CN110301291B - 一种羊肚菌菌种的培育方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于食用菌培育技术领域，具体涉及一种羊肚菌菌种的培育方法，包括：母种的制作及培养、原种的制作及培养、培养种的制作及培养。本发明的羊肚菌菌种的培育方法将羊肚菌菌种的培育过程中的各个培养基均作了调整，并且各个培养基的制备方法也都作出调整，培养基中加入了磷酸二氢钾、硫酸镁及玉米粉，使得母种从培养基中吸取更多的营养物质，避免菌种在后期的繁育过程中表现形态和母本不一致而影响产量。

Description

一种羊肚菌菌种的培育方法
技术领域
本发明属于食用菌培育技术领域，具体涉及一种羊肚菌菌种的培育方法。
背景技术
羊肚菌(Morchella)，又称羊肚菜、羊肚蘑等，真菌学分类属盘菌目，羊肚菌科，羊肚菌属。其由羊肚状的可孕头状体菌盖和一个***的菌柄组成，菌盖表面有网状棱的子实层，边缘与菌柄相连，菌柄圆筒状、中空，表面平滑或有凹槽，形态酷似羊肚而得名。羊肚菌富含人体必需的8种氨基酸及维生素类，特别是羊肚菌含有C-3-氨基-L-脯氨酸、氨基异丁酸和2,4-二氨基异丁酸等稀有氨基酸，因而具有其独特风味，是世界上最著名的珍贵食用菌之一。它的人工驯化种植一直是国内、外菌物学家致力研究探索的课题之一。
羊肚菌一般生长在海拔2100～3400米的林区，因对生长发育所要求的环境比较严格，因此实现人工种植有一定的难度。目前，羊肚菌的通用栽培方法主要有：(1)栽培料配方栽培；(2)室内脱袋栽培；(3)室外脱袋栽培。然而，采用上述通用培育方法培育羊肚菌的过程中，会遇到同一细胞的菌丝细胞表现不同，在同一条件下菌丝生长却有不同的表现，特别是每接种一次都与前次菌丝生长不一样，无论菌丝的长短、粗细、快慢、颜色、长势以及最后的表现都不同，哪怕是原来用过的，或是第一年出过菇的老菌种也是如此，采取同样的原料、配方、操作方法，同等的温湿度和内外界条件，却表现出较大的差距，因此，如何培育出性能稳定的菌种，使得后期产品质量稳定显得尤为重要。
发明内容
因此，本发明要解决的技术问题在于克服现有技术中羊肚菌菌种稳定性差的问题，从而提供一种性能稳定的羊肚菌菌种培育方法。
为解决上述技术问题，本发明提供了一种羊肚菌菌种的培育方法，包括：
(1)母种的制作及培养
A.制作母种培养基：
所述母种培养基的原料组成为，以重量份数计：去皮马铃薯120～180份、葡萄糖11～18份、琼脂12～16份、磷酸二氢钾0.4～0.6份、硫酸镁0.3～0.5份、玉米粉3～7份；
将所述去皮马铃薯切块，加水煮沸15～20分钟，捣碎后过滤，得到滤液；向上述滤液中加入上述重量份数的葡萄糖、琼脂、磷酸二氢钾、硫酸镁及玉米粉，加热至琼脂完全溶化，离心，取上清液，于0.1MPa压力下高压灭菌30min，取出冷却，即得母种培养基；
B.母种的培养：将野生环境中生长健壮、个大、长势好的羊肚菌子实体去除菌柄，余下的菌盖用体积浓度为70％的酒精表面消毒，并用无菌水冲洗，待干燥后，切取5mm×5mm的菌肉2～3块，接入所述母种培养基中，置于培养箱中培养，直至长成母种；所述培养箱的温度为16℃～20℃；
(2)原种的制作及培养
A.制作原种培养基：
所述原种培养基的原料组成为，以重量份数计：苹果木屑70～80份、麦粒15～20份、石灰0.5～1.5份、石膏0.5～1.5份、土壤3～7份；
将上述重量份的各组分混合，加水搅拌，控制水分的含量为60～70％，于0.2MPa压力下高压灭菌1.5～2h，取出冷却，即得原种培养基；
B.原种的培养：在接种箱中，将所述母种接种到所述原种培养基中；所述接种箱的温度保持在25℃～30℃；
(3)培养种的制作及培养
A.制作培养种的液体培养基：
所述原种培养基的原料组成为，以重量份数计，尿素6～10份，甘蔗渣10～12份，麦粒32～38份、葡萄糖6～9份、酵母膏10～15份、玉米浆5～10份、氯化钙8～10份、柠檬酸铁3～6份、氯化钙3～5份，石膏1～5份；
将上述重量份的各组分混合，滤渣，得到培养液，于0.15Pa压力下灭菌10～20min，取出冷却，即得到液体培养基；
B.在接种箱中，将所述原种培养基加入到所述液体培养基中，即获得培养种；所述接种箱的温度保持在15℃～20℃。
进一步地，所述羊肚菌菌种的培育方法还包括将步骤(3)得到的所述培养种移置培养室中培养的步骤。
更进一步地，所述培养室的温度为8℃～18℃、空气相对湿度≤65％。
