CN110234327A - 类固醇施用和免疫疗法 - Google Patents

类固醇施用和免疫疗法 Download PDF

Info

Publication number
CN110234327A
CN110234327A CN201780085063.3A CN201780085063A CN110234327A CN 110234327 A CN110234327 A CN 110234327A CN 201780085063 A CN201780085063 A CN 201780085063A CN 110234327 A CN110234327 A CN 110234327A
Authority
CN
China
Prior art keywords
cell
steroids
amount
modified
days
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201780085063.3A
Other languages
English (en)
Inventor
劳伦斯·J·N·库博
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Precigen Inc
Original Assignee
Intrexon Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Intrexon Corp filed Critical Intrexon Corp
Publication of CN110234327A publication Critical patent/CN110234327A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/191—Tumor necrosis factors [TNF], e.g. lymphotoxin [LT], i.e. TNF-beta
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/565—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids not substituted in position 17 beta by a carbon atom, e.g. estrane, estradiol
    • A61K31/568—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids not substituted in position 17 beta by a carbon atom, e.g. estrane, estradiol substituted in positions 10 and 13 by a chain having at least one carbon atom, e.g. androstanes, e.g. testosterone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/57—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms, e.g. pregnane or progesterone
    • A61K31/573—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms, e.g. pregnane or progesterone substituted in position 21, e.g. cortisone, dexamethasone, prednisone or aldosterone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/14—Blood; Artificial blood
    • A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/20—Interleukins [IL]
    • A61K38/2013—IL-2
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/20—Interleukins [IL]
    • A61K38/2046—IL-7
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/20—Interleukins [IL]
    • A61K38/208—IL-12
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/20—Interleukins [IL]
    • A61K38/2086—IL-13 to IL-16
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/21—Interferons [IFN]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/21—Interferons [IFN]
    • A61K38/212—IFN-alpha
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/21—Interferons [IFN]
    • A61K38/217—IFN-gamma
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/462—Cellular immunotherapy characterized by the effect or the function of the cells
    • A61K39/4621—Cellular immunotherapy characterized by the effect or the function of the cells immunosuppressive or immunotolerising
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/463—Cellular immunotherapy characterised by recombinant expression
    • A61K39/4631—Chimeric Antigen Receptors [CAR]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
    • A61K39/4643—Vertebrate antigens
    • A61K39/46434—Antigens related to induction of tolerance to non-self
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
    • A61K39/4643—Vertebrate antigens
    • A61K39/4644—Cancer antigens
    • A61K39/464402—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A61K39/464411—Immunoglobulin superfamily
    • A61K39/464412—CD19 or B4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/02—Drugs for disorders of the urinary system of urine or of the urinary tract, e.g. urine acidifiers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • C12N15/867—Retroviral vectors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0636—T lymphocytes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
    • A61K2239/38—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
    • A61K2239/46—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the cancer treated
    • A61K2239/48—Blood cells, e.g. leukemia or lymphoma
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/33—Fusion polypeptide fusions for targeting to specific cell types, e.g. tissue specific targeting, targeting of a bacterial subspecies

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)

Abstract

本文的公开内容包括在体内诱导经修饰的效应细胞扩增的方法，其包括施用类固醇和经修饰的效应细胞。本文的描述还包括在体内诱导经修饰的T细胞(例如，CAR‑T细胞或TCR细胞)扩增的方法，其包括施用类固醇和经修饰的T细胞。

