CN110205325A

CN110205325A - 大豆VQ motif编码基因GmVQ58的应用

Info

Publication number: CN110205325A
Application number: CN201910424828.2A
Authority: CN
Inventors: 王慧; 李霄; 喻德跃; 胡德洲
Original assignee: Nanjing Agricultural University
Current assignee: Nanjing Agricultural University
Priority date: 2019-05-21
Filing date: 2019-05-21
Publication date: 2019-09-06
Anticipated expiration: 2039-05-21
Also published as: CN110205325B

Abstract

本发明公开了大豆VQ motif编码基因GmVQ58的应用。SEQ ID NO.1所示大豆VQ motif编码基因GmVQ58在基因工程改造大豆对斜纹夜蛾抗性中的应用。过表达GmVQ58能够恢复jav1拟南芥突变体对斜纹夜蛾的敏感性。抑制该基因的表达，能够显著提高大豆对斜纹夜蛾的抗性。本发明所述的大豆VQ motif编码基因GmVQ58可通过基因工程转化到大豆毛状根中，并最终负调控大豆的对斜纹夜蛾的抗性。

Description

大豆VQ motif编码基因GmVQ58的应用

技术领域

本发明涉及大豆VQ motif编码基因GmVQ58的应用，属于基因工程领域。

背景技术

大豆，双子叶草本植物，起源于我国，富含植物油脂和植物蛋白，是世界上五大作物之一。大豆经常遭受各种生物胁迫，其中斜纹夜蛾已成为华南地区主要的暴食性害虫。斜纹夜蛾对大豆的产量和品质构成巨大威胁，因此给农民带来了严重的经济损失。尽管化学农药可以控制害虫，但长期使用它们不仅会污染环境，并且会使害虫产生抗药性。使用抗虫品种是最为经济、有效的害虫防治措施。传统的育种方法育出新品种年限长，获得抗性优良的品种较困难，不仅费时费力而且可能徒劳无功。随着基因工程手段的逐步应用和转基因技术的逐渐成熟，可以将抗虫基因导入现有品种的体内。这种转基因育种方法不仅可以避免化学杀虫方法带来的副作用，而且具有育种年限短，收效快等优点，从而为植物防治害虫开辟了一条新的路径。

GmVQ58编码了一种大豆VQ蛋白，其所属VQ家族具有单一且保守的氨基酸序列FxxhVQxhTG。在拟南芥等模式植物中，VQ基因调节不同的生长过程，包括对生物和非生物胁迫的响应，种子发育和光形态建成等。在拟南芥中，AtVQ22(JAV1)通过JA途径负调节拟南芥对植食性害虫(甜菜夜蛾、蚜虫和蔁蚊幼虫)和腐生性真菌(灰霉菌)的抗性反应，且不影响生长发育。AtVQ12能强烈响应灰霉病的侵染，并且在调控植物对灰霉病的基础抗性方面与AtVQ29具有功能冗余性。水稻中，发现OsVQs基因家族成员在响应水稻白叶枯病、ABA和干旱逆境方面均有不同的表现。香蕉中，MaVQ5响应低温胁迫，并且可能作为冷响应转录因子MaWRKY26的抑制子来调控MeJA介导的低温应激反应。大豆中，只有GmVQ35和GmVQ47被报道在拟南芥中负调控植株对灰霉菌的抗性。然而在大豆中还没有VQ基因参与抗虫功能的报道。

发明内容

本发明的目的在于公开大豆VQ基因GmVQ58的抗虫基因工程应用，该基因主要在大豆叶和根里表达，并且在斜纹夜蛾胁迫诱导后于叶片中迅速上调表达。此外，亚细胞定位分析得知GmVQ58为核定位蛋白。GmVQ58可作为目的基因导入拟南芥和大豆毛状根中，均负调控植株对斜纹夜蛾的抗性，同时GmVQ58会分别影响拟南芥AtPR4、AtVSP1和大豆GmPR1、GmVSPβ的表达，且在基因表达水平上存在负相关关系。

