CN110269872A - 一种中药续断炮制品、炮制方法及检测方法 - Google Patents

一种中药续断炮制品、炮制方法及检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN110269872A
CN110269872A CN201910543418.XA CN201910543418A CN110269872A CN 110269872 A CN110269872 A CN 110269872A CN 201910543418 A CN201910543418 A CN 201910543418A CN 110269872 A CN110269872 A CN 110269872A
Authority
CN
China
Prior art keywords
teasel root
precision
chinese medicine
water
processed product
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201910543418.XA
Other languages
English (en)
Inventor
王建科
李妍
迮薇薇
顾田
吴书亮
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Guizhou University of Traditional Chinese Medicine
Original Assignee
Guizhou University of Traditional Chinese Medicine
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Guizhou University of Traditional Chinese Medicine filed Critical Guizhou University of Traditional Chinese Medicine
Priority to CN201910543418.XA priority Critical patent/CN110269872A/zh
Publication of CN110269872A publication Critical patent/CN110269872A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/17—Systems in which incident light is modified in accordance with the properties of the material investigated
    • G01N21/25—Colour; Spectral properties, i.e. comparison of effect of material on the light at two or more different wavelengths or wavelength bands
    • G01N21/31—Investigating relative effect of material at wavelengths characteristic of specific elements or molecules, e.g. atomic absorption spectrometry
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N5/00—Analysing materials by weighing, e.g. weighing small particles separated from a gas or liquid
    • G01N5/04—Analysing materials by weighing, e.g. weighing small particles separated from a gas or liquid by removing a component, e.g. by evaporation, and weighing the remainder
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/10—Preparation or pretreatment of starting material

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Cosmetics (AREA)

Abstract

本发明涉及一种中药续断炮制品，属于中药炮制技术领域，该炮制方法主要是取续断饮片，加黄酒拌匀闷润后，用文火加热，炒至微带黑色，取出晾凉，筛去碎屑等方法制成，以川续断皂苷Ⅵ、川续断总皂苷、水溶性浸出物、醇溶性浸出物为检测指标的含量测定方法，良好的控制了续断酒炙饮片质量，从而提高了续断的临床疗效。

Description

一种中药续断炮制品、炮制方法及检测方法
技术领域
本发明涉及医药发明领域，具体涉及一种中药续断炮制品、炮制方法及检测方法。
背景技术
续断又名和尚头，为川续断科多年生草本植物川续断Dipsacus asper Wall.exHenry 的干燥根，因能“续折接骨”而得名。其性微温，味苦、辛；归肝、肾经。有补肝肾、 强筋骨、续折伤、止崩漏的功效，可用于治疗肝肾不足、腰膝酸软、风湿痹痛、筋伤骨 折、崩漏、胎漏、跌扑损伤等病症。其中酒续断多用于风湿痹痛、筋伤骨折、跌扑损伤。
续断的主要成分川续断皂苷VI，药理学实验证实，具有止血，促进骨损伤愈合， 降低子宫收缩，补肝肾的作用，临床应用时主要以炮制品入药为主，常用的炮制方法有 酒炙、盐炙、炒炙、制炭、酒麸炙等。
《中国药典》(2015版)中记载的酒炙续断的方法为：取续断片，用黄酒拌匀，闷 透，置锅内用文火加热，炒至微带黑色时，取出，放凉。本品形如续断片，表面浅黑色 或灰褐色，略带酒香气，含川续断皂苷VI不得少于1.5％。《药典》里面记载只有简述 炮制步骤，无黄酒闷润时间、文火炒制的温度时间不确定，缺乏具体炮制参数，炮制过 程不易掌握，导致续断饮片质量不稳定。
现有文献“宋丽.酒炙续断的炮制工艺及质量评价研究.山东大学.2013年”，公开了 酒炙续断炮制工艺及用HPLC测定川续断皂苷VI的含量，该文献以黄酒用量、酒炙温 度和酒炙时间作为炮制的工艺参数。该文献中提出“取续断片，均匀喷以黄酒，黄酒用 量为净药材用量的10-25％，拌匀，保鲜膜密封，防止闷透，转移至炒锅内，于100-190℃ 的炒制6-12min，取出放凉，粉碎，过4号筛，装入自封袋内置密闭容器中备用”的炮 制方法；此技术并未公开黄酒闷润时间，因此续断的有效成分相对偏低，药物疗效受影响。
酒炙续断最佳炮制工艺的研究，“中国医院药学杂志，2008年第28卷第17期”，公开了黄酒用量10％、20％、30％，炮制温度150℃、170℃、190℃，炒制时间6min、8min、10min，但此方法经过试验证实川续断皂苷VI含量偏低，有效成分偏低，药物疗效受 影响。
续断的炮制工艺及其质量控制研究，“湖北中医学院硕士学位论文，陈华曦”，考察了续断黄酒用量、炒制温度、炒制时间三因素对川续断皂苷VI含量的影响，公开了用 10％的黄酒用量，用150℃炒制6min，实验仅有黄酒用量、炒制温度和时间单一参数影 响的方案，并未同时测试黄酒用量、闷润时间、炒制温度、炒制时间对炮制质量的影响， 因此有效成分偏低，药物疗效受影响。
