CN110201161A - 一种组合物、制备方法及其在杀伤细胞株中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于抗肿瘤靶向药研发领域，尤其涉及一种组合物、制备方法及其在杀伤细胞株中的应用。本发明提供了一种组合物，原料包括：黑鳞、5‑氨基乙酰丙酸、聚乙二醇以及转铁蛋白受体结合肽。本发明还提供了一种上述组合物的制备方法，本发明提供了一种上述组合物或以上述制备方法得到的产品在杀伤SAS、HSC‑2以及HSC‑3细胞株中的应用。经实验测定可得，与阳性对照药相比，本发明提供的技术方案制得的产品，对于肿瘤细胞株的生长繁殖具有显著的抑制作用，同时还能进一步促进肿瘤细胞的凋亡。本发明提供的一种组合物、制备方法及其在杀伤细胞株中的应用，解决了现有技术中，肿瘤靶向药物存在着难以兼顾在体稳定性、靶向聚集能力及载体降解性能差的技术缺陷。

Description

一种组合物、制备方法及其在杀伤细胞株中的应用
技术领域
本发明属于抗肿瘤靶向药研发领域，尤其涉及一种组合物、制备方法及其在杀伤细胞株中的应用。
背景技术
口腔鳞状细胞癌(Oral squamous cell carcinoma，OSCC)是头颈部恶性肿瘤之一，且发病率呈逐年上升趋势，目前该病的治疗方式主要为手术治疗。但是，手术治疗通常会切除大面积口腔组织器官，严重影响患者术后的生活质量。因此，如何高效无创治疗OSCC是临床急需解决的问题之一。
肿瘤声动力疗法(sonodynamic therapy，SDT)是利用超声波激活选择性聚集在肿瘤组织的声敏药物，用于SDT治疗的声敏药物由于其体内稳定性不理想和靶向肿瘤富集能力有限等问题，大多还处于研究阶段。目前研究发现，SDT在神经胶质瘤、乳腺癌和肝癌等多种肿瘤以及动脉粥样硬化斑块等非肿瘤疾病的无创治疗中具有明确的治疗效果。
声敏剂5-ALA是人体内血红素代谢过程的产物，具有良好的生物安全性以及优秀的声动力效应，被广大研究者重点关注。纳米材料作为载体能够改善声敏剂的亲水性提高其在体内的稳定性。同时，利用纳米材料的实体瘤高通透性和滞留效应，可以增加声敏剂在肿瘤组织中的被动靶向富集。其中，有机纳米载体常用主要包括脂质体和阳离子聚合物等。有机纳米载体具有较高的载药率，体内容易降解等优点，但其表面较高的正电势导致其较高的细胞毒性以及较差的化学稳定性；无机纳米载体具有更强的化学稳定性和可控的物理性能，以及易于进行表面修饰可实现多功能化等优点，但是，无机纳米载体降解性能较差，生物相容性限制了其在纳米载体中的应用。
因此，研发出一种组合物、制备方法及其在杀伤细胞株中的应用，用于解决现有技术中，肿瘤靶向药物存在着难以兼顾在体稳定性、靶向聚集能力及载体降解性能差的技术缺陷，成为了本领域技术人员亟待解决的问题。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种组合物、制备方法及其在杀伤细胞株中的应用，用于解决现有技术中，肿瘤靶向药物存在着难以兼顾在体稳定性、靶向聚集能力及载体降解性能差的技术缺陷。
本发明提供了一种组合物，所述组合物的原料包括：黑鳞(BP)、5-氨基乙酰丙酸(5-ALA)、聚乙二醇(PEG)以及转铁蛋白受体结合肽(T7)。
优选地，以质量份计，所述组合物的原料包括：黑鳞1～2份、5-氨基乙酰丙酸份50～80份、聚乙二醇12～32份以及转铁蛋白受体结合肽6～16份。
本发明还提供了一种包括以上任意一项所述组合物的制备方法，所述制备方法为：
步骤一、制备BP NSs：黑鳞通过液相剥离法制备BP NSs；
步骤二、制备T7-PEG-NH2：Mal-PEG-NH2溶液与T7-Cys溶液混合后搅拌，干燥得T7-PEG-NH2；
步骤三、制备BP-PEG-T7NSs：BP NSs溶液与MAL-PEG混合，超声处理后搅拌，得BP-PEG-T7NSs；
步骤四、制备BP-PEG-T7/5-ALA NSs：BP-PEG-T7NSs与5-ALA溶液混合后孵育，得BP-PEG-T7/5-ALA NSs。
优选地，所述制备方法还包括：洗涤，所述洗涤步骤在步骤四后进行；
步骤四所得粗品BP-PEG-T7/5-ALA NSs经去离子水洗涤6～8次后，得纯品BP-PEG-T7/5-ALA NSs。