Description

类固醇施用和免疫疗法
相关申请的交叉引用
本申请要求于2016年11月30日提交的美国临时专利申请号62/428,474的权益，该美国临时专利申请通过引用以其全文并入于此。
背景技术
癌症是一大类异质性疾病，其治疗响应和结果通常依赖于恶性肿瘤的具体类型。肿瘤抗原是诊断和癌症疗法的有用标志物。在一些情况下，可以修饰效应细胞以表达可结合一种或多种肿瘤抗原的外源多肽。
发明内容
在某些实施方案中，本文公开了在有需要的受试者体内诱导经修饰的效应细胞的扩增的方法。在其他情况下，本文的描述包括诱导经修饰的T细胞(例如，CAR-T细胞或TCR-T细胞)的扩增的方法。
在某些实施方案中，本文公开了一种方法，其包括向有需要的受试者施用：(a)经修饰的效应细胞；以及(b)类固醇如皮质类固醇，其量有效诱导和/或维持所述经修饰的效应细胞的群体在所述受试者体内的扩增。在一些实施方案中，所述量不会在临床上干扰所述经修饰的效应细胞的群体在所述受试者体内的植入和/或持续扩增。在一些实施方案中，所述经修饰的效应细胞包含嵌合受体。在一些实施方案中，所述经修饰的效应细胞是嵌合抗原受体(CAR)T细胞。在一些实施方案中，所述CAR结合CD19上的表位。在一些实施方案中，所述CAR结合CD33上的表位。在一些实施方案中，所述CAR结合BCMA、CD44、α-叶酸受体、CAIX、CD30、ROR1、CEA、EGP-2、EGP-40、HER2、HER3、叶酸结合蛋白、GD2、GD3、IL-13R-a2、KDR、EDB-F、间皮素、CD22、EGFR、诸如MUC-1或MUC-16等粘蛋白、MAGE-A1、h5T4、EGFR、PSMA、TAG-72、EGFRvIII、CD123和VEGF-R2中的至少一种上的表位。在一些实施方案中，所述CAR进一步包含至少一种共刺激信号传导结构域。在一些实施方案中，所述至少一种共刺激信号传导结构域包括来自CD27、CD28、4-1BB、ICOS、OX40、CD3-ζ或其片段或组合的信号传导结构域。在一些实施方案中，所述至少一种共刺激信号传导结构域包括来自4-1BB、CD28或其组合的信号传导结构域。在一些实施方案中，所述CAR进一步包含CD28共刺激信号传导结构域和CD3-ζ。在一些实施方案中，所述CAR进一步包含CD28共刺激信号传导结构域。在一些实施方案中，所述经修饰的效应细胞是经修饰的自然杀伤T细胞。在一些实施方案中，所述经修饰的自然杀伤T细胞是经修饰的恒定自然杀伤T细胞。在一些实施方案中，所述经修饰的效应细胞是T细胞受体(TCR)工程化T细胞。在一些实施方案中，所述经修饰的效应细胞是经修饰的自然杀伤细胞。在一些实施方案中，所述类固醇与所述经修饰的效应细胞同时施用。在一些实施方案中，所述类固醇是皮质类固醇。在一些实施方案中，所述类固醇包括氟***、美睾酮、美雄酮、十一酸诺龙、环戊丙酸诺龙(nandrolone-cyplonate)、氧雄龙、羟甲烯龙、己氧基苯丙酸诺龙、睾酮、强的松、皮质醇、可的松、强的松龙、***、倍他米松、曲安西龙、倍氯米松、氟氢可的松、脱氧皮质酮、醛固酮或司坦唑醇。在一些实施方案中，所述类固醇与所述经修饰的效应细胞顺序施用。在一些实施方案中，在施用所述经修饰的效应细胞前将所述类固醇施用于所述受试者。在一些实施方案中，在施用所述经修饰的效应细胞后将所述类固醇施用于所述受试者。在一些实施方案中，在施用所述经修饰的效应细胞前至少0.5、1、2、3、4、5、6、8、10、12、15、18、20小时或24小时施用所述类固醇。在一些实施方案中，在施用所述经修饰的效应细胞前至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、75、90天施用所述类固醇。在一些实施方案中，在施用所述经修饰的效应细胞后至少0.5、1、2、3、4、5、6、8、10、12、15、18、20、24、36、48、60、72、84、96、108小时或120小时施用所述类固醇。在一些实施方案中，在施用所述经修饰的效应细胞后至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、75、90天或更多天施用所述类固醇。在一些实施方案中，所述类固醇连续施用1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、75、90天或更多天。在一些实施方案中，所述类固醇以预定的时间间隔施用1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、75、90天或更多天。在一些实施方案中，每10天施用所述类固醇。在一些实施方案中，以1个剂量、2个剂量、3个剂量、4个剂量、5个剂量或更多个剂量施用所述量的类固醇。在一些实施方案中，将第一量的类固醇以1个剂量、2个剂量、3个剂量、4个剂量、5个剂量或更多个剂量施用第一预定量的时间；并且将第二量的类固醇以1个剂量、2个剂量、3个剂量、4个剂量、5个剂量或更多个剂量施用第二预定量的时间。在一些实施方案中，所述第一预定量的时间是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、75、90天。在一些实施方案中，所述第二预定量的时间是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、75、90天。在一些实施方案中，将第一量的类固醇施用于所述受试者持续第一段时间，并将第二量的类固醇施用于所述受试者持续第二段时间。在一些实施方案中，将所述第一量的类固醇以1个剂量、2个剂量、3个剂量、4个剂量、5个剂量或更多个剂量施用于所述受试者，持续1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、75、90天或更多天。在一些实施方案中，所述第一量的类固醇是足以治疗病况的量。在一些实施方案中，所述病况是移植物抗宿主病(GVHD)。在一些实施方案中，所述病况是细胞因子释放综合征(CRS)。在一些实施方案中，在所述病况恢复或改善后，将所述第二量的类固醇施用于所述受试者。在一些实施方案中，将所述第二量的类固醇以1个剂量、2个剂量、3个剂量、4个剂量、5个剂量或更多个剂量施用于所述受试者，持续1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、75、90天或更多天。在一些实施方案中，将所述第一量的类固醇与所述经修饰的效应细胞同时施用于所述受试者。在一些实施方案中，在施用所述经修饰的效应细胞后将所述第一量的类固醇施用于所述受试者。在一些实施方案中，在施用所述经修饰的效应细胞前将所述第一量的类固醇施用于所述受试者。在一些实施方案中，在施用所述经修饰的效应细胞后至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、13、14天或15天将所述第一量的类固醇施用于所述受试者。在一些实施方案中，在施用所述经修饰的效应细胞后至少15天或更多天将所述第一量的类固醇施用于所述受试者。在一些实施方案中，将所述第一量的类固醇连续或间歇施用于所述受试者，持续至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、75、90天或更多天。在一些实施方案中，将所述第一量的类固醇以预定的时间间隔施用于所述受试者，持续至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、75、90天或更多天。在一些实施方案中，在施用所述经修饰的效应细胞并且完成施用所述第一量的类固醇后至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、75、90天或更多天将所述第二量的类固醇施用于所述受试者。在一些实施方案中，在施用所述经修饰的效应细胞并且完成施用所述第一量的类固醇后至少49天或更多天将所述第二量的类固醇施用于所述受试者。在一些实施方案中，所述第一量的类固醇是1mg/kg。在一些实施方案中，所述第二量的类固醇是约0.9mg/kg至约0.5mg/kg。在一些实施方案中，所述第二量的类固醇是0.5mg/kg。在一些实施方案中，以连续剂量施用所述第二量的类固醇。在一些实施方案中，每个连续剂量减少0.1mg/kg。在一些实施方案中，所述方法进一步包括施用细胞因子。在一些实施方案中，所述细胞因子包括干扰素、白介素、趋化因子、集落刺激因子或肿瘤坏死因子。在一些实施方案中，所述细胞因子与所述经修饰的效应细胞共表达。在一些实施方案中，所述细胞因子包括IL-2、IL-7、IL-12、IL-15、IL-21、IFNγ或TNF-α。在一些实施方案中，所述细胞因子包括膜结合的IL-15(mbIL-15)。在一些实施方案中，所述细胞因子与所述类固醇或所述经修饰的效应细胞同时施用。在一些实施方案中，所述细胞因子与所述类固醇和所述经修饰的效应细胞中的至少一种同时施用。在一些实施方案中，所述细胞因子和经修饰的效应细胞同时或顺序施用，并且在施用所述细胞因子和所述经修饰的效应细胞前，或在施用所述细胞因子和所述经修饰的效应细胞后但在与细胞因子风暴相关的任何症状前施用所述类固醇。在一些实施方案中，所述细胞因子与所述类固醇和/或所述经修饰的T细胞顺序施用。在一些实施方案中，在表现出细胞因子相关毒性的至少一种症状时施用所述类固醇，所述症状选自细胞因子释放综合征(CRS)、脑病和B细胞发育不全。在一些实施方案中，在表现出CRS、脑病和B细胞发育不全前施用所述类固醇。在一些实施方案中，所述细胞因子相关毒性诱导细胞因子风暴。在一些实施方案中，以小于减少细胞因子相关毒性的至少一种症状所需的类固醇量的量施用所述类固醇，所述症状选自细胞因子释放综合征(CRS)、脑病和B细胞发育不全。在一些实施方案中，以约1mg/kg的量施用所述类固醇。在一些实施方案中，以约0.5mg/kg的量施用所述类固醇。在一些实施方案中，将所述类固醇和/或所述经修饰的效应细胞配制用于肠胃外施用、皮下施用、舌下施用、鼻内施用和口服施用中的至少一种。在一些实施方案中，将一定量的所述经修饰的效应细胞施用于所述受试者。在一些实施方案中，所述量是约105至约109个经修饰的效应细胞/kg。在一些实施方案中，所述量是约105至约106个经修饰的效应细胞/kg。在一些实施方案中，所述量是约106至约107个经修饰的效应细胞/kg。在一些实施方案中，所述量是约107至约108个经修饰的效应细胞/kg。在一些实施方案中，所述量是约108至约109个经修饰的效应细胞/kg。在一些实施方案中，所述量是约105个经修饰的效应细胞/kg。在一些实施方案中，所述受试者患有癌症。在一些实施方案中，所述癌症是实体瘤。在一些实施方案中，所述实体瘤包括乳腺癌、***、结肠直肠癌、肾癌、肝癌、肺癌、卵巢癌、胰腺癌、***癌或尿路上皮癌。在一些实施方案中，所述癌症是血液学恶性肿瘤。在一些实施方案中，所述血液学恶性肿瘤包括白血病、淋巴瘤或骨髓瘤。在一些实施方案中，所述血液学恶性肿瘤包括B细胞恶性肿瘤。在一些实施方案中，所述B细胞恶性肿瘤包括慢性淋巴细胞白血病(CLL)、小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)、高危CLL、非CLL/SLL淋巴瘤、幼淋巴细胞白血病(PLL)、滤泡性淋巴瘤(FL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、Waldenstrom巨球蛋白血症、多发性骨髓瘤、结外边缘区B细胞淋巴瘤、***边缘区B细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、非伯基特高级别B细胞淋巴瘤、原发性纵隔B细胞淋巴瘤(PMBL)、免疫母细胞性大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤、B细胞幼淋巴细胞白血病、淋巴浆细胞淋巴瘤、脾边缘区淋巴瘤、浆细胞骨髓瘤、浆细胞瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤或淋巴瘤样肉芽肿病。在一些实施方案中，所述血液学恶性肿瘤包括髓样白血病。在一些实施方案中，所述血液学恶性肿瘤包括急性髓样白血病(AML)或慢性髓样白血病(CML)。在一些实施方案中，所述癌症是转移性癌症。在一些实施方案中，AML是复发性AML。在一些实施方案中，AML是难治性AML。在一些实施方案中，所述癌症是复发性或难治性癌症。在一些实施方案中，接受者患有明显的恶性疾病。在一些实施方案中，所述接受者患有少量残留的恶性疾病。在一些实施方案中，所述受试者是人。在一些情况下，所述受试者是18岁或18岁以上的人。在其他情况下，所述受试者是17岁或17岁以下的人。在一些情况下，所述受试者是人类婴儿、儿童或青少年。
在某些实施方案中，本文公开了一种方法，其包括向受试者施用：(a)结合CD19上的表位的CAR-T细胞；以及(b)类固醇，其中所述类固醇与所述CAR-T细胞同时或顺序施用，并且所述类固醇以有效诱导和/或维持所述CAR-T细胞的群体在所述受试者体内扩增的量施用于所述受试者。在一些实施方案中，所述量不会对所述CAR-T细胞的群体在所述受试者体内的植入和/或持续扩增产生不利影响。在一些实施方案中，在表现出细胞因子风暴的至少一种症状前施用所述类固醇。在一些情况下，施用的所述类固醇的量低于足以治疗细胞因子风暴的至少一种症状的量。在一些实施方案中，所述CAR-T细胞进一步包含至少一种共刺激信号传导结构域。在一些实施方案中，所述至少一种共刺激信号传导结构域包括来自CD27、CD28、4-1BB、ICOS、OX40、CD3-ζ或其片段或组合的信号传导结构域。在一些实施方案中，所述至少一种共刺激信号传导结构域包括来自4-1BB、CD28或其组合的信号传导结构域。在一些实施方案中，所述CAR-T细胞进一步包含CD28共刺激信号传导结构域和CD3-ζ。在一些实施方案中，所述CAR进一步包含CD28共刺激信号传导结构域。在一些实施方案中，所述经修饰的效应细胞是经修饰的自然杀伤T细胞。在一些实施方案中，所述经修饰的自然杀伤T细胞是经修饰的恒定自然杀伤T细胞。在一些实施方案中，所述经修饰的效应细胞是T细胞受体(TCR)工程化T细胞。在一些实施方案中，所述经修饰的效应细胞是经修饰的自然杀伤细胞。在一些实施方案中，所述类固醇与所述经修饰的效应细胞同时施用。在一些实施方案中，所述类固醇与所述经修饰的效应细胞顺序施用。在一些实施方案中，在施用所述经修饰的效应细胞前将所述类固醇施用于所述受试者。在一些实施方案中，在施用所述经修饰的效应细胞后将所述类固醇施用于所述受试者。在一些实施方案中，在施用所述经修饰的效应细胞前至少0.5、1、2、3、4、5、6、8、10、12、15、18、20小时或24小时施用所述类固醇。在一些实施方案中，在施用所述经修饰的效应细胞前至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、15、28天或30天施用所述类固醇。在一些实施方案中，在施用所述经修饰的效应细胞后至少0.5、1、2、3、4、5、6、8、10、12、15、18、20、24、36、48、60、72、84、96、108小时或120小时施用所述类固醇。在一些实施方案中，在施用所述经修饰的效应细胞后至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、15、28、30、45、60、90天或更多天施用所述类固醇。在一些实施方案中，将所述类固醇连续施用1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、15、20、25、30、45、60、90天或更多天。在一些实施方案中，将所述类固醇以预定的时间间隔施用1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、15、20、25、30、45、60、90天或更多天。在一些实施方案中，以1个剂量、2个剂量、3个剂量、4个剂量、5个剂量或更多个剂量施用所述量的类固醇。在一些实施方案中，以1个剂量、2个剂量、3个剂量、4个剂量、5个剂量或更多个剂量施用第一量的类固醇以治疗病况；并且在所述病况恢复或改善后以1个剂量、2个剂量、3个剂量、4个剂量、5个剂量或更多个剂量施用第二量的类固醇。在一些实施方案中，所述第一量的类固醇是1mg/kg。在一些实施方案中，所述第二量的类固醇是0.5mg/kg。在一些实施方案中，所述类固醇包括氟***、美睾酮、美雄酮、十一酸诺龙、环戊丙酸诺龙、氧雄龙、羟甲烯龙、己氧基苯丙酸诺龙、睾酮、强的松、皮质醇、可的松、强的松龙、***、倍他米松、曲安西龙、倍氯米松、氟氢可的松、脱氧皮质酮、醛固酮或司坦唑醇。在一些实施方案中，所述方法进一步包括施用细胞因子。在一些实施方案中，所述细胞因子包括干扰素、白介素、趋化因子、集落刺激因子或肿瘤坏死因子。在一些实施方案中，所述细胞因子与所述经修饰的效应细胞共表达。在一些实施方案中，所述细胞因子包括IL-2、IL-7、IL-12、IL-15、IL-21、IFNγ或TNF-α。在一些实施方案中，所述细胞因子包括mbIL-15。在一些实施方案中，所述细胞因子与所述类固醇或所述经修饰的效应细胞同时施用。在一些实施方案中，所述细胞因子与所述类固醇和所述经修饰的效应细胞同时施用。在一些实施方案中，所述细胞因子与所述类固醇和/或所述经修饰的效应细胞顺序施用。在一些实施方案中，在表现出细胞因子相关毒性的至少一种症状时施用所述类固醇，所述症状选自细胞因子释放综合征(CRS)、脑病和B细胞发育不全。在一些实施方案中，所述细胞因子相关毒性诱导细胞因子风暴。在一些实施方案中，以小于减少细胞因子相关毒性的至少一种症状所需的类固醇量的量施用所述类固醇，所述症状选自细胞因子释放综合征(CRS)、脑病和B细胞发育不全。在一些实施方案中，将所述类固醇和/或所述经修饰的效应细胞配制用于肠胃外施用、皮下施用、舌下施用、鼻内施用和口服施用中的至少一种。在一些实施方案中，所述受试者患有癌症。在一些实施方案中，所述癌症是实体瘤。在一些实施方案中，所述实体瘤包括乳腺癌、***、结肠直肠癌、肾癌、肝癌、肺癌、卵巢癌、胰腺癌、***癌或尿路上皮癌。在一些实施方案中，所述癌症是血液学恶性肿瘤。在一些实施方案中，所述血液学恶性肿瘤包括白血病、淋巴瘤或骨髓瘤。在一些实施方案中，所述血液学恶性肿瘤包括B细胞恶性肿瘤。在一些实施方案中，所述B细胞恶性肿瘤包括慢性淋巴细胞白血病(CLL)、小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)、高危CLL、非CLL/SLL淋巴瘤、幼淋巴细胞白血病(PLL)、滤泡性淋巴瘤(FL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、Waldenstrom巨球蛋白血症、多发性骨髓瘤、结外边缘区B细胞淋巴瘤、***边缘区B细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、非伯基特高级别B细胞淋巴瘤、原发性纵隔B细胞淋巴瘤(PMBL)、免疫母细胞性大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤、B细胞幼淋巴细胞白血病、淋巴浆细胞淋巴瘤、脾边缘区淋巴瘤、浆细胞骨髓瘤、浆细胞瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤或淋巴瘤样肉芽肿病。在一些实施方案中，所述血液学恶性肿瘤包括髓样白血病。在一些实施方案中，所述血液学恶性肿瘤包括急性髓样白血病(AML)或慢性髓样白血病(CML)。在一些实施方案中，所述癌症是转移性癌症。在一些实施方案中，所述癌症是复发性或难治性癌症。在一些实施方案中，所述受试者是人。在一些情况下，所述受试者是18岁或18岁以上的人。在其他情况下，所述受试者是17岁或17岁以下的人。在一些情况下，所述受试者是人类婴儿、儿童或青少年。
在某些实施方案中，本文公开了一种在有需要的受试者体内诱导T细胞植入和/或扩增的方法，其包括：(a)使T细胞与编码嵌合抗原受体的载体离体接触以生成经修饰的T细胞；(b)向所述受试者施用一定量的所述经修饰的T细胞；以及(c)以有效诱导和/或维持所述经修饰的T细胞的群体在所述受试者体内扩增的量向所述受试者施用类固醇。在一些实施方案中，所述量不会在临床上干扰所述经修饰的效应细胞的群体在所述受试者体内的植入和/或持续扩增。在一些实施方案中，所述载体是慢病毒载体、逆转录病毒载体、睡美人转座子或非病毒载体。在一些实施方案中，所述载体是睡美人转座子。在一些实施方案中，所述经修饰的T细胞是嵌合抗原受体(CAR)T细胞。在一些实施方案中，所述经修饰的T细胞是工程化T细胞受体(TCR)T细胞。在一些实施方案中，所述T细胞在照护点场所处被修饰并在未经历增殖和激活的情况下施用于所述受试者。在一些实施方案中，刺激所述经修饰的T细胞至少0、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30天或更多天。在一些实施方案中，刺激所述经修饰的T细胞至少5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60天或更多天。在一些实施方案中，刺激所述经修饰的T细胞至少7、14、21、28、35、42、49、56、63天或更多天。在一些实施方案中，所述嵌合抗原受体结合至CD19、CD33、BCMA、CD44、α-叶酸受体、CAIX、CD30、ROR1、CEA、EGP-2、EGP-40、HER2、HER3、叶酸结合蛋白、GD2、GD3、IL-13R-a2、KDR、EDB-F、间皮素、CD22、EGFR、MUC-1、MAGE-A1、h5T4、PSMA、TAG-72、EGFRvIII、CD123和VEGF-R2中的至少一种上的表位。在一些实施方案中，所述CAR-T细胞进一步包含至少一种共刺激信号传导结构域。在一些实施方案中，所述至少一种共刺激信号传导结构域包括来自CD27、CD28、4-1BB、ICOS、OX40、CD3-ζ或其片段或组合的信号传导结构域。在一些实施方案中，所述至少一种共刺激信号传导结构域包括来自4-1BB、CD28或其组合的信号传导结构域。在一些实施方案中，所述经修饰的T细胞进一步包含CD28共刺激信号传导结构域和CD3-ζ。在一些实施方案中，所述经修饰的T细胞进一步包含共刺激信号传导结构域CD28。在一些实施方案中，所述经修饰的效应细胞是经修饰的自然杀伤T细胞。在一些实施方案中，所述经修饰的自然杀伤T细胞是经修饰的恒定自然杀伤T细胞。在一些实施方案中，所述类固醇与所述经修饰的T细胞同时施用。在一些实施方案中，所述类固醇与所述经修饰的T细胞顺序施用。在一些实施方案中，在施用所述经修饰的T细胞前将所述类固醇施用于所述受试者。在一些实施方案中，在施用所述经修饰的T细胞后将所述类固醇施用于所述受试者。在一些实施方案中，在施用所述经修饰的T细胞前至少0.5、1、2、3、4、5、6、8、10、12、15、18、20小时或24小时施用所述类固醇。在一些实施方案中，在施用所述经修饰的效应细胞前至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、15、28天或30天施用所述类固醇。在一些实施方案中，在施用所述经修饰的T细胞后至少约0.5、1、2、3、4、5、6、8、10、12、15、18、20、24、36、48、72、80、90、100、108、120、130、140、150小时或160小时施用所述类固醇。在一些实施方案中，在施用所述经修饰的效应细胞后至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、75、90天或更多天施用所述类固醇。在一些实施方案中，将所述类固醇连续施用1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、75、90天或更多天。在一些实施方案中，将所述类固醇以预定间隔施用1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、75、90天或更多天，任选地与所述经修饰的T细胞组合。在一些实施方案中，每10天施用所述类固醇。在一些实施方案中，以1个剂量、2个剂量、3个剂量、4个剂量、5个剂量或更多个剂量施用所述量的类固醇。在一些实施方案中，将第一量的类固醇施用于所述受试者。在一些实施方案中，将所述第一量的类固醇以1个剂量、2个剂量、3个剂量、4个剂量、5个剂量或更多个剂量施用于所述受试者。在一些实施方案中，将所述第一量的类固醇施用于所述受试者以治疗病况。在一些实施方案中，所述病况是移植物抗宿主病(GVHD)。在一些实施方案中，所述病况是细胞因子释放综合征(CRS)。在一些实施方案中，在所述病况恢复或改善后，将第二量的类固醇施用于所述受试者。在一些实施方案中，以1个剂量、2个剂量、3个剂量、4个剂量、5个剂量或更多个剂量施用所述第二量的类固醇。在一些实施方案中，将所述第一量的类固醇与所述经修饰的T细胞同时施用于所述受试者。在一些实施方案中，在施用所述经修饰的T细胞后将所述第一量的类固醇施用于所述受试者。在一些实施方案中，在施用所述经修饰的T细胞前将所述第一量的类固醇施用于所述受试者。在一些实施方案中，在施用所述经修饰的T细胞后至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、15、28、30、45、60、90天或更多天将所述第一量的类固醇施用于所述受试者。在一些实施方案中，在施用所述经修饰的T细胞后至少15天或更多天将所述第一量的类固醇施用于所述受试者。在一些实施方案中，将所述第一量的类固醇连续施用于所述受试者，持续至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、75、90天或更多天。在一些实施方案中，将所述第一量的类固醇以预定的时间间隔施用于所述受试者，持续至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、75、90天或更多天。在一些实施方案中，在施用所述经修饰的T细胞并且完成施用所述第一量的类固醇后至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、75、90天或更多天将所述第二量的类固醇施用于所述受试者。在一些实施方案中，在施用所述经修饰的T细胞并且完成施用所述第一量的类固醇后至少49天或更多天将所述第二量的类固醇施用于所述受试者。在一些实施方案中，将所述第二量的类固醇连续施用于所述受试者，持续至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、75、90天或更多天。在一些实施方案中，将所述第二量的类固醇以预定的时间间隔施用于所述受试者，持续至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、75、90天或更多天。在一些实施方案中，所述第一量的类固醇是1mg/kg。在一些实施方案中，所述第二量的类固醇是约0.9mg/kg至约0.5mg/kg。在一些实施方案中，所述第二量的类固醇是0.5mg/kg。在一些实施方案中，以连续剂量施用所述第二量的类固醇。在一些实施方案中，每个连续剂量减少0.1mg/kg。在一些实施方案中，所述类固醇包括氟***、美睾酮、美雄酮、十一酸诺龙、环戊丙酸诺龙、氧雄龙、羟甲烯龙、己氧基苯丙酸诺龙、睾酮、强的松、皮质醇、可的松、强的松龙、***、倍他米松、曲安西龙、倍氯米松、氟氢可的松、脱氧皮质酮、醛固酮或司坦唑醇。在一些实施方案中，以小于减少细胞因子相关毒性的至少一种症状所需的类固醇量的量施用所述类固醇。在一些实施方案中，以足以减少细胞因子相关毒性的至少一种症状的量施用所述类固醇。在一些实施方案中，所述细胞因子相关毒性的至少一种症状选自细胞因子释放综合征(CRS)、脑病和B细胞发育不全。在一些实施方案中，以约1mg/kg的量施用所述类固醇。在一些实施方案中，以约0.5mg/kg的量施用所述类固醇。在一些实施方案中，所述经修饰的T细胞的量是约105至约109个经修饰的T细胞/kg。在一些实施方案中，所述经修饰的T细胞的量是约105至约106个经修饰的T细胞/kg。在一些实施方案中，所述经修饰的T细胞的量是约106至约107个经修饰的T细胞/kg。在一些实施方案中，所述经修饰的T细胞的量是约107至约108个经修饰的T细胞/kg。在一些实施方案中，所述经修饰的T细胞的量是约108至约109个经修饰的T细胞/kg。在一些实施方案中，所述经修饰的T细胞的量是约105个经修饰的T细胞/kg。在一些实施方案中，所述方法进一步包括施用细胞因子。在一些实施方案中，所述细胞因子包括干扰素、白介素、趋化因子、集落刺激因子或肿瘤坏死因子。在一些实施方案中，所述细胞因子与所述经修饰的T细胞共表达。在一些实施方案中，所述细胞因子包括IL-2、IL-7、IL-12、IL-15、IL-21、IFNγ或TNF-α。在一些实施方案中，所述细胞因子包括mbIL-15。在一些实施方案中，所述细胞因子与所述类固醇或所述CAR-T经修饰的T细胞同时施用。在一些实施方案中，所述细胞因子与所述类固醇和所述经修饰的T细胞同时施用。在一些实施方案中，所述细胞因子与所述类固醇和/或所述经修饰的T细胞顺序施用。在一些实施方案中，将所述类固醇和/或所述经修饰的T细胞配制用于肠胃外施用。在一些实施方案中，将所述类固醇和/或所述经修饰的T细胞配制用于口服施用。在一些实施方案中，所述受试者是人。在一些情况下，所述受试者是18岁或18岁以上的人。在其他情况下，所述受试者是17岁或17岁以下的人。在一些情况下，所述受试者是人类婴儿、儿童或青少年。
在某些实施方案中，本文公开了一种在有需要的受试者体内诱导T细胞扩增的方法，其包括：(a)使T细胞与包含编码嵌合抗原受体的核酸的载体离体接触以生成CD19特异性T细胞，所述嵌合受体识别CD19上的表位；以及(b)向所述受试者施用CD19特异性T细胞的群体与一定量的类固醇的组合，其中所述量的类固醇有效诱导和/或维持所述CD19特异性T细胞在所述受试者体内的扩增。在一些实施方案中，所述量不会在临床上干扰所述经修饰的效应细胞的群体在所述受试者体内的植入和/或持续扩增。在一些实施方案中，所述载体是慢病毒载体、逆转录病毒载体、睡美人转座子或非病毒载体。在一些实施方案中，所述载体是睡美人转座子。在一些实施方案中，刺激所述CAR-T细胞至少0、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30天或更多天。在一些实施方案中，刺激所述CAR-T细胞至少5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60天或更多天。在一些实施方案中，刺激所述CAR-T细胞至少7、14、21、28、35、42、49、56、63天或更多天。在一些实施方案中，所述CAR-T细胞进一步包含至少一种共刺激信号传导结构域。在一些实施方案中，所述至少一种共刺激信号传导结构域包括来自CD27、CD28、4-1BB、ICOS、OX40、CD3-ζ或其片段或组合的信号传导结构域。在一些实施方案中，所述至少一种共刺激信号传导结构域包括来自4-1BB、CD28或其组合的信号传导结构域。在一些实施方案中，所述CAR-T细胞进一步包含CD28共刺激信号传导结构域和CD3-ζ。在一些实施方案中，所述CAR-T进一步包含CD28共刺激信号传导结构域。在一些实施方案中，所述经修饰的效应细胞是经修饰的自然杀伤T细胞。在一些实施方案中，所述经修饰的自然杀伤T细胞是经修饰的恒定自然杀伤T细胞。在一些实施方案中，所述类固醇与所述CAR-T细胞同时施用。在一些实施方案中，所述类固醇与所述CAR-T细胞顺序施用。在一些实施方案中，在施用所述CAR-T细胞前将所述类固醇施用于所述受试者。在一些实施方案中，在施用所述CAR-T细胞后将所述类固醇施用于所述受试者。在一些实施方案中，在施用所述CAR-T细胞前至少0.5、1、2、3、4、5、6、8、10、12、15、18、20小时或24小时施用所述类固醇。在一些实施方案中，在施用所述经修饰的效应细胞前至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、15、28天或30天施用所述类固醇。在一些实施方案中，在施用所述CAR-T细胞后至少约0.5、1、2、3、4、5、6、8、10、12、15、18、20、24、36、48、72、80、90、100、108、120、130、140、150小时或160小时施用所述类固醇。在一些实施方案中，在施用所述经修饰的效应细胞后至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、15、28、30、45、60、90天或更多天施用所述类固醇。在一些实施方案中，将所述类固醇连续施用1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、15、20、25、30、45、60、90天或更多天。在一些实施方案中，将所述类固醇以预定间隔施用1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、15、20、25、30、45、60、90天或更多天，任选地与所述经修饰的CAR-T细胞组合。在一些实施方案中，以1个剂量、2个剂量、3个剂量、4个剂量、5个剂量或更多个剂量施用所述量的类固醇。在一些实施方案中，以1个剂量、2个剂量、3个剂量、4个剂量、5个剂量或更多个剂量施用第一量的类固醇以治疗病况；并且在所述病况恢复或改善后以1个剂量、2个剂量、3个剂量、4个剂量、5个剂量或更多个剂量施用第二量的类固醇。在一些实施方案中，所述第一量的类固醇是1mg/kg。在一些实施方案中，所述第二量的类固醇是0.5mg/kg。在一些实施方案中，所述类固醇包括氟***、美睾酮、美雄酮、十一酸诺龙、环戊丙酸诺龙、氧雄龙、羟甲烯龙、己氧基苯丙酸诺龙、睾酮、强的松、皮质醇、可的松、强的松龙、***、倍他米松、曲安西龙、倍氯米松、氟氢可的松、脱氧皮质酮、醛固酮或司坦唑醇。在一些实施方案中，以小于减少细胞因子相关毒性的至少一种症状所需的类固醇量的量施用所述类固醇。在一些实施方案中，以足以减少细胞因子相关毒性的至少一种症状的量施用所述类固醇。在一些实施方案中，所述细胞因子相关毒性的至少一种症状选自细胞因子释放综合征(CRS)、脑病和B细胞发育不全。在一些实施方案中，所述方法进一步包括施用细胞因子。在一些实施方案中，所述细胞因子包括干扰素、白介素、趋化因子、集落刺激因子或肿瘤坏死因子。在一些实施方案中，所述细胞因子与所述CAR-T细胞共表达。在一些实施方案中，所述细胞因子包括IL-2、IL-7、IL-12、IL-15、IL-21、IFNγ或TNF-α。在一些实施方案中，所述细胞因子包括mbIL-15。在一些实施方案中，所述细胞因子与所述类固醇或所述CAR-T细胞同时施用。在一些实施方案中，所述细胞因子与所述类固醇和所述CAR-T细胞同时施用。在一些实施方案中，所述细胞因子与所述类固醇和/或所述CAR-T细胞顺序施用。在一些实施方案中，将所述类固醇和/或所述CAR-T细胞配制用于肠胃外施用。在一些实施方案中，将所述类固醇和/或所述CAR-T细胞配制用于口腔施用。在一些实施方案中，所述嵌合受体是嵌合抗原受体(CAR)。在一些实施方案中，所述嵌合受体是抗原特异性工程化T细胞受体。在一些实施方案中，使所述T细胞进一步与编码细胞因子的载体接触。在一些实施方案中，所述细胞因子包括mbIL-15或其融合蛋白。
在某些实施方案中，本文公开了一种在体内诱导T细胞增殖的方法，其包括使经修饰的T细胞的群体与第一量的类固醇在体内接触，所述第一量足以诱导和/或维持所述经修饰的T细胞群体的扩增，其中所述经修饰的T细胞包含至少一种在所述细胞表面上表达的嵌合受体。在一些实施方案中，所述方法进一步包括向有需要的受试者施用所述经修饰的T细胞群体。在一些实施方案中，所述经修饰的T细胞群体是约105至约109个经修饰的T细胞/kg。在一些实施方案中，所述经修饰的T细胞群体是约105至约106个经修饰的T细胞/kg。在一些实施方案中，所述经修饰的T细胞群体是约106至约107个经修饰的T细胞/kg。在一些实施方案中，所述经修饰的T细胞群体是约107至约108个经修饰的T细胞/kg。在一些实施方案中，所述经修饰的T细胞群体是约108至约109个经修饰的T细胞/kg。在一些实施方案中，所述经修饰的T细胞群体是约105个经修饰的T细胞/kg。在一些实施方案中，在施用所述经修饰的T细胞后至少0.5、1、2、3、4、5、6、8、10、12、15、18、20、24、36、48、60、72、84、96、108小时或120小时施用所述第一量的类固醇。在一些实施方案中，在施用所述经修饰的T细胞后至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、75、90天或更多天施用所述第一量的类固醇。在一些实施方案中，所述方法进一步包括使T细胞与编码所述嵌合受体的载体离体接触以生成所述经修饰的T细胞，其中所述接触在使所述T细胞与所述第一量的类固醇在体内接触之前进行。在一些实施方案中，所述载体是慢病毒载体、逆转录病毒载体或睡美人转座子。在一些实施方案中，所述载体是睡美人转座子。在一些实施方案中，所述T细胞在照护点场所处被修饰并在未经历增殖和激活的情况下施用于所述受试者。在一些实施方案中，所述至少一种嵌合受体是嵌合抗原受体(CAR)。在一些实施方案中，所述至少一种嵌合受体是抗原特异性工程化T细胞受体。在一些实施方案中，刺激所述经修饰的T细胞至少0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30天或更多天。在一些实施方案中，刺激所述经修饰的T细胞至少5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60天或更多天。在一些实施方案中，刺激所述经修饰的T细胞至少7、14、21、28、35、42、49、56、63天或更多天。在一些实施方案中，所述至少一种嵌合受体结合至CD19、CD33、BCMA、CD44、α-叶酸受体、CAIX、CD30、ROR1、CEA、EGP-2、EGP-40、HER2、HER3、叶酸结合蛋白、GD2、GD3、IL-13R-a2、KDR、EDB-F、间皮素、CD22、EGFR、MUC-1、MAGE-A1、h5T4、PSMA、TAG-72、EGFRvIII、CD123和VEGF-R2中的至少一种上的表位。在一些实施方案中，所述经修饰的T细胞进一步包含至少一种共刺激信号传导结构域。在一些实施方案中，所述至少一种共刺激信号传导结构域包括来自CD27、CD28、4-1BB、ICOS、OX40或其片段或组合的信号传导结构域。在一些实施方案中，所述至少一种共刺激信号传导结构域包括来自4-1BB、CD28或其组合的信号传导结构域。在一些实施方案中，所述经修饰的T细胞进一步包含CD28共刺激信号传导结构域和CD3-ζ。在一些实施方案中，所述经修饰的T细胞进一步包含CD28共刺激信号传导结构域。在一些实施方案中，将所述第一量的类固醇连续施用1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、75、90天或更多天。在一些实施方案中，将所述第一量的类固醇以预定的时间间隔施用1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、75、90天或更多天。在一些实施方案中，每10天施用所述第一量的类固醇。在一些实施方案中，以1个剂量、2个剂量、3个剂量、4个剂量、5个剂量或更多个剂量施用所述第一量的类固醇。在一些实施方案中，所述第一量的类固醇小于减少细胞因子相关毒性的至少一种症状所需的类固醇的量。在一些实施方案中，所述第一量的类固醇是约1mg/kg。在一些实施方案中，在与所述第一量的类固醇接触后，使所述经修饰的T细胞群体进一步与第二量的类固醇在体内接触。在一些实施方案中，在与所述第一量的类固醇接触后至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、75、90天或更多天提供所述第二量的类固醇。在一些实施方案中，与所述第二量的类固醇的接触在与所述第一量的类固醇接触后至少30天或更多天进行。在一些实施方案中，所述第二量的类固醇少于所述第一量的类固醇。在一些实施方案中，所述第二量的类固醇是约0.9mg/kg至约0.5mg/kg。在一些实施方案中，所述第二量的类固醇是约0.5mg/kg。在一些实施方案中，以连续剂量施用所述第二量的类固醇。在一些实施方案中，每个连续剂量减少0.1mg/kg。在一些实施方案中，将所述第二量的类固醇连续施用1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、75、90天或更多天。在一些实施方案中，将额外量的类固醇以预定的时间间隔施用1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、75、90天或更多天。在一些实施方案中，每10天施用所述额外量的类固醇。在一些实施方案中，以1个剂量、2个剂量、3个剂量、4个剂量、5个剂量或更多个剂量施用所述额外量的类固醇。在一些实施方案中，所述类固醇包括氟***、美睾酮、美雄酮、十一酸诺龙、环戊丙酸诺龙、氧雄龙、羟甲烯龙、己氧基苯丙酸诺龙、睾酮、强的松、皮质醇、可的松、强的松龙、***、倍他米松、曲安西龙、倍氯米松、氟氢可的松、脱氧皮质酮、醛固酮或司坦唑醇。
在某些实施方案中，本文公开了一种试剂盒，其包含用于本文所述方法的经修饰的效应细胞和任选的类固醇。
在某些实施方案中，本文公开了一种用于在体内诱导经修饰的效应细胞群体扩增的***，其包括：经修饰的T细胞的群体，以及一定量的至少一种类固醇，其中使所述经修饰的效应细胞的群体与有效量的所述至少一种类固醇在体内接触，导致所述经修饰的效应细胞的群体的扩增。在一些实施方案中，所述量有效诱导和/或维持扩增。在一些实施方案中，所述至少一种类固醇的所述量小于减少细胞因子相关毒性的至少一种症状所需的类固醇的量。在一些实施方案中，所述经修饰的效应细胞是嵌合抗原受体(CAR)T细胞。在一些实施方案中，所述至少一种类固醇包括氟***、美睾酮、美雄酮、十一酸诺龙、环戊丙酸诺龙、氧雄龙、羟甲烯龙、己氧基苯丙酸诺龙、睾酮、强的松、皮质醇、可的松、强的松龙、***、倍他米松、曲安西龙、倍氯米松、氟氢可的松、脱氧皮质酮、醛固酮或司坦唑醇。
援引并入
本说明书中提及的所有出版物、专利和专利申请均通过引用并入本文，其程度如同特别地且单独地指出每个单独的出版物、专利或专利申请通过引用而并入。
附图说明
在所附权利要求中具体阐述了本发明的新颖特征。通过参考以下对利用了本发明原理的说明性实施方案进行阐述的详细描述以及附图，将获得对本发明的特征和优点更好的理解，在附图中：
图1图示了在施用CAR-T细胞之前用18F-氟脱氧葡萄糖(18F-FDG)进行的PET-CT扫描。
图2示出了在施用CAR-T细胞和强的松后用8F-氟脱氧葡萄糖(18F-FDG)进行的PET-CT扫描。
图3示出了基于输注后天数的CAR-T细胞的转基因拷贝。
图4示出了基于输注后天数的每毫升细胞数。
图5A示出了强的松治疗期间CAR-T扩增的调节。基于输注后的天数示出CAR-T细胞的转基因拷贝和CAR拷贝数。图5B示出了输注后至多90天的CAR转基因拷贝数。使用以下两种不同的分析方法检测转基因拷贝数：数字小液滴PCR(ddPCR)和定量PCR。
图6A描绘了在采样时间点在血液中检测到的特定细胞群体的定量流式细胞术分析。图6B描绘了在采样时间点在血液中检测到的特定细胞群体的定量流式细胞术分析。
图7A示出了在输注CAR-T细胞后不同时间点的血清细胞因子水平。图7B示出了在输注CAR-T细胞后不同时间点的血清细胞因子水平。
具体实施方式
本文提供方法和组合物，其包括用于靶向特定抗原的经修饰的效应细胞并提供至少一种类固醇，该类固醇的量足以不干扰经修饰的效应细胞的群体的植入和/或持续扩增。在一些情况下，在表现出细胞因子风暴的任何症状前提供类固醇。在一些情况下，在将经修饰的效应细胞施用于有需要的受试者前提供类固醇。