现有文献“宋丽.酒炙续断的炮制工艺及质量评价研究.山东大学.2013年”公开了酒 炙续断炮制工艺及用HPLC测定川续断皂苷VI的含量，该文献也提出了“川续断皂苷 VI的含量测定”方法是使用高效液相色谱仪，该文献中提出对续断的质量评价是将川 续断皂苷VI的含量、指纹图相似度以及抗氧化活性作为炮制工艺品评价指标，公开川 续断皂苷VI的含量测定方法，包括对照品溶液的制备，供试品溶液的制备；对照品溶 液制备方法：取川续断皂苷VI对照品10mg，精密称定，用甲醇溶解并定容于5mL棕 色容量瓶中，摇匀，于4℃冰箱内存储备用。供试品溶液制备：取酒炙续断饮片粉末约 0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密量取甲醇20mL，密塞称重，超声30min，冷却 至室温，称重，甲醇补足失重，摇匀，滤过。精密量取续滤液5mL于25mL容量瓶中， 加流动相稀释至刻度，摇匀，过0.22μm有机微孔滤膜，作为供试品溶液待测。色谱条 件：流动相：水-乙腈(70:30)；流速1mL/min；柱温30℃；进样量：20μL；检测波长 212nm。该文献并未公开川续断总皂苷、水溶性浸出物、醇溶性浸出物的含量测定方法， 因此考察指标偏少，不利于续断的质量控制。
酒炙续断最佳炮制工艺的研究，“中国医院药学杂志2008年第28卷第17期”，公 开了川续断皂苷VI的含量测定，具体方法色谱条件是：流动相﹕乙腈-水(30:70)；检 测波长：212nm；流速0.8mL/min；柱温28℃；理论塔板数按川续断皂苷VI计算不低 于3000。对照品溶液的制备：精密称取川续断皂苷VI对照品适量，加甲醇制成每1mL 含1.5mg的溶液。精密量取1mL，置10mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得 对照品溶液。供试品溶液的制备：取炮制后的川续断细粉约0.5g，精密称定，置具塞锥 形瓶中，精密加入甲醇25mL，放冷，再称定，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过。 精密量取续断滤液5mL，置50mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶 液。并未指出把川续断总皂苷、水溶性浸出物、醇溶性浸出物的含量测定也作为质量指 标，因此考察指标偏少，不利于续断的质量控制。
高效液相色谱法测定续断药材中川续断皂苷VI的含量.中国中医药科学院重要研究所，谭洪根，林生，张启伟，吉力等的文献中公开了测定方法：色谱条件：柱温35℃； 流动相为乙腈-水(30:70)；检测波长212nm；流速1mL/min；进样量20μL；对照品溶 液的制备：精密称取川续断皂苷VI对照品7.64mg，置5mL量瓶中，加流动相至刻度， 摇匀，精密量取1mL，置10mL量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，使成每1mL含川续 断皂苷VI0.1528mg的对照品溶液。供试品溶液制备：取药材粉末0.5g，精密称定，置 具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，密塞，称定重量，超声处理30min，放冷，称定 重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取滤液1mL，置10mL量瓶中，加 流动相稀释至刻度，摇匀，用0.45μm滤膜滤过，即得。样品测定：将对照品溶液和供 试品溶液分别注入高效液相色谱仪，计算样品中川续断皂苷VI的含量。因流动相的问 题色谱容易出现拖尾因子。
因此，本发明为了解决上述技术问题，研究了一种控制黄酒用量、闷润时间、炒制时间及温度的续断炮制方法，能有效的提高续断有效成分的含量；研究了以川续断皂苷Ⅵ、川续断总皂苷、水溶性浸出物、醇溶性浸出物的含量质量控制指标，使续断酒炙饮 片质量的稳定，从而保证续断临床疗效的发挥。
发明内容
针对现有的问题，本发明的目的是提供一种中药续断炮制品。
本发明的另一目的是提供一种中药续断炮制品的炮制方法。
本发明的另一目的是提供一种中药续断炮制品的检测方法。
本发明所述的一种中药续断炮制品，包括以下步骤：取续断饮片，加黄酒拌匀，闷润后，用文火加热，炒至微带黑色，炒制完成后，取出晾凉，筛去碎屑。
本发明所述中药续断炮制品，其炮制方法中黄酒的用量为续断饮片重量的5％～20％。
优选的，本发明所述中药续断炮制品，其炮制方法中黄酒的用量为续断饮片重量的 10％～15％。
本发明所述中药续断炮制品，其炮制方法中所述闷润时间为60分钟～150分钟。
优选的，所述中药续断炮制品，其炮制方法中所述闷润时间为90分钟～120分钟。
本发明所述中药续断炮制品，其炮制方法中所述炒制温度120℃～180℃。
优选的，所述中药续断炮制品，其炮制方法中所述炒制温度140℃～160℃。
本发明所述中药续断炮制品，其炮制方法中所述炒制时间8分钟～12分钟。
优选的，所述中药续断炮制品，其炮制方法中所述炒制时间10分钟。
本发明所述炮制品的质量检测方法是以测定川续断皂苷Ⅵ、川续断总皂苷、水溶性 浸出物、醇溶性浸出物的含量为指标；川续断皂苷Ⅵ、川续断总皂苷、水溶性浸出物、 醇溶性浸出物的含量测定方法为：
(一)川续断皂苷Ⅵ含量测定方法如下：
色谱条件
检测波长为206nm，流动相为乙腈-0.20％磷酸水(30:70)，流速为1mL/min，柱温为30℃，进样量为20μL；
对照品溶液的制备
取适量的川续断皂苷VI对照品，精密称定，先加入少量甲醇溶解，再加入甲醇制成浓度为1.5mg/mL的溶液，精密量取1mL，置10mL量瓶中，加流动相乙腈-0.20％磷 酸水(30:70)稀释至刻度，摇匀，即得；
供试品溶液的制备
称取续断细粉约0.5g，精密称定，置50mL具塞锥形瓶中，精密加入90％甲醇15mL，密塞，精密称重，回流提取3次，每次30min，放冷，再称定重量，用90％甲醇补足减 失的重量，摇匀，滤过，精密取续滤液1mL，置10mL量瓶中，用流动相稀释至刻度， 摇匀，以0.45μm微孔滤膜滤过，即得。
测定法：分别取样品溶液及对照品溶液20μL注入高效液相色谱仪测峰面积。
(二)川续断总皂苷含量测定方法如下：
对照品溶液的制备
精密称取川续断皂苷VI对照品5.65mg，加甲醇定容至25mL，得0.226mg/mL的标 准品溶液。
供试品溶液的制备
取续断粉末约0.3g，精密测定，加入60mL量70％乙醇，超声提取50min，滤过， 滤液置100mL容量瓶中，加入70％乙醇至刻度线，摇匀，即得。
显色条件
精密吸取供试品0.3mL于10mL的比色管中沸水浴挥干溶剂，精密加入2mL甲醇 及3mL浓硫酸，密塞，摇匀，置95℃恒温水浴中加热20min，取出放入冰水浴中冷却 5min，摇匀。最大吸收波长528nm出测定吸光度。
测定法：分别精密吸取上述对照品溶液和试品溶液适量于具塞试管中，在最大吸收 波长528nm处测定吸光度。
(三)水浸出物测定方法
取续断粉末约2g，精密称定，置100mL的锥形瓶中，精密加蒸馏水50mL，密塞， 称定重量，静置1小时后，连接回流冷凝管，加热至沸腾，并保持微沸1小时。放冷后， 取下锥形瓶，密塞，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取滤液25mL， 置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小时，置干燥器中冷却 30分钟，迅速精密称定重量。
(四)醇浸出物测定方法
提取溶剂为50％乙醇。取续断粉末约2g，精密称定，置100mL的锥形瓶中，精密 加50％乙醇50mL，密塞，称定重量，静置1小时后，连接回流冷凝管，加热至沸腾， 并保持微沸1小时。放冷后，取下锥形瓶，密塞，再称定重量，用水补足减失的重量， 摇匀，滤过，精密量取滤液25mL，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小时，置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量。
