CN110201008A - 用于治疗脑卒中的茯苓提取物制备方法及其应用 - Google Patents

用于治疗脑卒中的茯苓提取物制备方法及其应用 Download PDF

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Abstract

本申请涉及一种用于治疗脑卒中的茯苓提取物制备方法及其应用。所述制备方法包括以下步骤：(1)将1体积份的茯苓置于中药多功能提取罐内，加入4～10体积份的提取溶剂，进行加热回流，回流提取，提取时间为1～3小时，得到提取液；其中，提取溶剂为乙醇、甲醇、水中的一种或至少两种的混合物；其中，当提取溶剂为乙醇和水的混合物时，乙醇的体积百分百浓度为20～80％；(2)将提取液浓缩、干燥，得到茯苓提取物。

Description

用于治疗脑卒中的茯苓提取物制备方法及其应用
技术领域
本申请涉及中医药技术领域，尤其涉及一种用于治疗脑卒中的茯苓提取物制备方法及其应用。
背景技术
缺血性脑卒中(ischemic stroke)，即脑梗死，是一种突然起病，由缺血引起，以局灶性神经功能缺失为共同特征的急性脑血管疾病，有着高发病率、高死亡率、高致残率和高复发率的特点。
重组组织型纤溶酶原激活剂(recombination tissue plasminogen activator，rt-PA)仍是美国食品药品监督管理局(Food and Drug Administration，FDA)批准的治疗急性缺血性脑卒中唯一的药物，但其治疗时间窗短，有出血风险和神经毒性等副作用，使其临床广泛应用受到限制。
近年来研究发现，缺血后神经元损害的病理机制主要涉及兴奋性氨基酸的大量释放、钙离子超载和自由基的过度产生以及梗死区周围去极化、炎症和程序性细胞死亡等。这一系列级联反应都由缺血引发，发生在不同的时间点，相互间又重叠并互相联系。尽管全球医药工作者不断研发治疗缺血性脑卒中各种疗效显著的药物和干预手段，但单成分、单靶点的化学药物研发和临床应用遇到了瓶颈。
发明内容
本申请提供了一种用于治疗脑卒中的茯苓提取物制备方法及其应用。
本申请第一方面提供了一种茯苓提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)将1体积份的茯苓置于中药多功能提取罐内，加入4～10体积份的提取溶剂，进行加热回流，回流提取，提取时间为1～3小时，得到提取液；其中，提取溶剂为乙醇、甲醇、水中的一种或至少两种的混合物；其中，当提取溶剂为乙醇和水的混合物时，乙醇的体积百分百浓度为20～80％；
(2)将提取液浓缩、干燥，得到茯苓提取物。
在一些实施例中，步骤(1)包括：将1体积份的茯苓置于中药多功能提取罐内，加入4～10体积份提取溶剂，进行加热回流提取，提取时间为1～3小时，得到第一次提取液和第一次滤渣；向第一次滤渣中加入提取溶剂，进行加热回流提取，提取时间为1～3小时，得到第二次提取液和第二次滤渣；向第二次滤渣中加入提取溶剂，进行加热回流提取，提取时间为1～3小时，得到第三次提取液和第三次滤渣；
步骤(2)包括：将第一次提取液、第二次提取液、第三次提取液合并、浓缩、干燥，得到茯苓提取物。
在一些实施例中，在步骤(1)中，所述加入4～10体积份的提取液具体为，加入6～8体积份的提取溶剂；
提取溶剂为乙醇体积百分百浓度为50～70％的乙醇水溶液；
步骤(2)包括：将提取液减压蒸发浓缩至相对密度为1.05～1.5的稠浸膏，进行喷雾干燥，得到茯苓提取物干粉；相对密度为相对于水的密度；其中，在所述减压浓缩中，浓缩温度为60～90℃，相对压力为-0.05～-0.1MPa。
在一些实施例中，在步骤(1)中，所述加入4-10体积份的提取溶剂具体为，加入8体积份的提取溶剂；
提取溶剂为乙醇体积百分百浓度为50％的乙醇水溶液；
