CN110339166B - 一种利拉鲁肽多囊脂质体及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及医药领域，尤其涉及一种利拉鲁肽多囊脂质体及其制备方法。本发明提供的利拉鲁肽多囊脂质体中包括：利拉鲁肽、膜材、渗透压调节剂、稳定剂。本发明所制备的利拉鲁肽多囊脂质体稳定性好，药物包封率高，载药量大，释药速率缓慢平稳，无突释现象，且显著提高了药物的生物利用度。从而提高了疗效、降低了药物剂量相关性毒副作用，降低了用药成本，具有较大应用价值。实验表明，本发明提供的脂质体体外可持续恒速释药近432小时，体内可提供平稳的血药浓度，体内滞留时间较其注射液相比显著延长，呈现明显的缓释制剂的药动学特征，可提供正常平稳血糖水平，降血糖作用达312小时，与注射剂的相对生物利用度为661％。

Description

一种利拉鲁肽多囊脂质体及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及医药领域，尤其涉及一种利拉鲁肽多囊脂质体及其制备方法和应用。
背景技术
糖尿病已成为危害人类生命的第三大杀手，是全球性的流行性疾病。据WHO估计，到2050年，全世界糖尿病患者的数量将达到3亿。糖尿病是一组以胰岛素分泌缺陷和/或胰岛素作用障碍所致以高血糖为特征的代谢性疾病。糖尿病的慢性高血糖状态与长期并发症显著相关，即众多器官的损害、功能障碍和功能衰竭，特别是肾脏、眼、神经、心脏和血管等，严重者可引起是水，电解质紊乱和酸碱平衡失调等急性并发症酮症酸中毒和高渗昏迷。因此，研究开发高效长效新型糖尿病治疗药物具有重要的社会意义和经济价值。
利拉鲁肽(Liraglutide)是丹麦诺和诺德公司开发的胰高血糖素GLP-1(7～37)类似物，作为治疗2型糖尿病的新药，于2010年1月25日被FDA批准在美国上市。利拉鲁肽与人体天然GLP-1具有97％的同源性，其结构仅对GLP-1做了如下两个部分的修饰：即34位赖氨酸被精氨酸取代，26位赖氨酸上增加了谷氨酸介导的16个碳的棕榈酸侧链。这种结构修饰不仅使利拉鲁肽保留了GLP-1的生物活性，又避免了被DPP-4酶降解，与传统胰岛素注射液相比，利拉鲁肽具有长效性。
利拉鲁肽具有以下药理作用：(1)葡萄糖浓度依赖性促胰岛素分泌；(2)抑制餐后胰高血糖素的分泌，减少肝糖的释放；(3)增强胰岛素的敏感性；(4)减缓胃的排空；(5)抑制食欲,减轻体重。(6)修复胰岛β细胞；(7)保护心血管。
利拉鲁肽促胰岛素分泌和抑制胰高血糖素分泌作用具有血糖浓度依赖性，故当血糖水平正常时，持续给予利拉鲁肽并不会引起低血糖，由此可见利拉鲁肽不仅可以使患者血糖维持正常水平，且能够一定程度修复胰岛β细胞，对于糖尿病并发症也有一定疗效，是当前先进的糖尿病治疗药物。
当前诺和诺德公司研发的市售利拉鲁肽注射剂
Figure GDA0003520926370000021
为皮下注射给药每日注射一次的注射液，该注射剂已被证实在改善血糖控制及减轻体重方面具有良好的效果。虽然利拉鲁肽具有较长的体内半衰期(12-14小时)，但对于糖尿病这种需长期治疗，控制血糖水平的疾病，利拉鲁肽注射剂仍然存在需减少给药次数，提高患者给药依从性的改善需求。
为此，为降低利拉鲁肽的注射频次，人们开始研究开发其缓释长效给药剂型。在研阶段的长效剂型主要为利拉鲁肽与PLGA、PLA等合成高分子的微球制剂(CN102085355A，CN104382860A)，然而，聚合物微球制剂普遍存在突释效应(Sheikh Hasan,A.,et al.,Reduction of the in vivo burst release of insulin-loadedmicroparticles.Journal of Drug Delivery Science and Technology,2015.30,PartB:p.486-493.)、且长期滞留体内会产生炎症反应、导致机体免疫反应(Anderson,J.M.andM.S.Shive,Biodegradation and biocompatibility of PLA and PLGAmicrospheres.Advanced Drug Delivery Reviews,2012.64,Supplement(0):p.72-82.)，此外，聚合物降解产生的酸性环境会促进多肽蛋白类药物变性、活性下降等问题(Jiskoot,W.,et al.,Protein Instability and Immunogenicity:Roadblocks to ClinicalApplication of Injectable Protein Delivery Systems for SustainedRelease.Journal of Pharmaceutical Sciences,2012.101(3):p.946-954)。
多囊脂质体(Multivesicularliposome,MVLs)是由多个非同心药物水溶液小囊泡组成，这些囊泡被连续的非同心类脂质双分子层所分隔，对于水溶性药物具有较高的包封率。特别是多囊脂质体是通过破裂的囊泡释放药物，而完整的囊泡仍然保持原状。多囊脂质体这种非同心圆的拓扑结构，使其在注射部位形成“储库”，随着类脂质双分子层的不断降解，包封于其中的药物逐步释放，产生良好的缓释效果，同时又避免了突释效应，还可通过调整制备处方和工艺参数，获得控制药物释放时间从几天到数周的效果。MVLs作为药物传递***已被FDA批准，***多囊脂质体(DepoMorphinTM)已于2004年在美国上市。
制备过程中，多囊脂质体的处方组成及制备工艺对药物包封率、释放时间、特别是多囊脂质体的物理稳定性有显著影响。多囊脂质体由于粒径较大，贮存过程中容易出现沉降和聚集，制备过程中使用了有机溶剂，对蛋白多肽类药物易出现失活问题等，因此提高多囊脂质体的聚集稳定性和药物稳定性仍然是开发多囊脂质体制剂的亟待解决的问题。
发明内容
有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种利拉鲁肽多囊脂质体及其制备方法和应用，本发明提供的利拉鲁肽多囊脂质体具有良好的缓释性和长效性，且具有良好的稳定性和生物利用度。
