CN1102594C - 用于免疫测定中的干扰消除剂 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及在免疫测定中避免非特异相互作用的干扰消除剂，其中抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白或其衍生物被用作干扰消除剂。

Description

用于免疫测定中的干扰消除剂
本发明涉及抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白或其衍生物作为免疫测定中的干扰消除剂，以及应用该干扰消除剂进行分析物检测的方法。近年来，检测的免疫学方法已经变得非常重要了。它们可被用来快速而准确地检测生物样品中药物、激素、蛋白、传染性生物，特别是特异抗体的存在。在所有免疫学检测方法中，专一结合反应发生在第一特异结合配偶体(binding partner)和第二特异结合配偶体之间。所述第一特异结合配偶体是要检测的物质(“分析物”)，所述第二特异结合配偶体与分析物专一反应或结合。在这一方法中，分析物和特异分析物结合配偶体，所谓的特异结合对的配偶体，生成特异结合对，其通常是抗原和抗体或抗体片段的复合物。在这一连接作用中，有可能多于一种的分析物或结合配偶体在每一反应中与另一种分析物或结合配偶体反应。这些特异结合反应可用各种方法检测。通常参加特异结合反应的一个参加者被标记。一般标记方法是放射性同位素，色原，荧光团，酶标记或紧接着能生成特异结合对(例如生物素-链霉抗生物素蛋白)的物质。在多相免疫测定中，结合配偶体中的一个固定化在固相上。免疫测定中的一严重问题是：在免疫测定的特异结合配偶体与存在其它成分的样品之间，在某些条件下在固相中发生不期望的相互反应和非特异结合反应。这种相互作用通常引起背景信号的增加以及这些信号的更大的分散，因此降低了测试的灵敏性和专一性。由与被标记结合配偶体非特异相互反应，以及由样品组成的测试成分的特异结合，也能得出假阳性检测结果，即作为假增长信号测量的结果，即使分析物不存在时也以为分析物是存在的。
已经进行了许多尝试来减少这些免疫测定中的非特异相互作用。长期以来已知碳水化合物成分和各种蛋白，蛋白质混合物或蛋白质级分以及其水解产物能减少免疫测定中检验成分和分析物之间非特异相互反应(例如，Robertson等，Journal of Immun.Meth.26，1985，195；EP-A-260903；US-A-4931385)使用粗蛋白级分和粗水解产物是有缺点的，其中所含组分能紧接着引起检验的其它相互干扰。而且通过酶解方法制备的水解物可以被用于制备的蛋白酶污染，而且由于裂解难于控制，因此水解物通常不具有均一品质。蛋白酶能干扰检验成分，即使低含量也导致检验功能和储存稳定性的减损。化学修饰蛋白质，特别是琥珀酰化或乙酰化蛋白质的应用，也已经被说明来减少免疫测定中非特异相互作用(US-A-5D51356；EP-A-0525916)。然而，其不可能避免测试中血清抗体与这些物质的假阳性结果。EP-A-0331068和WO 91/06559说明应用多聚免疫球蛋白，特别是IgG，来减少特异干扰因子，例如类风湿因子。然而它们不能使所有干扰相互作用令人满意地排除。而且在人抗体检测中加入非特异人免疫球蛋白(单体或多聚抗体或其片段)能导致空白对照中的增加。而且人或动物IgG的生产费时而昂贵。
因此，本发明的目的是提供一种比本领域已知技术更好的，通过免疫测定中非特异相互作用来减少干扰的消除干扰物质和干扰消除剂。非特异相互作用被理解为能导致测定结果偏差的该方法各成分之间的所有相互作用。干扰消除物质能避免分析结果中的假阳性，特别是在抗体的分析中。特别是，当使用抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白为免疫测定中的结合配偶体时，能避免干扰。
通过将抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白或其衍生物作为干扰消除剂实现了这一目的。这些物质的应用出人意料地产生了测定中，特别是使用抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白为结合配偶体的测定中干扰的消除作用。因此，本发明涉及避免含有抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白或其衍生物的测定中非特异相互作用的干扰消除剂和测定中这些干扰消除剂的应用。根据本发明，抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白或其衍生物以可溶形式使用。它们不与固相或标记基团如酶键连或偶联。本发明干扰消除剂总是附加于测试中其它必需的试剂应用，并且不变成待测定分析物和特异结合配偶体构成的测试反应过程中生成的复合物的一个组成。本发明干扰消除剂优选用于免疫学测试(免疫测定)中。然而它也可以用于以其它以相互作用为基础的测试中，如核酸测定。该干扰消除剂优选用于其中一个检验成分与抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白结合的测定中，如免疫学或核酸测定中抗生物素蛋白包被的或链霉抗生物素蛋白包被的固相结合的测定中。抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白被理解为天然存在的纯化的蛋白或重组体抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白。抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白衍生物被理解为修饰的抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白分子。这种修饰首先可通过各抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白的交联以生成被称为聚SA或均匀交联SA来实现。下文中的SA总是被理解为抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白。交联或多聚SA的方法是本领域熟练技术人员公知的。特别是通过热处理或通过双功能或多功能基化合物的交联是合适的。双功能或多功能基化合物被理解为至少带有两个相同或不同且通过这些功能基能与SA的功能基如某些氨基酸残基或羧基残基反应的分子。本发明范围内适合的交联剂的典型的例子列于-表1中。表1缩写                        化学成分SPDP          N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫)-丙酸EADP          4-叠氮基己基-1，4-二硫丁酸亚氨酸乙酯盐酸盐FNPA          4-氟-3-硝基苯叠氮HSAB          N-羟基琥珀酰亚胺基-4-叠氮苯甲酸酯MABI          甲基-4-叠氮苯并亚氨酸酯盐酸盐MBS           m-马来亚氨苯基-N-羟基琥珀酰亚胺酯NHS-ASA       N-羟基琥珀酰亚胺基-4-叠氮水杨酸MHS           马来亚氨己酰-N-羟基琥珀酰亚胺酯PNP-DTP       对硝基苯基-2-重氮-3，3，3-三氟丙酸SADP          (4-叠氮苯基)1，3’-二硫丙酸N-琥珀酰亚胺酯SAND          硫代琥珀酰亚胺基-2-(间-叠氮-邻-硝基苯甲酰氨