在步骤(2)中，浓缩温度为65℃，相对压力为-0.07MPa。
本申请第二方面，提供了一种根据第一方面所述的制备方法获得的茯苓提取物。
本申请第三方面，提供了如第一方面所述的茯苓提取物在制备脑卒中预防或治疗脑卒中药物的用途。
在一些实施例中，所述脑卒中包括缺血性脑卒中和出血性脑卒中。
本申请第四方面，提供了一种脑卒中预防或治疗药物，包括有效量的第一方面所述的茯苓提取物。
本申请第五方面，提供了如第一方面所述的茯苓提取物在制备脑缺血损伤或脑出血损伤预防或治疗药物的用途。
本申请第六方面，提供了一种脑缺血损伤或脑出血损伤预防或治疗药物，包括有效量的第一方面所述的茯苓提取物。
本申请提供针对脑缺血形成的病因和病理机制，利用茯苓具有利水渗湿作用从而达到预防和治疗脑缺血性损伤的目的。
本申请提供的茯苓提取物可以和药剂学上可接受的辅料按传统或现代生产工艺制成临床可以接受的口服剂型。如散剂、茶剂、颗粒剂、胶囊剂、片剂、浓缩丸、滴丸、膜剂、煎膏剂、口服液或口服乳等等。所用的药物辅料可以是淀粉、糊精、乳糖、微晶纤维、明胶、蔗糖、硬脂酸镁，赤藓糖醇、木糖醇、山梨糖醇、甘露糖醇、麦芽糖醇、异麦芽糖醇、氢化淀粉水解物、甜菊苷、甜菊双糖苷、二氢查耳酮、甘草甜素、木糖醇、阿斯巴甜、阿力甜、糖精、甜蜜素、安塞蜜、三氯蔗糖等。临床上需要长期用药，制成固体制剂贮存方便，患者服用便利，也更适应市场需求。优选的剂型是胶囊剂、颗粒剂、片剂。
本申请制备的茯苓提取物具有如下优点：
疗效确切，安全性高，质量可控；针对脑缺血性损伤的发病原因和病理机制对症治疗，提取物内多种活性成分，相互协同作用，治疗效果快，作用迅速；并且制备方法简单，工艺条件温和，制造成本低廉，对于脑卒中治疗具有药物经济学优势，适宜临床应用和市场推广。
说明书附图
图1为本申请实施例制备的茯苓提取物对大鼠神经功能的影响结果展示图；
图2为本申请实施例制备的茯苓提取物对大鼠脑缺血再灌注损伤后脑血流的影响的结果展示图；
图3a为模型组和茯苓提取物组的大鼠脑组织TTC图片；
图3b为模型组和茯苓提取物组的左脑梗死体积统计结果；
图4为本申请实施例制备的茯苓提取物对大鼠脑缺血再灌注损伤后脑含水量的影响的结果展示图。
具体实施方式
下面在具体实施例中，对本说明书提供的方案进行举例描述。
中医学对中风的研究历史悠久，且基于中医具有整体观念的特点，中药及中药复方具有多成分、多靶点、多效应等特点，中医药在缺血性脑卒中临床应用方面可能存在一定的优势。中医药复方除本身治疗优势之外，亦极具早期干预优势。
中药茯苓为多孔菌科真菌茯苓Poria cocos(Schw.)Wolf的干燥菌核，甘、淡，平。归心、肺、脾、肾经。具有利水渗湿，健脾，宁心等功效，用于水肿尿少，痰饮眩悸，脾虚食少，便溏泄泻，心神不安，惊悸失眠等症状。现代研究表明茯苓的主要化学成份是茯苓多糖、三萜类化合物、脂肪酸类及组氨酸、胆碱、葡萄糖等其他成分。茯苓多糖包括葡聚糖类、果糖、半乳糖、葡萄糖、甘露糖等。三萜类化合物主要是：羊毛甾-8-烯型三萜、羊毛甾-7，9(11)-二烯型三萜、3，4-开环-羊毛甾-7，9(11)-二烯型三萜和3，4-开环-羊毛甾-8-烯型三萜等，其中羊毛甾-8-烯型三萜包括：3β-乙酰氧基-16α-羟基羊毛甾-8，24(31)-二烯-21-酸、3β，16α-二羟基—羊毛甾-8，24(31)-二烯-21-酸、3β-羟基—羊毛甾-8，24(31)-二烯-21-酸、3β-羟基—羊毛甾-8，24-二烯-21-酸、3β-乙酰氧基-16α-羟基羊毛甾-8，24-二烯-21-酸、3β，16α-二羟基—羊毛甾-8，24-二烯-21-酸、3β-乙酰氧基-16α-羟基羊毛甾-8，24-二烯-21-酸甲酯、3β，16α-二乙酰氧基-羊毛甾-8，24(31)-二烯-21-酸、3β，16α-二乙酰氧