本发明提供的利拉鲁肽多囊脂质体包括以下质量份的：
Figure GDA0003520926370000031
本发明提供的一种利拉鲁肽多囊脂质体，通过选用高生物相容性的磷脂等作为基本膜材，使其滞留体内不易产生炎症反应。所制得的脂质体具有较高的包封率和稳定的释药速率，成功避免突释效应。并且，本发明提供的多囊脂质体还可以避免利拉鲁肽在体内易发生降解的问题，延长了药物在体内的循环时间，取得了显著提高生物利用度的效果。
本发明中，利拉鲁肽多囊脂质体包括以下质量份的：
Figure GDA0003520926370000032
本发明中，膜材包括磷脂、胆固醇和甘油三酯，磷脂、胆固醇和甘油三酯的质量比为(46.8～342.3)：(28.0～100.5)：(8.6～191.0)。
本发明中，磷脂选自卵磷脂(EPC)、大豆磷脂(SPC)、脑磷脂、二油酰基磷脂酰胆碱(DOPC)、氢化大豆磷脂(HSPC)、二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(DMPC)、二油酰磷脂酰胆碱(DOPC)、二硬脂酰磷脂酰甘油(DSPG)、二棕榈酰磷脂酰甘油(DPPG)、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油(DMPG)、二油酰磷脂酰甘油(DOPG)或磷脂酰乙醇胺(DOPE)。
在一些实施例中，磷脂选自大豆磷脂、氢化大豆磷脂、二油酰磷脂酰胆碱、蛋黄卵磷脂、二油酰磷脂酰胆碱或二棕榈酰磷脂酰甘油。
DPPG、DSPG为增加膜负电荷的物质，能够以增加脂质体的稳定性。
甘油三酯是多囊脂质体形成的重要组分，其在多囊脂质体起支撑其结构的作用。所述的甘油三酯可以是天然的和合成的。本发明中所述的甘油三酯选自三油酸甘油酯、三辛酸甘油酯、大豆油中的至少一种，优选三油酸甘油酯。
本发明提供利拉鲁肽多囊脂质体的膜材中，甘油三酯的摩尔百分比为5％～50％。
本发明提供利拉鲁肽多囊脂质体的膜材中，磷脂与胆固醇的质量比为(0.5～20)：1。
本发明中，利拉鲁肽与膜材的的质量比为1：(1～100)。
一些实施例中，利拉鲁肽与膜材的的质量比为1：(1.44～92.35)。
本发明中，渗透压调节剂选自赖氨酸、组氨酸、蔗糖、葡萄糖、右旋糖酐、甘油、甘露醇或山梨醇。
一些实施例中，渗透压调节剂选自组氨酸、赖氨酸、葡萄糖或蔗糖。
本发明提供的利拉鲁肽多囊脂质体包含稳定剂，本发明中所述的“稳定剂”是指可提高药物的体内外稳定性，延长药物体内半衰期的药剂学中可接受的辅料。
本发明中，稳定剂选自人血白蛋白、牛血白蛋白、胶原蛋白、明胶或水解明胶。
一些实施例中，本发明提供的利拉鲁肽多囊脂质体中稳定剂选自人血白蛋白、牛血白蛋白、水解明胶或明胶。
本发明中，利拉鲁肽与稳定剂与的质量比为1：(0.3～2.5)。
一些实施例中，利拉鲁肽与稳定剂与的质量比为1：(0.34～2.42)。
在一些实施例中，磷脂为大豆卵磷脂；甘油三酯为三油酸甘油酯；其中，大豆卵磷脂、胆固醇和甘油三酯的质量比为201.1:90.2:125。
在此实施例中，利拉鲁肽与膜材的质量比为1:41.62。
作为优选，稳定剂为人血白蛋白；利拉鲁肽与稳定剂的质量比为1:1.6。
作为优选，渗透压调节剂为蔗糖与赖氨酸的混合物，其中，赖氨酸与蔗糖的质量比为15:1；利拉鲁肽与渗透压调节剂的质量比为1:67.2。
在一些实施例中，磷脂为氢化大豆磷脂；甘油三酯为三油酸甘油酯；膜材中，氢化大豆磷脂、胆固醇和甘油三酯的质量比为203:96:121。
在此实施例中，利拉鲁肽与膜材的质量比为1:42.1。
作为优选，稳定剂为人血白蛋白；利拉鲁肽与稳定剂的质量比为1:2。
作为优选，渗透压调节剂为蔗糖与赖氨酸的混合物，其中，蔗糖与赖氨酸的质量比为15：1；利拉鲁肽与渗透压调节剂的质量比为1:67.2。
在一些实施例中，磷脂为二油酰磷脂酰胆碱；甘油三酯为三油酸甘油酯；膜材中，二油酰磷脂酰胆碱、胆固醇和甘油三酯的质量比为196.8:99.4:126.1。
在此实施例中，利拉鲁肽与膜材的质量比为1:42.2。
作为优选，稳定剂为人血白蛋白；利拉鲁肽与稳定剂的质量比为1:1.8。
作为优选，渗透压调节剂为蔗糖与赖氨酸的混合物，其中，蔗糖与赖氨酸的质量比为17.4：1；利拉鲁肽与渗透压调节剂的质量比为1:180.4。
在一些实施例中，磷脂为大豆磷脂；甘油三酯为三油酸甘油酯；膜材中，大豆磷脂、胆固醇和甘油三酯的质量比为202.1:98:122.6。
在此实施例中，利拉鲁肽与膜材的质量比为1:7.7。
作为优选，稳定剂为人血白蛋白；利拉鲁肽与稳定剂的质量比为1:1.6。
作为优选，渗透压调节剂为蔗糖与赖氨酸的混合物，其中，蔗糖与赖氨酸的质量比为15:1；利拉鲁肽与渗透压调节剂的质量比为1:12.2。
在一些实施例中，磷脂为大豆磷脂；甘油三酯为三油酸甘油酯；膜材包括大豆磷脂、胆固醇、甘油三酯和DPPG，其中，大豆磷脂、胆固醇、甘油三酯和DPPG的质量比为210.5:95：128.5：44.2。
在此实施例中，利拉鲁肽与膜材的质量比为1:7.4。
作为优选，稳定剂为人血白蛋白；利拉鲁肽与稳定剂的质量比为1:2.3。
作为优选，渗透压调节剂为蔗糖与赖氨酸的混合物，其中，蔗糖与赖氨酸的质量比为12.5:1；利拉鲁肽与渗透压调节剂的质量比为1:26.3。
在一些实施例中，磷脂为大豆磷脂；甘油三酯为三油酸甘油酯；膜材中，大豆磷脂、胆固醇和甘油三酯的质量比为199:90.5:187。
在此实施例中，利拉鲁肽与膜材的质量比为1:42.2。
作为优选，稳定剂为牛血白蛋白；利拉鲁肽与稳定剂的质量比为1:2.1。
作为优选，渗透压调节剂为蔗糖与组氨酸的混合物，作为优选，渗透压调节剂为葡萄糖、蔗糖与组氨酸的混合物，其中，葡萄糖、蔗糖与组氨酸的质量比为100:980:112；利拉鲁肽与渗透压调节剂的质量比为1:105.5。
在一些实施例中，磷脂为大豆磷脂；甘油三酯为三油酸甘油酯；膜材中，大豆磷脂、胆固醇和甘油三酯的质量比为260.3:100.5:191。
在此实施例中，利拉鲁肽与膜材的质量比为1:30.3。