嵌合抗原受体(CAR)疗法包括用于靶向特定肿瘤抗原的经修饰的效应细胞(例如，T细胞)。在一些情况下，CAR疗法已被用于靶向CD19—一种在大多数B细胞恶性肿瘤中表达的泛B细胞抗原。CD19特异性CAR疗法已在若干临床试验中显示出功效，例如，靶向急性淋巴母细胞白血病(ALL)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)或B细胞非霍奇金淋巴瘤(NHL)。然而，还观察到施用后经修饰的效应细胞的体内扩增受限和这些经修饰的细胞的低水平持久性。
在某些实施方案中，本文公开了在有需要的受试者体内诱导经修饰的效应细胞的群体扩增的方法。在一些情况下，本文的公开内容包括向受试者施用经修饰的效应细胞和类固醇的方法，其中该类固醇为有效量，不会对经修饰的效应细胞的群体在受试者体内的植入和/或扩增产生不利影响。
在一些情况下，本文还公开了一种在受试者体内诱导T细胞扩增的方法，其包括使T细胞与编码嵌合抗原受体的载体离体接触以生成CAR-T细胞，向受试者施用一定量的CAR-T细胞，以及以足以中CAR-T细胞群体的扩增的量向受试者施用类固醇。
在一些情况下，本文额外公开了一种在体内诱导T细胞扩增的方法，其包括在第一时间点使经修饰的T细胞群体与第一量的类固醇在体内接触，该第一量不会对经修饰的T细胞的植入和/或扩增产生不利影响，其中每个经修饰的T细胞包含在细胞表面上表达的嵌合受体。
在一些情况下，本文所述的方法能够省略预处理步骤(例如，淋巴细胞耗尽)。在这样的情况下，将本文所述的经修饰的效应细胞和类固醇施用于受试者，而无需事先施用化学治疗剂以诱导淋巴细胞减少症。在一些情况中，预处理步骤是在将经修饰的效应细胞施用于受试者之前的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44天或45天。
在其他情况下，本文所述的方法包括施用低剂量的类固醇。在一些情况下，低剂量包括小于减少细胞因子相关毒性的至少一种症状所需剂量的剂量。在一些情况下，细胞因子相关毒性包括细胞因子释放综合征(CRS)、脑病或B细胞发育不全。在进一步的情况下，首先以一定剂量施用类固醇，该剂量随后连续减少，例如，第一剂量是1mg/kg，后续剂量是0.9mg/kg、0.8mg/kg、0.7mg/kg、0.6mg/kg、0.5mg/kg、0.4mg/kg、0.3mg/kg、0.2mg/kg或0.1mg/kg。
经修饰的效应细胞
在一些实施方案中，经修饰的效应细胞是自然杀伤经修饰的免疫细胞，包括T细胞和/或自然杀伤细胞。T细胞或T淋巴细胞是参与细胞介导的免疫的白细胞亚型。示例性T细胞包括T辅助细胞、细胞毒性T细胞、TH17细胞、记忆性干细胞样T细胞(TSCM)、幼稚T细胞、记忆T细胞、效应T细胞、调节性T细胞或自然杀伤T细胞。
T辅助细胞(TH细胞)在免疫过程中协助其他白细胞，该免疫过程包括B细胞成熟为浆细胞和记忆B细胞，以及细胞毒性T细胞和巨噬细胞的激活。在一些情况下，由于CD4糖蛋白在细胞表面上的表达，TH细胞被称为CD4+ T细胞。辅助性T细胞在通过MHC II类分子呈递肽抗原时被激活，该MHC II类分子在抗原呈递细胞(APC)的表面上表达。辅助性T细胞一旦被激活，迅速***并分泌出被称为细胞因子的小蛋白质，其调节或协助主动免疫应答。这些细胞可以分化成几种亚型中的一种，包括TH1、TH2、TH3、TH17、Th9或TFH，这些亚型分泌不同的细胞因子以促进不同类型的免疫应答。来自APC的信号传导将T细胞引导成特定的亚型。
细胞毒性T细胞(TC细胞或CTL)破坏病毒感染的细胞和肿瘤细胞，并且还涉及移植排斥。这些细胞也称为CD8+ T细胞，因为其在表面处表达CD8糖蛋白。这些细胞通过结合与MHC I类分子缔合的抗原而识别它们的靶标，该MHC I类分子存在于所有有核细胞的表面上。通过IL-10、腺苷和由调节性T细胞分泌的其他分子，CD8+细胞可以灭活至无反应状态，从而防止自身免疫疾病。
记忆T细胞是在感染消退后长期持续存在的抗原特异性T细胞的一个亚群。其在重新暴露于其同源抗原后迅速扩增成大量效应T细胞，从而为免疫***提供针对以往感染的“记忆”。记忆T细胞包括亚型：记忆性干细胞样T细胞(TSCM)、中枢记忆性T细胞(TCM细胞)和两种类型的效应记忆T细胞(TEM细胞和TEMRA细胞)。记忆细胞可以是CD4+或CD8+。记忆T细胞可以表达细胞表面蛋白CD45RO、CD45RA和/或CCR7。
调节性T细胞(Treg细胞)，以前称为抑制性T细胞，在维持免疫耐受性中起作用。其主要作用是在免疫反应结束时停止T细胞介导的免疫，并抑制逃避胸腺中的阴性选择过程的自身反应性T细胞。
自然杀伤T细胞(NKT细胞)将先天免疫***与适应性免疫***联系起来。与识别由主要组织相容性复合物(MHC)分子呈递的肽抗原的常规T细胞不同，NKT细胞识别由被称为CD1d的分子呈递的糖脂抗原。一旦被激活，这些细胞可以执行属于Th细胞和Tc细胞的功能(即，细胞因子产生和细胞溶解/细胞杀伤分子的释放)。它们还能够识别并消除一些肿瘤细胞和感染疱疹病毒的细胞。
自然杀伤(NK)细胞是先天免疫***的一种类型的细胞毒性淋巴细胞。在一些情况下，NK细胞提供针对病毒感染和/或肿瘤形成的第一线防御。NK细胞可检测感染细胞或癌细胞上呈递的MHC，从而触发细胞因子释放，并随后诱导裂解和凋亡。NK细胞可以在不存在抗体和/或MHC的情况下进一步检测应激细胞，从而允许快速免疫应答。
嵌合受体
在一些实施方案中，本文的描述包括经修饰的效应细胞，其包含在细胞表面上表达的嵌合受体。在一些情况下，嵌合受体包含能够识别和结合肿瘤抗原(例如肿瘤相关抗原或肿瘤特异性抗原)的抗原结合区。在一些情况下，抗原结合区包含抗体或结合片段，例如Fab、Fab’、F(ab’)2、F(ab’)3、scFv、sc(Fv)2、dsFv、双抗体、微抗体和纳米抗体或其结合片段。在一些情况下，抗原结合区包含scFv。在一些情况下，嵌合受体包含scFv(例如，嵌合抗原受体(CAR))。在一些情况下，嵌合抗原受体包含模式识别受体。在其他情况下，嵌合受体包含工程化T细胞受体(TCR)。
嵌合抗原受体(CAR)
嵌合抗原受体(CAR)是一种工程化受体，其将外源特异性移植到免疫效应细胞上。在一些情况下，CAR包含细胞外结构域(胞外域)和细胞内结构域(胞内域)，该细胞外结构域包含抗原结合域、茎区、跨膜结构域。在一些情况下，细胞内结构域进一步包含一个或多个细胞内信号传导结构域。在一些情况下，本文所述的CAR包含抗原结合域、茎区、跨膜结构域、一个或多个共刺激结构域和用于T细胞激活的信号传导结构域。
抗原结合域可包含单克隆抗体的互补决定区、单克隆抗体的可变区和/或其抗原结合片段。互补决定区(CDR)是在抗原受体(例如，免疫球蛋白和T细胞受体)蛋白的可变域中发现的短氨基酸序列，该短氨基酸序列与抗原互补并因此为受体提供针对该特定抗原的特异性。抗原受体的每条多肽链可含有三个CDR(CDR1、CDR2和CDR3)。在一些情况下，抗原结合域包含F(ab’)2、Fab’、Fab、Fv或scFv。在一些情况下，抗原结合域是scFv。在一些情况下，抗原结合域是Fab。在一些情况下，抗原结合域是Fab’。在一些情况下，抗原结合域是F(ab’)2。在一些情况下，抗原结合域是Fv。
在一些实施方案中，本文所述的CAR包含结合至CD19、BCMA、CD44、α-叶酸受体、CAIX、CD30、ROR1、CEA、EGP-2、EGP-40、HER2、HER3、叶酸结合蛋白、GD2、GD3、IL-13R-a2、KDR、EDB-F、间皮素、CD22、EGFR、叶酸受体α、诸如MUC-1或MUC-16等粘蛋白、MAGE-A1、h5T4、PSMA、TAG-72、EGFR、CD20、EGFRvIII、CD123或VEGF-R2上的表位的抗原结合域。在一些实施方案中，本文所述的CAR包含结合至CD19或CD33上的表位的抗原结合域。在一些情况下，本文所述的CAR包含结合至CD19上的表位的抗原结合域。在一些情况下，本文所述的CAR包含结合至CD33上的表位的抗原结合域。在进一步的实施方案中，本文所述的CAR包含结合至HLA-A2、髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)、因子VIII(FVIII)、MAdCAM1、SDF1或II型胶原上的表位的自身抗原或抗原结合区。
在一些实施方案中，本文所述的CAR和方法可用于治疗过度增殖性疾病，如癌症、自身免疫疾病，或用于治疗感染，如病毒、细菌或寄生虫感染。在一些方面，CAR靶向在癌细胞、自身免疫细胞或被病毒、细菌或寄生虫感染的细胞中升高的抗原。可以被靶向的病原体包括但不限于疟原虫、锥虫、曲霉属(Aspergillus)、假丝酵母属(Candida)、甲型肝炎、乙型肝炎、丙型肝炎、HSV、HPV、RSV、EBV、CMV、JC病毒、BK病毒或埃博拉病原体。自身免疫性疾病可包括移植物抗宿主病、类风湿性关节炎、狼疮、乳糜泻、克罗恩病、舍格伦综合征、风湿性多肌痛、多发性硬化症、视神经脊髓炎、强直性脊柱炎、1型糖尿病、斑秃、血管炎、颞动脉炎、大疱性类天疱疮、银屑病、寻常型天疱疮或自身免疫性葡萄膜炎。
由CAR识别的病原体可以基本上是任何种类的病原体，但在一些实施方案中，病原体是真菌、细菌或病毒。示例性病毒病原体包括以下家族的病毒病原体：腺病毒科、爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV)、巨细胞病毒(CMV)、呼吸道合胞病毒(RSV)、JC病毒、BK病毒、HPV病毒家族、HSV病毒家族、HHV病毒家族、肝炎病毒家族、小核糖核酸病毒科、疱疹病毒科、肝脱氧核糖核酸病毒科、黄病毒科、逆转录病毒科、正粘病毒科、副粘病毒科、***多瘤空泡病毒科、多瘤病毒、弹状病毒科和披膜病毒科。示例性的致病病毒引起天花、流感、流行性腮腺炎、麻疹、水痘、埃博拉和风疹。示例性的致病真菌包括假丝酵母属、曲霉属、隐球酵母属(Cryptococcus)、组织胞浆菌属(Histoplasma)、肺囊虫属(Pneumocystis)和葡萄穗霉属(Stachybotrys)。示例性的致病细菌包括链球菌属(Streptococcus)、假单胞菌属(Pseudomonas)、志贺菌属(Shigella)、弯曲杆菌属(Campylobacter)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、螺杆菌属(Helicobacter)、大肠杆菌(E.coli)、立克次体属(Rickettsia)、芽孢杆菌属(Bacillus)、博德特氏菌属(Bordetella)、衣原体属(Chlamydia)、螺旋体属(Spirochetes)和沙门菌属(Salmonella)。在一些实施方案中，病原体受体Dectin-1可用于生成识别真菌如曲霉的细胞壁上的碳水化合物结构的CAR。在另一实施方案中，CAR可以基于识别病毒决定簇(例如来自CMV和埃博拉的糖蛋白)的抗体来制备，以中断病毒感染和病理学。
在一些实施方案中，“茎”区或“间隔”或“铰链”区用于将抗原结合域与跨膜结构域连接。在一些情况下，“茎结构域”或“茎区”包括任何寡核苷酸或多肽，其起到将跨膜结构域连接到细胞外结构域或多肽链中的胞质域的作用。在一些实施方案中，其足够灵活以允许抗原结合域在不同方向上定向，从而促进抗原识别。在一些情况下，茎区包含来自IgG1的铰链区。在备选的情况下，茎区包含免疫球蛋白的CH2CH3区和任选的CD3的部分。在一些情况下，茎区包含CD8α铰链区、IgG4-Fc 12氨基酸铰链区(ESKYGPPCPPCP)或IgG4铰链区，如WO/2016/073755中所述。
跨膜结构域可以衍生自天然或合成来源。在来源是天然的情况下，该域可以衍生自任何膜结合蛋白或跨膜蛋白。合适的跨膜结构域可包括T细胞受体的α、β或ζ链的跨膜区；或来自CD28、CD3ε、CD3ζ、CD45、CD4、CD5、CD8α、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137或CD154的跨膜区。或者，跨膜结构域可以是合成的，并且可以包含疏水残基如亮氨酸和缬氨酸。在一些实施方案中，在合成跨膜结构域的一个或两个末端发现苯基丙氨酸、色氨酸和缬氨酸的三联体。任选地，在一些实施方案中，长度为2至10个氨基酸的短寡核苷酸或多肽连接体可以形成CAR的跨膜结构域与胞质信号传导结构域之间的连接。在一些实施方案中，连接体是甘氨酸-丝氨酸连接体。
在一些实施方案中，跨膜结构域包含CD8α跨膜结构域或CD3ζ跨膜结构域。在一些实施方案中，跨膜结构域包含CD8α跨膜结构域。在其他实施方案中，跨膜结构域包含CD3ζ跨膜结构域。
细胞内结构域可包含一个或多个共刺激结构域。示例性共刺激结构域包括但不限于CD8、CD27、CD28、4-1BB(CD137)、ICOS、DAP10、DAP12、OX40(CD134)或其片段或组合。在一些情况下，本文所述的CAR包含选自CD8、CD27、CD28、4-1BB(CD137)、ICOS、DAP10、DAP12、OX40(CD134)或其片段或组合的共刺激结构域中的一种或多种或两种或更多种。在一些情况下，本文所述的CAR包含选自CD27、CD28、4-1BB(CD137)、ICOS、OX40(CD134)或其片段或组合的共刺激结构域中的一种或多种或两种或更多种。在一些情况下，本文所述的CAR包含选自CD8、CD28、4-1BB(CD137)或其片段或组合的共刺激结构域中的一种或多种或两种或更多种。在一些情况下，本文所述的CAR包含选自CD28、4-1BB(CD137)或其片段或组合的共刺激结构域中的一种或多种或两种或更多种。在一些情况下，本文所述的CAR包含共刺激结构域CD28和4-1BB(CD137)或其各自的片段。在一些情况下，本文所述的CAR包含共刺激结构域CD28和OX40(CD134)或其各自的片段。在一些情况下，本文所述的CAR包含共刺激结构域CD8和CD28或其各自的片段。在一些情况下，本文所述的CAR包含共刺激结构域CD28或其片段。在一些情况下，本文所述的CAR包含共刺激结构域4-1BB(CD137)或其片段。在一些情况下，本文所述的CAR包含共刺激结构域OX40(CD134)或其片段。在一些情况下，本文所述的CAR包含共刺激结构域CD8或其片段。
在一些实施方案中，细胞内结构域进一步包含用于T细胞激活的信号传导结构域。在一些情况下，用于T细胞激活的信号传导结构域包含衍生自TCRζ、FcRγ、FcRβ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD5、CD22、CD79a、CD79b或CD66d的结构域。在一些情况下，用于T细胞激活的信号传导结构域包含衍生自CD3ζ的结构域。
CD19特异性CAR
CD19是免疫球蛋白超家族的细胞表面糖蛋白，并且主要见于恶性B谱系细胞中。在一些情况下，还在诸如胰腺癌、肝癌和***癌等实体瘤中检测到CD19。
在一些实施方案中，本文的描述包括CD19特异性CAR，其中抗原结合域包含F(ab’)2、Fab’、Fab、Fv或scFv。在一些情况下，抗原结合域识别CD19上的表位。
在一些实施方案中，抗原结合域识别CD19上的表位，该表位也被JCAR014、JCAR015、JCAR017或19-28z CAR(Juno Therapeutics)识别。在一些实施方案中，本文的描述包括CD19特异性CAR-T细胞，其中抗原结合域识别CD19上的表位，该表位也被JCAR014、JCAR015、JCAR017或19-28z CAR(Juno Therapeutics)识别。在一些情况下，CD19特异性CAR-T细胞进一步包含选自CD8α跨膜结构域或CD3ζ跨膜结构域的跨膜结构域；选自CD27、CD28、4-1BB(CD137)、ICOS、DAP10、OX40(CD134)或其片段或组合的一个或多个共刺激结构域；以及来自CD3ζ的信号传导结构域。
在一些实施方案中，本文的描述包括包含scFv抗原结合域的CD19特异性CAR-T细胞，并且抗原结合域识别CD19上的表位，该表位也被JCAR014、JCAR015、JCAR017或19-28zCAR(Juno Therapeutics)识别。在一些情况下，CD19特异性CAR-T细胞进一步包含选自CD8α跨膜结构域或CD3ζ跨膜结构域的跨膜结构域；选自CD27、CD28、4-1BB(CD137)、ICOS、DAP10、OX40(CD134)或其片段或组合的一个或多个共刺激结构域；以及来自CD3ζ的信号传导结构域。
在一些实施方案中，本文所述的CD19特异性CAR-T细胞包含US20160152723中描述的抗CD19抗体。
在一些实施方案中，抗原结合域识别CD19上的表位，该表位也被KTE-C19(KitePharma,Inc.)识别。在一些实施方案中，本文的描述包括CD19特异性CAR-T细胞，其中抗原结合域识别CD19上的表位，该表位也被KTE-C19识别。在一些情况下，CD19特异性CAR-T细胞进一步包含选自CD8α跨膜结构域或CD3ζ跨膜结构域的跨膜结构域；选自CD27、CD28、4-1BB(CD137)、ICOS、DAP10、OX40(CD134)或其片段或组合的一个或多个共刺激结构域；以及来自CD3ζ的信号传导结构域。
在一些实施方案中，本文的描述包括包含scFv抗原结合域的CD19特异性CAR-T细胞，并且抗原结合域识别CD19上的表位，该表位也被KTE-C19识别。在一些情况下，CD19特异性CAR-T细胞进一步包含选自CD8α跨膜结构域或CD3ζ跨膜结构域的跨膜结构域；选自CD27、CD28、4-1BB(CD137)、ICOS、DAP10、DAP12、OX40(CD134)或其片段或组合的一个或多个共刺激结构域；以及来自CD3ζ的信号传导结构域。
在一些实施方案中，本文所述的CD19特异性CAR-T细胞包含WO2015187528中描述的抗CD19抗体或其片段或衍生物。
在一些实施方案中，抗原结合域识别CD19上的表位，该表位也被CTL019(Novartis)识别。在一些实施方案中，本文的描述包括CD19特异性CAR-T细胞，其中抗原结合域识别CD19上的表位，该表位也被CTL019识别。在一些情况下，CD19特异性CAR-T细胞进一步包含选自CD8α跨膜结构域或CD3ζ跨膜结构域的跨膜结构域；选自CD27、CD28、4-1BB(CD137)、ICOS、DAP10、DAP12、OX40(CD134)或其片段或组合的一个或多个共刺激结构域；以及来自CD3ζ的信号传导结构域。
在一些实施方案中，本文的描述包括包含scFv抗原结合域的CD19特异性CAR-T细胞，并且抗原结合域识别CD19上的表位，该表位也被CTL019识别。在一些情况下，CD19特异性CAR-T细胞进一步包含选自CD8α跨膜结构域或CD3ζ跨膜结构域的跨膜结构域；选自CD27、CD28、4-1BB(CD137)、ICOS、DAP10、DAP12、OX40(CD134)或其片段或组合的一个或多个共刺激结构域；以及来自CD3ζ的信号传导结构域。
在一些实施方案中，抗原结合域识别CD19上的表位，该表位也被UCART19(Cellectis)识别。在一些实施方案中，本文的描述包括CD19特异性CAR-T细胞，其中抗原结合域识别CD19上的表位，该表位也被UCART19识别。在一些情况下，CD19特异性CAR-T细胞进一步包含选自CD8α跨膜结构域或CD3ζ跨膜结构域的跨膜结构域；选自CD27、CD28、4-1BB(CD137)、ICOS、DAP10、DAP12、OX40(CD134)或其片段或组合的一个或多个共刺激结构域；以及来自CD3ζ的信号传导结构域。
在一些实施方案中，本文的描述包括包含scFv抗原结合域的CD19特异性CAR-T细胞，并且抗原结合域识别CD19上的表位，该表位也被UCART19识别。在一些情况下，CD19特异性CAR-T细胞进一步包含选自CD8α跨膜结构域或CD3ζ跨膜结构域的跨膜结构域；选自CD27、CD28、4-1BB(CD137)、ICOS、DAP10、DAP12、OX40(CD134)或其片段或组合的一个或多个共刺激结构域；以及来自CD3ζ的信号传导结构域。
在一些实施方案中，抗原结合域识别CD19上的表位，该表位也被BPX-401(Bellicum)识别。在一些实施方案中，本文的描述包括CD19特异性CAR-T细胞，其中抗原结合域识别CD19上的表位，该表位也被BPX-401识别。在一些情况下，CD19特异性CAR-T细胞进一步包含选自CD8α跨膜结构域或CD3ζ跨膜结构域的跨膜结构域；选自CD27、CD28、4-1BB(CD137)、ICOS、DAP10、DAP12、OX40(CD134)或其片段或组合的一个或多个共刺激结构域；以及来自CD3ζ的信号传导结构域。
在一些实施方案中，本文的描述包括包含scFv抗原结合域的CD19特异性CAR-T细胞，并且抗原结合域识别CD19上的表位，该表位也被BPX-401识别。在一些情况下，CD19特异性CAR-T细胞进一步包含选自CD8α跨膜结构域或CD3ζ跨膜结构域的跨膜结构域；选自CD27、CD28、4-1BB(CD137)、ICOS、DAP10、DAP12、OX40(CD134)或其片段或组合的一个或多个共刺激结构域；以及来自CD3ζ的信号传导结构域。
在一些情况下，抗原结合域识别CD19上的表位，该表位也被兰妥莫单抗(Amgen)、克托西单抗(coltuximabravtansine)(ImmunoGen Inc./Sanofi-aventis)、MOR208(Morphosys AG/Xencor Inc.)、MEDI-551(Medimmune)、地宁图珠单抗(denintuzumabmafodotin)(Seattle Genetics)、B4(或DI-B4)(Merck Serono)、泰普利莫单抗(taplitumomabpaptox)(National Cancer Institute)、XmAb 5871(Amgen/Xencor,Inc.)、MDX-1342(Medarex)或AFM11(Affimed)识别。在一些情况下，CD19特异性CAR进一步包含选自CD8α跨膜结构域或CD3ζ跨膜结构域的跨膜结构域；选自CD27、CD28、4-1BB(CD137)、ICOS、DAP10、OX40(CD134)或其片段或组合的一个或多个共刺激结构域；以及来自CD3ζ的信号传导结构域。
在一些实施方案中，本文的描述包括CD19特异性CAR-T细胞，其中抗原结合域包含F(ab’)2、Fab’、Fab、Fv或scFv。在一些情况下，抗原结合域识别CD19上的表位。在一些情况下，抗原结合域识别CD19上的表位，该表位也被兰妥莫单抗(Amgen)、克托西单抗(ImmunoGen Inc./Sanofi-aventis)、MOR208(Morphosys AG/Xencor Inc.)、MEDI-551(Medimmune)、地宁图珠单抗(Seattle Genetics)、B4(或DI-B4)(Merck Serono)、泰普利莫单抗(National Cancer Institute)、XmAb 5871(Amgen/Xencor,Inc.)、MDX-1342(Medarex)或AFM11(Affimed)识别。在一些情况下，CD19特异性CAR-T细胞进一步包含选自CD8α跨膜结构域或CD3ζ跨膜结构域的跨膜结构域；选自CD27、CD28、4-1BB(CD137)、ICOS、DAP10、DAP12、OX40(CD134)或其片段或组合的一个或多个共刺激结构域；以及来自CD3ζ的信号传导结构域。
在一些情况下，本文所述的CD19特异性CAR-T细胞包含scFv抗原结合域，并且抗原结合域识别CD19上的表位，该表位也被兰妥莫单抗(Amgen)、克托西单抗(ImmunoGen Inc./Sanofi-aventis)、MOR208(Morphosys AG/Xencor Inc.)、MEDI-551(Medimmune)、地宁图珠单抗(Seattle Genetics)、B4(或DI-B4)(Merck Serono)、泰普利莫单抗(National CancerInstitute)、XmAb 5871(Amgen/Xencor,Inc.)、MDX-1342(Medarex)或AFM11(Affimed)识别。在一些情况下，CD19特异性CAR-T细胞进一步包含选自CD8α跨膜结构域或CD3ζ跨膜结构域的跨膜结构域；选自CD27、CD28、4-1BB(CD137)、ICOS、DAP10、DAP12、OX40(CD134)或其片段或组合的一个或多个共刺激结构域；以及来自CD3ζ的信号传导结构域。
工程化T细胞受体(TCR)
在一些实施方案中，嵌合受体包含工程化T细胞受体。T细胞受体(TCR)由两条链(αβ或γδ)组成，这两条链在T细胞表面上配对以形成异二聚体受体。在一些情况下，αβTCR在体内的大多数T细胞上表达，并且已知参与特定MHC限制性抗原的识别。每条α和β链由两个结构域组成：恒定域(C)，其将蛋白质锚定至细胞膜并与CD3信号传导器的不变亚基缔合；以及可变域(V)，其通过称为互补决定区(CDR)的六个环赋予抗原识别。在一些情况下，每个V结构域包含三个CDR；例如，CDR1、CDR2和CDR3，其中CDR3作为高变区。这些CDR与抗原肽结合至由主要组织相容性复合物(pepMHC)编码的蛋白质而形成的复合物(例如，HLA-A、HLA-B、HLA-C、HLA-DPA1、HLA-DPB1、HLA-DQA1、HLA-DQB1、HLA-DRA或HLA-DRB1复合物)相互作用。在一些情况下，恒定域进一步包含将恒定域连接到可变域的接合区。在一些情况下，β链进一步包含构成接合区的一部分的较短的多样性区域。
在一些情况下，这样的TCR对特定肿瘤抗原(例如NY-ESO、Mage A3、Titin)具有反应性。在其他情况下，这样的TCR对患者肿瘤内表达的特定新抗原(即，由肿瘤表达的患者特异性突变、体细胞突变、非同义突变)具有反应性。在一些情况下，工程化TCR可以是亲和力增强的。
在一些实施方案中，使用国际免疫遗传学(IMGT)TCR命名法描述TCR，并且该TCR链接至TCR序列的IMGT公共数据库。例如，可存在几种类型的α链可变(Vα)区和几种类型的β链可变(Vβ)区，按其框架、CDR1、CDR2和CDR3序列区分。因此，Vα类型可以在IMGT命名法中指代为独特的TRAV编号。例如，“TRAV21”定义了具有独特框架和CDR1和CDR2序列以及CDR3序列的TCR Vα区域，该CDR3序列由在TCR之间保守的氨基酸序列部分限定但也包括在TCR之间变化的氨基酸序列。类似地，“TRBV5-1”定义了具有独特框架和CDR1和CDR2序列以及仅部分限定的CDR3序列的TCR Vβ区域。
在一些情况下，β链多样性区域在IMGT命名法中指代为缩写TRBD。
在一些情况下，由IMGT命名法定义的独特序列是公知的，并且可供TCR领域的工作人员访问。例如，它们可见于IMGT公共数据库和“T cell Receptor Factsbook”,(2001)LeFranc和LeFranc,Academic Press,ISBN 0-12-441352-8中。
在一些实施方案中，例如，αβ异二聚体TCR被转染为具有胞质域和跨膜结构域的全长链。在一些情况下，TCR在相应恒定域的残基之间含有引入的二硫键，如例如WO 2006/000830中所述。
在一些情况下，本文所述的TCR是单链形式，例如参见WO 2004/033685。单链形式包括Vα-L-Vβ、Vβ-L-Vα、Vα-Cα-L-Vβ、Vα-L-Vβ-Cβ、Vα-Cα-L-Vβ-Cβ类型的αβTCR多肽，其中Vα和Vβ分别是TCRα和β可变区，Cα和Cβ分别是TCRα和β恒定区，并且L是连接体序列。在某些实施方案中，本发明的单链TCR可以在相应恒定域的残基之间具有引入的二硫键，如WO 2004/033685中所述。
本文所述的TCR可以与可检测标记、治疗剂或PK修饰部分缔合。
用于诊断目的的示例性可检测标记包括但不限于荧光标记、放射性标记、酶、核酸探针和造影剂。
可与本文所述TCR缔合的治疗剂包括免疫调节剂、放射性化合物、酶(例如穿孔素)或化学治疗剂。为了确保在预期位置发挥毒性作用，毒素可以处于与TCR连接的脂质体内，使得化合物以受控方式释放。在一些情况下，受控释放使体内转运期间的破坏作用最小，并确保毒素在TCR与相关抗原呈递细胞结合后具有最大效果。
在一些实施方案中，其他合适的治疗剂包括例如：
a.小分子细胞毒性剂，例如有杀伤哺乳动物细胞的能力的分子量小于700道尔顿的化合物。这样的化合物还可含有能够具有细胞毒性作用的有毒金属。此外，应理解这些小分子细胞毒性剂还包括前药，即在生理条件下分解或转化以释放细胞毒性剂的化合物。这样的药剂的实例包括顺铂、美登素衍生物、雷查霉素(rachelmycin)、加利车霉素、多西他赛、依托泊苷、吉西他滨、异环磷酰胺、伊立替康、美法仑、米托蒽醌、sorfimer sodiumphotofrinII、替莫唑胺、拓扑替康、葡萄糖醛酸曲美沙特(trimetreate glucuronate)、奥利斯他汀E(auristatin E)、长春新碱和多柔比星；
b.肽细胞毒素，即具有杀伤哺乳动物细胞能力的蛋白质或其片段。例如，蓖麻毒素、白喉毒素、假单胞菌细菌外毒素A、DNA酶和RNA酶；
c.放射性核素，即伴随着α或β粒子或γ射线中的一种或多种的发射而衰变的不稳定的元素同位素。例如，碘131、铼186、铟111、钇90、铋210和213、锕225和砹213；螯合剂可用于促进这些放射性核素与高亲和力TCR或其多聚体的缔合；
d.免疫刺激剂，即刺激免疫应答的免疫效应物。例如，细胞因子如IL-2和IFN-γ，
e.超抗原及其突变体；
f.TCR-HLA融合物；
g.趋化因子如IL-8、血小板因子4、黑素瘤生长刺激蛋白等；
h.抗体或其片段，其包括抗T细胞或NK细胞决定簇抗体(例如抗CD3、抗CD28或抗CD16)；
i.具有抗体样结合特征的替代蛋白质支架；
j.补体激活剂；以及
k.异种蛋白结构域、同种异型蛋白结构域、病毒/细菌蛋白结构域、病毒/细菌肽。
经修饰的效应细胞剂量
在一些实施方案中，将一定量的经修饰的效应细胞施用于有需要的受试者，并且基于诱导细胞因子相关毒性的功效和潜力来确定该量。在一些情况下，一定量的经修饰的效应细胞包含约105至约109个经修饰的效应细胞/kg。在一些情况下，一定量的经修饰的效应细胞包含约105至约108个经修饰的效应细胞/kg。在一些情况下，一定量的经修饰的效应细胞包含约105至约107个经修饰的效应细胞/kg。在一些情况下，一定量的经修饰的效应细胞包含约106至约109个经修饰的效应细胞/kg。在一些情况下，一定量的经修饰的效应细胞包含约106至约108个经修饰的效应细胞/kg。在一些情况下，一定量的经修饰的效应细胞包含约107至约109个经修饰的效应细胞/kg。在一些情况下，一定量的经修饰的效应细胞包含约105至约106个经修饰的效应细胞/kg。在一些情况下，一定量的经修饰的效应细胞包含约106至约107个经修饰的效应细胞/kg。在一些情况下，一定量的经修饰的效应细胞包含约107至约108个经修饰的效应细胞/kg。在一些情况下，一定量的经修饰的效应细胞包含约108至约109个经修饰的效应细胞/kg。在一些情况下，一定量的经修饰的效应细胞包含约109个经修饰的效应细胞/kg。在一些情况下，一定量的经修饰的效应细胞包含约108个经修饰的效应细胞/kg。在一些情况下，一定量的经修饰的效应细胞包含约107个经修饰的效应细胞/kg。在一些情况下，一定量的经修饰的效应细胞包含约106个经修饰的效应细胞/kg。在一些情况下，一定量的经修饰的效应细胞包含约105个经修饰的效应细胞/kg。
在一些实施方案中，经修饰的效应细胞是经修饰的T细胞。在一些情况下，经修饰的T细胞是CAR-T细胞。在一些情况下，一定量的CAR-T细胞包含约105至约109个CAR-T细胞/kg。在一些情况下，一定量的CAR-T细胞包含约105至约108个CAR-T细胞/kg。在一些情况下，一定量的CAR-T细胞包含约105至约107个CAR-T细胞/kg。在一些情况下，一定量的CAR-T细胞包含约106至约109个CAR-T细胞/kg。在一些情况下，一定量的CAR-T细胞包含约106至约108个CAR-T细胞/kg。在一些情况下，一定量的CAR-T细胞包含约107至约109个CAR-T细胞/kg。在一些情况下，一定量的CAR-T细胞包含约105至约106个CAR-T细胞/kg。在一些情况下，一定量的CAR-T细胞包含约106至约107个CAR-T细胞/kg。在一些情况下，一定量的CAR-T细胞包含约107至约108个CAR-T细胞/kg。在一些情况下，一定量的CAR-T细胞包含约108至约109个CAR-T细胞/kg。在一些情况下，一定量的CAR-T细胞包含约109个CAR-T细胞/kg。在一些情况下，一定量的CAR-T细胞包含约108个CAR-T细胞/kg。在一些情况下，一定量的CAR-T细胞包含约107个CAR-T细胞/kg。在一些情况下，一定量的CAR-T细胞包含约106个CAR-T细胞/kg。在一些情况下，一定量的CAR-T细胞包含约105个CAR-T细胞/kg。
在一些实施方案中，CAR-T细胞是CD19特异性CAR-T细胞。在一些情况下，一定量的CD19特异性CAR-T细胞包含约105至约109个CAR-T细胞/kg。在一些情况下，一定量的CD19特异性CAR-T细胞包含约105至约108个CAR-T细胞/kg。在一些情况下，一定量的CD19特异性CAR-T细胞包含约105至约107个CAR-T细胞/kg。在一些情况下，一定量的CD19特异性CAR-T细胞包含约106至约109个CAR-T细胞/kg。在一些情况下，一定量的CD19特异性CAR-T细胞包含约106至约108个CAR-T细胞/kg。在一些情况下，一定量的CD19特异性CAR-T细胞包含约107至约109个CAR-T细胞/kg。在一些情况下，一定量的CD19特异性CAR-T细胞包含约105至约106个CAR-T细胞/kg。在一些情况下，一定量的CD19特异性CAR-T细胞包含约106至约107个CAR-T细胞/kg。在一些情况下，一定量的CD19特异性CAR-T细胞包含约107至约108个CAR-T细胞/kg。在一些情况下，一定量的CD19特异性CAR-T细胞包含约108至约109个CAR-T细胞/kg。在一些情况下，一定量的CD19特异性CAR-T细胞包含约109个CAR-T细胞/kg。在一些情况下，一定量的CD19特异性CAR-T细胞包含约108个CAR-T细胞/kg。在一些情况下，一定量的CD19特异性CAR-T细胞包含约107个CAR-T细胞/kg。在一些情况下，一定量的CD19特异性CAR-T细胞包含约106个CAR-T细胞/kg。在一些情况下，一定量的CD19特异性CAR-T细胞包含约105个CAR-T细胞/kg。
在一些实施方案中，经修饰的T细胞是工程化TCR T细胞。在一些情况下，一定量的工程化TCR T细胞包含约105至约109个TCR细胞/kg。在一些情况下，一定量的工程化TCR细胞包含约105至约108个TCR细胞/kg。在一些情况下，一定量的工程化TCR细胞包含约105至约107个TCR细胞/kg。在一些情况下，一定量的工程化TCR细胞包含约106至约109个TCR细胞/kg。在一些情况下，一定量的工程化TCR细胞包含约106至约108个TCR细胞/kg。在一些情况下，一定量的工程化TCR细胞包含约107至约109个TCR细胞/kg。在一些情况下，一定量的工程化TCR细胞包含约105至约106个TCR细胞/kg。在一些情况下，一定量的工程化TCR细胞包含约106至约107个TCR细胞/kg。在一些情况下，一定量的工程化TCR细胞包含约107至约108个TCR细胞/kg。在一些情况下，一定量的工程化TCR细胞包含约108至约109个TCR细胞/kg。在一些情况下，一定量的工程化TCR细胞包含约109个TCR细胞/kg。在一些情况下，一定量的工程化TCR细胞包含约108个TCR细胞/kg。在一些情况下，一定量的工程化TCR细胞包含约107个TCR细胞/kg。在一些情况下，一定量的工程化TCR细胞包含约106个TCR细胞/kg。在一些情况下，一定量的工程化TCR细胞包含约105个TCR细胞/kg。
类固醇
类固醇，如雄激素、皮质类固醇、***和孕激素，控制人的许多生理过程，包括增殖、***、成熟、基因表达、心血管健康和神经功能。在一些情况下，基于结构分类或功能分类进一步划分类固醇。结构分类可以将类固醇分为六类：甾烷(具有17个碳)、雌烷(具有18个碳)、雄烷(具有19个碳)、孕烷(具有21个碳)、胆烷(具有24个碳)和胆甾烷(具有27个碳)。功能分类可以将类固醇分为五类：***(具有18个碳)、雄激素(具有19个碳)、皮质类固醇(具有21个碳)、孕酮(具有21个碳)和甾醇(具有27个碳)。
示例性的类固醇包括但不限于17-羟基孕烯醇酮；雄烯醇酮(DHEA)；5-***；孕酮；17-羟基孕酮；可托多松；皮质醇；脱氧皮质酮；皮质酮；醛固酮；雄烯二酮；睾酮；别双氢睾酮；雌酮El；***E2；1la-羟雌酮；1lb-羟雌酮；1la-羟***；1lb-羟***；9(11)-脱氢***；9(11)-脱氢雌酮；11-酮雌酮；***-3-SO4；雌酮-SO4；***-17-SO4；***-3,17-二-SO4；3-OM雌酮；***-3-葡糖苷酸；雌酮-葡糖苷酸；***-17-葡糖苷酸；***-3,17-二-葡糖苷酸；4-OH雌酮；4-OH***；4-OMe雌酮；4-OMe***；4-OMe雌三醇；2-OH雌酮；2-羟***；2-GH eslril；3-甲氧基-2-OH-雌酮；2-甲氧基-2-QH-雌酮；2-甲氧基-3-OH-***；2,3-二甲氧基雌酮；2,3-二甲氧基***；6a-羟***；6b-羟***；6-酮雌酮；6-酮***；6-脱氢***；6-脱氢雌酮；16a-羟雌酮；17-表雌三醇；雌三醇E3；16,17-表雌三醇；16-表雌三醇；雌三醇-3-硫酸酯；雌三醇-17-Ghi；3-甲氧基雌三醇；16-酮基-1.7b-***；6-酮雌三醇；7-脱氢-17b-***；马烯雌酮；二氢马烯雌酮-3-SO4；马烯雌酮-3-SO4；3a-羟基-5a-孕烷-20-酮；5a-二氢孕酮；别孕二醇；1la-羟基-4-孕烯-3,20-二酮；1lb-羟基-4-孕烯-3,20-二酮；1.7-羟基孕烯醇酮；17-羟基孕酮；2.1-羟基孕烯醇酮；20-羟基孕烯醇酮；7a-羟基孕烯醇酮；2-GH-睾酮；20a-羟基-5a-孕烷-3-酮；20a-二氢孕酮；17a,20a-二羟基孕酮；3b-羟基-5-孕烯-20-酮-3-SO4；依托诺龙；孕二醇；5b-二氢孕酮；5a-二氢睾酮；17b-二氢雄酮；17b-二氢表雄酮；7a-羟睾酮；7a-羟雄烯二酮；6a-OH-睾酮；6b-OH-睾酮；本胆烷醇酮葡糖苷酸；DHEA GLUC；16a-羟基DHEA；睾酮硫酸酯；脱氧睾酮；4-雄烯-30L,17-酮；2a-羟雄烯二酮；1la-羟雄烯二酮；6-酮睾酮；Nl 1-酮睾酮；9-脱氢睾酮；别四氢脱氧皮质酮；肾上腺雄酮；本胆烷醇酮；4-***；16a-酮睾酮；19-羟雄烯二酮；4-雄烯-3,6-17-三酮；7b-羟基DHEA；7a-羟基DHEA；7-酮DHEA；9-脱氢表雄酮；别胆固醇；9-脱氢孕酮；11-脱氢四氢皮质酮；四氢皮质酮；6b-羟基DOC；尿皮质醇；孕烷三醇；16a-羟基孕酮；17a-羟基孕烯醇酮；6-脱氢睾酮；9(11)-脱氢DHEA；11b-羟表雄酮；16a-羟表雄酮；雄酮；表雄酮；7a-羟***(DHEA)；7b-羟***(DHEA)；4-胆甾烯-3a-醇；4-孕烯-3b-醇-20-酮；5-雄烯-3b,17-二醇-16-酮；19-羟基DHEA；16a-OH-孕烯醇酮；5a-二氢皮质酮(5a-DH-DOC)；表睾酮；5b-雄烷二酮；11b-OH-雄烯二酮；11-酮-本胆烷醇酮；5a-孕烷-1la-OH-3,20-二酮；5a-环氧孕烯醇酮；5a-二氢-11-酮-孕酮；11-酮孕酮；胆固醇；4b-OH胆固醇；7a-OH胆固醇；7b-OH胆固醇；25-OH胆固醇；5a,6a-环氧胆固醇；7-酮-胆固醇；7-酮-25-OH胆固醇；6,7-脱氢胆固醇；6-脱氢胆甾烯酮；6-酮胆甾烯酮；本胆烷-3-OH-17-酮；7-脱氢胆固醇；二氢胆固醇；胆固醇-3-SO4；粪甾烷3-7,12-二醇；20a-OH-胆固醇；22b-OH-胆固醇；27-OH-cb.胆固醇；24-酮-胆固醇；24-羟胆固醇；Me-3OH-胆-5-n-24-酸酯；鹅胆酸；熊去氧胆酸；鼠胆酸；Iivodeoxycholic acid；别石胆酸；石胆酸；牛磺胆酸；牛磺猪脱氧胆酸；胆酸；牛磺鹅脱氧胆酸；脱氧胆酸；牛石胆酸；甘氨石胆酸；6-酮-别石胆酸；甘氨脱氧胆酸；甘氨鹅脱氧甘胆酸；牛磺熊脱氧胆酸；牛磺脱氧胆酸；甘氨脱氧胆酸；a-鼠胆酸；b-鼠胆酸；牛磺-b-鼠胆酸；牛磺胆酸；牛磺脱氢胆酸；甘氨脱氢胆酸；雄烷二醇-3-葡糖苷酸；1l-酮-本胆烷醇酮-3-葡糖苷酸；本胆烷醇酮-3-葡糖苷酸；硫酸脱氢表雄酮(DHEAS)；表睾酮-17-SO4；睾酮-17-葡糖苷酸；孕二醇-3-葡糖苷酸；17-OH-孕烷醇酮-3-葡糖苷酸钠；孕烷醇酮-3-SO4；17,20-二-OH-孕酮-20-葡糖苷酸；皮质醇-21-SO4；孕烯醇酮-3-葡糖苷酸；胆固醇-3-葡糖苷酸；别孕烷醇酮-SO4；表别孕烷醇酮-SO4；雌三醇-3-葡糖苷酸钠；24-脱氢胆固醇；粪甾醇；菜油固醇；b-谷甾醇；菜子甾醇；豆甾醇；表别胆固醇；24,25-环氧胆固醇；酵母固醇；羊毛甾醇；7-烯胆烷醇；17β-***；其类似物；或其衍生物。
在一些实施方案中，类固醇是促蛋白合成类固醇(或促蛋白合成雄激素类固醇，AAS)，一种在结构上与睾酮相关并且还具有与睾酮类似的效果的合成类固醇。示例性的促蛋白合成类固醇包括但不限于丙酸睾酮、庚酸睾酮、环戊丙酸睾酮、诺龙(例如，癸酸诺龙或苯丙酸诺龙)、司坦唑醇、羟甲基二烯酮(美雄酮)、***、氧雄龙、美睾酮、羟甲烯龙、屈他雄酮、美替诺龙(甲雄烯醇酮)、氟***或其衍生物。
在一些实施方案中，类固醇是皮质类固醇。皮质类固醇可进一步分为糖皮质激素和盐皮质激素。示例性皮质类固醇包括但不限于醛固酮、二丙酸阿氯米松、安西奈德、倍他米松、戊酸倍他米松、二丙酸倍他米松、布***、氯倍他松-17-丁酸酯、氯倍他索-17-丙酸酯、皮质醇(氢化可的松)、可的松、醋酸可的松、***、***、氟氢可的松、醋酸氟轻松、氟轻松、氟可龙、己酸氟可龙、新戊酸氟可龙、醋酸氟甲叉龙、氯氟舒松、卤米松、醋酸氢化可的松、氢化可的松-17-戊酸酯、甲基强的松龙、莫米松、泼尼卡酯、强的松龙、强的松、新戊酸替可的松、曲安奈德、曲安西龙醇或其衍生物。
在一些实施方案中，皮质类固醇包含前药形式。在一些实施方案中，皮质类固醇前药包括氢化可的松-17-丁酸酯、氢化可的松-17-乙丙酸酯、氢化可的松-17-丁丙酸酯、环索奈德或泼尼卡酯。
在一些实施方案中，本文的公开内容包括向受试者施用上文所述的经修饰的效应细胞和类固醇的方法。在一些情况下，以在体内有效诱导经修饰的效应细胞群体扩增的量施用类固醇。在一些情况下，将选自丙酸睾酮、庚酸睾酮、环戊丙酸睾酮、诺龙(例如，癸酸诺龙或苯丙酸诺龙)、司坦唑醇、羟甲基二烯酮(美雄酮)、***、氧雄龙、美睾酮、羟甲烯龙、屈他雄酮、美替诺龙(甲雄烯醇酮)、氟***、醛固酮、二丙酸阿氯米松、安西奈德、倍他米松、戊酸倍他米松、二丙酸倍他米松、布***、氯倍他松-17-丁酸酯、氯倍他索-17-丙酸酯、皮质醇(氢化可的松)、可的松、醋酸可的松、***、***、氟氢可的松、醋酸氟轻松、氟轻松、氟可龙、己酸氟可龙、新戊酸氟可龙、醋酸氟甲叉龙、氯氟舒松、卤米松、醋酸氢化可的松、氢化可的松-17-戊酸酯、甲基强的松龙、莫米松、泼尼卡酯、强的松龙、强的松、新戊酸替可的松、曲安奈德、曲安西龙醇、氢化可的松-17-丁酸酯、氢化可的松-17-乙丙酸酯、氢化可的松-17-丁丙酸酯、环索奈德或泼尼卡酯的类固醇与本文所述的经修饰的效应细胞一起施用于有需要的受试者，其中以足以诱导经修饰的效应细胞群体在受试者体内扩增的量施用该类固醇。在一些情况下，将选自丙酸睾酮、庚酸睾酮、环戊丙酸睾酮、诺龙(例如，癸酸诺龙或苯丙酸诺龙)、司坦唑醇、羟甲基二烯酮(美雄酮)、***、氧雄龙、美睾酮、羟甲烯龙、屈他雄酮、美替诺龙(甲雄烯醇酮)、氟***的类固醇与本文所述的经修饰的效应细胞一起施用于有需要的受试者，其中以有效诱导经修饰的效应细胞群体在受试者体内扩增的量施用该类固醇。在一些情况下，将选自醛固酮、二丙酸阿氯米松、安西奈德、倍他米松、戊酸倍他米松、二丙酸倍他米松、布***、氯倍他松-17-丁酸酯、氯倍他索-17-丙酸酯、皮质醇(氢化可的松)、可的松、醋酸可的松、***、***、氟氢可的松、醋酸氟轻松、氟轻松、氟可龙、己酸氟可龙、新戊酸氟可龙、醋酸氟甲叉龙、氯氟舒松、卤米松、醋酸氢化可的松、氢化可的松-17-戊酸酯、甲基强的松龙、莫米松、泼尼卡酯、强的松龙、强的松、新戊酸替可的松、曲安奈德、曲安西龙醇的类固醇与本文所述的经修饰的效应细胞一起施用于有需要的受试者，其中以足以诱导经修饰的效应细胞群体在受试者体内扩增的量施用该类固醇。在一些情况下，将选自氢化可的松-17-丁酸酯、氢化可的松-17-乙丙酸酯、氢化可的松-17-丁丙酸酯、环索奈德或泼尼卡酯的类固醇与本文所述的经修饰的效应细胞一起施用于有需要的受试者，其中以足以诱导经修饰的效应细胞群体在受试者体内扩增的量施用该类固醇。在一些情况下，将选自氟***、美睾酮、美雄酮、十一酸诺龙、环戊丙酸诺龙、氧雄龙、羟甲烯龙、己氧基苯丙酸诺龙、睾酮或司坦唑醇与本文所述的经修饰的效应细胞一起施用于有需要的受试者，其中以足以诱导经修饰的效应细胞群体在受试者体内扩增的量施用该类固醇。在一些情况下，将选自氟***、美睾酮、美雄酮、十一酸诺龙、环戊丙酸诺龙、氧雄龙、羟甲烯龙、己氧基苯丙酸诺龙、睾酮、强的松、皮质醇、可的松、强的松龙、***、倍他米松、曲安西龙、倍氯米松、氟氢可的松、脱氧皮质酮、醛固酮或司坦唑醇与本文所述的经修饰的效应细胞一起施用于有需要的受试者，其中以足以诱导经修饰的效应细胞群体在受试者体内扩增的量施用该类固醇。