本发明的目的可通过以下技术方案实现：

大豆VQ motif编码基因GmVQ58在基因工程改造大豆对斜纹夜蛾抗性中的应用，所述的大豆VQ motif编码基因GmVQ58，编码区序列如SEQ ID NO.1所示。

在拟南芥中，过表达GmVQ58能恢复jav1突变体对斜纹夜蛾的敏感性。在大豆中，抑制该基因的表达，能够显著提高大豆的抗虫性。

有益效果

GmVQ58是一种大豆VQ基因，大豆GmVQ58基因负调控转基因拟南芥和大豆毛状根对斜纹夜蛾的抗性。通过表达量分析，证明GmVQ58主要在大豆叶和根里表达，虫诱导后在叶片中上调表达。通过亚细胞定位分析，证明GmVQ58为核定位蛋白。同时通过功能验证发现该基因负调控转基因拟南芥和大豆毛状根对斜纹夜蛾的抗性，同时分别影响拟南芥AtPR4、AtVSP1和大豆GmPR1、GmVSPβ的表达，且存在负相关关系。因此，GmVQ58可以作为调节大豆对斜纹夜蛾抗性的靶点，用于大豆的抗虫性改造。

附图说明

图1.PCR克隆GmVQ58后琼脂糖凝胶电泳图。目的片段大小486bp。Marker：DL2000

图2.GmVQ58组织表达模式。N＝3。

图3.GmVQ58能响应斜纹夜蛾胁迫诱导。虫诱导后1、6、12、24、48、72h，大豆叶片中GmVQ58表达量的变化(N＝3)。

图4.GmVQ58蛋白的亚细胞定位分析。GFP，GFP荧光；Light，明场；Merge，融合蛋白；35S-GFP，空载对照；35S:GmVQ58-GFP，带GFP标签的GmVQ58蛋白。比例尺：50μm。

图5.JAV1、GmVQ58和两个胁迫相关基因AtPR4和AtVSP1在对照和转基因拟南芥中的表达量。(A)28天的野生型Col-0、jav1突变体和3个GmVQ58-OE jav1转基因株系。比例尺＝1cm。(B)JAV1在Col-0和jav1突变体中的相对表达水平。(C)GmVQ58在Col-0和3个GmVQ58-OE jav1转基因株系中的相对表达水平。Col-0、jav1突变体和3个GmVQ58-OE jav1转基因株系中AtPR4(D)和AtVSP1(E)的相对表达水平。1#，2#，3#GmVQ58-OE jav1分别代表3个独立的在拟南芥jav1突变体背景下过表达GmVQ58的转基因拟南芥株系。两尾测验，N＝3，*：P<0.05；**：P<0.01；***：P<0.001，误差线表示±SEM。

图6.jav1突变体中GmVQ58的过量表达减弱了植物对斜纹夜蛾的抗性。(A)对照(CK)或斜纹夜蛾喂养24小时后，Col-0、jav1突变体和3个GmVQ58-OE jav1转基因株系中的典型莲座叶。比例尺＝4mm。(B)喂养斜纹夜蛾0、2、3和4天称量其平均虫重。两尾测验，N＝3。**：P<0.01，误差线表示±SEM。(C)Col-0、jav1突变体和3个GmVQ58-OE jav1转基因株系喂养斜纹夜蛾0和4天时幼虫的大小。比例尺＝1cm。1#，2#，3#GmVQ58-OE jav1分别代表3个独立的在拟南芥jav1突变体背景下过表达GmVQ58的转基因拟南芥株系。

图7.转基因大豆毛状根中GmVQ58和两个胁迫相关基因的相对表达水平。(A)25天的大豆过表达毛状根GmVQ58-OE、过表达空载毛状根Control-OE、RNA干扰毛状根GmVQ58-RNAi和RNA干扰空载毛状根Control-RNAi。比例尺＝2cm。(B)4种基因型大豆毛状根中GmVQ58的相对表达水平。4种基因型转基因大豆毛状根中GmPR1(C)和GmVSPβ(D)的相对表达水平。两尾测验，N＝3。ns：没有显著差异；*：P<0.05；**：P<0.01。误差线表示±SEM。