本发明提供的中药续断炮制品与现有技术相比具有以下优点：
1、现有技术中公开了炮制步骤，但对黄酒闷润时间、文火炒制的温度和炒制时间未确定，本发明明确了黄酒闷润时间、文火炒制的温度和炒制时间，解决了因炮制参数 不明确而导致续断饮片有效成分偏低，质量不稳定的问题。
2、本发明与对比例相比，本发明川续断皂苷VI含量、川续断总皂苷、水溶性浸出物、醇溶性浸出物均高于对比例。
3、现有技术中对产品的检测方法并未对川续断总皂苷、水溶性浸出物、醇溶性浸出物的含量测定方法四个指标进行含量测定，因此考察指标偏少，不利于续断的质量控制，而本发明是对四个指标进行含量测定，有效的控制了产品质量。
4、本发明检测方法稳定性、重复性、线性关系良好。
附图说明：
图1：川续断皂苷VI标准曲线图
图2：川续断总皂苷标准曲线
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1取续断饮片，加10％黄酒拌匀，闷润60分钟后，用120℃炒制8分钟，炒制完成后，取出晾凉，筛去碎屑。
实施例2取续断饮片，加10％黄酒拌匀，闷润90分钟后，用150℃炒制10分钟，炒制完成后，取出晾凉，筛去碎屑。
实施例3取续断饮片，加10％黄酒拌匀，闷润120分钟后，用170℃炒制12分钟，炒制完成后，取出晾凉，筛去碎屑。
实施例4取续断饮片，加15％黄酒拌匀，闷润60分钟后，用150℃炒制12分钟，炒制完成后，取出晾凉，筛去碎屑。
实施例5取续断饮片，加15％黄酒拌匀，闷润90分钟后，用170℃炒制8分钟，炒制完成后，取出晾凉，筛去碎屑。
实施例6取续断饮片，加15％黄酒拌匀，闷润120分钟后，用120℃炒制10分钟，炒制完成后，取出晾凉，筛去碎屑。
实施例7取续断饮片，加20％黄酒拌匀，闷润60分钟后，用170℃炒制10分钟，炒制完成后，取出晾凉，筛去碎屑。
实施例8取续断饮片，加20％黄酒拌匀，闷润90分钟后，用120℃炒制12分钟，炒制完成后，取出晾凉，筛去碎屑。
实施例9取续断饮片，加20％黄酒拌匀，闷润120分钟后，用150℃炒制8分钟，炒制完成后，取出晾凉，筛去碎屑。
实施例10取续断饮片，加15％黄酒拌匀，闷润60分钟后，用120℃炒制8分钟，炒制完成后，取出晾凉，筛去碎屑。
实施例11取续断饮片，加15％黄酒拌匀，闷润90分钟后，用120℃炒制8分钟，炒制完成后，取出晾凉，筛去碎屑。
实施例12取续断饮片，加15％黄酒拌匀，闷润120分钟后，用170℃炒制10分钟，炒制完成后，取出晾凉，筛去碎屑。
实施例13取续断饮片，加5％黄酒拌匀，闷润60分钟后，用150℃炒制10分钟，炒制完成后，取出晾凉，筛去碎屑。
实施例14取续断饮片，加5％黄酒拌匀，闷润90分钟后，用150℃炒制10分钟，炒制完成后，取出晾凉，筛去碎屑。
实施例15取续断饮片，加5％黄酒拌匀，闷润120分钟后，用150℃炒制10分钟，炒制完成后，取出晾凉，筛去碎屑。
实施例16取续断饮片，加5％黄酒拌匀，闷润60分钟后，用170℃炒制12分钟，炒制完成后，取出晾凉，筛去碎屑。
实施例17取续断饮片，加5％黄酒拌匀，闷润90分钟后，用170℃炒制12分钟，炒制完成后，取出晾凉，筛去碎屑。
实施例18取续断饮片，加15％黄酒拌匀，闷润120分钟后，用130℃炒制12分钟，炒制完成后，取出晾凉，筛去碎屑。
实施例19取续断饮片，加5％黄酒拌匀，闷润60分钟后，用130℃炒制8分钟，炒制完成后，取出晾凉，筛去碎屑。
实施例20取续断饮片，加5％黄酒拌匀，闷润90分钟后，用160℃炒制8分钟，炒制完成后，取出晾凉，筛去碎屑。
实施例21取续断饮片，加5％黄酒拌匀，闷润120分钟后，用180℃炒制8分钟，炒制完成后，取出晾凉，筛去碎屑。
实施例22取续断饮片，加10％黄酒拌匀，闷润60分钟后，用130℃炒制10分钟，炒制完成后，取出晾凉，筛去碎屑。
实施例1-22按实施例23检测方法检测
实施例23
川续断皂苷Ⅵ、川续断总皂苷、水溶性浸出物、醇溶性浸出物的含量为指标；具体含量测定方法为：
(一)川续断皂苷Ⅵ含量测定方法：
色谱条件
检测波长为206nm，流动相为乙腈：0.20％磷酸水按体积比为30:70，流速为1mL/min， 柱温为30℃，进样量为20μL；
对照品溶液的制备
取适量的川续断皂苷VI对照品，精密称定，先加入少量甲醇溶解，再加入甲醇制成浓度为1.5mg/mL的溶液，精密量取1mL，置10mL量瓶中，加流动相乙腈-0.20％磷 酸水(30:70)稀释至刻度，摇匀，即得；
供试品溶液的制备
称取续断细粉约0.5g，精密称定，置50mL具塞锥形瓶中，精密加入90％甲醇15mL，密塞，精密称重，回流提取3次，每次30min，放冷，再称定重量，用90％甲醇补足减 失的重量，摇匀，滤过，精密取续滤液1mL，置10mL量瓶中，用流动相稀释至刻度， 摇匀，以0.45μm微孔滤膜滤过，即得；
测定法：分别取取样品溶液及对照品溶液20μL注入高效液相色谱仪测峰面积；
(二)川续断总皂苷含量测定方法：
对照品溶液的制备
精密称取川续断皂苷VI对照品5.65mg，加甲醇定容至25mL，得0.226mg/mL的标 准品溶液；
供试品溶液的制备
取续断粉末约0.3g，精密测定，加入60mL量70％乙醇，超声提取50min，滤过， 滤液置100mL容量瓶中，加入70％乙醇至刻度线，摇匀，即得；
显色条件
精密吸取供试品0.3mL于10mL的比色管中沸水浴挥干溶剂，精密加入2mL甲醇 及3mL浓硫酸，密塞，摇匀，置95℃恒温水浴中加热20min，取出放入冰水浴中冷却 5min，摇匀，最大吸收波长528nm处测定吸光度；
测定法：分别精密吸取上述对照品溶液和供试品溶液适量于具塞试管中，在最大吸 收波长528nm处测定吸光度；
(三)水浸出物测定方法
按照《中国药典》2015版浸出物测定方法项下的热浸法操作。取续断粉末约2g， 精密称定，置100mL的锥形瓶中，精密加蒸馏水50mL，密塞，称定重量，静置1小时 后，连接回流冷凝管，加热至沸腾，并保持微沸1小时；放冷后，取下锥形瓶，密塞， 再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取滤液25mL，置已干燥至恒 重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小时，置干燥器中冷却30分钟，迅速 精密称定重量；
(四)醇浸出物测定方法
提取溶剂为50％乙醇，取续断粉末约2g，精密称定，置100mL的锥形瓶中，精密 加50％乙醇50mL，密塞，称定重量，静置1小时后，连接回流冷凝管，加热至沸腾， 并保持微沸1小时，放冷后，取下锥形瓶，密塞，再称定重量，用水补足减失的重量， 摇匀，滤过，精密量取滤液25mL，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于 105℃干燥3小时，置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量。
本发明是通过以下实验筛选而来，具体实验方法如下：
实验例1川续断皂苷Ⅵ含量测定方法
1样品含量的测定方法
【仪器】UltiMate 3000高效液相色谱仪(美国赛默飞)；TU－1810型紫外－可见分光光度仪(北京普析通用有限责任公司)；数显恒温水浴锅(常州澳华仪器有限公司)；AUW220D型全自动电子天平(苏州岛津仪器有限公司)；金诺JT5003型全自动天平(余 姚金诺天平仪器有限公司)；中药粉碎机(天津泰斯特仪器有限公司)；实验室超纯水机 (四川沃特尔水处理设备有限公司)。