作为优选，稳定剂为明胶；利拉鲁肽与稳定剂的质量比为1:2.4。
作为优选，渗透压调节剂为蔗糖与组氨酸的混合物，其中，蔗糖与组氨酸的质量比为12.3:1；利拉鲁肽与渗透压调节剂的质量比为1:158.0。
在一些实施例中，磷脂为大豆磷脂；甘油三酯为三油酸甘油酯；膜材中，大豆磷脂、胆固醇和甘油三酯的质量比为220:88.5:126。
在此实施例中，利拉鲁肽与膜材的质量比为1:14.3。
作为优选，稳定剂为人血白蛋白；利拉鲁肽与稳定剂的质量比为1:2.2。
作为优选，渗透压调节剂为蔗糖与组氨酸的混合物，其中，蔗糖与组氨酸的质量比为16.3:1；利拉鲁肽与渗透压调节剂的质量比为1:34.2。
在一些实施例中，磷脂为大豆磷脂；甘油三酯为三油酸甘油酯；膜材中，大豆磷脂、胆固醇和甘油三酯的质量比为220:95:156。
在此实施例中，利拉鲁肽与膜材的质量比为1:92.4。
作为优选，稳定剂为牛血白蛋白；利拉鲁肽与稳定剂的质量比为1:2.4。
作为优选，渗透压调节剂为蔗糖与组氨酸的混合物，其中，蔗糖与组氨酸的质量比为13.1：1；利拉鲁肽与渗透压调节剂的质量比为1:265.8。
在一些实施例中，磷脂为大豆磷脂；膜材包括大豆磷脂、胆固醇、三辛酸甘油酯、油酸；其中，大豆磷脂、胆固醇、三辛酸甘油酯、油酸的质量比为220:76.5:122.3:25.6。
在此实施例中，利拉鲁肽与膜材的质量比为1:31.3。
作为优选，稳定剂为人血白蛋白；利拉鲁肽与稳定剂的质量比为1:2.1。
作为优选，渗透压调节剂为蔗糖与组氨酸的混合物，其中，蔗糖与组氨酸的质量比为18:1；利拉鲁肽与渗透压调节剂的质量比为1:93.7。
在一些实施例中，磷脂为大豆磷脂；膜材中，大豆磷脂、胆固醇和三油酸甘油酯的质量比为220:76.5:55.3。
在此实施例中，利拉鲁肽与膜材的质量比为1:6.5。
作为优选，稳定剂为水解明胶；利拉鲁肽与稳定剂的质量比为1:1.9。
作为优选，渗透压调节剂为蔗糖与组氨酸的混合物，其中，蔗糖与组氨酸的质量比为13.3:1；利拉鲁肽与渗透压调节剂的质量比为1：22.3。
在一些实施例中，磷脂为DOPC；膜材包括DOPC、DPPG、胆固醇、甘油三酯；其中，DOPC、DPPG、胆固醇、甘油三酯的质量比为36.6:10.2:28:8.6。
在此实施例中，利拉鲁肽与膜材的质量比为1:1.4。
作为优选，稳定剂为人血白蛋白；利拉鲁肽与稳定剂的质量比为1:0.34。
作为优选，渗透压调节剂为蔗糖与组氨酸的混合物，其中，蔗糖与组氨酸的质量比为15:1；利拉鲁肽与渗透压调节剂的质量比为1:23.1。
在一些实施例中，磷脂为蛋黄卵磷脂；膜材中，蛋黄卵磷脂、胆固醇和甘油三酯的质量比为183.6:70.7:61.1。
在此实施例中，利拉鲁肽与膜材的质量比为1:7.0。
作为优选，稳定剂为人血白蛋白；利拉鲁肽与稳定剂的质量比为1:2.0。
作为优选，渗透压调节剂为蔗糖与组氨酸的混合物，其中，蔗糖与组氨酸的质量比为13.3:1；利拉鲁肽与渗透压调节剂的质量比为1:26.9。
实验表明，采用本发明提供的组方及制备方法制备的利拉鲁肽多囊脂质体具有良好的稳定性和生物利用度，其粒径大小适宜、载药量和包封率皆较高。并且，能够提高药物在体内的滞留时间，生物利用度较普通注射液提高近6倍。而实验过程中也发现，一些不良组方或不恰当的制备方法会导致脂质体的形状会出现变化，有时不能形成完整的脂质体，有时会有很多油滴。
本发明制备的利拉鲁肽多囊脂质体为多囊脂质体。
本发明提供的利拉鲁肽多囊脂质体的制备方法包括：
步骤1：将膜材溶于有机溶剂作为油相；将稳定剂、渗透压调节剂和利拉鲁肽溶于水作为内水相；将渗透压调节剂溶于水作为外水相；
步骤2：使内水相与油相形成W/O一级乳；
步骤3：使所述一级乳与外水相形成W/O/W复乳；
步骤4：干燥复乳，制得利拉鲁肽多囊脂质体。
本发明中，步骤1中有机溶剂选自***、二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯或环己烷。
在一些实施例中，步骤1中的有机溶剂选自***、氯仿或环己烷。
在一些实施例中，油相中膜材的浓度为10mg/ml～400mg/ml。
在一些实施例中，油相中磷脂浓度为5～100mg/ml，胆固醇浓度为3～50mg/ml，甘油三酯浓度为1～95mg/ml。
本发明中，内水相的制备方法为：将稳定剂搅拌溶解于水中，加入渗透压调节剂使溶解，加入利拉鲁肽使溶解。
在一些实施例中，内水相中稳定剂的浓度为5～100mg/ml；利拉鲁肽的浓度为1～100mg/ml；渗透压调节剂的质量分数为4％～10％。
在一些实施例中，外水相中渗透压调节剂的质量分数为4％～10％。
作为优选，内水相中渗透压调节剂为葡萄糖或蔗糖，质量分数为7％；外水相中渗透压调节剂为蔗糖与组氨酸或蔗糖与赖氨酸的混合物，其中蔗糖的质量分数为7％；赖氨酸或组氨酸的浓度为2mg/mL～8mg/mL。
本发明中，内水相与油相的体积比为1：(0.8～10)。步骤2中制备一级乳的方法为将内水相滴加至油相中，乳化的方法采用本领域的常规技术，可以采用机械搅拌、涡旋、超声、高速分散机、高压均质机、微射流高压均质机等药剂学中可采用的方法进行乳化。
本发明中，一级乳与外水相的体积比为1：(1～4)。步骤3中制备复乳的方法为：外水相在搅拌条件下，将一级乳剂滴加入外水相，乳化的方法采用本领域的常规技术，可采用选自机械搅拌、超声乳化、机械高速剪切乳化、高压均质等方法。
本发明中，干燥复乳即为除去复乳中有机溶剂的过程，其中，除去有机溶剂的方法为领域的常规溶剂去除方法，如常压挥发、气流吹拂蒸发有机溶剂、减压干燥或喷雾干燥等，优选的方法是先用惰性气体气流吹干、再用旋转蒸发仪进一步除去残留的有机溶剂。
本发明中，步骤4之后还包括洗涤的步骤。
所述洗涤为通过用等渗溶液洗涤除去未包封的游离药物。其中，用等渗溶液洗涤的方法可以是本领域常规的方法，可用等渗溶液作为洗涤液，采用离心、透析或膜过滤的方法去除其中的游离药物和外水相中的溶质，然后在用等渗的溶液悬浮至所需的药物浓度的利拉鲁肽多囊脂质体。本发明中，所述的“等渗溶液”是指渗透压等于血浆或皮下、肌肉注射可耐受的渗透压，较佳的为氯化钠或蔗糖或葡萄糖的水溶液。
