CN110330370A - 一种同时含木霉和解淀粉芽孢杆菌的草炭生物有机肥及其制备方法和应用 - Google Patents

一种同时含木霉和解淀粉芽孢杆菌的草炭生物有机肥及其制备方法和应用 Download PDF

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CN110330370A CN201910661199.5A CN201910661199A CN110330370A CN 110330370 A CN110330370 A CN 110330370A CN 201910661199 A CN201910661199 A CN 201910661199A CN 110330370 A CN110330370 A CN 110330370A
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梅慧玲
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Abstract

本发明公开了一种同时含木霉和解淀粉芽孢杆菌的草炭生物有机肥及其制备方法和应用。本发明以草炭为原料，加入解淀粉芽孢杆菌SQR9或贵州木霉NJAU4742进行堆肥发酵制备生物有机肥，利用菌株SQR9或NJAU4742充分活化了草炭中的碳，活性腐殖酸含量由3.6％提升到13.5％以上，使其由生物无法利用的“死碳”转变为生物能够利用的“活碳”；制备的草炭生物有机肥能显著增加作物株高、茎粗，促进作物生长，可以显著提高和改善作物果实品质。

Description

一种同时含木霉和解淀粉芽孢杆菌的草炭生物有机肥及其制 备方法和应用
技术领域
本发明属于生物有机肥技术领域，涉及一种同时含木霉和解淀粉芽孢杆菌的草炭生物有机肥及其制备方法和应用。
背景技术
草炭又称泥炭，泥煤，是沼泽发育过程的产物，含有大量的未被分解的植物残体、腐殖质、纤维素、木质素以及一部分矿物质，富含氮磷钾等养分。此外，草炭中还含有一些生理活性物质，是一种无菌、无毒、无公害、无污染、无残留的绿色物质。
我国草炭资源丰富，除少数干旱地区尚未发现草炭资源外，全国各省市地区几乎均有草炭资源。在农业生产中，草炭可采用以下利用方式：1、直接用作肥料来改良土壤；2、与化肥掺混成有机无机肥混合肥料；3、用碱处理研制腐殖酸钠或者提取草炭里面的腐殖酸来研制腐殖酸肥；4、用草炭作为介质来吸附微生物来生产菌肥等；5、与岩棉、椰壳发酵物、蛭石等复混研制育苗基质等。现有的利用方式中，在充分发挥其组分功能方面还有待加强。如草炭中的主要成分是碳，这种高分子量的碳无论是施入土壤，还是作为微生物的吸附剂，都很难在短时间内被微生物所利用。如果能采用一定工艺，利用微生物来活化草炭中的碳，将会有很好的应用前景。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术的上述不足，提供一种同时含木霉和解淀粉芽孢杆菌的草炭生物有机肥的制备方法。
本发明的另一目的是提供该方法制备的含木霉和解淀粉芽孢杆菌的草炭生物有机肥。
本发明的又一目的是提供该含木霉和解淀粉芽孢杆菌的草炭生物有机肥的应用。
本发明的目的可通过以下技术方案实现：
含木霉和解淀粉芽孢杆菌的草炭生物有机肥的制备方法，所述的制备方法选自以下任意一种方法：
方法一包括以下步骤：
(1)向草炭中加入适量水和碱性物质调剂草炭pH至4.5～6.5，加入碳源，加入氨基酸稀释液调节含水量至40％～50％，接入保藏号为CGMCC NO.12166的贵州木霉(Trichoderma guizhouense)NJAU4742发酵液后进行好氧堆肥，发酵7～20天获得含木霉的草炭生物有机肥；
(2)向草炭中加入适量水和碱性物质调节草炭pH至6.5～7.5，加入碳源，加入氨基酸稀释液调节含水量至40％～50％，接入保藏号为CGMCC NO.5808的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)SQR9种子液后进行好氧堆肥，发酵7～20天获得含解淀粉芽孢杆菌的草炭生物有机肥；