【试剂】甲醇为色谱纯(天津市科密欧化学试剂有限公司，20160122)、乙腈为色 谱纯(天津市科密欧化学试剂有限公司，20160104)；无水乙醇为分析纯(天津市富于 精细化工有限公司，20160111)、甲醇为分析纯(天津市富于精细化工有限公司， 20160113)、磷酸为分析纯(天津市富于精细化工有限公司，20160712)；硫酸为分析纯 (国药集团化学试剂有限公司，20160303)；水为超纯水及蒸馏水。
【药材】续断药材采自贵州同济堂中药材种植有限公司续断种植基地(威宁县二塘镇梅花村)，经贵州中医药大学生药教研室魏升华副教授鉴定为续断科植物川续断Dipsacus asper Wall.ex Henry的干燥根。
2方法与结果
2.1色谱条件考察
2.1.1波长考察
称取续断粉末0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入甲醇25mL，密塞，精密称 重，超声处理30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密 取续滤液1mL，至10mL容量瓶内，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得。分别取样品溶 液及对照品溶液，采用紫外可见分光光度法进行全波长扫描。结果见表1、表2。
表1川续断皂苷VI波长扫描结果表
表2续断样品波长扫描结果表
结果表明，川续断皂苷VI对照品溶液在206nm处有最大吸收，样品在207nm处有 最大吸收，故选206nm为测定波长。
2.1.2波长选择
参照“2.1.1”项下方法制备供试品溶液，
流动相用乙腈-水(30:70)，流速1mL/min，柱温30℃，进样量20μL，分别在206 nm、207 nm、212nm(中国药典)波长下测定样品峰面积。结果见表3。
表3波长选择结果表
结果表明，波长为206nm时峰面积高。因此，本发明用206nm作为川续断皂苷VI 含量测定的检测波长。
2.1.3色谱柱考察
考察时检测波长用206nm，流动相乙腈-水(30:70)，流速1mL/min，柱温30？，进 样量20μL，色谱柱类型有：WondaSil(4.6×150mm，5μm)C18色谱柱；Hedera(4.6×150mm， 5μm)C18色谱柱；Agilent Eclipse(4.6×250mm，5μm)C18。结果见表4。
表4色谱柱考察结果表
结果表明，WondaSil柱的峰形不好，而且拖尾严重，Hedera柱的峰形很乱，分离 度和拖尾因子也达不到要求，Agilent Eclipse(4.6×250mm，5μm)C18柱的峰形好分离 度和拖尾因子也达到要求，所以选择Agilent Eclipse(4.6×250mm，5μm)C18作为本发 明的色谱柱。
2.1.4流动相的考察
考察时检测波长用206nm，流动相用甲醇-水(30:70)、乙腈-水(30:70)和乙腈-0.2％ 磷酸水(30:70)，流速1mL/min，柱温30℃，进样量20μL。结果见表5。
表5流动相考察结果表
结果表明，用甲醇-水(30:70)时未检测出信号，用乙腈-水(30:70)可以检测出信号，但出现拖尾现象，所以考虑用乙腈-0.2％磷酸水(30:70)来改善拖尾现象。
2.1.5磷酸用量考察
考察时检测波长206nm，流动相乙腈-磷酸水(30:70)，流速1mL/min，柱温30℃， 进样量20μL。结果见表6。
表6磷酸用量考察结果表
结果表明，在加入磷酸后，拖尾因子有所改善，且用乙腈-0.20％磷酸水时，能很好的改善拖尾因子。
2.1.6柱温考察
考察时检测波长用206nm，流动相用，流速1mL/min，进样量20μL。在不同柱温 情况下进样，结果见表7。
表7柱温考察结果
结果表明，柱温为30℃时，峰面积较大，且峰形好，用SPSS软件处理P＝0.308＞0.05，表示柱温对续断的含量的影响没有显著性差异，方差分析见表8；所以选择柱温 为30℃。
表8柱温方差分析表
2.2提取工艺优选
2.2.1提取方法考察
称续断粉末约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，密塞，精 密称重，分别用回流提取及超声方法提取30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失 的重量，摇匀，滤过，精密取续滤液1mL，置10mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇 匀，以0.45μm微孔滤膜滤过，即得。结果见表9。
表9提取方法考察结果
结果表明，回流提取的峰面积高于超声提取的峰面积，所以选择回流提取方法作为 本发明的提取方法提取。
2.2.2提取工艺正交试验
选择溶剂浓度、溶剂用量、提取时间、提取次数4个因素各选3个水平进行试验， 选用L9(34)正交表安排试验。取续断粉末27份，各份约0.5g，精密称定，置具塞锥 形瓶中，按提取工艺正交试验计划表加入相应的溶剂，回流提取不同时间及次数，放冷， 再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密取续滤液1mL，置10mL量瓶 中，用流动相稀释至刻度，摇匀，以0.45μm微孔滤膜滤过，即得。在检测波长为206nm， 流动相为乙腈-0.20％磷酸水(30:70)，流速为1mL/min，柱温为30？，进样量为20μL。 结果见表10至表13。
表10正交试验因素水平表
表11正交试验计划表
表12直观分析表
从直观分析中可以得出影响川续断皂苷VI含量的提取因素大小为D>B>A＞C，说明提取次数对川续断皂苷VI的影响最大，提取时间影响最小，最佳提取工艺为A2B1C2D3。
表13提取工艺的方差分析表
从方差分析表可以看出B、D这两个提取因素对川续断皂苷VI含量有显著性影响，A、 C两个提取因素无显著性差异，考虑方便操作，节省时间，对最佳的提取方法进行验证，确定其最优工艺为A2B1C1D3，即用90％甲醇15mL，回流提取3次，每次提取30min。
通过筛选实验，最终确定优选的川续断皂苷Ⅵ含量测定方法为：
色谱条件与***适用性试验：检测波长为206nm，流动相为乙腈-0.20％磷酸水(30:70)，流速为1mL/min，柱温为30℃，进样量为20μL。
对照品溶液的制备：取适量的川续断皂苷VI对照品，精密称定，先加入少量甲醇溶解，再加入甲醇制成浓度为1.5mg/mL的溶液。精密量取1mL，置10mL量瓶中，加 流动相乙腈-0.20％磷酸水(30:70)稀释至刻度，摇匀，即得。
供试品溶液的制备：取续断饮片，加10％黄酒拌匀，闷润90分钟后，用170℃炒 制12分钟，炒制完成后，取出晾凉，筛去碎屑。得续断酒炙饮片，研成粉末，称取续 断细粉约0.5g，精密称定，置50mL具塞锥形瓶中，精密加入90％甲醇15mL，密塞， 精密称重，回流提取3次，每次30min，放冷，再称定重量，用90％甲醇补足减失的重 量，摇匀，滤过，精密取续滤液1mL，置10mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀， 以0.45μm微孔滤膜滤过，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μL，注入高效液相色谱仪进行测定。
2.3线性关系考察
取川续断皂苷VI对照品适量，精密称定，以甲醇溶解制成1.505mg/mL的川续断皂苷VI的对照品溶液，分别精密吸取0.05、0.2、0.8、1.2、1.8mL于2mL的容量瓶中， 加入甲醇至刻度线，分别取20μL注入高效液相色谱仪，在“1”项色谱条件下测峰面积。 进样质量为横坐标(X)，以峰面积为纵坐标(Y)，求得线性回归方程：y＝4.6166x+1.0383，R＝0.9998。结果表明川续断皂苷VI在0.753μg～27.09μg范围内与峰面积呈良好的线性 关系。结果见表14，图1。
表14标准曲线绘制数据表
2.4重复性试验
