CN110261592A - 一种被分析物定性定量测定方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种被分析物定性定量测定方法，该方法包括自动加样、孵育、转运、清洗和检测步骤，孵育和清洗分别在孵育模块和清洗模块上进行，处于不同反应阶段的一组固相单元在孵育模块上同时开始及结束孵育及在清洗模块上同时开始及结束清洗；本发明基于被分析物各步反应均需进行孵育及清洗，通过自动转运实现处于各步反应阶段的一组固相单元同步孵育及同步清洗，一方面实现单个样本顺序检测，各个样本处理条件一致，检测结果更准确；另一方面，各组处于不同阶段的固相单元可实现同时孵育及同时清洗，大大提高了检测效率。

Description

一种被分析物定性定量测定方法

技术领域

本发明涉及免疫测定技术领域，具体而言，涉及一种被分析物定性定量测定方法。

背景技术

专一性配体特异性自发结合的现象，如抗原抗体特异性反应的免疫分析法和核酸碱基互补配对的核酸分析法被广泛地应用于多种领域。在所有的分析方法中，免疫分析法的种类最为庞杂。但大体可以有四个维度分类，即单种或多种，异相或均相，同时处理或非同时处理，分离和不分离。

按第一维度划分，基于平面或膜的微阵列(固相生物芯片)和基于流式细胞术的以编码微球为载体的液相芯片可同时检测多种被分析物，而其他方法通常只能够检测一种被分析物。

按照第二维度划分，ELISA，免疫层析，基于平面或膜的微阵列(固相生物芯片)代表异相相免疫分析法的基本特征。在上述技术基础上，还衍生出其他技术，如微阵列固相免疫分析法，板式化学发光法，时间分辨法，荧光免疫层析等。而免疫沉降，免疫比浊，光激化学发光，基于磁微球的化学发光，基于磁微球的电化学发光，基于流式细胞术的以编码微球为载体的液相芯片代表均相免疫反应的基本特征。

按第三维度划分，由于免疫反应通常包括多步的抗原抗体的反应和分离，基本采用两种策略来满足现实的需求。同时处理即在同一时刻批量处理某个步骤，如ELISA和与之相近的板式化学发光。同时处理的好处在于通量大，试剂成本低。特别适合大规模检测任务。

按第四维度划分，基于流式细胞术的以编码微球为载体的液相芯片和光激化学发光能够理论上实现在非分离情况下的被分析物测定。其他方法均需要分离步骤。

如何准确，高效，灵活，低成本，并且持续稳定地得到分析结果，是本发明追求的目标。如上的技术中，能够接近这个目标有如下几种技术：

ELISA或板式化学发光。该种技术基于微孔板的设计，把与一种被分析物相关的抗原或抗体固定在微孔内，与液体的抗原或抗体一同使用来分析液体样本中的一种被分析物。使用时，使用者以微孔板架为承载体，微孔或以整板或以单条组合使用，经过孵育(抗原抗体反应)，分离(洗涤)多个步骤，最后得到多个样本的同一种被分析物的检测结果。其中使用的分离设备，使用真空泵吸弃孔中的废液，使用蠕动泵或启动泵以及多通道对微孔进行清洗。一般喷头和吸头为多通道设计，最高96通道，最低也有8通道。该种方法测定样本时，通常还要安排额外的微孔同时测定校准品。对于定性产品，通常需要在测定样本的同时测定阴性对照，阳性对照和cutoff对照，通过与对照的比较来判断样本的定性结果；对于定量产品，通常需要在测定样本的同时测定系列校准品，如浓度从0到某一个数值的被分析物标准物质，通过与校准品浓度和校准品信号绘制的校准曲线图来计算样本中被分析物的浓度。

相对于如上技术，微阵列酶联免疫法问世了，如quansysbio，华大吉比爱，铭源数康等公司的微阵列酶联免疫法。使用高精度喷点机器，如Bio Dot公司的压电式喷点设备，将多种分别于不同的被分析物相关的抗原或抗体喷点到微孔板底部，底部可以是聚苯乙烯材质的或是硝酸纤维膜材质的。经过与ELISA一致的方式完成反应部分，最终不同于ELISA测定光密度的方法，使用CCD记录长时间曝光的微孔底部不同位置的点的光信号强度用来得到定性或者定量的结果。

然而这种方式并没有解决单个样本的检测问题。这种方式依赖于在测定样本时一定要同时测定一套校准品，用来计算当次样本中被分析物的浓度。

中国专利(苏州三联生物)解决了如上问题，采用***式硬质玻璃为载体，通过移动硬质芯片的方式，完成检测。但这种芯片存在着诸多问题，其中包括基于玻璃硬质芯片而设计的相应冲洗加吹干方式，结构复杂，不利于不间断的清洗。

分离是如上两种方法必不可少的步骤，该过程的实现策略是如上所述的多通道洗涤。在实际的应用当中，由于样本的成分复杂，吸弃通道的堵塞是经常遇到的问题。为了解决这个问题，目前已经开发出基于离心原理的洗板技术，如中国专利CN202683525，BlueCat Bio公司的Bluewahser；以及使用喷射头喷射倒置的微孔板。他们使用的方法特征是“同时处理”，即要么以整板为单位进行洗涤，要么以整条为单位进行洗涤。这种洗涤方式存在如下问题：1.结构复杂，并且耗能；2.不能做到单个样本的快速洗涤处理；3.液路和样本直接接触，需要经常维护，避免交叉污染。