(3)将所述的含木霉的草炭生物有机肥和所述的含芽孢杆菌的草炭生物有机肥按照1:0.5～1.5的比例混合均匀，获得含木霉和解淀粉芽孢杆菌的草炭生物有机肥；
方法二包括以下步骤：
(1)向草炭中加入适量水和碱性物质调剂草炭pH至4.5～6.5，加入碳源，加入氨基酸稀释液调节含水量至40％～50％，接入保藏号为CGMCC NO.12166的贵州木霉(Trichoderma guizhouense)NJAU4742发酵液后进行好氧堆肥，发酵7～20天获得含木霉的草炭生物有机肥；
(2)将孢子数量达到1010个·mL-1的解淀粉芽孢杆菌SQR9液体菌种按0.2％的量加入到所述的含木霉的草炭生物有机肥中，充分混匀，控制水分低于30％，获得含木霉和解淀粉芽孢杆菌的草炭生物有机肥；
方法三包括以下步骤
(1)向草炭中加入适量水和碱性物质调节草炭pH至6.5～7.5，加入碳源，加入氨基酸稀释液调节含水量至40％～50％，接入保藏号为CGMCC NO.5808的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)SQR9种子液后进行好氧堆肥，发酵7～20天获得含解淀粉芽孢杆菌的草炭生物有机肥；
(2)按照201610151640.1中公开的方法利用贵州木霉NJAU4742直接发酵作物秸秆制备木霉固体菌种，所制备的木霉固体菌种中木霉浓度为108cfu/ml；
(3)将步骤(2)制备的木霉固体菌种按5％的量加入到含解淀粉芽孢杆菌的草炭生物有机肥中，充分混匀，控制水分低于30％，获得含木霉和解淀粉芽孢杆菌的草炭生物有机肥。
其中，所述的含木霉的草炭生物有机肥制备方法优选包括：向草炭中加入适量水和碱性物质调剂草炭pH至4.5～6.5，待pH稳定后向其中加入碳源，加入氨基酸稀释液调节含水量至40％～50％，混匀，静置20～24小时，加入保藏号为CGMCCNO.12166的贵州木霉(Trichoderma guizhouense)NJAU4742发酵液，充分混匀后堆放成条垛进行好氧堆肥，发酵7～20天获得含木霉的草炭生物有机肥；其中所述的碳源的加入量为调节pH后的草炭质量的5％～10％；所述的NJAU4742发酵液中有效菌数量达到109CFU·mL-1，NJAU4742发酵液的添加量为调节pH后的草炭重量的5％～15％。
所述的含解淀粉芽孢杆菌的草炭生物有机肥制备方法优选包括：向草炭中加入适量水和碱性物质调节草炭pH至6.5～7.5，待pH稳定后向其中加入碳源，加入氨基酸稀释液调节含水量至40％～50％，静置20～24小时，加入保藏号为CGMCC NO.5808的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)SQR9种子液，充分混匀后堆放成条垛进行好氧堆肥，发酵7～20天获得含解淀粉芽孢杆菌的草炭生物有机肥；其中所述的碳源的加入量为调节pH后的草炭质量的5％～10％；SQR9种子液中有效菌数量达到109CFU·mL-1，SQR9种子液的添加量为调节pH后的草炭重量的5％～15％。
所述的解淀粉芽孢杆菌SQR9液体菌种优选通过以下方法制备得到：将保存在-80℃冰箱甘油管中的解淀粉芽孢杆菌SQR9菌种，在LB固体培养基上划线活化，置于37℃培养箱中培养过夜，接种SQR9单菌落至LB液体培养基上，然后置于30℃、170rpm摇床上摇12h，再按0.1％(v/v)接种到液体LB培养基后摇36h即获得SQR9发酵液，有效菌数量达到109CFU·mL-1，备用。
所述的碱性物质为草木灰。在制备含木霉的草炭生物有机肥时草木灰的添加量优选草炭质量的5％～10％，以将草炭的pH调节至4.5～6.5；在制备含解淀粉芽孢杆菌的草炭生物有机肥时草木灰的添加量优选草炭质量的12％～20％，以将草炭的pH调节至6.5～7.5，便于后面能加入较多的酸解氨基酸溶液，有利于微生物生长，有利于草炭中的碳活化。