          基)乙基-1，3’-二硫丙酸SANPAN        N-琥珀酰亚胺基-6(4’-叠氮-2’-硝基苯基-
          氨基)己酸酯SASD          2-(对-叠氮水杨酰氨基)乙基-1，3’-二硫丙酸硫
          代琥珀酰亚胺酯SIAB          (4-碘代乙酰基)氨基苯甲酸N-琥珀酰亚胺酯SMCC          环己烷-1-羧酸琥珀酰亚氨基-4-(N-马来亚胺乙
          酯SMPB          丁酸琥珀酰亚胺基-4-(对-马来亚氨)苯酯DSS           辛二酸二琥珀酰亚胺酯DMS           辛二亚胺酸二乙酯Traut’-试剂  2-亚氨硫羟烷2，4，6-三氯-s-三嗪SAMBA         S’-乙酰基-巯基-琥珀酸酐SATP          N-琥珀酰亚胺基-S-乙酰硫代丙酸酯SATA        N-琥珀酰亚胺基-S-乙酰硫代乙酸酯
第二，修饰作用可以是与其它高分子量分子特别是蛋白质如经常用来减少免疫测定中干扰的牛血清白蛋白(BSA)或免疫球蛋白的偶联。这种交联产生称之为不均匀交联的SA。在这种方法中，SA和/或蛋白质紧接着能在该复合物中聚合。SA与这些分子偶联的方法是本领域熟练技术人员公知的。已证明与DSS，SAMBA，SATP，MHS，SATA的偶联是特别合适的。BSA和SA或多聚SA的复合物特别适合作为干扰消除剂。当多聚BSA与SA或多聚SA偶联时能达到更好效果。用上面提到的用交联SA的方法能实现BSA的多聚作用或交联。最合适的方法是如EP-A-0331127中描述的通过热处理的聚合作用。
第三，SA的修饰可以是活性中心即生物素结合位点的失活，这样产生被称为失活SA的生成。失活作用能简单地通过用被抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白结合的生物素或生物素衍生物饱和结合位点来实现。由于SA对生物素的非常高的亲和性，当用于免疫测定中时，几乎没有实际上能产生干扰的生物素被释放。该活性中心优选是共价修饰的。在这种情况下，SA的活性中心中的一个或几个氨基酸残基被衍生物化，从而与生物素的结合被大大减少或完全抑制。将SA中生物素结合位点失活的方法参见Gitlin等人，Biochem.J.269(1990)527-530。SA活性中心的酪氨酸残基优选用对-硝基苯磺酰氟来修饰。失活SA中生物素结合位点的进一步的方法是将生物素与结合位点共价偶联。生物素与SA活性中心偶联的方法是本领域熟练技术人员公知的。通过一种新的光活化生物素衍生物将生物素偶联到SA上的新的方法是特别优选的。光活化生物素衍生物是已知的。在EP-A-0155854和EP-A-0187323中公开了叠氮取代的苯基/硝基苯基，其通过含胺连接剂被偶联到生物素上。生物素-DADOO-AB(生物素-[8-(4-叠氮基苯甲酰基)-氨基-3，6-二氧代辛基]酰胺)被优选用作生物素衍生物。另外的生物素衍生物在Boehringer MannheimBiochemica目录序号no.1292633和1292641中有所说明。用生物素衍生物对SA生物素结合位点进行饱和作用后，开始进行光反应，从而使生物素共价固定在活性中心上。在这种失活的SA中，生物素与活性中心键合，而且另外通过共价键与活性中心外部连接。通过这种方法获得SA生物素产物也是本发明的一个目的。
另一个失活SA活性中心的方法是通过基因工程修饰结合位点。能通过单个氨基酸残基或氨基酸残基短的片段的取代、缺失、或***来使SA活性中心修饰和失活。优选地，在活性中心中，单个氨基酸如酪氨酸残基被其它氨基酸取代。但是其也能产生其中结合位点部分或全部不存在的SA。通过基因工程来修饰和生产SA的方法是本领域熟练技术人员公知的。例如重组链霉抗生物素蛋白的生产公开于EP-A-0198015。
第四，修饰可通过SA片段化来实现。SA片段可通过化学或酶裂解或重组体生产进行制备。在这种情况下，特别是生物素结合位点可以不存在，如上文已说明的。片段化作用的优点是提高了产物的可溶性。优选地，通过化学或酶裂解由抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白获得的所有片段以混合物被使用，这样使得SA的全部或几乎全部的部分都存在。
这样失活或断裂的SA可以用在上面提到的修饰SA的第一或第二种方法中，即失活的SA紧接着可以与其它分子如BSA或聚BSA聚合或交联。已经证实其中至少两个所述方法进行结合来修饰SA的这些干扰消除剂是特别有利的。
完成用所述方法之一对SA的修饰后，通过合适的抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白衍生物的纯化方法，有可能去除保留生物素结合活性，与表面共价结合而没有与抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白活性中心键合的生物素或游离的生物素。例如可通过对固相结合生物素和/或SA的吸附作用来完成。
因此，本发明另外涉及通过上述修饰方法之一，并且接着任选地通过对固相结合的生物素和/或SA的吸附作用以去除保留生物素结合活性，与其表面而不是抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白的活性中心共价结合的生物素或游离生物素的纯化作用而获得的抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白衍生物。
进一步地，本发明涉及根据本发明的干扰消除剂的制备方法，其中SA根据上述三种方法之至少一种方法被修饰，并且紧接着可任意地进行纯化，如上文所描述的去除保留生物素结合能力，与表面共价结合的生物素和游离生物素。
抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白或其衍生物可被用来减少所有一般免疫测试或核酸分析中的干扰。它们特别适用于在其中抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白被用作结合成份的免疫测定或核酸分析中减少干扰。这种免疫测定是公知的，例如参见Guesdon等，J.Histochem.Cytochem.27(1979)1131-1139和Bayer和Wilchek，Analytical Biochemistry 171(1988)1-32。这些干扰可能是例如由有时存在于人血清中的抗抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白抗体引起的。但是本发明干扰消除剂在其中没有使用抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白的免疫测定中也有有利影响。在这些免疫测定中，已证实免疫测定中与另外分子如例如BSA或聚BSA结合的SA的使用，相应于上述修饰的第二种方法，是特别是益的。本发明干扰消除剂总是除试验中需要的其它试剂之外而使用的。它不等同于可能存在于测试中的抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白成分，如SA包被的固相或者酶-SA结合物。与这些SA试剂相反，本发明干扰消除剂没有结合到由分析物和特异结合配偶体组成的，要被检验的复合物中。
本发明进一步涉及样品中分析物的测定方法，通过(1)用
(a)抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白或其衍生物
(b)分析物的一种或几种特异结合配偶体接触样品，并且(2)测定由分析物和特异结合配偶体生成的复合物，以确定分析物的存在。
所有物质可以作为与至少一个特异结合配偶体如例如半抗原、抗原、抗体或核酸反应生成一复合物的分析物。根据本发明的方法特别适合于抗体特别是自身抗体的检测。
一般体液如血液、血浆、血清、唾液或尿液作为样品。
任何生物或化学结合配偶体能作为能够与分析物特异结合且与之生成复合物的特异结合配偶体。这些包括抗体、抗体片段、抗原、半抗原、激素、抗生物素蛋白、生物素、核酸、寡核苷酸或其衍生物。抗体或抗原或其片段优选用于在本发明中作为分析物的结合配偶体。
为测定由分析物和特异结合配偶体组成的复合物，能使用本领域熟练技术人员公知的所有方法。能使用均相方法，其中该方法中的所有结合配偶体是可溶形式的，如用生成的复合物的比浊或浊度测定的沉淀方法，或以CEDIA，EMIT或FPIA要素为基础的免疫测定。多相方法也是适用的，其中至少一种试剂与固相结合。例子是凝集试验，其中结合对的一个配偶体例如与胶乳结合；夹层测定；ELISA进行特异抗体，象例如抗HIV，HCV，风疹，兔弓形虫，谷氨酸脱羧酶或甲状腺球蛋白测定；RIA或免疫度量测定，除沉淀方法外，在所有这些方法中特异结合配偶体中的一个被标记。标记能直接产生可测信号，它们是例如一种放射性同位素，化学发光物，荧光或电化学发光标记或染色颗粒，如金属溶胶颗粒或染色或未染色胶乳。该标记也能产生非直接信号，如一种酶标记，象超氧化物歧化酶，葡萄糖氧化酶，β-半乳糖苷酶或碱性磷酸酶。
特别是当结合配偶体中的一个通过SA偶联到固相时，也可通过试验色条或生物敏感器进行免疫测定。根据本发明，也能减少以胞质团(plasmon)共振原理为基础的免疫测定中的干扰。
测定分析物的方法的一种试剂经常是通过特异结合对如抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白/生物素偶联到固相上。其优点在于固相能普遍适用于几种试验方法。也能通过特异结合对使标记结合到测定组成上。例如酶可偶联到抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白上，并且结合配偶体，例如抗体，能被生物素化。这种试验方法的例子是本领域熟练技术人员公知的。本发明抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白衍生物特别适合于应用在反应成分通过抗生物素蛋白/生物素或链霉抗生物素蛋白/生物素的非直接键合的测定方法中减少干扰。
测定分析物的方法可以一步或几步进行，即分析物与各试验成分的温育能同时或依次进行。如果使用抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白或其衍生物，而其中生物素结合位点未被失活，则其中结合成分通过抗生物素蛋白/生物素或链霉抗生物素蛋白/生物素被偶联的方法一定要小心进行，在抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白或其衍生物被加入之前，结合成分通过抗生物素蛋白/生物素或链霉抗生物素蛋白/生物素的结合就已经完成，因为否则未失活生物素结合位点将与生物素化结合成分键合而产生干扰。例如，当使用抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白固相时，在样品与抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白或其衍生物一起加入之前，必须首先加入分析物的生物素化特异结合配偶体。如果使用本发明抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白衍生物，其中生物素结合位点已被被失活，则所有试验试剂可同时温育，因为生物素化试剂不结合抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白衍生物。因此这种失活抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白衍生物普遍适用于所有想到的试验变化中，因此是优选的。
试验混合物中本发明干扰消除剂的浓度在0.0001和1％(m/v)之间，优选在0.01至1％(m/v)。
测定分析物的方法的各反应成分可有利地以试验混合物或试验药盒的形式被提供。因此本发明进一步的目的是测定含有抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白或其衍生物和至少一种分析物的特异结合配偶体的样品中分析物的方法的试验混合物。另外，它还可含有进行试验方法所必需的所有其它试剂，如缓冲剂，去垢剂，标记物，测定标记物如酶底物的辅助物质，固相等。本发明干扰消除剂和分析物的结合配偶体或多个结合配偶体优选分容器包装。如果使用本发明干扰消除剂，其中生物素结合位点已被失活，也可向分析物结合配偶体中直接加入干扰消除剂。
通过下面实施例解释本发明。
实施例1多聚链霉抗生物素蛋白的制备
根据EP-A-0331127制备多聚链霉抗生物素蛋白。--用马来酰亚胺-己酰-N-羟基琥珀酰亚胺酯对链霉抗生物素蛋白的活化作用
30mg链霉抗生物素蛋白溶解在3ml 30mM磷酸钾/100mM氯化钠(pH7.1)中，并加热至25℃。搅拌下滴加0.15ml马来酰亚胺-己酰-N-羟基琥珀酰亚胺酯(MHS)(Boehringer Mannheim  GmbH)的DMSO溶液(10mg/ml)，在25℃下反应1小时后将溶液在冰浴中冷却。然后将生成的MHS-链霉抗生物素蛋白在4℃的1升50mM磷酸钾/100mM氯化钠(pH 5.0)中透析两次。用S-乙酰基巯基琥珀酸酐对链霉抗生物素蛋白的活化作用