上述具备“同时处理”特征的所有方法在实际的应用中并没有真正对所进行的生物学反应进行“同时处理”。因为被分析样本还是一个一个地加入，如果样本数量少，加入样本所需要的时间可以被忽略，但如果样本的数量增大，如样本的量为100个则第一个样本到最后一个样本的时间间隔将会超过10分钟。这种方式尤其对于那些基于竞争原理的测试方法。这种“同时处理”的意义仅剩下减少使用者的劳动量了，对于准确的测量有害而无利，随着样本量的加大，测量结果的偏离将加大。

因此对于检测的准确性来说，最为理想的状态是从加样到最后的结果测定的每个步骤的条件和步骤间的转换时刻能够保持一致，或差别可以忽略。然而多步的清洗分离和数十数百样本测定将增加检测的时间，严重地影响这一理想状态的现实接受度。加快反应速度和增加清洗元件可以有效地改善现实接受度。

目前的以磁微粒为载体的均相免疫反应有效地解决了这个问题。由于均相反应速度快，可以将单步的免疫反应缩短到10分钟，再加上增加的清洗元件，可以实现较为快速的获得结果。如专利CN201310300162.2揭示的方法。第一个检测结果可以在18分钟获得，之后每隔20秒获得一个检测结果。然而这种方法只能一次获得一种结果。不能一次获得多种结果。

往往多种结果更有助于疾病的判断。如联合使用几种肿瘤标志物的测定可以更加准确判断或更早识别某些肿瘤的早期状态，又例如HPV的多种亚型的检验，可以防止遗漏***的病原体的检测等。

利用流式细胞术的液相芯片技术似乎能够圆满地解决一次多个被分析物同时测定的目的。但这种技术依赖于两种荧光物质作为标记的微球结构。微球的表面还有荧光物质，目前自然界和人工合成的荧光物质本身都具有疏水性质，在水溶液中这些物质将会自发地发生聚集，这种疏水作用的聚集具有积累效应，因此长时间的保存或存在环境的诱发(如试剂液体表面的蒸发)都将导致不同程度的聚集，因而该种技术在实际应用中需要经常校正和定标。

另外这种球的表面疏水特性不利于对于含脂浓度高的样本测定，在临床应用中受到限制。由于所有试剂都成液体状态，使得试剂的自由度增大，增大了变化的风险，同时为了高效和高灵敏地检测单个微球，必须将数百个微球以单个微球的方式高速通过检测器中的毛细管，使得毛细管的物理使用频次过高，容易发生堵管现象。加大了这种方法长时间运行后的失败发生风险。

从信息流的角度看，液相芯片先一种一种微球的生产，然后混合在一起，与样本进行反应后，再利用外力将不同微球排列成直线，利用激光激发和显微镜近距离逐个进行分析。这种从有序，到无序，再到有序的分析过程本身非常复杂，不合适于作为一种大规模和稳定的分析方法。

而分步进行的固相芯片的步骤清晰，通过稳定快速的分离，使得步骤之间不相互干扰，将会避免上述其他方法在实际应用的各种问题。本发明旨在提供一种定性定量测定方法，可以不间断顺次测定样本，每次测定可以获得多个检验结果。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供一种被分析物定性定量测定方法，所述方法包括自动加样、孵育、清洗和检测，所述孵育和清洗分别在孵育模块和清洗模块上进行，处于不同反应阶段的一组固相单元在孵育模块上同时开始及结束孵育及在清洗模块上同时开始及结束清洗。

在一些优选的方式中，孵育模块包含至少一组成直线排列的固相单元容纳位，每组固相单元容纳位包括分列两端的新加样位和待测样位，处于各步反应阶段的一组固相单元放置于相应的容纳位进行孵育反应。将各反应阶段的固相单元放置于相应的固相单元容纳位中，便于不同反应阶段的固相单元的区隔及区分，有利于固相单元多步反应的逐步进行。

在一些优选的方式中，孵育模块每组固相单元容纳位含有N1个固相单元容纳位，其中N1＝3n或2n，n个新加样位和n个待测样位分列两端。针对三步法或两步法，可设置不同数量的固相单元容纳位，孵育反应步数与容纳位数量对应。

在一些优选的方式中，n＝1或2或3。考虑到加样时间对准确测定的影响，每次加样的固相单元数量不宜过多，每次新增1个或2个或3个固相单元在保证检测结果准确的基础上，进一步提高检测的效率。