本发明提供的利拉鲁肽多囊脂质体能够用于制备治疗和/或预防糖尿病的药物。
本发明还提供了一种治疗和/或预防糖尿病的药物其中包括本发明提供的利拉鲁肽多囊脂质体。
本发明提供的制备脂质体的方法也适用于胰高血糖素样肽(GLP-1)类降糖药包括艾塞那肽(Exenatide)。
本发明提供的用于治疗和/或预防糖尿病的药物的剂型为注射剂。其给药方式为皮下注射、肌肉注射、硬膜外注射或鞘内注射，优选皮下注射和肌肉注射。
根据本发明，所述的药物活性成分利拉鲁肽为化合物利拉鲁肽，与其来源和制备方法无关，其可以是基因重组来源、也可以是化学合成来源或半合成来源。其实施皆在本发明的保护范围之内。
本发明提供的利拉鲁肽多囊脂质体中包括：利拉鲁肽、膜材、渗透压调节剂、稳定剂。相比于现有技术，本发明的显著效果如下：
(1)本发明所制备的利拉鲁肽多囊脂质体稳定性良好，药物包封率高，载药量大，释药速率缓慢平稳，无突释现象，特别是成功避免了利拉鲁肽注射液易发生的体内药物降解问题；实验表明，本发明提供的脂质体的粒径多为5～30μm；包封率不低于75％，载药量不低于2％；其释放效果稳定、可持续释药168-336小时以上。
(2)本发明提供的脂质体能够降低体内蛋白降解酶对利拉鲁肽的作用，提高了药物的体内外稳定性，同时，本发明提供的脂质体还减缓了药物的释放和吸收，延长了药物体内循环时间。故而本发明所制备的利拉鲁肽多囊脂质体显著提高了药物的生物利用度。从而提高了疗效、降低了药物剂量相关性毒副作用，降低了用药成本，具有较大应用价值。实验表明，本发明提供的脂质体大鼠皮下注射给药血药浓度稳定，在体内持续释药达336小时，体内滞留时间较利拉鲁肽注射剂显著延长(分别为163.4小时和13.9小时)，呈现明显的缓释制剂的药动学特征，与注射剂的相对生物利用度为661％。
(3)本发明所提供的利拉鲁肽多囊脂质体，其释药速度缓慢，可提供长效的降糖作用，具有更佳的降糖效果，大大减少患者的给药次数和频率，提高了患者的给药顺应性。
附图说明
图1示本发明实施例1制备的利拉鲁肽多囊脂质体的光学显微镜图片；
图2示本发明实施例2制备的利拉鲁肽多囊脂质体的光学显微镜图片；
图3示本发明实施例5制备的利拉鲁肽多囊脂质体的光学显微镜图片；
图4示本发明实施例1制备的利拉鲁肽多囊脂质体的体外释放曲线；
图5示本发明对比例1制备的利拉鲁肽多囊脂质体的体外释放曲线；
图6示本发明实施例1所制备的利拉鲁肽多囊脂质体糖尿病大鼠给药后第1天至第15天的血糖浓度—时间曲线，纵坐标其为血糖浓度(mmol/L)，横坐标其为时间(h)；
图7示对比例1制备利拉鲁肽多囊脂质体糖尿病大鼠给药后第1天至第7天的血糖浓度—时间曲线，纵坐标为血糖浓度(mmol/L)，横坐标为时间(h)；
图8示市售利拉鲁肽注射液糖尿病大鼠给药后的血糖浓度—时间曲线，纵坐标为血糖浓度(mmol/L)，横坐标为时间(h)；
图9实施例1所制备的利拉鲁肽多囊脂质体糖尿病大鼠皮下注射给药药时曲线；血药浓度(pmol/l)，横坐标为时间(h)；
图10对比例1制备的利拉鲁肽多囊脂质体糖尿病大鼠皮下注射给药药时曲线；血药浓度(pmol/l)，横坐标为时间(h)；
图11市售利拉鲁肽注射液糖尿病大鼠皮下注射给药药时曲线；血药浓度(pmol/l)，横坐标为时间(h)。
具体实施方式
本发明提供了一种利拉鲁肽多囊脂质体及其制备方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明采用的试剂、药品、仪器皆为普通市售品，皆可于市场购得。
其中对利拉鲁肽多囊脂质体(Lrg-MVLs)质量检测的方法为：
包封药量的测定：精密量取Lrg-MVLs混悬液1ml置4ml离心管中，3500rpm离心10min,弃去上清液，下层沉淀以pH 7.4的PBS洗涤三次后分散至1ml,精密量取0.2ml置10ml量瓶，以酸化异丙醇(含1％盐酸)定容至刻度，摇匀，HPLC法测定Lrg-MVLs囊内包封的药物浓度C囊内，计算包封药量M囊内
总药量测定：精密量取Lrg-MVLs混悬液0.2ml置10ml量瓶，以酸化异丙醇(含1％盐酸)定容至刻度，摇匀，HPLC法测定Lrg-MVLs囊内包封的药物浓度C总，计算总药量M总
按下式计算包封率(EE)：
EE％＝M囊内/M总×100
按照下式计算载药量：
(DL):DL％＝M囊内/m
式中：m为脂质总量
相对生物利用度的测定方法
相对生物利用度是同一种药物不同制剂之间比较吸收程度与速度而得到的生物利用度。按下式计算相对生物利用度：
Figure GDA0003520926370000121
式中：A、B分别代表实施例1组与利拉鲁肽市售制剂组，Dose表示给药剂量
利拉鲁肽含量测定HPLC法：
色谱条件：色谱柱：C18柱(250mm×4.6mm)；流动相：乙腈-水(60：40)，含0.1％三氟乙酸；流速：1ml·min-1；柱温：30℃；检测波长：290nm；进样量：20μl。
形态和粒度的测定：在400倍光学显微镜下观察其形态；取样品以生理盐水为分散介质稀释后，利用激光散射粒度仪(LS230激光粒度仪分析仪，美国Beckman Coulter公司)测定其粒径和粒度分布。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1
精密称取利拉鲁肽10.0mg溶于2ml含0.8％人血白蛋白和7％的蔗糖水溶液中形成内水相；精密称取大豆磷脂201.1mg,胆固醇90.2mg,三油酸甘油酯125.0mg,溶于5ml***形成油相，将上述内水相加于油相中，涡旋3min形成W/O型乳剂。将该乳剂滴入6mg/ml赖氨酸的7％蔗糖水溶液7ml中，40℃持续搅拌5min形成W/O/W型复乳，同时吹入氮气，使有机溶剂自然挥发，待大部分溶剂挥发后，将其移至旋蒸仪除去残留有机溶剂，即得利拉鲁肽缓释多囊脂质体，测得包封率为87.5％，载药量为2.3％，平均粒径为12.7μm(图1)。
实施例2