取同一批次续断药材粉末6份，每份约0.5g，精密称定。按“2.2”项方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件，分别进样测定。川续断皂苷VI的含量的RSD值为 2.19％，表明方法重现性良好，符合分析要求。结果见表15。
表15重复性试验结果表
2.5稳定性试验
精密吸取同一供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件，分别于0，2，4，6，8，10， 12h进行测定，计算川续断皂苷VI峰面积的RSD值为2.49％，表明供试品溶液在12h 内稳定。结果见表16。
表16稳定性试验结果表
2.6加样回收试验
取同一批续断药材粉末6份，每份约0.25g，精密称定。加入川续断皂苷VI对照 品1.900mg，按“2.2”项方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进行测定。结果 川续断皂苷VI的平均加样回收率为99.59％，RSD值为1.66％，表明方法测定准确。结 果见表17。
表17加样回收试验结果表
实验例2川续断总皂苷含量测定方法筛选
3仪器与试药
同实验例1的第1部分
4方法与结果
4.1显色体系及波长考察
分别精密吸取川续断皂苷VI对照品溶液及供试品溶液各3份于10mL比色管中， 对照品溶液每份0.5mL挥干溶剂，供试品溶液每份0.3mL挥干溶剂。用3种不同方法显 色，3种显色方法均以随行试剂做空白对照。
4.1.1香草醛-冰乙酸，高氯酸显色
精密加入新配置的5％香草醛-冰乙酸0.2mL和高氯酸0.8mL，密塞，摇匀，置65？ 恒温水浴中加热15min，取出放入冰水浴中冷却5min，加冰乙酸4mL，摇匀。于190～900 波长范围内进行扫描。结果见表18、表19。
表18香草醛-冰乙酸，高氯酸显色供试品扫描结果表
表19香草醛-冰乙酸，高氯酸显色川续断皂苷VI对照品波长扫描结果表
结果表明，用香草醛-冰乙酸、高氯酸体系显色的供试品溶液及对照品溶液的最大吸收波长相差太大。因此，不为本实验显色剂考虑。
4.1.2高氯酸显色
精密加入高氯酸5mL，密塞，摇匀，置65？恒温水浴中加热15min，取出放入冰水 浴中冷却5min。于190～900波长范围内进行扫描。结果见表20、表21。
表20高氯酸显色供试品波长扫描结果表
表21高氯酸显色川续断皂苷VI波长对照品扫描结果表
结果表明，用高氯酸显色的供试品溶液及对照品溶液的最大吸收波长一致，但考虑 到高氯酸见光容易分解，有不稳定因素存在，需避光显色，不方便操作，因此，不作为 本实验显色剂考虑。
4.1.3浓硫酸-甲醇显色
取续断粉末约0.3g，精密称定，加入70％乙醇70mL超声提取60min，滤过，滤液 置100mL容量瓶中，加入70％乙醇至刻度线。精密加入浓硫酸3mL和甲醇2mL，密塞， 摇匀，置65？恒温水浴中加热15min，取出放入冰水浴中冷却5min。于190～900波长范 围内进行扫描。结果见表22、表23。
表22浓硫酸-甲醇显色供试品波长扫描结果表
表23浓硫酸-甲醇显色川续断皂苷VI对照品波长扫描结果表
结果表明，用浓硫酸-甲醇显色的供试品溶液及对照品溶液的最大吸收波相差3nm。 因此，将浓硫酸-甲醇作为本实验显色剂，528nm作为本实验测定吸光度波长。
4.2提取工艺优选
以川续断皂苷VI含量为指标，对提取方法、提取溶剂、提取溶剂浓度、提取溶剂 用量、提取时间、提取次数等因素进行考察。
4.2.1提取方法考察
精密称定续断粉末6份，每份约0.3g，加入70％乙醇70mL，分别水浴回流及超声 提取60min，滤过，滤液置100mL容量瓶中，加入70％乙醇至刻度线，摇匀，即得。精 密吸取0.3mL于具塞比色管，参照“4.1.3”项方法进行显色，在最大吸收波长处测定 吸光度。结果见表24、25。
表24提取方法考察结果表
表25提取方法方差分析表
结果表明，经SPSS处理数据，其结果见表2.8。可知其P＝0.593>0.05，说明提取方法对总皂苷含量测定无显著性影响，因此本发明选择超声的方法提取，且操作简单方便。4.2.2提取溶剂及浓度考察
精密称定续断粉末24份，每份约0.3g，加入分别70mL不同溶剂及浓度的溶剂提取。参照“实验例2的4.1.3”项方法进行显色，在最大吸收波长处测定吸光度。结果见 表26、27。
表26提取溶剂及浓度考察结果表
表27提取溶剂及浓度方差分析表
结果表明，经SPSS处理数据，其结果见表26。可知其P＝0.000<0.01，说明提取溶剂及浓度对总皂苷含量测定有极显著性影响，把提取溶剂及浓度作为正交试验一个因素。70％乙醇吸光度最高，作为本发明单因素考察提取浓度及溶剂。
4.2.3提取溶剂用量考察
精密称定续断粉末15份，每份约0.3g，分别加入不同体积溶剂提取。参照“实验 例2的4.1.3”项方法进行显色，在最大吸收波长处测定吸光度。结果见表28、29。
表28提取溶剂用量考察结果表
表29提取溶剂用量方差分析表
结果表明，经SPSS处理数据，结果见表29。可知其P＝0.000<0.01，说明提取溶剂用量对总皂苷含量测定有极显著性影响，把提取溶剂用量作为正交试验的一个因素。70％乙醇70mL吸光度最高，作为本发明单因素考察提取溶剂用量。
4.2.4提取时间考察
精密称定续断粉末18份，每份约0.3g，提取不同时间。参照“实验例2的4.1.3” 项方法进行显色，在最大吸收波长处测定吸光度。结果见表30、31。
表30提取溶时间考察结果表
表31提取时间方差分析表
结果表明，经SPSS处理数据，其结果见表32。可知其P＝0.023>0.01，说明提取时间对总皂苷含量测定无显著性影响，把提取时间作为正交试验的一个因素。50min与 60min无显著性差异，考虑到节约时间，选择50min提取时间。
4.2.5提取次数的考察
精密称定续断粉末9份，每份约0.3g，分别提取不同次数。参照“实验例2的4.1.3”项方法进行显色，在最大吸收波长处测定吸光度。结果见表32、33。
表32提取次数考察表结果表
表33提取次数方差分析表
结果表明，经SPSS处理数据，其结果见表33。可知其P＝0.035>0.01，说明提取次数对川总皂苷含量测定无显著性影响，提取1次与提取2次相比P＝0.571无显著性差异， 因此选择1次作为本发明提取次数，节约时间且操作方便，而提取3次的吸光度值较低， 不作为本发明提取次数考虑。
4.3显色条件优选
4.3.1显色剂用量考察
参照“4.1”项方法制备供试品溶液，分别加入不同用量显色剂进行显色，在最大吸收波长处测定吸光度。结果见表34。
表34显色剂用量考察结果表
结果表明，用3mL浓硫酸-2mL甲醇显色样品吸光度较高，因此本实验采用显色剂用量为3mL浓硫酸-2mL甲醇。
4.3.2显色温度考察
参照“4.1”项方法制备供试品溶液，分别用不同温度显色，在最大吸收波长处测定吸光度。结果见表35。
表35显色温度考察结果表
结果表明，显色温度为95℃显色样品吸光度较高，因此本实验采用显色温度为95℃。4.3.3显色时间考察
取参照“4.1”项方法制备供试品溶液，分别在95℃水浴显色不同时间，在最大吸收波长处测定吸光度。结果见表36。
表36显色时间考察结果表
结果表明，显色时间20min显色样品吸光度较高，因此本实验采用显色时间为20min。 4.3.4冰水浴时间考察
参照“4.1”项方法制备供试品溶液，放入冰水中不同时间取出，在最大吸收波长处测定吸光度。结果见表37、38。
表37冰水浴时间考察结果表
表38冰水浴时间方差分析表
结果表明，用SPSS软件处理P＝0.688＞0.01，表示冰水浴对川续断总皂苷的含量影响没有显著性差异，而冰水浴2min时，比色管上部分并未冷却完全，没有达到冷却 的目的，因此，选择冰水浴的时间为5min较好，即节约时间也达到冷却的目的又与文 献报道一致。
4.4提取工艺正交