在一些情况下，本文所述的方法能够省略预处理步骤(例如，淋巴细胞耗尽)。在这样的情况下，将本文所述的经修饰的效应细胞和类固醇施用于受试者，而无需事先施用化学治疗剂以诱导淋巴细胞减少症。
给药方案
在一些情况下，经修饰的效应细胞的扩增取决于类固醇的施用时机。在一些实施方案中，类固醇与本文所述的经修饰的效应细胞同时施用。在其他实施方案中，类固醇与本文所述的经修饰的效应细胞顺序施用。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞前将类固醇施用于受试者。在其他情况下，在施用经修饰的效应细胞后将类固醇施用于受试者。在一些实施方案中，以有效诱导和/或维持经修饰的效应细胞群体在受试者体内扩增的量将类固醇施用于受试者。在一些实施方案中，以有效地不在临床上干扰经修饰的效应细胞群体在受试者体内植入和/或持续扩增的量将类固醇施用于受试者。在一些实施方案中，该量不会不利地影响经修饰的效应细胞群体在受试者体内的植入和/或持续扩增。
在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞前至少0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、10.5、11、11.5、12、15、16、17、18、19、20、21、22、23小时或24小时施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞前至少0.5、1、2、3、4、5、6、8、10、12、15、18、20小时或24小时施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞前至少0.5小时施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞前至少1小时施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞前至少1.5小时施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞前至少2小时施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞前至少3小时施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞前至少4小时施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞前至少5小时施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞前至少6小时施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞前至少7小时施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞前至少8小时施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞前至少9小时施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞前至少10小时施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞前至少12小时施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞前至少15小时施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞前至少18小时施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞前至少20小时施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞前至少24小时施用类固醇。
在一些实施方案中，在施用经修饰的效应细胞前至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、15、21、28天或30天施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞前至少2天施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞前至少3天施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞前至少4天施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞前至少5天施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞前至少6天施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞前至少7天施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞前至少8天施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞前至少9天施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞前至少10天施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞前至少12天施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞前至少14天施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞前至少15天施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞前至少28天施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞前至少30天施用类固醇。
在一些情况下，在施用所述经修饰的效应细胞后至少0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、15、18、20、24、36、48、60、72、84、96、108小时或120小时施用所述类固醇。在一些情况下，在施用所述经修饰的效应细胞后至少0.5、1、2、3、4、5、6、8、10、12、15、18、20、24、36、48、60、72、84、96、108小时或120小时施用所述类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞后至少0.5小时施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞后至少1小时施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞后至少1.5小时施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞后至少2小时施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞后至少3小时施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞后至少4小时施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞后至少5小时施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞后至少6小时施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞后至少7小时施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞后至少8小时施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞后至少9小时施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞后至少10小时施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞后至少12小时施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞后至少15小时施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞后至少18小时施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞后至少20小时施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞后至少24小时施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞后至少36小时施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞后至少48小时施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞后至少60小时施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞后至少72小时施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞后至少84小时施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞后至少96小时施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞后至少108小时施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞后至少120小时施用类固醇。
在一些实施方案中，在施用经修饰的效应细胞后至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、75、90天或更多天施用类固醇。在一些实施方案中，在施用经修饰的效应细胞后至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、15、28、30、45、60、90天或更多天施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞后至少2天施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞后至少3天施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞后至少4天施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞后至少5天施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞后至少6天施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞后至少7天施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞后至少8天施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞后至少9天施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞后至少10天施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞后至少12天施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞后至少14天施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞后至少15天施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞后至少28天施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞后至少30天施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞后至少45天施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞后至少60天施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞后至少90天施用类固醇。
在一些实施方案中，将类固醇连续施用1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、75、90天或更多天。在一些情况下，将类固醇连续施用1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、15、20、25、30、45、60、90天或更多天。在一些情况下，将类固醇连续施用1天或多天。在一些情况下，将类固醇连续施用2天或更多天。在一些情况下，将类固醇连续施用3天或更多天。在一些情况下，将类固醇连续施用4天或更多天。在一些情况下，将类固醇连续施用5天或更多天。在一些情况下，将类固醇连续施用6天或更多天。在一些情况下，将类固醇连续施用7天或更多天。在一些情况下，将类固醇连续施用8天或更多天。在一些情况下，将类固醇连续施用9天或更多天。在一些情况下，将类固醇连续施用10天或更多天。在一些情况下，将类固醇连续施用12天或更多天。在一些情况下，将类固醇连续施用15天或更多天。在一些情况下，将类固醇连续施用20天或更多天。在一些情况下，将类固醇连续施用25天或更多天。在一些情况下，将类固醇连续施用30天或更多天。在一些情况下，将类固醇连续施用45天或更多天。在一些情况下，将类固醇连续施用60天或更多天。在一些情况下，将类固醇连续施用90天或更多天。
在一些情况下，将类固醇以预定的时间间隔施用1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、75、90天或更多天。在一些情况下，将类固醇以预定的时间间隔施用1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、15、20、25、30、45、60、90天或更多天。在一些情况下，将类固醇以预定的时间间隔施用1天或多天。在一些情况下，将类固醇以预定的时间间隔施用2天或更多天。在一些情况下，将类固醇以预定的时间间隔施用3天或更多天。在一些情况下，将类固醇以预定的时间间隔施用4天或更多天。在一些情况下，将类固醇以预定的时间间隔施用5天或更多天。在一些情况下，将类固醇以预定的时间间隔施用6天或更多天。在一些情况下，将类固醇以预定的时间间隔施用7天或更多天。在一些情况下，将类固醇以预定的时间间隔施用8天或更多天。在一些情况下，将类固醇以预定的时间间隔施用9天或更多天。在一些情况下，将类固醇以预定的时间间隔施用10天或更多天。在一些情况下，将类固醇以预定的时间间隔施用12天或更多天。在一些情况下，将类固醇以预定的时间间隔施用15天或更多天。在一些情况下，将类固醇以预定的时间间隔施用20天或更多天。在一些情况下，将类固醇以预定的时间间隔施用25天或更多天。在一些情况下，将类固醇以预定的时间间隔施用30天或更多天。在一些情况下，将类固醇以预定的时间间隔施用45天或更多天。在一些情况下，将类固醇以预定的时间间隔施用60天或更多天。在一些情况下，将类固醇以预定的时间间隔施用90天或更多天。
在一些实施方案中，每2、5、7、10、14、15、28或30天施用类固醇。在一些实施方案中，每2天施用类固醇。在一些实施方案中，每5天施用类固醇。在一些实施方案中，每7天施用类固醇。在一些实施方案中，每10天施用类固醇。在一些实施方案中，每14天施用类固醇。在一些实施方案中，每15天施用类固醇。在一些实施方案中，每28天施用类固醇。在一些实施方案中，每30天施用类固醇。
在一些情况下，类固醇以一天一次、一天两次、一天三次、每天、每隔一天一次、一周三次、一周四次、一周五次、一周一次、每隔一周一次、一个月一次、一个月两次、一个月三次、一个月四次、一个月五次或其组合施用。
在一些情况下，以1个剂量、2个剂量、3个剂量、4个剂量、5个剂量或更多个剂量施用一定量的类固醇。在一些情况下，以1个剂量或多个剂量施用该量的类固醇。在一些情况下，以2个剂量或更多个剂量施用该量的类固醇。在一些情况下，以3个剂量或更多个剂量施用该量的类固醇。在一些情况下，以4个剂量或更多个剂量施用该量的类固醇。在一些情况下，以5个剂量或更多个剂量施用该量的类固醇。
在一些实施方案中，在施用经修饰的效应细胞后至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、15、28、30天或更多天以第一量施用类固醇，并且随后在施用经修饰的效应细胞后至少10、15、20、25、30、35、40、45、49、50、55、60、65、70、75、80、85、90天或更多天以第二量施用类固醇。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞后至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、15、21、28、30天或更多天以第一量施用类固醇，以治疗病况。在一些情况下，在受试者从病况中改善或恢复后，在初始施用经修饰的效应细胞后至少15、30、31、32、33、34、35、40、45、49、50、55、60、65、70、80、90天或更多天将第二量的类固醇施用于受试者。
在一些实施方案中，在施用经修饰的效应细胞后至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、75、90天或更多天将第一量的类固醇施用于受试者。在一些实施方案中，在施用经修饰的效应细胞后至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、15、28、30、45、60、90天或更多天将第一量的类固醇施用于受试者。在一些实施方案中，在施用经修饰的效应细胞后至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、15、21、28、30天或更多天以第一量施用类固醇。在一些实施方案中，在施用经修饰的效应细胞后至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、13、14、15天或更多天以第一量施用类固醇。在一些实施方案中，在施用经修饰的效应细胞后至少14天以第一量施用类固醇。在一些实施方案中，在施用经修饰的效应细胞后至少15天以第一量施用类固醇。在一些实施方案中，在施用经修饰的效应细胞后至少21天以第一量施用类固醇。在一些实施方案中，在施用经修饰的效应细胞后至少28天以第一量施用类固醇。
在一些实施方案中，所述第一量的类固醇连续施用于所述受试者，持续至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、75、90天或更多天。在一些实施方案中，将第一量的类固醇连续施用于受试者，持续至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、15、21、28、30、45、60、90天或更多天。在一些实施方案中，在施用经修饰的效应细胞后将第一量的类固醇连续施用于受试者，持续至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、13、14天或15天。在一些实施方案中，在施用经修饰的效应细胞后将第一量的类固醇连续施用于受试者，持续至少14天。在一些实施方案中，在施用经修饰的效应细胞后将第一量的类固醇连续施用于受试者，持续至少15天。在一些实施方案中，在施用经修饰的效应细胞后将第一量的类固醇连续施用于受试者，持续至少21天。在一些实施方案中，在施用经修饰的效应细胞后将第一量的类固醇连续施用于受试者，持续至少28天。
在一些实施方案中，将第一量的类固醇间歇施用于受试者，持续至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、75、90天或更多天。在一些实施方案中，将第一量的类固醇间歇施用于受试者，持续至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、15、21、28、30、45、60、90天或更多天。在一些实施方案中，在施用经修饰的效应细胞后将第一量的类固醇间歇施用于受试者，持续至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、13、14天或15天。在一些实施方案中，在施用经修饰的效应细胞后将第一量的类固醇间歇施用于受试者，持续至少14天。在一些实施方案中，在施用经修饰的效应细胞后将第一量的类固醇间歇施用于受试者，持续至少15天。在一些实施方案中，在施用经修饰的效应细胞后将第一量的类固醇间歇施用于受试者，持续至少21天。在一些实施方案中，在施用经修饰的效应细胞后将第一量的类固醇间歇施用于受试者，持续至少28天。
在一些情况下，将第一量的类固醇以预定的时间间隔施用于受试者，持续至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、75、90天或更多天。在一些情况下，将第一量的类固醇以预定的时间间隔施用于受试者，持续至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、15、21、28、30、45、60、90天或更多天。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞后将第一量的类固醇以预定的时间间隔施用于受试者，持续至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、13、14天或15天。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞后将第一量的类固醇以预定的时间间隔施用于受试者，持续至少14天。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞后将第一量的类固醇以预定的时间间隔施用于受试者，持续至少15天。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞后将第一量的类固醇以预定的时间间隔施用于受试者，持续至少21天。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞后将第一量的类固醇以预定的时间间隔施用于受试者，持续至少28天。
在一些实施方案中，每2、5、7、10、14、15、28或30天施用第一量的类固醇。在一些实施方案中，每2天施用第一量的类固醇。在一些实施方案中，每5天施用第一量的类固醇。在一些实施方案中，每7天施用第一量的类固醇。在一些实施方案中，每10天施用第一量的类固醇。在一些实施方案中，每14天施用第一量的类固醇。在一些实施方案中，每15天施用第一量的类固醇。在一些实施方案中，每28天施用第一量的类固醇。在一些实施方案中，每30天施用第一量的类固醇。
在一些实施方案中，在病况恢复或改善后，将第二量的类固醇施用于受试者。在一些情况下，在施用经修饰的效应细胞并且完成施用第一量的类固醇后至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、15、28、30、45、49、50、60、90天或更多天将第二量的类固醇施用于受试者。在一些实施方案中，在施用经修饰的效应细胞并且完成施用第一量的类固醇后至少49天或更多天将第二量的类固醇施用于受试者。
在一些情况下，将第二量的类固醇连续施用于受试者，持续至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、75、90天或更多天。在一些情况下，将第二量的类固醇连续施用于受试者，持续至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、15、28、30、45、60、90天或更多天。在一些情况下，将第二量的类固醇连续施用于受试者，持续至少10、15、20、25、30、35、40、45、49、50、55、60、65、70、75、80、85、90天或更多天。
在一些情况下，将第二量的类固醇间歇施用于受试者，持续至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、75、90天或更多天。在一些情况下，将第二量的类固醇间歇施用于受试者，持续至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、15、28、30、45、60、90天或更多天。在一些情况下，将第二量的类固醇间歇施用于受试者，持续至少10、15、20、25、30、35、40、45、49、50、55、60、65、70、75、80、85、90天或更多天。
在一些情况下，将第二量的类固醇以预定的时间间隔施用于受试者，持续至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、75、90天或更多天。在一些情况下，将第二量的类固醇以预定的时间间隔施用于受试者，持续至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、15、28、30、45、60、90天或更多天。在一些情况下，将第二量的类固醇以预定的时间间隔施用于受试者，持续至少10、15、20、25、30、35、40、45、49、50、55、60、65、70、75、80、85、90天或更多天。
在一些实施方案中，每2、5、7、10、14、15、28或30天施用第二量的类固醇。在一些实施方案中，每2天施用第二量的类固醇。在一些实施方案中，每5天施用第二量的类固醇。在一些实施方案中，每7天施用第二量的类固醇。在一些实施方案中，每10天施用第二量的类固醇。在一些实施方案中，每14天施用第二量的类固醇。在一些实施方案中，每15天施用第二量的类固醇。在一些实施方案中，每28天施用第二量的类固醇。在一些实施方案中，每30天施用第二量的类固醇。
在一些情况下，以1个剂量、2个剂量、3个剂量、4个剂量、5个剂量或更多个剂量施用第一量的类固醇以用于治疗病况。
在一些情况下，以1个剂量、2个剂量、3个剂量、4个剂量、5个剂量或更多个剂量施用第二量的类固醇。
在一些实施方案中，第一量的类固醇是约1mg/kg、1.5mg/kg、2mg/kg、2.5mg/kg、3mg/kg或更多。在一些情况下，第一量的类固醇是约1mg/kg。在一些情况下，第一量的类固醇是约1.5mg/kg。在一些情况下，第一量的类固醇是约2mg/kg。
在一些情况下，第二量的类固醇是约0.1mg/kg、0.2mg/kg、0.3mg/kg、0.4mg/kg、0.5mg/kg、0.6mg/kg、0.7mg/kg、0.8mg/kg或0.9mg/kg。在一些情况下，第二量的类固醇是约0.9mg/kg。在一些情况下，第二量的类固醇是约0.8mg/kg。在一些情况下，第二量的类固醇是约0.7mg/kg。在一些情况下，第二量的类固醇是约0.6mg/kg。在一些情况下，第二量的类固醇是约0.5mg/kg。在一些情况下，第二量的类固醇是约0.9mg/kg、0.8mg/kg、0.7mg/kg、0.6mg/kg、0.5mg/kg、0.4mg/kg、0.3mg/kg、0.2mg/kg或0.1mg/kg。
在一些情况下，第二量的类固醇顺序施用。在一些情况下，每个连续剂量减少0.1mg/kg、0.2mg/kg、0.3mg/kg、0.4mg/kg、0.5mg/kg、0.6mg/kg、0.7mg/kg、0.8mg/kg或0.9mg/kg。在一些情况下，每个连续剂量间隔至少2、5、7、10、12、14、15、20、21、28、30天或更多天施用。在一些情况下，每个连续剂量间隔2天施用。在一些情况下，每个连续剂量间隔5天施用。在一些情况下，每个连续剂量间隔7天施用。在一些情况下，每个连续剂量间隔10天施用。在一些情况下，每个连续剂量间隔12天施用。在一些情况下，每个连续剂量间隔14天施用。在一些情况下，每个连续剂量间隔15天施用。在一些情况下，每个连续剂量间隔20天施用。在一些情况下，每个连续剂量间隔21天施用。在一些情况下，每个连续剂量间隔28天施用。在一些情况下，每个连续剂量间隔30天施用。
在一些实施方案中，在施用经修饰的效应细胞后至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、15、28、30天或更多天以1mg/kg施用类固醇，并且随后在初始施用经修饰的效应细胞后至少30、35、40、45、49、50、55、60、65、70、80、90天或更多天以0.5mg/kg施用类固醇。在一些实施方案中，在施用经修饰的效应细胞后至少15天以1mg/kg施用类固醇，并且随后在初始施用经修饰的效应细胞后至少49天以0.5mg/kg施用类固醇。在一些实施方案中，在施用经修饰的效应细胞后第14天以1mg/kg施用类固醇，并且随后在施用经修饰的效应细胞后第48天以0.5mg/kg施用类固醇。
在一些实施方案中，在表现出细胞因子相关毒性的至少一种症状时施用类固醇。在一些情况下，细胞因子相关毒性包括细胞因子释放综合征(CRS)、脑病或B细胞发育不全。在一些情况下，细胞因子相关毒性诱导细胞因子风暴。
在一些情况下，将第一量的类固醇施用于受试者以治疗病况。在一些实施方案中，病况是移植物抗宿主病(GVHD)。在一些实施方案中，病况是细胞因子释放综合征(CRS)。
在一些情况下，以小于减少细胞因子相关毒性的至少一种症状所需的类固醇量的量施用类固醇。
细胞因子
在一些实施方案中，本文所述的一种或多种方法进一步包括施用细胞因子。细胞因子是一类约5-20kDa的参与细胞信号传导的小蛋白质。在一些情况下，细胞因子包括趋化因子、干扰素、白介素、集落刺激因子或肿瘤坏死因子。在一些实施方案中，趋化因子起到用于引导细胞迁移的化学引诱物的作用，并且分为四个亚家族：CXC、CC、CX3C和XC。示例性趋化因子包括来自CC亚家族的趋化因子：CCL1、CCL2(MCP-1)、CCL3、CCL4、CCL5(RANTES)、CCL6、CCL7、CCL8、CCL9(或CCL10)、CCL11、CCL12、CCL13、CCL14、CCL15、CCL16、CCL17、CCL18、CCL19、CCL20、CCL21、CCL22、CCL23、CCL24、CCL25、CCL26、CCL27和CCL28；来自CXC亚家族的趋化因子：CXCL1、CXCL2、CXCL3、CXCL4、CXCL5、CXCL6、CXCL7、CXCL8、CXCL9、CXCL10、CXCL11、CXCL12、CXCL13、CXCL14、CXCL15、CXCL16和CXCL17；来自XC亚家族的趋化因子：XCL1和XCL2；以及来自CX3C亚家族的趋化因子：CX3CL1。
干扰素(IFN)包括I型干扰素(例如IFN-α、IFN-β、IFN-ε、IFN-κ和IFN-ω)、II型干扰素(例如IFN-γ)和III型干扰素。在一些实施方案中，IFN-α进一步分为约13种亚型，其包括IFNA1、IFNA2、IFNA4、IFNA5、IFNA6、IFNA7、IFNA8、IFNA10、IFNA13、IFNA14、IFNA16、IFNA17和IFNA21。
白介素由白血球或白细胞表达，并且它们促进T和B淋巴细胞和造血细胞的发育和分化。示例性白介素包括IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8(CXCL8)、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-13、IL-14、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、IL-19、IL-20、IL-21、IL-22、IL-23、IL-24、IL-25、IL-26、IL-27、IL-28、IL-29、IL-30、IL-31、IL-32、IL-33、IL-35和IL-36。
在一些实施方案中，白介素包括mbIL-15。在一些实施方案中，mbIL-15是膜结合的嵌合IL-15，其可以与本文所述的经修饰的效应细胞共表达。在一些实施方案中，mbIL-15包含与全长IL-15Rα、其功能片段或变体在框内融合的全长IL-15(例如，天然IL-15多肽)或其片段或变体。在一些情况下，IL-15通过连接体与IL-15Rα间接连接。在一些情况下，mbIL-15如Hurton等人,“Tethered IL-15 augments antitumor activity and promotes a stem-cell memory subset in tumor-specific T cells,”PNAS2016中所述。
肿瘤坏死因子(TNF)是一组调节凋亡的细胞因子。在一些情况下，TNF家族中约有19个成员，包括但不限于TNFα、淋巴毒素-α(LT-α)、淋巴毒素-β(LT-β)、T细胞抗原gp39(CD40L)、CD27L、CD30L、FASL、4-1BBL、OX40L和TNF相关凋亡诱导配体(TRAIL)。
集落刺激因子(CSF)是分泌的糖蛋白，其与造血干细胞表面上的受体蛋白相互作用，这随后调节细胞增殖和向特定种类血细胞的分化。在一些情况下，CSF包括巨噬细胞集落刺激因子、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)或促巨核细胞生成素(promegapoietin)。
在一些实施方案中，细胞因子是膜结合细胞因子，其与本文所述的嵌合抗原受体共表达。
在一些实施方案中，本文所述的一种或多种方法进一步包括施用细胞因子。在一些情况下，细胞因子包括趋化因子、干扰素、白介素、集落刺激因子或肿瘤坏死因子。在一些情况下，本文所述的一种或多种方法进一步包括施用选自趋化因子、干扰素、白介素、集落刺激因子或肿瘤坏死因子的细胞因子。在一些情况下，本文所述的一种或多种方法进一步包括施用选自IL-2、IL-7、IL-12、IL-15、IL-21、IFNγ或TNF-α的细胞因子。
在一些情况下，细胞因子与类固醇或经修饰的效应细胞同时施用。在一些情况下，细胞因子与类固醇和经修饰的效应细胞同时施用。
在一些情况下，细胞因子与类固醇和/或经修饰的效应细胞顺序施用。
其他治疗剂
在一些实施方案中，将一种或多种其他治疗剂与本文所述的方法一起施用。在一些情况下，一种或多种其他治疗剂包括化学治疗剂。示例性化学治疗剂包括：
·烷化剂，如环磷酰胺、氮芥、苯丁酸氮芥、美法仑或亚硝基脲；
·蒽环类，如柔红霉素、多柔比星、表柔比星、伊达比星、米托蒽醌或戊柔比星；
·紫杉烷类，如紫杉醇、多西他赛、abraxane或泰索帝；
·埃博霉素；
·组蛋白脱乙酰酶抑制剂，如伏立诺他或罗米地辛；
·拓扑异构酶抑制剂，如伊立替康、拓扑替康、依托泊苷、替尼泊苷或他氟泊苷；
·激酶抑制剂，如硼替佐米、厄洛替尼、吉非替尼、伊马替尼、维莫非尼或维莫德吉；
·核苷酸类似物和前体类似物，如阿扎胞苷、硫唑嘌呤、卡培他滨、克拉屈滨、氯法拉滨、阿糖胞苷、地西他滨、脱氧氟尿苷、氟达拉滨、氟尿嘧啶、氟尿苷、吉西他滨、羟基脲、巯嘌呤、氨甲蝶呤、奈拉滨、培美曲塞、普拉曲沙或硫鸟嘌呤；
·抗菌剂，如博来霉素或放线菌素；
·基于铂的药剂，如卡铂、顺铂或奥沙利铂；
·类视黄醇，如维A酸、阿利维A酸或贝沙罗汀；或者
·长春花生物碱和衍生物，如长春花碱、长春新碱、长春地辛或长春瑞滨。
在一些实施方案中，其他治疗剂是多药剂治疗方案。在一些实施方案中，其他治疗剂包括HyperCVAD方案(环磷酰胺、长春新碱、多柔比星、***与氨甲蝶呤和阿糖胞苷交替使用)。
在一些实施方案中，其他治疗剂包括R-CHOP方案(利妥昔单抗、环磷酰胺、多柔比星、长春新碱和强的松)。
在一些实施方案中，其他治疗剂包括FCR方案(FCR(氟达拉滨、环磷酰胺、利妥昔单抗))。
在一些实施方案中，其他治疗剂包括FCMR方案(氟达拉滨、环磷酰胺、米托蒽醌、利妥昔单抗)。
在一些实施方案中，其他治疗剂包括FMR方案(氟达拉滨、米托蒽醌、利妥昔单抗)。
在一些实施方案中，其他治疗剂包括PCR方案(喷司他丁、环磷酰胺、利妥昔单抗)。
在一些实施方案中，其他治疗剂包括PEPC方案(强的松、依托泊苷、甲苄肼、环磷酰胺)。
在一些实施方案中，其他治疗剂包括环磷酰胺和氟达拉滨的方案。
在一些情况下，其他治疗剂与类固醇、经修饰的效应细胞、细胞因子或其组合同时施用。在一些情况下，其他治疗剂与类固醇和经修饰的效应细胞同时施用。在一些情况下，其他治疗剂与类固醇、经修饰的效应细胞和/或细胞因子顺序施用。
在一些情况下，其他治疗剂以低剂量方案施用。在一些情况下，低剂量方案包括环磷酰胺和氟达拉滨的方案。在一些情况下，低剂量方案包括约250mg/m2剂量的环磷酰胺，和约25mg/m2剂量的氟达拉滨。在一些情况下，给药方案包括约1、2、3天或更多天。
在其他情况下，其他治疗剂以高剂量方案施用。在一些情况下，高剂量方案包括环磷酰胺和氟达拉滨的方案。在一些情况下，高剂量方案包括持续约1、2天或更多天的约60mg/m2剂量的环磷酰胺，和持续约1、2、3、4、5天或更多天的约25mg/m2剂量的氟达拉滨。
在一些情况下，其他治疗剂包括这样的剂量方案，其包含持续约1、2、3天或更多天的约250mg/m2环磷酰胺和约25mg/m2氟达拉滨。在一些情况下，施用氟达拉滨约3天。
在一些情况下，其他治疗剂包括这样的剂量方案，其包含持续约1、2、3、4、5、6天或更多天的约300mg/m2环磷酰胺。在一些情况下，施用环磷酰胺约6天。
在一些情况下，其他治疗剂包括这样的剂量方案，其包含持续约1、2、3天或更多天的约500mg/m2环磷酰胺和约30mg/m2氟达拉滨。在一些情况下，施用氟达拉滨约3天。
在一些情况下，施用任何一种或多种上述化学治疗剂诱导淋巴细胞减少症。
适应症
在一些实施方案中，本文公开了向患有癌症的受试者施用经修饰的效应细胞和类固醇的方法。在一些情况下，癌症是与CD19、CD20、CD33、CD44、BCMA、CD123、EGFRvIII、α-叶酸受体、CAIX、CD30、ROR1、CEA、EGP-2、EGP-40、HER2、HER3、叶酸结合蛋白、GD2、GD3、IL-13R-a2、KDR、EDB-F、间皮素、CD22、EGFR、MUC-1、MUC-16、MAGE-A1、h5T4、PSMA、TAG-72或VEGF-R2的过表达相关的癌症。在一些情况下，癌症是与CD19、CD33、BCMA、CD44、α-叶酸受体、CAIX、CD30、ROR1、CEA、EGP-2、EGP-40、HER2、HER3、叶酸结合蛋白、GD2、GD3、IL-13R-a2、KDR、EDB-F、间皮素、CD22、EGFR、MUC-1、MUC-16、MAGE-A1、h5T4、PSMA、TAG-72、EGFRvIII、CD123和VEGF-R2的过表达相关的癌症。
在一些实施方案中，本文公开了向患有与CD19过表达相关的癌症的受试者施用经修饰的效应细胞和类固醇的方法。在一些实施方案中，本文公开了向患有与CD33过表达相关的癌症的受试者施用经修饰的效应细胞和类固醇的方法。在一些实施方案中，本文公开了向患有与CD44、BCMA、CD123、EGFRvIII、α-叶酸受体、CAIX、CD30、ROR1、CEA、EGP-2、EGP-40、HER2、HER3、叶酸结合蛋白、GD2、GD3、IL-13R-a2、KDR、EDB-F、间皮素、CD22、EGFR、MUC-1、MAGE-A1、h5T4、PSMA、TAG-72或VEGF-R2的过表达相关的癌症的受试者施用经修饰的效应细胞和类固醇的方法。在一些情况下，癌症是转移性癌症。在其他情况下，癌症是复发性或难治性癌症。
在一些情况下，癌症是实体瘤或血液学恶性肿瘤。在一些情况下，癌症是实体瘤。在其他情况下，癌症是血液学恶性肿瘤。在一些情况下，癌症是转移性癌症。在一些情况下，癌症是复发性或难治性癌症。
在一些情况下，癌症是实体瘤。示例性实体瘤包括但不限于***癌；阑尾癌；胆道癌(即胆管癌)；膀胱癌；脑肿瘤；乳腺癌；***；结肠癌；原发灶不明癌(CUP)；食道癌；眼癌；输卵管癌；胃肠癌；肾癌；肝癌；肺癌；髓母细胞瘤；黑素瘤；口腔癌；卵巢癌；胰腺癌；甲状旁腺疾病；***癌；垂体瘤；***癌；直肠癌；皮肤癌；胃癌；睾丸癌；咽喉癌；甲状腺癌；子宫癌；***癌；或外阴癌。
在一些情况下，本文公开了向患有实体瘤的受试者施用经修饰的效应细胞和类固醇的方法，该类固醇的量有效诱导经修饰的效应细胞群体在受试者体内的扩增。在一些情况下，本文公开了向患有实体瘤的受试者施用经修饰的效应细胞和类固醇的方法，该类固醇的量有效诱导经修饰的效应细胞群体在受试者体内的扩增，该实体瘤选自***癌；阑尾癌；胆道癌(即胆管癌)；膀胱癌；脑肿瘤；乳腺癌；***；结肠癌；原发灶不明癌(CUP)；食道癌；眼癌；输卵管癌；胃肠癌；肾癌；肝癌；肺癌；髓母细胞瘤；黑素瘤；口腔癌；卵巢癌；胰腺癌；甲状旁腺疾病；***癌；垂体瘤；***癌；直肠癌；皮肤癌；胃癌；睾丸癌；咽喉癌；甲状腺癌；子宫癌；***癌；或外阴癌。在一些情况下，实体瘤是转移性实体瘤。在其他情况下，实体瘤是复发性或难治性肿瘤。
在一些情况下，癌症是血液学恶性肿瘤。在一些情况下，血液学恶性肿瘤包括淋巴瘤、白血病、骨髓瘤或B细胞恶性肿瘤。在一些情况下，血液学恶性肿瘤包括淋巴瘤、白血病或骨髓瘤。在一些情况下，示例性血液学恶性肿瘤包括慢性淋巴细胞白血病(CLL)、小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)、高危CLL、非CLL/SLL淋巴瘤、幼淋巴细胞白血病(PLL)、滤泡性淋巴瘤(FL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、Waldenstrom巨球蛋白血症、多发性骨髓瘤、结外边缘区B细胞淋巴瘤、***边缘区B细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、非伯基特高级别B细胞淋巴瘤、原发性纵隔B细胞淋巴瘤(PMBL)、免疫母细胞性大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤、B细胞幼淋巴细胞白血病、淋巴浆细胞淋巴瘤、脾边缘区淋巴瘤、浆细胞骨髓瘤、浆细胞瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤或淋巴瘤样肉芽肿病。在一些实施方案中，血液学恶性肿瘤包括髓样白血病。在一些实施方案中，血液学恶性肿瘤包括急性髓样白血病(AML)或慢性髓样白血病(CML)。