优选地，步骤一中，所述液相剥离法为：黑鳞溶于NMP中，以200～300W的强度超声间歇震动5～8h后，于0℃继续超声6～12h，超声完成后除去未被剥离的黑鳞晶体，取上清液离心，收集沉淀物即为BP NSs。
优选地，所述超声间歇震动的方法为：每间歇2～5s后，超声作用1～4s；
所述除去未被剥离的黑鳞晶体的方法为：以6000～8000rpm的转速离心15～30min；
所述上清液离心的转速为8000～12000rpm，所述上清液离心的时间为15～30min。
优选地，步骤二中，所述Mal-PEG-NH2溶液的溶剂为DMSO和/或DMF，所述Mal-PEG-NH2溶液的浓度为15～25mg/ml；
步骤二中，所述T7-Cys溶液的溶剂为PBS，所述T7-Cys溶液的溶度为0.2～0.8mg/ml；
步骤二中，所述搅拌的温度为室温，所述搅拌的时间为10～15h，所述干燥的方法为冷冻干燥；
步骤二中，所述搅拌完成后还包括洗涤，所述洗涤的方法为去离子水透析。
优选地，步骤三中，所述超声处理的时间为20～40min，所述搅拌的时间为2～6h。
优选地，步骤四中，所述5-ALA溶液的溶剂为DMSO和/或DMF，所述5-ALA溶液的浓度为0.1～0.4mg/ml，所述孵育的时间为20～30h。
本发明提供了一种包括以上任意一项所述的组合物或以上任意一项所述的制备方法得到的产品在杀伤SAS、HSC-2、HSC-3、Ca922以及Sa-3细胞株中的应用。
本发明提供的技术方案中，采用黑鳞纳米片作为载体，与传统无机纳米材料相比，黑鳞由单一磷元素构成，磷元素是机体必须的微量元素，它的代谢不会引起免疫反应，使其具有较高的生物安全性优秀的生物降解性能；同时，二维黑磷纳米片为波形层状结构，具有极高的比表面积，使其在药物及基因递送中的应用显示出了巨大的优势。黑磷表面有众多活性位点，易于修饰，还具有较宽的禁带能隙，可以实现单重态与三重态间的跃迁，激发三重态的持续时间可长达100μs，有利于其与氧分子相互作用产生1O2，黑磷纳米片的这一特点使其在超声波的激发下，具备协同促进声动力效应的特性。经研究证实，黑磷纳米片可高效固载和稳定释放5-ALA，具有良好的生物相容性和可降解性。
同时，本发明提供的技术方案中，为进一步地提高纳米声敏剂的肿瘤靶向递送效果，还通过肿瘤表面特异性受体结合的内吞作用实现纳米声敏剂主动靶向OSCC细胞，从而更精准高效地富集于肿瘤部位，减少或避免在正常组织的分布和累计。本发明提供的技术方案中，通过一种小分子短肽(转铁蛋白受体结合肽，HAIYPRH，T7)特异性识别靶向结合OSCC肿瘤细胞表面存在高表达转铁蛋白受体(Transferrin Receptor，TfR)；同时，由于T7空间位阻小(Kd<10nm)，与TfR结合后均不影响Tf的两个位点7-mer sequence和12-mersequence与TfR结合，外源性T7进入体内不会受到内源性Tf的竞争性抑制作用，从而极大得提高了与肿瘤细胞靶向结合得能力。采用T7修饰黑磷纳米片构建纳米声敏剂，可以主动靶向递送并释放5-ALA至OSCC细胞内，实现SDT对OSCC精准靶向治疗。
综上所述，本发明提供了一种组合物，所述组合物的原料包括：黑鳞(BP)、5-氨基乙酰丙酸(5-ALA)、聚乙二醇(PEG)以及转铁蛋白受体结合肽(T7)。本发明还提供了一种上述组合物的制备方法，本发明提供了一种上述组合物或以上述制备方法得到的产品在杀伤SAS、HSC-2、HSC-3、Ca922以及Sa-3细胞株中的应用。经实验测定可得，与阳性对照药相比，本发明提供的技术方案制得的产品，对于肿瘤细胞株的生长繁殖具有显著的抑制作用，同时还能进一步促进肿瘤细胞的凋亡。本发明提供的一种组合物、制备方法及其在杀伤细胞株中的应用，解决了现有技术中，肿瘤靶向药物存在着难以兼顾在体稳定性、靶向聚集能力及载体降解性能差的技术缺陷。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
图1为本发明提供的BP-PEG-T7/5-ALA NSs制备方法的流程示意图；
图2为实施例4中，BP-PEG-T7/5-ALA NSs对于肿瘤细胞株生长抑制效果的结果示意图；
图3为实施例5中，测定BP-PEG-T7/5-ALA生物相容性的结果示意图；