以溶剂浓度、溶剂用量、提取时间分别取三个水平进行考察，考察因素及水平见下表。采用L9(34)正交试验表设计试验方案。取本品细粉约0.3g，精密称定，共9份， 分别置锥形瓶中，采用超声提取，按正交试验表设定的因素、水平进行提取，参照“4.1” 项方法进行显色，在最大吸收波长处测定吸光度。正交试验表及实验结果见表39～43。
表39提取工艺正交试验因素水平表
表40提取工艺正交试验计划表
表41提取工艺正交试验结果表
表42L9(34)正交实验表及直观分析表
表43提取工艺方差分析表
结果表明，从直观分析中可以得出提取因素A>C>B，说明提取溶剂浓度对川续断总皂苷的影响较大，提取的溶剂用量影响最小，可以初步确定提取方法为A1B1C2。在 进行方差分析时，选择的3个因素对实验结果无显著性影响，因此，考虑方便操作，节 约时间等因素，在对最佳提取方案进行验证的基础上，最终优化的提取工艺为A2B1C2， 即提溶剂浓度为70％乙醇、溶剂用量为60mL。
4.5方法学考察
显色条件:精密吸取供试品0.3mL于10mL的比色管中沸水浴挥干溶剂，精密加入2mL甲醇及3mL浓硫酸，密塞，摇匀，置95℃恒温水浴中加热20min，取出放入冰水 浴中冷却5min，摇匀。最大吸收波长528nm出测定吸光度。
对照品溶液的制备：精密称取川续断皂苷VI对照品5.65mg，加甲醇定容至25mL，得0.226mg/mL的标准品溶液。
供试品溶液的制备：取续断饮片，加10％黄酒拌匀，闷润90min后，用170℃炒制1290min，炒制完成后，取出晾凉，筛去碎屑。得续断酒炙饮片，研成粉末，取续断粉 末约0.3g，精密测定，加入60mL量70％乙醇，超声提取50min，滤过，滤液置100mL 容量瓶中，加入70％乙醇至刻度线，摇匀，即得。
测定法：分别精密吸取上述对照品溶液和试品溶液适量于具塞试管中，在最大吸收 波长528nm处测定吸光度
4.5.1线性关系考察
分别精密吸取上述对照品溶液0.3，0.4，0.5，0.6，0.7，0.8，0.9mL至具塞试管中，随行试剂做空白对照，水浴挥干溶剂，精密加入浓硫酸3mL和甲醇2mL，密塞，摇匀， 置95℃恒温水浴中加热20min，取出放入冰水浴中冷却5min。在最大吸收波长528nm 处测定吸光度，以吸光度(Y)为纵坐标，对照品质量(mg)(X)为横坐标，进行线性 回归得续断皂苷VI回归方程为：Y＝3.641X-0.0226，r＝0.9996，结果表川续断皂苷VI 在0.0678～0.2034mg范围内呈良好的线性关系。结果见表44，图2。
表44标准曲线考察结果表
4.5.2精密度试验
精密吸取川续断皂苷VI对照品溶液适量于具塞试管中，平行6份，参照“4.5”项 下自“沸水浴挥干溶剂”起依法操作，在最大吸收波长处测定吸光度，川续断皂苷VI 的吸光度RSD值为0.09％。结果表明该仪器精密度良好。结果见表45。
表45精密度试验结果表
4.5.3稳定性试验
精密吸供试品溶液适量于具塞试管中，参照“4.5”项下自“沸水浴挥干溶剂”起依法操作，在最大吸收波长处测定吸光度，平均值为0.447，吸光度RSD值为0.41％，结 果表明，样品在120min内稳定。结果见表46。
表46稳定性试验结果表
4.5.4重复性试验
取同一批续断粉末6份，每份约0.3g，精密称定，照样品溶液制备方法制备，精密吸取各样品溶液适量，参照“4.5”项下自“沸水浴挥干溶剂”起依法操作，在最大吸收 波长处测定吸光度，测定结果为的平均质量分数的RSD值为1.78％，表明该方法重复性 良好。结果见表47。
表47重复性试验结果表
实验例3：水溶性浸出物测定筛选
按照《中国药典》2015版浸出物测定方法项下的热浸法操作。取续断粉末约2g， 精密称定，置100mL的锥形瓶中，精密加蒸馏水50mL，密塞，称定重量，静置1h后， 连接回流冷凝管，加热至沸腾，并保持微沸1h。放冷后，取下锥形瓶，密塞，再称定重 量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取滤液25mL，置已干燥至恒重的蒸发 皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小时，置干燥器中冷却30min，迅速精密称定 重量。
实验例4：醇浸出物测定筛选
乙醇浓度考察参照《中国药典》方法，选择40％、50％、60％、70％、80％不同浓 度乙醇对续断醇溶性浸出物含量测定进行考察。结果见表48。
表48醇溶性浸出物醇浓度考察结果表
结果表明，乙醇浓度为40％、50％提取出的醇溶性浸出物含量比较高，用SPSS软件对二者数据进行处理，其结果见表48，可知其P＝0.059>0.01，说明二者无显著性差异，而40％乙醇提取后过滤时间很长，期间可能乙醇会挥发，影响最终的测定结果，因此综 合考虑选择50％乙醇作为醇溶性浸出物提取溶剂，节约时间，配制方便。
按照《中国药典》2015版浸出物测定方法项下的热浸法操作。提取溶剂为50％乙醇。取续断粉末约2g，精密称定，置100mL的锥形瓶中，精密加50％乙醇50mL，密 塞，称定重量，静置1h后，连接回流冷凝管，加热至沸腾，并保持微沸1h。放冷后， 取下锥形瓶，密塞，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取滤液25mL， 置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小时，置干燥器中冷却 30min，迅速精密称定重量。
实验例5：酒炙续断工艺研究
本发明采用多指标综合评分法优选续断的酒炙工艺，根据各成分在续断中的重要性， 考虑川续断皂苷VI占40％、总皂苷占30％、水溶性浸出物占15％、醇溶性浸出物占15％的权重。实验综合评分数＝川续断皂苷VI隶属度×40％+总皂苷隶属度×30％+水溶性浸出物隶属度×15％+醇溶性浸出物隶属度×15％；[指标隶属度＝(指标值一指标最小值)/(指标最大值一指标最小值)]，满分为1.00。
5单因素考察
以川续断皂苷、川续断总皂苷、水溶性浸出物、醇溶性浸出物的含量为指标，对其黄酒用量、闷润时间、炮制温度及炮制时间进行单因素考察。
5.1不同黄酒用量对续断含量的影响考察：
取续断饮片，用不同用量的黄酒拌匀，稍闷润，待酒被吸尽后，置炒制容器内，用文火加热，炒至微带黑色，取出晾凉，筛去碎屑。按“2.2.2”、“4.5”项下方法制备供试 品溶液，按“2.2.2”、“4.5”项下的方法测定样品中的各指标含量。结果见表49。
表49不同黄酒用量对续断含量的影响考察表
结果表明，当黄酒用量为10％～15％时，其指标成分的综合评分较高，因此，黄酒用量可行方案为：黄酒用量为5％～20％；较好方案为：黄酒用量选为10％～15％；最佳 方案为：黄酒用量选为15％。
5.2闷润时间考察
取续断饮片，用15％黄酒拌匀，闷润不同时间，待酒被吸尽后，置炒制容器内， 用文火加热，炒至微带黑色，取出晾凉，筛去碎屑。按“2.2.2”、“4.5”项下方法制备供 试品溶液，按“2.2.2”、“4.5”项下的方法测定样品中的各指标含量。结果见表50。
表50不同闷润时间对续断含量的影响考察表
结果表明，闷润90min时的综合评分较高。在闷润的过程中，60min时药材刚好 完全被黄酒浸润，但是还有少许的黄酒没有被吸干，到90min时，黄酒刚好完全被吸 尽，到120min和150min时，黄酒已经被完全吸尽。在测定各成分的含量时，闷润时 间为90min的综合评分较高，因此闷润可行方案为：闷润时间为60min-150min；较好 方案为90min-120min；最佳方案为：闷润时间为90min。
5.3炒制温度考察
取续断饮片，用15％黄酒拌匀，闷润90min，置炒制容器内，用不同温度加热，炒 至微带黑色，取出晾凉，筛去碎屑。按“2.2.2”、“4.5”项下方法制备供试品溶液，按“2.2.2”、“4.5”项下的方法测定样品中的各指标含量。结果见表51。
表51不同炒制温度对续断含量的影响考察表