精密称取利拉鲁肽10.0mg溶于2ml含1％的人血白蛋白和7％的蔗糖水溶液中形成内水相；精密称取氢化大豆磷脂203.0mg,胆固醇96.6mg,三油酸甘油酯121.0mg,溶于5ml氯仿中形成油相，将上述内水相加于油相中，涡旋分散形成W/O型乳剂。将该乳剂滴入含6mg/ml赖氨酸的7％蔗糖水溶液7ml中，40℃持续搅拌10min形成W/O/W型复乳，继续低速搅拌使有机溶剂自然挥发，待大部分溶剂挥发后，将其移至旋蒸仪除去残留有机溶剂既得利拉鲁肽缓释多囊脂质体，测得包封率为74.4％，载药量为2.3％，平均粒径为22.0μm(图2)。
实施例3
精密称取利拉鲁肽10.0mg溶于2ml含有0.9％人血白蛋白和7％的蔗糖水溶液中形成内水相；精密称取二油酰磷脂酰胆碱196.8mg,胆固醇99.4mg,三油酸甘油酯126.1mg,溶于6ml氯仿中形成油相，将上述内水相加于油相中，涡旋分散5min形成W/O型乳剂。在1000r/min搅拌下，将该乳剂滴入的含5mg/ml赖氨酸的8％蔗糖水溶液20ml中，40℃持续搅拌10min形成W/O/W型复乳，吹入氮气使有机溶剂自然挥发，待有沉降现象出现时，将其移至旋蒸仪除去残留有机溶剂既得利拉鲁肽缓释多囊脂质体，测得包封率为88.0％，载药量为2.4％，平均粒径为11.6μm。
实施例4
精密称取利拉鲁肽55.1mg溶于2ml含4.3％的人血白蛋白和7％的蔗糖水溶液中形成内水相；精密称取大豆磷脂202.1mg,胆固醇98.0mg,三油酸甘油酯122.6mg,溶于5ml***形成油相，将上述内水相加于油相中，水浴超声3min形成W/O型乳剂。将该乳剂滴入含6mg/ml赖氨酸的7％蔗糖水溶液7ml中，40℃持续搅拌5min形成W/O/W型复乳，同时吹入氮气，使有机溶剂自然挥发，待有沉降现象出现时，将其移至旋蒸仪除去残留有机溶剂既得利拉鲁肽缓释多囊脂质体，测得包封率为84.5％，载药量为11.5％，平均粒径为12.4μm。
实施例5
精密称取利拉鲁肽64.6mg,溶于1.5ml含10％人血白蛋白和7％的蔗糖溶液中形成内水相；精密称取大豆磷脂210.5mg,胆固醇95.0mg,三油酸甘油128.5mg,DPPG 44.2mg溶于6ml氯仿:***(体积比1:1)形成油相，将上述内水相加于油相中，快速涡旋5min形成W/O型乳剂。将该乳剂滴入含6mg/ml赖氨酸的7％蔗糖水溶液21ml中，40℃持续搅拌10min形成W/O/W型复乳，吹入氮气使有机溶剂挥发，待有沉降现象出现时，将其移至旋蒸仪除去残留有机溶剂既得利拉鲁肽缓释多囊脂质体，测得包封率为91.3％，载药量为11.9，平均粒径为16.2μm(图3)。
实施例6
精密称取利拉鲁肽11.3mg溶于2ml含1.2％牛血白蛋白和5％的葡萄糖溶液中形成内水相；精密称取大豆磷脂199.0mg,胆固醇90.5mg,三油酸甘油酯187.0mg,溶于2ml***形成油相，将上述内水相加于油相中，水浴超声形成W/O型乳剂。将该乳剂滴入含8mg/ml组氨酸的7％蔗糖水溶14ml中，持续搅拌5min形成W/O/W型复乳，40℃低速搅拌下，同时吹入氮气，使有机溶剂自然挥发，待有沉降现象出现时，将其移至旋蒸仪除去残留有机溶剂既得利拉鲁肽缓释多囊脂质体，测得包封率为80.0％，载药量为2.3％，平均粒径为11.3μm。
实施例7
精密称取利拉鲁肽18.2mg溶于2ml含2.2％的明胶(250Bloom B型)和7％的蔗糖溶液中形成内水相；精密称取大豆磷脂260.3mg,胆固醇100.5mg,甘油三酯191.0mg,溶于16ml***形成油相，将上述内水相加于油相中，冰浴超声3min形成W/O型乳剂。将该乳剂滴入6mg/ml组氨酸的7％蔗糖水溶液36ml中，10℃冰浴持续搅拌8min形成W/O/W型复乳，吹入氮气，使有机溶剂自然挥发，待有沉降现象出现时，将其移至旋蒸仪除去残留有机溶剂既得利拉鲁肽缓释多囊脂质体，测得包封率为86.6％，载药量为3.2％，平均粒径为11.0μm。
实施例8
精密称取利拉鲁肽30.4mg溶于2ml含3.4％的人血白蛋白和7％的蔗糖溶液中形成内水相；精密称取大豆磷脂220.0mg,胆固醇88.5mg,三油酸甘油酯126.0mg,溶于4ml环己烷中形成油相，将上述内水相加于油相中，冰浴超声3min形成W/O型乳剂。将该乳剂滴入含6mg/ml组氨酸的7％蔗糖水溶液中(初乳与外水相的相体积比为1:2)，45℃持续搅拌至形成W/O/W型复乳后，吹入氮气，使有机溶剂自然挥发，待有沉降现象出现时，将其移至旋蒸仪除去残留有机溶剂既得利拉鲁肽缓释多囊脂质体，测得包封率为77.7％，载药量为6.6％，平均粒径为25.5μm。
实施例9
精密称取利拉鲁肽5.1mg溶于2ml含0.125％的牛血白蛋白和7％的蔗糖溶液中形成内水相；精密称取大豆磷脂220.0mg,胆固醇95mg,三油酸甘油酯156.0mg,溶于6ml***中形成油相，将上述内水相加于油相中，冰浴超声3min形成W/O型乳剂。将该乳剂滴入40℃含6mg/ml组氨酸的7％蔗糖水溶液中(初乳与外水相的相体积比为1:2)，持续搅拌至形成W/O/W型复乳，低速搅拌，同时吹入氮气，使有机溶剂自然挥发，待有沉降现象出现时，将其移至旋蒸仪除去残留有机溶剂既得利拉鲁肽缓释多囊脂质体，测得包封率为79.9％，载药量为1.1％，平均粒径为10.5μm。
实施例10
精密称取利拉鲁肽14.2mg溶于2ml含1.5％人血白蛋白和7％的蔗糖溶液中形成内水相；精密称取大豆磷脂220.0mg,胆固醇76.5mg,油酸25.6mg，三辛酸甘油酯122.3mg,溶于5ml***中形成油相，将上述内水相加于油相中，涡旋5min形成W/O型乳剂。将该乳剂滴入含6mg/ml组氨酸的7％蔗糖水溶液中(初乳与外水相的相体积比为1:2)，40℃持续搅拌至形成W/O/W型复乳，600r/min低速搅拌下，同时吹入氮气，使有机溶剂自然挥发，待有沉降现象出现时，将其移至旋蒸仪除去残留有机溶剂既得利拉鲁肽缓释多囊脂质体，测得包封率为88.1％，载药量为3.1％，平均粒径为13.9μm。
实施例11