图4为实施例5中，测定BP-PEG-T7/5-ALA血液相容性的结果示意图；
图5为实施例5中，测定BP-PEG-T7/5-ALA体内生物安全性的结果示意图。
具体实施方式
本发明实施例提供了一种组合物、制备方法及其在杀伤细胞株中的应用，用于解决现有技术中，肿瘤靶向药物存在着难以兼顾在体稳定性、靶向聚集能力及载体降解性能差的技术缺陷。
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
为了更详细说明本发明，下面结合实施例对本发明提供的一种组合物、制备方法及其在杀伤细胞株中的应用，进行具体地描述。
实施例1
本实施例为制备BP-PEG-T7/5-ALA NSs的其中一个实施例。
步骤一、制备BP NSs：黑鳞通过液相剥离法制备BP NSs；其中，液相剥离法为：黑鳞溶于NMP中，以200W的强度超声间歇震动6h后，于0℃继续超声8h，超声完成后除去未被剥离的黑鳞晶体，取上清液离心，收集沉淀物即为BP NSs。本实施例中，超声间歇震动的方法为：每间歇5s后，超声作用1s；除去未被剥离的黑鳞晶体的方法为：以6500rpm的转速离心20min；上清液离心的转速为10000rpm，上清液离心的时间为20min。
步骤二、制备T7-PEG-NH2：Mal-PEG-NH2溶液与T7-Cys溶液混合后搅拌，干燥得T7-PEG-NH2；Mal-PEG-NH2溶液的溶剂为DMF，Mal-PEG-NH2溶液的浓度为15mg/ml；步骤二中，T7-Cys溶液的溶剂为PBS，T7-Cys溶液的溶度为0.2mg/ml；步骤二中，搅拌的温度为室温，搅拌的时间为15h，干燥的方法为冷冻干燥；步骤二中，搅拌完成后还包括洗涤，洗涤的方法为去离子水透析。
步骤三、制备BP-PEG-T7NSs：BP NSs溶液与MAL-PEG混合，超声处理后搅拌，得BP-PEG-T7NSs；超声处理的时间为20min，搅拌的时间为6h。
步骤四、制备BP-PEG-T7/5-ALA NSs：BP-PEG-T7NSs与5-ALA溶液混合后孵育，得BP-PEG-T7/5-ALA NSs粗品；5-ALA溶液的溶剂为DMSO，5-ALA溶液的浓度为0.1mg/ml，孵育的时间为25h。
步骤五、所得粗品BP-PEG-T7/5-ALA NSs经去离子水洗涤6～8次后，得纯品BP-PEG-T7/5-ALA NSs。
本实施例中，质量份计，各原料的投料比为：黑鳞1份、5-氨基乙酰丙酸份80份、聚乙二醇20份以及转铁蛋白受体结合肽6份。
实施例2
本实施例为制备BP-PEG-T7/5-ALA NSs的其中一个实施例。
步骤一、制备BP NSs：黑鳞通过液相剥离法制备BP NSs；其中，液相剥离法为：黑鳞溶于NMP中，以300W的强度超声间歇震动5h后，于0℃继续超声12h，超声完成后除去未被剥离的黑鳞晶体，取上清液离心，收集沉淀物即为BP NSs。本实施例中，超声间歇震动的方法为：每间歇2s后，超声作用2s；除去未被剥离的黑鳞晶体的方法为：以6000rpm的转速离心15min；上清液离心的转速为12000rpm，上清液离心的时间为15min。
步骤二、制备T7-PEG-NH2：Mal-PEG-NH2溶液与T7-Cys溶液混合后搅拌，干燥得T7-PEG-NH2；Mal-PEG-NH2溶液的溶剂为DMSO，Mal-PEG-NH2溶液的浓度为22mg/ml；步骤二中，T7-Cys溶液的溶剂为PBS，T7-Cys溶液的溶度为0.4mg/ml；步骤二中，搅拌的温度为室温，搅拌的时间为12h，干燥的方法为冷冻干燥；步骤二中，搅拌完成后还包括洗涤，洗涤的方法为去离子水透析。
步骤三、制备BP-PEG-T7NSs：BP NSs溶液与MAL-PEG混合，超声处理后搅拌，得BP-PEG-T7NSs；超声处理的时间为25min，搅拌的时间为2h。
步骤四、制备BP-PEG-T7/5-ALA NSs：BP-PEG-T7NSs与5-ALA溶液混合后孵育，得BP-PEG-T7/5-ALA NSs粗品；5-ALA溶液的溶剂为DMS，5-ALA溶液的浓度为0.4mg/ml，孵育的时间为30h。
步骤五、所得粗品BP-PEG-T7/5-ALA NSs经去离子水洗涤6～8次后，得纯品BP-PEG-T7/5-ALA NSs。