图8.转基因毛状根对斜纹夜蛾抗性的鉴定。(A)大豆过表达毛状根GmVQ58-OE和过表达空载毛状根Control-OE喂养斜纹夜蛾0、4和6天时幼虫的大小。比例尺＝1cm。(B)大豆过表达毛状根GmVQ58-OE和过表达空载毛状根Control-OE喂养斜纹夜蛾0、2、3、4、5和6天称量其平均重量。(C)大豆干扰毛状根GmVQ58-RNAi和RNA干扰空载毛状根Control-RNAi喂养斜纹夜蛾0、4和6天时幼虫的大小。比例尺＝1cm。(B)大豆干扰毛状根GmVQ58-RNAi和RNA干扰空载毛状根Control-RNAi喂养斜纹夜蛾0、2、3、4、5和6天称量其平均重量。两尾测验，N＝3。*：P<0.05；**：P<0.01。误差线表示±SEM。

图9.转基因拟南芥PCR检测。(A)拟南芥jav1突变体(T-DNA***)的PCR检测。在特定的时间内，拟南芥jav1突变体不能扩增出1329bp大小的片段，而Col-0植株能扩增出1329bp大小的片段。(B)GmVQ58转基因拟南芥的PCR检测，目的片段大小855bp。M：MarkerDL2000，P：阳性质粒，Col-0：拟南芥野生型Col-0，jav1：拟南芥jav1突变体，1-6：不同的GmVQ58-OEjav1转基因植株，H₂O：空白对照。

图10.转基因毛状根的PCR检测。(A)过表达毛状根GmVQ58-OE和过表达空载毛状根Control-OE的PCR检测。目的片段大小855bp。M：Marker DL2000，P：阳性质粒(pMDC83-GmVQ58)，H₂O：空白对照，ck：阴性毛状根，1-6：不同的携带有pMDC83-GmVQ58质粒的阳性毛状根。(B)干扰毛状根GmVQ58-RNAi和干扰空载毛状根Control-RNAi的PCR检测。目的片段大小625bp。M：Marker DL2000，P：阳性质粒[pB7GWIWG2(II)-GmVQ58]，H₂O：空白对照，ck：阴性毛状根，1-6：不同的携带有pB7GWIWG2(II)-GmVQ58质粒的阳性毛状根。

具体实施方式

下面结合附图及实施例对本发明做进一步说明。

下述实施例中所用方法如无特别说明，均为常规方法。

实施例1

1)大豆VQ基因GmVQ58的克隆

以大豆品种Williams 82为取材对象，取其叶片，用研钵研碎，加入盛有裂解液的1.5mL EP管，充分振荡后，移至1.5mL EP管中，抽提总RNA(Total RNA Kit(天根，北京，中国)。用甲醛变性胶电泳鉴定总RNA质量，分光光度计测定RNA含量。以获得的总RNA为模板，按照日本TaKaRa公司提供的反转录试剂盒(TaKaRa Primer Script^TM RT reagent kit，日本)的说明书进行反转录，得到cDNA第一链后，进行PCR扩增，PCR程序如下PCR程序如下：95℃预变性3分钟，95℃变性15秒，60℃退火15秒，72℃延伸90秒，共35个循环，最后72℃保温5分钟，随后12℃恒温，获得Williams 82的cDNA。

从NCBI数据库和Phytozome v12大豆数据库，找到GmVQ58所对应的基因(Glyma.14g002800，GeneID:102665271)，根据数据库提供的核苷酸序列设计特异引物引物，引物序列见SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4，从大豆品种Williams 82的基因编码区(CDS)序列扩增基因，PCR克隆后随后进行PCR产物割胶纯化、连接及转化工作，挑取阳性单克隆测序，测序后获得具有完整编码区的长度为486bp的大豆GmVQ58基因的CDS序列，其中编码区序列见SEQ ID NO.1，大小为486bp(图1)，核苷酸序列和氨基酸序列(SEQ ID NO.1和SEQIDNO.2)。