精密称取利拉鲁肽54.0mg溶于2ml含5％水解明胶和7％的蔗糖溶液中形成内水相；精密称取大豆磷脂220.0mg,胆固醇76.5mg,甘油三酯55.3mg,溶于5ml***中形成油相，将上述内水相加于油相中，冰浴超声5min形成W/O型乳剂。将该乳剂滴入含6mg/ml组氨酸的7％蔗糖水溶液中(初乳与外水相的相体积比为1:2)，40℃温度下持续搅拌至形成W/O/W型复乳后，吹入氮气，使有机溶剂自然挥发，待有沉降现象出现时，将其移至旋蒸仪除去残留有机溶剂既得利拉鲁肽缓释多囊脂质体，测得包封率为86.8％，载药量为13.3％，平均粒径为15.5μm。
实施例12
精密称取利拉鲁肽58.1mg溶于2ml含1％人血白蛋白和7％的蔗糖溶液中形成内水相；精密称取DOPC 36.6mg(Lipoid),DPPG 10.2mg，胆固醇28.0mg,甘油三酯8.6mg,溶于5ml氯仿:***混合溶剂中(体积比1:1)中形成油相，将上述内水相加于油相中，涡旋5min形成W/O型乳剂。将该乳剂滴入含6mg/ml组氨酸的7％蔗糖水溶液中(初乳与外水相的相体积比为1:2)40℃恒温下持续搅拌至形成W/O/W型复乳，搅拌下吹入氮气，使有机溶剂自然挥发，待有沉降现象出现时，将其移至旋蒸仪除去残留有机溶剂既得利拉鲁肽缓释多囊脂质体，测得包封率为82.3％，载药量为41.2％，平均粒径为19.7μm。
实施例13
精密称取利拉鲁肽44.8mg溶于2ml含4.5％人血白蛋白和7％的蔗糖溶液中形成内水相；精密称取蛋黄卵磷脂183.6mg(Lipoid),胆固醇70.7mg,三油酸甘油酯61.1mg,溶于5ml***混合溶剂中(体积比0.3:1)中形成油相，将上述内水相加于油相中，涡旋5min形成W/O型乳剂。将该乳剂滴入含6mg/ml组氨酸的7％蔗糖水溶液中(初乳与外水相的相体积比为1:2)，40℃恒温下持续搅拌至形成W/O/W型复乳，吹入氮气，使有机溶剂自然挥发，待有沉降现象出现时，将其移至旋蒸仪除去残留有机溶剂既得利拉鲁肽缓释多囊脂质体，测得包封率为86.0％，载药量为12.5％，平均粒径为18.3μm。
对比例1(不含稳定剂)
精密称取利拉鲁肽10.0mg溶于2ml含和7％的蔗糖水溶液中形成内水相；精密称取大豆磷脂201.1mg,胆固醇100.2mg,三油酸甘油酯125.0mg,溶于5ml***形成油相，将上述内水相加于油相中，涡旋3min形成W/O型乳剂。将该乳剂滴入含6mg/ml赖氨酸的7％蔗糖水溶液7ml中，40℃温度下持续搅拌5min形成W/O/W型复乳，吹入氮气，使有机溶剂自然挥发，待大部分溶剂挥发后，将其移至旋蒸仪除去残留有机溶剂，即得利拉鲁肽缓释多囊脂质体，测得包封率为73％，载药量为2.3％。
实施例14利拉鲁肽多囊脂质体的释放实验
精密量取实施例1和对比例1制备的Lrg-MVL混悬液0.5ml,分别加入pH7.4的PBS溶液至5ml,将试管加塞置于37℃恒温，100rpm的摇床中，分别于不同时间点取样，样品于5000rpm离心5min除去上清液，重复以上操作再两次，沉淀中加入酸化异丙醇(含1％盐酸)溶解，HPLC法测定其含量，计算每个取样点滞留在MVLs中的药物，以零时刻包封药量为100％，计算各取样点的剩余百分率，从而获得释放百分率，绘制Lrg-MVLs的累积释放百分数曲线。
实施例1制备脂质体的释放曲线如图4所示，结果表明本发明所述的利拉鲁肽多囊脂质体药物释放缓慢，持续释药可持续近432小时，缓释效果显著且无突释效应。其他实施例制得的脂质体的释放效果与此相似。对比例制备脂质体的释放曲线如图5所示，结果表明对比例1制备的利拉鲁肽多囊脂质体药物释放持续216小时，缓释效果弱于实施例1制备的多囊脂质体。
实施例15利拉鲁肽多囊脂质体的药效学和药动学实验
1.1糖尿病大鼠模型的制备
取雄性大鼠,隔夜禁食12小时后称重，以45mg/kg的剂量尾静脉注射以生理盐水新鲜配制的1％的四氧嘧啶溶液，30min后每只灌胃给予2ml,50％的葡萄糖溶液，正常饲养72h后眼眶取血，采用葡萄糖氧化酶试剂盒检测其血糖浓度，大于11.1mmol/L者为成功的糖尿病模型大鼠。
1.2给药方法
将造模成功的糖尿病大鼠分成A、B、C三组，按下述方法给药
A组大鼠颈背部皮下一次性给予7mg/kg(以利拉鲁肽计)利拉鲁肽多囊脂质体混悬液(利拉鲁肽多囊脂质体由本发明实施例1～13制备，以生理盐水重悬)，分别于0、24、96、168、240、312、336、360h时，取血0.5ml置于涂有肝素的EP管内，经3500r/min离心10min分离血浆，-20℃冷冻保存待测。
B组大鼠颈背部皮下一次性给予同剂量的利拉鲁肽注射液(
Figure GDA0003520926370000171
诺和诺德)，分别在0、2、4、8、12、24、30和36h，取血0.5ml置于涂有肝素的EP管内。经3500r/min离心10min分离血浆，-20℃冷冻保存待测。
C组大鼠颈背部皮下一次性给予5mg/kg利拉鲁肽多囊脂质体混悬液(利拉鲁肽多囊脂质体由本发明对比例1制备，以生理盐水重悬)，分别于0、24、48、72、96、120、168h时，取血0.5ml置于涂有肝素的EP管内。
1.3血糖和血药浓度的测定
方法：利用葡萄糖氧化酶试剂盒(中山北控生物科技股份有限公司)，采用分光光度法505波长下测定反应液的OD值，计算相应时刻每只大鼠的血糖浓度,利用人用GLP-1试剂盒(上海沪鼎生物科技有限公司)测定相应的血药浓度。
1.4药效学结果
大鼠皮下注射给予利拉鲁肽不同剂型的血糖测定结果如表1所示，
表1：大鼠给药后的血糖浓度
Figure GDA0003520926370000181
结果表明，单次注射本发明提供的利拉鲁肽多囊脂质体至少312小时内可提供正常平稳血糖水平，降血糖作用达312小时。然而，相同剂量的利拉鲁肽注射液(市售)的降血糖作用仅维持24小时。证明利拉鲁肽多囊脂质体具有显著的缓释效果，可大大减少利拉鲁肽的给药次数，提高患者的顺应性。单次注射利拉鲁肽多囊脂质体(不含稳定剂的)只能提供120小时降糖作用，其长效作用大于注射剂，但不及含稳定剂的利拉鲁肽多囊脂质体，二者具有显著差异(p<0.05)。
1.5药动学结果
大鼠皮下分别单次注射利拉鲁肽多囊脂质体(本发明制备)注射液(市售)，对比制剂的血药浓度如表2。
表2：大鼠给药后血药浓度
Figure GDA0003520926370000191
表3药动学参数
Figure GDA0003520926370000192