在一些优选的方式中，一组固相单元清洗完成后，原孵育模块待测样位上的固相单元进行检测，其余固相单元转运至孵育模块并在孵育模块上由新加样位向待测样位方向移位，同时新加样位补入加样后的新固相单元，进行再次孵育。孵育模块待测样位上的固相单元孵育清洗完成后进行检测，其余的固相单元由于完成了一次孵育、清洗过程，需进入下一步孵育、清洗过程，因此在转运回孵育模块上时，其对应的容纳位发生改变，也即原新加样位上的固相单元移入的是新加样位之后的固相单元容纳位，新加样位用于容纳新的固相单元，而进行最后一步孵育的固相单元移入待测样位中。这样可实现不同反应阶段的固相单元同时进行孵育、清洗操作，且单个固相单元顺次进行检测。

在一些优选的方式中，在上一组固相单元完成清洗再次开始孵育后，下一组固相单元进行清洗、再次孵育步骤，直至最后一组，并依次循环。孵育模块固相单元容纳位组数N2＝T/t，其中T为固相单元加入孵育模块固相单元容纳位至再次加入孵育模块固相单元容纳位间隔时长，t为一组固相单元移入孵育模块固相单元容纳位至下一组固相单元移入孵育模块固相单元容纳位间隔时长。由于孵育反应时长相较固相单元在孵育模块和清洗模块间的转运及在清洗模块中的清洗时长要长，通过设置T/t组固相单元，可使得上一组固相单元完成清洗并重新转运至孵育模块后，下一组固相单元完成孵育反应，可进行清洗操作，直至最后一组，并依次循环。由于组与组之间无等待的衔接或很短时间的衔接，节省整个检测过程时间，大大提高检测效率。

在一些优选的方式中，孵育模块包括长板形温育盘，各组固相单元容纳位沿长度方向平行排列于其上。长板形温育盘结构简单，便于各组固相单元依次进行孵育及清洗。

在一些优选的方式中，孵育模块包括圆盘形温育盘，各组固相单元容纳位沿周向方向排列于其上，每组固相单元容纳位连线的中点与圆心的连线与每组固相单元容纳位连线垂直或每组固相单元容纳位连线的延长线经过圆心。

在一些优选的方式中，圆盘形温育盘底部设置有转动装置，温育盘还设有盖体，盖体具有使一组固相单元露出的开口，一组固相单元完成清洗再次开始孵育后，转动装置带动温育盘转动，而盖体不动，盖体开口露出下一组固相单元，并进行清洗、再次孵育步骤。采用圆盘形温育盘并设置转动装置，可减少温育盘与盖体间的腔体空间，有利于提供稳定的孵育反应环境。

在一些优选的方式中，所述方法还包括自动转运步骤，所述自动转运通过转运模块完成，所述转运模块包括新加样转运模块、清洗转运模块、待测样转运模块、第一抓手、第二抓手、第三抓手，所述新加样转运模块包含N3个固相单元新加样位，其中N3＝n；所述待测样转运模块包含N4个固相单元待测样位，其中N4＝n。转运模块用于固相单元在固相单元存储模块、孵育模块、清洗模块和测定模块间的转运，在新加样转运模块、清洗转运模块、待测样转运模块、第一抓手、第二抓手、第三抓手的共同作用下，实现固相单元在模块间的自动转运，提高检测效率。

在一些优选的方式中，所述清洗转运模块包含一组N5个成直线排列的固相单元容纳位，其中N5＝N1，也即清洗转运模块固相单元容纳位和孵育模块一组固相单元容纳位数量相同，固相单元容纳位包括位于一端的n个固相单元待测样位。

新加样转运模块与清洗转运模块位于同一直线，沿直线往复运动，新加样转运模块运动至位置Ⅰ时，第一抓手沿直线运动将固相单元从固相单元存储模块转移至新加样转运模块新加样位上；运动至位置Ⅱ时，进行加样；运动至位置Ⅲ时，新加样转运模块新加样位与孵育模块新加样位平行对齐。

清洗转运模块沿直线往复运动，清洗转运模块运动至第一位置时，清洗转运模块待测样位与孵育模块待测样位平行对齐，第二抓手沿直线运动将一组固相单元从孵育模块转移至清洗转运模块上；清洗转运模块固相单元完成加洗液及清洗后运动至第二位置时，清洗转运模块待测样位与待测样转运模块待测样位平行对齐，第三抓手沿直线运动将清洗转运模块待测样位上的固相单元转移至待测样转运模块待测样位上，待测样转运模块转运待测的固相单元至测定模块检测；清洗转运模块运动至第三位置时，清洗转运模块紧邻位于位置Ⅲ的新加样转运模块，第二抓手沿直线运动将新加样转运模块及清洗转运模块上的固相单元转移至孵育模块上。

通过新加样转运模块、清洗转运模块、待测样转运模块运动及位置的配合及第一抓手、第二抓手、第三抓手的转移作用，实现了固相单元在孵育模块由新加样位到待测样位的移位，实现单个固相单元全自动顺次检测，在提高检测准确性的基础上提高了检测效率。

在一些优选的方式中，所述清洗转运模块包含一组N5个成直线排列的固相单元容纳位，其中N5＝N1+n，固相单元容纳位包括位于两端的n个固相单元新加样位和n个固相单元待测样。