2)GmVQ58的组织表达分析

为了鉴定GmVQ58在不同组织中的表达水平，采集大豆品种Williams 82不同发育阶段的根、茎、叶、花、荚和种子：根、茎和叶为V4期；成熟花为R2期；种子和荚在开花后15天采集。样品于液氮速冻后-80℃保存。总RNA的提取同步骤1)。以上述各组织取样获得的总RNA为模板，反转为cDNA。GmVQ58荧光定量引物序列见SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6，检测GmVQ58基因在各组织的表达量变化以大豆组成内参基因Tubulin作为内部参照，引物序列见SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8，进行实时荧光定量PCR反应(Real-time RT-PCR)。

GmVQ58主要在大豆叶和根组织中表达，在茎、花、荚和种子中的表达量较低(图2)，表明GmVQ58可能在叶和根中起作用。

3)GmVQ58在斜纹夜蛾胁迫诱导下的表达分析

将斜纹夜蛾分别放于V4期大豆品种Williams 82植株真叶和第二片复叶上，每株两头。48h后，将虫子取出，诱导处理完成，此时大豆叶片损失面积达20％左右。诱导处理后1、6、12、24、48和72h诱导组和对照组(未诱导组)分别取新鲜叶片，液氮速冻后于-80℃保存。总RNA的提取同步骤1)。以上述诱导组和对照组取样获得的总RNA为模板，反转为cDNA，并进行实时荧光定量PCR反应(Real-time RT-PCR)。GmVQ58荧光定量引物序列和内参基因Tubulin引物序列同步骤2)。

用斜纹夜蛾处理大豆叶片后，GmVQ58表达量显著上调，在48h时达到峰值，在72h时急剧下降(图3)，表明GmVQ58受斜纹夜蛾胁迫诱导表达。

实施例2

1)大豆VQ基因GmVQ58的克隆

以大豆品种Williams 82叶片总RNA为模板，经反转录合成cDNA第一链后，进行PCR扩增，引物序列见SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10，PCR程序如下：95℃预变性3分钟，95℃变性15秒，60℃退火15秒，72℃延伸90秒，共35个循环，最后72℃保温5分钟，随后4℃恒温，测序后获得不含终止密码子的大豆GmVQ58基因的CDS序列。

2)亚细胞定位载体的构建

构建亚细胞定位载体时，将不含终止密码子的大豆GmVQ58基因的CDS序列***到含有GFP标签的pFGC5941表达载体。该载体具有35S启动子，可强烈诱导目的基因GmVQ58在受体中的表达。然后通过冻融法将载体转入根癌农杆菌菌株EHA105中。同时将空载pFGC5941也转化到EHA105中，作为空载对照。

3)GmVQ58的亚细胞定位

将含有35S:GmVQ58-GFP和35S:GFP的菌液分别注射到7-8周大小的本氏烟的叶片中，培养36-48小时后用Leica TCS SP2型激光共聚焦显微镜观察报告基因GFP的定位情况。GFP信号显示，GmVQ58-GFP融合蛋白只定位于细胞核，而空载定位于整个烟草细胞(图4)。

实施例3基因GmVQ58的基因工程应用

1)大豆VQ基因GmVQ58的克隆

以大豆品种Williams 82叶片总RNA为模板，经反转录合成cDNA第一链后，进行PCR扩增，引物序列见SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4，PCR程序如下：95℃预变性3分钟，95℃变性15秒，60℃退火15秒，72℃延伸90秒，共35个循环，最后72℃保温5分钟，随后4℃恒温，测序后获得具有完整编码区的长度为486bp的大豆GmVQ58基因的CDS序列，其序列见SEQ IDNO.1。