本实施例中，质量份计，各原料的投料比为：黑鳞1.3份、5-氨基乙酰丙酸份70份、聚乙二醇12份以及转铁蛋白受体结合肽16份。
实施例3
本实施例为制备BP-PEG-T7/5-ALA NSs的其中一个实施例。
步骤一、制备BP NSs：黑鳞通过液相剥离法制备BP NSs；其中，液相剥离法为：黑鳞溶于NMP中，以260W的强度超声间歇震动8h后，于0℃继续超声6h，超声完成后除去未被剥离的黑鳞晶体，取上清液离心，收集沉淀物即为BP NSs。本实施例中，超声间歇震动的方法为：每间歇4s后，超声作用4s；除去未被剥离的黑鳞晶体的方法为：以8000rpm的转速离心30min；上清液离心的转速为8000rpm，上清液离心的时间为30min。
步骤二、制备T7-PEG-NH2：Mal-PEG-NH2溶液与T7-Cys溶液混合后搅拌，干燥得T7-PEG-NH2；Mal-PEG-NH2溶液的溶剂为DMSO，Mal-PEG-NH2溶液的浓度为25mg/ml；步骤二中，T7-Cys溶液的溶剂为PBS，T7-Cys溶液的溶度为0.8mg/ml；步骤二中，搅拌的温度为室温，搅拌的时间为10h，干燥的方法为冷冻干燥；步骤二中，搅拌完成后还包括洗涤，洗涤的方法为去离子水透析。
步骤三、制备BP-PEG-T7NSs：BP NSs溶液与MAL-PEG混合，超声处理后搅拌，得BP-PEG-T7NSs；超声处理的时间为40min，搅拌的时间为5h。
步骤四、制备BP-PEG-T7/5-ALA NSs：BP-PEG-T7NSs与5-ALA溶液混合后孵育，得BP-PEG-T7/5-ALA NSs粗品；5-ALA溶液的溶剂为DMF，5-ALA溶液的浓度为0.3mg/ml，孵育的时间为20h。
步骤五、所得粗品BP-PEG-T7/5-ALA NSs经去离子水洗涤6～8次后，得纯品BP-PEG-T7/5-ALA NSs。
本实施例中，质量份计，各原料的投料比为：黑鳞2份、5-氨基乙酰丙酸份50份、聚乙二醇32份以及转铁蛋白受体结合肽14份。
实施例4
本实施例为验证BP-PEG-T7/5-ALA NSs对于肿瘤细胞株生长抑制效果的具体实施例。
本实施例中，实验分组为：阴性对照组(C组)，阳性对照组应用5-Fu(5-Fu组)5-ALA组，BP-PEG-T7/5-ALA组。将各组分别与OSCC肿瘤细胞包括(SAS、HSC-2、HSC-3、Ca922、Sa-3)共培养，给予相同剂量的超声(1.0MHz；1W/cm2；20％占空比)治疗5min，建立SDT治疗OSCC细胞模型：应用CCK-8检测细胞增殖情况，计算细胞存活率。
所得实验结果请进一步参阅图2，结果为均数±标准差(n＝6)，*p<0.05，与C组相比具有统计学意义。
实施例5
本实施例为测定BP-PEG-T7/5-ALA NSs在体内相容性及代谢情况的具体实施例。
5.1生物相容性
测定选用细胞为成纤维细胞(3T3)，实验分为三组：每组分别加入PBS(对照组)、二氧化硅SiO2和BP-PEG-T7/5-ALA，共培养6h，应用CCK-8检测细胞增殖活性，计算细胞存活率。
所得实验结果请参阅图3，从图3中可以得出，BP-PEG-T7/5-ALA NSs良好。结果为均数±标准差(n＝6)，*p<0.05，与对照组(C组)相比具有统计学意义。
5.2血液相容性
将2.5μg/mL浓度的纳米银颗粒(Ag)溶液和BP-PEG-T7/5-ALA溶液，分别加入15mL离心管内，每管10mL，每个浓度各制备3管。离心管内加入10mL生理盐水作为阴性对照，离心管内加入10mL蒸馏水作为阳性对照，阴性对照和阳性对照各制备3管。
心脏采取家兔血液4mL(2％草酸钾溶液1:9抗凝)，与5mL生理盐水稀释混匀。将样品管，阴性对照管和阳性对照管放入水浴箱内37℃水浴30min，向各管内分别加入0.2mL稀释抗凝兔血，继续在恒温水浴箱内37℃水浴60min，水浴结束后取出试管，放入离心机内800g离心5min，观察试管内上清液的颜色变化，吸取上清液，用紫外分光光度计在545nm处读取吸光度值。
其中，A、A1和A2分别表示实验组吸光值、阴性对照组吸光值和阳性对照组吸光值。
所得结果请参阅图4，从图4可以得出，BP-PEG-T7/5-ALA具有良好的血液相容性。
5.3体内生物安全性