所述的制备方法优选调节pH时加入水至草炭堆体含水量为30％～40％，含水量高点有利于缩短酸碱中和时间，尽早稳定pH值。
所述的碳源优选米糠或稻壳粉。最初给所加的功能菌提供少量的可利用的碳源，让微生物繁殖，微生物在繁殖的过程中，逐步利用草炭中的碳，将草炭中的碳活化出来。
所述的氨基酸稀释液优选用水稀释的全价氨基酸液，在制备含木霉的草炭生物有机肥时，全价氨基酸液的加入量为调节pH后的草炭重量的5％～10％；在制备全价氨基酸液的加入量为调节pH后的草炭重量的3％～8％。所述的全价氨基酸液可以按照以下方法制备而成：(1)在密闭容器中先将病死畜禽动物经自动化粉碎、所有固形物和液体自动转入密闭的水解罐后，在初始酸浓度c(1/2H2SO4)为2.5-5mol L-1、80-100℃和1-2个大气压下水解2-5小时；(2)水解结束待水解罐内溶液冷却至80℃以下时，静置分层，收集中层的氨基酸溶液即得。氨基酸水解液含氨基酸和各种肽类物质约10％(g/100ml)及以上；含17种氨基酸、小肽和少量多肽，溶液呈强酸性，其游离氨基酸含量≥100g·L-1。也可以直接购买江苏省江阴市联业生物科技有限公司生产的动物蛋白氨基酸水溶肥。
所述的制备方法优选，进行好氧堆肥时当堆温升至50℃进行第一次翻堆；堆制过程中，当堆温不再上升时进行翻堆。
所述的方法优选春季或夏季的堆肥时长为7～15天；秋季或冬季的堆肥时长为15～20天。
按照本发明所述的方法制备的含木霉和解淀粉芽孢杆菌的草炭生物有机肥。
本发明所述的草炭生物有机肥在促进作物生长和/或提高作物品质中的应用。
有益效果：
本发明以草炭为原料，加入解淀粉芽孢杆菌SQR9或贵州木霉NJAU4742进行堆肥发酵制备生物有机肥，利用菌株SQR9或NJAU4742充分活化了草炭中的碳，活性腐殖酸含量由3.6％提升到13.5％以上，使其由生物无法利用的“死碳”转变为生物能够利用的“活碳”；制备的草炭生物有机肥能显著增加作物株高、茎粗，促进作物生长，可以显著提高和改善作物果实品质。
表1草炭主要成分含量(原始)
表2草炭主要成分含量(SQR9活化后)
表3草炭主要成分含量(NJAU4742活化后)
具体实施方式
以下实施例中使用的材料：
草炭由陕西华威肥业科技发展有限公司提供，其基本理化性状：有机质70.6％，pH3.8，全氮1.3％，全磷2.2％，全钾0.3％，水分16.4％。总腐殖酸20.2％(水不溶物0.2％，富里酸0.7％，胡敏酸2.7％，胡敏素16.6％)，活性腐殖酸3.6％。
草木灰由小麦秸秆焚烧后所得，其pH值为8.90。
全价氨基酸(AA)：由江苏省江阴市联业生物科技有限公司提供。全价氨基酸由废弃畜禽经酸解而成，含17种氨基酸、小肽和少量多肽，溶液呈强酸性，稀释250倍后pH值为2.5，其游离氨基酸含量≥100g·L-1。
CGMCC NO.5808的解淀粉芽孢杆菌SQR9的菌株已在CN104130040A中公开；CGMCCNO.12166的贵州木霉NJAU4742的菌株已在ZL2018101301042中公开。
实施例1
菌株NJAU4742草炭生物有机肥制备：
将制备好的固体PDA培养基加热融化后倒入无菌培养皿中，待其再次凝固后接种木霉NJAU4742，28℃恒温培养箱中连续培养6～7天，待其长满整个平板后，置于4℃冰箱中保存，待用。
用打孔器在长满木霉的PDA的平板上取大小一致的木霉菌块，接种在PDA液体培养基中，在28℃，175rpm条件下连续振荡培养6天后的产物即为木霉发酵液，经稀释后用血球计数板测定木霉孢子数为2×107CFU·mL-1。待用。
向50kg草炭中加入适量水(15kg)，用草木灰(用量为草炭用量的10％)调剂草炭pH至6.17，待pH稳定后向其中加入5kg米糠，加入全价氨基酸(用量为调整pH值后的草炭用量的7％)的稀释液调节含水量至50％，充分混匀，静止24小时。加入相当于调节pH后的草炭重量的10％的CGMCC NO.12166的哈茨木霉(Trichoderma harzianum)NJAU4742发酵浓缩液，充分混匀后堆放成条垛进行好氧堆肥，当堆温升至50℃进行第一次翻堆；堆制过程中，堆温不再上升时进行翻堆，发酵17天获得含木霉的草炭生物有机肥。