2)植物表达载体的构建

构建过表达载体时，将GmVQ58基因序列与Invitrogen公司的Technology withClonase^TMII试剂盒中的pDONR221载体进行BP反应，并进行菌液PCR测序验证，引物序列见SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12，具体的PCR过程与步骤1)相同，获得入门克隆。接着将得到的入门克隆与Invitrogen公司开发的目的表达载体pMDC83进行重组交换，得到pMDC83-GmVQ58植物过量表达载体，植物转化载体pMDC83含有2x 35S强启动子，可强烈诱导目的基因GmVQ58在受体中的表达。然后通过冻融法将载体转入根癌农杆菌菌株EHA105和K599中。同时将空载pMDC83也转化到K599中，作为空载对照。

构建RNA干扰载体时，GmVQ58CDS全长小于500bp，符合干扰片段的长度，因此扩增其全长连接干扰载体，引物序列和接下来的步骤均与构建过表达载体一样，只是将pMDC83载体换成pB7GWIWG2(II)载体。将构建好的载体pBI-GmVQ58和空载pB7GWIWG2(II)转化到K599中。

3)转基因拟南芥植株的获得

利用沾花法转化拟南芥，将jav1拟南芥突变体花蕾浸于步骤2)含pMDC83-GmVQ58的根癌农杆菌菌株EHA105菌液中，侵染30s～1min。用保鲜膜或保鲜袋包裹植株以保持湿度，暗培养24h。之后可视植株生长状况，待新的一批花序长出后再次转化。将拟南芥放于正常条件下继续生长，收获种子。选择三个纯合的T₃代GmVQ58-OE jav1转基因拟南芥株系进行表型分析和对斜纹夜蛾的抗性鉴定(图5A)。为检测是否为jav1拟南芥突变体和是否为过表达GmVQ58转基因拟南芥，分别利用特异性引物对提取的DNA片段进行PCR检测(SEQ IDNO.13、SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.15和SEQ ID NO.16)，PCR检测胶图见图9。实时荧光定量qPCR发现与野生型对照相比，jav1拟南芥突变体中JAV1的表达量显著降低(图5B)。Jav1和拟南芥内参Tubulin荧光定量引物序列见SEQ ID NO.17、SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.19和SEQ ID NO.20。而GmVQ58基因在三个GmVQ58-OE jav1转基因拟南芥中的表达量要显著高于野生型对照中的表达量(图5C)。GmVQ58和大豆内参Tubulin荧光定量引物序列同上。

室内用培养皿喂养大小一致的3龄斜纹夜蛾，采摘28天左右的野生型对照Col-0、jav1拟南芥突变体和三个GmVQ58-OE jav1拟南芥转基因株系的叶片喂食斜纹夜蛾。每个培养皿5头虫，3个重复。每天更换新鲜叶片，分别于喂养第0，2，3和4天称重。计算每皿平均虫重，并以斜纹夜蛾平均虫重作为抗性鉴定指标。当喂食4天后，喂食jav1突变体的斜纹夜蛾幼虫吞食少量叶片，并且生长缓慢，而Col-0或GmVQ58-OE jav1转基因拟南芥则促进了幼虫的生长(图6A和C)。同时，喂食Col-0或GmVQ58-OE jav1拟南芥的斜纹夜蛾幼虫的平均虫重明显高于喂食jav1突变体的幼虫的平均虫重(图6B)。此外，qRT-PCR还检测了两个抗虫相关基因的表达水平。AtPR4(At3g04720)在jav1突变体中的表达水平显著高于其在GmVQ58-OEjav1拟南芥或Col-0中的表达水平(图5D)。同样，与GmVQ58-OE jav1拟南芥或Col-0相比，jav1突变体中的AtVSP1(营养储存蛋白1，At5g24780)的表达显著积累(图5E)。AtPR4和AtVSP1荧光定量引物序列见SEQ ID NO.21、SEQ ID NO.22、SEQ ID NO.23和SEQ ID NO.24。