建立裸鼠OSCC荷瘤模型，对照组尾静脉注射生理盐水、实验组尾静脉注射浓度为2.5μg/mL的BP-PEG-T7/5-ALA溶液，15天后处死小鼠迅速分离肝脏、脾脏、心脏、肾脏和肺器官。
所得结果请参阅图5，通过HE染色观察主要脏器组织病理学，未见明显的损伤和病理改变。证明BP-PEG-T7/5-AL体内生物安全性良好。
综上所述，本发明提供了一种组合物，所述组合物的原料包括：黑鳞(BP)、5-氨基乙酰丙酸(5-ALA)、聚乙二醇(PEG)以及转铁蛋白受体结合肽(T7)。本发明还提供了一种上述组合物的制备方法，本发明提供了一种上述组合物或以上述制备方法得到的产品在杀伤SAS、HSC-2、HSC-3、Ca922以及Sa-3细胞株中的应用。经实验测定可得，与阳性对照药相比，本发明提供的技术方案制得的产品，对于肿瘤细胞株的生长繁殖具有显著的抑制作用，同时还能进一步促进肿瘤细胞的凋亡。本发明提供的一种组合物、制备方法及其在杀伤细胞株中的应用，解决了现有技术中，肿瘤靶向药物存在着难以兼顾在体稳定性、靶向聚集能力及载体降解性能差的技术缺陷。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种组合物，其特征在于，所述组合物的原料包括：黑鳞、5-氨基乙酰丙酸、聚乙二醇以及转铁蛋白受体结合肽。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，以质量份计，所述组合物的原料包括：黑鳞1～2份、5-氨基乙酰丙酸份50～80份、聚乙二醇12～32份以及转铁蛋白受体结合肽6～16份。
3.一种包括权利要求1至2任意一项所述组合物的制备方法，其特征在于，所述制备方法为：
步骤一、制备BP NSs：黑鳞通过液相剥离法制备BP NSs；
步骤二、制备T7-PEG-NH2：Mal-PEG-NH2溶液与T7-Cys溶液混合后搅拌，干燥得T7-PEG-NH2；
步骤三、制备BP-PEG-T7 NSs：BP NSs溶液与MAL-PEG混合，超声处理后搅拌，得BP-PEG-T7 NSs；
步骤四、制备BP-PEG-T7/5-ALA NSs：BP-PEG-T7 NSs与5-ALA溶液混合后孵育，得BP-PEG-T7/5-ALA NSs。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法还包括：洗涤，所述洗涤步骤在步骤四后进行；
步骤四所得粗品BP-PEG-T7/5-ALA NSs经去离子水洗涤6～8次后，得纯品BP-PEG-T7/5-ALA NSs。
5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤一中，所述液相剥离法为：黑鳞溶于NMP中，以200～300W的强度超声间歇震动5～8h后，于0℃继续超声6～12h，超声完成后除去未被剥离的黑鳞晶体，取上清液离心，收集沉淀物即为BP NSs。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述超声间歇震动的方法为：每间歇2～5s后，超声作用1～4s；
所述除去未被剥离的黑鳞晶体的方法为：以6000～8000rpm的转速离心15～30min；
所述上清液离心的转速为8000～12000rpm，所述上清液离心的时间为15～30min。
7.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤二中，所述Mal-PEG-NH2溶液的溶剂为DMSO和/或DMF，所述Mal-PEG-NH2溶液的浓度为15～25mg/ml；
步骤二中，所述T7-Cys溶液的溶剂为PBS，所述T7-Cys溶液的溶度为0.2～0.8mg/ml；
步骤二中，所述搅拌的温度为室温，所述搅拌的时间为10～15h，所述干燥的方法为冷冻干燥；
步骤二中，所述搅拌完成后还包括洗涤，所述洗涤的方法为去离子水透析。
8.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤三中，所述超声处理的时间为20～40min，所述搅拌的时间为2～6h。
