1.6ng/μL、1.7ng/μL或1。8ng/μL。
优选地，所述dNTPs的终浓度为0.8-1.2mM，例如可以是0.8mM、0.9mM、1.0mM、1.1mM或1.2mM。
优选地，所述DNA聚合酶的终浓度为0.1-0.3U/μL，例如可以是0.1U/μL、0.2U/μL或0.3U/μL。
优选地，检测体系还包括阳性对照和/或阴性对照。
优选地，所述阳性对照为野生型质粒和/或突变型质粒。
优选地，所述突变型质粒同时含有至少两个SNP位点、优选为同时含有rs705380-126C>G位点和rs854572 95325384C>G位点。
优选地，所述野生型质粒的核酸序列如SEQ ID NO:5所示。
优选地，所述突变型质粒的核酸序列为SEQ ID NO:6所示。
优选地，所述阴性对照为去离子水。
第五方面，本发明提供了一种基因多态性的判断方法，所述方法采用如第二方面所述的引物组、如第三方面所述的试剂盒或如第四方面所述的检测体系进行PCR扩增。
优选地，所述判断方法包括以下步骤：
采用检测SNP位点的引物组进行模板的PCR扩增，将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，根据电泳条带的数量判断基因多态性。
优选地，所述判断方法包括以下步骤：
采用如SEQ ID NO:1-4所示的引物组进行模板的PCR扩增，将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，根据电泳条带的数量判断基因多态性。
本发明中，由于SEQ ID NO:1-4所示的引物组是根据野生型PON1基因设计的，当电泳条带为两条、且条带大小约为320bp和588bp时，判断模板在rs705380-126C>G位点和rs854572 95325384C>G位点为野生型；当电泳条带为一条、且条带大小约为320bp时，判断模板存在rs854572 95325384C>G位点突变；当电泳条带为一条、且条带大小约为588bp时，判断模板存在rs705380-126C>G位点突变；当不存在大小约为320bp和588bp的两条电泳条带时，判断模板存在rs705380-126C>G位点和rs854572 95325384C>G位点突变。
第六方面，本发明提供了一种如第二方面所述的引物组、如第三方面所述的试剂盒或如第四方面所述的检测体系在制备药物和/或检测试剂中的应用。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
(1)本发明通过在上游引物的靠近3’端SNP位点处的3个非SNP位点突变至少一个碱基，使得野生型基因和突变型基因不易同时扩增出条带，并且引物在3’端的SNP位点对于野生型基因和突变型基因的差异有利于通过PCR和琼脂糖凝胶电泳区分野生型基因和突变型基因；
(2)本发明特异性选择PON1基因上对氯吡格雷代谢有明显影响的rs705380-126C>G位点和rs854572 95325384C>G位点设计引物组，进行多重PCR，根据产物的电泳条带数量和大小实现了快速准确检测PON1基因的多态性的效果，结果可靠稳定，操作简便。
附图说明
图1为采用实施例1的试剂盒的PCR反应体系、用SEQ ID NO:1-2的引物组扩增野生型质粒和突变型质粒，得到的扩增产物的琼脂糖凝胶电泳图，其中，WT-野生型质粒，Mut-突变型质粒，Negative-阴性对照；
图2为采用实施例1的试剂盒的PCR反应体系、用SEQ ID NO:3-4的引物组扩增野生型质粒和突变型质粒，得到的扩增产物的琼脂糖凝胶电泳图，其中，WT-野生型质粒，Mut-突变型质粒，Negative-阴性对照；
图3为采用实施例1的试剂盒的多重PCR反应体系、用SEQ ID NO:1-4的引物组扩增野生型质粒和突变型质粒，得到的扩增产物的琼脂糖凝胶电泳图，其中，WT-野生型质粒，Mut-突变型质粒，Negative-阴性对照。
具体实施方式
为进一步阐述本发明所采取的技术手段及其效果，以下结合实施例和附图对本发明作进一步地说明。可以理解的是，此处所描述的具体实施方式仅仅用于解释本发明，而非对本发明的限定。
实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道商购获得的常规产品。
实施例1组装试剂盒
1、引物设计
根据NCBI公布的PON1基因序列(参考序列号为NG_008779.2)，采用Primer5.0引物设计软件特异性设计针对rs705380-126C>G位点和rs85457295325384C>G位点的引物组，并在非SNP位点分别取代突变一个碱基，得到如SEQ ID NO:1-4所示的引物；
2、组装试剂盒
将设计好的引物组、阴性对照、阳性对照、10×PCR缓冲液(含Mg2+)、dNTPs、Taq酶、去离子水和说明书组装成试剂盒，其中，阴性对照为去离子水，阳性对照为野生型PON1质粒(SEQ ID NO:5)和同时含有rs705380-126C>G位点和rs854572 95325384C>G位点的突变型PON1质粒(SEQ ID NO:6)，SEQ ID NO:5-6采用常规DNA合成方法得到。
实施例2 PON1基因多态性检测
采用如下步骤，检测受检者PON1基因的多态性：
(1)外周血基因组DNA抽提
采用组织基因组DNA提取试剂盒(Qiagen，货号：69504)，按照常规DNA抽提纯化方法快速提取0.5mL受检者外周血中的基因组DNA；
(2)外周血基因组DNA的完整性鉴定