SQR9草炭生物有机肥制备：
将保存在-80℃冰箱甘油管中的解淀粉芽孢杆菌SQR9菌种，在LB固体培养基上划线活化，置于37℃培养箱中培养过夜，用接种环轻轻刮一下平板上的SQR9单菌落然后放进LB液体培养基上，然后置于30℃、170rpm摇床上摇12h，再按0.1％(v/v)接种到液体LB培养基后摇36h即获得SQR9发酵液(有效菌数量达到109CFU·mL-1)，备用。
向50kg草炭中加入适量水(15kg)，用草木灰(用量为草炭用量的14％)调剂草炭pH至6.92，待pH稳定后向其中加入5kg米糠，加入全价氨基酸(用量为调整pH值后的草炭用量的5％)的稀释液调节含水量至50％，充分混匀，静止24小时。加入相当于调节pH后的草炭重量的10％的保藏号为CGMCC NO.5808的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)SQR9发酵浓缩菌液，充分混匀后堆放成条垛进行好氧堆肥，当堆温升至50℃进行第一次翻堆；堆制过程中，当堆温不再上升时进行翻堆，发酵15天获得含解淀粉芽孢杆菌的草炭生物有机肥。
将含木霉的草炭生物有机肥和含解淀粉芽孢杆菌的草炭生物有机肥按50％的量充分混匀，控制水分低于30％，即为同时含木霉和解淀粉芽孢杆菌的草炭生物有机肥。
该同时含木霉和解淀粉芽孢杆菌的草炭生物有机肥符合NY 884-2012标准，其主要指标如下：功能菌(哈茨木霉NJAU4742+解淀粉芽孢杆菌SQR9)数量为8.3×107CFU·g-1肥料干重，有机质55.0％，腐殖酸总含量18.9％，活性腐殖酸含量14.2％，水分27.5％，pH值6.0，粪大肠菌群数未检出，无蛔虫卵，有效期≥6个月。砷0.019mg/kg，镉1.95mg/kg，铅14.2mg/kg，铬15.6mg/kg，汞0.053mg/kg。
实施例2
菌株NJAU4742草炭生物有机肥制备：
将制备好的固体PDA培养基加热融化后倒入无菌培养皿中，待其再次凝固后接种木霉NJAU4742，28℃恒温培养箱中连续培养6～7天，待其长满整个平板后，置于4℃冰箱中保存，待用。
用打孔器在长满木霉的PDA的平板上取大小一致的木霉菌块，接种在PDA液体培养基中，在28℃，175rpm条件下连续振荡培养6天后的产物即为木霉发酵液，经稀释后用血球计数板测定木霉孢子数为2×107CFU·mL-1。待用。
向50kg草炭中加入适量水(15kg)，用草木灰(用量为草炭用量的10％)调剂草炭pH至6.17，待pH稳定后向其中加入5kg米糠，加入全价氨基酸(用量为调整pH值后的草炭用量的7％)的稀释液调节含水量至50％，充分混匀，静止24小时。加入相当于调节pH后的草炭重量的10％的CGMCC NO.12166的哈茨木霉(Trichoderma harzianum)NJAU4742发酵浓缩液，充分混匀后堆放成条垛进行好氧堆肥，当堆温升至50℃进行第一次翻堆；堆制过程中，堆温不再上升时进行翻堆，发酵17天获得含木霉的草炭生物有机肥，为生产含木霉的草炭生物有机肥。
SQR9液体发酵菌种生产：
将保存在-80℃冰箱甘油管中的解淀粉芽孢杆菌SQR9菌种，在LB固体培养基上划线活化，置于37℃培养箱中培养过夜，用接种环轻轻刮一下平板上的SQR9单菌落然后放进LB液体培养基上，然后置于30℃、170rpm摇床上摇12h，再按0.1％(v/v)接种到液体LB培养基后摇36h即获得SQR9发酵液(有效菌数量达到109CFU·mL-1)，备用。
继续按10％的接种量将解淀粉芽孢杆菌SQR9菌种接种到LB液体培养基中，在发酵罐中发酵(温度30℃，转速170rpm)36h，获得菌株SQR9液体菌种(孢子数量达到1.6×1010个·mL-1)，备用。
将SQR9发酵液按0.2％的量加入到含木霉的草炭生物有机肥，充分混匀，控制水分低于30％，即为同时含木霉和解淀粉芽孢杆菌的草炭生物有机肥。