在一些情况下，本文公开了向患有血液学恶性肿瘤的受试者施用经修饰的效应细胞和类固醇的方法，该类固醇的量有效诱导经修饰的效应细胞群体在受试者体内的扩增。在一些情况下，本文公开了向患有淋巴瘤、白血病、骨髓瘤或B细胞恶性肿瘤的受试者施用经修饰的效应细胞和类固醇的方法，该类固醇的量有效诱导经修饰的效应细胞群体在受试者体内的扩增。在一些情况下，本文公开了向患有血液学恶性肿瘤的受试者施用经修饰的效应细胞和类固醇的方法，该类固醇的量有效诱导经修饰的效应细胞群体在受试者体内的扩增，该血液学恶性肿瘤选自慢性淋巴细胞白血病(CLL)、小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)、高危CLL、非CLL/SLL淋巴瘤、幼淋巴细胞白血病(PLL)、滤泡性淋巴瘤(FL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、Waldenstrom巨球蛋白血症、多发性骨髓瘤、结外边缘区B细胞淋巴瘤、***边缘区B细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、非伯基特高级别B细胞淋巴瘤、原发性纵隔B细胞淋巴瘤(PMBL)、免疫母细胞性大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤、B细胞幼淋巴细胞白血病、淋巴浆细胞淋巴瘤、脾边缘区淋巴瘤、浆细胞骨髓瘤、浆细胞瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤或淋巴瘤样肉芽肿病。在一些情况下，本文公开了向患有选自AML或CML的血液学恶性肿瘤的受试者施用经修饰的效应细胞和类固醇的方法，该类固醇的量有效诱导经修饰的效应细胞群体在受试者体内的扩增。在一些情况下，本文公开了向患有大B细胞淋巴瘤的受试者施用经修饰的效应细胞和类固醇的方法，该类固醇的量有效诱导经修饰的效应细胞群体在受试者体内的扩增。在一些情况下，本文公开了向患有CLL的受试者施用经修饰的效应细胞和类固醇的方法，该类固醇的量有效诱导经修饰的效应细胞群体在受试者体内的扩增。在一些情况下，本文公开了向患有滤泡性淋巴瘤的受试者施用经修饰的效应细胞和类固醇的方法，该类固醇的量有效诱导经修饰的效应细胞群体在受试者体内的扩增。在一些情况下，本文公开了向患有ALL的受试者施用经修饰的效应细胞和类固醇的方法，该类固醇的量有效诱导经修饰的效应细胞群体在受试者体内的扩增。在一些情况下，本文公开了向患有AML的受试者施用经修饰的效应细胞和类固醇的方法，该类固醇的量有效诱导经修饰的效应细胞群体在受试者体内的扩增。在一些情况下，本文公开了向患有CML的受试者施用经修饰的效应细胞和类固醇的方法，该类固醇的量有效诱导经修饰的效应细胞群体在受试者体内的扩增。在一些情况下，血液学恶性肿瘤是转移性血液学恶性肿瘤。在其他情况下，血液学恶性肿瘤是复发性或难治性血液学恶性肿瘤。
基于病毒的递送***
本发明还提供了递送***，如基于病毒的***，其中***了本文所述的核酸。代表性的病毒表达载体包括但不限于腺相关病毒载体、基于腺病毒的载体(例如，可从Crucell,Inc.(Leiden,The Netherlands)获得的基于腺病毒的Per.C6***)、基于慢病毒的载体(例如，来自Life Technologies(Carlsbad,Calif.)的基于慢病毒的pLPI)、逆转录病毒载体(例如，pFB-ERV加pCFB-EGSH)和基于疱疹病毒的载体。在一个实施方案中，病毒载体是慢病毒载体。衍生自逆转录病毒如慢病毒的载体是实现长期基因转移的合适工具，因为其允许转基因的长期稳定整合及其在子细胞中的增殖。慢病毒载体比衍生自致癌逆转录病毒如鼠白血病病毒的载体具有额外优势，因为其可以转导非增殖细胞如肝细胞。慢病毒载体还具有低免疫原性的额外优势。在另外的实施方案中，病毒载体是腺相关病毒载体。在进一步的实施方案中，病毒载体是逆转录病毒载体。通常来说，并且在实施方案中，合适的载体含有在至少一种生物体中起作用的复制起点、启动子序列、方便的限制性内切核酸酶位点和一种或多种选择标记(例如，WO 01/96584；WO 01/29058；以及美国专利号6,326,193)。
其他合适的载体包括整合表达载体，其可以随机整合到宿主细胞的DNA中，或者可以包括重组位点以实现表达载体与宿主细胞染色体之间的特异性重组。这样的整合表达载体可利用宿主细胞染色体的内源表达控制序列来实现所需蛋白质的表达。以位点特异性方式整合的载体的实例包括，例如，来自Invitrogen(Carlsbad,Calif.)的flp-in***的组分(例如，pcDNATM5/FRT)，或例如可见于来自Stratagene(La Jolla,Calif.)的pExchange-6核心载体中的cre-lox***。随机整合到宿主细胞染色体中的载体的实例包括，例如，来自Invitrogen(Carlsbad,Calif.)的pcDNA3.1(当在没有T-抗原的情况下引入时)和来自Promega(Madison,Wis.)的pCI或pFN10A(ACT)FLEXITM。额外的启动子元件(例如增强子)调节转录起始的频率。尽管最近已示出许多启动子也包含在起始位点下游的功能元件，但通常这些启动子元件位于起始位点上游30-110bp的区域。启动子元件之间的间隔通常是柔性的，因此当元件相对于彼此倒置或移动时保留启动子功能。在胸苷激酶(tk)启动子中，启动子元件之间的间隔可以在活性开始下降之前增加至相隔50bp。似乎单个元件可以协同或独立地起作用以激活转录，这取决于启动子。
合适的启动子的一个实例是立即早期巨细胞病毒(CMV)启动子序列。该启动子序列是强组成型启动子序列，能够驱动与其可操作地连接的任何多核苷酸序列的高水平表达。
合适的启动子的另一实例是人延伸生长因子1α1(hEF1a1)。在实施方案中，包含本发明的CAR和/或TCR的载体构建体包含hEF1a1功能变体。
然而，也可以使用其他组成型启动子序列，包括但不限于猴病毒40(SV40)早期启动子、小鼠乳腺肿瘤病毒(MMTV)、人免疫缺陷病毒(HIV)长末端重复序列(LTR)启动子、MoMuLV启动子、禽白血病病毒启动子、爱泼斯坦-巴尔病毒立即早期启动子、劳斯肉瘤病毒启动子，以及人基因启动子，诸如但不限于肌动蛋白启动子、肌球蛋白启动子、血红蛋白启动子和肌酸激酶启动子。进一步地，本发明不应限于组成型启动子的使用。诱导型启动子也被考虑为本发明的一部分。诱导型启动子的使用提供了一种分子开关，其能够开启可操作地连接的多核苷酸序列的表达(当需要这样的表达时)，或者当不需要表达时关闭表达。诱导型启动子的实例包括但不限于金属硫蛋白启动子、糖皮质激素启动子、孕酮启动子和四环素启动子。
为了评估CAR或TCR多肽或其部分的表达，待引入细胞中的表达载体还可含有选择标记基因或报告基因或两者，以便于从试图通过病毒载体来转染或感染的细胞群体中鉴别和选择表达细胞。在其他方面，选择标记可以携带在单独的DNA片段上并用于共转染程序。选择标记和报告基因都可以侧接适当的调节序列以实现在宿主细胞中的表达。有用的选择标记包括，例如，抗生素抗性基因如新霉素抗性基因(neo)和氨苄青霉素抗性基因等。在一些实施方案中，截短的表皮生长因子受体(HER1t)标签可用作选择标记基因。
报告基因可用于鉴别潜在转染的细胞和评价调节序列的功能。通常，报告基因是不存在于接受体生物体或组织中且不由其表达的基因，其编码多肽，该多肽的表达通过一些易于检测的特性(例如酶活性)表现。在将DNA引入接受体细胞后的合适时间测定报告基因的表达。合适的报告基因可包括编码萤光素酶、β-半乳糖苷酶、氯霉素乙酰转移酶、分泌的碱性磷酸酶的基因，或绿色荧光蛋白基因(例如，Ui-Tei等人,FEBS Letters 479:79-82(2000))。合适的表达***是公知的，并且可以使用已知技术制备或商购获得。通常，示出报告基因最高表达水平的具有最小5'侧翼区的构建体被鉴别为启动子。这样的启动子区可以与报告基因连接，并用于评价药剂调节启动子驱动的转录的能力。
在一些实施方案中，载体包含驱动转基因表达的hEF1a1启动子、增强转录的牛生长激素ployA序列、土拨鼠肝炎病毒转录后调节元件(WPRE)以及衍生自pFUGW质粒的LTR序列。
将基因引入细胞以及使基因在细胞中表达的方法是本领域已知的。在表达载体的情况下，可以通过本领域的任何方法将载体容易地引入宿主细胞，如哺乳动物细胞、细菌、酵母或昆虫细胞中。例如，可以通过物理、化学或生物方式将表达载体转移到宿主细胞中。
用于将多核苷酸引入宿主细胞的物理方法包括磷酸钙沉淀、脂质转染、粒子轰击、显微注射、电穿孔等。用于产生包含载体和/或外源核酸的细胞的方法是本领域公知的。例如，参见Sambrook等人(Molecular Cloning:A Laboratory Manual,Cold Spring HarborLaboratory,New York(2001))。在实施方案中，用于将多核苷酸引入宿主细胞的方法是磷酸钙转染或聚乙烯亚胺(PEI)转染。
用于将感兴趣的多核苷酸引入宿主细胞的生物学方法包括使用DNA和RNA载体。病毒载体，尤其是逆转录病毒载体，已成为用于将基因***哺乳动物细胞(例如人细胞)中的最广泛使用的方法。其他病毒载体可以衍生自慢病毒、痘病毒、单纯疱疹病毒I、腺病毒和腺相关病毒等。参见，例如，美国专利号5,350,674和5,585,362。
用于将多核苷酸引入宿主细胞的化学方法包括胶体分散***，如大分子复合物、纳米胶囊、微球、珠和基于脂质的***，包括水包油乳液、胶束、混合胶束和脂质体。用作体外和体内递送媒介物的示例性胶体***是脂质体(例如，人造膜囊泡)。
在利用病毒递送***的情况下，示例性递送媒介物是脂质体。考虑使用脂质制剂将核酸引入宿主细胞(在体外、离体或体内)。在另一方面，核酸可以与脂质缔合。与脂质缔合的核酸可以包封在脂质体的水性内部中、散布在脂质体的脂质双层内、经由与脂质体和寡核苷酸二者缔合的连接分子附接于脂质体、包埋在脂质体中、与脂质体复合、分散在含有脂质的溶液中、与脂质混合、与脂质结合、作为悬浮液包含在脂质中、包含在胶束中或与胶束复合，或以其他方式与脂质缔合。脂质、脂质/DNA或脂质/表达载体相关的组合物不限于在溶液中的任何特定结构。例如，它们可以以双层结构、胶束或“折叠”结构存在。它们也可以简单地散布在溶液中，可能形成大小或形状不均匀的聚集体。脂质是脂肪物质，可以是天然存在的或合成的脂质。例如，脂质包括天然存在于细胞质中的脂肪液滴，以及含有长链脂族烃及其衍生物的一类化合物，如脂肪酸、醇、胺、氨基醇和醛。
适合使用的脂质可以从商业来源获得。例如，二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(“DMPC”)可以从Sigma,St.Louis,Mo.获得；双十六烷基磷酸酯(“DCP”)可以从K&K Laboratories(Plainview,N.Y.)获得；胆固醇(“Chol”)可以从Calbiochem-Behring获得；二肉豆蔻酰磷脂酰甘油(“DMPG”)和其他脂质可以从Avanti Polar Lipids,Inc.(Birmingham,Ala.)获得。脂质在氯仿或氯仿/甲醇中的储备溶液可以在约-20℃下储存。将氯仿用作唯一的溶剂，因为它比甲醇更容易蒸发。“脂质体”是通用术语，其包括通过生成封闭的脂质双层或聚集体而形成的多种单层和多层脂质媒介物。脂质体的特征可以在于具有囊泡结构，该囊泡结构具有磷脂双层膜和内部水性介质。多层脂质体具有由水性介质隔开的多个脂质层。当磷脂悬浮在过量的水溶液中时，多层脂质体自发形成。脂质组分在形成闭合结构之前经历自重排，并在脂质双层之间捕获水和溶解的溶质(Ghosh等人,Glycobiology 5:505-10(1991))。然而，还包括在溶液中具有与正常囊泡结构不同的结构的组合物。例如，脂质可呈现胶束结构或仅作为脂质分子的不均匀聚集体存在。还考虑了脂质转染胺-核酸复合物。
基于非病毒的递送***
在一些情况下，还可以使用基于非病毒的递送***如“睡美人(SB)转座子***”将本文所述的CAR和/或TCR引入T细胞中，该睡美人转座子***是指一种合成的DNA转座子***，用于将DNA序列引入脊椎动物的染色体中。例如，该***描述于美国专利号6,489,458中。睡美人转座子***由睡美人(SB)转座酶和SB转座子组成。DNA转座子以简单的剪切-粘贴方式从一个DNA位点易位到另一DNA位点。转座是一个精确的过程，其中限定的DNA片段从一个DNA分子切下并移动到相同或不同DNA分子或基因组中的另一位点。与其他Tc1/水手型转座酶一样，SB转座酶将转座子***接受体DNA序列中的TA二核苷酸碱基对中。***位点可以在相同DNA分子中的其他地方，或在另一DNA分子(或染色体)中。在哺乳动物基因组(包括人基因组)中大约有2亿个TA位点。TA***位点在转座子整合过程中重复。这种TA序列的重复是转座的标志，并用于确定一些实验中的机理。转座酶可以在转座子内编码，或者转座酶可以由另一来源提供，在该情况下，转座子成为非自主元件。非自主转座子作为遗传工具最有用，因为在***后它们不能独立地继续切除和重新***。SB转座子被设想用作非病毒载体，用于将基因引入脊椎动物的基因组中和基因疗法。简言之，睡美人(SB)***(Hackett等人,Mol Ther 18:674-83,(2010))适用于对T细胞进行遗传修饰(Cooper等人,Blood 105:1622-31,(2005))。这涉及两个步骤：(i)表达SB转座子(即，嵌合抗原受体(CAR)，用于重定向T细胞特异性(Jin等人,Gene Ther 18:849-56,(2011)；Kebriaei等人,Hum Gene Ther23:444-50,(2012))和SB转座酶的DNA质粒的电转移，以及(ii)稳定表达整合体的T细胞在衍生自K562细胞系的设计者人工抗原呈递细胞(AaPC)(也是称为AaPC(激活和扩增细胞))上的增殖和扩增。在一个实施方案中，SB转座子***包括编码tdIL-15、IL-21和/或嵌合抗原受体的编码序列。这样的***于例如Singh等人,Cancer Res(8):68(2008).2008年4月15日和Maiti等人,J Immunother.36(2):112–123(2013)中有述，其通过引用整体并入本文。
在一些实施方案中，本文所述的经修饰的效应细胞(例如，CAR效应细胞或TCR效应细胞)和mbIL-15在转座子DNA质粒载体中编码，并且SB转座酶在单独的载体中编码。在实施方案中，CD19CAR在转座子DNA质粒载体中编码，mbIL-15在第二转座子DNA质粒载体中编码，并且SB转座酶在第三DNA质粒载体中编码。在一些实施方案中，mbIL-15用截短的表皮生长因子受体标签编码。
无论用于将外源核酸引入宿主细胞或以其他方式将细胞暴露于本发明的抑制剂的方法是哪一种，为了确认宿主细胞中存在重组DNA序列，可以进行多种测定。这样的测定包括，例如，本领域技术人员公知的分子测定，如DNA印迹和RNA印迹、RT-PCR和PCR；“生物化学”测定，如检测是否存在特定肽，例如通过免疫学手段(ELISA和蛋白质印迹)或通过本文所述的用于鉴别落入本发明范围内的药剂的测定。
在实施方案中，使用SB11转座子***、SB100X转座子***、SB110转座子***，piggyBac转座子***(参见例如Wilson等人,“PiggyBac Transposon-mediated GeneTransfer in Human Cells,”Molecular Therapy 15:139-145(2007)，其通过引用整体并入本文)和/或piggyBac转座子***(参见例如Mitra等人,“Functional characterizationof piggyBac from the bat Myotis lucifugus unveils an active mammalian DNAtransposon,”Proc.Natl.Acad.Sci USA 110:234-239(2013))将本文所述的经修饰的效应细胞和其他遗传元件递送至细胞。另外的转座酶和转座子***在美国专利号7,148,203；8,227,432；美国专利公开号2011/0117072；Mates等人,Nat Genet,41(6):753-61(2009).doi:10.1038/ng.343.2009年5月3日网上出版,Gene Ther.,18(9):849-56(2011).doi:10.1038/gt.2011.40.2011年3月31日网上出版和Ivics等人,Cell.91(4):501-10,(1997)中提供，其各自通过引用整体并入本文。
T细胞来源
在某些方面，本文所述的实施方案包括制备和/或扩增抗原特异性重定向免疫效应细胞(例如，T细胞、NK细胞或NK T细胞)的方法，包括用含有编码CAR的DNA(或RNA)构建体的表达载体转染细胞，然后任选地用饲养细胞、重组抗原或针对受体的抗体刺激细胞，以使细胞增殖。在某些方面，经工程化以表达CAR或TCR的细胞(或细胞群体)是干细胞、iPS细胞、免疫效应细胞或这些细胞的前体。
免疫效应细胞的来源可包括同种异型来源和自体来源。在一些情况下，免疫效应细胞可以从干细胞或诱导多能干细胞(iPSC)分化。因此，根据实施方案的用于工程化的细胞可以从脐带血、外周血、人胚胎干细胞、Pan-T细胞或iPSC中分离。例如，可以将同种异型T细胞修饰成包括嵌合抗原受体(并且任选地缺乏功能性TCR)。在一些方面，免疫效应细胞是原代人T细胞，如衍生自人外周血单核细胞(PBMC)的T细胞。PBMC可以从外周血中收集，或者在用G-CSF(粒细胞集落刺激因子)刺激后从骨髓收集，或从脐带血收集。在一些方面，可以在基因转移之前从PBMC中纯化T细胞。在转染或转导后(例如，用CAR表达构建体)，可以立即输注细胞或可以冷冻保存细胞。在一些方面，在转染后，可以将细胞维持在细胞因子浴中，该细胞因子浴可以包括IL-2和/或IL-21。在某些方面，在转染后，细胞可以在基因转移到细胞后的约1、2、3、4、5天或更多天内作为本体群体离体增殖数天、数周或数月。在另一方面，在转染后，将转染子克隆，并将表现出存在单个整合的或附加体保持的表达盒或质粒以及嵌合抗原受体的表达的克隆离体扩增。选择用于扩增的克隆表现出特异性识别和裂解表达抗原的靶细胞的能力。可以通过用IL-2或结合共同γ链的其他细胞因子(例如IL-7、IL-12、IL-15、IL-21等)刺激来扩增重组T细胞。可以通过用人工抗原呈递细胞刺激来扩增重组T细胞。重组T细胞可以在人工抗原呈递细胞上扩增，或者用与T细胞表面上的CD3交联的抗体如OKT3扩增。可以使用基于磁珠的分离方法和/或荧光激活细胞分选技术进一步选择重组T细胞的亚组，并将其进一步与AaPC一起培养。在另一方面，可以冷冻保存经遗传修饰的细胞。
T细胞也可以从许多来源获得，包括外周血、骨髓、***组织、脐带血、胸腺组织、来自感染部位的组织、腹水、胸腔积液、脾组织和肿瘤(肿瘤浸润淋巴细胞)。在本发明的某些实施方案中，可以使用本领域可获得的任何数目的T细胞系。在本发明的某些实施方案中，可以使用本领域技术人员已知的任何技术如分离从采集自受试者的血液单位获得T细胞。在实施方案中，来自个体的循环血液的细胞通过单采血液成分术获得。单采产品通常含有淋巴细胞，包括T细胞、单核细胞、粒细胞、B细胞、其他有核白细胞、红细胞和血小板。在一个实施方案中，可以洗涤通过单采血液成分术收集的细胞以去除血浆部分并将细胞置于合适的缓冲液或培养基中，以供用于随后的处理步骤。在本发明的一个实施方案中，用磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤细胞。在替代的实施方案中，洗涤溶液缺少钙并且可能缺少镁或者可能缺少许多(即便不是全部)二价阳离子。在没有钙的情况下的初始激活步骤导致放大的激活。如本领域普通技术人员将容易理解的，洗涤步骤可以通过本领域技术人员已知的方法完成，如根据制造商的说明使用半自动“流通式”离心机(例如，Cobe 2991细胞处理器,the Baxter CytoMate，或Haemonetics Cell Saver 5)。洗涤后，可将细胞重悬于多种生物相容性缓冲液，如无Ca2+、无Mg2+的PBS、PlasmaLyte A或其他含有或不含缓冲剂的盐溶液中。或者，可以去除单采样品中的不需要的组分，并将细胞直接重悬于培养基中。
在另一实施方案中，通过裂解红细胞并耗尽单核细胞(例如，通过梯度离心或通过逆流离心淘洗)，从外周血淋巴细胞中分离T细胞。可以通过阳性或阴性选择技术进一步分离特定的T细胞亚群，如CD3+、CD28+、CD4+、CD8+、CD45RA+和CD45RO+ T细胞。例如，在一个实施方案中，通过与抗-CD3/抗-CD28(即，3x28)缀合的珠子(如 M-450CD3/CD28T)一起温育足够用于所需T细胞的阳性选择的时间段来分离T细胞。在一个实施方案中，该时间段是约30分钟。在进一步的实施方案中，该时间段的范围为30分钟至36小时或更长以及其间的所有整数值。在进一步的实施方案中，该时间段是至少1、2、3、4、5或6小时。在又一实施方案中，该时间段是10至24小时。在一个实施方案中，温育时间段是24小时。为了从患有白血病的患者中分离T细胞，使用更长的温育时间(如24小时)可以增加细胞产量。可以在T细胞与其他细胞类型相比较少的任何情况下，例如在从肿瘤组织或免疫受损的个体分离肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)的情况下使用更长的温育时间来分离T细胞。进一步地，使用更长的温育时间可以提高捕获CD8+ T细胞的效率。因此，通过简单地缩短或延长允许T细胞与CD3/CD28珠子结合的时间，和/或通过增加或减少珠子与T细胞(如本文进一步描述的)的比率，可以在培养开始时或在该过程中的其他时间点优先选择或排除某T细胞亚群。此外，通过增加或减少珠子或其他表面上的抗CD3和/或抗CD28抗体的比率，可以在培养起始时或在其他所需时间点优先选择或排除某T细胞亚群。技术人员将会认识到，在本发明的上下文中也可以使用多轮选择。在某些实施方案中，可能需要执行选择程序并在激活和扩增过程中使用“未选择的”细胞。也可使“未选择的”细胞经历进一步轮次的选择。
T细胞群体通过阴性选择的富集可以用针对阴性选择的细胞的特有表面标志物的抗体组合来完成。一种方法是经由负磁性免疫粘附或流式细胞术进行细胞分选和/或选择，该负磁性免疫粘附或流式细胞术使用针对存在于阴性选择的细胞上的细胞表面标志物的单克隆抗体混合物。例如，为了通过阴性选择富集CD4+细胞，单克隆抗体混合物通常包括针对CD14、CD20、CD11b、CD16、HLA-DR和CD8的抗体。在某些实施方案中，可能需要富集或阳性选择通常表达CD4+、CD25+、CD62Lhi、GITR+和FoxP3+的调节性T细胞。或者，在某些实施方案中，T调节细胞被抗CD25缀合的珠子或其他类似的选择方法耗尽。
为了通过阳性或阴性选择分离所需的细胞群体，可以改变细胞和表面(例如，颗粒，如珠子)的浓度。在某些实施方案中，可能需要显著降低珠子和细胞混合在一起的体积(即，增加细胞浓度)，以确保细胞和珠子的最大接触。例如，在一个实施方案中，使用20亿个细胞/ml的浓度。在一个实施方案中，使用10亿个细胞/ml的浓度。在进一步的实施方案中，使用大于1亿个细胞/ml。在进一步的实施方案中，使用1000万、1500万、2000万、2500万、3000万、35000万、4000万、4500万或5000万个细胞/ml的细胞浓度。在另一实施方案中，使用7500万、8000万、8500万、9000万、9500万或1亿个细胞/ml的细胞浓度。在进一步的实施方案中，可以使用1.25亿或1.5亿个细胞/ml的浓度。使用高浓度可导致细胞产量、细胞激活和细胞扩增增加。进一步地，使用高细胞浓度允许更有效地捕获可能较弱表达感兴趣的靶抗原的细胞(如CD28阴性T细胞)或者来自存在许多肿瘤细胞的样品(即，白血病血液、肿瘤组织等)的细胞。这样的细胞群体可能具有治疗价值并且将是需要获得的。例如，使用高浓度的细胞允许更有效地选择通常具有较弱CD28表达的CD8+ T细胞。
在相关的实施方案中，可能需要使用较低浓度的细胞。通过显著稀释T细胞和表面(例如，颗粒，如珠子)的混合物，使颗粒与细胞之间的相互作用最小。这选择表达大量待与颗粒结合的所需抗原的细胞。例如，CD4+ T细胞表达较高水平的CD28，并且在稀释浓度下比CD8+ T细胞更有效地捕获。在一个实施方案中，使用的细胞浓度是5x106/ml。在其他实施方案中，使用的浓度可以是约1x105/ml至1x106/ml以及其间的任何整数值。
在其他实施方案中，细胞可以在2-10℃或室温下以变化的速度在旋转器上温育不同的时间长度。
用于刺激的T细胞也可在洗涤步骤后冷冻。在去除血浆和血小板的洗涤步骤之后，可以将细胞悬浮在冷冻溶液中。虽然许多冷冻溶液和参数是本领域已知的并在这种情况下将会是有用的，但一种方法涉及使用含有20％DMSO和8％人血清白蛋白的PBS，或含有10％葡聚糖40和5％右旋糖、20％人血清白蛋白和7.5％DMSO的培养基，或31.25％Plasmalyte-A、31.25％右旋糖5％、0.45％NaCl、10％葡聚糖40和5％右旋糖、20％人血清白蛋白和7.5％DMSO，或含有例如Hespan和PlasmaLyte A的其他合适的细胞冷冻培养基，然后将细胞以每分钟1°的速率冷冻至-80℃并储存在液氮储罐的气相中。可以使用其他受控冷冻方法以及在-20℃下或液氮中的不受控的速冻。
在某些实施方案中，如本文所述将冷冻保存的细胞解冻并洗涤，并在使用本发明的方法激活之前允许其在室温下静置1小时。
在本发明的上下文中还考虑了在可能需要如本文所述的经扩增细胞之前的时间段从受试者收集血液样品或单采产品。因此，可以在任何必要的时间点收集待扩增细胞的来源，并且分离和冷冻所需的细胞如T细胞，以供随后在T细胞疗法中用于将受益于T细胞疗法的任何数目的疾病或病况，例如本文所述的疾病或病况。在一个实施方案中，血液样品或单采物取自大体健康的受试者。在某些实施方案中，血液样品或单采物取自大体健康的受试者，该受试者有发展出疾病的风险但尚未发展出该疾病，并且感兴趣的细胞被分离并冷冻以供随后使用。在某些实施方案中，T细胞可以扩增、冷冻并在随后使用。在某些实施方案中，在任何治疗之前，在诊断如本文所述的特定疾病之后的较短时间内从患者收集样品。在进一步的实施方案中，在任何数目的相关治疗方式前，从受试者的血液样品或单采物中分离细胞，该治疗方式包括但不限于采用诸如以下的药剂的治疗：那他珠单抗、依法珠单抗、抗病毒剂、化疗、放射、诸如环孢菌素、硫唑嘌呤、氨甲蝶呤、霉酚酸酯和FK506等免疫抑制剂、抗体或其他免疫清除剂，如CAMPATH、抗CD3抗体、环磷酰胺、氟达拉滨、环孢菌素、FK506、雷帕霉素、霉酚酸、类固醇、FR901228和辐射。这些药物抑制钙依赖性的磷酸酶——钙依赖磷酸酶(环孢菌素和FK506)或抑制对生长因子诱导的信号传导重要的p70S6激酶(雷帕霉素)(Liu等人,Cell 66:807-815,(1991)；Henderson等人,Immun 73:316-321,(1991)；Bierer等人,Curr.Opin.Immun 5:763-773,(1993))。在进一步的实施方案中，为患者分离细胞并将其冷冻，以供随后与骨髓或干细胞移植、使用化学治疗剂如氟达拉滨的T细胞消融疗法、外照射放射疗法(XRT)、环磷酰胺或抗体如OKT3或CAMPATH结合使用(例如，在其之前、同时或之后)。在另一实施方案中，细胞在治疗之前分离并且可被冷冻以供随后用于在B细胞消融疗法(如与CD20反应的药剂，例如利妥昔单抗)之后的治疗。
在本发明的进一步的实施方案中，在治疗后直接从患者获得T细胞。在这方面，已经观察到，在某些癌症治疗特别是用损害免疫***的药物治疗之后，在该治疗后不久且在患者通常将从治疗中恢复的时期中，所获得的T细胞的质量可能是最佳的或改善的，因为其有离体扩增的能力。同样地，在使用本文所述的方法进行离体操作后，这些细胞可以处于植入和体内扩增增强的优选状。因此，在本发明的上下文中考虑在该恢复期中收集血细胞，包括T细胞、树突细胞或造血谱系的其他细胞。进一步地，在某些实施方案中，活动化(例如，用GM-CSF活动化)和调节方案可用于在受试者体内产生这样的条件，其中特别细胞类型的再增殖、再循环、再生和/或扩增是有利的，尤其是在疗法后限定的时间窗口内。示例性细胞类型包括T细胞、B细胞、树突细胞和免疫***的其他细胞。
T细胞的激活和扩增
无论是在将T细胞遗传修饰成表达所需CAR之前还是之后，T细胞通常可以使用如美国专利号6,352,694；6,534,055；6,905,680；6,692,964；5,858,358；6,887,466；6,905,681；7,144,575；7,067,318；7,172,869；7,232,566；7,175,843；5,883,223；6,905,874；6,797,514；6,867,041；以及美国专利申请公开号20060121005中所述的方法进行激活和扩增。
通常，本发明的T细胞通过与已附接有药剂(刺激CD3/TCR复合物相关信号)和配体(刺激T细胞表面上的共刺激分子)的表面接触而扩增。特别地，可以如本文所述地刺激T细胞群体，如通过与固定在表面上的抗CD3抗体或其抗原结合片段或抗CD2抗体接触，或通过与结合钙离子载体的蛋白激酶C激活剂接触(例如，苔藓抑制素)。为了共刺激T细胞表面上的辅助分子，使用结合辅助分子的配体。例如，可在适于刺激T细胞增殖的条件下，使T细胞群体与抗CD3抗体和抗CD28抗体接触。为刺激CD4+ T细胞或CD8+ T细胞的增殖，采用抗CD3抗体和抗CD28抗体。抗CD28抗体的实例包括9.3，B-T3，XR-CD28(Diaclone,Besancon,France)，其可以与本领域公知的其他方法一样使用(Berg等人,Transplant Proc.30(8):3975-3977,(1998)；Haanen等人,J.Exp.Med.190(9):13191328,(1999)；Garland等人,J.Immunol Meth.227(1-2):53-63,(1999))。
在某些实施方案中，T细胞的主要刺激信号和共刺激信号可以由不同的方案提供。例如，提供每个信号的药剂可以在溶液中或偶联到表面。当偶联到表面时，药剂可以偶联到相同表面(即，“顺式”排列)或不同表面(即“反式”排列)。或者，可以将一种药剂偶联到表面而另一药剂在溶液中。在一个实施方案中，提供共刺激信号的药剂结合到细胞表面，并且提供主要激活信号的药剂在溶液中或偶联到表面。在某些实施方案中，两种药剂可以都在溶液中。在另一实施方案中，药剂可以是可溶形式，并然后交联至表面，如表达Fc受体的细胞或将会与该药剂结合的抗体或其他结合剂。在这方面，参见例如美国专利申请公开号20040101519和20060034810中的预期用于激活和扩增本发明中的T细胞的人工抗原呈递细胞(aAPC)。
在一个实施方案中，将两种药剂固定在珠子上(固定在相同的珠子上，即“顺式”，或者固定在不同的珠子上，即“反式”)。例如，提供主要激活信号的药剂是抗CD3抗体或其抗原结合片段，而提供共刺激信号的药剂是抗CD28抗体或其抗原结合片段；并且两种药剂以相等的分子量共同固定到相同的珠子。在一个实施方案中，用于CD4+ T细胞扩增和T细胞生长的与珠子结合的每种抗体使用1:1的比率。在本发明的某些方面，使用这样的与珠子结合的抗CD3抗体:抗CD28抗体比率，使得与使用1:1的比率观察到的扩增相比，观察到T细胞扩增增加。在一个特定的实施方案中，与使用1:1的比率观察到的扩增相比，观察到约1倍至约3倍的增加。在一个实施方案中，与珠子结合的CD3抗体:CD28抗体的比率范围为100:1至1:100以及其间的所有整数值。在本发明的一个方面，与抗CD3抗体相比，更多的抗CD28抗体与颗粒结合，即CD3:CD28比率小于1。在本发明的某些实施方案中，与珠子结合的抗CD28抗体与抗CD3抗体的比率大于2:1。在一个特定的实施方案中，与珠子结合的抗体使用1:100的CD3:CD28比率。在另一实施方案中，与珠子结合的抗体使用1:75的CD3:CD28比率。在进一步的实施方案中，与珠子结合的抗体使用1:50的CD3:CD28比率。在另一的实施方案中，与珠子结合的抗体使用1:30的CD3:CD28比率。在实施方案中，与珠子结合的抗体使用1:10的CD3:CD28比率。在另一实施方案中，与珠子结合的抗体使用1:3的CD3:CD28比率。在又一实施方案中，与珠子结合的抗体使用3:1的CD3:CD28比率。
从1:500至500:1以及其间的任何整数值的颗粒与细胞的比率可用于刺激T细胞或其他靶细胞。如本领域普通技术人员可以容易理解的，颗粒与细胞的比率可以取决于相对于靶细胞的颗粒大小。例如，大小较小的珠子只能结合少量细胞，而较大的珠子可以结合许多细胞。在某些实施方案中，细胞与颗粒的比率范围为1:100至100:1以及其间的任何整数值，并且在进一步的实施方案中，该比率包括1:9至9:1以及其间的任何整数值，也可用于刺激T细胞。如上所述，抗CD3和抗CD28偶联的颗粒与T细胞的导致T细胞刺激的比率可以变化，但是某些值包括1:100、1:50、1:40、1:30、1:20、1:10、1:9、1:8、1:7、1:6、1:5、1:4、1:3、1:2、1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1和15:1，其中一个比率是T细胞/颗粒至少1:1。在一个实施方案中，使用1:1或更小的颗粒与细胞比率。在一个特定的实施方案中，颗粒:细胞比率为1:5。在进一步的实施方案中，颗粒与细胞的比率可以根据刺激的天数而变化。例如，在一个实施方案中，颗粒与细胞的比率在第一天为1:1至10:1，并且之后每天或每隔一天将额外的颗粒添加到细胞，持续至多10天，最终比率为1:1至1:10(基于添加当天的细胞计数)。在一个特定实施方案中，颗粒与细胞的比率在刺激的第一天为1:1，并且在刺激的第三天和第五天被调整为1:5。在另一实施方案中，每天或每隔一天添加颗粒，直至第一天的最终比率为1:1，并且在刺激的第三天和第五天的最终比率为1:5。在另一实施方案中，颗粒与细胞的比率在刺激的第一天为2:1，并且在刺激的第三天和第五天被调整为1:10。在另一实施方案中，每天或每隔一天添加颗粒，直至第一天的最终比率为1:1，并且在刺激的第三天和第五天的最终比率为1:10。本领域技术人员将理解，多种其他比率可适用于本发明。特别地，比率将根据粒度和细胞大小和类型而变化。
在本发明的进一步的实施方案中，将细胞如T细胞与药剂包覆的珠子组合，然后将珠子和细胞分离，并随后培养细胞。在替代的实施方案中，在培养之前，未分离药剂包覆的珠子和细胞，而是将其一起培养。在进一步的实施方案中，首先通过施加力(如磁力)浓缩珠子和细胞，导致细胞表面标志物的连接增加，从而诱导细胞刺激。
举例来说，可以通过允许抗CD3和抗CD28所附接至的顺磁珠(3x28个珠子)与T细胞接触来连接细胞表面蛋白。在一个实施方案中，将细胞(例如，104到109个T细胞)和珠子(例如，比率为1:1的 M-450CD3/CD28T顺磁珠，或来自Miltenyi Biotec的 MicroBeads)在缓冲液例如PBS(无二价阳离子，如钙和镁)中混合。同样，本领域普通技术人员可以容易地理解可使用任何细胞浓度。例如，靶细胞在样品中可能非常罕见并且仅构成0.01％的样品，或者整个样品(即100％)可包含感兴趣的靶细胞。因此，任何细胞数都在本发明的情况的范围内。在某些实施方案中，可能需要显著降低颗粒和细胞混合在一起的体积(即，增加细胞浓度)，以确保细胞和颗粒的最大接触。例如，在一个实施方案中，使用约20亿个细胞/ml的浓度。在另一实施方案中，使用大于1亿个细胞/ml。在进一步的实施方案中，使用1000万、1500万、2000万、2500万、3000万、35000万、4000万、4500万或5000万个细胞/ml的细胞浓度。在又一实施方案中，使用7500万、8000万、8500万、9000万、9500万或1亿个细胞/ml的细胞浓度。在进一步的实施方案中，可以使用1.25亿或1.5亿个细胞/ml的浓度。使用高浓度可导致细胞产量、细胞激活和细胞扩增增加。此外，使用高细胞浓度允许更有效地捕获可能较弱低表达感兴趣的靶抗原的细胞，如CD28阴性T细胞。这样的细胞群体可能具有治疗价值并且在某些实施方案中需要获得。例如，使用高浓度的细胞允许更有效地选择通常具有较弱CD28表达的CD8+ T细胞。
在本发明的一个实施方案中，可以将混合物培养数小时(约3小时)至约14天或其间的任何整数小时的值。在另一实施方案中，可以将混合物培养21天。在本发明的一个实施方案中，将珠子和T细胞一起培养约8天。在另一实施方案中，将珠子和T细胞一起培养2-3天。也可能需要几个刺激周期，使得T细胞的培养时间可以是60天或更长。适合T细胞培养的条件包括可含有增殖和生存所必需的因子的适当培养基(例如，最小必需培养基或RPMI培养基1640或X-vivo 15，(Lonza))，该因子包括血清(例如，胎牛血清或人血清)、白介素-2(IL-2)、胰岛素、IFN-γ、IL-4、IL-7、GM-CSF、IL-10、IL-12、IL-15、TGFβ和TNF-α或本领域技术人员已知的用于细胞生长的任何其他添加剂。用于细胞生长的其他添加剂包括但不限于表面活性剂、人血浆蛋白粉和还原剂如N-乙酰基-半胱氨酸和2-巯基乙醇。培养基可包括添加有氨基酸、丙酮酸钠和维生素、无血清或补充适量血清(或血浆)或一组限定的激素和/或足以使T细胞生长和扩增的量的细胞因子的RPMI 1640、AIM-V、DMEM、MEM、α-MEM、F-12、X-Vivo 15和X-Vivo 20、Optimizer。抗生素，例如青霉素和链霉素，仅包含在实验培养物中，而不包含在待注入受试者的细胞培养物中。将靶细胞维持在支持生长所需的条件下，例如适当的温度(例如37℃)和气氛(例如空气加5％CO2)。
已暴露于不同刺激时间的T细胞可展现不同的特征。例如，典型的血液或单采的外周血单核细胞产品具有大于细胞毒性T细胞群体或抑制性T细胞群体(TC，CD8+)的辅助T细胞群体(TH，CD4+)。通过刺激CD3和CD28受体体外扩增T细胞产生T细胞群体，该T细胞群体在约第8-9天之前主要由TH细胞组成，而在约第8-9天之后，该T细胞群体包含越来越多的TC细胞群体。因此，根据治疗目的，向受试者输注主要由TH细胞构成的T细胞群体可能是有利的。类似地，如果已经分离了TC细胞的抗原特异性亚组，则将该亚组扩展到更大程度可能是有益的。
进一步地，除了CD4和CD8标志物之外，其他表型标志物显著变化，但在很大程度上，在细胞扩增过程中该变化可再现。因此，这样的再现性使得能够针对特定目的定制激活的T细胞产物。
在一些情况下，将实施方案的免疫效应细胞(例如，T细胞)与激活和增殖细胞(AaPC)共培养，以帮助细胞扩增。AaPC也可称为人工抗原呈递细胞(aAPC)。例如，抗原呈递细胞(APC)可用于制备实施方案的治疗组合物和细胞疗法产品。在一个方面，AaPC可以是转基因K562细胞。关于抗原呈递***的制备和使用的一般指导，参见例如美国专利号6,225,042、6,355,479、6,362,001和6,790,662；美国专利申请公开号2009/0017000和2009/0004142；以及国际公开号WO2007/103009，其各自通过引用并入本文。在实施方案的又一方面，培养转基因CAR细胞包括在刺激表达CAR的免疫效应细胞扩增的树突细胞或激活和增殖细胞(AaPC)的存在下培养转基因CAR细胞。在更进一步的方面，AaPC包含在AaPC表面上表达的CAR结合抗体或其片段。在一些情况下，AaPC可以包括激活或共刺激T细胞的其他分子。在一些情况下，其他分子可以包括膜结合的Cγ细胞因子。在更进一步的方面，AaPC被灭活或辐射，或已经过测试并证实不含感染性物质。在更进一步的方面，在AaPC的存在下培养转基因CAR细胞包括在包含可溶性细胞因子如IL-15、IL-21和/或IL-2的培养基中培养转基因CAR细胞。细胞可以以约10:1至约1:10；约3:1至约1:5；约1:1至约1:3(免疫效应细胞比AaPC)；或其中可导出的任何范围的比率培养。例如，T细胞和AaPC的共培养物可以是约1:1、约1:2或约1:3的比率。
在一个方面，AaPC可以表达CD137L。在其他方面，AaPC可以进一步表达CD19、CD64、CD86或mbIL-15。在某些方面，AaPC可以表达至少一种抗CD3抗体克隆，例如OKT3和/或UCHT1。在一个方面，AaPC可以被灭活(例如，辐射)。在一个方面，AaPC可能已经过测试并证实不含感染性物质。用于产生这样的AaPC的方法是本领域已知的。在一个方面，将CAR修饰的T细胞群体与AaPC一起培养可以包括以约10:1至约1:10；约3:1至约1:5；约1:1至约1:3(T细胞比AaPC)；或其中可导出的任何范围的比率培养细胞。例如，T细胞和AaPC的共培养物可以是约1:1、约1:2或约1:3的比率。在一个方面，培养步骤可以进一步包括用氨基二膦酸盐(例如唑来膦酸)培养。
在进一步的方面，培养和/或刺激CAR-T细胞群体不超过7、14、21、28、35、42、49、56、63或70天。在一些实施方案中，培养和/或刺激CAR-T细胞群体至少0、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30天或更多天。在一些实施方案中，培养和/或刺激CAR-T细胞群体至少5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60天或更多天。在一些实施方案中，培养和/或刺激CAR-T细胞群体至少7、14、21、28、35、42、49、56、63天或更多天。在其他实施方案中，刺激包括CAR-T细胞与AaPC的共培养以促进CAR阳性T细胞的生长。在另一方面，刺激转基因CAR细胞群体不超过：1X刺激、2X刺激、3X刺激、4X刺激、5X刺激、5X刺激、6X刺激、7X刺激、8X刺激、9X刺激或10X刺激。在一些情况下，转基因细胞不在AaPC的存在下离体培养。在一些具体情况下，实施方案的方法进一步包括在转染和/或培养步骤后富集细胞群体中的表达CAR的免疫效应细胞(例如，T细胞)。富集可以包括荧光激活细胞分选(FACS)和针对CAR表达细胞的分选。在进一步的方面，针对表达CAR的细胞的分选包括使用CAR结合抗体。富集还可以包括CD56+细胞的耗尽。在实施方案的又一方面，方法进一步包括冷冻保存转基因CAR细胞群体的样品。
在一些情况下，将AaPC与最佳长度的肽一起温育，该最佳长度允许肽直接结合MHC分子而无需额外处理。或者，细胞可以表达感兴趣的抗原(即，在不依赖MHC的抗原识别的情况下)。此外，在一些情况下，APC可以表达抗体，该抗体与特定CAR多肽结合或与一般的CAR多肽结合(例如，通用激活和增殖细胞(uAPC))。这样的方法公开于WO/2014/190273中，其通过引用并入本文。除了肽-MHC分子或感兴趣的抗原之外，AaPC***还可包含至少一种外源辅助分子。可以采用任何合适数目的辅助分子和辅助分子的组合。辅助分子可选自诸如共刺激分子和粘附分子等辅助分子。示例性的共刺激分子包括CD70和B7.1(B7.1以前称为B7，并且也称为CD80)，除其他分子外，它们还与T细胞表面上的CD28和/或CTLA-4分子结合，从而影响例如T细胞扩增、Th1分化、短期T细胞存活和细胞因子分泌，如白介素(IL)-2。粘附分子可包括碳水化合物结合糖蛋白如选择蛋白、跨膜结合糖蛋白如整联蛋白、钙依赖性蛋白质如钙黏着蛋白，以及单次跨膜免疫球蛋白(Ig)超家族蛋白如细胞间粘附分子(ICAM)，其促进例如细胞与细胞或细胞与基质的接触。示例性粘附分子包括LFA-3和ICAM，如ICAM-1。用于选择、克隆、制备和表达示例性辅助分子(包括共刺激分子和粘附分子)的技术、方法和试剂例示于例如美国专利号6,225,042、6,355,479和6,362,001中，其通过引用并入本文。