将提取的受检者外周血基因组DNA经琼脂糖凝胶电泳鉴定完整性，采用紫外分光光度计测定260nm与280nm处的光密度值，计算DNA的纯度与浓度，-20℃保存备用；
(3)PCR反应
将受检者外周血基因组DNA与阳性对照进行PCR反应，在实际应用中，可以根据实际情况选用单对引物进行一重PCR或两对引物进行多重PCR反应，为节省检测时间可以直接采用多重PCR，具体步骤如下：
采用如SEQ ID NO:1-4的引物组分别对受检者外周血基因组DNA、阳性对照和阴性对照进行多重PCR，反应产物经琼脂糖凝胶电泳进行检测；多重PCR的反应体系如表1所示，反应条件如表2所示；
表1
组分 终浓度
1×PCR缓冲液(含Mg<sup>2+</sup>) 1×
上游引物 1pmol/μL
下游引物 1pmol/μL
dNTPs 1mM
Taq酶 0.2U/μL
模板(1.6ng/μL) 1.6ng/μL
去离子水 补齐至25μL
表2
(4)PON1基因多态性的判定
将受检者外周血基因组DNA的扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，并与如图1-图3所示的阳性对照电泳图进行比较，分析受检者的PON1基因多态性，如表3所示，判定方法为：
当多重PCR产物的琼脂糖凝胶电泳条带为2条、且大小分别为320bp和588bp时，则基因型为rs705380-126C>G位点和rs854572 95325384C>G位点野生型；
当多重PCR产物的琼脂糖凝胶电泳条带为1条、且大小为588bp时，则基因型为rs705380-126C>G位点突变型；
当多重PCR产物的琼脂糖凝胶电泳条带为1条、且大小为320bp时，则基因型为rs854572 95325384C>G位点突变型；
当多重PCR产物的琼脂糖凝胶电泳在320bp和588bp处无条带时，则基因型为rs705380-126C>G位点和rs854572 95325384C>G位点同时突变型。
PON1的rs705380-126C>G位点检测：PON1的rs705380-126C>G位点突变可能导致氯吡格雷用药后出血事件，当此位点等位基因中存在≥1个野生型即为正常，因此，只有当PON1的rs705380-126C>G位点检测不出野生型时，可判定为rs705380-126C>G位点突变型；
PON1的rs854572 95325384C>G位点检测：PON1的rs854572 95325384C>G位点突变将发生氯吡格雷抵抗，当此位点等位基因中存在≥1个野生型即为正常，因此，只有当PON1的rs854572 95325384C>G位点检测不出野生型时，可判定为rs854572 95325384C>G突变型。
表3多重PCR结果判定
多态性类型 PCR产物条带数 PCR产物大小(bp)
野生型 2 320，588
rs705380突变型 1 588
rs854572突变型 1 320
rs705380和rs854572同时突变型 0 /
此外，由于不同引物对之间的相互作用，可能出现非特异性扩增条带，但可以根据条带大小进行去除，不影响多态性位点的检测结果，也不影响实验的可靠性。
综上所述，本发明通过在上游引物的非SNP位点突变至少一个碱基，使得野生型基因和突变型基因不易同时扩增出条带，并且引物在3’端的SNP位点对于野生型基因和突变型基因的差异有利于通过PCR和琼脂糖凝胶电泳区分野生型基因和突变型基因；本发明特异性选择PON1基因上对氯吡格雷代谢有明显影响的rs705380-126C>G位点和rs85457295325384C>G位点设计引物组，进行多重PCR，根据产物的电泳条带数量和大小实现了快速准确检测PON1基因的多态性的效果，结果可靠稳定，操作简便。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的详细方法，但本发明并不局限于上述详细方法，即不意味着本发明必须依赖上述详细方法才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
SEQUENCE LISTING
<110> 苏州泓迅生物科技股份有限公司
<120> 一种检测PON1基因SNP位点的引物组、引物组的设计方法及其应用
<130> 20190520
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<170> PatentIn version 3.3
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aggtgcctag tccagtcggg gaggggaaat caaacaagct gaagtaaatt gccatgggaa 240
aggacagtca agctttggtg agcactcact ttgtgccatc ccggtccttg cgtctcagag 300
agattcagta gcttgatcat ggtgacagcc aaaaaggtgc ggaagggagg gctgtagtag 360
gaacccctaa gatctaactg ttctcaccag gctactactc tgtgtcacct tccaacatct 420
ggatttcaag catttttctc tcaacaccac tctgacttta gagttcactc aagtacatcc 480
cccacacagc tcattcattt cctcatgcag ctggcattta ttgagtacct actatgtgcc 540