30mg链霉抗生物素蛋白溶解在3ml 100mM磷酸钾中(pH7.8)，并加热至25℃。搅拌下加入0.175ml S-乙酰基巯基琥珀酸酐(SAMBA)的DMSO溶液(10mg/ml)。在25℃反应3小时后，生成SAMBA-链霉抗生物素蛋白在4℃在1升50mM磷酸钾/2mM EDTA(pH 6.5)中透析两次。链霉抗生物素蛋白的均匀交联
将3ml活化SAMBA-链霉抗生物素蛋白(10mg/ml溶液加热至25℃，与50μl 1M羟胺(pH6.5)混合)。在25℃反应30分钟后，加入15ml 50mM磷酸钾/100mM氯化钠/1mM EDTA(pH6.5)稀释。加入3ml活化MHS-链霉抗生物素蛋白(10mg/ml)起始链霉抗生物素蛋白的均匀交联反应。小心搅拌下在25℃反应2小时后，加入0.2ml 100mM半胱氨酸/HCl使反应终止。在25℃保温30分钟后，通过加入1M磷酸氢二钾，将溶液的PH值调至7.5。加入0.2ml 500mM碘代乙酰胺后，在25℃再温育1小时。然后在4℃在3升50mM磷酸钾/100mM氯化钠(pH7.5)中渗析两次。渗析后在超滤池中将结合物浓缩，并加入蔗糖8％冻干。
实施例2制备热-BSA-SA
根据EP-A-0331127制备热-BSA链霉抗生物素蛋白(热-BSA-SA)。BSA与热BSA交联
1.0g BSA溶解在100ml 20mM磷酸钾缓冲液(pH7.0)中，并在70℃温度下保持5小时。接着将其冷却至20℃，并对100mM pH7.8的磷酸钾缓冲液渗析。用SAMBA活化热-BSA
将68mg热-BSA溶解在2ml 0.1M pH7.8的磷酸钾缓冲液中，并与0.38ml SAMBA(10mg/ml，在DMSO中)缓慢混合。在25℃反应3.5小时后，在4℃对1升50mM pH6.5的磷酸钾缓冲液渗析。制备热-BSA-链霉抗生物素蛋白结合物
类似于实施例1中描述的均相交联进行链霉抗生物素蛋白与热-BSA的多相交联。在这一方法中，60mg活化MHS-链霉抗生物素蛋白(根据实施例1制备的)与68mg SAMBA-热-BSA反应。用凝胶过滤纯化反应产物，并在超滤池中浓缩。接着将获得的产品冻干。
实施例3用游离抗生物将热-BSA-SA饱和
溶解在6.0ml 100mM pH7.0磷酸钾缓冲液中的60mg热-BSA-SA与溶解在0.5ml磷酸钾缓冲液(10mM，pH7.8)的2mg D-生物素混合，并搅拌1小时。凝胶过滤(Superose 6)分离出游离的生物素。高分子量蛋白质馏分在10mM pH7.0的磷酸钾缓冲液中渗析，加入8％蔗糖后冻干。
实施例4制备共价修饰的链霉抗生物素蛋白
根据G.Gitlin，E.A.Bayer，M.Wilchek：Studies on the biotin-binding sites of Avidin and Streptavidin；Biochem.J.(1990)，269，527-530，和对-硝基苯磺酰氟将链霉抗生物素蛋白/抗生物素蛋白活性中心的酪氨酸残基衍生物化。
相对于链霉抗生物素蛋白亚单位200倍摩尔过量的对硝基苯磺酰氟(Sigma N-2262)被加入到蛋白质浓度为10mg/ml的0.1M，pH7.9Tris-HCl缓冲液中的1g链霉抗生物素蛋白中。加完后在25℃再搅拌18-20小时。然后为了分离未反应的衍生作用试剂，将产物对大于500倍体积的pH7.5 PBS缓冲液渗析(16-18小时，4℃)。
实施例5制备光活化生物素合成生物素-[8-(4-叠氮苯甲酰基)氨基-3，6-二氧代辛基]胺(生物素-DADOO-AB)
将1.50g(4mmol)生物素酰基-1，8-二氨基-3，6-二氧代辛烷(生物素-DADOO，Boehringer Mannheim GmbH)在搅拌下溶解在50ml新蒸馏的DMF中。向溶液中依次加入1.04g(4mmol)N-羟基琥珀酰亚胺基-(4-叠氮苯甲酸酯)(HSAB，Boehringer Mannheim GmbH)和0.55ml(4mmol)三乙胺，并在20℃搅拌2小时。接着用油泵真空旋转蒸发器去除溶剂，剩余的粗产物用硅胶色谱纯化。为此，在轻微加热至大约40℃时，将其溶解在尽可能少量的氯仿/甲醇2/1(v/v)中，并上硅胶柱60(Merck Company，Germany)柱(4×60cm)。用氯仿/甲醇2/1(v/v)洗脱，收集50ml馏分。用TLC(下文说明的***)测定含有纯产物的馏分，并收集。用旋转蒸发器去除溶剂，用大约50ml二异丙醚溶解半固体残余物。将最后结晶的无色的产物抽滤，在真空干燥箱中干燥过夜(0.1-0.15巴/40℃)。产量：                         1.24g(理论产率60％)TLC：       硅胶60(Merck)F254，氯仿/甲醇
        2/1(v/v)；Rf＝0.711H-NMR(100MHz/d6-DMSO：δ(ppm)＝1.20-1.65(m，6H)；2.07
                   (tr，2H)； 2.60-3.65(m，15H)；4.05-
                   4.20(m；2H)；6.38(d，br，2H)，7.20
                   (d，2H)，7.62(tr，br，1H)；7.91
                   (d，2H)；8.53(tr，br，1H).UV(CH3OH)：λ(max)＝267nmIR(KBr)：ν＝2125 cm-1
图1给出了生物素-DADOO-AB的合成路线。
实施例6制备生物素(光活化的)链霉抗生物素蛋白
链霉抗生物素蛋白与光活化生物素衍生物(例如生物素-DADOO-AB)反应，并渗析去除游离的未结合的生物素。通过Hg蒸汽灯(350-700nm)照射开始光反应，生物素被共价固定在链霉抗生物素蛋白结合中心。
10倍摩尔过量的生物素-DADOO-AB试剂(3.5ml 25mg/ml生物素-DADOO-AB的DMSO储液溶液)被加入到蛋白质浓度为20mg/ml溶于pH7.5 PBS缓冲液中的1g链霉抗生物素蛋白中。加完后，在无光条件下，在25℃搅拌2小时。
通过在无光照条件下对大于500倍体积pH7.5的PBS缓冲液渗析(20小时，4℃)，完全分离游离的未结合的生物素衍生物(不再可测得)。然后混合物在搅拌下用Hg蒸汽灯(350-700nm)以＜5cm的溶液的光程长度照射20分钟，接着对＞500倍体积pH7.5的PBS缓冲液渗析(10-18小时，4℃)。
实施例7纯化失活链霉抗生物素蛋白和热-BSA-SA和衍生物和其片段制备BSA-生物素吸附剂
将10倍摩尔过量的D-生物酰基-ε-氨基己酸-N-羟基琥珀酰亚胺酯(Boehringer Mannheim GmbH)加到蛋白质浓度为10mg/ml溶于pH8.5的PBS缓冲液中的1gBSA中。