该草炭生物有机肥符合NY 884-2012标准，其主要指标如下：功能菌(哈茨木霉NJAU4742+解淀粉芽孢杆菌SQR9)数量为9.6×107CFU·g-1肥料干重，有机质53.3％，腐殖酸总含量18.9％，活性腐殖酸含量14.2％，水分27.1％，pH值5.9，粪大肠菌群数未检出，无蛔虫卵，有效期≥6个月。砷0.019mg/kg，镉1.95mg/kg，铅14.2mg/kg，铬15.6mg/kg，汞0.053mg/kg。
实施例3
SQR9草炭生物有机肥制备：
将保存在-80℃冰箱甘油管中的解淀粉芽孢杆菌SQR9菌种，在LB固体培养基上划线活化，置于37℃培养箱中培养过夜，用接种环轻轻刮一下平板上的SQR9单菌落然后放进LB液体培养基上，然后置于30℃、170rpm摇床上摇12h，再按0.1％(v/v)接种到液体LB培养基后摇36h即获得SQR9发酵液(有效菌数量达到109CFU·mL-1)，备用。
向50kg草炭中加入适量水(15kg)，用草木灰(用量为草炭用量的14％)调剂草炭pH至6.92，待pH稳定后向其中加入5kg米糠，加入全价氨基酸(用量为调整pH值后的草炭用量的5％)的稀释液调节含水量至50％，充分混匀，静止24小时。加入相当于调节pH后的草炭重量的10％的保藏号为CGMCC NO.5808的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)SQR9发酵浓缩菌液，充分混匀后堆放成条垛进行好氧堆肥，当堆温升至50℃进行第一次翻堆；堆制过程中，当堆温不再上升时进行翻堆，发酵15天获得含解淀粉芽孢杆菌的草炭生物有机肥。
菌株NJAU4742固体发酵生产菌种：
木霉NJAU 4742的平板培养：将制备好的固体PDA培养基加热融化后倒入无菌培养皿中，待其再次凝固后接种木霉NJAU4742，28℃恒温培养箱中连续培养6～7天，待其长满整个平板后，置于4℃冰箱中保存，待用。
木霉NJAU 4742发酵液的制备：用打孔器在长满木霉的PDA的平板上取大小一致的木霉菌块，接种在PDA液体培养基中，在28℃，175rpm条件下连续振荡培养6天后的产物即为木霉发酵液，经稀释后用血球计数板测定木霉孢子数为2×107CFU·mL-1。
菌株NJAU4742的固体菌种生产：见ZL 201610151640.1(一种木霉直接发酵作物秸秆制备木霉固体菌种的方法及制备的产品)实施例1得菌株NJAU4742的固体菌种。
将NJAU4742的固体菌种按5％的量加入到含解淀粉芽孢杆菌的草炭生物有机肥中，充分混匀，控制水分低于30％，即为同时含木霉和解淀粉芽孢杆菌的草炭生物有机肥。
该草炭生物有机肥符合NY 884-2012标准，其主要指标如下：功能菌(哈茨木霉NJAU4742+解淀粉芽孢杆菌SQR9)数量为8.5×107CFU·g-1肥料干重，有机质54.0％，腐殖酸总含量17.2％，活性腐殖酸含量12.8％，水分25.9％，pH值6.1，粪大肠菌群数未检出，无蛔虫卵，有效期≥6个月。砷0.019mg/kg，镉1.95mg/kg，铅14.2mg/kg，铬15.6mg/kg，汞0.053mg/kg。
实施例4含木霉和解淀粉芽孢杆菌的草炭生物有机肥生物效应
4.1供试作物
番茄；品种：世纪红冠。
4.2供试肥料
含木霉和解淀粉芽孢杆菌的草炭生物有机肥(实施例1、实施例2、实施例3制备)，化肥(尿素、磷酸氢二钾、过磷酸钙)。
4.3供试土壤
黄壤土，其基本理化性质为有机质：41.5g/kg；全氮：3.31g/kg；全磷：3.31g/kg；速效磷：37.9mg/kg；速效钾：521.0mg/kg；pH:6.58。
4.4验设计
大田试验设置四个处理：处理1(CK1)：未施肥；处理2(CK2)：单施化肥(常规用量)；处理3(AOF)：灭活后的草炭生物有机肥+化肥(常规用量减去灭活后的草炭生物有机肥所含养分)；处理4(BOF)：草炭生物有机肥+化肥(常规用量减去草炭生物有机肥所含养分)。每个处理重复三次，每个处理小区面积22.5m2(长15.0m，宽1.5米)。