基—羊毛甾-8，24(31)-二烯-21-酸甲酯、31-羟基-3β，16α-二乙酰氧基—羊毛甾-8-烯-21-酸；羊毛甾-7，9(11)-二烯型三萜包括：3β-乙酰氧基-16α-羟基—羊毛甾-7，9(11)，24(31)-三烯-21-酸、3β，16α-二羟基羊毛甾-7，9(11)，24(31)-三烯-21-酸、3α，16α-二羟基－羊毛甾-7，9(11)，24(31)-三烯-21-酸、3α，16α，25-三羟基—羊毛甾-7，9(11)，24(31)-三烯-21-酸、3-酮基-16α-羟基羊毛甾-7，9(11)，24(31)-三烯-21-酸、3β-羟基—羊毛甾-7，9(11)，24(31)-三烯-21-酸、3β-羟基—羊毛甾-7，9(11)，24-三烯-21-酸、3-酮基-6，16α-二羟基—羊毛甾-7，9(11)，24(31)-三烯-21-酸、3β-乙酰氧基-16α-羟基—羊毛甾-7，9(11)，24-三烯-21-酸、3α-乙酰氧基-16α-羟基—羊毛甾-7，9(11)，24(31)-三烯-21-酸、3-酮基—羊毛甾-7，9(11)，24(31)-三烯-21-酸、3β，16α-二羟基—羊毛甾-7，9(11)，24-三烯-21-酸、3β-乙酰氧基-6α，16α-二羟基—羊毛甾-7，9(11)，24(31)-三烯-21-酸、3β-对－羟基苯甲酰基-16α-羟基—羊毛甾-7，9(11)，24(31)-三烯-21-酸、3β-羟基-16α-乙酰氧基—羊毛甾-7，9(11)，24(31)-三烯-21-酸、3-酮基-16α，25-二羟基—羊毛甾-7，9(11)，24(31)-三烯-21-酸；3，4-开环—羊毛甾-7，9(11)-二烯型三萜包括：16α-羟基-3，4-开环－羊毛甾-4(28)，7，9(11)，24(31)-四烯-3，21-二酸、16α-羟基-3，4-开环－羊毛甾-4(28)，7，9(11)，24(31)-四烯-3，21-二酸-3-甲酯、16α-羟基-3，4-开环－羊毛甾-4(28)，7，9(11)，24-四烯-3，21-二酸、16α-羟基-3，4-开环－羊毛甾-4(28)，7，9(11)，24(31)-四烯-3，21-二酸-3-甲酯、3，4-开环－羊毛甾-4(28)，7，9(11)，24(31)-四烯-3，21-二酸、16α，25-二羟基-3，4-开环－羊毛甾-4(28)，7，9(11)，24(31)-四烯3，21-二酸、16α，25-二羟基-3，4-开环－羊毛甾-4(28)，7，9(11)，24(31)-四烯3，21-二酸-3-甲酯、16α，27-二羟基-3，4-开环－羊毛甾-4(28)，7，9(11)，24-四烯-3，21-二酸、16α，29-二羟基-3，4-开环－羊毛甾-4(28)，7，9(11)，24-四烯-3，21-二酸、3，4-开环－羊毛甾-4(28)，7，9(11)，24-四烯-3，21-二酸、3，4-开环－羊毛甾-4(28)，7，9(11)，24(31)-四烯-3，21-二酸-3-甲酯；3，4-开环－羊毛甾-8-烯型三萜包括：16α-羟基-3，4-开环－羊毛甾-8，24-二烯-3，21-二酸、16α-羟基-3，4-开环－羊毛甾-8，24(31)-二烯-3，21-二酸、16α，25-二羟基-3，4-开环－羊毛甾-8，24(31)-二烯-3，21-二酸。甾醇类化合物主要包括：麦角甾醇、麦角甾醇过氧化物、麦角甾-7,22E-二烯-3β-醇、啤酒甾醇。脂肪酸类包括：辛酸、月桂酸、棕榈酸、栓菌酸、土莫酸、去氢齿孔酸、2-月桂烯酸、7,9(11)-去氢茯苓酸、茯苓酸、茯苓酸A、茯苓酸B、茯苓酸C、茯苓酸D、茯苓酸DM等。
本申请实施例中使用的原料药可通过商业渠道购得。其中，茯苓购自河北春开制药股份有限公司，产地湖南，批号：171001300。其他原料药茯苓均适用于本申请。