新加样转运模块沿直线往复运动，运动至位置Ⅰ时，第一抓手沿直线运动，将固相单元从固相单元存储模块转移至新加样转运模块新加样位上；运动至位置Ⅱ时，进行加样；运动至位置Ⅲ时，新加样转运模块新加样位与清洗转运模块新加样位平行对齐。

所述清洗转运模块沿直线往复运动，清洗转运模块运动至第一位置时，清洗转运模块待测样位与孵育模块待测样位平行对齐，第二抓手沿直线运动将一组固相单元从孵育模块转移至清洗转运模块上；清洗转运模块固相单元完成加洗液及清洗后运动至第二位置时，清洗转运模块待测样位与待测样转运模块待测样位平行对齐，第三抓手沿直线运动将清洗转运模块待测样位上的固相单元转移至待测样转运模块待测样位上，待测样转运模块转运待测的固相单元至测定模块检测；清洗转运模块运动至第三位置时，清洗转运模块新加样位与位于位置Ⅲ的新加样转运模块新加样位平行对齐，第三抓手沿直线运动将新加样转运模块新加样位上的固相单元转移至清洗转运模块新加样位上；清洗转运模块运动至第四位置时，清洗转运模块新加样位与孵育模块新加样位平行对齐，第二抓手沿直线运动将清洗转运模块上的固相单元转移至孵育模块上进行孵育。

通过新加样转运模块、清洗转运模块、待测样转运模块运动及位置的配合及第一抓手、第二抓手、第三抓手的转移作用，实现了固相单元在孵育模块由新加样位到待测样位的移位，实现单个固相单元全自动顺次检测，在提高检测准确性的基础上提高了检测效率。

在一些优选的方式中，所述加样通过样品加液器自动加样。

在一些优选的方式中，清洗模块包括清洗转运模块安置位，清洗转运模块转运固相单元运动至所述安置位进行安置及清洗操作。清洗转运模块直接运动至清洗模块内进行安置及清洗操作，方便各反应阶段的固相单元直接且同时进行清洗，操作方便简单。

在一些优选的方式中，所述固相单元内设置多个被分析物检测配体，可同时检测多种被分析物。

本发明有益效果：

1.本发明被分析物定性定量测定方法可实现被分析样本从加样到检测全过程自动化，操作简单方便，效率高。

2.本发明采用固相单元进行被分析物测定，固相单元可单个使用，并能同时检测多种被分析物，相较多孔板或微孔板等，操作更简便，有利于保持处理条件的一致性。

3.采用本发明被分析物定性定量测定方法，可实现单个样本顺序检测，克服大量样本同时处理导致的样本处理条件不一致，测定结果不够准确的技术问题，提高了样本测定准确性。

4.本发明被分析物定性定量测定方法基于多步反应中各步均需进行孵育反应及清洗操作，实现了不同反应阶段固相单元同时孵育和同时清洗，检测效率大大提升。

5.本发明被分析物定性定量测定方法可实现各组固相单元之间无间歇进行孵育及清洗操作，减少流程时间，提高检测效率。

附图说明

图1为测定***俯视图；`

图2为测定***立体图；

图3为长板形孵育模块立体图；

图4.1-图4.3分别为圆盘形孵育模块一实施例正视图、仰视图及立体图；

图5.1-图5.2分别为圆盘形孵育模块另一实施例仰视图及立体图；

图6为测定***简化俯视图；

图7为一实施例清洗转移模块位于第一位置时俯视图；

图8为一实施例清洗转移模块位于第二位置时俯视图；

图9为一实施例清洗转移模块位于第三位置时俯视图；

图10为一实施例清洗转移模块位于第四位置时俯视图；

图11为测定***简化立体图；

图12为另一实施例清洗转移模块位于第一位置时俯视图；

图13为另一实施例清洗转移模块位于第二位置时俯视图；

图14为另一实施例清洗转移模块位于第三位置时俯视图。

具体实施方式

为便于理解，首先对本发明涉及的部分技术术语做进一步的说明：

被分析物：能够与专一性配体特异性结合的物质，包括但不限于各类抗原、抗体、多肽、蛋白、核酸等。

固相单元：固相单元为一种可承载液体的容器，其内侧表面上固定有与被分析物(样本)特异性结合反应的配体点阵。

三步法、两步法：

上述表格中酶标+底物液只是列举的测定方法之一，并不局限于此。

为使本发明的目的、特征和优点能够更为明显易懂，下面结合附图对本发明的具体实施例做详细的说明。

一种被分析物定性定量测定方法，包括自动加样、孵育、转运、清洗和检测。

自动加样：固相单元110通过第一抓手从固相单元存储模块120转移至新加样转运模块181的新加样位1811上，新加样转运模块181运动至加样位置，样品加液器191(如图11所示)吸取样品存储模块130中存储的样品，然后注入新加样转运模块181新加样位1811上的固相单元110中。

孵育：孵育在孵育模块150上进行，孵育模块150包括温育盘151，温育盘151上设置固相单元容纳位。当将固相单元***到固相单元容纳位中，固相单元内部的液体温度将会被固相单元容纳位内温度调节，经过一段时间的恒温处理成为孵育。经过孵育，固相单元中的配体专一性反应将会达到平衡。所谓平衡，就是指配体间的反应不会随孵育时间的继续延长而发生明显的量上的变化。