aggcgctgtt ctagatgcta cagaacagga caaaacgtct tcctcaagct tacgttcatt 600
ccaatggggg agtcaattga gaaatcagca aaacatgtca ctgtggcata tatggggcat 660
ttgagtaaag acccaaagga ggtgcctctg tacaaccatg tctctcttct ctgctgtctg 720
ctgttactgt gaatgatttg ctccatgtct ctttccttct caaggctttt ggtcccagtt 780
ataccttctc tcttctgcaa tatctgtcct ttcatctctt gtggaatatt gccagccaat 840
accaacatgc tttacttatc acctttagct ttctgggggg aagcttcttt ggcctcacat 900
tgtaactact gccctctctc tctgctcctt ctgaacactt gctcttaagc cttgagctac 960
tatgtaaaaa acctgaccac tccactggag cattcacatg aaaggccatg aacatatgga 1020
gagggaaagt ggtcagctga agccaacctc ttaaccatcg gcaccaagga agcagaaatg 1080
aatgaagtgg gctattagac aagcccagcc accacagcct ggccaccaac tgaataccac 1140
tggctaagcc accctggtta acaccaggtg gagcagaaga atctacctaa gaagtagaac 1200
caatgaatcc aaaagagaag agtattcgaa aagaggggga atgatgatct gtgtccaatg 1260
tggctatgag ttgagtatgc ttatggcaga gaagtaacta ct 1302
<210> 6
<211> 1302
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 6
ccctgctggg gcagcgccga ttggcccgcc ccgcccctcc ccgccgggtc ggcagctagc 60
tgggccgacc aggtgcacag aaggcgcggc ttgcggtcag cccccaccgc aggagctcag 120
cactttcagc caaaagtccc attttgctcc ttccaactgt aaagagagaa gacagagaat 180
aggtgcctag tccagtcggg gaggggaaat caaacaagct gaagtaaatt gccatgggaa 240
aggacagtca agctttggtg agcactcact ttgtgccatc ccggtccttg cgtctcagag 300
agattcagta gcttgatcat ggtgacagcc aaaaaggtgc ggaagggagg gctgtagtag 360
gaacccctaa gatctaactg ttctcaccag gctactactc tgtgtcacct tccaacatct 420
ggatttcaag catttttctc tcaacaccac tctgacttta gagttcactc aagtacatcc 480
cccacacagc tcattcattt cctcatgcag ctggcattta ttgagtacct actatgtgcc 540
aggcgctgtt ctagatgcta cagaacagga caaaacgtct tcctcaagct tacgttcatt 600
ccaatggggg agtcaattga gaaatcagca aaacatgtca ctgtggcata tatggggcat 660
ttgagtaaag acccaaagga ggtgcctctg tacaaccatg tgtctcttct ctgctgtctg 720
ctgttactgt gaatgatttg ctccatgtct ctttccttct caaggctttt ggtcccagtt 780
ataccttctc tcttctgcaa tatctgtcct ttcatctctt gtggaatatt gccagccaat 840
accaacatgc tttacttatc acctttagct ttctgggggg aagcttcttt ggcctcacat 900
tgtaactact gccctctctc tctgctcctt ctgaacactt gctcttaagc cttgagctac 960
tatgtaaaaa acctgaccac tccactggag cattcacatg aaaggccatg aacatatgga 1020
gagggaaagt ggtcagctga agccaacctc ttaaccatcg gcaccaagga agcagaaatg 1080
aatgaagtgg gctattagac aagcccagcc accacagcct ggccaccaac tgaataccac 1140
tggctaagcc accctggtta acaccaggtg gagcagaaga atctacctaa gaagtagaac 1200
caatgaatcc aaaagagaag agtattcgaa aagaggggga atgatgatct gtgtccaatg 1260