加入后在25℃搅拌2小时，并通过加入赖氨酸至终浓度为10mM来终止反应。游离的未结合的生物素衍生物通过对＞500倍体积pH7.5的PBS缓冲液的渗析(16-18h，4℃)而被完全分离(不再可测到)。
300ml戊二醛(10％)被加到40g氨基-Spherosil(BoehringerMannheim GmbH)中，旋转下将混合物在pH3.7和55℃下搅拌2小时。悬浮液用＞7 Spherosil体积的再蒸馏水和5 Spherosil体积pH8.0 PBS缓冲液洗涤。接着活化的Spherosil在室温下与BSA-Bi反应20小时，摇振，蛋白质供给量为5-10mg/ml Spherosil。
未反应蛋白质溶液过玻璃吸滤器分离，吸附剂材料用10 Spherosil体积0.9％NaCl溶液洗涤，用5 Spherosil体积乙醇胺溶液温育1小时。
然后吸附剂材料用5倍Spherosil体积的0.9％ NaCl溶液洗涤，用3倍Spherosil(体积1M丙酸和足够的30mM NaCl溶液洗涤，达到pH6.5。吸附剂均匀地用pH7.5 PBS缓冲液平衡。制备链霉抗生物素蛋白-Spherosil)吸附剂
300ml戊二醛(10％)加入到40g氨基-Spherosil(BoehringerMannheim GmbH)中，混合物在旋转下在pH3.7和55℃搅拌2小时。悬浮液用＞7 Spherosil体积的重蒸馏水和5 Spherosil体积pH 8.0 PBS缓冲液洗涤。接着活化的Spherosil在振荡下在室温下与链霉抗生物素蛋白反应20小时，蛋白质供给量为5-10mg/ml Spherosil(BoehringerMannheim GmbH)。
未反应蛋白质溶液通过玻璃吸滤器被分离，吸附剂材料用10Spherosil体积0.9％ NaCl溶液洗涤，并与5体积乙醇胺溶液保温1小时。然后吸附剂材料用5倍Spherosil体积0.9％ NaCl溶液，3倍Spherosil体积1M丙酸和足够的30mM NaCl溶液洗涤，至pH6.5。吸附剂均匀地用pH7.5 PBS缓冲液平衡。
失活的链霉抗生物素蛋白进行纯化，去除有残存活性(生物素结合)的链霉抗生物素蛋白，残余游离的生物素或带有可以共价连接在表面(与固定在结合蛋白质立体结构袋的生物素相反)的生物素的链霉抗生物素蛋白。根据的是实施例3、4或6中牛血清白蛋白-生物素色谱和/或以Spherosil为基础的链霉抗生物素蛋白吸附剂的方法。
向反应混合物(含10mg蛋白质)中加入1ml链霉抗生物素蛋白-Spherosil吸附剂，吸附剂已在pH7.5 PBS缓冲液中平衡过，在25℃搅拌2小时。
然后将悬浮液转移到柱上并用pH7.5的PBS缓冲液冲洗柱材料。在该方法中，蛋白质含量在柱子出口处用UV监测仪在A280nm处监测，直到冲洗到无蛋白质止。在馏分中收集合蛋白质的洗脱液。
以每10mg蛋白质1ml在pH7.5 PBS缓冲液中平衡过的牛血清白蛋白-生物素(BSA-Bi)-Spherosil吸附剂的比例向含有蛋白质的链霉抗生物素蛋白吸附近洗脱液中加入牛血清白蛋白-生物素(BSA-Bi)-Spherosil吸附剂，室温下搅拌2小时。
将悬浮液转移至柱上并用pH7.5的PBS缓冲液冲洗。在该方法中，蛋白质含量在柱出口处通过UV监测器在A280nm处监测。含有蛋白质的洗脱液含有产物，以馏分收集。产物(失活的(聚合)链霉抗生物素蛋白或热-BSA-SA或衍生物和其片段)被浓缩至蛋白质浓度为20mg/ml，分散后冻干。
实施例8关于生物素化的抗原和样品在序列试验方法中进行GAD抗体试验
将100μl从猪脑中分离的生物素酰化谷氨酸去羧酸酶(GAD)用移液吸管以各批最佳浓度(在购自Boehringer Mannheim Enzymun TestAnti-HIV 1+2的培养缓冲液中的浓度为1-3μg/ml)移到用热-BSA链霉抗生物素蛋白预包被的微滴平板中的每个孔中，并在室温下温育30分钟。然后用350μl 50mmol/(pH7.0的磷酸钾将平板洗三次，每次加入0.1％(w/v)CHAPSO(3-[3-乙醇胺丙基)-二甲基氨复盐]-2-羟基-1-丙烷磺酸盐)。人血清在得自Enzymun Test抗-HIV 1+2的温育缓冲液中稀释1+25倍，向其中加入各种量的热-BSA-链霉抗生物素蛋白(未处理或失活的)或链霉抗生物素蛋白单体或链霉抗生物素蛋白聚合物(未处理或失活的)。这样被稀释的这些样品在摇荡中在微滴平板中以100μl/孔的体积在室温下温育1小时。接着将样品吸出，平板按上述方法冲洗三次。来自绵羊POD-偶联的测定抗体具有对人IgG结合特异性，其被在得自Enzymun Test抗-HIV 1+2的结合物缓冲液中稀释至75mU/ml的浓度，100μl这种被稀释的溶液在室温振荡下在室温下在每一孔中温育1小时。吸收液体，平板再用上述溶液冲洗三次。颜料ABTS以1mg/ml的浓度溶解在Enzymun Test底物缓冲液中，100μl/孔样品在无振荡下在室温温育。大约30分钟后在微滴平板光测仪中读数吸收率。测量波长是405nm，参考波长是492nm。空白样品是只含有底物/染料溶液的两个未处理的孔。从所有其它吸收率中扣除两个空白孔吸收率的平均值。由两个井中重复测得的一个样品的平均值在表2、3和4中以吸收率列出。表2加入各种量热-BSA链霉抗生物素蛋白的干扰消除作用
样品 未加入到缓冲液中的吸收率 以初始信号百分数％表示的各热-BSA-SA量的信号水平(％w/v)
0 0.01 0.025 0.05 0.1 0.25 0.5 1
缓冲液 0.016 * * * * * * * *
正常血清 0.182 100 95 68 71 74 70 70 60
阳性对照(MICA 1.906 100 72 74 73.5 73 65 62 44
阳性血清 2.065 100 63 61 62 60 50 48 37
干扰血清1 2.325 100 16 14 15 16 15 14 11
干扰血清2 1.243 100 9 8.5 8 5 4 4 2
干扰血清3 0.707 100 24 16 13 13 10 10 8
*由于低测量信号不充分，因此未列出。
MICA：抗GAD单克隆抗体表3加入单体或聚合的链霉抗生物素蛋白的干扰消除作用
  样    品     未加入   1％(w/v)SA  1％(w/v)聚SA
  缓冲液     0.008     0.006     0.009
正常血清     0.106     0.144     0.108
干扰血清     1.390     0.108     0.087
阳性对照(MICA)     0.950     1.588     1.033
阳性血清     0.940     1.416     0.950
表4加入已经共价修饰的(根据实施例4)热-BSA-链霉抗生物素蛋白或热-BSA-链霉抗生物素蛋白的干扰消除作用