选择成为AaPC的细胞优选在细胞内抗原加工、细胞内肽运输和/或细胞内MHC I类或II类分子-肽负载方面存在缺陷，或者是变温的(即，相较于哺乳动物细胞系对温度挑战的敏感性更低)，或具有缺陷和变温性质二者。优选地，选择成为AaPC的细胞还缺乏表达被引入细胞中的外源性MHC I类或II类分子和辅助分子组分的至少一种内源性对应物(例如，如上所述的内源性MHC I类或II类分子和/或内源性辅助分子)的能力。此外，AaPC优选地保留细胞在其修饰以生成AaPC之前所具有的缺陷和变温性质。示例性AaPC由与抗原加工(TAP)缺陷型细胞系如昆虫细胞系相关的转运蛋白构成或衍生。示例性的变温昆虫细胞系是果蝇细胞系，如Schneider 2细胞系(参见例如，Schneider 1972，美国专利号6,225,042、6,355,479和6,362,001中提供了用于Schneider 2细胞的制备、生长和培养的说明性方法)。
在一个实施方案中，还使AaPC经历冻融循环。在示例性的冻融循环中，可以通过使容纳AaPC的合适容器与适量的液氮、固体二氧化碳(即干冰)或类似的低温材料接触来冷冻AaPC，使得冷冻迅速发生。然后通过将AaPC从低温材料中取出并暴露于室温条件下，或者通过促进解冻过程(其中采用温水浴或温暖的手来缩短解冻时间)来解冻冷冻的APC。此外，可以将AaPC冷冻并在解冻之前储存一段延长的时间。也可以将冷冻的AaPC解冻并随后在进一步使用前冻干。优选地，可能对冻融程序产生不利影响的防腐剂，如二甲基亚砜(DMSO)、聚乙二醇(PEG)和其他防腐剂不存在于含有经历冻融循环的AaPC的培养基中，或例如通过将AaPC转移到基本上不含这样的防腐剂的培养基中而基本上去除。
在进一步的实施方案中，相对于AaPC的异种核酸和内源核酸可以通过交联而灭活，使得在灭活后基本上不发生细胞生长、复制或核酸表达。在一个实施方案中，AaPC在外源性MHC和辅助分子表达、这些分子在AaPC表面上呈递，以及所呈递的MHC分子负载选定的一种或多种肽之后的某一点处灭活。因此，这样的灭活且负载选定肽的AaPC虽然基本上不能增殖或复制，但保留了选定肽呈递功能。优选地，交联还产生基本上不含污染微生物(如细菌和病毒)的AaPC，而基本上不降低AaPC的抗原呈递细胞功能。因此，交联保持了重要的AaPC功能，同时有助于减轻对使用AaPC开发的细胞疗法产品的安全性的担忧。对于与交联和AaPC相关的方法，参见例如美国专利申请公开号20090017000，其通过引用并入本文。
在某些实施方案中，进一步提供了工程化抗原呈递细胞(APC)。例如，如上所述，这样的细胞可用于使免疫效应细胞离体增殖。在进一步的方面，工程化APC本身可以施用于患者，由此在体内刺激免疫效应细胞的扩增。实施方案的工程化APC本身可用作治疗剂。在其他实施方案中，工程化APC可以用作治疗剂，其可以刺激对靶抗原特异的内源性免疫效应细胞的激活和/或增加对靶抗原特异的过继转移免疫效应细胞的活性或持久性。
如本文所用，术语“工程化APC”是指包含至少第一转基因的细胞，其中第一转基因编码HLA。这样的工程化APC可以进一步包含用于表达抗原的第二转基因，使得抗原与HLA复合呈递在APC表面。在一些方面，工程化APC可以是呈递抗原的细胞类型(例如，树突细胞)。在进一步的方面，工程化APC可以由通常不呈递抗原的细胞类型如T细胞或T细胞祖细胞产生(称为“T-APC”)。因此，在一些方面，实施方案的工程化APC包含编码靶抗原的第一转基因和编码人白细胞抗原(HLA)的第二转基因，使得HLA与靶抗原的表位复合地在工程化APC的表面上表达。在某些具体方面，在工程化APC中表达的HLA是HLA-A2。
在一些方面，实施方案的工程化APC可以进一步包含编码共刺激分子的至少第三转基因。共刺激分子可以是共刺激细胞因子，其可以是膜结合的Cγ细胞因子。在某些方面，共刺激细胞因子是IL-15，如膜结合的IL-15。在一些进一步的方面，工程化APC可包含经编辑的(删除的)基因。例如，可以编辑抑制基因，如PD-1、LIM-3、CTLA-4或TCR以减少或消除该基因的表达。实施方案的工程化APC可以进一步包含编码任何感兴趣的靶抗原的转基因。例如，靶抗原可以是感染性疾病抗原或肿瘤相关抗原(TAA)。
在本发明的一个实施方案中，本文所述的T细胞在照护点场所处被修饰。在一些情况下，照护点场所位于受试者附近的医院或机构(例如，医疗机构)。在一些情况下，通过将嵌合受体工程化/引入T细胞来修饰T细胞，然后将其快速输注到受试者中。在一些情况下，经修饰的T细胞不经历增殖和激活步骤。在一些情况下，经修饰的T细胞不经历温育步骤。在其他情况下，通过将嵌合受体和细胞因子工程化/引入T细胞来修饰T细胞，然后将其快速输注到受试者中。在一种情况下，细胞因子可以是mbIL-15。
药物组合物和剂型
在一些实施方案中，本文公开了用于在受试者中施用的经修饰的效应细胞组合物。在一些情况下，经修饰的效应细胞组合物进一步包含类固醇和任选的细胞因子和/或其他治疗剂。在一些情况下，本文还包括编码嵌合抗原受体的载体，用于修饰效应细胞。
在一些情况下，使用一种或多种生理学上可接受的运载体以常规方式配制经修饰的效应细胞或编码嵌合抗原受体的载体的药物组合物，该运载体包括有助于将活性化合物加工成可药用的制剂的赋形剂和助剂。适当的配方取决于选定的施用途径。本文所述药物组合物的综述可见于例如Remington:The Science and Practice of Pharmacy,第十九版(Easton,Pa.:Mack Publishing Company,1995)；Hoover,John E.,Remington’sPharmaceutical Sciences,Mack Publishing Co.,Easton,Pennsylvania 1975；Liberman,H.A.和Lachman,L.,编著,Pharmaceutical Dosage Forms,Marcel Decker,NewYork,N.Y.,1980；以及Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems,第七版(Lippincott Williams&Wilkins1999)。
任选地以常规方式制备药物组合物，诸如，仅举例来说，通过常规的混合、溶解、制粒、制糖衣丸、研磨、乳化、包封、包埋或压缩方法。
在某些实施方案中，组合物还可包含一种或多种pH调节剂或缓冲剂，包括酸，如乙酸、硼酸、柠檬酸、乳酸、磷酸和盐酸；碱，如氢氧化钠、磷酸钠、硼酸钠、柠檬酸钠、乙酸钠、乳酸钠和三羟甲基氨基甲烷；以及缓冲剂，如柠檬酸盐/右旋糖、碳酸氢钠和氯化铵。所包含的这样的酸、碱和缓冲剂的量是将组合物的pH维持在可接受范围内所需的量。
在其他实施方案中，组合物还可包含一种或多种盐，其量是使组合物的重量摩尔渗透压浓度达到可接受范围所需的量。这样的盐包括具有钠、钾或铵阳离子和氯、柠檬酸根、抗坏血酸根、硼酸根、磷酸根、碳酸氢根、硫酸根、硫代硫酸根或亚硫酸氢根阴离子的盐；合适的盐包括氯化钠、氯化钾、硫代硫酸钠、亚硫酸氢钠和硫酸铵。
本文所述的药物组合物通过任何合适的施用途径施用，包括但不限于口服施用途径、肠胃外(例如，静脉内、皮下、肌内、脑内、脑室内、关节内、腹膜内或颅内)施用途径、鼻内施用途径、颊部施用途径、舌下施用途径或直肠施用途径。在一些情况下，配制药物组合物用于肠胃外(例如，静脉内、皮下、肌内、脑内、脑室内、关节内、腹膜内或颅内)施用。
将本文所述的药物组合物配制成任何合适的剂型，包括但不限于用于由待治疗个体口服摄取的水性口服分散液、液体、凝胶、糖浆、酏剂、浆液、悬浮液等、固体口服剂型、气溶胶、控制释放制剂、速溶制剂、泡腾制剂、冻干制剂、片剂、粉剂、丸剂、糖衣丸、胶囊、延迟释放制剂、延长释放制剂、脉冲释放制剂、多颗粒制剂，以及混合型速释和控释制剂。在一些实施方案中，将药物组合物配制成胶囊。在一些实施方案中，将药物组合物配制成溶液(例如，用于IV施用)。在一些情况下，将药物组合物配制成输注剂。在一些情况下，将药物组合物配制成注射剂。
本文所述的药物固体剂型任选地包括本文所述的化合物和一种或多种药学上可接受的添加剂，如相容的运载体、粘合剂、填充剂、悬浮剂、调味剂、甜味剂、崩解剂、分散剂、表面活性剂、润滑剂、着色剂、稀释剂、增溶剂、润湿剂、增塑剂、稳定剂、渗透增强剂、润湿剂、消泡剂、抗氧化剂、防腐剂或其一种或多种组合。
在其他方面，使用标准包覆程序，如Remington's Pharmaceutical Sciences,第20版(2000)中所述的标准包覆程序，在组合物周围提供膜包衣。在一些实施方案中，将组合物配制成颗粒(例如用于通过胶囊施用)并且对一些或所有颗粒进行包覆。在一些实施方案中，将组合物配制成颗粒(例如用于通过胶囊施用)并且将一些或所有颗粒微胶囊化。在一些实施方案中，将组合物配制成颗粒(例如用于通过胶囊施用)并且一些或所有颗粒未微胶囊化且未包覆。
在某些实施方案中，本文提供的组合物还可包含一种或多种防腐剂以抑制微生物活性。合适的防腐剂包括含汞物质，如merfen和硫柳汞；稳定的二氧化氯；以及季铵化合物如苯扎氯铵、十六烷基三甲基溴化铵和十六烷基氯化吡啶鎓。
“消泡剂”减少加工期间的起泡，该起泡可能导致水性分散体的凝结、成品膜中的气泡，或通常损害加工。示例性的消泡剂包括硅乳剂或倍半油酸山梨坦。
“抗氧化剂”包括，例如，丁化羟基甲苯(BHT)、抗坏血酸钠、抗坏血酸、偏亚硫酸氢钠和生育酚。在某些实施方案中，在需要时，抗氧化剂增强化学稳定性。
本文所述的制剂可受益于抗氧化剂、金属螯合剂、含硫醇的化合物和其他一般稳定剂。这样的稳定剂的实例包括但不限于：(a)约0.5％w/v至约2％w/v甘油，(b)约0.1％w/v至约1％w/v甲硫氨酸，(c)约0.1％w/v至约2％w/v单硫代甘油，(d)约1mM至约10mM EDTA，(e)约0.01％w/v至约2％w/v抗坏血酸，(f)0.003％w/v至约0.02％w/v聚山梨醇酯80，(g)0.001％w/v至约0.05％w/v聚山梨醇酯20，(h)精氨酸，(i)肝素，(j)硫酸葡聚糖，(k)环糊精，(l)多硫酸戊聚糖和其他类肝素，(m)二价阳离子如镁和锌；或(n)其组合。
“粘合剂”赋予粘合性质并包括例如海藻酸及其盐；纤维素衍生物如羧甲基纤维素、甲基纤维素(例如)、羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素(例如)、乙基纤维素(例如)和微晶纤维素(例如)；微晶右旋糖；直链淀粉；硅酸镁铝；多糖酸；膨润土；明胶；聚乙烯吡咯烷酮/乙酸乙烯酯共聚物；聚乙烯聚吡咯烷酮；聚维酮；淀粉；预胶化淀粉；黄蓍胶、糊精、糖如蔗糖(例如)、葡萄糖、右旋糖、糖蜜、甘露醇、山梨糖醇、木糖醇(例如)和乳糖；天然或合成树胶，如***胶、黄蓍胶、茄替胶、车前籽胶、聚乙烯吡咯烷酮(例如 CL、 CL、 XL-10)、落叶松***半乳聚糖、聚乙二醇、蜡、海藻酸钠等。
“运载体”或“运载体材料”包括制药学中任何常用的赋形剂，并且应基于与本文公开的化合物(如依鲁替尼和抗癌剂的化合物)的相容性和所需剂型的释放谱性质来选择。示例性运载体材料包括例如粘合剂、悬浮剂、崩解剂、填充剂、表面活性剂、增溶剂、稳定剂、润滑剂、润湿剂、稀释剂等。“药学上相容的运载体材料”可包括但不限于***胶、明胶、胶体二氧化硅、甘油磷酸钙、乳酸钙、麦芽糖糊精、甘油、硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、胆固醇、胆固醇酯、酪蛋白酸钠、大豆卵磷脂、牛磺胆酸、磷脂酰胆碱、氯化钠、磷酸三钙、磷酸氢二钾、纤维素和纤维素缀合物、糖硬脂酰乳酸钠、角叉菜胶、单甘油酯、甘油二酯、预胶化淀粉等。参见例如，Remington:The Science and Practice of Pharmacy,第十九版(Easton,Pa.:Mack Publishing Company,1995)；Hoover,John E.,Remington’s PharmaceuticalSciences,Mack Publishing Co.,Easton,Pennsylvania 1975；Liberman,H.A.和Lachman,L.,编著,Pharmaceutical Dosage Forms,Marcel Decker,New York,N.Y.,1980；以及Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems,第七版(LippincottWilliams&Wilkins1999)。
“分散剂”和/或“粘度调节剂”包括通过液体介质或造粒方法或混合方法控制药物的扩散和均匀性的材料。在一些实施方案中，这些药剂还有助于包覆或侵蚀基质的有效性。示例性扩散促进剂/分散剂包括例如亲水性聚合物、电解质、60或80、PEG、聚乙烯吡咯烷酮(PVP；商品名为)和基于碳水化合物的分散剂，如羟丙基纤维素(例如，HPC、HPC-SL和HPC-L)、羟丙基甲基纤维素(例如，HPMC K100、HPMC K4M、HPMC K15M和HPMC K100M)、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、醋酸羟丙基甲基纤维素硬脂酸酯(HPMCAS)、非结晶纤维素、硅酸镁铝、三乙醇胺、聚乙烯醇(PVA)、乙烯基吡咯烷酮/乙酸乙烯酯共聚物(S630)、4-(1,1,3,3-四甲基丁基)-苯酚聚合物与环氧乙烷和甲醛(也称为泰洛沙泊)、泊洛沙姆(例如，和它们是环氧乙烷和环氧丙烷的嵌段共聚物)；以及泊洛沙胺(例如，Tetronic也称为Poloxamine它是由将环氧丙烷和环氧乙烷依次添加至乙二胺而得到的四官能嵌段共聚物(BASF Corporation,Parsippany,N.J.))、聚乙烯吡咯烷酮K12、聚乙烯吡咯烷酮K17、聚乙烯吡咯烷酮K25或聚乙烯吡咯烷酮K30、聚乙烯吡咯烷酮/乙酸乙烯酯共聚物(S-630)、聚乙二醇例如可具有约300至约6000，或约3350至约4000，或约7000至约5400的分子量的聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、聚山梨醇酯-80、海藻酸钠、树胶如黄蓍树胶和***树胶、瓜尔胶、黄原胶(包括黄原树胶)、糖、纤维素制品如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、聚山梨醇酯-80、海藻酸钠、聚乙氧基脱水山梨糖醇单月桂酸酯、聚乙氧基脱水山梨糖醇单月桂酸酯、聚维酮、卡波姆、聚乙烯醇(PVA)、海藻酸盐、壳聚糖及其组合。增塑剂如纤维素或三乙基纤维素也可用作分散剂。特别适用于脂质体分散体和自乳化分散体的分散剂是二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、来自蛋的天然磷脂酰胆碱、来自蛋的天然磷脂酰甘油、胆固醇和异丙基豆蔻酸酯。
一种或多种侵蚀促进剂与一种或多种扩散促进剂的组合也可用于本发明的组合物。
术语“稀释剂”是指用于在递送前稀释感兴趣的化合物的化学化合物。稀释剂也可用于稳定化合物，因为其可以提供更稳定的环境。溶解在缓冲溶液(其也可提供pH控制或维持)中的盐用作本领域的稀释剂，包括但不限于磷酸盐缓冲盐水溶液。在某些实施方案中，稀释剂增加组合物的体积以促进压缩，或为均匀混合物产生足够的体积以供胶囊填充。这样的化合物包括例如乳糖、淀粉、甘露醇、山梨糖醇、右旋糖、微晶纤维素如磷酸氢钙、二水合磷酸二钙；磷酸三钙、磷酸钙；无水乳糖、喷雾干燥的乳糖；预胶化淀粉、可压缩糖如Di-(Amstar)；甘露醇、羟丙基甲基纤维素、醋酸羟丙基甲基纤维素硬脂酸酯、基于蔗糖的稀释剂、糖粉；一代硫酸钙一水合物、硫酸钙二水合物；乳酸钙三水合物、葡萄糖结合剂；谷物水解固形物、直链淀粉；粉状纤维素、碳酸钙；甘氨酸、高岭土；甘露醇、氯化钠；肌醇、膨润土等。
“填充剂”包括化合物如乳糖、碳酸钙、磷酸钙、磷酸氢钙、硫酸钙、微晶纤维素、纤维素粉末、右旋糖、葡萄糖结合剂、葡聚糖、淀粉、预胶化淀粉、蔗糖、木糖醇、乳糖醇、甘露醇、山梨糖醇、氯化钠、聚乙二醇等。
“润滑剂”和“助流剂”是防止、减少或抑制材料粘附或摩擦的化合物。示例性润滑剂包括例如硬脂酸、氢氧化钙、滑石、硬脂酰富马酸钠、烃如矿物油或氢化植物油(如氢化大豆油)、高级脂肪酸及其碱金属和碱土金属盐如铝盐、钙盐、镁盐、锌盐、硬脂酸、硬脂酸钠、甘油、滑石、蜡、硼酸、苯甲酸钠、醋酸钠、氯化钠、亮氨酸、聚乙二醇(例如PEG-4000)或甲氧基聚乙二醇如CarbowaxTM、油酸钠、苯甲酸钠、山嵛酸甘油酯、聚乙二醇、十二烷基硫酸镁或十二烷基硫酸钠、胶体二氧化硅如SyloidTM、Cab-O-淀粉如玉米淀粉、硅油、表面活性剂等。
“增塑剂”是用于软化微胶囊化材料或膜包衣以使其不易碎的化合物。合适的增塑剂包括例如聚乙二醇如PEG 300、PEG 400、PEG 600、PEG 1450、PEG 3350和PEG 800、硬脂酸、丙二醇、油酸、三乙基纤维素和三醋精。在一些实施方案中，增塑剂还可以用作分散剂或润湿剂。
“增溶剂”包括化合物如三醋精、柠檬酸三乙酯、油酸乙酯、辛酸乙酯、十二烷基硫酸钠、多库酯钠、维生素E TPGS、二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮、N-羟乙基吡咯烷酮、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素、羟丙基环糊精、乙醇、正丁醇、异丙醇、胆固醇、胆汁盐、聚乙二醇200-600、糖原质、二甘醇单***(transcutol)、丙二醇和二甲基异山梨醇等。
“稳定剂”包括诸如任何抗氧化剂、缓冲剂、酸、防腐剂等化合物。
“悬浮剂”包括化合物如聚乙烯吡咯烷酮的化合物，例如聚乙烯吡咯烷酮K12、聚乙烯吡咯烷酮K17、聚乙烯吡咯烷酮K25或聚乙烯吡咯烷酮K30、乙烯基吡咯烷酮/乙酸乙烯酯共聚物(S630)、聚乙二醇，例如可具有约300至约6000，或约3350至约4000，或约7000至约5400的分子量的聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、醋酸羟甲基纤维素硬脂酸酯、聚山梨醇酯-80、羟乙基纤维素、海藻酸钠、树胶，例如黄蓍树胶和***树胶、瓜尔胶、黄原胶(包括黄原树胶)、糖、纤维素，例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素、聚山梨醇酯-80、海藻酸钠、聚乙氧基脱水山梨糖醇单月桂酸酯、聚乙氧基脱水山梨糖醇单月桂酸酯、聚维酮等。
“表面活性剂”包括化合物如十二烷基硫酸钠、多库酯钠、吐温60或80、三醋精、维生素E TPGS、脱水山梨糖醇单油酸酯、聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯、聚山梨醇酯、泊洛沙姆、胆汁盐、单硬脂酸甘油酯、环氧乙烷和环氧丙烷的共聚物例如(BASF)等。一些其他表面活性剂包括聚氧乙烯脂肪酸甘油酯和植物油，例如聚氧乙烯(60)氢化蓖麻油；以及聚氧乙烯烷基醚和烷基苯基醚，例如辛苯聚醇10、辛苯聚醇40。在一些实施方案中，可包含表面活性剂以增强物理稳定性或用于其他目的。
“粘度增强剂”包括例如甲基纤维素、黄原树胶、羧甲基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、醋酸羟丙基甲基纤维硬脂酸酯、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、卡波姆、聚乙烯醇、海藻酸盐、***胶、壳聚糖及其组合。
“润湿剂”包括化合物如油酸、单硬脂酸甘油酯、脱水山梨糖醇单油酸酯、脱水山梨醇单月桂酸酯、油酸三乙醇胺、聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯、聚氧乙烯脱水山梨糖醇单月桂酸酯、多库酯钠、油酸钠、十二烷基硫酸钠、多库酯钠、三醋精、吐温80、维生素E TPGS、铵盐等。
试剂盒/制品
在某些实施方案中，本文公开了与本文所述的一种或多种方法一起使用的试剂盒和制品。这样的试剂盒包括载具、包装或容器，它们被分区以接纳一个或多个容器如小瓶、管等，每个容器包含将在本文所述的方法中使用的一个单独要素。合适的容器包括例如瓶、小瓶、注射器和试管。在一个实施方案中，容器由多种材料(如玻璃或塑料)形成。
本文提供的制品包含包装材料。药物包装材料的实例包括但不限于泡罩包装、瓶、管、袋、容器、瓶子以及适用于选定制剂和预期施用和治疗模式的任何包装材料。
例如，容器包含CAR-T细胞(例如，CD19CAR-T细胞)和本文所述的类固醇，并且任选地额外包括本文公开的细胞因子和/或化学治疗剂。这样的试剂盒任选地包括与其在本文所述方法中的使用相关的标识性描述或标签或说明。
试剂盒通常包括列出内容物的标签和/或使用说明，以及具有使用说明的包装插页。通常还将包括一组说明。
在一些实施方案中，标签在容器上或与容器相关联。在一个实施方案中，当形成标签的字母、数字或其他字符被附着、模制或蚀刻到容器本身中时，该标签在容器上；当标签存在于还容纳容器的器皿或载具内(例如作为包装插页)时，该标签与容器相关联。在一个实施方案中，使用标签来指示内容物将用于特定治疗应用。标签还指示关于内容物使用的指导，例如本文所述的方法使用的指导。
某些名词
除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与所要求保护的主题所属领域的技术人员通常理解的含义相同的含义。应当理解，详细描述仅为示例性和解释性的，并不限制任何所要求保护的主题。在本申请中，除非另外明确指出，否则单数的使用包括复数。必须注意，如在本说明书中所用的，除非上下文另有明确说明，否则单数形式“一个”、“一种”、“该”包括复数指示物。在本申请中，除非另外指出，否则“或”的使用意指“和/或”。此外，术语“包括”以及其他形式如“包含”、“含有”和“包括”的使用并非是限制性的。
本文所用的章节标题仅仅是为了组织编排目的，而不应理解为限制所描述的主题。
尽管可以在单个实施方案的上下文中描述本发明的多个特征，但是这些特征也可以单独提供或以任何合适的组合提供。相反，尽管为了清楚起见，本文可能在单独的实施方案的上下文中描述本发明，但是本发明也可以在单个实施方案中实现。
说明书中对“一些实施方案”、“实施方案”、“一个实施方案”或“其他实施方案”的引用意指结合实施方案描述的特定特征、结构或特性包含在本发明的至少一些实施方案中，但不一定包含在所有实施方案中。
如在本说明书和权利要求中所使用的，词语“包含(comprising)”(和任何形式的包含，如“包含(comprise)”和“包含(comprises)”)、“具有(having)”(和任何形式的具有，如“具有(have)”和“具有(has)”)、“包括(including)”(以及任何形式的包括，如“包括(includes)”和“包括(include)”)，或“含有(containing)”(和任何形式的含有，如“含有(contains)”和“含有(contain)”)是包容性的或开放式的，并不排除其他未列举的要素或方法步骤。考虑本说明书中讨论的任何实施方案可以相对于本发明的任何方法或组合物实施，反之亦然。此外，本发明的组合物可用于实现本发明的方法。
如本文所用，范围和量可表示为“约”特定值或范围。约还包括确切量。因此，“约5μL”意指“约5μL”并且还指“5μL”。通常，术语“约”包括预期在实验误差内的量。
“分离”是指将核酸从其天然环境中取出。“纯化”是指给定的核酸(无论是从自然界中取出的核酸(包括基因组DNA和mRNA)还是合成的核酸(包括cDNA)和/或在实验室条件下扩增的核酸)纯度增加，其中“纯度”是一个相对的术语，而不是“绝对的纯度”。然而，应该理解，核酸和蛋白质可以与稀释剂或佐剂一起配制，并且仍然出于实际目的将其分离。例如，当用于引入细胞中时，核酸通常与可接受的运载体或稀释剂混合。
如本文所用的“多核苷酸”或“寡核苷酸”是指任何长度的核苷酸的聚合形式—核糖核苷酸或脱氧核糖核苷酸。该术语仅指分子的一级结构。因此，该术语包括双链和单链DNA、三链DNA以及双链和单链RNA。它还包括经修饰形式(例如通过甲基化和/或通过加帽)和未经修饰形式的多核苷酸。该术语还意在包括包含非天然存在核苷酸或合成核苷酸以及核苷酸类似物的分子。
“多肽(polypeptide)”与术语“多肽(polypeptides)”和“蛋白质”可互换使用，并且是指氨基酸残基的聚合物。“成熟蛋白质”是全长的并且任选包含在给定细胞环境中对蛋白质而言典型的糖基化或其他修饰的蛋白质。
当核酸和/或核酸序列天然地或人工地衍生自共同的祖先核酸或核酸序列时，它们是“同源的”。当蛋白质和/或蛋白质序列的编码DNA天然地或人工地衍生自共同的祖先核酸或核酸序列时，它们是同源的。同源分子可称为同源物。例如，如本文所述的任何天然存在的蛋白质均可以通过任何可用的诱变方法进行修饰。当表达时，该诱变的核酸编码的多肽与原始核酸编码的蛋白质同源。通常从两种或更多种核酸或蛋白质(或其序列)之间的序列同一性推断同源性。用于确立同源性的序列间精确同一性百分比随所讨论的核酸和蛋白质而变化，但是通常使用低至25％的序列同一性来确立同源性。更高水平的序列同一性，例如30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或99％或更高，也可用于确立同源性。
在两个核酸序列或多肽氨基酸序列的情况下，术语“相同”或“序列同一性”是指两个序列中的残基在指定的比较窗口上比对以获得最大对应性时是相同的。
在一类实施方案中，本文的多肽与参考多肽或其片段至少80％、85％、90％、98％、99％或100％相同，如使用默认参数通过BLASTP(或CLUSTAL，或任何其他可用的比对软件)测定的。类似地，核酸也可以参考起始核酸来描述，例如，其可以与参考核酸或其片段50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、98％、99％或100％相同，如使用默认参数测量通过BLASTN(或CLUSTAL，或任何其他可用的比对软件)测定的。当描述一个分子与较大分子具有一定百分比的序列同一性时，这意指当两个分子最佳比对时，根据两个分子最佳比对的顺序，较小分子中所述百分比的残基在较大分子中找到匹配残基。
本文公开的蛋白质(包括其功能部分和功能变体)可包含代替一种或多种天然存在氨基酸的合成氨基酸。这样的合成氨基酸是本领域已知的，并且包括例如氨基环己烷羧酸、正亮氨酸、α-氨基正癸酸、高丝氨酸、S-乙酰氨甲基-半胱氨酸、反式-3-羟基脯氨酸和反式-4-羟基脯氨酸、4-氨基苯丙氨酸、4-硝基苯丙氨酸、4-氯苯丙氨酸、4-羧基苯丙氨酸、β-苯基丝氨酸、β-羟基苯丙氨酸、苯基甘氨酸、α-萘基丙氨酸、环己基丙氨酸、环己基甘氨酸、二氢吲哚-2-羧酸、1,2,3,4-四氢异喹啉-3-羧酸、氨基丙二酸、氨基丙二酸单酰胺、N’-苄基-N’-甲基-赖氨酸、N’,N’-二苄基-赖氨酸、6-羟基赖氨酸、鸟氨酸、α-氨基环戊烷羧酸、α-氨基环己烷羧酸α-氨基环庚烷羧酸、α-(2-氨基-2-降莰烷)-羧酸、α,γ-二氨基丁酸、α,β-二氨基丙酸、高苯丙氨酸和α-叔丁基甘氨酸。
“转座子”或“转座因子”(TE)是可以改变其在基因组内的位置的载体DNA序列，其有时产生或逆转突变并改变细胞的基因组大小。转座经常导致TE的复制。I类TE在两个阶段中拷贝：首先将它们从DNA转录为RNA，随后所产生的RNA逆转录为DNA。然后，拷贝的DNA***基因组的新位置。逆转录步骤由逆转录酶催化，该逆转录酶可以由TE本身编码。逆转录转座子的特征类似于逆转录病毒如HIV。II类TE的剪切-粘贴转座机制不涉及RNA中间体。转座由几种转座酶催化。一些转座酶非特异性地结合DNA中的任何靶位点，而其他转座酶结合特定的DNA序列靶标。转座酶在靶位点处进行交错剪切，从而产生单链5’或3’DNA突出端(粘性末端)。该步骤切下DNA转座子，然后将其连接到新的靶位点；该过程涉及填充空隙的DNA聚合酶和封闭糖-磷酸骨架的DNA连接酶的活性。这导致靶位点的复制。DNA转座子的***位点可以通过短的定向重复序列(其可以通过在靶DNA中交错切割并通过DNA聚合酶填充而产生)和随后的对通过转座酶切除TE重要的一系列反向重复序列来鉴别。如果当在细胞周期的S期中供***点已被复制但靶位点尚未复制时发生剪切-粘贴TE的转座，则该剪切-粘贴TE可以被复制。在I类和II类TE中，转座可分为“自主的”或“非自主的”。自主TE可以自己移动，而非自主TE的移动需要存在另一TE。这通常是因为非自主TE缺乏转座酶(对于II类)或逆转录酶(对于I类)。
“转座酶”是指结合至转座子末端并通过剪切-粘贴机制或复制转座机制催化转座子移动到基因组另一部分的酶。
“睡美人(SB)转座子***”是指用于将DNA序列引入脊椎动物染色体的合成DNA转座子***。例如，该***于例如美国专利号6,489,458和8,227,432中有述。
可以通过“转染”、“转化”或“转导”将本文公开或考虑的核酸序列和载体引入细胞中。如本文所用，“转染”、“转化”或“转导”是指通过使用物理或化学方法将一种或多种外源多核苷酸引入宿主细胞中。许多转染技术是本领域已知的，并包括例如磷酸钙DNA共沉淀(参见例如，Murray E.J.(编著),Methods in Molecular Biology,Vol.7,Gene Transferand Expression Protocols,Humana Press(1991))；DEAE-葡聚糖；电穿孔；阳离子脂质体介导的转染；钨颗粒促进的微粒轰击(Johnston,Nature,346:776-777(1990))；以及磷酸锶DNA共沉淀(Brash等人,Mol.Cell Biol.,7:2031-2034(1987))。在合适的包装细胞中生长感染性颗粒后，可将噬菌体或病毒载体引入宿主细胞中，其中许多可商购获得。
“启动子”是指引发编码序列转录的多核苷酸区域。启动子位于基因的转录起始位点附近，位于DNA的同一链和上游(朝向有义链的5’区)。一些启动子是组成型的，因为它们在细胞中在所有情况下都是活跃的，而其他启动子响应于特定刺激被调节变得活跃(例如，诱导型启动子)。
术语“启动子活性”是指与正被测量活性的启动子可操作地连接的核苷酸序列的表达程度。启动子活性可以通过确定产生的RNA转录物的量直接测定(例如通过RNA印迹分析)，或通过确定由所连接的核酸序列(如与启动子连接的报告核酸序列)编码的产物的量间接测定。
如本文所用的“诱导型启动子”是指通过转录调节因子(例如，生物或非生物因子)的存在或不存在而诱导活性的启动子。诱导型启动子是有用的，因为与它们可操作连接的基因的表达可以在生物体的某些发育阶段或特定组织中打开或关闭。诱导型启动子的实例是醇调节的启动子、四环素调节的启动子、类固醇调节的启动子、金属调节的启动子、发病机制调节的启动子、温度调节的启动子和光调节的启动子。在一个实施方案中，诱导型启动子是遗传开关的部分。
如本文所用的术语“增强子”是指增加例如与其可操作地连接的核酸序列的转录的DNA序列。增强子可以位于远离核酸序列编码区的数千碱基处，并且可以介导调节因子的结合、DNA甲基化的模式或DNA结构的变化。来自多种不同来源的大量增强子是本领域公知的，并且可作为克隆多核苷酸(来自例如ATCC等贮藏所以及其他商业或个体来源)或在克隆多核苷酸内获得。许多包含启动子(如常用的CMV启动子)的多核苷酸也包含增强子序列。增强子可位于编码序列的上游、内部或下游。术语“Ig增强子”是指衍生自免疫球蛋白(Ig)基因座内映射的增强子区域的增强子元件(这样的增强子包括例如重链(μ)5’增强子、轻链(κ)5’增强子、κ和μ内含增强子和3’增强子)(通常参见Paul W.E.(编著),FundamentalImmunology,第3版,Raven Press,New York(1993),第353-363页；以及美国专利号5,885,827)。
“表达载体”或“载体”是表现为细胞内多核苷酸复制的自主单元(即能够在其自身控制下复制)或通过***宿主细胞染色体使得能够复制的任何遗传元件，例如质粒、染色体、病毒、转座子，其已附接有另一多核苷酸区段以便实现连接区段的复制和/或表达。合适的载体包括但不限于质粒、转座子、噬菌体和粘粒。载体可含有多核苷酸序列，该多核苷酸序列是实现载体连接或***所需宿主细胞以及实现附接片段的表达所必需的。这样的序列根据宿主生物而不同；它们包括实现转录的启动子序列、增加转录的增强子序列、核糖体结合位点序列，以及转录和翻译终止序列。或者，表达载体可以能够直接表达其中编码的核酸序列产物，而无需载体连接或整合到宿主细胞DNA序列中。
载体还可以包含“选择标记基因”。如本文所用，术语“选择标记基因”是指在存在相应选择剂的情况下允许表达核酸序列的细胞被特异性选择或排除的核酸序列。合适的选择标记基因是本领域已知的，并于例如国际专利申请公开WO 1992/08796和WO 1994/28143；Wigler等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,77:3567(1980)；O’Hare等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,78:1527(1981)；Mulligan&Berg,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,78:2072(1981)；Colberre-Garapin等人,J.Mol.Biol.,150:1(1981)；Santerre等人,Gene,30:147(1984)；Kent等人,Science,237:901-903(1987)；Wigler等人,Cell,11:223(1977)；Szybalska&Szybalski,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,48:2026(1962)；Lowy等人,Cell,22:817(1980)；以及美国专利号5,122,464和5,770,359中有述。
在一些实施方案中，载体是“附加型表达载体”或“附加体”，其能够在宿主细胞中复制，并且在存在适当选择压力的情况下作为DNA的染色体外区段存在于宿主细胞内(参见例如，Conese等人,Gene Therapy,11:1735-1742(2004))。代表性可商获的附加型表达载体包括但不限于利用爱泼斯坦巴尔核抗原1(EBNA1)和爱泼斯坦巴尔病毒(EBV)复制起点(oriP)的附加型质粒。来自Invitrogen(Carlsbad,Calif.)的载体pREP4、pCEP4、pREP7和pcDNA3.1以及来自Stratagene(La Jolla,Calif.)的pBK-CMV代表了使用T-抗原和SV40复制起点来代替EBNA1和oriP的附加型载体的非限制性实例。
如本文所用的“抗体”是指单克隆或多克隆抗体。如本文所用，术语“单克隆抗体”是指由B细胞的单个克隆产生并结合相同表位的抗体。相反，“多克隆抗体”是指由不同B细胞产生并结合相同抗原的不同表位的抗体群体。完整抗体通常由四个多肽组成：重(H)链多肽的两个相同拷贝和轻(L)链多肽的两个相同拷贝。每条重链含有一个N端可变(VH)区和三个C端恒定(CH1、CH2和CH3)区，并且每条轻链含有一个N端可变(VL)区和一个C端恒定(CL)区。每对轻链和重链的可变区形成抗体的抗原结合位点。VH区和VL区具有相似的一般结构，每个区包含四个序列相对保守的框架区。框架区通过三个互补决定区(CDR)连接。被称为CDR1、CDR2和CDR3的三个CDR形成抗体的“高变区”，其负责抗原结合。
术语“抗体的片段”、“抗体片段”、“抗体的功能片段”和“抗原结合部分”在本文中可互换使用，以意指保留特异性结合抗原的能力的抗体的一个或多个片段或部分(通常参见Holliger等人,Nat.Biotech.,23(9):1126-1129(2005))。例如，抗体片段理想地包含一个或多个CDR、可变区(或其部分)、恒定区(或其部分)或其组合。抗体片段的实例包括但不限于(i)Fab片段，其是由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段；(ii)F(ab’)2片段，其是包含两个Fab片段的二价片段，该Fab片段通过茎区处的二硫键连接；(iii)Fv片段，由抗体单臂的VL和VH结构域组成；(iv)单链Fv(scFv)，其是由Fv片段的通过合成连接体连接的两个结构域(即VL和VH)组成的单价分子，该合成连接体使得两个结构域能够作为单个多肽链合成(参见例如，Bird等人,Science,242:423-426(1988)；Huston等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,85:5879-5883(1988)；以及Osbourn等人,Nat.Biotechnol.,16:778(1998))，以及(v)双抗体，其是多肽链的二聚体，其中每个多肽链包含通过肽连接体与VL连接的VH，该肽连接体太短而不允许同一肽链上的VH与VL之间进行配对，从而驱动不同VH-VL多肽链上的互补结构域之间进行配对以生成具有两个功能性抗原结合位点的二聚体分子。抗体片段是本领域已知的，并且在例如美国专利申请公开2009/0093024 A1中有更详细的描述。
当用于提及CAR时，术语“功能部分”是指本发明的CAR的任何部分或片段，该部分或片段保留其作为一部分的CAR(亲本CAR)的生物活性。关于编码亲本CAR的核酸序列，编码CAR的功能部分的核酸序列可编码构成亲本CAR的例如约10％、25％、30％、50％、68％、80％、90％、95％或更多的蛋白质。
如本文所用，术语“功能变体”是指这样的多肽或蛋白质，其与参考多肽具有较高或显著序列同一性或相似性，并且保留其作为变体的参照多肽的生物活性。功能变体包括，例如，本文所述CAR(亲本CAR)的那些变体，其保留与亲本CAR相似程度、相同程度或更高程度的识别靶细胞的能力。关于编码亲本CAR的核酸序列，编码CAR的功能变体的核酸序列可以与编码亲本CAR的核酸序列具有例如约10％、约25％、约30％、约50％、约65％、约80％、约90％、约95％或约99％的同一性。
如本文所提及的“增殖性疾病”是指统一的概念，即细胞的过度增殖和细胞基质的更新对包括癌症在内的几种疾病的发病机制有显著贡献。
“施用”在本文中是指向患者提供本发明的组合物。作为实例而非限制，组合物施用(例如，注射)可通过静脉内(iv)注射、皮下(sc)注射、皮内(id)注射、腹膜内(ip)注射或肌内(im)注射进行。可以采用一种或多种这样的途径。肠胃外施用可以是，例如，通过推注或通过随时间推移平缓灌注。替代地或同时地，可通过口服途径施用。此外，还可以通过手术沉积细胞团或细胞丸或放置医疗装置来施用。
本文所述的经修饰的效应细胞组合物可包含表达一种或多种本文所述核酸序列的宿主细胞，或包含一种或多种本文所述核酸序列的载体，它们的量可有效治疗或预防增殖性病症。如本文所用，术语“治疗”、“处理”等是指获得所需的药理学和/或生理学效果。在实施方案中，效果是治疗性的，即效果部分或完全地治愈疾病和/或由该疾病引起的不良症状。为此，本发明方法包括施用“一定量”的组合物，该组合物包含表达本发明核酸序列的宿主细胞，或包含本发明核酸序列的载体。
“量”或“剂量”是指以所需剂量且持续所需时间段的量，其有效实现预期治疗结果。该量可以根据诸如疾病状态、年龄、性别和个体体重等因素以及本发明的核酸序列在个体中引发预期反应的能力而变化。
或者，药理学和/或生理学效果可以是“预防性的”，即该效果完全或部分地预防疾病或其症状。
“预防有效量”是指以所需剂量且持续所需时间段的量，其有效实现预期预防结果(例如，预防疾病发作)。
如本文所用，术语“个体”、“受试者”和“患者”是指任何哺乳动物。在一些实施方案中，哺乳动物是人。在一些实施方案中，哺乳动物是非人哺乳动物。这些术语均不要求或仅限于以医护人员(例如医生、注册护士、执业护士、医师助理、护理员或临终关怀工作者)的监督(例如，持续或间歇)为特征的情况。
实施例
提供这些实施例仅用于说明目的，而不是限制本文提供的权利要求的范围。
实施例1.CD19特异性CAR-T细胞的制备
SB转座子CoOpCD19RCD28/pSBSO在EF-1/HTLV杂合复合启动子(InvivoGen)下表达人密码子优化的(CoOp)第2代CoOpCD19RCD28CAR，该EF-1/HTLV杂合复合启动子由延伸因子-1α(EF-1α)和人T细胞白血病病毒(HTLV)的5′非翻译区组成。巨细胞病毒(CMV)启动子下的SB转座酶SB11以顺式的方式从DNA质粒pCMV-SB11表达。
可以使用SB转座引入CAR，然后添加aAPC从而以CAR依赖性的方式在数值上扩增T细胞，而从源自PB或UCB的单核细胞(MNC)生成CD19特异性T细胞。使用15μg编码转座子(CAR)的DNA质粒(CD19RCD28/pSBSO)和5μg编码转座酶(SB11)的DNA质粒(pCMV-SB11)将10个比色皿(2×107个MNC/比色皿)中的接受体电穿孔。电穿孔日定义为刺激周期#1的“第0天”。作为流式细胞术和培养条件的对照，对自体T细胞进行模拟电穿孔(不含DNA质粒)，并在γ-照射的aAPC(克隆#4)上进行数值扩增，该aAPC预先负载OKT3以交联CD3从而维持T细胞增殖。常规地评估电穿孔后第二天T细胞的电转移效率和活力。在该初始时间点，来自对照DNA质粒(命名为pmaxGFP)和CAR的EGFP表达反映了来自整合质粒和附加体质粒的蛋白质表达。通常，电穿孔后第二天EGFP表达测定为60％，CAR表达为约40％，T细胞活力在40％-50％之间。在存在可溶性重组人IL-2和IL-21的情况下循环添加γ-照射的aAPC恢复稳定表达CAR的CD细胞(CD19RCD28)。如果CD3negCD56+ NK细胞的百分比≥10％并且特别是如果在T细胞上表达的CAR的百分比较低，则可以使用CD56特异性顺磁珠从培养物中耗尽这些NK细胞。该耗尽阻止NK细胞的快速过度生长，该快速过度生长干扰激活和增殖细胞(AaPC)以维持CAR+ T细胞增殖的能力。有时，在最后两个刺激循环期间从CAR+ T细胞中耗尽NK细胞，但由于CD56在一些CAR+ T细胞上的共表达，这导致所需细胞的损失。在第14天，使用VueLife培养袋，在功能封闭的***中培养T细胞。通常在aAPC上共培养的第14天或第21天至第23天(刺激周期#2或#3结束时)，将经遗传修饰且繁殖的T细胞的亚组冷冻保存，以用作供未来分析的存档材料来源，以及如果随后在制备过程中出现意外问题，则可以将其解冻。可以在第21天至第28天，或大约第21天至第28天(例如培养的第23天)收获T细胞。这样的T细胞可以表达CAR并且可以有>80％存活。
实施例2.CAR-T细胞的体内扩增
一名40岁男性被诊断出患有B细胞急性淋巴母细胞白血病(B-ALL)。患者展现出核型47XY和+X，并且未展现出任何CNS受累。施用一线疗法hyperCVAD，导致初始完全缓解。患者复发并展现出生物标志物CD19、CD20、CD22、CRLF2、核型47XY、+X和inv 17。给予了多种补救疗法。随后开始POMP维持疗法。患者进一步发展出移植物抗宿主病GVHD并用强的松和他克莫司治疗。进一步向患者施用额外的放射疗法(XRT)、免疫疗法，hyperCAVD和O-EPOCH。此外，用持续3天的500mg/m2的环磷酰胺和30mg/m2的氟达拉滨在患者中诱导淋巴细胞耗尽。在淋巴细胞耗尽后，在第0天以106个CAR-T细胞/kg向患者进行输注。在第14天，患者发展出GVHD。从第14天开始施用约1mg/kg强的松。在第18天(或从施用CAR-T细胞起的第48天)，GVHD消退并将强的松被减少至约0.5mg/kg。白细胞计数(WBC)为2.7，并且绝对淋巴细胞计数(ALC)为200。
尽管本文中已经示出并描述了本发明的优选实施方案，但对于本领域技术人员显而易见的是，这些实施方案仅以示例的方式提供。本领域技术人员在不脱离本发明的情况下现将想到多种变化、改变和替代。应当理解，本文所述的实施方案的各种替代方案或本文所述的这些实施方案或方面中的一个或多个的组合可用于实施本发明。旨在以下述权利要求限定本发明的范围，并由此涵盖这些权利要求范围内的方法和结构及其等同项。