4.5试验方法
育苗：选取颗粒饱满，大小均匀的世纪红冠种子，每穴播3粒，出苗后留健壮苗1株，常规水肥管理。
大田施肥与管理：各处理氮磷钾肥基肥施用量相同，即尿素21kg/亩，过磷酸钙68kg/亩，硫酸钾：16.5kg/亩，草炭生物有机肥施用量：每小区施用3.5kg(干重)肥料，均做基肥施用，常规水肥和植保管理。
待番茄幼苗长至1芽三叶时，选用长势基本一致的幼苗于2018年3月20日移栽到大田；2018年4月16日和5月6日喷施甲维盐类农药防治青虫，未喷施其他农药，2018年5月16日开始计产。
数据处理与制作图表在office 2016软件中进行，数据分析与差异显著性检验在SPSS25.0软件中进行。
4.6试验结果
4.6.1施用草炭生物有机肥对番茄生物学性状的影响
不同处理对番茄株高、茎粗及叶片的SPAD的影响不同(表1、表1、表3)。施用草炭生物有机肥(BOF)能显著增加番茄植株的株高，BOF显著优于单施化肥(CK2)和不施肥(CK1)(P＝0.05)，优于AOF；施用草炭生物有机肥(BOF)能明显增加番茄植株的茎粗，显著优于CK2、CK1和AOF(P＝0.05)；施用复合微生物肥料(BOF)能显著提高番茄叶片的SPAD值。表明施用草炭生物有机肥可以显著提高和改善番茄的生物学性状。
表1草炭生物有机肥对世纪红冠生物学性状和产量结构的影响
注：CK1：不施肥；CK2：单施化肥(常规用量)；
AOF1：灭活后的草炭生物有机肥(实施例1制备)+化肥(常规用量减去灭活后的草炭生物有机肥所含养分)；
BOF1：草炭生物有机肥(实施例1制备)+化肥(常规用量减去草炭生物有机肥所含养分)；
表2草炭生物有机肥对世纪红冠生物学性状和产量结构的影响
注：CK1：不施肥；CK2：单施化肥(常规用量)；
AOF2：灭活后的草炭生物有机肥(实施例2制备)+化肥(常规用量减去灭活后的草炭生物有机肥所含养分)；
BOF2：草炭生物有机肥(实施例2制备)+化肥(常规用量减去草炭生物有机肥所含养分)；
表3草炭生物有机肥对世纪红冠生物学性状和产量结构的影响
注：CK1：不施肥；CK2：单施化肥(常规用量)；
AOF3：灭活后的草炭生物有机肥(实施例3制备)+化肥(常规用量减去灭活后的草炭生物有机肥所含养分)；
BOF3：草炭生物有机肥(实施例3制备)+化肥(常规用量减去草炭生物有机肥所含养分)；
4.6.2施用草炭生物有机肥对番茄果实品质的影响
不同处理对番茄果实的Vc含量、有机酸含量及可溶性糖含量的影响不同(表4、表5、表6)。施用草炭生物有机肥(BOF)能显著增加番茄果实的可溶性糖含量，其中BOF显著优于CK2、CK1和AOF(P＝0.05)，增加番茄果实中可溶性糖含量与有机酸含量的比值(BOF>AOF>CK1>CK2)，表明草炭生物有机肥可以改善番茄果实品质。
表4草炭生物有机肥对世纪红冠果实品质的影响
注：CK1：不施肥；CK2：单施化肥(常规用量)；
AOF1：灭活后的草炭生物有机肥(实施例1制备)+化肥(常规用量减去灭活后的草炭生物有机肥所含养分)；
BOF1：草炭生物有机肥(实施例1制备)+化肥(常规用量减去草炭生物有机肥所含养分)；
表5草炭生物有机肥对世纪红冠果实品质的影响
注：CK1：不施肥；CK2：单施化肥(常规用量)；
AOF2：灭活后的草炭生物有机肥(实施例2制备)+化肥(常规用量减去灭活后的草炭生物有机肥所含养分)；
BOF2：草炭生物有机肥(实施例2制备)+化肥(常规用量减去草炭生物有机肥所含养分)；
表6草炭生物有机肥对世纪红冠果实品质的影响
注：CK1：不施肥；CK2：单施化肥(常规用量)；
AOF3：灭活后的草炭生物有机肥(实施例3制备)+化肥(常规用量减去灭活后的草炭生物有机肥所含养分)；
BOF3：草炭生物有机肥(实施例3制备)+化肥(常规用量减去草炭生物有机肥所含养分)；
4.6.3施用草炭生物有机肥对番茄果实产量的影响