注，*示P<0.05
结果表明与注射液相比，本发明制备的利拉鲁肽多囊脂质体血药浓度稳定，释放长达360h。体内滞留时间显著延长(分别为163.4小时和13.9小时)，呈现明显的缓释制剂的药动学特征，与注射剂的相对生物利用度为661.6％。说明利拉鲁肽多囊脂质体显著提高了体内药物稳定性，生物利用度显著提高，大大降低了用药成本。单次注射利拉鲁肽普通多囊脂质体(对比例1制备)体内滞留时间为74.9小时,大于注射剂，但显著低于(p<0.05)含稳定剂的利拉鲁肽多囊脂质体。
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (8)

1.一种利拉鲁肽多囊脂质体，其特征在于，由如下质量份的原料制得：
利拉鲁肽 1份；
膜材 1份~100份；
渗透压调节剂 10份~300份；
稳定剂 0.3份~2.5份；
所述稳定剂为人血白蛋白、牛血白蛋白或水解明胶；
所述膜材包括磷脂、胆固醇和甘油三酯，所述磷脂、胆固醇和甘油三酯的质量比为（46.8~342.3）：（28.0~100.5）：（8.6~191.0）；
其中，所述磷脂为大豆磷脂、卵磷脂、氢化大豆磷脂、二棕榈酰磷脂酰甘油和二油酰磷脂酰胆碱中至少一种，所述甘油三酯为三油酸甘油酯或三辛酸甘油酯；
所述渗透压调节剂选自赖氨酸、组氨酸、葡萄糖和蔗糖中至少一种。
2.根据权利要求1所述的利拉鲁肽多囊脂质体，其特征在于，所述利拉鲁肽多囊脂质体包括以下质量份的：
利拉鲁肽 1份；
膜材 1.44份~92.35份；
渗透压调节剂 12.2份~265.8份；
稳定剂 0.34份~2.42份。
3.根据权利要求1所述的利拉鲁肽多囊脂质体，其特征在于，
所述磷脂为大豆卵磷脂，所述甘油三酯为三油酸甘油酯，所述稳定剂为人血白蛋白，所述渗透压调节剂为蔗糖与赖氨酸的混合物；其中，利拉鲁肽与膜材的质量比为1:41.62，利拉鲁肽与稳定剂的质量比为1:1.6，利拉鲁肽与渗透压调节剂的质量比为1:67.2，膜材中大豆卵磷脂、胆固醇和甘油三酯的质量比为201.1:90.2:125；渗透压调节剂中蔗糖与赖氨酸的质量比为15:1；
或者所述磷脂为氢化大豆磷脂，所述甘油三酯为三油酸甘油酯，所述稳定剂为人血白蛋白，所述渗透压调节剂为蔗糖与赖氨酸的混合物；其中，利拉鲁肽与膜材的质量比为1:42.1，利拉鲁肽与稳定剂的质量比为1:2，利拉鲁肽与渗透压调节剂的质量比为1:67.2，膜材中氢化大豆磷脂、胆固醇和甘油三酯的质量比为203:96:121；渗透压调节剂中蔗糖与赖氨酸的质量比为15:1；
或者所述磷脂为二油酰磷脂酰胆碱，所述甘油三酯为三油酸甘油酯，所述稳定剂为人血白蛋白，所述渗透压调节剂为蔗糖与赖氨酸的混合物；其中，利拉鲁肽与膜材的质量比为1:42.2，利拉鲁肽与稳定剂的质量比为1:1.8，利拉鲁肽与渗透压调节剂的质量比为1:180.4，膜材中二油酰磷脂酰胆碱、胆固醇和甘油三酯的质量比的质量比为196.8:99.4:126.1；渗透压调节剂中蔗糖与赖氨酸的质量比为17.4:1；
或者所述磷脂为大豆磷脂，所述甘油三酯为三油酸甘油酯，所述稳定剂为人血白蛋白，所述渗透压调节剂为蔗糖与赖氨酸的混合物；其中，利拉鲁肽与膜材的质量比为1:7.7，利拉鲁肽与稳定剂的质量比为1:1.6，利拉鲁肽与渗透压调节剂的质量比为1:12.2，膜材中大豆磷脂、胆固醇和甘油三酯的质量比为202.1:98:122.6；渗透压调节剂中蔗糖与赖氨酸的质量比为15:1；
或者所述磷脂为大豆磷脂，所述甘油三酯为三油酸甘油酯，所述稳定剂为人血白蛋白，所述渗透压调节剂为蔗糖与赖氨酸的混合物；利拉鲁肽与膜材的质量比为1:7.4，利拉鲁肽与稳定剂的质量比为1:2.3，利拉鲁肽与渗透压调节剂的质量比为1:26.3；所述膜材包括大豆磷脂、胆固醇、甘油三酯和DPPG，所述膜材中大豆磷脂、胆固醇、甘油三酯和DPPG的质量比为210.5:95:128.5：44.2，所述渗透压调节剂中蔗糖与赖氨酸的质量比为12.5:1；
或者磷脂为大豆磷脂，所述甘油三酯为三油酸甘油酯，所述稳定剂为牛血白蛋白，所述渗透压调节剂为葡萄糖、蔗糖与组氨酸的混合物；利拉鲁肽与膜材的质量比为1:42.2，利拉鲁肽与稳定剂的质量比为1:2.1，利拉鲁肽与渗透压调节剂的质量比为1:105.5，膜材中，大豆磷脂、胆固醇和甘油三酯的质量比为199:90.5:187，所述渗透压调节剂中葡萄糖、蔗糖与组氨酸的质量比为100:98.0:112 ；
或者所述磷脂为大豆磷脂，所述甘油三酯为三油酸甘油酯，所述稳定剂为人血白蛋白，渗透压调节剂为蔗糖与组氨酸的混合物；利拉鲁肽与膜材的质量比为1:14.3，利拉鲁肽与稳定剂的质量比为1:2.2，利拉鲁肽与渗透压调节剂的质量比为1:34.2，所述膜材中，大豆磷脂、胆固醇和甘油三酯的质量比为220:88.5:126，所述渗透压调节剂中，蔗糖与组氨酸的质量比为16.3:1；
或者所述磷脂为大豆磷脂，所述甘油三酯为三油酸甘油酯；稳定剂为牛血白蛋白，所述渗透压调节剂为蔗糖与组氨酸的混合物；利拉鲁肽与膜材的质量比为1:92.4，利拉鲁肽与稳定剂的质量比为1:2.4，利拉鲁肽与渗透压调节剂的质量比为1:265.8，所述膜材中，大豆磷脂、胆固醇和甘油三酯的质量比为220:95:156，所述渗透压调节剂中蔗糖与组氨酸的质量比为13.1：1；
或者所述磷脂为大豆磷脂，所述膜材包括大豆磷脂、胆固醇、三辛酸甘油酯和油酸，所述稳定剂为人血白蛋白，所述渗透压调节剂为蔗糖与组氨酸的混合物；利拉鲁肽与膜材的质量比为1:31.3，利拉鲁肽与稳定剂的质量比为1:2.1，利拉鲁肽与渗透压调节剂的质量比为1:93.7，所述膜材中大豆磷脂、胆固醇、三辛酸甘油酯、油酸的质量比为220:76.5:122.3:25.6，所述渗透压调节剂蔗糖与组氨酸的质量比为18:1；
或者所述磷脂为大豆磷脂，所述稳定剂为水解明胶，所述渗透压调节剂为蔗糖与组氨酸的混合物；利拉鲁肽与膜材的质量比为1:6.5，利拉鲁肽与稳定剂的质量比为1:1.9，利拉鲁肽与渗透压调节剂的质量比为1：22.3，所述膜材中大豆磷脂、胆固醇和三油酸甘油酯的质量比为220:76.5:55.3，所述渗透压调节剂中蔗糖与组氨酸的质量比为13.3:1；