实施例1
将1kg茯苓切碎后，置于中药多功能提取罐内。按照每1升茯苓加入8升提取溶剂的比例加入提取溶剂。进行加热回流提取。提取溶剂为乙醇体积百分百浓度为50％的乙醇水溶液。加热回流具体为提取沸腾后，继续处于微沸状态下回流提取，回流提取2h后，过滤，得到第一次提取液。
向滤渣中分两次加入乙醇体积百分百浓度为50％的乙醇水溶液，加热回流提取2次，每次加热回流提取的提取溶剂的体积与茯苓的体积之比为8：1。提取时间为2h，过滤，分别得到第二次提取液和第三次提取液。
将3次滤液合并，减压浓缩至稠浸膏(相对于4℃水的相对密度为1.05-1.5)，再进行喷雾干燥，制得茯苓干粉。其中，在所述减压浓缩中，浓缩温度为65℃，相对压力为-0.07MPa。
将茯苓干粉装入空胶囊壳内，制得抗脑缺血胶囊。
实施例2
将1kg茯苓切碎后，置于中药多功能提取罐内。按照每1升茯苓加入10升提取溶剂的比例加入提取溶剂。进行加热回流提取。提取溶剂为乙醇体积百分百浓度为80％的乙醇水溶液。加热回流具体为提取沸腾后，继续处于微沸状态下回流提取，回流提取2h后，过滤，得到第一次提取液。
向滤渣中分两次加入乙醇体积百分百浓度为80％的乙醇水溶液，加热回流提取2次，每次加热回流提取的提取溶剂的体积与茯苓的体积之比为10：1。提取时间为2h，过滤，分别得到第二次提取液和第三次提取液。
将3次滤液合并，减压浓缩至稠浸膏(相对于4℃水的相对密度为1.05-1.5)，再进行喷雾干燥，制得茯苓干粉。其中，在所述减压浓缩中，浓缩温度为60℃，相对压力为-0.09MPa。
向茯苓干粉中加入辅料淀粉，制成颗粒，并干燥，压制成抗脑缺血片。
实施例3
将1kg茯苓切碎后，置于中药多功能提取罐内。按照每1升茯苓加入4升提取溶剂的比例加入提取溶剂。进行加热回流提取。提取溶剂为乙醇体积百分百浓度为20％的乙醇水溶液。加热回流具体为提取沸腾后，继续处于微沸状态下回流提取，回流提取2h后，过滤，得到第一次提取液。
向滤渣中分两次加入乙醇体积百分百浓度为20％的乙醇水溶液，加热回流提取2次，每次加热回流提取的提取溶剂的体积与茯苓的体积之比为4：1。提取时间为2h，过滤，分别得到第二次提取液和第三次提取液。
将3次滤液合并，减压浓缩至稠浸膏(相对于4℃水的相对密度为1.05-1.5)，再进行喷雾干燥，制得茯苓干粉。其中，在所述减压浓缩中，浓缩温度为70℃，相对压力为-0.05MPa。
将茯苓干粉与辅料炼蜜混合，搅拌均匀后置于制丸机中进行制丸，然后干燥，制得本申请的抗脑缺血浓缩丸。
实施例4
将1kg茯苓切碎后，置于中药多功能提取罐内。按照每1升茯苓加入5升提取溶剂的比例加入提取溶剂。进行加热回流提取。提取溶剂为乙醇体积百分百浓度为70％的乙醇水溶液。加热回流具体为提取沸腾后，继续处于微沸状态下回流提取，回流提取2h后，过滤，得到第一次提取液。
向滤渣中分两次加入乙醇体积百分百浓度为70％的乙醇水溶液，加热回流提取2次，每次加热回流提取的提取溶剂的体积与茯苓的体积之比为5：1。提取时间为2h，过滤，分别得到第二次提取液和第三次提取液。
将3次滤液合并，减压浓缩至稠浸膏(相对于4℃水的相对密度为1.05-1.5)，再进行喷雾干燥，制得茯苓干粉。其中，在所述减压浓缩中，浓缩温度为75℃，相对压力为-0.1MPa。
将抗茯苓提取物干粉与辅料炼蜜混合，搅拌均匀后置于制丸机中进行制丸，然后干燥，制得本申请的抗脑缺血浓缩丸。
实施例5
将1kg茯苓切碎后，置于中药多功能提取罐内。按照每1升茯苓加入6升提取溶剂的比例加入提取溶剂。进行加热回流提取。提取溶剂为乙醇体积百分百浓度为60％的乙醇水溶液。加热回流具体为提取沸腾后，继续处于微沸状态下回流提取，回流提取2h后，过滤，得到第一次提取液。