4)转基因大豆毛状根的获得

对生长5天的大豆幼苗子叶背部进行创伤处理，再将步骤2)获得的分别含pMDC83-GmVQ58和pBI-GmVQ58载体以及相应空载对照的根癌农杆菌菌株K599菌液接种到大豆子叶背部的伤口处，并将接种后的子叶置于含有500μg/mL羧卞和50μg/mL头孢的White培养基中。25℃黑暗培养3-4周后，毛状根会从子叶背部伤口处长出，将过表达毛状根称之为GmVQ58-OE，其空载对照为Control-OE；将干扰毛状根称之为GmVQ58-RNAi，其空载对照为Control-RNAi。为检测是否为阳性毛状根，利用特异性引物对提取的DNA片段进行PCR检测。过表达毛状根检测引物序列与上述3)中过表达拟南芥检测序列一致，PCR阳性毛状根检测胶图见图10A。RNA干扰毛状根检测引物序列见SEQ ID NO.25和SEQ IDNO.26，PCR阳性毛状根检测见图10B。实时荧光定量qPCR发现在过表达毛状根(GmVQ58-OE)中GmVQ58基因表达量要显著高于Control-OE的，而在RNA干扰的毛状根中(GmVQ58-RNAi)中GmVQ58基因表达量要显著低于Control-RNAi中的(图7B)。GmVQ58和大豆内参Tubulin荧光定量引物序列同上。

室内用培养皿喂养大小一致的3龄斜纹夜蛾，采摘25天左右4种基因型的大豆毛状根(GmVQ58-OE、Control-OE、GmVQ58-RNAi和Control-RNAi)喂食斜纹夜蛾。每个培养皿5头虫，3个重复。每天更换新鲜毛状根，分别于喂养0，2，3，4，5和6天称重。计算每皿平均虫重，并以斜纹夜蛾平均虫重作为抗性鉴定指标。用GmVQ58-OE转基因毛根喂养的斜纹夜蛾的平均虫重与其对照喂养的没有明显差异，然而用GmVQ58-RNAi转基因毛根喂养的斜纹夜蛾的平均虫重显著低于其对照喂养的平均虫重。同时，我们测定了毛状根中抗虫相关基因GmPR1(Glyma.15g062500)和GmVSPβ(Glyma.08g200100)的相对表达量，发现GmPR1和GmVSPβ基因的表达量在GmVQ58-OE毛状根与Control-OE毛状根中无明显差异。然而，与Control-RNAi毛状根相比，GmVQ58-RNAi毛状根中的GmPR1和GmVSPβ转录水平显著升高。GmPR1和GmVSPβ荧光定量引物序列见SEQ ID NO.27、SEQ ID NO.28、SEQ ID NO.29和SEQ ID NO.30。

序列表

<110> 南京农业大学

<120> 大豆VQ motif编码基因GmVQ58的应用

<160> 30

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 486

<212> DNA

<213> 大豆(Glycine max)

<400> 1

atgactgcta ccatgtctgg ccctattcct aatgatcact ggctccattt ctatcaacaa 60

aaccaattcc cctcttccgt ttccgacgcc acaaccgtga caaccaccgc cgcgccggcc 120

aagctaagcc cagaaggcgg agtctcaaag cccattagac ggcgttcacg ggcctcaagg 180

agaactccca ccactctgct gaacacggac accagcaatt tccgggccat ggtgcaacag 240

ttcactggag ctccttctgc gcctgatatg tttgggagcc cagtccctgt caacccaaat 300

ggcctcatgt tggccccttc tcagtccctt tatcaccaac aaaaccactt agcatacaga 360

gatggtggag acaagggttt ttttcagaga ctgagcaacc caacagcaac agctccaaat 420

aatgatcgag ctgatgaggt tttggtggac catggcgggc gtttcttccc aacaacttct 480

tcttga 486

<210> 2

<211> 161

<212> PRT

<213> 大豆(Glycine max)