通常在一定的温度范围内，配体专一性结合的反应呈现反应温度越高，达到平衡的所需要的时间越短的特征，正如化学反应中反应速度和温度之间的关系一样。应用这一原理，孵育模块的孔中温度可以调高，以增加反应速度，缩短反应时间的效果。

在一些实施例中，孵育模块150包括长板形温育盘151，长板形温育盘151上包括N2组平行设置于其长度方向上的固相单元容纳位1510，N2＝T/t，其中T为固相单元加入孵育模块固相单元容纳位至再次加入孵育模块固相单元容纳位间隔时长，t为孵育模块上一组固相单元移入固相单元容纳位至下一组固相单元移入固相单元容纳位间隔时长。每组固相单元容纳位含有N1个成直线排列的固相单元容纳位，其中N1＝2n或3n，n优选1或2或3，n个新加样位和n个待测样位分列两端。以T＝10min，孵育模块上一组固相单元移入孵育模块固相单元容纳位至下一组固相单元移入孵育模块固相单元容纳位间隔时长t＝0.5min，N1＝3n，n＝1为例，如图1-3所示，长板形温育盘151含有N2＝20组固相单元容纳位1510，每组固相单元容纳位含有3个成直线排列的固相单元容纳位，每组固相单元容纳位左侧为新加样位1511，用于容纳三步法中处于第一步反应的固相单元，中间容纳位用于容纳三步法中处于第二步反应的固相单元，右侧为待测样位1512，用于容纳三步法中处于最后一步反应的固相单元。因此长板形温育盘第一列20个固相单元容纳位均为新加样位1511，第三列20个固相单元容纳位均为待测样位。

加完样后的固相单元以0.5min的时间间隔加入到孵育模块150的温育盘151上，第1个固相单元放置于温育盘第一列第1个新加样位上，第2个固相单元放置于温育盘第一列第2个新加样位上，直至第20个固相单元放置于温育盘第一列第20个新加样位上。当第20个固相单元放置后，第1个固相单元刚好完成第一次孵育反应，第1个固相单元被移出进行清洗及加第二步反应试剂，然后移入孵育模块第二列第1个固相单元容纳位上，与此同时第21个固相单元被放置于第一列第1个新加样位上，此过程用时0.5min，此时第2个固相单元完成孵育，进行清洗及加第二步反应试剂，然后移入孵育模块第二列第2个固相单元容纳位上，与此同时第22个固相单元被放置于第一列第2个新加样位上，依次类推，直至第40个固相单元放置于温育盘第一列第20个新加样位上。当第40个固相单元放置后，第1个和第21个固相单元刚好分别完成第二次和第一次孵育反应，第1个和第21个固相单元同时移出进行清洗及分别加第三步和第二步反应试剂，然后分别移入孵育模块第三列第1个和第二列第1个固相单元容纳位上，与此同时第41个固相单元被放置于第一列第1个新加样位上，此过程用时0.5min。依次类推，直至第60个固相单元放置于温育盘第一列第20个新加样位上。当第60个固相单元放置后，第1个、第21个和第41个固相单元刚好分别完成第三次、第二次和第一次孵育反应，第1个、第21个和第41个固相单元同时移出进行清洗，清洗完成后，第1个固相单元进行检测，第21个和第41个固相单元分别加入第三步和第二步反应试剂，然后分别移入孵育模块第三列第1个和第二列第1个固相单元容纳位上，与此同时第61个固相单元被放置于第一列第1个新加样位上，此过程用时0.5min，接着第2个、第22个、第42个固相单元进行相关操作，并依次循环。这样就实现了单个样本顺次检测，同时处于三步法中各步反应阶段的一组固相单元同时孵育及清洗，大大提高了检测效率。

在一些实施例中，以T＝10min，孵育模块上一组固相单元移入孵育模块固相单元容纳位至下一组固相单元移入孵育模块固相单元容纳位间隔时长t＝0.5min，N1＝2n，n＝1为例。长板形温育盘151含有平行排列的N2＝20组固相单元容纳位1510，每组固相单元容纳位含有2个成直线排列的固相单元容纳位，每组固相单元容纳位左侧为新加样位1511，用于容纳两步法中处于第一步反应的固相单元，右侧为待测样位1512，用于容纳两步法中处于第二步反应的固相单元。因此长板形温育盘第一列20个固相单元容纳位均为新加样位1511，第二列20个固相单元容纳位均为待测样位。