向滤渣中分两次加入乙醇体积百分百浓度为60％的乙醇水溶液，加热回流提取2次，每次加热回流提取的提取溶剂的体积与茯苓的体积之比为6：1。提取时间为2h，过滤，分别得到第二次提取液和第三次提取液。
将3次滤液合并，减压浓缩至稠浸膏(相对于4℃水的相对密度为1.05-1.5)，再进行喷雾干燥，制得茯苓干粉。其中，在所述减压浓缩中，浓缩温度为80℃，相对压力为-0.08MPa。
将茯苓干粉与辅料微晶纤维素混合均匀后，装入空胶囊壳内，制得抗脑缺血胶囊。
实验例6
在本实施例中，进行茯苓提取物抗脑缺血损伤作用研究，具体如下。
1实验材料
1.1实验动物：SD大鼠，雄性，240±20g，SPF级，购自上海西普尔-必凯实验动物有限公司，许可证号：SCXK(沪)2013-0016，饲养于SPF(specific pathogen free)级饲养室(5只分笼饲养，恒温恒湿(26±2℃，55％±5％))，12小时循环照明，自由饮水，标准饲料喂养。
1.2实验药物：本申请实施例1制备的茯苓提取物干粉。
2实验方法
2.1实验动物分组及给药
根据动物起始体重随机分笼分组并按组顺序编号，并从每组中随机各取一只大鼠交予施术者，尽力保证各组动物实验条件均等，图像分析处理完成后按事先记录的数字与分组信息进行分组合并统计数据。大鼠适应性饲养1周后，随机挑选大鼠并将动物分为2组，即模型组和茯苓提取物组，每组16只大鼠。
采用线栓法制作大脑中动脉梗塞再灌注模型，梗塞2h后再灌注。分别于脑缺血3小时、24小时和48小时口服灌胃给药，共计给药3次。脑缺血72h后取脑。
实验具体分组如下：
模型组：灌胃给予相同重量的生理盐水，连续3天；
茯苓提取物组：灌服本申请实施例1制备的茯苓提取物干粉，灌服量0.021g/kg(剂量按照成人60公斤体重每天临床使用剂量)，连续给药3天。
2.2大鼠脑缺血模型制备与评价
采用线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型，激光多普勒血流监测仪(LaserDoppler flowmetry，LDF)监测皮层脑血流以评价造模是否成功。大鼠以异氟烷气体麻醉后，于前囟后2mm、中线右侧旁开5mm处颅骨钻一薄孔，将LDF光纤探头于此处固定，连续监测大脑皮层局部脑血流(cerebral blood flow，CBF)。于造模前监测获取基线值，并连续监测至术后血流值稳定为止。大鼠仰卧位，常规消毒、备皮、剥离肌肉筋膜，依次分离暴露右侧颈总动脉(CCA)、颈外动脉(ECA)、颈内动脉(ICA)，离断ECA的分支，双线结扎ECA，夹闭CCA、ICA近心端，于ECA近心端斜剪一“V”形切口，快速***根据大鼠体重选好的线栓，并将预先放置于ECA根部的丝线打一单结。于双结之间离断ECA，移去ICA上的动脉夹，轻拉ECA使之与ICA成近似直线，将线栓缓慢地向ICA入颅方向***，至感觉有少许阻力为止，以阻断该侧大脑中动脉(MCA)的血流。此时LDF显示MCA支配皮层局部血流下降为血流基值的25％以下视为造模成功。阻塞2h后缓慢将线栓抽出，并将ECA断端结扎，松开CCA动脉夹，缝合皮肤。小动物加热板维持大鼠术中肛温37℃，术后30℃保温，并予5mL生理盐水腹腔注射以防止脱水，大鼠苏醒后放回笼中，自由进食进水。
2.3神经功能评分
根据Longa评分进行脑中风后行为学检测，记录脑缺血后3小时(给药前)和脑缺血后72h(处死前)两个时间点神经功能评分。评分标准如下：0分：无神经缺损症状；1分：在提尾状态下，不能完全伸展右侧前爪；2分：行走时，向右侧划圈；3分：行走时，向右侧倾倒；4分：不能自发行走，意识障碍。
2.4激光多普勒血流仪测定大鼠脑血流量