tggctatgag ttgagtatgc ttatggcaga gaagtaacta ct 1302

Claims (10)

1.一种引物组的设计方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)以野生型基因为模板，设计扩增SNP位点的上游引物，所述SNP位点位于上游引物的3’端；
(2)在所述上游引物的靠近3’端SNP位点的非SNP位点，突变至少一个碱基，使突变后的上游引物与野生型基因和突变型基因在突变碱基处均不互补；
(3)依据设计的上游引物，选择下游引物，得到所述引物组。
2.根据权利要求1所述的设计方法，其特征在于，所述rs705380-126C>G位点的引物组的设计方法包括以下步骤：
(1)以野生型PON1基因为模板，设计扩增rs705380-126C>G位点的上游引物，所述rs705380-126C>G位点位于上游引物的3’端；
(2)在所述上游引物的靠近3’端rs705380-126C>G位点的非rs705380-126C>G位点，突变至少一个碱基，使突变后的上游引物与野生型PON1基因和突变型基因在突变碱基处均不互补；
(3)依据设计的上游引物，选择下游引物，得到所述rs705380-126C>G位点的引物组。
3.根据权利要求1所述的设计方法，其特征在于，所述rs85457295325384C>G位点的引物组的设计方法包括以下步骤：
(1)以野生型PON1基因为模板，设计扩增rs854572 95325384C>G位点的上游引物，所述rs854572 95325384C>G位点位于上游引物的3’端；
(2)在所述上游引物的靠近3’端rs854572 95325384C>G位点的非rs85457295325384C>G位点，突变至少一个碱基，使突变后的上游引物与野生型PON1基因和突变型基因在突变碱基处均不互补；
(3)依据设计的上游引物，选择下游引物，得到所述rs854572 95325384C>G位点的引物组。
4.一种检测SNP位点的引物组，其特征在于，所述引物组采用如权利要求1-3任一项所述的方法设计得到。
5.根据权利要求4所述的引物组，其特征在于，所述引物组包括针对rs705380-126C>G位点的引物组和/或针对rs854572 95325384C>G位点的引物组；
其中，针对rs705380-126C>G位点的上游引物如SEQ ID NO:1所示，针对rs85457295325384C>G位点的上游引物如SEQ ID NO:3所示。
6.根据权利要求5所述的引物组，其特征在于，针对rs705380-126C>G位点的下游引物如SEQ ID NO:2所示，针对rs854572 95325384C>G位点的下游引物如SEQ ID NO:4所示。
7.一种SNP位点检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如权利要求4-6任一项所述的引物组；
优选地，所述试剂盒还包括Mg2+缓冲液、dNTPs、DNA聚合酶和去离子水；
优选地，所述试剂盒还包括阳性对照和/或阴性对照；
优选地，所述阳性对照为野生型质粒和/或突变型质粒；
优选地，所述突变型质粒同时含有至少两个SNP位点、优选为同时含有rs705380-126C>G位点和rs854572 95325384C>G位点；
优选地，所述野生型质粒的核酸序列如SEQ ID NO:5所示；
优选地，所述突变型质粒的核酸序列为SEQ ID NO:6所示；
优选地，所述阴性对照为去离子水。
8.一种检测体系，其特征在于，所述检测体系包括如权利要求4-6任一项所述的引物组；
优选地，所述检测体系还包括Mg2+缓冲液、模板、dNTPs、DNA聚合酶和去离子水；
优选地，所述引物组中每条引物的终浓度为0.8-1.2pmol/μL；
优选地，所述模板的终浓度为1.4-1.8ng/μL；
优选地，所述dNTPs的终浓度为0.8-1.2mM；
优选地，所述DNA聚合酶的终浓度为0.1-0.3 U/μL；
优选地，检测体系还包括阳性对照和/或阴性对照；
优选地，所述阳性对照为野生型质粒和/或突变型质粒；
优选地，所述突变型质粒同时含有至少两个SNP位点、优选为同时含有rs705380-126C>G位点和rs854572 95325384C>G位点；
优选地，所述野生型质粒的核酸序列如SEQ ID NO:5所示；
优选地，所述突变型质粒的核酸序列为SEQ ID NO:6所示；
优选地，所述阴性对照为去离子水。
9.一种基因多态性的判断方法，其特征在于，所述方法采用如权利要求4-6任一项所述的引物组、如权利要求7所述的试剂盒或如权利要求8所述的检测体系进行PCR扩增；
优选地，所述判断方法包括以下步骤：
采用检测SNP位点的引物组进行模板的PCR扩增，将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，根据电泳条带的数量判断基因多态性；
优选地，所述判断方法包括以下步骤：
采用如SEQ ID NO:1-4所示的引物组进行模板的PCR扩增，将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，根据电泳条带的数量判断基因多态性。
10.一种如权利要求4-6任一项所述的引物组、如权利要求7所述的试剂盒或如权利要求8所述的检测体系在制备药物和/或检测试剂中的应用。
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