加完样后的固相单元以0.5min的时间间隔加入到孵育模块150的温育盘151上，第1个固相单元放置于温育盘第一列第1个新加样位上，第2个固相单元放置于温育盘第一列第2个新加样位上，直至第20个固相单元放置于温育盘第一列第20个新加样位上。当第20个固相单元放置后，第1个固相单元刚好完成第一次孵育反应，第1个固相单元被移出进行清洗及加第二步反应试剂，然后移入孵育模块第二列第1个待测样位上，与此同时第21个固相单元被放置于第一列第1个新加样位上，此过程用时0.5min，此时第2个固相单元完成孵育，进行清洗及加第二步反应试剂，然后移入孵育模块第二列第2个待测样位上，与此同时第22个固相单元被放置于第一列第2个新加样位上，依次类推，直至第40个固相单元放置于温育盘第一列第20个新加样位上。当第40个固相单元放置后，第1个和第21个固相单元刚好分别完成第二次和第一次孵育反应，第1个和第21个固相单元同时移出进行清洗，清洗完成后，第1个固相单元进行检测，第21个固相单元加入第二步反应试剂，然后移入孵育模块第二列第1个待测样位上，与此同时第41个固相单元被放置于第一列第1个新加样位上，此过程用时0.5min，接着第2个、第22个进行相关操作，并依次循环。这样就实现了单个样本顺次检测，同时处于两步法中各步反应阶段的一组固相单元同时孵育及清洗，大大提高了检测效率。

在一些实施例中，如图4.1-图5.2所示，孵育模块150′包含圆盘形温育盘151′，至少一组固相单元容纳位按周向方向排列于其上，每组固相单元容纳位成直线排列，其连线的中点与圆心的连线与每组固相单元容纳位连线垂直，或每组固相单元容纳位连线的延长线经过圆心。固相单元在圆盘形温育盘151′上的孵育与在长板形温育盘上相似，在一组固相单元完成清洗，移入孵育模块固相单元容纳位后，圆盘形温育盘151′底部的转动装置152′带动圆盘形温育盘151′转动，而盖体153′不动，使得下一组固相单元露出盖体153′的开口154′处，以进行下一步的操作。

转运：采用自动转运，自动转运通过转运模块进行，如图6所示，所述转运模块包括新加样转运模块181、清洗转运模块182、待测样转运模块183、第一抓手184、第二抓手185、第三抓手186，所述新加样转运模块181包含N3个固相单元新加样位1811，其中N3＝n；所述待测样转运模块183包含N4个固相单元待测样位1831，其中N4＝n。

在一些实施例中，所述清洗转运模块包含一组N5个成直线排列的固相单元容纳位，其中N5＝N1+n，固相单元容纳位包括位于两端的n个固相单元新加样位和n个固相单元待测样。以n＝1为例，如图6所示孵育模块150中金属孵育盘151每组包含3个固相单元容纳位，最左边为新加样位1511，最右边为待测样位1512；清洗转运模块182包含4个容纳位，最左边为新加样位1821，最右边为待测样位1822；新加样转运模块181包含1个新加样位1811，待测样转运模块183含有1个待测样位1831。清洗转运模块182、新加样转运模块181、待测样转运模块183均沿直线往复运动，第一抓手184具有1个固相单元抓取位，可沿直线往复运动。第二抓手185具有3个固相单元抓取位，可沿温育盘151长度方向直线往复运动。第三抓手186具有1个固相单元抓取位，沿直线往复运动。

清洗转运模块在沿直线运动中包含4个位置，位于第一位置时，如图7所示，清洗转运模块182待测样位1822与孵育模块150待测样位1512平行对齐，这时第二抓手185抓取孵育模块150上的3个处于不同反应阶段的固相单元，并沿直线运动至清洗转运模块182正上方，将孵育模块150上的固相单元一一对齐转运至清洗转运模块182容纳位上。随后清洗转运模块182转运固相单元至清洗模块160，完成加注洗液及清洗，在此期间第一抓手184抓取固相存储模块120中的固相单元110并沿直线转移至位于位置Ⅰ的新加样转运模块181新加样位1811上，随后新加样转运模块181运动至加样的位置Ⅱ。清洗转运模块182随后转移至第二位置，如图8所示，同时待测样转运模块183从测定模块170内运动到测定模块外，清洗转运模块182待测样位1822(位于第三抓手186下方，图8中未显示)与待测样转运模块183待测样位1831平行对齐，第三抓手186抓取清洗转运模块182待测样位1822上的固相单元并沿直线转移至待测样转运模块183待测样位1831上，待测样转运模块183转运固相单元沿直线运动至测定模块170内进行测定。清洗转运模块182运动至第三位置时，如图9所示，完成加样的固相单元被新加样转运模块181转移至位置Ⅲ，此时清洗转运模块182新加样位1821与位于位置Ⅲ的新加样转运模块181新加样位1811平行对齐(清洗转运模块182新加样位1821与新加样转运模块181新加样位1811位于第三抓手186下方，图9中未显示)，第三抓手186从新加样转运模块181新加样位1811上抓取固相单元并转移至清洗转运模块182新加样位1821上。然后清洗转运模块182运动至第四位置，如图10所示，此时清洗转运模块182新加样位1821与孵育模块150新加样位1511平行对齐(清洗转运模块182新加样位1821位于第二抓手185下方，图10中未显示)，第二抓手185将清洗转运模块182上的固相单元抓取并一一对齐转移至孵育模块150上，转移后清洗转运模块182新加样位1821上的固相单元位于孵育模块150新加样位1511上。随后，第二抓手抓取下一组固相单元进行上述操作，并依次循环。