本发明的技术方案，具有如下优点：
(1)本发明将羊肚菌菌种的培育过程中的各个培养基均作了调整，并且各个培养基的制备方法也都作出调整，培养基中加入了磷酸二氢钾、硫酸镁及玉米粉，使得母种从培养基中吸取更多的营养物质，有效避免菌种在后期的繁育过程中表现形态和母本不一致，影响产量。
(2)将培养基制成液体培养基，并加入更多稳定性和富含养分的物质，如尿素、麦麸等，不容易被杂菌侵入，因此，其能够保持菌种的稳定性，避免菌种在后期的繁育过程中表现形态和母本不一致，影响产量。
(3)选用野生环境中生长健壮、个大、长势好的羊肚菌制作母种，更进一步提高了菌种的稳定性。
(4)对各步的培养基进行高压灭菌，杜绝了细菌等的侵入，提高了菌种的稳定性；控制接种箱及培养室的温度，为菌种的快速生长提供了有利条件。
具体实施方式
下面将对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。此外，下面所描述的本发明不同实施方式中所涉及的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互结合。
实施例1
本实施例提供一种羊肚菌菌种的培育方法，具体步骤如下：
(1)母种的制作及培养
A.制作母种培养基：分别称取去皮马铃薯160g、葡萄糖16g、琼脂14g、磷酸二氢钾0.5g、硫酸镁0.4g、玉米粉5g，将马铃薯去皮、洗涤、切块，加水煮沸18分钟，捣碎后过滤，得到滤液；向上述滤液中加入上述质量的葡萄糖、琼脂、磷酸二氢钾、硫酸镁及玉米粉，加热至琼脂完全溶化，离心，取上清液，于0.1MPa压力下高压灭菌30min，取出冷却，即得母种培养基；
B.母种的培养：将野生环境中生长健壮、个大、长势好的羊肚菌子实体去除菌柄，余下的菌盖用体积浓度为70％的酒精表面消毒，并用无菌水冲洗。待干燥后，切取5mm×5mm的菌肉2块，接入所述母种培养基中，置于温度为18℃的培养箱中培养，直至长成母种。
(2)原种的制作及培养
A.制作原种培养基：分别称取：苹果木屑75g、麦粒18g、石灰1g、石膏1g、土壤5g，将上述质量的各组分混合，加水搅拌，控制水分的含量为65％，于0.2MPa压力下高压灭菌1.8h，取出冷却，即得原种培养基；
B.原种的培养：在温度为28℃的接种箱中，将母种接种到原种培养基中。
(3)培养种的制作及培养
A.制作培养种的液体培养基：分别称取：尿素8g，甘蔗渣11g，麦粒35g、葡萄糖7.5g、酵母膏12.5g、玉米浆7.5g、氯化钙9g、柠檬酸铁4.5g、氯化钙4g，石膏3g，将上述组份混合，滤渣，得到培养液，于0.15Pa压力下灭菌15min，取出冷却，即得到液体培养基；
B.在温度为18℃的接种箱中，将原种接种到所述液体培养基中，即获得培养种，将培养种移置培养室中培养，培养室的温度为12℃、空气相对湿度≤65％。
实施例2
本实施例提供一种羊肚菌菌种的培育方法，具体步骤如下：
(1)母种的制作及培养
A.制作母种培养基：分别称取去皮马铃薯120g、葡萄糖11g、琼脂12g、磷酸二氢钾0.4g、硫酸镁0.3g、玉米粉3g，将马铃薯去皮、洗涤、切块，加水煮沸15分钟，捣碎后过滤，得到滤液；向上述滤液中加入上述质量的葡萄糖、琼脂、磷酸二氢钾、硫酸镁及玉米粉，加热至琼脂完全溶化，离心，取上清液，于0.1MPa压力下高压灭菌30min，取出冷却，即得母种培养基；
B.母种的培养：将野生环境中生长健壮、个大、长势好的羊肚菌子实体去除菌柄，余下的菌盖用体积浓度为70％的酒精表面消毒，并用无菌水冲洗。待干燥后，切取5mm×5mm的菌肉3块，接入所述母种培养基中，置于温度为16℃的培养箱中培养，直至长成母种。
(2)原种的制作及培养
A.制作原种培养基：分别称取：苹果木屑70g、麦粒15g、石灰0.5g、石膏0.5g、土壤3g，将上述质量的各组分混合，加水搅拌，控制水分的含量为70％，于0.2MPa压力下高压灭菌1.5h，取出冷却，即得原种培养基；
B.原种的培养：在温度为25℃的接种箱中，将母种接种到原种培养基中。
(3)培养种的制作及培养
A.制作培养种的液体培养基：分别称取：尿素6g，甘蔗渣10g，麦粒32g、葡萄糖6g、酵母膏10g、玉米浆5g、氯化钙8g、柠檬酸铁3g、氯化钙3g，石膏1g，将上述组份混合，滤渣，得到培养液，于0.15Pa压力下灭菌10min，取出冷却，即得到液体培养基；