脑缺血后72h(处死前)将大鼠麻醉，头部备皮，俯卧。打开软件，待探头后面指示灯均为绿色时，机器稳定。调整探头，使得探头距离大鼠头部20cm处，监控面积为5cm×5cm。开始测量血流，测量时间为30s-1min，测量结束后，选择血流稳定区域15s。记录大鼠再灌注72h后，大脑左右两侧中大脑供血区血流变化。以左脑血流量(手术端)比右脑血流量(假手术端)相比，作为大鼠脑的相对血流灌注量。
2.5脑梗死体积评价
TTC是脂溶性光敏感复合物，是线粒体呼吸链质子受体，正常脑组织中的脱氢酶与TTC反应而呈红色，缺血脑组织因细胞膜线粒体脱氢酶活性下降而不能与TTC反应，呈白色拒染区域。于脑缺血72小时，大鼠予10％水合氯醛(3.5mL/kg)腹腔注射麻醉后，断头取脑，置于脑切片模具中(去除嗅球、小脑)依次从前至后行2mm厚冠状切片，2％TTC溶液中染色15min(37℃)，用Image J图像分析软件进行分析。具体公式如下：
脑梗死体积(％)＝(正常侧半球体积－缺血侧半球正常部分体积)÷正常侧半球体积×100％。
2.6大鼠脑含水量测定
采用干湿质量法测定脑含水量。脑缺血72h后，异氟烷吸入麻醉，待大鼠麻醉进入无意识状态是，小心轻轻地取出脑组织，并轻轻地去除脑膜、嗅叶和小脑部分，用滤纸擦干表面血液，左右脑切开，迅速放在小培养皿中分别称量，此为脑半球湿重。然后置于-80℃冰箱保存12h，110℃恒温条件下烘干24h后称量，此为脑半球干重。记录数据，按以下公式计算：大鼠脑含水量(％)＝(湿重-干重)/湿重×100％。
2.7死亡率评价
记录缺血72小时内各组动物的死亡数，分别统计各组大鼠死亡率。
2.8统计学分析
采用SPSS 19.0软件进行统计学分析。计量资料以均值±标准差(x±s)表示，正态分布计量资料组间比较采用独立样本T检验(Independent Samples T Test)，均以P＜0.05为差异有统计学意义。
3实验结果
3.1茯苓提取物对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经功能的影响
通过大鼠神经功能缺损观察发现，在造模后实验大鼠神经功能缺损明显。主要表现为提尾状态下，不能完全伸展右侧前爪；行走时，向右侧划圈，活动减少。Longa评分结果如图1所示。从图1可知，茯苓提取物组给药后大鼠的神经功能缺损评分与缺血再灌注模型组比较存在明显的下降趋势。
3.2茯苓提取物对大鼠脑缺血再灌注损伤后脑血流的影响
采用激光多普勒血流仪检测脑血流量的变化，并用大鼠脑患侧血流量及正常侧血流量的比值作为大鼠的相对血流量变化的指标。在给药72h后，与脑缺血再灌注模型组相比，茯苓提取物组明显改善大鼠脑缺血再灌注后脑血流(P<0.05)。具体参阅图2。
图2为茯苓提取物对大鼠脑缺血再灌注损伤后脑血流的影响的结果展示图。其中，纵坐标为相对血流量，相对血流量为大鼠脑患侧血流量/正常侧血流量。与模型组相比，*P<0.05。模型组实验大鼠数目为13，茯苓提取物组实验大鼠数目为15。
3.3茯苓提取物对大鼠脑缺血急性期脑梗死体积的影响
图3a为模型组和茯苓提取物组的大鼠脑组织TTC图片。图3b为模型组和茯苓提取物组的左脑梗死体积统计结果；与模型组比较，*P＜0.05。模型组实验大鼠数目为13，茯苓提取物组实验大鼠数目为15。
参阅图3a和图3b，大鼠脑组织经TTC染色后，正常脑组织均匀红染，模型组缺血半球脑组织纹状体、海马、皮层等区域可见白色拒染区域(梗死灶)，且缺血半球脑组织明显肿胀，说明模型制作成功；与模型组比较，茯苓提取物显著降低缺血半球梗死体积(P＜0.05)。
3.4茯苓提取物对大鼠脑缺血再灌注损伤后脑含水量的影响
脑缺血再灌注72h后检测实验各组脑含水量。图4为茯苓提取物对大鼠脑缺血再灌注损伤后脑含水量的影响的结果展示图。与模型组比较，*P＜0.05。模型组实验大鼠数目为13，茯苓提取物组实验大鼠数目为15。
由图4可知，茯苓提取物组缺血侧大脑含水量较模型组明显下降(P<0.05)；实验各组正常侧脑含水量组间均无显著统计学差异。