  样    品     未加入 0.025％(w/v)热-BSA-SA 0.025％(w/v)热-BSA-SA(失活)
缓冲液     0.009     0.011     0.011
正常血清     0.226     0.191     0.206
干扰血清     1.500     0.117     0.332
阳性对照(MICA)     1.745     1.528     1.579
阳性血清     1.963     1.457     0.797
实施例9应用生物素(光活化)-SA在抗-HCV试验中的干扰消除作用试验原理
链霉抗生物素蛋白固相的两步夹层测定(试验方法和试剂按照Boehringer Mannheim Enzymun Test抗-HIV 1+2)第一步：生物素酰化肽加样品第二步：壁结合抗体与抗-人IgG-POD结合物的反应第三步：以ABTS为底物的指示剂反应缓冲液：a)来自Enzymun Test抗-HIV 1+2的培养缓冲液来自核心，
NS4和NS5区的HCV肽上根据实施例6和7制备的失活抗生蛋白
链霉素b)来自Enzymun Test抗-HIV 1+2的结合物缓冲液温育期：第一步：1小时(样品+培养缓冲液)第二步：1小时(+结合物缓冲液)第三步：1小时(与ABTS的底物反应)样品：3个阴性血清样品(参考1)6个假阳性抗-HCV阴性样品3个阳性抗-HCV样品(参考2)体积：样品20μl每种所有其它试剂为500μl试验方法：
根据Enzymun  Test抗-HIV 1+2的试验说明在25℃在ES600上底物测定：
在ES600(Boehringer Mannheim GmbH)上在422nm处测定底物溶液。吸收率列于表5。表5
  样品 在温育缓冲液中无失活SA 在温育缓冲液中含20μl/ml失活SA 加入失活SA后信号的减弱
阴性血清1     0.036     0.027     *
阴性血清2     0.042     0.035     *
阴性血清3     0.078     0.076     *
HCV阴性血清1     0.528     0.125     76％
HCV阴性血清2     0.467     0.106     77％
HCV阴性血清3     0.979     0.161     84％
HCV阴性血清4     0.499     0.094     81％
HCV阴性血清5     2.049     0.471     77％
HCV阴性血清6     0.427     0.065     85％
HCV阳性血清1     1.747     1.645     6％
HCV阳性血清2     1.161     1.076     7％
HCV阳性血清3     1.104     1.026     7％
*未标出，因为低弱测定信号不充分。

Claims (29)

1.抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白或其衍生物作为避免免疫测定或核酸测定中非特异相互作用的干扰消除剂的应用。
2.权利要求1抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白或其衍生物的应用，其中应用了均匀交联的抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白分子。
3.权利要求1抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白或其衍生物的应用，其中通过双功能或多功能化合物交联的抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白分子被用作抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白衍生物。
4.权利要求1抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白或其衍生物的应用，其中不均匀交联的抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白分子被用作抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白衍生物。
5.权利要求4抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白或其衍生物的应用，其中应用了与蛋白质交联的抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白分子。
6.权利要求5抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白或其衍生物的应用，其中应用了与多聚蛋白质交联的抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白分子。
7.权利要求5抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白或其衍生物的应用，其中均匀交联的抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白分子被用作抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白分子。
8.权利要求6抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白或其衍生物的应用，其中均匀交联的抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白分子被用作抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白分子。
9.权利要求1抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白或其衍生物的应用，其中抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白的片段或片段混合物被用作抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白衍生物，该衍生物能保持整个分子的干扰消除作用。
10.权利要求1至9抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白或其衍生物的应用，其中失活抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白被用作抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白衍生物。