结果表明，炒制温度的可行性方案为130±10℃-170±10℃；最佳方案炮制温度定为 130±10℃。
5.4炒制时间考察
取续断饮片，用15％黄酒拌匀，闷润90min，置炒制容器内，用130±10℃的温度 加热，炒制不同时间，取出晾凉，筛去碎屑。按“2.2.2”、“4.5”项下方法制备供试品溶 液，按“2.2.2”、“4.5”项下的方法测定样品中的各指标含量。结果见表52。
表52不同炒制时间对续断含量的影响考察表
结果表明，炒制时间为8min较好，8min刚好炒至近干，但是炮制出来的药材还 有点润，可能是因为炮制温度较低，炮制时间较短，导致其药材炒出来还有点润。待晾 干后粉碎。所以暂时定其炮制时间为8min。因此可行性方案为炒制时间为8-12min，较 好方案炒制时间为8min。
实验例6:中药续断炮制品的正交试验
通过以上单因素考察结果，黄酒用量、炒制时间、操作温度、炒制时间4个因素各取三个水平进行试验，采用L9(34)正交试验表安排试验按“2.2.2”、“4.5”项下方法 制备供试品溶液，按“2.2.2”、“4.5”项下的方法测定样品中的各指标含量。正交试验因 素水平表及实验结果见表53、54。
表53因素水平表
表54 L9(3)4正交试验设计及结果表
从直观分析中可以得出影响续断综合评分的因素大小为C>A>D＞B，炮制温度对续断的综合评分影响最大，闷润时间对续断的综合评分影响最小，最佳工艺为A1B1C3D3。
各因素对续断各个含量均没有显著性影响，闷润时间对续断的综合评分影响最小， 但是当闷润时间为60min时，黄酒还没有完全被吸尽，考虑到中药炮制中“汁尽药透”的原则，因此最佳的酒炙工艺确定为A1B2C3D3，即最佳方案黄酒用量为10％，闷润时 间为90min，炮制温度为170±10℃，炮制时间为12min。
实验例7:酒炙续断工艺验证
取同一批次的续断饮片3份，每份5kg，照“实验例6”项下确定的最佳炮制工艺 制备酒炙饮片，按“2.2.2”、“4.5”、实验3、实验4项下方法制备供试品溶液并测定个 含量，由以下测定的结果可得，3次结果的差异较小，表明该酒炙工艺稳定可行。结果 见表55。
表55酒炙工艺验证结果表
本发明与对比例相对比试验
对比例1方法：取续断片，均匀喷以黄酒，黄酒用量为净药材用量的10-25％，拌匀，保鲜膜密封，防止闷透，转移至炒锅内，于100-190℃的文火炒制6-12min，取出放 凉，粉碎，过4号筛，装入自封袋内置密闭容器中备用。
对比例2方法：称取9份每份饮片50g，按试验黄酒用量10％、20％、30％，炒炙 温度150℃、170℃、190℃，炒炙时间6min、8min、10min条件分别酒炙，放凉，制置 密闭容器内备用。
对比例3方法：取续断，先用饱和石灰水溶液10倍量药材浸泡1h，取出水洗至水 洗液为中性，再加续断重量40％的黄酒，置密闭容器中浸泡1h，浙干，多余黄酒备用。 将浸泡过的续断放在高压锅内蒸煮，设定温度为120℃，时间为2小时，压力为0.2MPa。 取出高温高压蒸煮过的续断，在热风循环烘箱中烘干，温度为60℃，时间为5h，烘干。 将烘干后的续断，加浸泡过续断中多余的黄酒，置密闭容器中闷润，至黄酒被药材吸尽 为止。取被黄酒闷润吸尽的续断，在热风循环烘箱中烘干，温度为60℃，时间为5h， 烘干即得续断炮制品。取用等量6份，每份5g，高效液相色谱法测定饮片中川续断皂苷 VI的含量。
含量测定方法：采用本发明含量测定方法测定。结果见表56。
表56对比实验结果
本发明与对比例相比，本发明川续断皂苷VI含量、川续断总皂苷、水溶性浸出物、醇溶性浸出物均高于对比例。
本发明检测方法与对比例检测方法对比
对比例1：根据公开技术“高效液相色谱法测定续断药材中川续断皂苷VI的含量”。中国中医药科学院重要研究所谭洪根，林生，张启伟，吉力文献中公开了测定方法做试验。
色谱条件：柱温35℃，流动相为乙腈-水(30:70)，检测波长212nm，流速1mL/min，进样量20μL；
对照品溶液的制备：精密称取川续断皂苷VI对照品7.64mg，置5mL量瓶中，加流 动相至刻度，摇匀，精密量取1mL，置10mL量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，使成每 1mL含川续断皂苷VI0.1528mg的对照品溶液。
供试品溶液制备：取药材粉末0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL， 密塞，称定重量，超声处理30min，放冷，称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀， 滤过，精密量取滤液1mL，置10mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，0.45μm滤 膜滤过，即得。
样品测定：将对照品溶液和供试品溶液分别注入液相色谱仪，计算样品中川续断皂 苷VI的含量。
结果显示色谱中有出现严重的拖尾现象、重复性、稳定性、线性关系较差，而本发明重复性、稳定性、线性关系经试验证明良好。
以上为本发明明确了具体的续断酒炙饮片炮制的详细的工艺技术参数，包括黄酒用量、 闷润时间、炒制温度、和炒制时间，改变以感官评价质量的缺陷，保证了续断酒炙饮片 质量的稳定；也提出以续断中川续断皂苷Ⅵ、川续断总皂苷、水溶性浸出物、醇溶性浸出物的含量作为续断质量好坏的控制参数，并作出了含量测定的方法。测定时操作简单、续断酒炙后有效成分稳定性好，能很好的控制续断的药效。
虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述， 但在本发明基础上，可以对之作出一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易 见的。因此，在不偏离本发明的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (10)

1.一种中药续断炮制品，其特征在于所述炮制品由以下炮制方法制成：取续断饮片，加黄酒拌匀，闷润后，用文火加热，炒至微带黑色，炒制完成后，取出晾凉，筛去碎屑。
2.根据权利要求1所述中药续断炮制品，其特征在于所述黄酒的用量为续断饮片重量的5％～20％。
3.根据权利要求2所述中药续断炮制品，其特征在于所述黄酒的用量为续断饮片重量的10％～15％。
4.根据权利要求1所述中药续断炮制品，其特征在于所述闷润时间为60分钟～150分钟。
5.根据权利要求4所述中药续断炮制品，其特征在于所述闷润时间为90分钟～120分钟。
6.根据权利要求1所述中药续断炮制品，其特征在于所述炒制温度120℃～180℃。
7.根据权利要求6所述中药续断炮制品，其特征在于所述炒制温度140℃～160℃。
8.根据权利要求1所述中药续断炮制品，其特征在于所述炒制时间8分钟～12分钟。
9.根据权利要求1所述中药续断炮制品，其特征在于所述炒制时间10分钟。
10.根据权利要求1所述中药续断炮制品，其特征在于，所述炮制品的质量检测方法是以测定川续断皂苷Ⅵ、川续断总皂苷、水溶性浸出物、醇溶性浸出物的含量为指标；具体含量测定方法为：
(一)川续断皂苷Ⅵ含量测定方法：
色谱条件
检测波长为206nm，流动相为乙腈﹕0.20％磷酸水按体积比为30:70，流速为1mL/min，柱温为30℃，进样量为20μL；
对照品溶液的制备
取适量的川续断皂苷VI对照品，精密称定，先加入少量甲醇溶解，再加入甲醇制成浓度为1.5mg/mL的溶液，精密量取1mL，置10mL量瓶中，加流动相乙腈-0.20％磷酸水(30:70)稀释至刻度，摇匀，即得；
供试品溶液的制备