9.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤四中，所述5-ALA溶液的溶剂为DMSO和/或DMF，所述5-ALA溶液的浓度为0.1～0.4mg/ml，所述孵育的时间为20～30h。
10.一种包括权利要求1至2任意一项所述的组合物或权利要求3至9任意一项所述的制备方法得到的产品在杀伤SAS、HSC-2、HSC-3、Ca922以及Sa-3细胞株中的应用。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111529508A (zh) * 2020-06-18 2020-08-14 中南大学 黑磷纳米片/金纳米粒子复合材料及其制备方法、应用
CN113509549A (zh) * 2021-06-04 2021-10-19 中山大学 一种黑磷纳米片复合材料及其制备方法和应用

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040171601A1 (en) * 2002-07-31 2004-09-02 Dai Fukumura Photodynamic and sonodynamic therapy
CN102247596A (zh) * 2011-05-10 2011-11-23 哈尔滨医科大学 5-氨基酮戊酸或其代谢产物在制备医用超声敏感剂中的应用
CN106620699A (zh) * 2016-11-25 2017-05-10 深圳大学 一种靶向光热黑磷纳米制剂及其制备方法和应用
CN107789632A (zh) * 2017-09-06 2018-03-13 哈尔滨理工大学 一种t7肽修饰的主动脑靶向纳米递药***及其制备方法
CN109125723A (zh) * 2017-06-15 2019-01-04 中国科学院深圳先进技术研究院 复合声敏剂、其制备方法、应用、使用方法、用途及药物组合物

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040171601A1 (en) * 2002-07-31 2004-09-02 Dai Fukumura Photodynamic and sonodynamic therapy
CN102247596A (zh) * 2011-05-10 2011-11-23 哈尔滨医科大学 5-氨基酮戊酸或其代谢产物在制备医用超声敏感剂中的应用
CN106620699A (zh) * 2016-11-25 2017-05-10 深圳大学 一种靶向光热黑磷纳米制剂及其制备方法和应用
CN109125723A (zh) * 2017-06-15 2019-01-04 中国科学院深圳先进技术研究院 复合声敏剂、其制备方法、应用、使用方法、用途及药物组合物
CN107789632A (zh) * 2017-09-06 2018-03-13 哈尔滨理工大学 一种t7肽修饰的主动脑靶向纳米递药***及其制备方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
WEI SONG，ET AL.: "Apoptosis of SAS Cells Induced by Sonodynamic Therapy Using 5-Aminolevulinic Acid Sonosensitizer", 《ANTICANCER RESEARCH》 *
WEI TAO，ET AL.: "Black Phosphorus Nanosheets as a Robust Delivery Platform for Cancer Theranostics", 《ADV. MATER.》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111529508A (zh) * 2020-06-18 2020-08-14 中南大学 黑磷纳米片/金纳米粒子复合材料及其制备方法、应用
CN113509549A (zh) * 2021-06-04 2021-10-19 中山大学 一种黑磷纳米片复合材料及其制备方法和应用

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