Claims (219)

1.一种方法，包括向有需要的受试者施用：
a)经修饰的效应细胞；以及
b)类固醇，其量有效诱导和/或维持所述经修饰的效应细胞的群体在所述受试者体内的扩增。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述经修饰的效应细胞包含嵌合受体。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述经修饰的效应细胞是嵌合抗原受体(CAR)T细胞。
4.根据权利要求3所述的方法，其中所述CAR结合CD19上的表位。
5.根据权利要求3所述的方法，其中所述CAR结合CD33上的表位。
6.根据权利要求3所述的方法，其中所述CAR结合BCMA、CD44、α-叶酸受体、CAIX、CD30、ROR1、CEA、EGP-2、EGP-40、HER2、HER3、叶酸结合蛋白、GD2、GD3、IL-13R-a2、KDR、EDB-F、间皮素、CD22、EGFR、MUC-1、MUC-16、MAGE-A1、h5T4、PSMA、TAG-72、EGFRvIII、CD123和VEGF-R2中的至少一种上的表位。
7.根据权利要求3-6中任一项所述的方法，其中所述CAR进一步包含至少一种共刺激信号传导结构域。
8.根据权利要求7所述的方法，其中所述至少一种共刺激信号传导结构域包括来自CD27、CD28、4-1BB、ICOS、OX40、CD3-ζ或其片段或组合的信号传导结构域。
9.根据权利要求7或8所述的方法，其中所述至少一种共刺激信号传导结构域包括来自4-1BB、CD28或其组合的信号传导结构域。
10.根据权利要求6-8中任一项所述的方法，其中所述CAR进一步包含CD28共刺激信号传导结构域和CD3-ζ。
11.根据权利要求6-8中任一项所述的方法，其中所述CAR进一步包含CD28共刺激信号传导结构域。
12.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述经修饰的效应细胞是经修饰的自然杀伤T细胞。
13.根据权利要求12所述的方法，其中所述经修饰的自然杀伤T细胞是经修饰的恒定自然杀伤T细胞。
14.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述经修饰的效应细胞是工程化T细胞受体(TCR)T细胞。
15.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述经修饰的效应细胞是经修饰的自然杀伤细胞。
16.根据权利要求1所述的方法，其中所述类固醇与所述经修饰的效应细胞同时施用。
17.根据权利要求1所述的方法，其中所述类固醇与所述经修饰的效应细胞顺序施用。
18.根据权利要求17所述的方法，其中在施用所述经修饰的效应细胞前将所述类固醇施用于所述受试者。
19.根据权利要求17所述的方法，其中在施用所述经修饰的效应细胞后将所述类固醇施用于所述受试者。
20.根据权利要求18所述的方法，其中在施用所述经修饰的效应细胞前至少0.5、1、2、3、4、5、6、8、10、12、15、18、20小时或24小时施用所述类固醇。
21.根据权利要求18所述的方法，其中在施用所述经修饰的效应细胞前至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、15、21、28天或30天施用所述类固醇。
22.根据权利要求19所述的方法，其中在施用所述经修饰的效应细胞后至少0.5、1、2、3、4、5、6、8、10、12、15、18、20、24、36、48、60、72、84、96、108小时或120小时施用所述类固醇。
23.根据权利要求19所述的方法，其中在施用所述经修饰的效应细胞后至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、75、90天或更多天施用所述类固醇。
24.根据权利要求1或16-23中任一项所述的方法，其中将所述类固醇连续施用1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、75、90天或更多天。
25.根据权利要求1或16-23中任一项所述的方法，其中将所述类固醇以预定的时间间隔施用1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、75、90天或更多天。
26.根据权利要求1或16-23中任一项所述的方法，其中每10天施用所述类固醇。
27.根据权利要求1或16-26中任一项所述的方法，其中以1个剂量、2个剂量、3个剂量、4个剂量、5个剂量或更多个剂量施用所述类固醇。
28.根据权利要求1-27中任一项所述的方法，其中将第一量的类固醇施用于所述受试者持续第一段时间，并将第二量的类固醇施用于所述受试者持续第二段时间。
29.根据权利要求28所述的方法，其中将所述第一量的类固醇以1个剂量、2个剂量、3个剂量、4个剂量、5个剂量或更多个剂量施用于所述受试者，持续1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、75、90天或更多天。
30.根据权利要求28或29所述的方法，其中所述第一量的类固醇是足以治疗病况的量。
31.根据权利要求30所述的方法，其中所述病况是移植物抗宿主病(GVHD)。
32.根据权利要求30所述的方法，其中所述病况是细胞因子释放综合征(CRS)。
33.根据权利要求28-32中任一项所述的方法，其中在所述病况恢复或改善后，将所述第二量的类固醇施用于所述受试者。
34.根据权利要求33所述的方法，其中将所述第二量的类固醇以1个剂量、2个剂量、3个剂量、4个剂量、5个剂量或更多个剂量施用于所述受试者，持续1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、75、90天或更多天。
35.根据权利要求28-34中任一项所述的方法，其中将所述第一量的类固醇与所述经修饰的效应细胞同时施用于所述受试者。
36.根据权利要求28-34中任一项所述的方法，其中在施用经修饰的效应细胞后将所述第一量的类固醇施用于所述受试者。
37.根据权利要求28-34中任一项所述的方法，其中在施用经修饰的效应细胞前将所述第一量的类固醇施用于所述受试者。
38.根据权利要求28-34或36中任一项所述的方法，其中在施用所述经修饰的效应细胞后至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、13、14天或15天将所述第一量的类固醇施用于所述受试者。
39.根据权利要求28-34或36中任一项所述的方法，其中在施用所述经修饰的效应细胞后至少15天或更多天将所述第一量的类固醇施用于所述受试者。
40.根据权利要求28-39中任一项所述的方法，其中将所述第一量的类固醇连续或间歇施用于所述受试者，持续至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、75、90天或更多天。
41.根据权利要求28-39中任一项所述的方法，其中将所述第一量的类固醇以预定的时间间隔施用于所述受试者，持续至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、75、90天或更多天。
42.根据权利要求28-41中任一项所述的方法，其中在施用所述经修饰的效应细胞并且完成施用所述第一量的类固醇后至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、75、90天或更多天将所述第二量的类固醇施用于所述受试者。
43.根据权利要求28-41中任一项所述的方法，其中在施用所述经修饰的效应细胞并且完成施用所述第一量的类固醇后至少49天或更多天将所述第二量的类固醇施用于所述受试者。
44.根据权利要求28-43中任一项所述的方法，其中将所述第二量的类固醇连续或间歇施用于所述受试者，持续至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、75、90天或更多天。
45.根据权利要求28-43中任一项所述的方法，其中将所述第二量的类固醇以预定的时间间隔施用于所述受试者，持续至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、75、90天或更多天。
46.根据权利要求28-45中任一项所述的方法，其中所述第一量的类固醇是约1mg/kg。
47.根据权利要求28-45中任一项所述的方法，其中所述第二量的类固醇是约0.9mg/kg至约0.5mg/kg。
48.根据权利要求28-45中任一项所述的方法，其中所述第二量的类固醇是约0.5mg/kg。
49.根据权利要求28-45中任一项所述的方法，其中以连续剂量施用所述第二量的类固醇。
50.根据权利要求49所述的方法，其中每个连续剂量减少0.1mg/kg。
51.根据权利要求1或16-48中任一项所述的方法，其中所述类固醇包括氟***、美睾酮、美雄酮、十一酸诺龙、环戊丙酸诺龙、氧雄龙、羟甲烯龙、己氧基苯丙酸诺龙、睾酮、强的松、皮质醇、可的松、强的松龙、***、倍他米松、曲安西龙、倍氯米松、氟氢可的松、脱氧皮质酮、醛固酮和司坦唑醇中的至少一种。
52.根据权利要求1-51中任一项所述的方法，其进一步包括施用细胞因子。
53.根据权利要求52所述的方法，其中所述细胞因子包括干扰素、白介素、趋化因子、集落刺激因子或肿瘤坏死因子。
54.根据权利要求52或53所述的方法，其中所述细胞因子与所述经修饰的效应细胞共表达。
55.根据权利要求52-54中任一项所述的方法，其中所述细胞因子包括IL-2、IL-7、IL-12、IL-15、IL-21、IFNγ、TNF-α变体、其片段或融合蛋白。
56.根据权利要求52-54中任一项所述的方法，其中所述细胞因子包括mbIL-15或IL-15与IL-15Rα的融合物。
57.根据权利要求52-56中任一项所述的方法，其中所述细胞因子与所述类固醇或所述经修饰的效应细胞同时施用。
58.根据权利要求52-56中任一项所述的方法，其中所述细胞因子与所述类固醇和所述经修饰的效应细胞同时施用。
59.根据权利要求52-56中任一项所述的方法，其中所述细胞因子与所述类固醇和/或所述经修饰的效应细胞顺序施用。
60.根据权利要求1-59中任一项所述的方法，其中在表现出细胞因子相关毒性的至少一种症状时施用所述类固醇，所述症状选自细胞因子释放综合征(CRS)、脑病和B细胞发育不全。
61.根据权利要求1-59中任一项所述的方法，其中在表现出细胞因子相关毒性的至少一种症状前施用所述类固醇，所述症状选自细胞因子释放综合征(CRS)、脑病和B细胞发育不全。
62.根据权利要求60或61所述的方法，其中所述细胞因子相关毒性诱导细胞因子风暴的至少一种症状。
63.根据权利要求1-62中任一项所述的方法，其中以小于减少细胞因子相关毒性的至少一种症状所需的类固醇量的量施用所述类固醇，所述症状选自细胞因子释放综合征(CRS)、脑病和B细胞发育不全。
64.根据权利要求63所述的方法，其中以约1mg/kg的量施用所述类固醇。
65.根据权利要求63所述的方法，其中以约0.5mg/kg的量施用所述类固醇。
66.根据权利要求1-65中任一项所述的方法，其中将所述类固醇和/或所述经修饰的效应细胞配制用于肠胃外施用、皮下施用、舌下施用、鼻内施用和口服施用中的至少一种。
67.根据权利要求1-65中任一项所述的方法，其中将一定量的所述经修饰的效应细胞施用于所述受试者。
68.根据权利要求67所述的方法，其中所述量是约105至约109个经修饰的效应细胞/kg。
69.根据权利要求67所述的方法，其中所述量是约105至约106个经修饰的效应细胞/kg。
70.根据权利要求67所述的方法，其中所述量是约106至约107个经修饰的效应细胞/kg。
71.根据权利要求67所述的方法，其中所述量是约107至约108个经修饰的效应细胞/kg。
72.根据权利要求67所述的方法，其中所述量是约108至约109个经修饰的效应细胞/kg。
73.根据权利要求67所述的方法，其中所述量是约105个经修饰的效应细胞/kg。
74.根据权利要求1所述的方法，其中所述受试者患有癌症。
75.根据权利要求74所述的方法，其中所述癌症是实体瘤。
76.根据权利要求75所述的方法，其中所述实体瘤包括乳腺癌、***、结肠直肠癌、肾癌、肝癌、肺癌、卵巢癌、胰腺癌、***癌或尿路上皮癌。
77.根据权利要求74所述的方法，其中所述癌症是血液学恶性肿瘤。
78.根据权利要求77所述的方法，其中所述血液学恶性肿瘤包括白血病、淋巴瘤或骨髓瘤。
79.根据权利要求77或78所述的方法，其中所述血液学恶性肿瘤包括B细胞恶性肿瘤。
80.根据权利要求79所述的方法，其中所述B细胞恶性肿瘤包括慢性淋巴细胞白血病(CLL)、小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)、高危CLL、非CLL/SLL淋巴瘤、幼淋巴细胞白血病(PLL)、滤泡性淋巴瘤(FL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、Waldenstrom巨球蛋白血症、多发性骨髓瘤、结外边缘区B细胞淋巴瘤、***边缘区B细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、非伯基特高级别B细胞淋巴瘤、原发性纵隔B细胞淋巴瘤(PMBL)、免疫母细胞性大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤、B细胞幼淋巴细胞白血病、淋巴浆细胞淋巴瘤、脾边缘区淋巴瘤、浆细胞骨髓瘤、浆细胞瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤或淋巴瘤样肉芽肿病。
81.根据权利要求77-79中任一项所述的方法，其中所述血液学恶性肿瘤包括髓样白血病。
82.根据权利要求77-79或81中任一项所述的方法，其中所述血液学恶性肿瘤包括急性髓样白血病(AML)或慢性髓样白血病(CML)。
83.根据权利要求74-82中任一项所述的方法，其中所述癌症是转移性癌症。
84.根据权利要求74-82中任一项所述的方法，其中所述癌症是复发性或难治性癌症。
85.根据权利要求77-79、81-82或84中任一项所述的方法，其中所述AML是复发性AML。
86.根据权利要求77-79、81-82或84中任一项所述的方法，其中所述AML是难治性AML。
87.根据权利要求1-86中任一项所述的方法，其中所述受试者是人。
88.一种方法，包括向受试者施用：
a)CAR-T细胞，其结合CD19上的表位的；以及
b)类固醇，其中所述类固醇与所述CAR-T细胞同时或顺序施用，并且所述类固醇以有效诱导和/或维持所述CAR-T细胞的群体在所述受试者体内扩增的量施用于所述受试者。
89.一种在有需要的受试者体内诱导T细胞植入和/或扩增的方法，其包括：
a)使T细胞与编码嵌合受体的载体离体接触以生成经修饰的T细胞；
b)向所述受试者施用一定量的所述经修饰的T细胞；以及
c)向所述受试者施用类固醇，所述类固醇的量有效诱导和/或维持所述经修饰的T细胞的群体在所述受试者体内的扩增。
90.根据权利要求89所述的方法，其中所述载体是慢病毒载体、逆转录病毒载体、睡美人转座子或非病毒载体。
91.根据权利要求89或90所述的方法，其中所述载体是睡美人转座子。
92.根据权利要求89-91中任一项所述的方法，其中所述经修饰的T细胞是嵌合抗原受体(CAR)T细胞。
93.根据权利要求89-91中任一项所述的方法，其中所述经修饰的T细胞是工程化T细胞受体(TCR)T细胞。
94.根据权利要求89-93中任一项所述的方法，其中所述T细胞在照护点场所处被修饰并在未经历增殖和激活的情况下施用于所述受试者。
95.根据权利要求89-94中任一项所述的方法，其中刺激所述经修饰的T细胞至少0、1、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30天或更多天。
96.根据权利要求89-92中任一项所述的方法，其中刺激所述经修饰的T细胞至少5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60天或更多天。
97.根据权利要求89-92中任一项所述的方法，其中刺激所述经修饰的T细胞至少7、14、21、28、35、42、49、56、63天或更多天。
98.根据权利要求89所述的方法，其中所述嵌合受体结合至CD19、CD33、BCMA、CD44、α-叶酸受体、CAIX、CD30、ROR1、CEA、EGP-2、EGP-40、HER2、HER3、叶酸结合蛋白、GD2、GD3、IL-13R-a2、KDR、EDB-F、间皮素、CD22、EGFR、MUC-1、MAGE-A1、h5T4、PSMA、TAG-72、EGFRvIII、CD123和VEGF-R2中的至少一种上的表位。
99.根据权利要求89-98中任一项所述的方法，其中所述经修饰的T细胞进一步包含至少一种共刺激信号传导结构域。
100.根据权利要求99所述的方法，其中所述至少一种共刺激信号传导结构域包括来自CD27、CD28、4-1BB、ICOS、OX40、CD3-ζ或其片段或组合的信号传导结构域。
101.根据权利要求99或100所述的方法，其中所述至少一种共刺激信号传导结构域包括来自4-1BB、CD28或其组合的信号传导结构域。
102.根据权利要求99-101中任一项所述的方法，其中所述经修饰的T细胞进一步包含CD28共刺激信号传导结构域和CD3-ζ。
103.根据权利要求99-101中任一项所述的方法，其中所述经修饰的T细胞进一步包含CD28共刺激信号传导结构域。
104.根据权利要求89所述的方法，其中所述经修饰的T细胞是经修饰的自然杀伤T细胞。
105.根据权利要求89所述的方法，其中所述经修饰的自然杀伤T细胞是经修饰的恒定自然杀伤T细胞。
106.根据权利要求89-105中任一项所述的方法，其中所述类固醇与所述经修饰的T细胞同时施用。
107.根据权利要求89-105中任一项所述的方法，其中所述类固醇与所述经修饰的T细胞顺序施用。
108.根据权利要求107所述的方法，其中在施用所述经修饰的T细胞前将所述类固醇施用于所述受试者。
109.根据权利要求107所述的方法，其中在施用所述经修饰的T细胞后将所述类固醇施用于所述受试者。
110.根据权利要求108所述的方法，其中在施用所述经修饰的T细胞前至少0.5、1、2、3、4、5、6、8、10、12、15、18、20小时或24小时施用所述类固醇。
111.根据权利要求108所述的方法，其中在施用所述经修饰的T细胞前至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、15、28天或30天施用所述类固醇。
112.根据权利要求109所述的方法，其中在施用所述经修饰的T细胞后至少约0.5、1、2、3、4、5、6、8、10、12、15、18、20、24、36、48、72、80、90、100、108、120、130、140、150小时或160小时施用所述类固醇。
113.根据权利要求109所述的方法，其中在施用所述经修饰的T细胞后至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、75、90天或更多天施用所述类固醇。
114.根据权利要求89-113中任一项所述的方法，其中将所述类固醇连续施用1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、75、90天或更多天。
115.根据权利要求89-113中任一项所述的方法，其中将所述类固醇以预定间隔施用1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、75、90天或更多天，任选地与所述经修饰的T细胞组合。
116.根据权利要求89-113中任一项所述的方法，其中每10天施用所述类固醇。
117.根据权利要求89-115中任一项所述的方法，其中以1个剂量、2个剂量、3个剂量、4个剂量、5个剂量或更多个剂量施用所述量的类固醇。
118.根据权利要求89-117中任一项所述的方法，其中将第一量的类固醇施用于所述受试者。
119.根据权利要求118所述的方法，其中将所述第一量的类固醇以1个剂量、2个剂量、3个剂量、4个剂量、5个剂量或更多个剂量施用于所述受试者。
120.根据权利要求118或119所述的方法，其中将所述第一量的类固醇施用于所述受试者以治疗病况。
121.根据权利要求120所述的方法，其中所述病况是移植物抗宿主病(GVHD)。
122.根据权利要求120所述的方法，其中所述病况是细胞因子释放综合征(CRS)。
123.根据权利要求118-122中任一项所述的方法，其中在所述病况恢复或改善后，将第二量的类固醇施用于所述受试者。
124.根据权利要求123所述的方法，其中以1个剂量、2个剂量、3个剂量、4个剂量、5个剂量或更多个剂量施用所述第二量的类固醇。
125.根据权利要求118-124中任一项所述的方法，其中将所述第一量的类固醇与所述经修饰的T细胞同时施用于所述受试者。
126.根据权利要求118-124中任一项所述的方法，其中在施用经修饰的T细胞后将所述第一量的类固醇施用于所述受试者。
127.根据权利要求118-124中任一项所述的方法，其中在施用经修饰的T细胞前将所述第一量的类固醇施用于所述受试者。
128.根据权利要求118-124或126中任一项所述的方法，其中在施用所述经修饰的T细胞后至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、15、28、30、45、60、90天或更多天将所述第一量的类固醇施用于所述受试者。
129.根据权利要求118-124或126中任一项所述的方法，其中在施用所述经修饰的T细胞后至少15天或更多天将所述第一量的类固醇施用于所述受试者。
130.根据权利要求118-129中任一项所述的方法，其中将所述第一量的类固醇连续施用于所述受试者，持续至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、75、90天或更多天。
131.根据权利要求118-129中任一项所述的方法，其中将所述第一量的类固醇以预定的时间间隔施用于所述受试者，持续至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、75、90天或更多天。
132.根据权利要求118-131中任一项所述的方法，其中在施用所述经修饰的T细胞并且完成施用所述第一量的类固醇后至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、75、90天或更多天将所述第二量的类固醇施用于所述受试者。
133.根据权利要求118-131中任一项所述的方法，其中在施用所述经修饰的T细胞并且完成施用所述第一量的类固醇后至少49天或更多天将所述第二量的类固醇施用于所述受试者。
134.根据权利要求118-133中任一项所述的方法，其中将所述第二量的类固醇连续施用于所述受试者，持续至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、75、90天或更多天。
135.根据权利要求118-133中任一项所述的方法，其中将所述第二量的类固醇以预定的时间间隔施用于所述受试者，持续至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、75、90天或更多天。
136.根据权利要求118-135中任一项所述的方法，其中所述第一量的类固醇是1mg/kg。
137.根据权利要求118-136中任一项所述的方法，其中所述第二量的类固醇是约0.9mg/kg至约0.5mg/kg。
138.根据权利要求118-136中任一项所述的方法，其中所述第二量的类固醇是0.5mg/kg。
139.根据权利要求118-136中任一项所述的方法，其中以连续剂量施用所述第二量的类固醇。
140.根据权利要求139所述的方法，其中每个连续剂量减少0.1mg/kg。
141.根据权利要求89-140中任一项所述的方法，其中所述类固醇包括氟***、美睾酮、美雄酮、十一酸诺龙、环戊丙酸诺龙、氧雄龙、羟甲烯龙、己氧基苯丙酸诺龙、睾酮、强的松、皮质醇、可的松、强的松龙、***、倍他米松、曲安西龙、倍氯米松、氟氢可的松、脱氧皮质酮、醛固酮或司坦唑醇。
142.根据权利要求89-141中任一项所述的方法，其中以小于减少细胞因子相关毒性的至少一种症状所需的类固醇量的量施用所述类固醇。
143.根据权利要求89-141中任一项所述的方法，其中以足以减少细胞因子相关毒性的至少一种症状的量施用所述类固醇。
144.根据权利要求142-143中任一项所述的方法，其中所述细胞因子相关毒性的至少一种症状选自细胞因子释放综合征(CRS)、脑病和B细胞发育不全。
145.根据权利要求142或143所述的方法，其中以约1mg/kg的量施用所述类固醇。
146.根据权利要求142或143所述的方法，其中以约0.5mg/kg的量施用所述类固醇。
147.根据权利要求89所述的方法，其中所述经修饰的T细胞的量是约105至约109个经修饰的T细胞/kg。
148.根据权利要求89所述的方法，其中所述经修饰的T细胞的量是约105至约106个经修饰的T细胞/kg。
149.根据权利要求89所述的方法，其中所述经修饰的T细胞的量是约106至约107个经修饰的T细胞/kg。
150.根据权利要求89所述的方法，其中所述经修饰的T细胞的量是约107至约108个经修饰的T细胞/kg。
151.根据权利要求89所述的方法，其中所述经修饰的T细胞的量是约108至约109个经修饰的T细胞/kg。
152.根据权利要求89所述的方法，其中所述经修饰的T细胞的量是约105个经修饰的T细胞/kg。
153.根据权利要求89-152中任一项所述的方法，其进一步包括施用细胞因子。
154.根据权利要求153所述的方法，其中所述细胞因子包括干扰素、白介素、趋化因子、集落刺激因子或肿瘤坏死因子。
155.根据权利要求153或154所述的方法，其中所述细胞因子与所述经修饰的T细胞共表达。
156.根据权利要求153-155中任一项所述的方法，其中所述细胞因子包括IL-2、IL-7、IL-12、IL-15、IL-21、IFNγ或TNF-α。
157.根据权利要求153-155中任一项所述的方法，其中所述细胞因子包括mbIL-15。
158.根据权利要求89-157中任一项所述的方法，其中所述细胞因子与所述类固醇或所述经修饰的T细胞同时施用。
159.根据权利要求89-157中任一项所述的方法，其中所述细胞因子与所述类固醇和所述经修饰的T细胞同时施用。
160.根据权利要求89-157中任一项所述的方法，其中所述细胞因子与所述类固醇和/或所述经修饰的T细胞顺序施用。
161.根据权利要求89-160中任一项所述的方法，其中将所述类固醇和/或所述经修饰的T细胞配制用于肠胃外施用。
162.根据权利要求89-160中任一项所述的方法，其中将所述类固醇和/或所述经修饰的T细胞配制用于口腔施用。
163.根据权利要求89-162中任一项所述的方法，其中所述受试者是人。
164.一种在有需要的受试者体内诱导T细胞扩增的方法，其包括：
a)使T细胞与包含编码嵌合受体的核酸的载体离体接触以生成CD19特异性T细胞，所述嵌合受体识别CD19上的表位；以及
b)向所述受试者施用CD19特异性T细胞的群体与一定量的类固醇的组合，其中所述量的类固醇有效诱导和/或维持所述CD19特异性T细胞在所述受试者体内的扩增。
165.根据权利要求164所述的方法，其中所述载体是慢病毒载体、逆转录病毒载体、睡美人转座子或非病毒载体。
166.根据权利要求164或165所述的方法，其中所述载体是睡美人转座子。
167.根据权利要求164-166中任一项所述的方法，其中所述嵌合受体是嵌合抗原受体(CAR)。
168.根据权利要求164-166中任一项所述的方法，其中所述嵌合受体是抗原特异性工程化T细胞受体。
169.根据权利要求164-168中任一项所述的方法，其中使所述T细胞进一步与编码细胞因子的载体接触。
170.根据权利要求169所述的方法，其中所述细胞因子包括mbIL-15或其融合蛋白。
171.一种在体内诱导T细胞扩增的方法，其包括：
使经修饰的T细胞的群体与第一量的类固醇在体内接触，所述第一量有效诱导和/或维持所述经修饰的T细胞的群体的扩增，其中所述经修饰的T细胞包含至少一种在所述细胞表面上表达的嵌合受体。
172.根据权利要求171所述的方法，其进一步包括向有需要的受试者施用所述经修饰的T细胞群体。
173.根据权利要求171或172所述的方法，其中所述经修饰的T细胞群体是约105至约109个经修饰的T细胞/kg。
174.根据权利要求171或172所述的方法，其中所述经修饰的T细胞群体是约105至约106个经修饰的T细胞/kg。
175.根据权利要求171或172所述的方法，其中所述经修饰的T细胞群体是约106至约107个经修饰的T细胞/kg。
176.根据权利要求171或172所述的方法，其中所述经修饰的T细胞群体是约107至约108个经修饰的T细胞/kg。
177.根据权利要求171或172所述的方法，其中所述经修饰的T细胞群体是约108至约109个经修饰的T细胞/kg。
178.根据权利要求171或172所述的方法，其中所述经修饰的T细胞群体是约105个经修饰的T细胞/kg。
179.根据权利要求171所述的方法，其中在施用所述经修饰的T细胞后至少0.5、1、2、3、4、5、6、8、10、12、15、18、20、24、36、48、60、72、84、96、108小时或120小时施用所述第一量的类固醇。
180.根据权利要求171所述的方法，其中在施用所述经修饰的T细胞后至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、75、90天或更多天施用所述第一量的类固醇。
181.根据权利要求171所述的方法，其进一步包括使T细胞与编码所述嵌合受体的载体离体接触以生成所述经修饰的T细胞，其中所述接触在使所述T细胞与所述第一量的类固醇在体内接触之前进行。
182.根据权利要求181所述的方法，其中所述载体是慢病毒载体、逆转录病毒载体或睡美人转座子。
183.根据权利要求181或182所述的方法，其中所述载体是睡美人转座子。
184.根据权利要求181-183中任一项所述的方法，其中所述T细胞在照护点场所处被修饰并在未经历增殖和激活的情况下施用于所述受试者。
185.根据权利要求171-184中任一项所述的方法，其中所述至少一种嵌合受体是嵌合抗原受体(CAR)。
186.根据权利要求171-184中任一项所述的方法，其中所述至少一种嵌合受体是抗原特异性工程化T细胞受体。
187.根据权利要求171-186中任一项所述的方法，其中刺激所述经修饰的T细胞至少0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30天或更多天。
188.根据权利要求171-186中任一项所述的方法，其中刺激所述经修饰的T细胞至少5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60天或更多天。
189.根据权利要求171-186中任一项所述的方法，其中刺激所述经修饰的T细胞至少7、14、21、28、35、42、49、56、63天或更多天。
190.根据权利要求171所述的方法，其中所述至少一种嵌合受体结合至CD19、CD33、BCMA、CD44、α-叶酸受体、CAIX、CD30、ROR1、CEA、EGP-2、EGP-40、HER2、HER3、叶酸结合蛋白、GD2、GD3、IL-13R-a2、KDR、EDB-F、间皮素、CD22、EGFR、MUC-1、MAGE-A1、h5T4、PSMA、TAG-72、EGFRvIII、CD123和VEGF-R2中的至少一种上的表位。
191.根据权利要求171-190中任一项所述的方法，其中所述经修饰的T细胞进一步包含至少一种共刺激信号传导结构域。
192.根据权利要求191所述的方法，其中所述至少一种共刺激信号传导结构域包括来自CD27、CD28、4-1BB、ICOS、OX40或其片段或组合的信号传导结构域。
193.根据权利要求191或192所述的方法，其中所述至少一种共刺激信号传导结构域包括来自4-1BB、CD28或其组合的信号传导结构域。
194.根据权利要求191-193中任一项所述的方法，其中所述经修饰的T细胞进一步包含CD28共刺激信号传导结构域和CD3-ζ。
195.根据权利要求191-193中任一项所述的方法，其中所述经修饰的T细胞进一步包含CD28共刺激信号传导结构域。
196.根据权利要求171-194中任一项所述的方法，其中将所述第一量的类固醇连续施用1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、75、90天或更多天。
197.根据权利要求171-194中任一项所述的方法，其中将所述第一量的类固醇以预定的时间间隔施用1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、75、90天或更多天。
198.根据权利要求171-194中任一项所述的方法，其中每10天施用所述第一量的类固醇。
199.根据权利要求171-197中任一项所述的方法，其中以1个剂量、2个剂量、3个剂量、4个剂量、5个剂量或更多个剂量施用所述第一量的类固醇。
200.根据权利要求171-199中任一项所述的方法，其中所述第一量的类固醇小于减少细胞因子相关毒性的至少一种症状所需的类固醇的量。
201.根据权利要求171-200中任一项所述的方法，其中所述第一量的类固醇是约1mg/kg。
202.根据权利要求171-201中任一项所述的方法，其中在与所述第一量的类固醇接触后，使所述经修饰的T细胞群体进一步与第二量的类固醇在体内接触。
203.根据权利要求202所述的方法，其中在与所述第一量的类固醇接触后至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、75、90天或更多天提供所述第二量的类固醇。
204.根据权利要求202所述的方法，其中所述与第二量的类固醇的接触在与所述第一量的类固醇接触后至少30天或更多天进行。
205.根据权利要求202所述的方法，其中所述第二量的类固醇少于所述第一量的类固醇。
206.根据权利要求202-205中任一项所述的方法，其中所述第二量的类固醇是约0.9mg/kg至约0.5mg/kg。
207.根据权利要求202-205中任一项所述的方法，其中所述第二量的类固醇是约0.5mg/kg。
208.根据权利要求202-205中任一项所述的方法，其中以连续剂量施用所述第二量的类固醇。
209.根据权利要求208所述的方法，其中每个连续剂量减少0.1mg/kg。
210.根据权利要求202-209中任一项所述的方法，其中将所述第二量的类固醇连续施用1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、75、90天或更多天。
211.根据权利要求202-209中任一项所述的方法，其中将额外量的类固醇以预定的时间间隔施用1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、75、90天或更多天。
212.根据权利要求202-209中任一项所述的方法，其中每10天施用额外量的类固醇。
213.根据权利要求202-212中任一项所述的方法，其中以1个剂量、2个剂量、3个剂量、4个剂量、5个剂量或更多个剂量施用所述额外量的类固醇。
214.根据权利要求171-213中任一项所述的方法，其中所述类固醇包括氟***、美睾酮、美雄酮、十一酸诺龙、环戊丙酸诺龙、氧雄龙、羟甲烯龙、己氧基苯丙酸诺龙、睾酮、强的松、皮质醇、可的松、强的松龙、***、倍他米松、曲安西龙、倍氯米松、氟氢可的松、脱氧皮质酮、醛固酮或司坦唑醇。
215.一种试剂盒，其包含用于如权利要求1-214所述的方法的经修饰的效应细胞和任选的类固醇。
216.一种用于在体内诱导经修饰的效应细胞群体扩增的***，其包括：
经修饰的效应细胞的群体，以及一定量的至少一种类固醇，
其中使所述经修饰的效应细胞的群体与有效量的所述至少一种类固醇在体内接触，导致所述经修饰的效应细胞群体的扩增。
217.根据权利要求216所述的方法，其中所述至少一种类固醇的所述量小于减少细胞因子相关毒性的至少一种症状所需的类固醇的量。
218.根据权利要求216或217所述的***，其中所述经修饰的效应细胞是嵌合抗原受体(CAR)T细胞。
219.根据权利要求216-218中任一项所述的***，其中所述至少一种类固醇包括氟***、美睾酮、美雄酮、十一酸诺龙、环戊丙酸诺龙、氧雄龙、羟甲烯龙、己氧基苯丙酸诺龙、睾酮、强的松、皮质醇、可的松、强的松龙、***、倍他米松、曲安西龙、倍氯米松、氟氢可的松、脱氧皮质酮、醛固酮和司坦唑醇中的至少一种。
CN201780085063.3A 2016-11-30 2017-11-30 类固醇施用和免疫疗法 Pending CN110234327A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201662428474P 2016-11-30 2016-11-30
US62/428,474 2016-11-30
PCT/US2017/064060 WO2018102606A1 (en) 2016-11-30 2017-11-30 Steroid administration and immunotherapy