或者所述磷脂为DOPC和DPPG，所述稳定剂为人血白蛋白，所述渗透压调节剂为蔗糖与组氨酸的混合物；利拉鲁肽与膜材的质量比为1:1.4，利拉鲁肽与稳定剂的质量比为1:0.34，利拉鲁肽与渗透压调节剂的质量比为1:23.1，所述膜材中，DOPC、DPPG、胆固醇、甘油三酯的质量比为36.6:10.2:28:8.6，所述渗透压调节剂中蔗糖与组氨酸的质量比为15:1；
或者所述磷脂为蛋黄卵磷脂，所述稳定剂为人血白蛋白，所述渗透压调节剂为蔗糖与组氨酸的混合物，利拉鲁肽与膜材的质量比为1:7.0，利拉鲁肽与渗透压调节剂的质量比为1:26.9，利拉鲁肽与稳定剂的质量比为1:2.0，所述膜材中，蛋黄卵磷脂、胆固醇和甘油三酯的质量比为183.6:70.7:61.1，所述渗透压调节剂中蔗糖与组氨酸的质量比为13.3:1。
4.权利要求1~3任一项所述利拉鲁肽多囊脂质体的制备方法，其特征在于，包括：
步骤1：将膜材溶于有机溶剂作为油相；将稳定剂、部分渗透压调节剂和利拉鲁肽溶于水作为内水相；将另外部分渗透压调节剂溶于水作为外水相；
步骤2：使内水相与油相形成一级乳；
步骤3：使所述一级乳与外水相形成复乳；
步骤4：干燥复乳中的有机溶剂，制得利拉鲁肽多囊脂质体。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤1中所述有机溶剂选自***、二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯或环己烷。
6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述内水相与所述油相的体积比为1：（0.8~10）；所述一级乳与所述外水相的体积比为1：（1~4）。
7.权利要求1~3任一项所述利拉鲁肽多囊脂质体在制备治疗和/或预防糖尿病的药物中的应用。
8.一种治疗和/或预防糖尿病的药物，其特征在于，包括权利要求1~3任一项所述的利拉鲁肽多囊脂质体。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3897570A1 (en) 2018-12-19 2021-10-27 KRKA, d.d., Novo mesto Pharmaceutical composition comprising glp-1 analogue
WO2020257260A1 (en) * 2019-06-17 2020-12-24 Massachusetts Institute Of Technology Formulation of peptide loaded liposomes and related applications
WO2021123228A1 (en) 2019-12-18 2021-06-24 Krka, D.D., Novo Mesto Pharmaceutical composition comprising glp-1 analogue
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CN114344280A (zh) * 2022-01-10 2022-04-15 益奇健康科技（上海）有限公司 一种维生素和（或）矿物质微囊的制备方法
CN114452258B (zh) * 2022-03-09 2023-07-25 成都大学 利拉鲁肽脂质体制剂及其制备方法和应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102274182A (zh) * 2010-06-13 2011-12-14 上海现代药物制剂工程研究中心有限公司 一种含有艾塞那肽的多囊脂质体及其制备方法和应用
CN102274183A (zh) * 2010-06-13 2011-12-14 上海现代药物制剂工程研究中心有限公司 一种多囊脂质体制备方法和应用
CN102688198A (zh) * 2012-06-19 2012-09-26 广州帝奇医药技术有限公司 多肽药物缓释微球制剂及其制备方法
CN106924185A (zh) * 2017-03-29 2017-07-07 烟台大学 一种载有囊泡的多囊脂质体的制备方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102274182A (zh) * 2010-06-13 2011-12-14 上海现代药物制剂工程研究中心有限公司 一种含有艾塞那肽的多囊脂质体及其制备方法和应用
CN102274183A (zh) * 2010-06-13 2011-12-14 上海现代药物制剂工程研究中心有限公司 一种多囊脂质体制备方法和应用
CN102688198A (zh) * 2012-06-19 2012-09-26 广州帝奇医药技术有限公司 多肽药物缓释微球制剂及其制备方法
CN106924185A (zh) * 2017-03-29 2017-07-07 烟台大学 一种载有囊泡的多囊脂质体的制备方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"Liraglutide-loaded multivesicular liposome as a sustained-delivery reduces blood glucose in SD rats with diabetes";Lixue Zhang等;《Drug Deliv》;20160510;第23卷(第9期);第3358-3363页 *
"利拉鲁肽的药理作用及其缓释制剂的最新研究进展";张莉雪等;《沈阳药科大学学报》;20150630;第32卷(第6期);第496-502页 *
"长效利拉鲁肽多囊脂质体的制备及质量评价";丁蕾等;《沈阳药科大学学报》;20190930;第36卷(第7期);第549-553页+第585页 *

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