B.在温度为15℃的接种箱中，将原种培养基加入到所述液体培养基中，即获得培养种，将培养种移置培养室中培养，培养室的温度为18℃、空气相对湿度≤62％。
实施例3
本实施例提供一种羊肚菌菌种的培育方法，具体步骤如下：
(1)母种的制作及培养
A.制作母种培养基：分别称取去皮马铃薯180g、葡萄糖18g、琼脂16g、磷酸二氢钾0.6g、硫酸镁0.5g、玉米粉7g，将马铃薯去皮、洗涤、切块，加水煮沸20分钟，捣碎后过滤，得到滤液；向上述滤液中加入葡萄糖、琼脂、磷酸二氢钾、硫酸镁及玉米粉，加热至琼脂完全溶化，离心，取上清液，于0.1MPa压力下高压灭菌30min，取出冷却，即得母种培养基；
B.母种的培养：将野生环境中生长健壮、个大、长势好的羊肚菌子实体去除菌柄，余下的菌盖用体积浓度为70％的酒精表面消毒，并用无菌水冲洗，待干燥后，切取5mm×5mm的菌肉3块，接入所述母种培养基中，置于温度为18℃的培养箱中培养，直至长成母种。
(2)原种的制作及培养
A.制作原种培养基：分别称取：苹果木屑80g、麦粒20g、石灰1.5g、石膏1.5g、土壤7g，将上述各组分混合，加水搅拌，控制水分的含量为60％，于0.2MPa压力下高压灭菌2h，取出冷却，即得原种培养基；
B.原种的培养：在温度为30℃的接种箱中，将母种接种到原种培养基中。
(3)培养种的制作及培养
A.制作培养种的液体培养基：分别称取：尿素10g，甘蔗渣12g，麦粒38g、葡萄糖9g、酵母膏15g、玉米浆10g、氯化钙10g、柠檬酸铁6g、氯化钙5g，石膏5g，将上述组份混合，滤渣，得到培养液，于0.15Pa压力下灭菌20min，取出冷却，即得到液体培养基；
B.在温度为20℃的接种箱中，将原种培养基加入到所述液体培养基中，即获得培养种，将培养种移置培养室中培养，培养室的温度为8℃、空气相对湿度≤64％。
经检测，本发明实施例1-3所制得的菌种，长短、粗细、颜色及长势基本相同，稳定性高。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (3)

1.一种羊肚菌菌种的培育方法，其特征在于，包括：
(1)母种的制作及培养
A.制作母种培养基：
所述母种培养基的原料组成为，以重量份数计：去皮马铃薯120～180份、葡萄糖11～18份、琼脂12～16份、磷酸二氢钾0.4～0.6份、硫酸镁0.3～0.5份、玉米粉3～7份；
将所述去皮马铃薯切块，加水煮沸15～20分钟，捣碎后过滤，得到滤液；向上述滤液中加入上述重量份数的葡萄糖、琼脂、磷酸二氢钾、硫酸镁及玉米粉，加热至琼脂完全溶化，离心，取上清液，于0.1MPa压力下高压灭菌30min，取出冷却，即得母种培养基；
B.母种的培养：将野生环境中生长健壮、个大、长势好的羊肚菌子实体去除菌柄，余下的菌盖用体积浓度为70％的酒精表面消毒，并用无菌水冲洗，待干燥后，切取5mm×5mm的菌肉2～3块，接入所述母种培养基中，置于培养箱中培养，直至长成母种；所述培养箱的温度为16℃～20℃；
(2)原种的制作及培养
A.制作原种培养基：
所述原种培养基的原料组成为，以重量份数计：苹果木屑70～80份、麦粒15～20份、石灰0.5～1.5份、石膏0.5～1.5份、土壤3～7份；
将上述重量份的各组分混合，加水搅拌，控制水分的含量为60～70％，于0.2MPa压力下高压灭菌1.5～2h，取出冷却，即得原种培养基；
B.原种的培养：在接种箱中，将所述母种接种到所述原种培养基中；所述接种箱的温度保持在25℃～30℃；
(3)培养种的制作及培养
A.制作培养种的液体培养基：
所述原种培养基的原料组成为，以重量份数计，尿素6～10份，甘蔗渣10～12份，麦粒32～38份、葡萄糖6～9份、酵母膏10～15份、玉米浆5～10份、氯化钙8～10份、柠檬酸铁3～6份、氯化钙3～5份，石膏1～5份；
将上述重量份的各组分混合，滤渣，得到培养液，于0.15Pa压力下灭菌10～20min，取出冷却，即得到液体培养基；
B.在接种箱中，将所述原种培养基加入到所述液体培养基中，即获得培养种；所述接种箱的温度保持在15℃～20℃。
2.根据权利要求1所述的羊肚菌菌种的培育方法，其特征在于，还包括将步骤(3)得到的所述培养种移置培养室中培养的步骤。
3.根据权利要求2所述的羊肚菌菌种的培育方法，其特征在于，所述培养室的温度为8℃～18℃、空气相对湿度≤65％。
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