3.5茯苓提取物对大鼠脑缺血再灌注损伤后死亡率的影响
脑缺血再灌注模型组，大鼠的死亡率达到18.75％；当口服给予茯苓提取物时，大鼠的死亡率明显下降，具体为6.25％。具体结果见表1。
表1各组大鼠脑缺血后72小时存活/死亡率
上述实验表明，本申请实施例制备的茯苓提取物具有抗急性脑缺血损伤作用，可用于制备预防或治疗脑缺血损伤的药物，也可以用于制备预防或治疗脑出血损伤的药物，并且可以用于制备预防或治疗缺血性脑卒中以及出血性脑卒中的药物。
以上所述的具体实施方式，对本申请的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明，所应理解的是，以上所述仅为本申请的具体实施方式而已，并不用于限定本申请的保护范围，凡在本申请的技术方案的基础之上，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包括在本申请的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种茯苓提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将1体积份的茯苓置于中药多功能提取罐内，加入4～10体积份的提取溶剂，进行加热回流，回流提取，提取时间为1～3小时，得到提取液；其中，提取溶剂为乙醇、甲醇、水中的一种或至少两种的混合物；其中，当提取溶剂为乙醇和水的混合物时，乙醇的体积百分百浓度为20～80％；
(2)将提取液浓缩、干燥，得到茯苓提取物。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)包括：将1体积份的茯苓置于中药多功能提取罐内，加入4～10体积份提取溶剂，进行加热回流提取，提取时间为1～3小时，得到第一次提取液和第一次滤渣；向第一次滤渣中加入提取溶剂，进行加热回流提取，提取时间为1～3小时，得到第二次提取液和第二次滤渣；向第二次滤渣中加入提取溶剂，进行加热回流提取，提取时间为1～3小时，得到第三次提取液和第三次滤渣；
步骤(2)包括：将第一次提取液、第二次提取液、第三次提取液合并、浓缩、干燥，得到茯苓提取物。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述加入4～10体积份的提取液具体为，加入6～8体积份的提取溶剂；
提取溶剂为乙醇体积百分百浓度为50～70％的乙醇水溶液；
步骤(2)包括：将提取液减压蒸发浓缩至相对密度为1.05～1.5的稠浸膏，进行喷雾干燥，得到茯苓提取物干粉；相对密度为相对于水的密度；其中，在所述减压浓缩中，浓缩温度为60～90℃，相对压力为-0.05～-0.1MPa。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述加入4-10体积份的提取溶剂具体为，加入8体积份的提取溶剂；
提取溶剂为乙醇体积百分百浓度为50％的乙醇水溶液；
在步骤(2)中，浓缩温度为65℃，相对压力为-0.07MPa。
5.一种根据权利要求1-4任一项所述的制备方法获得的茯苓提取物。
6.如权利要求5所述的茯苓提取物在制备脑卒中预防或治疗脑卒中药物的用途。
7.根据权利要求6所述的用途，所述脑卒中包括缺血性脑卒中和出血性脑卒中。
8.一种脑卒中预防或治疗药物，其特征在于，包括有效量的如权利要求5所述的茯苓提取物。
9.如权利要求5所述的茯苓提取物在制备脑缺血损伤或脑出血损伤预防或治疗药物的用途。
10.一种脑缺血损伤或脑出血损伤预防或治疗药物，其特征在于，包括有效量的如权利要求5所述的茯苓提取物。
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