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN110234327A true CN110234327A (zh) 2019-09-13

Family

ID=62241962

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201780085063.3A Pending CN110234327A (zh) 2016-11-30 2017-11-30 类固醇施用和免疫疗法

Country Status (8)

Country Link
US (1) US20190351019A1 (zh)
EP (1) EP3548047A4 (zh)
JP (1) JP2019536786A (zh)
KR (1) KR20190090390A (zh)
CN (1) CN110234327A (zh)
AU (1) AU2017368248A1 (zh)
CA (1) CA3044261A1 (zh)
WO (1) WO2018102606A1 (zh)

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3490605B1 (en) * 2017-04-01 2023-06-07 AVM Biotechnology, LLC Replacement of cytotoxic preconditioning before cellular immunotherapy
AU2019301147A1 (en) * 2018-07-10 2021-01-21 Precigen, Inc. ROR-1 specific chimeric antigen receptors and uses thereof
WO2020076815A1 (en) * 2018-10-08 2020-04-16 New York University Steroid compounds as treg modulators and uses thereof
SE544015C2 (en) * 2019-06-18 2021-11-02 Tx Medic Ab Allogenic car-t cell therapy
CN113616660A (zh) * 2020-05-07 2021-11-09 深圳埃格林医药有限公司 孕激素制剂及其用途
WO2022016150A1 (en) * 2020-07-17 2022-01-20 Ross Peter M Methods for the treatment of cytokine release syndromes
US11617767B2 (en) 2020-11-20 2023-04-04 Simcere Innovation, Inc. Armed dual CAR-T compositions and methods for cancer immunotherapy
US11969434B1 (en) 2022-08-29 2024-04-30 Lipocine Inc. Oral allopregnanolone compositions and methods of use

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1901911A (zh) * 2003-11-06 2007-01-24 细胞基因公司 使用沙利度胺治疗和控制癌症和其它疾病的组合物和方法
WO2015157384A1 (en) * 2014-04-10 2015-10-15 Seattle Children's Hospital (dba Seattle Children's Research Institute) Defined composition gene modified t-cell products

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011053322A1 (en) * 2009-10-30 2011-05-05 University Of Arkansas For Medical Science Use of autologous effector cells and antibodies for treatment of multiple myeloma
US20150290244A1 (en) * 2012-07-13 2015-10-15 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Use of cart19 to deplete normal b cells to induce tolerance
MX2017001011A (es) * 2014-07-21 2018-05-28 Novartis Ag Tratamiento de cancer de usando un receptor quimerico de antigeno anti-bcma.
WO2016168595A1 (en) * 2015-04-17 2016-10-20 Barrett David Maxwell Methods for improving the efficacy and expansion of chimeric antigen receptor-expressing cells

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1901911A (zh) * 2003-11-06 2007-01-24 细胞基因公司 使用沙利度胺治疗和控制癌症和其它疾病的组合物和方法
WO2015157384A1 (en) * 2014-04-10 2015-10-15 Seattle Children's Hospital (dba Seattle Children's Research Institute) Defined composition gene modified t-cell products

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BMJ: "Antenatal steroids may have no long term side effects", 《BMJ》 *
杨琼等: "皮质类固醇在鼻息肉围手术期治疗中的不良反应", 《中外医疗》 *

Also Published As

Publication number Publication date
US20190351019A1 (en) 2019-11-21
EP3548047A4 (en) 2020-07-01
JP2019536786A (ja) 2019-12-19
WO2018102606A1 (en) 2018-06-07
EP3548047A1 (en) 2019-10-09
CA3044261A1 (en) 2018-06-07
AU2017368248A1 (en) 2019-06-06
KR20190090390A (ko) 2019-08-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11946054B2 (en) Modulating expression of polypeptides via new gene switch expression systems
CN110234327A (zh) 类固醇施用和免疫疗法
US20220064609A1 (en) Expression of novel cell tags
CN110191898A (zh) Cd33特异性嵌合抗原受体
AU2018352984B2 (en) Polypeptide compositions comprising spacers
US20230167187A1 (en) Virus-specific immune cells expressing chimeric antigen receptors
AU2018281316B2 (en) Expression of novel cell tags
RU2796334C9 (ru) Экспрессия новых клеточных меток
JP2021501589A (ja) 新規操作ｔ細胞受容体およびそれを使用した免疫療法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20190913