不同处理对番茄果实产量影响不同，施用草炭生物有机肥均能显著提高黄瓜果实的产量(表7、表8、表9)。以表7为例(表8、表9有类似的规律)：施用草炭生物有机肥比未施肥每亩增产1186.7公斤，增产率32.9％；比单施化肥每亩增产533.3公斤，增产率12.5％，比AOF每亩增产506.7公斤，增产率11.8％。
进一步对表7的产量结果进行方差分析发现，处理间的F(1376.18)>F 0.01(9.78)>F0.05(4.76)；而重复间的F(5.12)<F0.05(5.14)<F0.01(10.92)，即处理间差异性显著(P＝0.05)，重复内在P＝0.05和P＝0.01下差异均不显著。同时，比较处理间与重复间的差异性发现，F处理(1376.18)>F重复(5.12)，即处理间的差异显著大于重复间的变异，表明不同施肥处理对于番茄果实产量的影响存在显著差异。
对产量进行处理间差异性显著性分析，结果表明：在P＝1％下，BOF与其它处理比较均具有显著性差异。
表7施用NJAU4742草炭生物有机肥对番茄果实产量的影响
注：CK1：不施肥；CK2：单施化肥(常规用量)；
AOF1：灭活后的草炭生物有机肥(实施例1制备)+化肥(常规用量减去灭活后的生物有机肥所含养分)；
BOF1：草炭生物有机肥(实施例1制备)+化肥(常规用量减去生物有机肥所含养分)；
表8施用NJAU4742草炭生物有机肥对番茄果实产量的影响
注：CK1：不施肥；CK2：单施化肥(常规用量)；
AOF1：灭活后的草炭生物有机肥(实施例2制备)+化肥(常规用量减去灭活后的生物有机肥所含养分)；
BOF1：草炭生物有机肥(实施例2制备)+化肥(常规用量减去生物有机肥所含养分)；
表9施用NJAU4742草炭生物有机肥对番茄果实产量的影响
注：CK1：不施肥；CK2：单施化肥(常规用量)；
AOF3：灭活后的草炭生物有机肥(实施例3制备)+化肥(常规用量减去灭活后的生物有机肥所含养分)；
BOF3：草炭生物有机肥(实施例3制备)+化肥(常规用量减去生物有机肥所含养分)。

Claims (12)

1.含木霉和解淀粉芽孢杆菌的草炭生物有机肥的制备方法，其特征在于，所述的制备方法选自以下任意一种方法：
方法一包括以下步骤：
(1)向草炭中加入适量水和碱性物质调剂草炭pH至4.5～6.5，加入碳源，加入氨基酸稀释液调节含水量至40％～50％，接入保藏号为CGMCC NO.12166的贵州木霉(Trichodermaguizhouense)NJAU4742发酵液后进行好氧堆肥，发酵7～20天获得含木霉的草炭生物有机肥；
(2)向草炭中加入适量水和碱性物质调节草炭pH至6.5～7.5，加入碳源，加入氨基酸稀释液调节含水量至40％～50％，接入保藏号为CGMCC NO.5808的解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)SQR9种子液后进行好氧堆肥，发酵7～20天获得含解淀粉芽孢杆菌的草炭生物有机肥；
(3)将所述的含木霉的草炭生物有机肥和所述的含芽孢杆菌的草炭生物有机肥按照1:0.5～1.5的比例混合均匀，获得含木霉和解淀粉芽孢杆菌的草炭生物有机肥；
方法二包括以下步骤：
(1)向草炭中加入适量水和碱性物质调剂草炭pH至4.5～6.5，加入碳源，加入氨基酸稀释液调节含水量至40％～50％，接入保藏号为CGMCC NO.12166的贵州木霉(Trichodermaguizhouense)NJAU4742发酵液后进行好氧堆肥，发酵7～20天获得含木霉的草炭生物有机肥；
(2)将孢子数量达到1010个/mL的解淀粉芽孢杆菌SQR9液体菌种按0.2％的量加入到所述的含木霉的草炭生物有机肥中，充分混匀，控制水分低于30％，获得含木霉和解淀粉芽孢杆菌的草炭生物有机肥；
方法三包括以下步骤
(1)向草炭中加入适量水和碱性物质调节草炭pH至6.5～7.5，加入碳源，加入氨基酸稀释液调节含水量至40％～50％，接入保藏号为CGMCC NO.5808的解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)SQR9种子液后进行好氧堆肥，发酵7～20天获得含解淀粉芽孢杆菌的草炭生物有机肥；