11.权利要求10抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白或其衍生物的应用，其中抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白的失活作用是通过用生物素或生物素衍生物的饱和作用完成的。
12.权利要求9抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白或其衍生物的应用，其中失活作用是通过对抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白活性中心进行共价修饰而实现的。
13.权利要求12抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白或其衍生物的应用，其中对于共价修饰，至少活性中心的一个氨基酸被衍生化，或者，生物素被共价偶联到活性中心上。
14.权利要求13的抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白或其衍生物的应用，其中生物素通过光活化的生物素，例如生物素-DADOO-AB，与活性中心共价偶联。
15.权利要求10的抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白或其衍生物的应用，其中活性中心通过基因工程方法失活，例如一个或几个氨基酸残基的取代，缺失或***。
16.权利要求10的抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白或其衍生物的应用，其中失活的抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白通过固相结合生物素和/或抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白另外进行了纯化。
17.权利要求11至15之一的抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白或其衍生物的应用，其中失活的抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白通过固相结合生物素和/或抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白另外进行了纯化。
18.权利要求1至9，11至16中之一的干扰消除剂在免疫测定或核酸测定中的应用，其中抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白被用作结合成分。
19.权利要求10的干扰消除剂在免疫测定或核酸测定中的应用，其中抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白被用作结合成分。
20.权利要求17的干扰消除剂在免疫测定或核酸测定中的应用，其中抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白被用作结合成分。
21.样品中分析物的测定方法，包括步骤
(1)样品与
(a)权利要求1至20之一的干扰消除剂
(b)分析物的一种或几种特异结合配偶体接触
(2)测定由分析物和特异结合配偶体生成的复合物以测定分析物的存在。
22.权利要求17样品中分析物的测定方法，其中该方法中至少一个结合成分通过抗生物素蛋白/生物素或链霉抗生物素蛋白/生物素被偶联，且该结合成分的偶联是在加入干扰消除剂之前实行的。
23.样品中分析物的测定方法，包括步骤
(1)样品与
(a)权利要求1-20之一的干扰消除剂
(b)分析物的一种或几种特异结合配偶体接触
(2)测定由分析物和特异结合配偶体生成的复合物以测定分析物的存在，其中样品同时与(a)和(b)接触。
24.用于样品中分析物的测定方法的试验组合物，含有
(1)权利要求1至20之一的抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白衍生物，它没有结合到分析物和分析物结合配偶体的复合物中。
(2)分析物的一种或几种特异结合配偶体。
25.权利要求24的试验组合物，另外含有该方法测定所必需的所有其它试剂。
26.权利要求9至15之一的干扰消除剂的制备方法，其中抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白是被修饰的，且用固相结合的生物素和/或抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白纯化。
27.失活抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白，它可通过用生物素或生物素衍生物饱和活性中心或通过共价修饰活性中心及固相结合的生物素和/或抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白的纯化作用获得。
28.失活抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白，其中生物素与活性中心结合，并且另外通过共价键与活性中心外部结合，其中所述共价键通过用光活化生物素衍生物饱和抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白的活性中心，并接着通过起始光反应共价偶联生物素衍生物而获得。
29.权利要求28的失活抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白，其中生物素-DADOO-AB被用作生物素衍生物。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103620407A (zh) * 2011-06-29 2014-03-05 三菱化学美迪恩斯株式会社 非特异性反应抑制剂、非特异性反应抑制方法及试剂盒

Families Citing this family (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE19637718A1 (de) 1996-04-01 1997-10-02 Boehringer Mannheim Gmbh Rekombinante inaktive Core-Streptavidin Mutanten
US6410692B2 (en) * 1998-02-02 2002-06-25 Novadx, Inc. Removal of abundant interfering proteins from a liquid sample using a collapsible affinity matrix