在一些实施例中，所述清洗转运模块182包含一组N5个成直线排列的固相单元容纳位，其中N5＝N1，也即清洗转运模块182固相单元容纳位和孵育模块150一组固相单元容纳位数量相同，清洗转运模块固相单元容纳位包括位于一端的n个固相单元待测样位1512。以n＝1为例，如图12-14所示，孵育模块150每组包含3个固相单元容纳位，最左边为新加样位1511，最右边为待测样位1512；清洗转运模块182包含3个容纳位，最右边为待测样位1822；新加样转运模块181包含1个新加样位1811，待测样转运模块183包含1个待测样位1831。清洗转运模块182、新加样转运模块181、待测样转运模块183均沿直线往复运动，第一抓手184位于固相单元存储模块120内的固相单元正上方，具有1个固相单元抓取位，可沿直线往复运动。第二抓手185位于孵育模块150内长板形温育盘151正上方，具有3个固相单元抓取位，可沿温育盘151长度方向直线往复运动。第三抓手186具有1个固相单元抓取位，沿直线往复运动。

清洗转运模块182在沿直线运动中包含3个位置，位于第一位置时，如图12所示，清洗转运模块182待测样位1822与孵育模块150待测样位1512平行对齐，这时第二抓手185抓取孵育模块150上的3个处于不同反应阶段的固相单元，并沿直线运动至清洗转运模块182正上方，将固相单元一一对齐转移至清洗转运模块182上，转移后孵育模块150待测样位1512上的固相单元位于清洗转运模块182待测样位1822上。随后清洗转运模块182转运固相单元至清洗模块160，完成加注洗液及清洗，在此期间第一抓手184抓取固相存储模块120中的固相单元110并沿直线转移至位于位置Ⅰ的新加样转运模块181新加样位上1811，然后新加样转运模块181运动至加样的位置Ⅱ，此时新加样转运模块181与清洗转运模块182位于同一直线上，且新加样转运模块181新加样位1811与孵育模块150新加样位1511平行错开。清洗转运模块182随后运动至第二位置(如图13所示)，同时待测样转运模块183从测定模块170内运动到测定模块170外，清洗转运模块182待测样位1822(位于第三抓手186下方，图13中未显示)与待测样转运模块183待测样位1831平行对齐，第三抓手186抓取清洗转运模块182待测样位1822上的固相单元并沿直线转移至待测样转运模块183待测样位1831上，待测样转运模块183转运固相单元沿直线运动至测定模块170内进行测定。清洗转运模块182运动至第三位置时，如图14所示，完成加样的新固相单元被新加样转运模块181转移至位置Ⅲ，此时新加样转运模块181与清洗转运模块182位于同一直线，且新加样转运模块181新加样位1811与孵育模块150新加样位1511平行对齐(新加样转运模块181新加样位1811位于第二抓手185下方，图14中未显示)，新加样转运模块181新加样位1811紧邻清洗转运模块182，第二抓手185将新加样转运模块181新加样位1811及清洗转运模块182上的固相单元抓取并一一对齐转移至孵育模块150上，转移后新加样转运模块181新加样位1811上的固相单元位于孵育模块150新加样位1511上。随后，第二抓手抓取下一组固相单元进行上述操作，并依次循环。

清洗：清洗在清洗模块160上进行，清洗模块160包括清洗转运模块安置位。清洗转运模块转运一组固相单元运动至预定位置，洗液加液器193(如图11所示)将洗液加注到固相单元中，洗液加注完毕，清洗转运模块转运固相单元运动至清洗模块160内安置位上，离心甩干洗液，完成一次清洗后，再重复进行洗液加注及离心清洗，清洗次数不超过3次。

测定：测定在测定模块上进行，固相单元通过待测样转运模块转运至测定模块内，注入底物液，当转盘转动到拍照物镜口处的时刻开始进行固相单元底部信号的收集。该收集将会在特定的但不超过转盘再次转动的时间内完成。

加试剂：在一些实施例中，如图11所示，反应试剂通过试剂加液器192加注到固相单元中，对于三步法，试剂加液器包括加注第二步反应试剂的第一试剂加液器1921及加注第三步反应试剂的第二试剂加液器1922；通过试剂加液器可实现反应试剂的自动加注。

虽然本发明披露如上，但本发明并非限定于此。任何本领域技术人员，在不脱离本发明的精神和范围内，均可作各种更动与修改，因此本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。

Claims (21)

1.一种被分析物定性定量测定方法，其特征在于，所述方法包括自动加样、孵育、清洗和检测，所述孵育和清洗分别在孵育模块和清洗模块上进行，处于不同反应阶段的一组固相单元在孵育模块上同时开始及结束孵育及在清洗模块上同时开始及结束清洗。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述孵育模块包含至少一组成直线排列的固相单元容纳位，每组固相单元容纳位包括分列两端的新加样位和待测样位，处于各步反应阶段的一组固相单元放置于相应的容纳位进行孵育反应。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述孵育模块每组固相单元容纳位含有N1个固相单元容纳位，其中N1＝2n或3n，n个新加样位和n个待测样位分列两端。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，一组固相单元清洗完成后，原孵育模块待测样位上的固相单元进行检测，其余固相单元转运至孵育模块并在孵育模块上由新加样位向待测样位方向移位，同时新加样位补入加样后的新固相单元，进行再次孵育。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，在上一组固相单元完成清洗再次开始孵育后，下一组固相单元进行清洗、再次孵育步骤，直至最后一组，并依次循环。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述孵育模块固相单元容纳位组数N2＝T/t，其中T为固相单元加入孵育模块固相单元容纳位至再次加入孵育模块固相单元容纳位间隔时长，t为一组固相单元移入孵育模块固相单元容纳位至下一组固相单元移入孵育模块固相单元容纳位间隔时长。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述孵育模块包括长板形温育盘，各组固相单元容纳位沿长度方向平行排列于其上。