(2)按照201610151640.1中公开的方法利用贵州木霉NJAU4742直接发酵作物秸秆制备木霉固体菌种，所制备的木霉固体菌种中木霉浓度为108cfu/ml；
(3)将步骤(2)制备的木霉固体菌种按5％的量加入到含解淀粉芽孢杆菌的草炭生物有机肥中，充分混匀，控制水分低于30％，获得含木霉和解淀粉芽孢杆菌的草炭生物有机肥。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述的含木霉的草炭生物有机肥制备方法包括：向草炭中加入适量水和碱性物质调剂草炭pH至4.5～6.5，待pH稳定后向其中加入碳源，加入氨基酸稀释液调节含水量至40％～50％，混匀，静置20～24小时，加入保藏号为CGMCC NO.12166的贵州木霉(Trichoderma guizhouense)NJAU4742发酵液，充分混匀后堆放成条垛进行好氧堆肥，发酵7～20天获得含木霉的草炭生物有机肥；其中所述的碳源的加入量为调节pH后的草炭质量的5％～10％；所述的NJAU4742发酵液中有效菌数量达到109CFU·mL-1，NJAU4742发酵液的添加量为调节pH后的草炭重量的5％～15％。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述的含解淀粉芽孢杆菌的草炭生物有机肥制备方法包括：向草炭中加入适量水和碱性物质调节草炭pH至6.5～7.5，待pH稳定后向其中加入碳源，加入氨基酸稀释液调节含水量至40％～50％，静置20～24小时，加入保藏号为CGMCC NO.5808的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)SQR9种子液，充分混匀后堆放成条垛进行好氧堆肥，发酵7～20天获得含解淀粉芽孢杆菌的草炭生物有机肥；其中所述的碳源的加入量为调节pH后的草炭质量的5％～10％；SQR9种子液中有效菌数量达到109CFU·mL-1，SQR9种子液的添加量为调节pH后的草炭重量的5％～15％。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述的解淀粉芽孢杆菌SQR9液体菌种通过以下方法制备得到：将保存在-80℃冰箱甘油管中的解淀粉芽孢杆菌SQR9菌种，在LB固体培养基上划线活化，置于37℃培养箱中培养过夜，接种SQR9单菌落至LB液体培养基上，然后置于30℃、170rpm摇床上摇12h，再按0.1％(v/v)接种到液体LB培养基后摇36h即获得SQR9发酵液，有效菌数量达到109CFU·mL-1，备用。
5.根据权利要求1～4中任一项所述的制备方法，其特征在于所述的碱性物质为草木灰。
6.根据权利要求1～4中任一项所述的制备方法，其特征在于调节pH时加入水至草炭堆体含水量为30％～40％。
7.根据权利要求1～4所述的制备方法，其特征在于，所述的碳源为米糠或稻壳粉或菇渣粉。
8.根据权利要求1～4所述的制备方法，其特征在于，所述的氨基酸稀释液为用水稀释的全价氨基酸液，全价氨基酸液的加入量为调节pH后的草炭重量的3％～10％。
9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，进行好氧堆肥时当堆温升至50℃进行第一次翻堆；堆制过程中，当堆温不再上升时进行翻堆。
10.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于春季或夏季的堆肥时长为7～15天；秋季或冬季的堆肥时长为15～20天。
11.按照权利要求1～4中任一项所述的方法制备的草炭生物有机肥。
12.权利要求11所述的草炭生物有机肥在促进作物生长和/或提高作物品质中的应用。
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