US7166478B2 (en) * 2002-03-12 2007-01-23 Enzo Life Sciences, Inc., C/O Enzo Biochem, Inc. Labeling reagents and labeled targets, target labeling processes and other processes for using same in nucleic acid determinations and analyses
US7172877B2 (en) * 2003-01-09 2007-02-06 Massachusetts Institute Of Technology Methods and compositions for peptide and protein labeling
US20050112586A1 (en) * 2003-11-24 2005-05-26 Roland Janzen Method and composition for stabilizing liquid reagents
WO2011127136A1 (en) * 2010-04-06 2011-10-13 University Of Chicago Composition and methods related to modification of 5-hydroxymethylcytosine (5-hmc)
EP3176580A1 (en) * 2015-12-01 2017-06-07 Roche Diagnostics GmbH Method for reduction of interferences in immunoassays
CA3039057A1 (en) * 2016-10-13 2018-04-19 Laboratory Corporation Of America Holdings Devices and methods to reduce interfering compounds in biological samples
CN106950363A (zh) * 2017-03-31 2017-07-14 四川迈克生物科技股份有限公司 抑制类风湿因子干扰的胶乳增强免疫比浊试剂
EP4325220A3 (en) * 2018-09-25 2024-05-01 Siemens Healthcare Diagnostics Inc. Methods and compositions for removing biotin interference from assays using conjugated molecular traps
WO2020068541A1 (en) 2018-09-25 2020-04-02 Siemens Healthcare Diagnostics Inc. Methods and compositions for removing biotin interference from assays using molecular traps
CN111122842A (zh) * 2018-10-31 2020-05-08 博阳生物科技（上海）有限公司 一种抗干扰剂及其应用
CN112888945B (zh) * 2018-12-06 2022-07-12 武汉全景生物技术有限公司 免疫检测中消除阿霉素干扰的方法及免疫检测试剂盒
WO2020113529A1 (zh) * 2018-12-06 2020-06-11 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 免疫检测中消除茶碱干扰的方法及免疫检测试剂盒
CN110146692A (zh) * 2019-05-28 2019-08-20 迪瑞医疗科技股份有限公司 一种基于吖啶酯化学发光、链霉亲和素磁珠-生物素放大反应体系及检测试剂盒
CN112595845B (zh) * 2020-12-09 2022-10-21 深圳普门科技股份有限公司 透明质酸检测试剂盒及检测***
CN113740526B (zh) * 2021-08-20 2024-02-20 广西康柏莱科技有限公司 一种改性封闭剂及其制备方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0155854B1 (en) * 1984-03-22 1990-09-26 Bresatec Limited Non-radioactive biological probes

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4914040A (en) * 1988-03-03 1990-04-03 Boehringer Mannheim Gmbh Reagent and method for determination of a polyvalent substance using an immunoaggregate
US5395938A (en) * 1992-08-21 1995-03-07 Nichols Institute Diagnostics Biotinylated chemiluminescent labels and their conjugates, assays and assay kits
DE4302241A1 (de) * 1993-01-27 1994-07-28 Boehringer Mannheim Gmbh Neues Biotinylierungsreagenz

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0155854B1 (en) * 1984-03-22 1990-09-26 Bresatec Limited Non-radioactive biological probes

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BIOCHEM.J.269 1990-01-01 Gitlin等 *
EP-0155854 1985-09-25 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103620407A (zh) * 2011-06-29 2014-03-05 三菱化学美迪恩斯株式会社 非特异性反应抑制剂、非特异性反应抑制方法及试剂盒
CN103620407B (zh) * 2011-06-29 2016-09-21 美迪恩斯生命科技株式会社 非特异性反应抑制剂、非特异性反应抑制方法及试剂盒

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