<400> 2

Met Thr Ala Thr Met Ser Gly Pro Ile Pro Asn Asp His Trp Leu His

1 5 10 15

Phe Tyr Gln Gln Asn Gln Phe Pro Ser Ser Val Ser Asp Ala Thr Thr

20 25 30

Val Thr Thr Thr Ala Ala Pro Ala Lys Leu Ser Pro Glu Gly Gly Val

35 40 45

Ser Lys Pro Ile Arg Arg Arg Ser Arg Ala Ser Arg Arg Thr Pro Thr

50 55 60

Thr Leu Leu Asn Thr Asp Thr Ser Asn Phe Arg Ala Met Val Gln Gln

65 70 75 80

Phe Thr Gly Ala Pro Ser Ala Pro Asp Met Phe Gly Ser Pro Val Pro

85 90 95

Val Asn Pro Asn Gly Leu Met Leu Ala Pro Ser Gln Ser Leu Tyr His

100 105 110

Gln Gln Asn His Leu Ala Tyr Arg Asp Gly Gly Asp Lys Gly Phe Phe

115 120 125

Gln Arg Leu Ser Asn Pro Thr Ala Thr Ala Pro Asn Asn Asp Arg Ala

130 135 140

Asp Glu Val Leu Val Asp His Gly Gly Arg Phe Phe Pro Thr Thr Ser

145 150 155 160

Ser

<210> 3

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

atgactgcta ccatgtctgg c 21

<210> 4

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

tcaagaagaa gttgttggga ag 22

<210> 5

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

agaaggcgga gtctcaaagc 20

<210> 6

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

atatcaggcg cagaaggagc 20

<210> 7

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

cctcgttcga attcgctttt tg 22

<210> 8

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

caactgtctt gtcacttggc at 22

<210> 9

<211> 29

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 9

gctctagaat gactgctacc atgtctggc 29

<210> 10

<211> 32

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 10

ccgctcgaga gaagaagttg ttgggaagaa ac 32

<210> 11

<211> 52

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 11

ggggacaagt ttgtacaaaa aagcaggctc catgactgct accatgtctg gc 52

<210> 12

<211> 51

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 12

ggggaccact ttgtacaaga aagctgggtt caagaagaag ttgttgggaa g 51

<210> 13

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 13

ttttctctac cacaaaaccg c 21

<210> 14

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 14

ccaacaagtt gacgaaattg g 21

<210> 15

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 15

aggccaccaa tgcacatttt 20

<210> 16

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 16

tgaagaagat ggtcctctcc tg 22

<210> 17

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 17

gtccagaaac tggccgtgta 20

<210> 18

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 18

atccgacgat gaagtgaggc 20

<210> 19

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 19

ctcaagaggt tctcagcagt a 21

<210> 20

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 20

tcaccttctt catccgcagt t 21

<210> 21

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 21

cgtgagtgct tattgctcca 20

<210> 22

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 22

atacttgctc cgccatgc 18

<210> 23

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 23

gtttggatct ttgacctaga cga 23

<210> 24

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 24

ctctaaccac gaccagtacg c 21

<210> 25

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 25

gctcaacaca tgagcgaaac 20

<210> 26

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 26

aagaaggaag caagtcaaca cac 23

<210> 27

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 27

aactatgctc cccctggcaa ctatattg 28

<210> 28

<211> 30

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 28

tctgaagtgg tagcttctac atcgaaacaa 30

<210> 29

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 29

ggccgtaaca gaagcaaacc 20

<210> 30

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 30

aggtacgtgg agtgtcttag gt 22

Claims

1.大豆VQ motif编码基因GmVQ58在基因工程改造大豆对斜纹夜蛾抗性中的应用，所述的大豆VQ motif编码基因GmVQ58，编码区序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于过表达所述的GmVQ58基因能够恢复jav1拟南芥突变体对斜纹夜蛾的敏感性。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于抑制所述的GmVQ58基因的表达，能够显著提高大豆对斜纹夜蛾的抗性。