8.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述孵育模块包括圆盘形温育盘，各组固相单元容纳位沿周向方向排列于其上。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，每组固相单元容纳位连线的中点与圆心的连线与每组固相单元容纳位连线垂直或每组固相单元容纳位连线的延长线经过圆心。

10.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述温育盘底部设置有转动装置，温育盘还设有盖体，盖体具有使一组固相单元露出的开口。

11.如权利要求10所述的方法，其特征在于，上一组固相单元完成清洗再次开始孵育后，转动装置带动温育盘转动，而盖体不动，盖体开口露出下一组固相单元，进行清洗、再次孵育步骤。

12.如权利要求1-11之一所述的方法，其特征在于，所述方法还包括自动转运步骤，所述自动转运通过转运模块完成，所述转运模块包括清洗转运模块、新加样转运模块、待测样转运模块、第一抓手、第二抓手、第三抓手；新加样转运模块包含N3个新加样位，待测样转运模块包含N4个待测样位，其中N3＝N4＝n。

13.如权利要求12所述的方法，其特征在于，所述清洗转运模块包含一组N5个成直线排列的固相单元容纳位，其中N5＝N1，固相单元容纳位包括位于一端的n个固相单元待测样位。

14.如权利要求13所述的方法，其特征在于，新加样转运模块与清洗转运模块位于同一直线，新加样转运模块沿直线往复运动，新加样转运模块运动至位置Ⅰ时，第一抓手将固相单元从固相单元存储模块转移至新加样转运模块新加样位上；运动至位置Ⅱ时，进行加样；运动至位置Ⅲ时，新加样转运模块新加样位与孵育模块新加样位平行对齐。

15.如权利要求14所述的方法，其特征在于，所述清洗转运模块沿直线往复运动，清洗转运模块运动至第一位置时，清洗转运模块待测样位与孵育模块待测样位平行对齐，第二抓手将一组固相单元从孵育模块转移至清洗转运模块上；清洗转运模块固相单元完成加洗液及清洗后运动至第二位置时，清洗转运模块待测样位与待测样转运模块待测样位平行对齐，第三抓手将清洗转运模块待测样位上的固相单元转移至待测样转运模块待测样位上，待测样转运模块转运待测的固相单元至测定模块检测；清洗转运模块运动至第三位置时，清洗转运模块紧邻位于位置Ⅲ的新加样转运模块，第二抓手将新加样转运模块及清洗转运模块上的固相单元转移至孵育模块上。

16.如权利要求12所述的方法，其特征在于，所述清洗转运模块包含一组N5个成直线排列的固相单元容纳位，其中N5＝N1+n，固相单元容纳位包括位于两端的n个固相单元新加样位和n个固相单元待测样位。

17.如权利要求16所述的方法，其特征在于，其特征在于，新加样转运模块沿直线往复运动，运动至位置Ⅰ时，第一抓手将固相单元从固相单元存储模块转移至新加样转运模块新加样位上；运动至位置Ⅱ时，进行加样；运动至位置Ⅲ时，新加样转运模块新加样位与清洗转运模块新加样位平行对齐。

18.如权利要求17所述的方法，其特征在于，所述清洗转运模块沿直线往复运动，清洗转运模块运动至第一位置时，清洗转运模块待测样位与孵育模块待测样位平行对齐，第二抓手将一组固相单元从孵育模块转移至清洗转运模块上；清洗转运模块固相单元完成加洗液及清洗后运动至第二位置时，清洗转运模块待测样位与待测样转运模块待测样位平行对齐，第三抓手将清洗转运模块待测样位上的固相单元转移至待测样转运模块待测样位上，待测样转运模块转运待测的固相单元至测定模块检测；清洗转运模块运动至第三位置时，清洗转运模块新加样位与位于位置Ⅲ的新加样转运模块新加样位平行对齐，第三抓手将新加样转运模块新加样位上的固相单元转移至清洗转运模块新加样位上；清洗转运模块运动至第四位置时，清洗转运模块新加样位与孵育模块新加样位平行对齐，第二抓手将清洗转运模块上的固相单元转移至孵育模块上进行孵育。

19.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述加样通过样品加液器自动加样。

20.如权利要求12所述的方法，其特征在于，清洗模块包括清洗转运模块安置位，清洗转运模块转运固相单元运动至所述安置位进行安置及清洗操作。

21.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述固相单元内设置多个被分析物检测配体。