称取续断细粉约0.5g，精密称定，置50mL具塞锥形瓶中，精密加入90％甲醇15mL，密塞，精密称重，回流提取3次，每次30min，放冷，再称定重量，用90％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密取续滤液1mL，置10mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，以0.45μm微孔滤膜滤过，即得；
测定法：分别取样品溶液及对照品溶液20μL注入高效液相色谱仪测峰面积；
(二)川续断总皂苷含量测定方法：
对照品溶液的制备
精密称取川续断皂苷VI对照品5.65mg，加甲醇定容至25mL，得0.226mg/mL的标准品溶液；
供试品溶液的制备
取续断粉末约0.3g，精密测定，加入60mL70％乙醇，超声提取50min，滤过，滤液置100mL容量瓶中，加入70％乙醇至刻度线，摇匀，即得；
显色条件
精密吸取供试品0.3mL于10mL的比色管中沸水浴挥干溶剂，精密加入2mL甲醇及3mL浓硫酸，密塞，摇匀，置95℃恒温水浴中加热20min，取出放入冰水浴中冷却5min，摇匀，于最大吸收波长528nm处测定吸光度；
测定法：分别吸取上述对照品溶液和供试品溶液适量于比色皿中，于最大吸收波长528nm处测定吸光度；
(三)水浸出物测定方法
按照《中国药典》2015版浸出物测定方法项下的热浸法操作。取续断粉末约2g，精密称定，置100mL的锥形瓶中，精密加蒸馏水50mL，密塞，称定重量，静置1小时后，连接回流冷凝管，加热至沸腾，并保持微沸1小时；放冷后，取下锥形瓶，密塞，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25mL，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小时，置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量；
(四)醇浸出物测定方法
按照《中国药典》2015版浸出物测定方法项下的热浸法操作。提取溶剂为50％乙醇。取续断粉末约2g，精密称定，置100mL的锥形瓶中，精密加50％乙醇50mL，密塞，称定重量，静置1小时后，连接回流冷凝管，加热至沸腾，并保持微沸1小时，放冷后，取下锥形瓶，密塞，再称定重量，用50％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25mL，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小时，置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量。
CN201910543418.XA 2019-06-21 2019-06-21 一种中药续断炮制品、炮制方法及检测方法 Pending CN110269872A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910543418.XA CN110269872A (zh) 2019-06-21 2019-06-21 一种中药续断炮制品、炮制方法及检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910543418.XA CN110269872A (zh) 2019-06-21 2019-06-21 一种中药续断炮制品、炮制方法及检测方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN110269872A true CN110269872A (zh) 2019-09-24

Family

ID=67961426

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910543418.XA Pending CN110269872A (zh) 2019-06-21 2019-06-21 一种中药续断炮制品、炮制方法及检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110269872A (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110693894A (zh) * 2019-11-18 2020-01-17 贵州中医药大学 一种川续断皂苷vi的神经保护作用在抑郁症治疗中的应用
CN111297923A (zh) * 2020-04-20 2020-06-19 贵州中医药大学 一种续断药材加工及含量测定方法、化合物及确认方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
李越峰等: "《中药炮制技术》", 31 March 2016, 甘肃科学技术出版社 *
马新飞等: "HPLC法测定不同续断炮制品中川续断皂苷Ⅵ", 《中草药》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110693894A (zh) * 2019-11-18 2020-01-17 贵州中医药大学 一种川续断皂苷vi的神经保护作用在抑郁症治疗中的应用
CN111297923A (zh) * 2020-04-20 2020-06-19 贵州中医药大学 一种续断药材加工及含量测定方法、化合物及确认方法
CN111297923B (zh) * 2020-04-20 2022-03-15 贵州中医药大学 一种续断药材加工及含量测定方法、化合物及确认方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN105259295B (zh) 参枝苓口服液的质量检测方法
CN108362788A (zh) 一种清蒸黄精品质检测分析方法
CN103235082B (zh) 精乌胶囊的检测方法
CN103330758A (zh) 一种芍药甘草汤配方颗粒及其制备方法和检测方法
CN113848278A (zh) 一种穿破石标准汤剂质量控制方法
CN104391072B (zh) 一种治疗骨质疏松症的中药复方制剂的检测方法
CN106668111A (zh) 白术配方颗粒制剂及其质量标准鉴定检测方法
CN110269872A (zh) 一种中药续断炮制品、炮制方法及检测方法
CN102106892B (zh) 一种山茱萸中药饮片的炮制方法
CN104800481A (zh) 一种挥发油包合物的制备方法及其应用
CN113777183B (zh) 女贞子药材及其炮制品的特征图谱构建方法、多指标成分含量检测方法
CN105079180B (zh) 栀子饮片的炮制方法
CN110068628A (zh) 当归标准汤剂指纹图谱、特征图谱建立及含量测定方法
CN106110280A (zh) 桂龙咳喘宁片制备工艺
CN109765322A (zh) 荆芥的特征图谱构建方法和质量检测方法
CN112798701A (zh) 一种当归补血药物组合物的制备方法及其检测方法
CN103230448A (zh) 一种黄连阿胶汤复方配方颗粒及其制备方法和检测方法
CN110464825A (zh) 一种地黄饮子药物组合物、制备方法、检测方法
CN103211907A (zh) 四物汤复方配方颗粒及其制备方法和检测方法
CN109985150A (zh) 一种姜山药的炮制方法
CN112578055B (zh) 藕节及藕节炭对照提取物的制备工艺及其质量控制方法
CN113484429B (zh) 桃核承气汤物质基准的建立方法
CN105548390B (zh) 一种当归饮片中阿魏酸含量的测定方法
CN104034839A (zh) 乙肝扶正胶囊的质量检测方法
CN110658264A (zh) 一种九制黄精的质量检测方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20190924